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LABORATORIO DE EXTRACCIN DE ADN

INTRODUCCIN
Para la extraccin y purificacin de ADN se cuentan con mtodos caseros,
tcnicas de laboratorio como el fenol/cloroformo y solucin de sales, y kit
comerciales distribuidos por diferentes empresas. Existen protocolos de extraccin
a partir de diversas muestras vegetales, animales y microorganismos (parsitos,
hongos, bacterias, virus, levaduras); as mismo a partir de diferentes muestras
biolgicas humanas como sangre, biopsia de tejidos, materia fecal, tejidos
incluidos en parafina (material de laboratorio de patologa), hueso, cultivos
celulares, etc. Bsicamente, los protocolos de extraccin empiezan con lisis
celular y nuclear (usando soluciones con detergentes), precipitacin de protenas
(solucin de sales) y precipitacin de cidos (solucin alcohlica). La extraccin de
ADN es la base para mltiples tcnicas moleculares de laboratorio de impacto en
la medicina (diagnstico de enfermedades infecciosas y no infecciosas), en
biotecnologa, ciencias forenses e investigacin en diferentes reas.

OBJETIVOS
1. Tomar muestra de sangre perifrica.

2. Extraer y purificar el ADN a partir de clulas sanguneas humanas mediante el


kit comercial de Promega.

MATERIALES
Guantes
Tubos vacutainer
Micropipetas y puntas
Centrfuga
Vortex
Kit Promega
Isopropanol
Etanol 70%

PROCEDIMIENTO
Se tomar una muestra de sangre perifrica por cada pareja de estudiantes
mediante el uso de vacutainer.

Para la extraccin y purificacin de ADN a partir de sangre, se seguirn las


indicaciones del kit comercial Promega (se recomienda leer el inserto antes de
la prctica). El protocolo consiste en lo siguiente:

1. Para 300l de sangre, adicionar 900l de buffer de lisis celular, incube por 10
minutos a temperatura ambiente.
Centrifugar a 14000 rpm por 20 segundos.

2. Descartar el sobrenadante y agitar el pellet.


3. Adicionar 300 l de buffer de lisis nuclear y mezclar por inversin.

4. Adicionar 100 l solucin de precipitacin proteica y agitar por 20seg.


Centrifugar a 14000 rpm por 3 minutos.

5. Transferir el sobrenadante a un tubo con 300 l de isopropanol y agitar.


Centrifugar a 14000 rpm por 1 minuto.

6. Descartar el sobrenadante y adicionar 300 l de etanol al 70%.


Centrifugar a 14000 rpm por 1 minuto.

7. Descartar el sobrenadante, secar al aire el pellet y adicionar 100ul de solucin


de rehidratacin.

Madeja de ADN. Extraccin y


purificacin de ADN.

CONSULTA

1. Explique el principio de la tcnica de extraccin y purificacin de ADN.

2. Qu dificultades puede presentar la extraccin de ADN.

3. Cmo se evala la cantidad y calidad del ADN extrado.

4. Cmo se realiza la extraccin de ADN mitocondrial.

5. Una vez extrado el ADN cmo se almacena.