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Se utilizan varios colorantes combinados.

Las estructuras celulares se


diferencian en funcin de los diferentes colorantes que fijan de acuerdo con
su propia constitucin qumica.
Los ejemplos clsicos seran la tincin de GRAM o la de Ziehl-Neelsen.
El colorante utilizado pone de manifiesto diferencias entre clulas
bacterianas o entre partes de una misma clula, estas tcnicas utilizan ms
de un colorante o bien ciertos reactivos complementarios para la tincin.
Los colorantes ms usados son: azul de metileno, cristal violeta, safranina,
estos son catinicos y se combinan fuertemente con componentes celulares
cargados negativamente, como los cidos nucleicos y los polisacridos
cidos.
Las clulas generalmente son tratadas para coagular el protoplasma antes
de teirlas, proceso conocido como fijacin. Despus de esta habitualmente
se realiza la tincin. La fijacin produce generalmente encogimiento de las
clulas, la tincin por el contrario, hace que las clulas parezcan mayores de
lo que son realmente.

I. PROCEDIMIENTOS
Pasos para una coloracin
1. Extensin o frotis
2. Fijar la muestra
3. Realizar la tincin
4. Lavar
5. Secar
6. Muestra lista para observar
COLORACIN DE GRAM
1. Previa extensin y fijacin de la muestra, cubrirla con la solucin fenicada
de violeta de genciana o cristal violeta.

Tiempo: de 30 a 60 segundos, aproximadamente.

2. Lavar con agua


3. Cubrir con lugol y dejar actuar de 2 a 3 minutos.

4. Lavar

5. Decolorar con alcohol, solo o con alcohol-acetona hasta que ya no se


desprenda ms colorante de la lmina, luego lavar
6. Contrastar con safranina.

7. Lavar, secar y observar a inmersin.


II. RESULTADOS
III. DISCUSIN DE RESULTADOS
Luego de los diferentes procedimientos de coloracin llevamos la muestra al

microscopio y obtuvimos los siguientes resultados en el que pudimos

diferenciar grupos de bacterias Gram positivas y gran negativas adems de

hongos esto debido a un error de principiantes que al momento de la

extensin no se hizo de una sola colonia sino que con el asa recogimos de

diferentes colonias o ms claro de toda la superficie del medio de cultivo.

Adems en la tincin de Gram pudimos notar:


IV. CONCLUSIONES
En esta prctica reconocimos los principales procedimientos para
realizar una coloracin.
La tincin de Gram es una tcnica de coloracin que sirve para
reconocer bacterias Gram positivas y Gram negativas.
Las bacterias Gram positivas quedaron de color violeta
Las bacterias Gram negativas de color rojo

V. BIBLIOGRAFIA
Brock et al. Biologa de los microorganismos. 12 Edicin. Madrid.
Pearson: Adisson Wesley. 2009.
https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-de-
microbiologia/indice/observacion-microscopica/fijacion Consultada el 26
de Enero de 2015.
Gerard J. Tortora, Berdell R. Funke, Christine L. Case. Microbiology.
10th Edition. Pearson Education. 2010.
http://www.bacteriainphotos.com/ Consultada el 26 de Enero de 2015.

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