HIBRIDACIN FLUORESCENTE

IN SITU (FISH)

TIANA ALARCON
BRIGITTE CASTRO
MARIA ALEJANDRA CHAPARRO
CAMILO MOLANO
CAROLINA PAEZ
 DEFINICION
La tcnica consiste en preparar cortas secuencias
de DNA de una sola hebra, llamadas sondas, que
son complementarias de las secuencias de DNA
que se quieren marcar y examinar.

Es muy utilizada en la deteccin de anomalas

cromosmicas.

alta sensibilidad y especificidad

 SONDAS
Son secuencias cortas de ADN de una sola
hebra, que son complementarias de las
secuencias de ADN que se quieren marcar y
examinar.
 Hibridan a una regin particular
de un gen. Esta sonda es til
Sondas especificas de cuando se ha aislado una
un locus pequea parte de un gen y se
quiere averiguar en que
cromosoma se encuentra.

contienen secuencias
complementarias de las
secuencias repetidas que se
Sondas centromricas encuentran en los centrmeros
de los cromosomas. Como
pueden utilizarse sondas de
diferentes colores, cada
cromosoma puede ser marcado
de manera distinta, con lo que se
puede averiguar si un individuo
tiene el nmero correcto

Sondas para Son colecciones de sondas de un

tamao reducido, cada una de
cromosomas las cuales se hibrida a una
completos secuencia diferente a lo largo de
todo un cromosoma. Utilizando
estas librerias de sondas, se
puede marcar todo un
cromosoma generando un
cariotipo espectral.
 TIPOS DE SONDAS DE FISH - SECUENCIAS EN
EL GENOMA :

SONDAS DE SECUENCIA UNICA:para la deteccion de regiones especificas

Ej: regiones subtelomericas microdelecciones

SONDAS CENTROMERICAS:son sondas alfa satelite que permiten la deteccion de

secuencias altamente repetitivas de las regiones pericentromericas

SONDAS PARA REGIONES ESPECIFICAS:detecta

secuencias altamente repetitivas localizadas en determinadas regiones de los
cromosomas
Ej. Yq12

SONDAS PARA EL PINTADO DE CROMOSOMAS

COMPLETOS (WCP):detectan secuencias de eucromatina en determinados brazos o
cromosomas completos
PROCEDIMIENTO

A . Moter ,U . B . Gobel,2000
FISH (Hibridacin in situ con fluorescencia)
 HISTORIA
Las primeras tcnica de FISH fue desarrollada,
independientemente por Padue, Gall, John y
sus colaboradores en 1969, pero fue
propuesto por Olsen.

En 1989, DeLong y su equipo de trabajo

emplearon oligonucletidos marcados con
fluorocromos para detectar clulas
microbianas crecidas de manera individual.
 APLICACIONES
Detecta anomalas: Aneuploida, la prdida de
una regin cromosmica, un cromosoma entero
o para monitorizar la progresin de una
aberracin.

En el diagnstico de una enfermedad gentica.

FISH se puede aplicar a la investigacin como: el

mapeo de genes, identificacin de nuevos
oncogenes que contribuyen a diversos tipos de
cncer.
 Sospecha de sindrome de microdelecion
Retraso mental
Parejas con abortos de repeticion
Cromosomas marcadores
Caracterizacion de reestructuraciones
Cromosomicas
Diagnostico prenatal de las aneuploidias
mas frecuentes
Diagnostico de diferentes aneupolidias en
Abortos espontaneos
 VENTAJA
Proporciona una resolucin
considerablemente superior a la de las
tcnicas de bandas de alta resolucin; ya que
puede detectar deleciones de tamao tan
pequeo como 1 milln de pares de bases.

Pueden detectar aneuploidias empleando

cromosomas en interfase, no es necesario
estimular a las clulas para que se dividan con
el fin de obtener cromosomas en metafase.
 COMPARACION
Convencional: Tcnicas de bandeo de cromosomas
(tincin Giemsa) revolucion el anlisis citogentico y
han sido fundamentales en la comprensin de los
cambios genticos en ambas enfermedades
constitucionales y adquiridos.

La resolucin del anlisis de bandas es de tal manera

que slo puede detectar reordenamientos que
implican 0,3 Mb de ADN.

Tcnicas de bandas se limitan a clulas mitticas

activas.
 La tincin de cromosomas con Giemsa permite el
anlisis de los diferentes tipos como:
cromosomas policntricos, cromosomas en
anillo, intercambios de cromtidas y fragmentos.

Otros tipos de aberraciones cromosmicas tales

como translocaciones e inversiones recprocas no
son normalmente reconocible con la tincin de
Giemsa, pero pueden ser visualizados por FISH.
Nueva: La tecnologa de Microarreglos.
Analizar diferentes tipos de muestras biolgicas
(tejidos, protenas y material gentico) y otras
molculas de manera simultnea por ensayo.

La versatilidad de esta tcnica permite utilizarla

en estudios de dosis-respuesta, para establecer
perfiles de expresin diferencial de genes en
condiciones experimentales distintas
(enfermedades y tratamientos) en el anlisis de
polimorfismos, presencia de metilaciones,
mutaciones puntuales e identificacin de blancos
teraputicos.
E. Medina, 2009
Bishop,2010
INTERPRETACION
Internacional System for Human Cytogenetics Nomenclature (ISCN), 2009.
IATREIA Vol 24(3) septiembre 2011
Acta md. costarric. Vol 53 (1), enero-marzo 2011
Acta md. costarric. Vol 53 (1), enero-marzo 2011
Acta md. costarric. Vol 53 (1), enero-marzo 2011
LSI BCR/ABL ES Dual Color
Translocation Probe
hybridized to a nucleus
showing one green (native
BCR), one large orange
(native ABL), one smaller
orange (ES) and one fused
orange/green (20IGIF)
signal pattern.
Sondas telomricas
Sondas especificas para los
cromosomas 13,18,21,X
SONDA DE PINTADO DE CROMOSOMA 1
GRACIAS