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PRACTICA N 1

CURVA DE CALIBRACION

GRADOS BRIX VS CONCENTRACIN DE AZCAR

FUNDAMENTO TEORICO

Un procedimiento analtico muy empleado en anlisis cuantitativo es el llamado de


calibracin que implica la construccin de una curva de calibracin. Una curva de
calibracin es la representacin grfica de una seal que se mide en funcin de la
concentracin de un analito. La calibracin incluye la seleccin de un modelo para estimar
los parmetros que permitan determinar la linealidad de esa curva. Y, en consecuencia, la
capacidad de un mtodo analtico para obtener resultados que sean directamente
proporcionales a la concentracin de un compuesto en una muestra, dentro de un
determinado intervalo de trabajo. En el procedimiento se compara una propiedad del
analito con la de estndares de concentracin conocida del mismo analito (o de algn otro
con propiedades muy similares a ste). Para realizar la comparacin se requiere utilizar
mtodos y equipos apropiados para la resolucin del problema de acuerdo al analito que se
desee determinar.

A partir de la curva de calibracin (conjunto de concentraciones que describen el intervalo


en el cual se deber cuantificar el compuesto por analizar) y a fin de asegurar que la recta
encontrada con los puntos experimentales se ajuste correctamente al modelo matemtico
de la ecuacin se calculan los valores de la ordenada al origen, la pendiente y el coeficiente
de determinacin (r2).

GRADOS BRIX

1. Los grados Brix (smbolo Bx) sirven para determinar el cociente total de sacarosa
o sal disuelta en un lquido, es la concentracin de slidos- solubles. Una solucin de
25 Bx contiene 25 g de azcar (sacarosa) por 100 g de lquido. Dicho de otro modo,
en 100 g de solucin hay 25 g de sacarosa y 75 g de agua.

Los grados Brix se cuantifican con un sacarmetro -que mide la densidad (o gravedad
especfica) de lquidos- o, ms fcilmente, con un refractmetro.

OBJETIVO GEBERAL:
Elaborar la curva de calibracin de los grados brix con la concentracin de azcar.

OBJETIVOS ESPECFICOS:

Determinar los parmetros de correlacin y sus errores.


Interpolar el valor de una muestra y establecer su intervalo de confianza

Procedimiento

Prepara disoluciones de sacarosa del 5, 10,15,20,25 y 30 %.


Efectuar las lecturas de los grados Brix para cada disolucin
Extraer el zumo de limn y/o gaseosa determinar los grados Brix
Elaborar la curva de calibracin y determinar sus parmetros de correlacin lineal
con sus respectivos intervalos

CUESTINARIO

1. Cul es la concentracin en la muestra utilizada y su intervalo de confianza?


2. Para qu es importante conocer los grados Brix de un fruto a procesar?
3. Investigue en qu casos se puede utilizar la correlacin polinmica?

ESQUEMA DEL INFORME:

1. TITULO DE PRCTICA
2. OBJETIVOS
3. PARTE TERICA (mximo 2 pginas con sus referencias bibliogrficas, NO COPIA
TEXTUALES, deber reaizar un resumen).
4. PARTE EXPERIMENTAL (Detallar el procedimiento efectuado, con el listado de
equipos y materiales)
5. RESULTADOS Y DISCUSIN (se utilizarn tablas, de ellas se analizan los resultados
obtenidos y se comparan con datos de fuentes bibliogrficas).
6. CONCLUSIONES
7. BIBLIOGRAFA (debern existir como mnimo 5 fuentes )
PRACTICA N 2

Espectrofotometra
PRACTICA N 3

Espectrofotometra

DETERMINACION DE Fe(III)

REACTIVOS

A) Solucin estndar de Fe: 1mL = 0,05 mg de Fe


Disolver 0,3511 g de Fe2(SO4)3.SO4(NH4)2.6H2O en 5 mL de HNO3(1:1). Diluir a 1 L en
matraz aforado.
B) Agua Oxigenada 3%: Diluir 10 ml de H2O2 (30%) con agua destilada en un matraz aforado
de 100 mL.
C) Solucin de tiocianato de amonio: disolver 115 g de SCN(NH4) en 300 mL de agua
destilada, filtrar y diluir a 1 L en un matraz aforado.
CURVA DE CALIBRACION

Los patrones de calibracin se preparan colocando las alcuotas indicadas debajo.

Transferir 1, 2, 3 y 4 mL de solucin estndar de hierro a matraces aforados de 100 mL y diluir


con 10 mL de agua destilada. En otro matraz aforado de 100 mL agregar 10 mL de agua
destilada para ser utilizado como blanco.

A cada matraz aforado, en cada orden indicado y mezclando despus de cada agregado,
colocar 5 mL de HNO3 (1:1); 50 mL de agua destilada, 1 mL de agua oxigenada(3%) y 20 mL de
NH4SCN, llevar a 100 mL y mezclar.

Medir la absorbancia de la disolucin a 480 nm.

MUESTRA PROBLEMA: transferir 1 ml de solucin problema a un matraz de 100 mL, agregar


suficiente HNO3 (1:1) asegurando un contenido total de 5 mL. Diluir con agua destilada hasta
60 mL. Agregar 1 mL de agua oxigenada mezclar. Agregar 20 mL de tiocianato de amonio, diluir
a la marca y mezclar. Medir la absorbancia a 480 nm. Calcular la concentracin de hierro en la
muestra.

CUESTIONARIO

- Indicar cul es el fundamento de la prctica?.


- Por qu se adiciona HNO3 a las disoluciones?.Tendr el mismo efecto si se adiciona
H2SO4?
- Indicar las reacciones utilizadas para diferencias el Fe(III) del Fe(II).
- Si a usted le ordenan determinar espectrofotomtricamente el Fe total presente en una
muestra, cmo procedera?.
PRACTICA N 4

PRCTICA POTENCIOMETRIA Y CONDUCTOMETRIA

TITULACIONES ACIDO BASE

PROCEDIMIENTO:

Tomar 5 ml de vinagre en un vaso


Adicionar 50 ml de agua destilada
Insertar los electrodos, el nivel de la disolucin debe garantizar que los electrodos
estn sumergidos para una lectura correcta, caso contrario se deber aadir ms agua
destilada.
Realizar la lectura del pH y de la conductividad despus de cada adicin de 0, 2, 4, 6, 8,
10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40 mL de NaOH 0.10 N.
Realizar la grfica de la titulacin.
Determinar el punto final de la titulacin.
Calcular la concentracin de cido actico en el vinagre.

MATERIALES:

Vasos de precipitacin 150 mL


Varilla de vidrio
Bureta de 50 ml con pinza y soporte
Pipetas volumtricas de 5, 10 mL

REACTIVOS

Vinagre
Disolucin estandarizada de NaOH 0.10 N

CUESTIONARIO

Investigue un procedimiento para la determinacin potenciomtrica de carbonatos en aguas


residuales.

Ser posible la titulacin potenciomtrica conjunta de NaOH y NaHCO3. De una explicacin


fundamentada a su respuesta.

Investigue los cuidados que se deben dar a los electrodos

Cmo se prepara una disolucin amortiguadora pH 7.00


PRACTICA N 5

CROMATOGRAFA

SEPARACIN DE TINTAS DE BOLGRAFOS POR


CROMATOGRAFA EN PAPEL

1. OBJETIVO(S):

1.1. GENERAL

Separar las tintas de bolgrafo por cromatografa en papel.

1.2. ESPECFCOS

Comparar el efecto de la polaridad del disolvente en la separacin


cromatografa.
Calcular el Rf para cada mancha.

2. EQUIPOS Y MATERIALES:

MATERIALES REACTIVOS
Cmara cromatogrfica ( puede Agua destilada
utilizar frascos anchos con su Acetona
respectiva tapa)
Tiras de papel cromatogrfico de
14x10
Capilares
Lpiz
Estufa
Regla
Vasos de 50 mL

3. PROCEDIMIENTO:
Preparacin del solvente

Mezclar acetona-agua en las siguientes porciones: 3-1; 1-1; 2-1; 1-2,


hacer los clculos para preparar 25 mL de solvente.
Colocar el solvente preparado en la cmara cromatogrfica y dejar por 20
minutos.

Preparacin del papel

Recortar el papel cromatogrfico con dimensiones 10 x14cm

Sealar los puntos equidistantes para la aplicacin con lpiz suave (


segn el nmero de colores)

Localizar directamente un punto con los bolgrafos en cada punto un color


diferente.

Colocar el papel en la cmara cromatogrfica

Elucin

Dejar eluir hasta las 3/4 partes de la dimensin del papel.

Retirar el cromatograma y marcar con lpiz el frente del solvente.

Revelado

Ubicar cada mancha visualmente y medir las distancias migradas y


calcular los Rf

4. MARCO TERICO

La cromatografa en papel se utiliza para compuestos muy polares o


polifuncionales. El uso ms comn es para azcares, aminocidos y
pigmentos naturales. En esta cromatografa se utiliza el fenmeno de
particin en donde la fase estacionaria se halla sobre un soporte activo (el
papel) que en realidad forma parte de la fase estacionaria que es el agua.
Las fases mvil y estacionaria estarn en contacto en una gran interfase,
lo que permite una rpida obtencin de una distribucin de equilibrio del
soluto entre ellas. Si la muestra problema est formada por ms de un
soluto, stos se separan por sus diferentes coeficientes de particin. La
realizacin de la cromatografa en papel implica la siembra de la muestra
problema en un trozo de papel de buena calidad, en general Whatman
N1 para cromatografa analtica, que luego se introducir en una cuba de
desarrollo de modo que el solvente (fase mvil) ascienda por capilaridad
(tcnica ascendente) o descienda por capilaridad y gravedad (tcnica
descendente). La fase estacionaria es un complejo celulosa - agua que
tiene un poder diferente que el del agua pura.

5. CUESTIONARIO
i. Porqu la presencia de colas en las manchas cromatogrficas?
ii. Que caractersticas debe tener el papel cromatogrfico?
iii. Que hara con la composicin de la fase mvil para mejorar la
separacin cromatogrfica?
6. BIBLIOGRAFA
- SKOOG D., HOLLER F., NIEMAN T., (2008), Principios de Anlisis
Instrumental, Ed. Cengage Learning, 6ta ed., Madrid.
- RUBINSON K., RUBINSON J., (2001), Anlisis Instrumental, Ed.
Prentice Hall, Madrid.
- HARRIS D., (1999), Quantitative Chemical Analysis, Ed. W.H.
Freeman and Company, 5th ed., New York.
- http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/quimicabiologica1/wp-
content/uploads/2010/08/2011-TP-9-CROMATOGRAFIA-PAPEL.pdf
PRACTICA N 6

CROMATOGRAFA

SEPARACIN DE COLORANTES ALIMENTARIOS POR


CROMATOGRAFA EN CPA FINA
1.1 OBJETIVO GENERAL:
Aplicar las tcnicas y principales conceptos de la cromatografa en capa
fina para la separacin de colorantes.

1.2. OBJETIVOS ESPECFICOS:


Desarrollar la separacin de los componentes de distintos colores.
Determinar los Rf para cada mancha.

2. MATERIALES Y REACTIVOS:
Cmara cromatogrfica
Lpiz
Regla
Palillos de dientes
Agua destilada
Acetona
Colorantes vegetales
Placa de vidrio
Slice
Sulfato de calcio
Estufa

3. PROCEDIMIENTO:
Lavamos la placa de vidrio y secamos. Preparamos la suspensin de
Slice + CaSO4 en agua colocando 3 gramos de Slica + 1.5 gramos de
CaSO4 en 7 ml de agua. Recubrimos la placa con la suspensin
preparada. Activamos la placa a 1300C por 20 minutos y dejamos enfriar.

Con la ayuda capilares o de palillos de dientes se toma una pequea


muestra de colorante (azul, verde, amarillo, rojo) y se procede a colocar
en la lnea base de las placa preparada.
Colocar las placas preparadas en la cmara cromatogrfica en la cual
previamente se introdujo una solvente (2:1; 1:1; 3:1; 1:2)(Acetona:H2O)

Dejar que el disolvente fluya a travs de las placas de vidrio por


capilaridad, hasta las 3/4 partes de la dimensin.

Localizar las machas y calcular los Rf de cada una de ellas.

Interpretar los resultados.

4. MARCO TERICO
La cromatografa de capa fina es un procedimiento que se utiliza para separar
molculas relativamente pequeas. En la biologa celular se utiliza
frecuentemente para separar azcares simples, lpidos, aminocidos,
nucletidos, metabolitos, y ocacionalmente para separar cadenas cortas de
polipptidos y cidos nucleicos. Al igual que otras cromatografas, consiste
de una fase estacionaria y una fase mvil y el principio es el mismo: la
sustancia de inters se adherir a la fase estacionaria o se mover con la
fase mvil, viajando una distancia que es inversamente proporcional a la
afinidad por la fase estacionaria.

La fase estacionaria puede ser variada. Puede ser de papel, de celulosa o de


un gel de silicato (vidrio molido bien fino) unido a una superficie slida (una
placa de vidrio, aluminio, plstico o papel). Esta superficie slida puede ser
rgida o flexible. El tipo de fase estacionaria que se utilice en un experimento
depender del tipo de molculas que se quieran separar. Incluso vienen
algunas placas con indicadores fluorescentes. La fase estacionaria consiste
de un solvente que puede ser agua, un solvente orgnico o una mezcla de
ambos.

5. CUESTIONARIO
Qu tcnicas puede aplicarse para el revelado de sustancias incoloras?
Qu tipos de cromatoplacas existen?
Investigue lasprincipales caractersticas de los adsorbentes para
cromatografa en capa fina.

6. BIBLIOGRAFA
- SKOOG D., HOLLER F., NIEMAN T., (2008), Principios de Anlisis
Instrumental, Ed. Cengage Learning, 6ta ed., Madrid.
- RUBINSON K., RUBINSON J., (2001), Anlisis Instrumental, Ed.
Prentice Hall, Madrid.
- HARRIS D., (1999), Quantitative Chemical Analysis, Ed. W.H.
Freeman and Company, 5th ed., New York.

- http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/6.-
CROMATOGRAFIA_26249.pdf
PRACTICA N 7

CROMATOGRAFA

ANLISIS DE CONTENIDO DE VITAMINA C EN FRUTAS


CTRICAS POR HPLC
1.1 OBJETIVO GENERAL:
Determinar el contenido de vitamina C en frutas ctricas por HPLC.

1.2. OBJETIVOS ESPECFICOS:


Comprender el procedimiento de manejo del HPLC.
Calcular la concentracin de vitamina C en cada muestra utilizada.

2. MATERIALES Y REACTIVOS:
- Matraces volumtricos de 10 ml, 50 ml y 1000 ml
- Jeringa de 5 ml
- Membranas de filtracin para equipo millipore de 45 um
- Acrodiscos de 0,45 um
- H3PO4 pa.
- Agua bidestilada y desionizada

3. PROCEDIMIENTO:
PREPARCIN DE LA FASE MVIL

Preparar una disolucin acuosa de H3PO4 0,05M en agua


Filtrar en equipo Millipore con membrana de 0,45 um.
Desgasificar la disolucin en bao ultrasonido por 15 minutos.

Equipo HPLC

FM: H3PO4 0,05M

Flujo: 1ml/min

Detector: 254 nm

Columna C18

Vol. iny: 10 ul
Muestra: limn, mandarina, naranja

Exprimir el zumo de 4 frutas y medir el volumen

Diluir la muestra 40 veces con FM, previa filtracin

Disolucin estandar de vitamin C : 5 ppm

Tr: 5,55 min

Resultado: calcular mg Vitamina C/mL de fruta.

4. MARCO TERICO

En la cromatografa lquida, la fase mvil es un lquido que fluye a travs de


una columna que contiene a la fase fija. La separacin cromatogrfica en
HPLC es el resultado de las interacciones especficas entre las molculas de
la muestra en ambas fases, mvil y estacionaria. A diferencia de la
cromatografa de gases, la cromatografa de lquidos de alto rendimiento
(HPLC, de high-performance liquid chromatography) no est limitada por la
volatilidad o la estabilidad trmica de la muestra. La HPLC es capaz de
separar macromolculas y especies inicas, productos naturales lbiles,
materiales polimricos y una gran variedad de otros grupos polifuncionales
de alto peso molecular. Con una fase mvil lquida interactiva, otro parmetro
se encuentra disponible para la selectividad, en adicin a una fase
estacionaria activa. La HPLC ofrece una mayor variedad de fases
estacionarias, lo que permite una mayor gama de estas interacciones
selectivas y ms posibilidades para la separacin.

5. CUESTIONARIO
- En que cosiste la tcnica de HPLC preparativa?
- En qu casos se puede aplicar una programacin a gradiente?
- Investigue otro procedimiento para determinacin de vitamina C.

6. BIBLIOGRAFA
- SKOOG D., HOLLER F., NIEMAN T., (2008), Principios de Anlisis
Instrumental, Ed. Cengage Learning, 6ta ed., Madrid.
- RUBINSON K., RUBINSON J., (2001), Anlisis Instrumental, Ed.
Prentice Hall, Madrid.
- HARRIS D., (1999), Quantitative Chemical Analysis, Ed. W.H.
Freeman and Company, 5th ed., New York.

- http://laboratoriotecnicasinstrumentales.es/analisis-
qumicos/cromatografa-de-lquidos-hplc