UNIVERSIDAD DE COSTA RICA

FACULTAD DE MICROBIOLOGA
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGA E INMUNOLOGA
SECCIN DE INMUNOLOGA

Nombre del curso: Laboratorio de Inmunologa General

Sigla del curso: MB-3511
Ciclo y ao lectivo: Segundo ciclo del 2017
Crditos: 2
Horas lectivas: 4
Horario: Viernes de 13:00 a 16:50
Lugar: Facultad de Microbiologa (Aula 105-106/Laboratorios 107-110)
Requisitos:MB-0209, MB-3000 (segn resolucin 8777-2012)
Correquisitos: MB-3510

Profesores:
Dra. Teresa Escalante MQC, PhD(Coordinadora) (TE) teresa.escalante@ucr.ac.cr
Dr. Fernando Chaves Mora, PhD (FC) fernando.chaves@ucr.ac.cr
Dr. Julin Fernndez, MQC, PhD (JF) julian.fernandezulate@ucr.ac.cr
Dra. Marietta Flores, MQC, PhD (MF) marietta.floresdiaz@gmail.com
Dra. Laura Monturiol, MQC, PhD (LM) laura.monturiol@ucr.ac.cr
Ing. Maringela Vargas, PhD (MV) mariangela.vargasarroyo@ucr.ac.cr
Dra. Alexandra Rucavado, MQC, PhD (AR) alexandra.rucavado@ucr.ac.cr

Profesora invitada:
Ing. Wendy Aguilar Ulloa, Lic. maaguw@gmail.com

Horas de atencin a estudiantes: Los profesores atendern consultas ya sea, en el Instituto

Clodomiro Picado (ICP), situado en Coronado (contiguo a la plaza de ftbol de Dulce Nombre), de
lunes a viernes de 8 am a 4 pm, con previa cita mediante el telfono 25117888 o mediante correo
electrnico. Alternativamente, tambin se atienden consultas durante el transcurso de las prcticas,
o al finalizar las lecciones. Tambin podrn atenderse consultas mediante el correo electrnico, en
las direcciones indicadas en lneas anteriores.

Descripcin del curso: El curso "Laboratorio de Inmunologa General", forma parte del plan de
estudios de la carrera de Microbiologa y Qumica Clnica, a nivel del segundo ciclo del tercer ao.
Se imparte simultneamente con el curso de Inmunologa General (MB-3510).

Objetivo general:
Adquirir la capacidad de desarrollar e interpretar los principales mtodos inmunolgicos de
laboratorio con el fin de contar con los conocimientos necesarios para aplicar estas metodologas
en laboratorios de investigacin biomdica o en laboratorios clnicos.

Objetivos especficos:

Al finalizar el curso el estudiante ser capaz de:

1. Comprender los principios y aplicaciones de las principales mtodos inmunolgicos
2. Ejecutar correctamente los mtodos inmunolgicos estudiados
3. Integrar los conocimientos adquiridos con el fin de seleccionar la metodologa adecuada
segn la aplicacin
4. Comprender el proceso de inmunizacin de animales de laboratorio para la produccin de un
suero policlonal

La intencin de los objetivos anteriores es adquirir las bases y destrezas suficientes para la
aplicacin de estas metodologas tanto a nivel clnico como en el rea de investigacin biomdica.

Metodologa:

El curso consiste en una sesin semanal de 4 horas de duracin en la cual, los profesores
expondrn brevemente los fundamentos tericos y procedimientos de las tcnicas a realizar ese
da y posteriormente se realizar una prctica de laboratorio. Como apoyo a las actividades
tericas y prcticas se contar con un Manual de Mtodos Inmunolgicos y con un Manual de
Prcticas del 2017. Cualquier informacin adicional ser proporcionada a los estudiantes con al
menos 3 das de anticipacin por el profesor encargado de cada prctica. Es responsabilidad del
estudiante prepararse para cada sesin de laboratorio estudiando los fundamentos tericos de
cada prctica (Manual de Mtodos Inmunolgicos) as como los procedimientos a realizar ese da
(Manual de prcticas 2017). Antes de cada prctica, el profesor encargado dar instrucciones
generales y aclarar dudas. En la sesin posterior, se discutirn resultados y otros aspectos de
inters. La asistencia a prcticas es obligatoria y debe quedar registrada en hojas de control que el
estudiante firmar al finalizar cada sesin. Se permiten mximo 2 ausencias debidamente
justificadas (ver reglamento), sin derecho a reposicin de los respectivos exmenes cortos. No se
permitir el ingreso al laboratorio sin gabacha, as como fumar o comer. Los estudiantes se
distribuirn en grupos, cada uno de los cuales ser guiado por un profesor. Los siguientes
materiales sern aportados por los estudiantes: gabacha, guantes de ltex, torniquete y marcador.

Se contar adems con un aula virtual a la que se puede ingresar en la direccin electrnica
http://mediacionvirtual.ucr.ac.cr/. Es responsabilidad de cada estudiante inscribirse en dicho sitio,
consultar constantemente la informacin que se pondr en l y revisar el material que asignen los
profesores. Adems, en este sitio se programarn actividades de retroalimentacin (cuestionarios
y/o foros) que permitirn a los profesores recabar la opinin de los estudiantes sobre las
actividades que se realicen en las sesiones de laboratorio y determinar el grado de cumplimiento
de los objetivos del curso.

Normas de Evaluacin:

El curso ser evaluado mediante:

2 Exmenes parciales no acumulativos 37 % cada uno
4 Evaluaciones prcticas 6%
Exmenes cortos semanales 10 %

Discusin de resultados de las prcticas de laboratorio 8%

Pregunta de integracin 2%
Exmenes parciales no acumulativos: Se evaluarn las clases tericas, los conceptos tericos y
prcticos de todas las metodologas estudiadas en el curso y los resultados obtenidos en cada
prctica. No habr examen final. Despus de cada examen se discutirn las respuestas en clase.
Los reclamos deben hacerse por escrito y en hojas separadas a las del examen. No se aceptan
reclamos de aquellas preguntas respondidas utilizando lpiz o que tengan con corrector. Los
formularios de preguntas no sern devueltos. En caso de ausencia a un examen por razones
justificadas, ste se repondr en la forma y fecha que decidan los profesores. Otras normas podrn
ser consultadas a la direccin electrnica http://cu.ucr.ac.cr
Exmenes cortos semanales: Estos exmenes cortos evaluarn los fundamentos y procedimientos
de la prctica a realizar ese da. La materia a evaluar se encuentra en el Manual de Mtodos
Inmunolgicos y en el Manual de prcticas 2017, as mismo el profesor encargado puede
proporcionar material suplementario.
Discusin de resultados de las prcticas de laboratorio: Cada grupo de laboratorio debe discutir y
resumir los resultados obtenidos en cada prctica y preparar una pequea presentacin para
presentarlo al grupo la sesin siguiente. Cada sesin se seleccionar dos grupos al azar, que
presentarn los resultados a los dems compaeros.
Pregunta de integracin: El da del segundo examen parcial se realizar una pregunta a libro
abierto que requiere integrar las diferentes metodologas estudiadas a lo largo del curso.

Bibliografa recomendada:
Lomonte, B. Manual de Mtodos Inmunolgicos. 2007. 138 pp.
Kindt TJ, Goldsby RA, Osborne BA. Inmunologa de Kuby. Sexta Edicin. Editorial Mc Graw Hill
Interamericana. 2007. 574 pp.

CONTENIDOS TERICOS

Tema 1 Mtodos inmunolgicos de laboratorio. Conceptos bsicos de antgeno, anticuerpo,

interacciones antgeno-anticuerpo, mtodos usados en inmunologa, sensibilidad y
especificidad analticas de las tcnicas. Generalidades estructura de anticuerpos.

Tema 2 Inmunizacin de animales de laboratorio (a) tipos de adyuvantes, tipos de antgenos

Inmunizacin de animales con antgenos proteicos, inmunizacin de animales con ADN.
Captulo 1

Tema 3 Diluciones seriadas y titulacin: diluciones seriadas y directas, pruebas serolgicas

basadas en titulacin. Captulo 2

Tema 4 Purificacin de anticuerpos

A. Purificacin de anticuerpos por precipitacin Captulo 3
B. Purificacin de anticuerpos por inmunoafinidad. Captulo 4

Tema 5 Tecnologa de hibridomas y anticuerpos monoclonales. Fusin celular y generacin de

hibridomas. Preparacin, produccin y caracterizacin de anticuerpos monoclonales.
Caractersticas y comparacin con anticuerpos policlonales. Aplicaciones. Anticuerpos
recombinantes, Fab, scFv. Expresin/seleccin en fagos. Captulo 15
Tema 6 Tcnicas de inmunoprecipitacin. Curva de precipitacin cuantitativa y fenmenos de
zona. Doble inmunodifusin en geles de agarosa, inmunodifusin radial. Principios de la
inmunonefelometra. Captulos 6 y 7

Tema 7 Tcnicas de aglutinacin. Aglutinacin directa, pasiva, reversa, e inhibicin de la

aglutinacin Captulo 8

Tema 8 Tcnicas electroforticas e inmunoelectroforticas. Electroforesis de zona,

electroforesis en geles de poliacrilamida unidimensional y bidimensional,
isoelectroenfoque. Inmunoelectroforesis simple. Captulos 11 y 12

Tema 9 Mtodos inmunolgicos basados en marcaje con enzimas. Fundamentos de ensayos

inmunoenzimticos. Conjugados no-inmunes. ELISA, diseos y aplicaciones. Dot blot y
Western blot. Sustratos cromognicos, fluorognicos, quimioluminiscentes y su deteccin.
Inmunohistoqumica y sus aplicaciones. Captulo 10

Tema 10 Mtodos inmunolgicos basados en el marcaje con fluorocromos y radioistopos.

Propiedades de los fluorocromos. Tcnicas de inmunofluorescencia, equipo bsico y
aplicaciones. Citometra de flujo, instrumentacin, principios y aplicaciones. Recuento
celular automatizado y manual. Propiedades de los radioistopos y sus emisiones. RIA,
IRMA y otras tcnicas radioinmunes. Equipo bsico, cuidados y usos. Autoradiografa.
Captulo 16

Tema 11 Pruebas rpidas basadas en inmunodeteccin. Inmunocromatografa y ejemplos de

sus aplicaciones.

PRCTICAS DE LABORATORIO
Para cada prctica revisar el captulo indicado del Manual de Mtodos Inmunolgicos as
como el procedimiento respectivo del Manual de Prcticas 2017

P1. Inmunizacin de animales de laboratorio Cap. 1

P2. Diluciones seriadas Cap. 2
P3. Purificacin de inmunoglobulinas sricas mediante precipitacin. Cap. 3
P4. Cromatografa de inmunoafinidad para la purificacin de anticuerpos. Cap. 4
P5. Inmunodifusin radial y doble inmunodifusin en gel Cap. 5, 6 y 7
P6. Titulacin de anticuerpos mediante hemaglutinacin. Cap. 8
P7. Electroforesis de zona para anlisis de protenas sricas e Igs purificadas. Cap. 11
P8. Recuento celular en cmara de Neubauer. Material suplementario
P9. Inmunoelectroforesis simple. Cap. 12
P10. ELISA. Cap. 10
P11. Dot blot y Western Blot Cap. 14
 CALENDARIO LABORATORIO DE INMUNOLOGA GENERAL II-2017

Sesin Fecha Teora de laboratorio (# de tema) Prof Prctica Prof

Presentacin del Programa TE

1 11-ago 1. Introduccin a los mtodos inmunolgicos TE
2. Inmunizacin de animales de laboratorio MF
P1: Inmunizacin de animales MF
2 18-ago 3.Diluciones seriadas LM
P2: Prctica y ejercicios de diluciones seriadas LM
4A. Purificacin de anticuerpos por precipitacin P3: Purificacin de anticuerpos por
MV MV
con cido caprlico precipitacin
3 25-ago
4B. Purificacin de anticuerpos por cromatografa P4: Purificacin de anticuerpos por
TE TE
de inmunoafinidad cromatografa de inmunoafinidad
Quiz de estructura de anticuerpos
4 01 Set 5.Tecnologa de hibridomas y anticuerpos
MF
monoclonales

Discusin resultados prctica purificacin de

anticuerpos y diluciones seriadas P5: Inmunodifusin radial y doble
5 08 Set AR
inmunodifusin
6. Tcnicas de inmunoprecipitacin AR
15 Set FERIADO
P6: Titulacin de anticuerpos por
Discusin resultados inmunoprecipitacin FC
6 22 Set hemaglutinacin
7. Tcnicas de aglutinacin FC Evaluacin prctica 1: Diluciones seriadas LM
7 29 Set I Examen Parcial (Temas 1-7 y Prcticas 1-6)

8. Tcnicas electroforticas e P7: Electroforesis de zona FC

9 06-oct FC
Inmunoelectroforticas Evaluacin prctica 2: Titulacin FC

9. Mtodos inmunolgicos basados en marcaje Ejercicios diseo de ELISA TE

7 13-oct MV
con enzimas
P8: Recuento celular en cmara Neubauer JF

10. Mtodos inmunolgicos basados en el P9: Inmunoelectroforesis FC

10 20-oct LM
marcaje con fluorocromos y radioistopos
Discusin ejercicios de ELISA
P10: ELISA TE
Discusin resultados electroforesis de zona e
11 27-oct Evaluacin prctica 3: Recuento celular en
inmunoelectroforesis JF
cmara de Neubauer

Evaluacin prctica 4: Evaluacin de

12 03-nov 11. Pruebas rpidas de inmunodeteccin JF MF
antisueros de conejo mediante ELISA

13 10-nov Discusin resultados del ELISA P11: Dot blot y Western Blot MV
P11: Dot blot y Western Blot (continuacin)
14 17-nov Discusin resultados evaluacin de antisueros MV
Ejercicios Diseo de Western Blot
Visita Instituto Clodomiro Picado
15 24-nov
Discusin resultados western blot
16 01-dic II Examen Parcial (Temas 8-11, Prcticas 7-11)
17 08-dic Examen de Ampliacin
Reglamentos de la UCR:

En la direccin electrnica http://cu.ucr.ac.cr se encuentran los reglamentos de uso ms frecuente por los
estudiantes de la Universidad de Costa Rica.

Salud Ocupacional de la Facultad de Microbiologa

Pgina Web de la Comisin de Salud Ocupacional de la Facultad con informacin del plan de evacuacin,
primeros auxilios, normas de bioseguridad y plan de incendios:

http://www.micro.ucr.ac.cr/comisiones

Procedimiento para realizar la matrcula al aula virtual:

El procedimiento de matrcula para estudiantes es el siguiente:

1. Primero ingrese a http://mediacionvirtual.ucr.ac.cr

o bien, en Google poner las palabras portafolio virtual UCR > mediacin virtual
2. Abra una cuenta de usuario (por nica vez), mediante el enlace que se encuentra al lado
superior derecho. Deben seguir la forma NOMBRE.APELLIDO ejemplo: Maria.Jimenez

3. Esta cuenta de usuario se abre una sola vez. Con esta cuenta usted puede ingresar a tantos
espacios virtuales de cursos usted requiera.

4. Cuando termine de llenar el formulario, la plataforma le enviar un correo electrnico a la

direccin de correo que usted indic.

5. Una vez confirmada su cuenta, vuelva a ingresar a Mediacin Virtual, digite su usuario y
contrasea, luego pulse ENTRAR.

6. Busque el bloque Buscar cursos, en la columna derecha y digite el nombre del curso que
desea localizar, en este caso Laboratorio de Inmunologa General MB-3511

7. En la lista que aparezca, haga clic sobre el nombre del curso. Se le pedir una contrasea, que
el coordinador del curso le debe haber suministrado antes. Con esto, ya puede ingresar al
espacio, configurar su perfil de participante e interactuar con los dems.