INFORME 5

DETERMINACIN CUANTITATIVA DE PROTEINAS SOLUBLES POR EL

MTODO DE BIURET
*1Erika Cortes Lamprea
1,2 Estudiante del programa de Qumica de Universidad de la Amazonia
Programa de Qumica, Facultad de Ciencias Bsicas, Universidad de la Amazonia
Florencia- Caquet
Resumen: Durante la prctica se extrajo por solubilidad en cloruro de sodio las
protenas presentes en 2,0045g de harina de trigo, mediante la tcnica curva de
calibracin empleando concentraciones 0,1660 - 0,33 0,5 - 0,666 y 0.833mg/mL de
albumina se determin que la muestra de harina de trigo contiene 3,526mg 0,025
de protenas. Adems se emple el mtodo colorimtrico reaccin de Biuret que
absorbe a una longitud de onda de 540nm.

Introduccin:

Las protenas ocupan un lugar de mxima importancia entre las molculas

constituyentes de los seres vivos (biomolculas). Prcticamente todos los procesos
biolgicos dependen de la presencia o la actividad de este tipo de molculas. 1
Existen diferentes mtodos para la cuantificacin de protenas. Muchos de estos
mtodos se basan en: a) la propiedad intrnseca de las protenas para absorber luz
en el UV, b) para la formacin de derivados qumicos, o c) la capacidad que tienen
las protenas de unir ciertos colorantes. 2

Las protenas se pueden clasificar de acuerdo a su solubilidad en:

- Albminas que son solubles en agua

- Globulinas: solubles en soluciones salinas diluidas.
- Glutelinas: Solubles en cidos y bases diluidas
- Prolaminas: Solubles en soluciones acuosas de etanol. 3

El mtodo de Biuret se basa en la formacin de un complejo coloreado entre el Cu2+

y los grupos NH de los enlaces peptdicos en medio bsico. 1Cu2+ se acompleja con
4NH. La intensidad de coloracin es directamente proporcional a la cantidad de
protenas (enlaces peptdicos) y la reaccin es bastante especfica, de manera que
pocas sustancias interfieren. La sensibilidad del mtodo es muy baja y slo se
recomienda para la cuantificacin de protenas en preparados muy concentrados.
Conclusiones

Materiales y mtodos:

La prctica se llev a cabo de la siguiente manera:

- Preparacin de la muestra:

Se peso 2,0045 gramos de harina de trigo y se adicion 10 ml de NaCl al 5%. Se agit

durante 5 minutos y se centrifug a 2.800 r.p.m. El sobrenadante se transfiri a un
matraz aforado de 25 mL, se repiti este procedimiento 2 veces ms. Seguidamente
en un Beaker de 50mL previamente rotulado como muestra se disolvi el
precipitado final en 10 mL de NaCl,

- Curva de calibracin
Para la determinacin cuantitativa de protenas por el mtodo de Biuret se realiz
una curva de calibracin utilizando un patrn de albmina de 5 mg / mL.

Se rotularon 8 tubos de ensayo (B,1,2,3,4,5,6,7 y S) y se agreg a cada uno los

respectivos volmenes (mL) de las sustancias como lo indica la siguiente tabla

Se agit y se dej en reposo por 20 minutos a temperatura ambiente para el

desarrollo del color. Finalmente se midi la absorbancia a una longitud de onda de
540 nm.
RESULTADOS Y DISCUSIN:m7

Se realiz una curva de calibracin con soluciones que contenan un patrn conocido
de albumina, De la curva de calibracin se extrajo la ecuacin de la recta (Ecuacin
1) para poder hallar la concentracin de protenas que contena la muestra.

La muestra problema se cuantific por duplicado adicionando volmenes

distintos de muestra, al tubo 7 se le adicion 0,5mL de muestra y dio una
absorbancia de 1,140, al tubo 8 se le agreg 1mL de muestra problema y present
una absorbancia de 1,413.

= 0,3581 + 0,0134

Ecuacin N 1: Ecuacin de la recta

Se despej X y se reemplaz Y la absorbancia de las muestras (0,5mL)

1,140 0,0134
= = 3,1460
0,3581

Ecuacin para hallar la concentracin de protenas en 1mL de muestra

1,413 0,0134
= = 3,9084
0,3581

La importancia del estudio y la cuantificacin de protenas en la harina de trigo es

que es el ingrediente principal en la elaboracin de varios productos bsicos
que hacen parte de la alimentacin del hombre como el pan, galletas, pizzas,
pasteles, etc. La tabla numero 2 presenta los porcentajes de los principales
componentes de la harina de trigo

Las protenas que contiene la harina de trigo se clasifican de dos formas:

Segn la solubilidad en agua, solucin de sal diluida, solucin de alcohol y solucin

de cidos o lcalis diluidos, usando esta secuencia se clasifican en albminas,
globulinas, gliadinas y gluteninas respectivamente.
Segn su funcin se dividen en dos grupos:

- Protenas pertenecientes al gluten: Representan entre un 8085 % del total de

las protenas del trigo, representan la mayor parte de las protenas de
almacenamiento. Pertenecen a la clase de prolaminas. Las protenas del
gluten se encuentran en el endospermo del grano de trigo maduro donde
forman una matriz continua alrededor de los grnulos de almidn. Las
protenas de gluten son en gran parte insolubles en agua o en soluciones de
sales diluidas. Pueden distinguirse dos grupos funcionalmente distintos de
protenas de gluten: gliadinas que son monomricas y gluteninas que son
polimricas.
- Protenas no pertenecientes al gluten: Representan entre un 1520 % del total
de las protenas del trigo, principalmente se encuentran en las capas externas
del grano de trigo y en bajas concentraciones en el endospermo. Estas
protenas son extradas en soluciones de sales diluidas y por lo tanto se
encuentran albminas y globulinas. En su mayor parte son protenas
monomricas o fisiolgicamente activas (enzimas). No obstante a estas
protenas tambin pertenecen un grupo secundario de protenas polimricas
de almacenamiento, llamadas triticinas, que pertenecen a la clase globulinas
de las protenas de almacenamiento de la semilla.

En la prctica se utiliz las protenas de tipo albmina, en cuanto a estas se puede

recordar que precipitan en soluciones salinas concentradas proceso que se denomina
precipitacin por salado o salting out.

A medida que se adiciona soluciones salinas concentradas, la fuerza inica aumenta,

la solubilidad de una protena comienza a disminuir. A una fuerza inica lo
suficientemente elevada, una protena puede ser casi completamente precipitada de
su disolucin, efecto llamado precipitacin por salado o salting out, que es el
resultado de la competencia por molculas de solvatacin entre los iones salinos
agregados y los otros solutos disueltos. Uno de los factores que explican este efecto
es que la concentracin elevada de la sal puede eliminar el agua de hidratacin de
las molculas de protena, reduciendo entonces su solubilidad.
Como se puede observar obtuvimos una incertidumbre muy pequea lo que nos da
a entender que hubo muy pocos errores durante la prctica, pero se presentaron
errores sistemticos a la hora de realizar las mediciones de las alcuotas
correspondientes, tambin se present un error instrumental con las celdas
espectrofotomtricas ya que la calidad del material no fue el esperado; Estas celdas
pueden presentar el problema de que en las paredes se pueden producir perdidas
de radiacin por reflexin de las interfaces, tambin puede presentar una absorcin
significativa en las paredes de la celda, del mismo modo no se descarta la posibilidad
de que a la hora de limpiar las celdas quedara rastro alguno de polvo o las huellas
dactilares y estas interferencias producen variaciones en la transmitancia de la celda;
Para terminar tambin se presentaron otras fuentes de error imposibles de controlar
pero que afectan las medidas, estas son las fluctuaciones producidas por la corriente
elctrica.

Tambin podemos observar que el R2 de la curva de calibracin es muy cercano a 1,

se deduce que tiene una tendencia lineal y por lo tanto podemos concluir que hay
gran precisin entre los datos.

BIBLIOGRAFA:
2:
Departamento de Bioqumica y Biologa Molecular, Campus Universitario de Rabanales, Edificio
Severo Ochoa, 14071-Crdob

Por muchos aos el pan ha sido uno de los principales constituyentes de la dieta humana, elaborar
pan de masas fermentadas con levaduras es uno de los procesos biotecnolgicos mas antiguos. El
trigo es por mucho el cereal mas importante en la elaboracin de pan, aunque en algunas partes del
mundo el uso de centeno es bastante considerable, otros cereales son usados en menor medida
(Goesaert et al 2005). El proceso de elaboracin de pan se divide en tres etapas principalmente:
mezclado, fermentado y horneado. Durante todas las etapas de elaboracin de pan, ocurren
cambios qumicos, bioqumicos y transformaciones fsicas, las cuales son afectadas por los diversos
constituyentes de la harina. Unos de los componentes que tecnolgicamente son importantes y que
determinan la calidad del producto terminado son las protenas, principalmente las protenas que
integran el gluten (gliadinas y gluteninas). Es importante conocer este tipo de protenas as como
sus propiedades funcionales, para determinar el uso que se les puede dar ya sea para la elaboracin
de pan o para la elaboracin de otros productos a base de trigo (pastas, galletas, etc.).