CARACTERIZAO BOTNICA E CITOLGICA DA ESPCIE

SILVESTRE Vasconcella goudotiana (Caricaceae)

EMANUELLI NARDUCCI DA SILVA

UNIVERSIDADE ESTADUAL DO NORTE FLUMINENSE

DARCY RIBEIRO UENF

CAMPOS DOS GOYTACAZES / RJ

MARO - 2009
CARACTERIZAO BOTNICA E CITOLGICA DA ESPCIE
SILVESTRE Vasconcella goudotiana (Caricaceae)

EMANUELLI NARDUCCI DA SILVA

Dissertao apresentada ao Centro de Cincias

e Tecnologias Agropecurias da Universidade
Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro,
como parte das exigncias para a obteno do
ttulo de Mestre em Gentica e Melhoramento
de Plantas.

Orientadora: Prof. Telma Nair Santana Pereira

CAMPOS DOS GOYTACAZES / RJ

MARO 2009
 CARACTERIZAO BOTNICA E CITOLOGICA DA ESPCIE
SILVESTRE DE Vasconcella goudotiana (Caricaceae)

EMANUELLI NARDUCCI DA SILVA

Dissertao apresentada ao Centro de Cincias

e Tecnologias Agropecurias da Universidade
Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro,
como parte das exigncias para a obteno do
ttulo de Mestre em Gentica e Melhoramento
de Plantas.

Apresentada em 04 de maro de 2009.

Comisso examinadora:

_________________________________________________________________
Francisco Filho da Silva (D.Sc. Produo Vegetal) AGERP/MA

_________________________________________________________________
Alexandre Pio Viana (D.Sc., Produo Vegetal) UENF

_________________________________________________________________
Messias Gonzaga Pereira (Ph.D., Plant Breeding) UENF

_________________________________________________________________
Telma Nair Santana Pereira (Ph.D., Plant Breeding) UENF
Orientadora
 Dedico esta vitria minha famlia, pelo apoio incondicional, em
especial minha Me Cida, mulher
mulher guerreira que dedica sua vida
s filhas;
Ao meu namorado Matheus amor, companheiro, sempre
acreditando em mim.

ii
 AGRADECIMENTOS

Em primeiro lugar agradeo a Deus, pois sem ele no estaria aqui;

A Nossa Senhora das Graas me companheira que sempre em todas as
dificuldades esteve ao meu lado, me consolando e guiando nos momentos
difceis;
A UENF, pela oportunidade de cursar o mestrado;
A FAPERJ, pela concesso da bolsa.
professora Telma por acreditar em uma estranha, por toda pacincia,
dedicao e compreenso, sem os quais no conseguiria chegar at aqui;
minha famlia MARAVILHOSA, minha Me, Minha irm Emarielli, Minhas
Tias, Tia Bebel pelo apoio, Tia Lurdinha pelo incentivo, Tia Delina pelos puxes
de orelhas, aos meus Tios em especial ao Tio Pedro que antes de todos acreditou
que eu poderia chegar at aqui, aos meus Avs, pela pacincia na minha
constante ausncia; Minhas primas, em especial as caulinhas Dani e Joo Vitor
que sempre souberam me entender;
Ao meu namorado Matheus, amor da minha vida, que sempre acreditou
incentivou, teve pacincia, e nunca mediu esforos para que eu alcanasse meus
objetivos;
Aos amigos de Laboratrio, Srgio, Kellen, Carlos e Hrica, de forma especial a
Fabiane, a Pedro pela ajuda e pacincia sempre, e minha amiga Monique,
sempre disposta e parceira, me ajudando nos momentos mais difceis;
s amigas maravilhosas, Fefa, Karine, Jalile, Poli, Keila, Erica, Roberta,
Marilene, Cludia, Gazi, e a todos os amigos conquistados no dia a dia da UENF.

iii
 SMARIO

RESUMO.............................................................................................................. vi
ABSTRACT................................................................................................ ix
1. Introduo...................................................................................................01
2. Reviso de Literatura..................................................................................04
2.1. Aspectos Botnicos e Origem Geogrfica...........................................04
2.2. Determinao do Caritipo.................................................................05
2.3. Meiose ................................................................................................09
2.4. Viabilidade Polnica.............................................................................12
2.5. Aspectos Citogenticos da famlia Caricaceae...................................14
3. Trabalhos....................................................................................................17
3.1. Vasconcella goudotiana: UMA DESCRIO BOTNICA
SUMARIZADA DESSA ESPCIE SILVESTRE..........................................17
3.1.1. Resumo..................................................................................17
3.1.2. Abstract.................................................................................18
3.1.3. Introduo..............................................................................19
3.1.4. Material e Mtodos...................................................... .........20
3.1.4.1. Material Vegetal..................................................................20
3.1.4.2. Metodologia........................................................................21
3.1.5.. Anlise Estatstica........................................................... ...22
3.1.6. Resultados e Discusso........................................................22
3.1.7. Descrio das Plantas Masculinas........................................23
3.1.8. Descrio das Plantas Femininas.........................................25

iv
 3.1.9. Referncias...........................................................................27
3.2. DETERMINAO DO CARITIPO DA ESPCIE SILVESTRE
Vasconcella goudotiana..................................................................................29
3.2.1. Resumo..................................................................................29
3.2.2. Abstract..................................................................................30
3.2.3. Introduo..............................................................................30
3.2.4. Material e Mtodos.................................................................31
3.2.4.1. Material Vegetal...................................................................31
3.2.4.2. Pr-tratamento e Fixao...................................................32
3.2.4.3. Preparo das Lminas..........................................................32
3.2.5. Determinao do Caritipo.....................................................33
3.2.6. Resultados e Discusso.........................................................33
3.2.7. Referncias............................................................................38
3.3. AVALIAO DO COMPORTAMENTO MEITICO DA ESPCIE
SILVESTRE Vasconcella goudotiana.............................................................41
3.3.1. Resumo..................................................................................41
3.3.2. Abstract..................................................................................42
3.3.3. Introduo..............................................................................43
3.3.4. Materiais e Mtodos..............................................................44
3.3.4.1. Material Gentico...............................................................44
3.3.4.2. Metodologias. ....................................................................45
3.3.5. Resultado e Discusso..........................................................47
3.3.6 Referncias............................................................................59
4.0. Concluso Geral.....................................................................................61
5.0. Referncias.............................................................................................62

v
 RESUMO

SILVA, Emanuelli Narducci; M.Sc.; Universidade Estadual do Norte Fluminense

Darcy Ribeiro. Maro, 2009. Caracterizao botnica e citolgica da espcie
silvestre Vasconcella goudotiana (Caricaceae). Orientadora: Telma Nair Santana
Pereira. Conselheiros: Messias Gonzaga Pereira e Alexandre Pio Viana.

As espcies que compem o gnero Vasconcella so cultivadas em pequena

escala, sendo consumidas e cultivadas principalmente por populaes indgenas,
da regio dos Andes e Equador. O gnero se destaca por ser considerada fonte
de genes de resistncia a doenas que so danosas para a cultura do mamoeiro
(Carica papaya L.). Assim, a preservao, avaliao e caracterizao de
germoplasma silvestre relacionado forma cultivada so essenciais para o
melhoramento da cultura. Esta dissertao teve o objetivo de fazer uma
caracterizao citolgica da espcie silvestre Vasconcella goudotiana e est
composta de trs artigos cientficos: um sobre uma descrio botnica
sumarizada da espcie cultivada nas condies de Campos dos Goytacazes; um
segundo sobre a determinao do caritipo da espcie e um terceiro sobre a
caracterizao meitica e ps-meitica da espcie. Para tanto, sementes foram
adquiridas via doao feita pelo USDA / ARS - Hillo (HI) (United States
Department of Agriculture / Agricultural Research Service) - Hillo (HI): (HCR 167)
e as plantas foram cultivadas na casa de vegetao localizada na Unidade de
Apoio Pesquisa do CCTA. A descrio botnica foi realizada usando descritores
do IBPRG para a cultura do mamoeiro. Pode-se observar que a espcie diica
com plantas masculinas e femininas com fentipos bem distintos: a planta

vi
masculina apresenta folhas palmipartidas e onduladas com comprimento mdio
variando de 25,98 cm e largura mdia de 31,20 cm, no apresentam pubescncia
e nem cera. As flores so dispostas em inflorescncias com pednculos
compridos medindo em mdia 23,84 cm e apresentando em mdia 24,44 botes
florais. As flores so de colorao amarelo creme, pentmeras, simptalas,
apresentando dez anteras do tipo heterodinamo. As anteras so basifixas com
deiscncia longitudinal. A planta feminina apresenta folhas palmipartidas,
onduladas, sem serosidade, pouca pubescncia e com dimenses menores que
as folhas masculinas. As flores so nicas, dispostas nas axilares foliares,
pentmeras, dialissepalo. O gineceu gamocarpelar e o pistilo pluricarpelar
apresentando seis carpelos. O ovrio nfero, plurilocular, apresentado cinco
lculos e 264 vulos. Para a determinao do caritipo foi utilizado um protocolo
j definido no Laboratrio para outras espcies da famlia, sendo que as pontas
de razes foram obtidas em plantas em desenvolvimento. Os dados de
comprimento dos braos longos e curtos dos cromossomos permitiram estimar a
razo entre braos, o comprimento total ou absoluto dos cromossomos, o ndice
centromrico e o ndice de simetria. Com base nas imagens das clulas em
metfase observou-se que a espcie apresenta dezoito cromossomos, cujos
comprimentos variaram de 3,06 m a 2,03 m, sendo quatro pares
submetacntricos e cinco pares metacntricos. O caritipo do tipo simtrico com
um ndice de 40,16% e o comprimento do lote haplide foi de 23,08 . Dentre as
espcies Caricaceae analisadas at ento, Vasconcella goudotiana a que
apresenta as maiores medidas dos cromossomos. A avaliao do comportamento
meitico foi realizada com a observao da formao de gametas masculinos
baseada na anlise meitica, observando as diferentes fases meiticas. De um
modo geral, a meiose seguiu normal gerando no final gametas balanceados,
porm algumas irregularidades foram observadas como cromossomos pegajosos,
cromossomos retardatrios, segregao precoce, e distrbio nas fibras do fuso.
Considerando que a meiose influenciada por fatores genticos e ambientais,
acredita-se que essas anormalidades foram decorrentes das condies
ambientais como alta temperatura durante a formao dos gametas, j que esta
espcie originalmente de ambientes cuja elevao fica em torno de 1.500 a
2.200 m acima do nvel do mar. O ndice meitico foi de 85,45%, sendo que foram
observados dades, trades e polades com certa freqncia nas clulas. Esse

vii
ndice sugere que esta espcie meioticamente instvel. A avaliao da taxa de
viabilidade polnica foi realizada com a soluo tripla de Alexander, sendo os
gros de plen classificados como viveis (colorao prpura) e inviveis
(colorao verde). A espcie apresentou uma viabilidade polnica de 67,93%
considerada um percentual baixo, apesar de ter tido plantas com percentual de
85,05%, que um percentual indicador de uma viabilidade mdia. Os valores
baixos do ndice meitico e da viabilidade polnica so reflexos das anomalias
observadas durante a diviso meitica. Assim, conclui-se que a espcie V.
goudotiana deve ser usada em programas de melhoramento via hibridao com
certa cautela, j que provavelmente apresenta gametas desbalanceados.

viii
 ABSTRACT

SILVA, Emanuelli Narducci; M.Sc.; Universidade Estadual do Norte Fluminense

Darcy Ribeiro. March, 2009. Botanical and cytological characterization of the wild
species Vasconcella goudotiana (Caricaceae). Adviser: Telma Nair Santana
Pereira. Committee members: Messias Pereira Gonzaga and Alexandre Pio
Viana.

In general, species within Vasconcella genus are cultivated in small scale by

indigenous populations in Ecuador and Andean region. The genus is considered
as a source of resistance genes that can be transferred to papaya (Carica papaya
L.). Thus, the conservation, evaluation and characterization of this wild germplasm
related to the cultivated form are essential to papaya breeding. The objective of
this dissertation was to characterize V. goudotiana, a wild species related to
papaya, in cytological terms. This dissertation is compound by three scientific
works. The first one botanically describes the species under Campos dos
Goytacazes climate conditions; the second one presents its karyotype and the last
one shows the meiotic and post-meiotic analyses of this species. Seeds of V.
goudotiana (accession HCAR 167) were kindly donated by USDA/ARS - Hillo (HI)
(United States Department of Agriculture/Agricultural Research Service) - Hillo (HI)
and the plants were cultivated under greenhouse conditions, at UAP/CCTA/UENF.
The botanical description was based on the IBPGR descriptors recommended to
papaya. V. goudotiana is a dioecious species and its male and female plants show
a very distinct phenotypes. The male plants presented palmate leaves, with a
mean length of 25.98 cm and a mean wide of 31.20 cm. These leaves presented

ix
neither trichomes nor wax. The male flowers are disposed in inflorescences with
long peduncles (mean length of 23.84 cm) and a mean of 24.44 floral buds per
inflorescence. The flowers are yellow-cream, pentamerous, sympetals, with ten
anthers of heterodynamous type. The anthers are basefix with longitudinal
dehiscence. The female plants have palmate leaves with no waxy, a few
pubescence and smaller size than the male leaves. The solitary female flowers are
localized in the axil of the leaf. They are pentamerous and dialysepalous. The
gynoecium is syncarpous (multiple connate carpels) and the pistil shows six
carpels. The ovary is inferior, 5-locular, with 264 ovules per ovary. Male plants
flowered before female, with a mean of 8 months until flowering. The karyotype
was obtained using the protocol that was already defined to the other Caricacae
species. Root tips were collected from developing plants. Data from long and short
arms of the chromosomes were used to estimate the arm ratio, the total or
absolute chromosome length, the centromeric index and the symmetry index.
Based on the images from metaphase cells, it was verified that this species has 18
chromosomes, whose length is between 2.03 and 3.06 m. Four chromosome
pairs were classified as submetacentric and five pairs as submetacentric. The
karyotype was symmetric and its symmetry index was 40.16%. The haploid lot
length was 23.08 M. Among the already Cariacaceae species analyzed in the
lab, V. goudotiana has the longest chromosomes. Its meiotic behavior was
evaluated by the analysis of male gametes formation in different meiosis stages. In
general, it was a normal meiosis, resulting in balanced gametes, although some
abnormalities as sticky and delayed chromosomes, precocious segregation and
fuse fibers disturbance had been observed. Considering that meiosis is influenced
by genetic and environment factors, it is possible to suppose that these
abnormalities would be a consequence from environment conditions such as the
high temperatures during the gametes formation, since this species is native from
altitudes between 1,500 and 2,200 m above sea, usually with low temperatures.
The meiotic index was 85.45% and some dyads, triads and polyads were
observed in the cells. This index value suggests that V. goudotiana is a meiotic
unstable species. The pollen grain viability was analyzed using Alexanders triple
solution. The viable pollen gains were red stained while the non-viable ones were
green stained. A 67.93% can be considered low pollen grain viability, although
some plants presented a value of 85.05%, indicating a moderate viability. The low

x
values of the meiotic index and the pollen grain viability can result from some
abnormalities observed during the meiosis. Thus, the use of V. goudotiana in
breeding programs that use hybridization crosses should be cautious due to its
unbalanced gametes.
.

xi
 1

1. INTRODUO

A famlia Caricaceae composta pelo gnero Cylicomorpha, originrio da

frica Equatorial, e pelos gneros Carica, Jacaratia, Jarilla, Horovitzia e
Vasconcella, originrios das Amricas do Sul e Central (Badillo, 1993, 2000).
Todas as espcies da famlia at ento analisadas citologicamente so diplides
(2n=2x=18 cromossomos) e diicas com exceo de Vasconcella monica que
monica, Vasconcella cundinarmacensis tambm conhecida com Vasconcella
pubescens, que monica-diica e Carica papaya que diico-hermafrodita. O
mamoeiro (Carica papaya L.) a espcie mais importante da famlia devido
produo de seus frutos nas regies tropicais e subtropicais do mundo (Chen et
al., 1991).
A cultura do mamoeiro apresenta alguns problemas srios que causam
grandes perdas aos agricultores devido presena de pragas e doenas, que
algumas vezes dizimam plantaes inteiras. A mancha anelar ou mosaico,
causada pelo vrus PRSV (Papaya RingSpot Vrus), considerada uma das
principais doenas que ocorrem na cultura do mamoeiro (Souza Junior, 2000).
Vrias metodologias foram implementadas a fim de controlar a doena, mas at o
presente nenhuma apresentou sucesso (Dantas et al., 2002); uma das limitaes
encontradas pelos melhoristas para controlar o PRSV a ausncia de gentipos
no germoplasma da forma cultivada que apresentem resistncia ao vrus.
Atualmente o monitoramento semanal do campo, a tcnica de controle aplicada
em campos de produo. Por outro lado, algumas espcies silvestres da famlia
Caricaceae apresentam genes de resistncia ao vrus PRSV (Alvizo e Rojkind,
 2

1987; Magdalita et al.,1988), bem como so portadoras de outras caractersticas

de interesse agronmico, como resistncia ao frio, alta concentrao de acar,
resistncia Phytophtora, entre outros caracteres (Manshardt e Wenslaff, 1989;
Drew et al., 1998; Scheldeman et al., 2001).
Dentro do gnero Vasconcella pode-se destacar a espcie silvestre
Vasconcella goudotiana que apresenta o carter de resistncia ao fungo
Phytophtora palmivora, que age destruindo o meristema radicular das plantas.
Esse fungo age tambm na forma de esporos ocasionando o desenvolvimento de
uma massa micelial branca, a qual leva a podrido do fruto, sendo que as perdas
de frutos maduros giram em torno de 7 a 10% da produo total do mamoeiro
(Liberato et al., 1993). A ao de fitopatgenos causa perdas ps-colheita que
podem chegar a 75% na cultura do mamoeiro na fase de comercializao. Com
tudo as pesquisas visando resistncia ao fungo ainda so incipientes.
Para que esse germoplasma seja utilizado em programas de
melhoramento necessrio que se utilize a hibridao interespecfica que tem
como objetivo a introgresso de genes de interesse em espcies cultivadas. Para
tanto importante que se conhea a espcie em questo e que se conhea as
relaes genticas entre a espcie silvestre e a forma cultivada (Dantas et al.,
2002).
As espcies que compem o gnero Vasconcella so cultivadas em
pequena escala, sendo consumidas e cultivadas principalmente por populaes
indgenas, da regio dos Andes e Equador (Scheldeman et al., 2001). A literatura
sobre os aspectos citogenticos e genticos desse gnero muito incipiente.
Assim, conhecer e caracterizar citogenticamente o germoplasma silvestre da
famlia Caricaceae permite um maior conhecimento a respeito das espcies e um
melhor uso das mesmas em programas de melhoramento.
O Laboratrio de Melhoramento Gentico Vegetal (LMGV) da Universidade
Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro (UENF) vem desenvolvendo um
programa de melhoramento gentico do mamoeiro desde 1995, e recentemente
foram introduzidas na sua coleo de germoplasma as espcies V. quercifolia, V.
cauliflora, V. goudotiana, V. cundinamarcensis e V. monoica importantes fontes de
genes de interesse para o melhoramento gentico da forma cultivada, o
mamoeiro.
 3

Dando continuidade s pesquisas citogenticas de espcies da famlia

Caricaceae, este trabalho teve por objetivo caracterizar citologicamente espcie
silvestre Vasconcella goudotiana via determinao do caritipo, caracterizao da
meiose, determinao do ndice meitico e determinao da viabilidade polnica,
visando gerar conhecimentos que possam ser usados no programa de
melhoramento do mamoeiro.
 4

2. REVISO DE LITERATURA

2.1. Aspectos Botnicos e Origem Geogrfica

A famlia Caricaceae pertence classe Dicotyledoneae, subclasse

Archichlamydeae, ordem Violales, subordem Caricineae, famlia Caricaceae
(Badillo, 1993). Dentro da famlia destaca-se o gnero Vasconcella que
composto por 21 espcies. De acordo com Scheldeman et al. (2001), algumas
das espcies que compem o gnero Vasconcella apresentam forma e textura da
casca parecida com a Carica papaya L., sendo conhecidas como papaya de
terras altas ou papayas das montanhas, e pela preferncia por terras altas. At o
presente, as espcies da famlia analisadas so tidas como diplides com
2n=2x=18 cromossomos, ou seja, o nmero bsico de cromossomos do conjunto
haplide n=x=9 (Storey, 1941).
As plantas do gnero Vasconcella so arbustos que chegam a atingir at
10 m de altura; a haste medular pode se apresentar simples ou ramificada, seu
tronco se apresenta mais largo acima da base podendo atingir at 20 cm de
dimetro. Apresentam folhas grandes, sendo formadas de sete a cinco nervuras,
em mbito semicircular (Badillo, 2000). A maioria das espcies do gnero
Vasconcella diica, porm h representantes monicos (V. monica) e diico-
monico (V. cundinamarcensis ou V. pubescens). Em V. monica as flores so
diferenciadas morfologicamente, porm ocorrem na mesma inflorescncia,
ocorrendo uma ou duas flores femininas e as demais masculinas (Badillo, 1993).
 5

A espcie V. goudotiana diica e, portanto algama. Nas plantas

masculinas as flores ocorrem em inflorescncias e nascem nas axilas foliares;
apresentam pednculos alongados que chegam a atingir 13 cm; as flores se
organizam em grupos e apresentam o tubo do clice curto, lbulos curtos
estreitos e agudos, de colorao verde enquanto os botes apresentam colorao
amarelo-claro ao abrirem. J as flores femininas se apresentam como flores
isoladas e tambm nascem nas axilas foliares, so flores pequenas e com o
pednculo muito curto (Badillo, 1993). As plantas de V. goudotiana tambm
diferem em tamanho e estrutura foliar, as plantas masculinas apresentam folhas
mais repicadas, enquanto as femininas apresentam folhas menos repicadas.
Os primeiros relatos sobre as Caricceas datam de 1696, e foram
descritos por Linneaus, em sua obra Plantarum em 1753 (Badillo, 1971). O
gnero Vasconcella tem o Equador como seu centro de diversidade; na rea se
concentra 71% do total de espcies do gnero descritas, ou seja, 15 das 21
espcies do gnero. Devido a tal caracterstica a rea considerada como
portadora de um alto nvel de diversidade gentica (Badillo, 1993). V. microcarpa
e V. cundinamarcensis so encontradas da regio Andina e em direo ao norte
do Panam e V.cauliflora pode ser encontrada do norte ao sul do Mxico (Badillo,
2000). As espcies que compem o gnero so descritas como silvestres e ou
semidomesticadas, e se desenvolvem em regies de 1.500 a 2.200m de altitude,
em bosques midos e subtropicais (Badillo 1971, 1993, 2000).

2.2. Determinao do Caritipo

Caritipo so a representao de todos os cromossomos ou conjunto

cromossmico de uma espcie. Cromossomos so unidades de herana
encontradas no ncleo de todas as clulas de organismos eucariontes. A
determinao de um caritipo geralmente baseia-se nos cromossomos mitticos
em metfase. Trs termos so freqentemente utilizados na identificao de
cromossomos: caritipo, o exato conjunto bsico (genoma) de um organismo;
cariograma, medidas fsicas dos cromossomos tiradas em fotomicrografia, onde
os cromossomos so organizados em ordem decrescente ou no, e idiograma,
que o desenho esquemtico do cariograma (Guerra &Souza, 2002).
 6

A forma dos cromossomos monocntricos fundamenta-se na posio da

constrio primria ou centrmero que divide o cromossomo em braos de
tamanho igual ou no; alm dos centrmeros tem-se a regio organizadora de
nuclolo (RON), sitio da seqncia repetitiva 45S (rDNA), que pode ser terminal
ou intersticial dando origem constrio secundaria e no ltimo caso dando
origem ao satlite (Schubert, 2007).
Levan et al. (1964), baseando-se na posio do centrmero, classificaram
os cromossomos em seis tipos: metacntrico (M) e telocntrico (T), que so
terminologias usadas para cromossomos que possuem o centrmero localizado
exatamente no meio do cromossomo (metacntrico) e na poro terminal do
cromossomo (telocntrico). Os outros quatro tipos foram classificados em
concordncia com a localizao do centrmero que poderia ser na regio
mediana (m), submediana (sm), subterminal (st) e terminal (t); entretanto, essa
classificao indicada para cromossomos longos. Guerra (1986) revisou o
trabalho de Levan et al. (1964) e sugeriu uma classificao baseada na razo
entre braos (r) e no ndice centromrico (IC) e com base nesses dois
estimadores classificou os cromossomos em quatro tipos: metacntrico (M, r=1,0
a 1,49; IC= 40,1 a 50,0), submetacntrico (SM, r=1,50 a 2, 99, IC= 25,1 a 40,0),
acrocntrico (A, r= 3,0 a 7, IC=0.01 a 25.0) e telocntrico (T, r=, IC=0). O autor
relata que esta classificao mais adequada para espcies com cromossomos
pequenos.
Outro conceito importante em citologia a simetria e assimetria do
caritipo, cujos cromossomos de tamanho semelhante e centrmero mediano ou
submediano so considerados como pertencentes a um caritipo simtrico,
enquanto que caritipos assimtricos so aqueles que apresentam cromossomos
de tamanho mais heterogneo e centrmeros mais terminais (Mayeda, 1997). Os
caritipos mais simtricos so considerados mais primitivos e dariam origem aos
caritipos assimtricos. Huziwara (1962) estabeleceu um parmetro para analisar
a simetria dos caritipos, o ndice TF (ndice de simetria). O ndice TF
corresponde razo entre o somatrio dos braos curtos e o comprimento do lote
haplide; o ndice pode variar de 0 a 50%, sendo este ltimo valor caracterstico
de caritipos extremamente simtricos. Acredita-se que espcies que apresentam
caritipo assimtrico sejam mais avanadas evolutivamente (Coelho e Battistin,
 7

1996; Mercado-Ruaro e Delgado-Salinas 1998), e que alteraes cromossmicas

ocorreram no decorrer da evoluo da espcie (Maffei et al., 1996).
Outras variveis tambm so levadas em conta na anlise do caritipo
como o tamanho do genoma, caractersticas dos telmeros, tamanho e posio
dos knobs heterocromticos, e comprimento absoluto e relativo dos
cromossomos, alm das constries secundrias (Singh, 1993).
Para a determinao do caritipo necessrio que clulas mitticas em
diviso apresentem os cromossomos espalhados e condensados de forma a
permitir a contagem dos cromossomos e as medies dos braos
cromossmicos. Para tanto, o tecido vegetal tem que ser preparado de maneira a
preservar os cromossomos permitindo, assim, uma boa visualizao dos mesmos.
De maneira geral, realizado um pr-tratamento com substncias qumicas, o
qual seguido pela fixao, com posterior colorao. O pr-tratamento consiste
em submeter o tecido vegetal, normalmente pontas de razes visando: a) clarear o
citoplasma; b) dissolver a lamela mdia promovendo uma melhor separao e
distribuio das clulas; c) promover o espalhamento dos cromossomos
acompanhado da clarificao das constries; e d) amaciar o tecido. O pr-
tratamento tambm promove uma rpida penetrao da soluo fixadora como
tambm facilita o estudo da estrutura dos cromossomos (Sharma e Sharma 1994)
Dentre os produtos qumicos utilizados em pr-tratamentos tem-se a
colchicina que um alcalide que altera o estado coloidal dos cromossomos e, no
citoplasma, causa a inibio das fibras do fuso acromtico, permitindo assim uma
distribuio ao acaso dos cromossomos metafsicos por toda a clula. Essa
substncia em contato com os cromossomos promove o encurtamento dos
mesmos e torna as constries mais evidentes. No h efeito letal nos tecidos, o
qual deve ser fixado em uma soluo fixadora, aps tratamento com colchicina
(Sharma e Sharma, 1994). As metfases, bem espalhadas oriundas de
tratamento com colchicina, so conhecidas como metfase C. a partir das
metfases C que so montados os cariogramas e idiogramas (Guerra, 1988).
A 8-hidroxiquinolena, membro do complexo quinolina outro produto
utilizado como pr-tratamento, e seu uso promove a inativao do fuso e,
conseqentemente, no impede a expanso dos cromossomos; os braos
cromossmicos contraem - se igualmente, permitindo a metfase manter o seu
arranjo relativo no plano equatorial da clula. A oxiquinolena no afeta algumas
 8

regies dos cromossomos fazendo com que os dois braos fiquem bem
contrados e visveis. As constries secundrias tambm se tornam visveis com
o uso desta substncia (Sharma e Sharma, 1994). Usualmente indicado pr-
tratar o tecido somtico em soluo aquosa 0,002 M por 3 a 4 h, em temperatura
de 18 C; temperaturas superiores tm causado o aparecimento de cromossomos
pegajosos, sendo o seu uso adequado para espcies que apresentam
cromossomos de tamanho grande (Singh, 1993).
O paradiclorobenzeno (PDB), pertencente ao grupo dos benzenos, muito
utilizado em determinao de caritipos, pois ele no somente promove a inibio
do fuso, como tambm torna as constries cromossmicas mais visveis devido
contrao e a hidratao diferencial dos segmentos dos cromossomos. De
todos os produtos utilizados na citogentica, o paradiclorobenzeno apresenta uma
ampla utilizao podendo ser utilizado tanto para espcies com cromossomos
longos quanto com cromossomos pequenos, variando o tempo de tratamento, de
acordo com a espcie (Sharma & Sharma, 1994).
Quanto colorao dos cromossomos tem a colorao convencional e a
diferencial ou bandeamento. As coloraes ditas como convencionais, so as que
utilizam produtos que coram o cromossomo por inteiro (Giemsa, Orcena Actica,
Reativo de Schiff, hematoxilina/eosina, etc.). A soluo corante Feulgen ou
Reativo de Schiff, cujo corante a fucsina cida, tem muitas vantagens como alta
especificidade ao DNA, da ser considerado o mais efetivo para a colorao dos
cromossomos, porm em espcies de baixo contedo de DNA e cromossomos
muito pequenos, nem sempre os cromossomos so bem corados e delineados
(Guerra & Souza, 2002).
O carmim ou carmine um corante natural muito utilizado para colorao
de cromossomos mitticos e meiticos. Sua soluo serve a duplo propsito, de
fixao e colorao, pois o cido actico um bom fixador para cromatina e o
fludo penetra rapidamente. Soluo em 1 % do corante preparada em cido
actico em 45 % quente; certos autores preferem sempre soluo em 5 %,
podendo ser adicionado hidrxido de ferro durante a preparao do corante para
funcionar como mordente e intensificar a colorao. Para tecidos mais compactos
como pontas de razes ou folhas aconselhvel tratar o material com uma
mistura HCl-carmim aquecido, o qual alm de amaciar o tecido ir colorir os
cromossomos (Sharma e Sharma 1994).
 9

Giemsa uma mistura de vrios corantes, do grupo azul de metileno e

seus produtos da oxidao, os azures bem como a eosina Y. A qualidade do
corante varia com a proporo dos corantes usados no preparo. A soluo de
Giemsa geralmente preparada por dissoluo do p em mistura de glicerina e
metanol. Seu efeito na colorao torna a cromatina corada de vermelho e o
citoplasma de azul. A importncia de Giemsa na colorao de cromossomos
aumentou substancialmente aps o advento da tcnica de bandeamento, em
meados de 1970 (Sharma e Sharma 1994).
Alm destes podem ser utilizados corantes para regies especficas do
DNA formando bandas, tambm conhecida como colorao diferencial ou
bandeamento, sendo importantes na caracterizao de polimorfismos, permitindo
a distino de possveis rearranjos cromossmicos. O caritipo convencional
pode at constatar a ocorrncia de polimorfismo intra-especifico (Ferreira e
Aguiar-Perecin, 1996), porm, tcnicas de colorao convencional no distinguem
cromossomos com caractersticas morfolgicas similares (Ferreira e Aguiar-
Perecin, 1996; Singh, 1993).

A anlise do caritipo permite avaliar rearranjos estruturais, os quais

podem ser detectados em funo de diferenas no tamanho relativo, posio do
centrmero, nmero cromossmico bsico e nmero, posio e tamanho do
satlite. Variaes na forma do cromossomo podem ser devidas a inverses
pericntricas e paracntricas, enquanto que alteraes na forma e no tamanho
dos cromossomos podem ser devidas a translocaes recprocas, delees,
inseres, duplicaes (Schubert, 2007); no estudo do caritipo tais informaes
so de grande importncia para a anlise cito taxonmicas (Stace, 2000).

2.3. Meiose

A fertilidade de um organismo esta diretamente associada sua

regularidade meitica. O estudo do comportamento meitico permite a
compreenso de uma maior parte do DNA funcional de um cromossomo, assim
os resultados obtidos podem ser aplicados a estudos de gentica de populaes,
na preservao de recursos genticos e em programas de melhoramento (Techio
et al., 2007). A realizao de estudos meiticos fornece importantes informaes
associadas ao genoma individual de uma espcie assim como sobre o
pareamento na produo de hbridos (Gupta e Priyadarshan, 1987), tais estudos
 10

geram tambm informaes sobre a recombinao cromossmica, as

irregularidades meiticas e a viabilidade no caso da produo de hbridos (Jong et
al., 1993).
O processo compreende dois ciclos sucessivos de diviso denominados
meiose I (ou 1 diviso) e meiose II (ou 2 diviso). Na meiose I ocorre
segregao de cromossomos homlogos, formando duas clulas com metade do
nmero de cromossomos (n) da clula original, cada uma com contedo 2C de
DNA, enquanto na meiose II ocorre segregao de cromtides irms, originando
quatro clulas filhas n, e com contedo 1C de DNA (Guerra, 1988).
A primeira diviso, reducional, apresenta as fases Prfase I, Metfase I,
Anfase I e Telfase I. A Prfase I a mais longa e constituda de cinco
subfases: leptteno, zigteno, paquteno, diplteno e diacinese. Em algumas
espcies, a prfase longa, representando mais que 90% da durao de toda a
meiose. nesta fase e nas subfases que ocorre o pareamento dos cromossomos
homlogos e a permuta entre os mesmos que pode resultar em recombinao e
conseqentemente em variabilidade gentica.
Embora os quiasmas apaream no diplteno eles so formados no final do
zigteno ou no paquteno, quando as cromtides esto emparelhadas; nos
bivalentes meiticos os quiasmas podem se localizar na regio proximal (P),
intersticial (I) ou distal (D) em relao ao centrmero (Guerra e Souza, 2002). .A
posio e o nmero de quiasmas so responsveis pela determinao do nvel de
recombinao (IR ndice de Recombinao), assim como o grau de segregao
gnica das geraes subseqentes.
De uma maneira resumida na metfase I os pares de cromossomos
homlogos alinham-se formando a placa equatorial; na anfase I, os
cromossomos homlogos segregam e migram para os plos opostos devido ao
encurtamento das fibras do fuso, completando a terminalizao dos quiasmas.
Usualmente na metfase I que os quiasmas so classificados em terminais e
interticias de acordo com a configurao observada dos cromossomos na placa.
Fernndez-Calvin et al. (1995), relatam que a avaliao meitica baseada
apenas em clulas em metfase I, pode vir a fornecer uma viso limitada do
pareamento, de forma especial quando so utilizadas tcnicas de colorao
convencional. As configuraes observadas nas metfases I no so,
necessariamente, as que melhor caracterizam a constituio cromossmica, pois
 11

podem ser o resultado de quebras em configuraes maiores de pareamento

como conseqncia da limitada formao de quiasmas (considerando os
possveis efeitos das translocaes).
Ao final da anfase I cada plo da clula contm o nmero de
cromossomos reduzidos a metade (n). Na telfase I os cromossomos localizados
nos plos da clula iniciam um processo de descondensao parcial, o envoltrio
nuclear volta a reorganizar-se e o nuclolo se reconstitui.
A segunda diviso da meiose, a diviso equacional, se assemelha a uma
mitose, exceto o fato de que h apenas uma cpia de cada par cromossmico por
ncleo. Durante a prfase II, os cromossomos voltam a atingir seu grau mximo
de condensao e se movem para a placa equatorial. Na metfase II, os
cromossomos se posicionam na regio mediana da clula formando a placa
equatorial e durante a anfase II, h a separao e migrao de cada cromtide
irm em direo a um dos plos da clula. A telfase II marca o final da meiose,
quando a membrana nuclear e o nuclolo voltam a se reconstituir.
A meiose um evento de elevada estabilidade evolutiva que culmina na
reduo do nmero de cromossomos (Pagliarini, 2000). O processo de diviso
meitica caracteriza-se por uma srie de eventos seqenciais de elevada
complexidade, tanto mecnica quanto bioqumica (Pagliarini e Pozzobon, 2004).
Os estudos meiticos so de grande relevncia, pois explicam fenmenos
reprodutivos, mecanismos de hereditariedade e de variabilidade gentica nas
espcies. Afinal, a meiose se converte em uma das fontes de variabilidade
gentica utilizada pelos organismos para a adaptao ao meio ambiente e em
conseqncia, a perpetuao atravs da descendncia.
O curso normal e harmonioso da meiose garante a viabilidade do gameta
(Pagliarini, 2000), entretanto os eventos da meiose so controlados por fatores
genticos, sendo assim mutveis, e responsveis por algumas das irregularidades
meiticas como os cromossomos retardatrios (Consolaro et al., 1996), o
processo de orientao diferenciada das fibras do fuso acromtico (Tilquin et al.,
1984; Caetano-Pereira et al.,1998). Segundo Defani-Scoarize et al., (1996), as
irregularidades meiticas so indesejveis, pois altera os gentipos ocasionando
a instabilidade meitica caracterstica indesejada por dificultar trabalhos de
hibridao interespecfica em programas de melhoramento e a ocorrncia dessas
anomalias pode dificultar a produo de hbridos, por ter como conseqncia, a
 12

variao cromossmica em funo da perda ou ganho de cromossomos nas

novas geraes (Souza et al. , 2000).
Cromossomos retardatrios, cromossomos pegajosos, e outras
anormalidades observadas durante a meiose podem ser causadas pela
manifestao de genes ou pela influncia ambiental sobre a planta durante a
meiose (Kaul & Murthy, 1985; Koduru & Rao, 1981).
Love (1951) estabeleceu o ndice Meitico (IM) como forma de avaliao
da estabilidade meitica dos gentipos; os ndices abaixo de 90% so
caractersticos de espcie com baixa estabilidade meitica, o que sugere uma
tendncia para a ocorrncia de anormalidades durante o processo de
gametognese; J espcies portadoras de um ndice superior a 90% so
consideradas portadoras de alta estabilidade meitica.

2.4. Viabilidade Polnica

A viabilidade polnica uma medida da fertilidade masculina e pode ser

determinada atravs de um grande nmero de tcnicas. A realizao de estudos
associados viabilidade polnica contribui para pesquisas associadas ecologia
e taxonomia da espcie em estudo, gerando assim informaes as quais podem
ser utilizadas em processos de conservao gentica, assim como na agricultura,
e em programas de melhoramento gentico.
A viabilidade polnica pode ser determinada atravs de mtodos diretos,
como a induo da germinao do plen in vivo ou in vitro e por mtodos
indiretos, baseados em parmetros citolgicos como a colorao (Dafni, 1992;
Techio et al., 2006). Estes testes utilizam corantes qumicos especficos que
reagem com componentes celulares presentes no gro de plen maduro. Dentre
as solues corantes pode-se citar a soluo de lugol, soluo de carmim actico
em 1%, e a soluo tripla de Alexander (Dafni, 1992).
Os testes utilizando lugol ou iodeto de potssio (I2KI) baseiam-se em uma
reao qumica que acontece entre o iodo da soluo e a molcula de amido do
gro de plen, dando aos gros de plen viveis uma colorao marrom e aos
inviveis, devido ausncia de amido, uma colorao amarelo-claro (Jonhansen,
1940). indicado para espcies cujo material de reserva do gro de plen o
amido. Na colorao com carmim actico em 1%, os gros de plen viveis
apresentam uma colorao rosa/vermelha forte, enquanto os gros inviveis
 13

mostram-se transparentes e no corados devido reao da soluo corante com

o material gentico existente no citoplasma, como o DNA. Esses mtodos apesar
de serem usados com certa freqncia no so considerados eficazes e seus
resultados so questionveis (Dafni, 1992).
A soluo tripla de colorao utiliza uma soluo composta por fucsina
bsica, verde malaquita, e laranja G. O corante fucsina bsica reage com o
citoplasma colorindo o mesmo de prpura; o verde malachita reage com a parede
do gro de plen colorindo-a de verde e a laranja G o intensificador da cor
dando uma maior diferenciao entre os dois outros corantes. Sob o efeito desta
soluo gros de plen viveis apresentam o citoplasma cor prpura e a parede
do gro de plen de cor verde; enquanto gros de plen inviveis colorem de
verde por apresentarem apenas a parede do gro de plen (Alexander, 1969).
Esses mtodos so fceis e relativamente baratos, portanto podem ser utilizados
de maneira rotineira nos laboratrios visando ter um indicativo da viabilidade
polnica de um determinado gentipo. No entanto, apesar dessas vantagens
alguns autores questionam a eficcia dos mesmos fornecerem informaes sobre
a capacidade germinativa do plen, j que as solues reagem com o citoplasma
e ncleo do gro de plen.
A capacidade germinativa do gro de plen pode ser avaliada atravs de
testes de germinao in vitro (Techio et al., 2006) ou atravs do mtodo via
reao fluorocromtica ou Teste do FCR. Nesta metodologia, os gros de plen
que no so plenamente fluorescentes, ou seja, gros pouco fluorescentes e sem
fluorescncia so considerados inviveis, enquanto que os gros de plen
fluorescentes so tidos como viveis; a reao de fluorescncia est diretamente

correlacionada com a integridade da membrana do gro de plen, que por sua

vez participar da germinao e crescimento do tubo polnico (Heslop-Harrison &

Heslop-Harrison, 1970).
A viabilidade do plen se relaciona diretamente com a normalidade da
microesporognese e microgametogenese e com a eficcia dos cruzamentos,
tanto entre cultivares quanto entre espcies. Uma alta porcentagem de gros de
plen viveis esperada como resultado de um alto percentual de ttrades
normais, as quais refletem um processo meitico regular (Techio et al., 2006 ).
Considerando-se que a meiose est sob controle gentico, mutaes podem
ocorrer (Defani-Scoarize et al., 1996) e segundo Horner e Palmer (1995), h
 14

genes mutantes que atuam durante os estdios de pr-meiose, meiose e ps-

meiose, assim o desenvolvimento de gros anormais ou inviveis pode ser o
resultado de anormalidades que tenham ocorrido durante este perodo. Singh
(1993) relata que os gros de plen podem ser abortados devido ocorrncia de
aberraes estruturais; a ocorrncia de translocaes heterozigotas causa
aproximadamente 50% de gros de plen estreis.

2.5. Aspectos citogenticos da famlia Caricaceae

A cultura do mamoeiro mesmo sendo considerada como uma importante

cultura tropical e subtropical, no apresenta muitos estudos associados
caracterizao citogentica quando esta comparada a outras espcies de
interesse agronmico; fato este justificado devido ao tamanho e semelhana
morfolgica entre os cromossomos (Bajpai e Shing, 2006).
Kumar et al. (1945) relatam a importncia do trabalho realizado por Heiborn
em 1921, que descreveu que a espcie C. papaya era diplide, com 2n=18
cromossomos. Considerando relevante o trabalho, Kumar e Abraham (1942), a
partir da avaliao de clulas de mamoeiro em metfase, comprovaram que o
nmero somtico da espcie 2n=18 cromossomos, sendo estes metacntricos
ou submetacntricos, concluindo ainda a no existncia de cromossomos sexuais
heteromrficos. Em termos de contedo de DNA, a espcie cultivada apresenta
um genoma relativamente pequeno, sendo este composto por 327 Mpb
(Arumuganathan e Earle, 1991).
A cariotipagem importante para as espcies, pois por meio dela se
podem avaliar os diferentes tipos de cromossomos que a espcie apresenta a
presena das constries secundrias, o tamanho do lote haplide, e o tipo de
caritipo se simtrico ou no. Em Caricceas a literatura faz referncia ao nmero
de cromossomos somticos, porm poucos so os trabalhos de descrio desses
cromossomos. Datta (1971) descreveu os cromossomos da espcie cultivada,
como sendo todos muito pequenos, apresentando pequenas diferenas em seu
comprimento, contries primrias do tipo medianas ou submedianas, sendo que
alguns cromossomos podem apresentar mais de uma constrio secundria. Os
cromossomos das cinco variedades estudadas pelo autor foram em geral
pequenos com comprimento variando de 1 a 4,23 m.
 15

Damasceno Junior (2008) trabalhando com as espcies C. papaya, V.

monoica, V. cundinamarcensis e J. spinosa observou que as quatro espcies
apresentaram caritipos simtricos com 9 pares de cromossomos, ou seja 2n=18
cromossomos, como j descrito na literatura para a famlia Caricaceae. Foi
possvel observar constries secundrias nas espcies C. papaya (par 6), J.
spinosa (par 1) e V. monoica (par 3), todas tratadas com paradiclorobenzeno,
porm em V. cundinamarcensis, pr-tratada com trifluralin, no foi possvel
observar nenhuma constrio secundria nos cromossomos. O tamanho dos
cromossomos de C. papaya variaram de 1,52 a 2,29 m, de V. monoica variaram
de 1,35 a 2,49 m, de V. cundinamarcensis variaram de 1,66 a 2,45 m, e de J.
spinosa variou de 1,67 a 2,92 m. As trs primeiras espcies apresentaram
cromossomos metacntricos, e a ltima, metacntricos e submetacntricos. O
comprimento do lote haplide variou entre as quatro espcies, sendo para J.
spinosa de 20,17 m, para V. cundinamarcensis de 18,69 m, para V. monica
de 17,11 m, e para C. papaya de 17,18 m, concluindo que a forma cultivada
apresenta um dos menores genomas entre as espcies estudadas.

Por meio da tcnica de hibridizao in situ fluorescente (FISH), utilizando

sondas de rDNA (18S e 5S) Costa et al. (2008) fizeram um estudo comparativo
entre as espcies V. cundinamarcensis, V. goudotiana e C. papaya e verificaram
que h uma maior similaridade gentica entre V. goudotiana e V.
cundinamarcensis, em termos de nmero e distribuio das sondas, e que o
mamoeiro, em relao a estas seqncias repetitivas de rDNA, praticamente no
se assemelha s espcies de Vasconcellea. As espcies do gnero Vasconcellea
apresentaram um par de stios 5S, enquanto C. papaya apresentou trs stios 5S;
j as sondas 18S ocorreram com maior freqncia no gnero Vasconcellea, tendo
sido observado em V. goudotiana cinco stios da sonda 18S, e em V.
cundinamarsencis foram observados quatro stios dessa sonda. Os autores
confirmaram o nmero de cromossomos para as trs espcies como sendo 2n=18
cromossomos,
A meiose tambm pouco estudada nas Caricceas. Damasceno Junior
(2008) analisando a meiose das espcies C. papaya e V. monoica confirmou que
as duas espcies so diplides com 2n=2x=18 cromossomos, ambas
apresentando pareamento regular dos cromossomos, observando-se nove
bivalentes para ambas as espcies, confirmando assim o nvel de ploidia das
 16

mesmas. Entretanto, a meiose nas duas espcies apresentou algumas

anormalidades. C. papaya apresentou 79% das clulas em anfase I com
cromossomos retardatrios, e V. monoica, 92,31%. V. monoica, apresentou mais
irregularidades do que a espcie cultivada, sendo cromossomos pegajosos (sticky
chromosomes) a anormalidade mais freqente e, provavelmente, responsvel
pela segregao irregular na anfase I, produzindo clulas desbalanceadas, que
resultaram em produtos meiticos desbalanceados. C. papaya apresentou ndices
meiticos e viabilidade polnica maiores do que V. monoica, sendo de 94,84 e
96,0%, e 77,83 e 70,93%, respectivamente. Esses dados sugerem que V.
monoica uma espcie meioticamente instvel, e, portanto, pode apresentar
problemas quando envolvida em hibridaes. Os autores no observaram
cromossomos sem pareamento em C. papaya, portanto sugerem a no existncia
de cromossomos sexuais heteromrficos.
 17

3. TRABALHOS

3.1. Vasconcella goudotiana: DESCRIO BOTNICA SUMARIZADA DESSA

ESPCIE SILVESTRE.

3.1.1. RESUMO

O gnero Vasconcella o que mais se destaca dentro da famlia Caricaceae por

apresentar um grande nmero de espcies com caractersticas desejveis que
podero ser transferidas, via hibridizao interespecfica, para a forma cultivada
(Carica papaya L.). Recentemente, o Laboratrio de Melhoramento Gentico
Vegetal (LMGV) da Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro
(UENF) adquiriu sementes de espcies do gnero Vasconcellea visando ampliar a
base gentica da sua coleo de germoplasma, bem como utilizar algumas
dessas espcies em futuras pesquisas de melhoramento do mamoeiro.
Considerando-se que a maioria das espcies desse gnero silvestre ou
semidomesticadas, importante observar o seu comportamento vegetativo
quando cultivada em local diferente do seu local de origem. Tendo como objetivos
futuros a utilizao de Vasconcella goudotiana em programas de melhoramento
do mamoeiro, sementes foram colocadas para germinar e gentipos foram
cultivados em casa de vegetao na Unidade de Apoio de Pesquisa do
CCTA/UENF. Foram descritas folhas e flores das plantas masculinas e femininas
 18

da espcie conforme descritores recomendados para a cultura do mamoeiro pelo

IBPGR. As plantas masculinas apresentam folhas palmipartidas e onduladas,
tendo em mdia comprimento de 25,98 cm e 31,20 cm de largura, no
apresentam tricomas e nem cera nas folhas. As flores masculinas so dispostas
em inflorescncias e apresentam, em mdia, 24,44 botes ou flores por
inflorescncia. Quanto s plantas femininas, apresentam folhas tambm
palmipartidas, com colorao verde-escuro, e comprimento mdio de 22,71 cm e
27,9 de largura. As flores femininas so isoladas e surgem nas axilas foliares. O
gineceu gamocarpelar e o pistilo pluricarpelar com seis carpelos. O ovrio da
planta nfero e plurilocular, apresentando cinco lcus. O nmero de vulos por
ovrio em mdia de 264 vulos. As plantas masculinas floresceram antes das
femininas e levaram em mdia oito meses para o florescimento.

3.1.2. ABSTRACT

Vasconcella is an important genus of Caricaceae family. It contains many

species with desirable traits that can be transferred to papaya (Carica papaya L.)
by interspecific hybridization. Recently, the Plant Breeding Laboratory (LMGV)
from the Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro (UENF)
acquired seeds from Vasconcella species aiming to increase the genetic base of
its Caricaceae germplasm collection as well as to use some of these species in
further researches of papaya breeding. Considering that almost all species within
this genus are wild or semi-domesticated species, it is important to observe their
vegetative behavior when cultivated under different conditions of their natural
habitats. With the potential intent to use V. goudotiana in papaya breeding
programs, seeds were germinated and the plants were cultivated under
greenhouse conditions at UAP/CCTA/UENF. Leaves and flowers from male and
female plants were described according to the papaya descriptors recommended
by IBPGR. The male plants presented palmate leaves, with a mean length of
25.98 cm and a mean wide of 31.20 cm. These leaves presented neither
trichomes nor wax. The male flowers are disposed in inflorescences with a mean
of 24.44 floral buds per inflorescence. The female plants shows dark green
 19

palmate leaves, with a mean length of 22.71 cm and a mean wide of 27.90 cm.
The solitary female flowers are localized in the axil of the leaf. The gynoecium is
syncarpous (multiple connate carpels) and the pistil shows six carpels. The ovary
is inferior, 5-locular, with 264 ovules per ovary. Male plants flowered before
female, with a mean of 8 months until flowering.

3.1.3. INTRODUO

Segundo Badillo (1971), o primeiro relato da famlia Caricaceae datado

de 1696, presente na obra Plantarum de Lineus, publicada em 1753. A famlia tem
como principal centro de origem a Amrica, apresentando uma maior
concentrao na Amrica do Sul, onde se localizam os gneros Vasconcella,
Carica e Jacaratia. As espcies que compem o gnero Vasconcella so
descritas como silvestres e ou semidomesticadas, e se desenvolvem em regies
de 1.500 a 2.200m de altitude, em bosques midos e subtropicais (Badillo, 1971,
1993, 2001).
As espcies que compem a famlia Caricaeae alm de C. papaya L., so
muito conhecidas regionalmente, sem apresentarem grande destaque econmico,
mas suas caractersticas podem vir a ser consideravelmente exploradas
futuramente (Badillo, 1971). As espcies do gnero Vasconcella so muito
utilizadas por camponeses da regio Andina e Peru, centro de origem dessas
espcies, sendo que cada uma apresenta caractersticas muito especficas, sendo
muito utilizadas na produo de sucos.
Considerando o conjunto de caracteres de interesse agronmico presente
no gnero Vasconcella, pode-se relatar a resistncia ao frio, alta concentrao de
acar, resistncia Phytophtora, entre outros caracteres (Manshardt e Wenslaff,
1989; Drew et al., 1998; Scheldeman et al., 2003) V. quercifolia e V. cauliflora, so
resistentes ao vrus da mancha anelar (Van Droogenbroeck et al., 2004; Dillon et
al., 2005; Dillon et al., 2006;). As variedades cultivadas do mamoeiro so
suscetveis maioria dos agentes patolgicos como fungos, bactrias e vrus;
assim, torna-se imprescindvel a realizao de trabalhos de pr-melhoramento do
 20

gnero para que se possa avaliar a possibilidade de sua utilizao em programas

de melhoramento.
A espcie Vasconcella goudotiana considerada resistente ao fungo
Phytophtora palmivora, que age destruindo o meristema radicular das plantas
podendo ocasionar a podrido do fruto e causar perdas de frutos maduros em
torno de 7 a 10% da produo total do mamoeiro (Liberato et al, 1993).
Considerando que a UENF tem um programa de melhoramento gentico de
mamoeiro e que recentemente ampliou a sua coleo de germoplasma com
aquisio de acessos de espcies silvestres e dentre elas a Vasconcella
goudotiana, e considerando ainda a completa ausncia de relatos na literatura
sobre esta espcie em condies de cultivo no territrio nacional, o objetivo do
presente trabalho foi fazer uma descrio botnica das plantas masculinas e
femininas representantes da espcie em questo.

3.1.4. MATERIAL E METODOS

3.1.4.1. Material Vegetal

Foram utilizadas sementes da espcie silvestre Vasconcella goudotiana

cedidas pelo USDA / ARS - Hillo (HI) (United States Department of Agriculture /
Agricultural Research Service) - Hillo (HI): (HCR 167). Assim que as sementes
chegaram a territrio nacional foram encaminhadas ao Instituto Agronmico de
Campinas (IAC), localizado em Campinas SP, onde passaram um perodo de
quarentena.
Por serem sementes silvestres e adaptadas a baixa temperatura, as
sementes foram submetidas a um pr-tratamento. As sementes foram imersas em
soluo de 1 M de Nitrato de Potssio. O material foi distribudo em Erlemeyer, e
colocado no agitador (shaker) por 48 horas, a 99,3 rpm e 35 0C (Costa et al.,
2007). O tratamento teve como objetivo quebrar a dormncia das sementes, e
nutri-las a fim de acelerar, e garantir sucesso em sua germinao e
desenvolvimento das plntulas.
 21

Aps o pr-tratamento, as sementes foram retiradas do agitador (shaker);

em seguida foram semeadas em bandejas preenchidas com substrato. Em
seguida as bandejas foram levadas para a estufa incubadora temperatura de
250C, e fotoperodo de 8h, segundo Damasceno Junior (2008), sendo molhadas
diariamente.
Doze dias aps a semeadura as primeiras plntulas iniciaram a emerso
das primeiras folhas e assim que as primeiras folhas verdadeiras se
desenvolveram as plntulas foram transplantadas para copos plsticos de 200 ml
preenchidos com substrato, e levadas para a casa de vegetao, mantidas
temperatura ambiente, e em local sombreado, com aplicao de gua duas vezes
ao dia.
Dois meses aps serem levadas para casa de vegetao, as plantas foram
transferidas dos copos para pequenos vasos de 3 litros, preenchidos com
substrato na proporo de 1:1:1 (solo:esterco:areia), a fim de permitir o melhor
desenvolvimento das plantas.
A adubao foi realizada de duas formas, semanalmente foi realizada a
adubao com hmus, formando uma cobertura na base do caule da planta, com
o objetivo de nutri-la e ajudar na manuteno da temperatura. Quinzenalmente, foi
feita a adubao com ouro verde (N4. P14. K8), diludo em gua, na proporo de
1g/l. As plantas foram regadas diariamente, e mantidas em local mido e com alta
luminosidade. Trs meses aps o transplante das plantas, elas foram novamente
remanejadas para 5 litros, e a adubao foi mantida.
Cinco meses aps o primeiro transplantio, as plantas foram novamente
transferidas para vasos de 50 litros com o mesmo preparado de 1: 1: 1 (solo:
esterco: areia). A esta mistura foi adicionado o adubo Osmocoti (N4: P14: K8),
prprio para fruteiras. A adubao realizada com hmus foi mantida
semanalmente e foi aplicado em todas as plantas 0,5 g de sulfato de amnio.

3.1.4.2 Metodologia

A mensurao das peas florais das plantas masculinas e femininas, bem

como a descrio botnica foi realizada seguindo os descritores do IBPGR (1988)
recomendados para a cultura do mamoeiro e conforme Vidal & Vidal (1995).
 22

Para a descrio botnica das plantas foram analisadas quatro plantas

(tratamentos) femininas e cinco masculinas, devido ausncia do florescimento
nas demais plantas.
Nas plantas femininas foram avaliados as variveis comprimento e largura
da folha adulta de cinco folhas (tratamentos), e trs flores para as avaliaes da
estrutura floral, como nmero de ovlos por ovrio, e caractersticas da morfologia
floral interna. Em plantas masculinas foram tambm coletadas cinco folhas para a
avaliao das variveis de comprimento e largura da folha, e cinco inflorescncias
para a avaliao das caractersticas comprimento do pednculo floral, nmero de
botes por inflorescncia, nmero de flores abertas por inflorescncia. As
medidas foram obtidas com utilizao do paqumetro digital, a fim de se obter
dados precisos. As folhas foram mesuradas com o auxilio de uma fita mtrica, l e
para a caracterizao das estruturas internas das flores utilizou-se a lupa.

3.1.5. Anlise estatstica

Para a anlise dos dados foi utilizado o Programa Genes (Cruz, 2001). Foi
realizada a anlise de varincia, para as variveis mensuradas. Aplicou-se o teste
de mdia Scott-knott a 5% de probabilidade, para as mesmas variveis.

3.1.6. RESULTADOS E DISCUSSO

As plantas masculinas iniciaram o perodo de florao aos oito meses e as

femininas aos nove meses e meio. Avaliando-se o crescimento das plantas,
observou-se, que tanto as plantas masculinas quanto as femininas apresentam
porte arbustivo quando cultivados sob as condies experimentais, sendo
regadas diariamente, adubadas com hmus semanalmente e adubadas
mensalmente com adubo qumico.
 23

3.1.7. Descrio das plantas masculinas

A anlise de varincia dos dados mensurados foi significativa em nvel de

5% e em nvel de 1% de probabilidade conforme pode ser verificado na Tabela 1.
Nos gentipos masculinos, o caule da planta apresenta colorao verde-escura, e
textura spera como que se o caule estivesse constantemente escamando. As
folhas so classificadas como folhas palmipartidas, tendo uma mdia de
comprimento de 25,99 cm, e 31,20 cm de largura (Tabela 1), no apresentam
tricomas e nem cera nas folhas. O pecolo apresenta colorao verde com
pigmentos avermelhados variando de intensidade (Figura 1).

Figura 1-Detalhe da folha masculina onde se observa o limbo bem recortado.

O florescimento das plantas masculinas iniciou aos oito meses aps a

germinao das sementes. Seu florescimento ocorre por inflorescncias que
apresentam, em mdia, 24,44 botes ou flores por inflorescncia; o pednculo
das inflorescncias apresenta colorao verde-clara e um comprimento mdio de
23,84 cm (Tabela 2).
 24

Tabela 1. Resumo e anlise da varincia dos dados, Comprimento (C) e Largura

(L) da Folha, Nmero de botes florais/inflorescncia (NBF), Comprimento do
pednculo da inflorescncia (CPI) e Comprimento da corola (CC) mensurados em
cinco plantas da espcie Vasconcella goudotiana.

QM QM
FV GL GL
C L CPI NBF CC
Trat. 4 95,524* 282,0454 * 507,6374* 553,2600* 4 6,53076**
Res. 20 5,256 15,8134 16,3864 133,6199 15 1,80502
Mdias 25,988 30,904 24,464 24,32 7,6595
CV% 14,1907 23,6119 40,5172 9,9344 14,1907
*Significativo em nvel de 1% de probabilidade; ** Significativo em nvel de 5% de probabilidade;
CV% = Coeficiente de Variao Gentico.

Tabela 2. Comprimento (C) e Largura (L) da Folha, Nmero de botes

florais/inflorescncia (NBF), Comprimento do pednculo da inflorescncia (CPI) e
Comprimento da corola (CC) mensurados em cinco plantas da espcie
Vasconcella goudotiana. Campos dos Goytacazes, 2008.

Plantas Folha Inflorescncia

C (cm) L (cm) NBF (cm) CPI (cm) CC (mm)
1 27,30 /b 31,82 /b 37,6/ a 34,9 /a 8,80 / a
2 24,20 /b 27,4 /b 25,2 /a 29,4 / b 8,77 /a
3 20,84 /c 25,5 /b 29,2 /a 21,7 / c 6,67 / a
4 24,98 /b 27,7 /b 10,2 /b 10,8 / d 6,86 / a
5 32,62 /a 43,6 /a 20,0 /b 22,4 / c 9,31 / a
Mdia 25,99 31,20 24,44 23,84 8,10
Cv% 8, 8220 12, 8676 47, 5304 16, 5468 17, 5404
Coeficiente de Variao (Cv%). Mdias seguidas pela mesma letra no diferem significativamente
entre si, pelo teste Scott Knott a 5% de probabilidade.

As flores so de colorao amarelo creme, unissexuais, pentmeras, ou

seja, com cinco ptalas, so classificadas como simptalas, pois suas ptalas so
soldadas parcialmente entre si (Figura 2). Quanto disposio das peas florais
so cclicas, homoclamideas, com suas ptalas iguais entre si.
O comprimento mdio da corola de 8,10 mm e a colorao se apresenta
com a base verde-clara com a presena de pigmentos roxos e vermelhos
misturados, presentes em apenas um lado do boto floral, se estendendo por todo
 25

comprimento do boto. As spalas so de colorao verde-clara, comeando com

um verde mais claro e aumentando de tom gradativamente. O nmero de anteras
por flor de 10, sendo do tipo heterodinamo, cinco maiores e cinco menores,
indicando assim que uma planta diplostmone, ou seja, apresenta o dobro de
anteras em relao ao nmero de ptalas. As anteras so basifixas, pois o filete
que as sustenta se insere na base da antera; apresentam deiscncia longitudinal,
e dita introrsa, pois a abertura das anteras voltada para o eixo da flor ou seja,
voltada para a parte interna do boto (Vidal e Vidal, 1995).

A B C

Figura 2. Inflorescncia ( a), boto floral fechado (b), e a flor masculina(c) observado em plantas
masculinas de V. goudotiana.

3.1.8. Descrio botnica das plantas femininas

As plantas femininas apresentaram o mesmo perodo de geminao, com

as mesmas caractersticas A para colorao e textura B do caule. C O pecolo
A
foliar de colorao verde-claro, B
sendo que as folhas C
so classificadas como
palmipartidas com colorao verde-escuro, e tem um comprimento mdio de
22,71 cm e 27,9 cm de largura. Apresentam folhas sem serosidade, e baixa
presena de tricomas, o tom de verde apresenta uma colorao mais opaca, e
apresentam brotaes no inicio do florescimento (Figura 3).
Quanto ao tempo para a primeira florao, este foi de nove meses e meio,
aps a germinao. Os botes se desenvolvem isolados nas axilas foliares,
apresentam uma colorao verde com pigmentos roxos e avermelhados
distribudos na base das flores, concentrados apenas de um lado da flor; as
ptalas so internamente de colorao amarelo-claro.
 26

A
Figura 3. Folha feminina adulta, onde se observa ela mais larga quando comparada com a folha
masculina.

A flor pedunculada (Figura 4); suas peas florais so dispostas em

circulo, descritas assim como acclicas, diperiantada, sendo composta por clice e
corola, so unissexuais, heteroclamdea, e hipgea, pois os seus verticilos florais
esto dispostos abaixo do gineceu. Suas ptalas so livres, e descritas como
dialissepalo. uma flor pentmera, com ptalas persistentes e apresenta um
plano de simetria bilateral.
O gineceu caracterizado como gamocarpelar, sendo os pistilos
pluricarpelares, apresentando seis carpelos. O estilete apresenta uma insero
terminal, e o estigma da flor descrito como indiviso ou nico. O ovrio da planta
nfero e plurilocular, apresentando cinco lcus. Apresenta em mdia 264 vulos
por ovrio.

A B

Figura 4 Boto floral feminino (seta) (a), e flor feminina aberta (b) na axila foliar em V.
goudotiana.
 27

Devido espcie ser diica e devido falta de sincronia no florescimento

das plantas masculinas e femininas no foram obtidos frutos maduros. Porm,
algumas poucas polinizaes manuais foram realizadas, e observou-se que os
frutos quando jovens apresentam colorao verde-escura, e apresentam a casca
do fruto de textura lisa e firme.
Podese observar que mesmo considerando-se as condies ambientais
desfavorveis como altas temperaturas, durante o perodo em que o trabalho foi
realizado, os gentipos apresentaram desenvolvimento satisfatrio, pois todos
floresceram, e apresentaram caractersticas botnicas conforme descrito por
Badillo (1971).
Com base nos resultados conclui-se que possvel o cultivo e adaptao
da espcie Vasconcella goudotiana nas condies edafo-climticas do Norte
Fluminense e que para a manuteno da espcie necessrio que haja uma
programao de semeadura das sementes para que ocorra a sincronia da
florao simultnea das plantas femininas e masculinas.

3.1.9. REFERNCIAS

Badillo, V.M. (1971) Monografa de la familia Caricaceae. Maracay, Venezuela,

Universidad Central de Venezuela Publicada por La Asociacin de
Profesores, 222p.
Badillo, V.M. (1993) Caricaceae. Segundo esquema. Rev. Fac. Agron. Univ.
Centr. Venezuela, 43:1-111.

Badillo, V.M. (2001) Nota correctiva Vasconcellea St. Hil. Y no Vasconcella

(Caricaceae). Ernstia, 11 (1):75-76.

Costa, F. R., Pereira, T. N. S., Hodnett, G. L., Pereira, M. G., Stell, D. M., (2007)
Desenvolvimento de protocolo para obteno de metfase em mamoeiro (
Carica papaya L.). Boletim tcnico da III reunio de pesquisa do frutimamo.
241-242 p
 28

Damasceno Junior, P. C. (2008) Estudos citogenticos, genticos e moleculares,

como ferramenta auxiliar no melhoramento gentico do mamoeiro. (Tese
doutorado) Campos do Goytacazes RJ Universidade Estadual do Norte
Fluminense UENF, 151p.

Dillon, S.; Ramage, C.; Ashmore, S.; Drew, R.A. (2006) Development of a
codominant CAPS marker linked to PRSV-P resistance in highland papaya.
Theoretical and Applied Genetics, v.113, p.1159-11696.

Dillon, S.; Ramage, C.; Drew, R.; Ashmore, S. (2005) Genetic mapping of a
PRSV-P resistance gene in highland papaya based on inheritance of RAF
markers. Euphytica, v.145, p.1123.

Drew, R.A., OBrien, C.M., Magdalita, P.M. (1998) Development of interspecific

Carica hybrids. Acta Horticulturae, 461:285-292.

IBPRG (1988) Descriptors for papaya. Italy, Roma. 34pp

Manshardt, R.M., Wenslaff, T.F. (1989) interspecific hybridization of papaya with

other species. Journal of the American Society for Horticultural Science,
114:689-694.

Scheldeman, X., Van Damme, P., Urena Alvarez, J.V., Romero, M. (2003)
Horticultural potential of Andean fruit crops exploring their centre of origin.
Acta Hortic. 598:97-102.

Van Droogenbroeck, B., Kyndt, T., Maertens, I., Romeijn-Peeters, E.,

Scheldeman, X., Romero-Motochi, J.P., Van Damme, P., Goetghebeur,
P.,Gheysen, G. (2004) Phylogenetic analysis of the highland papayas
(Vasconcellea)and allied genera (Caricaceae) using PCR-RFLP. Theor. Appl.
Genet. 108:1473-1486.

Vidal W N & Vidal M R R (1995) Botnica Organografia. Imprensa Universitria,

Universidade Federal de Viosa Viosa/MG. 114 pp.
 29

3.2. DETERMINAO DO CARITIPO DA ESPCIE SILVESTRE Vasconcella

goudotiana

3.2.1. RESUMO

Essa pesquisa teve como objetivo a determinao do caritipo

convencional da espcie Vasconcella goudotiana. Para tanto, pontas de razes
foram coletadas, pr-tratadas, fixadas, e coloridas de acordo com protocolo j
utilizado para espcies Caricceas no Laboratrio de Melhoramento Gentico
Vegetal (LMGV) da Universidade Estadual do Norte Fluminense (UENF). Clulas
metafsicas que apresentavam os cromossomos condensados e bem espalhados
foram selecionadas e as imagens foram capturadas utilizando-se o Programa
Imedia ProPlus. Medidas como comprimento do brao longo e do brao curto
foram realizadas usando o Programa Micromeasure. Com base nas medidas
foram estimados o comprimento absoluto dos cromossomos, o ndice
centromrico, a razo entre braos, o comprimento do lote haplide, e o ndice de
simetria. Os cromossomos foram classificados com base no ndice centromrico
(ic) e com base na razo entre os braos. Foram observados 18 cromossomos
nas clulas metfasicas e o caritipo da espcie constitudo por cinco pares de
cromossomos metacntricos e quatro pares submetacntricos. O caritipo
simtrico e o comprimento do lote haplide estimado para a espcie foi de 23,08
m. No foi observada no conjunto haplide nenhuma diferena que pudesse
indicar a presena de cromossomos associados ao sexo da espcie.
 30

3.2.2. ABSTRACT

The objective of this research was to determine the conventional karyotype of

Vasconcella goudotiana. Root tips were collected, pretreated, fixed and stained according
to the routine protocol defined to the other Caricaceae species. Cells with condensed and
well spread chromosomes were selected and the images were captured using the Image
ProPlus software. Measures of the long and the short chromosome arms were obtained
using the Micromeasure software. Based on these measures, the absolute chromosome
length, the centromeric index, the arm ratio, the haploid chromosome length and the
symmetry index were estimated. The chromosomes were classified according to their
centromeric index (CI) and their arm ratios. Eighteen chromosomes were observed in
metaphase cells and the species karyotype was constituted by five metacentric
chromosome pairs and four submetacentric chromosome pairs. The karyotype was
symmetric and the lot haploid length was 23.08 m. It was not observed any difference in
the haploid lot suggesting the presence of sexual chromosomes in this species.

3.2.3. INTRODUO

O gnero Vasconcella, o maior da famlia Caricaceae, pode ser

considerado como um reservatrio de genes importantes para ser incorporado no
mamoeiro cultivado (Carica papaya L.), pois apresenta caractersticas
agronmicas de interesse para o melhoramento gentico do mamoeiro (Van
Droogenbroeck et al., 2004; Dilon et al., 2005; Dilon et al., 2006). A transferncia
de genes de interesse agronmico presentes em espcies silvestres, para
espcies e/ou variedades cultivadas, pelo mtodo de hibridao, uma
ferramenta de grande interesse, pois tem como objetivo combinar o potencial
gentico das espcies, a fim melhorar o material cultivado. Desta forma, as
caractersticas de interesse tendem a ser melhoradas, complementadas pelos
genes transferidos das espcies silvestres para as cultivadas.
Entretanto, a hibridao interespecfica apresenta uma srie de
dificuldades que so minimizadas quando as espcies envolvidas apresentam
 31

similaridade gentica, fazendo com que o pareamento dos cromossomos no

hibrido seja perfeito resultando em alta fertilidade; assim, necessrio se
conhecer as relaes genticas entre as espcies (Singh 1993).
Vrias metodologias so utilizadas para se estudar as relaes entre as
espcies e dentre elas tm as citogenticas, como a determinao do nmero de
cromossomos somticos (2n), o nvel de ploidia das espcies envolvidas, e a
determinao do caritipo (Singh 1993).
Em Caricaceae alguns estudos foram realizados na forma cultivada do
mamoeiro. Kumar e Abraham (1942) analisando metfases em pontas de raiz de
mamoeiro concluram que a espcie tem 2n=2x=18 cromossomos, sendo todos
classificados como metacntricos. Os autores destacam ainda que no foi
encontrado nenhum cromossomo heteromrfico que pudesse estar associado ao
sexo na espcie.
Mais recentemente outros trabalhos foram realizados visando
determinao do nmero de cromossomos do mamoeiro e de algumas espcies
silvestres (Bajpai e Shing, 2006; Damasceno Junior et al., 2008 e Costa et al.,
2008). Entretanto, estudos citogenticos ainda so incipientes tanto na forma
cultivada quanto nas espcies silvestres.
Considerando a importncia das espcies silvestres do gnero Vasconcella
e considerando a escassez de informaes sobre as mesmas faz-se necessrio a
realizao de estudos de caracterizao citogentica dessas espcies silvestres a
fim de utiliz-las em programas de melhoramento gentico do mamoeiro.
Dando continuidade a pesquisas de caracterizao citogentica de
espcies Caricceas (Damasceno Junior et al., 2008; Costa et al., 2008), a
presente pesquisa teve por objetivo determinar o caritipo com base em
colorao convencional, da espcie silvestre Vasconcella goudotiana.

3.2.4. MATERIAL E MTODOS

3.2.4.1. Material Vegetal

 32

Para a realizao da determinao do caritipo foram coletadas pontas de

razes jovens, de plantas em fase de desenvolvimento, cultivadas em casa de
vegetao.

3.2.4.2. Pr-tratamento e fixao

As pontas de razes foram coletadas e imediatamente pr-tratadas em

soluo de paradiclorobenzeno, agente antimittico, por 8hrs a 400C. Aps o pr-
tratamento as pontas foram retiradas da soluo antimittica e foram lavadas em
gua corrente durante 3 minutos. Em seguida, as pontas de razes foram
transferidas para soluo fixadora de Farmer (Berlyn & Miksche, 1976) e
conservadas no freezer at o momento do preparo da lmina (Guerra & Souza,
2002).

3.2.4.3. Preparo das lminas

Para o preparo das lminas utilizou-se protocolo para a obteno de

ncleos em suspenso (Costa et al. , 2007; Damasceno Junior et al., 2008). Para
tanto, as pontas de razes foram lavadas com gua deionizada, e separadas por
tamanho. Posteriormente, o material foi transferido para tubos de 1 ml, e foram
hidrolisadas, com soluo 0,2 M de HCl durante 10 minutos. Aps hidrolise, as
pontas foram lavadas duas vezes em gua destilada, colocadas em micro-tubos,
recobertas na enzima pectinase em 20%, e celulase em 2%, e levadas em
seguida ao banho-maria a 370C por 60 min. Retirados do banho, os tubos
contendo as pontas de razes foram completados com gua destilada e
centrifugados com rotao de 25000rpm, por 10 minutos. Aps centrifugao, o
material foi lavado trs vezes consecutivas a fim de paralisar a ao enzimtica.
Finalmente, aps a ltima lavagem das pontas de razes, a gua foi substituda
pela soluo de metanol: cido actico na proporo 2:1, e novamente os tubos
foram centrifugados conforme descrito anteriormente.
Aps centrifugao, as lminas foram preparadas com uma gota da
suspenso de ncleos, e em seguida o material foi levado cmara mida para
secar. Uma gota do corante Giemsa 5% foi colocada sobre os ncleos em
suspenso e a lmina foi deixada para secar em temperatura ambiente. Depois
 33

de coradas, as lminas foram cobertas com lamnulas e observadas sob

microscpio tico. Foram selecionadas as cinco melhores metfases e nessas foi
observada a posio do centrmero e foram mensurados os tamanhos dos braos
longos e curtos.

3.2.5.Determinao do caritipo

As clulas com as melhores imagens de metfases foram capturadas

atravs do software IMAGE PRO-PLUS verso 5.1 (Media Cybernetics, 2004). As
imagens posteriormente foram trabalhadas e utilizadas para a construo de um
cariograma e de um idiograma da espcie.
Para a montagem do idiograma, os cromossomos foram mensurados
utilizando o Programa MicroMeasure 3.3 (Reeves & Tear, 2000). Cinco clulas
com metfases bem definidas foram utilizadas para as mensuraes dos braos
longo e curto de cada par de cromossomos. Com base nos dados mensurados
foram estimados comprimento total do cromossomo (soma dos braos longo e
curto), a razo entre braos (r = brao longo/brao curto), o comprimento do lote
haplide (CLH = somatria dos comprimentos absolutos dos cromossomos), o
ndice centromrico (ic = comprimento do brao curto/comprimento total x 100), e
o ndice de simetria (%TF = razo entre o somatrio dos braos curtos pelo
comprimento do lote haplide X 100).
Para determinao dos pares de homlogos foram observados o tamanho
absoluto dos cromossomos e a relao entre braos. Os cromossomos foram
classificados de acordo com (Guerra, 1986), que considera a relao entre braos
(Levan et al. 1964), o ndice centromrico (ic).

3.2.6. RESULTADOS E DISCUSSO

O uso do paradiclorobenzeno associado colorao com Giemsa 5%

permitiu observar dezoito cromossomos na espcie em estudo (Figura 1),
conforme registrado pela literatura para a famlia Cariccea (Darlignton & Ammal,
 34

1945). O uso do agente antimittico permitiu uma boa condensao e um bom

espalhamento dos cromossomos sem sobreposies.
O paradiclorobenzeno indicado tanto para cromossomos longos quanto
para cromossomos pequenos, j o corante Giemsa indicado para cromossomos
pequenos, garantindo assim uma colorao mais intensa e com melhor contraste
(Guerra & Souza, 2002).
Conforme pode observar na Tabela 1 os cromossomos de Vasconcella
goudotiana so pequenos, sendo a mdia do maior par de cromossomos de 3,06
m e a do menor de 2,03 m. Entretanto, so maiores do que os reportados por
Dasmasceno Junior (2008), que constatou que o tamanho dos cromossomos de
C. papaya, V. monoica e V. cundinamarcensis variam de 2,29 a 1,52 m; 2,49 a
1,35 m e de 2,45 a 1,66 m, respectivamente. Ainda segundo Eder-Silva et al
(2007), os cromossomos da espcie Jacaratia spinosa, outro membro da famlia
Caricaceae, variando de 2,5 a 1,5 m.
Pode-se concluir que as espcies que compem a famlia Caricaceae at
ento estudadas apresentam cromossomos pequenos j que em 856
angiospermas avaliadas o tamanho do cromossomo metafsico variou de 0,6 m
h um pouco mais de 14,6 m e o comprimento do lote haplide varia de 14,6 m
a 250 m (Levin & Funderberg, 1979; Schubert, 2007). O comprimento do lote
haplide estimado para a espcie aqui estudada foi de 23,08 m, enquanto que
em V. cundinamarcensis de 18.69 m e V. monoica de 17.11 m (Damasceno
Junior et al., 2008).
No foram observadas constries secundrias, RON e satlites,
provavelmente devido colorao utilizada, j que Giemsa no indicado para
este fim; entretanto, s vezes a condensao dos cromossomos permitiu esta
observao mesmo com uma colorao no especfica. Devido sua constituio
as contries secundrias s colorem com o nitrato de prata (Guerra & Souza,
2002). Nas espcies de C. papaya, J. spinosa e V. monica; foram observadas a
presena de possveis constries secundrias, tais estruturas so de natureza
heterocromtica e se manifestaram nos pares 6, 1, e 3 das espcies,
respectivamente. Assim, pode se inferir que tais pares cromossmicos possam
estar associados regio organizadora de nuclolo (RONS) (Damasceno Junior
et al, 2008).
 35

Figura 1- Cromossomos metafsicos; Cariograma e idiograma da espcie V. goudotiana, onde se

observa os dezoito cromossomos e a similaridade entre os cromossomos. Barra= 5 m
 36

O caritipo de V. goudotiana constitudo por 2n=18 cromossomos, sendo

cinco pares do tipo metacntrico e quatro pares do tipo submetacntrico (Tabela 1
e Figura 1). Damasceno Junior (2008) relata que V. cundinamarcensis e V.
monoica apresentam o caritipo constitudo por nove pares de cromossomos
metacntricos. A forma ou tipo dos cromossomos dentro de um determinado
gnero pode ser alterado durante a evoluo devido presena de inverses
enquanto nmero de cromossomos pode ser alterado devido s translocaes,
delees, duplicaes, por inseres, dentre outras aberraes estruturais
cromossmicas (Schubert, 2007).

O ndice de simetria (TF=40,16%) indica que o caritipo de Vasconcella

goudotiana do tipo simtrico (Tabela 1); o TF pode ter uma variao de zero a
0,5 (0 a 50%), sendo este ltimo valor caracterstico de caritipo extremamente
simtrico. De acordo com Mayeda (1997), caritipos assimtricos apresentam
cromossomos de tamanhos variados e centrmeros mais terminais, enquanto que
os caritipos simtricos so considerados os mais primitivos e possvelmente
originariam os assimtricos. Guerra (1988) estabelece que uma espcie
apresenta caritipo simtrico quando seus cromossomos apresentam uma
variao de tamanho muito pequena e similar, pois estes so homomrficos.
Resultados semelhantes foram relatados por Damasceno Junior (2008), cujos
ndices de simetria das espcies C. papaya, V. monoica, V. cundinamarcensis e J.
spinosa foram 46%, 44%, 40% e 47%, respectivamente. Assim, com base nesses
resultados pode-se supor que a espcie estudada mais evoluda, que as demais
espcies do gnero at o presente avaliado, por outros autores. O caritipo
simtrico caracterizado pela predominncia de cromossomos metacntricos e
submetacntricos de tamanhos aproximados. O aumento da assimetria pode
ocorrer ou pela mudana de posio do centrmero, de mediana para
submediana, ou para terminal ou subterminal, ou pelo acumulo de diferenas no
tamanho dos cromossomos de complementos tornando o caritipo mais
heterogneo (Slbbieis, 1971).
 37

Tabela 1 Mdia do comprimento total dos pares cromossmicos (CT ), mdia do

brao longo (BL), mdia do brao curto (BC), razo entre os braos (r), ndice
centromrico (IC), tipo de cromossomo (TC), Comprimento do Lote Haplide
(CLH) e ndice de Simetria (TF).

Cromossomo CT (m) BL (m) BC (m) r IC TC

1 3,06 1,78 1,28 1,39 41,83 M
2 3,09 1,93 1,16 1,66 37,54 SM
3 2,63 1,51 1,12 1,34 42,58 M
4 2,80 1,71 1,09 1,56 38,92 SM
5 2,50 1,56 0,94 1,65 37,6 SM
6 2,41 1,50 0,91 1,64 37,75 SM
7 2,31 1,32 0,99 1,33 42,85 M
8 2,25 1,31 0,94 1,39 41,77 M
9 2,03 1,17 0,86 1,36 42,36 M
CLH (m) 23,08 9,29
TF (%) 40,25
M= metacntrico, SM = submetacntrico

No se observou nenhum par de cromossomos heteromrficos que

pudessem indicar a existncia de cromossomos sexuais na determinao do sexo
nas plantas de V. goudotiana. Entretanto, nem sempre o sexo nas plantas diicas
devido presena de cromossomos e quando o , o par de cromossomos pode
ser homomrfico ou heteromrfico. Segundo Charlesworth (2004), muitas plantas
diicas como mamoeiro e kiwi no apresentam cromossomos heteromrficos;
nessas espcies os genes que determinam o sexo das plantas parecem estar
localizados em regies de um cromossomo normal. Concluses semelhantes a
estas foram descritas por Costa et al. (2008), que utilizando a tcnica de FISH em
espcies de Caricceas, no observaram nenhum par de cromossomo
heteromrfico. Damasceno Junior (2008), estudando Carica papaya L, J spinosa,
e V. monica, tambm no relata presenas de pares ou de cromossomos
sexuais heteromrficos.
Os resultados obtidos permitem concluir que a espcie V. goudotiana
apresenta cromossomos pequenos, sendo cinco pares de cromossomos
 38

metacntricos e quatro pares de cromossomos submetacntricos com caritipo do

tipo simtrico, apresentando assim uma formula cariotpica de 2n=18= 5M + 4SM.

3.2.7. REFERNCIAS

Bajpai, A.; Singh, A. K. (2006) Meiotic Behavior of Carica papaya L.; Spontaneous
chromosome instability and elimination in important cvs. in North Indian
conditions.Cytologia, 71(2): 131-136.

Berlyn, G. P. and Miksche, J. P. (1976) Botanical microtechnique and

cytovhemistry. Iowa State University Presse, Iowa-USA. 326 pp.

Charlesworth, D. (2004) Plant evolution: modern sex chromosomes. Current

Biology 14: 271-273.

Costa, F. R., Pereira, T. N. S., Hodnett, G. L., Pereira, M. G., Stelly, D. M., (2007),
Desenvolvimento de protocolo para obteno de metfase em mamoeiro
(Carica papaya L.). Boletim Tcnico da III Reunio de Pesquisa do
Frutimamo. 241-242 p.

Costa, F. R., Pereira, T. N. S., Hodnett, G. L., Pereira, M. G., Stelly, D. M. (2008).
Fluorescent in situ hybridization of 18S and 5S rDNA in papaya (Carica
papaya L.) and wild relatives. Caryologia (No Prelo).

Damasceno Junior, P. C., Costa, F. R., Pereira, T. N. S., Freitas Neto, M., Pereira,
M.(2008). Karyotype determination in three Caricaceae species
emphasizing the cultivated form (C. papaya L.). Caryologia (No prelo).

Damasceno Junior, P. C. (2008), Estudos citogenticos, genticos e moleculares,

como ferramenta auxiliar no melhoramento gentico do mamoeiro. (Tese
 39

doutorado) Campos do Goytacazes RJ Universidade Estadual do

Norte Fluminense UENF, 151p

Darlington, C.D., Ammnal, E. J. K. (1945). Chromosome atlas of cultivated plants.

George Allen and Unwin Ltd.,London.

Dillon, S.; Ramage, C.; Ashmore, S.; Drew, R.A (2006). Development of a
codominant CAPS marker linked to PRSV-P resistance in highland papaya.
Theoretical and Applied Genetics, v.113, p.1159-1169.

Dillon, S.; Ramage, C.; Drew, R.; Ashmore, S.( 2005). Genetic mapping of a
PRSV-P resistance gene in highland papaya based on inheritance of RAF
markers. Euphytica, v.145, p.1123.

der-Silva, E., Felix, L. P., Lucena, Bruno, R. L. A. (2007). Citogentica de

algumas espcies frutferas nativas do nordeste do Brasil. Revista
Brasileira de Fruticultura, 29: 110-114.

Guerra, M., (1986) Reviewing the chromosome nomenclature of Levan et al.

Revista Brasileira de Gentica, 4:741-743.

Guerra, M. (1988) Introduo a Citogentica Geral. 1 ed. Editora Guanabara, 1988.

Guerra, M. e Souza, M J. (2002). Como observar cromossomos: um guia de

tcnicas em citogentica vegetal, animal, e humana. FUNPEC, Ribeiro
Preto - SP . 131 pp.

Kumar, L. S. S., Abraham, (1942). A. Chromosome number in Carica. Current

Science 11:58,.

Levan, A., Frediga, K., And Sandberg, A., (1964) Nomenclature for centromeric
position on chromosomes. Hereditas, 52: 201-220.

Levin, D. A. & Funderberg, S. W. (1979). Genome size in angiosperms: temperate

versus tropical species. American Naturalist 114: 784-795.
 40

Mayeda, L. C. (1997). Estudo citogentico em dez taxons do gnero Passiflora L.

(Passifloraceae). Dissertao de mestrado. Escola Superior de Agriocultura
Luiz de Queiroz. USP, Piracicaba. 89p.

Media Cybernetics (2004). Image-Pro plus, version 5.1 for Windows. Media
Cybernetics Inc, Maryland, USA.

Mercado-Ruaro, P., Delgado-Salinas, A. (1998) Karyotypic studies on species of

Phaseolus (Fabaceae: phaseolinae). American Journal of Botany 85(1): 1-
9.
Reeves, A. and Tear, J. (2000). Micromeasure. Version 3.3. Free Program
distributed by the authors over the internet from Department of Biology at
Colorado State University.

Schubert, I. (2007). Chromosome evolution. Current Opinion in Plant Biology 10:

109-115.

Singh, R. J. (1993). Plant cytogenetics. CRC Press, Florida, p.391

Van Droogenbroeck, B., Kyndt, T., Maertens, I., Romeijn-Peeters, E.,

Scheldeman, X., Romero-Motochi, J.P., Van Damme, P., Goetghebeur,
P.,Gheysen, G. (2004). Phylogenetic analysis of the highland papayas
(Vasconcellea)and allied genera (Caricaceae) using PCR-RFLP. Theor.
Appl. Genet. 108:1473-1486.
 41

3.3. AVALIAO DO COMPORTAMENTO MEITICO DA ESPCIE

SILVESTRE Vasconcella goudotiana

3.3.1. RESUMO

O objetivo deste trabalho foi avaliar o comportamento meitico, determinar

o ndice meitico e a viabilidade polnica da espcie silvestre V. goudotiana. Para
a anlise meitica, botes florais em diferentes estdios de desenvolvimento
foram fixados em soluo de Farmer. As lminas foram preparadas pelo mtodo
do esmagamento (squash), sendo as anteras maceradas em soluo de carmim
actico em 1% e posteriormente observadas sob microscpio tico. Observou-se
que a espcie apresenta dezoito cromossomos e diplide conforme registra a
literatura para a famlia Caricaceae. A meiose foi normal com um ndice de
recombinao de 26,2, porm foram observadas vrias anomalias como
cromossomos pegajosos, cromossomos retardatrios, falta de sincronia, e
distrbios nas fibras do fuso. Essas anomalias devem ter ocasionado a ocorrncia
de produtos ps-meiticos do tipo trades, dades, mnades e polades que
influenciaram para que o ndice meitico fosse de 85,27%. Para a viabilidade
polnica os botes prximos da antese foram coletados em etanol 70%, as
anteras foram maceradas em soluo tripla de Alexander, e as lminas foram
observadas no microscpio tico. Foi contado o nmero de gros de plen
viveis e inviveis que computados originaram um percentual de viabilidade
polnica de 67,93%, considerado um percentual baixo. Assim, conclui-se que V.
 42

goudotiana apresenta meiose irregular devido provavelmente s condies

ambientais como alta temperatura e a prpria condio de ser uma espcie
silvestre. Assim, recomenda-se cautela no uso dessa espcie em programas de
melhoramento, visto que a mesma pode apresentar uma proporo de gametas
desbalanceados e assim gerar prognies aneuplides.

3.3.2. ABSTRACT

The objectives of this work were to evaluate the meiotic behavior, to

determine the meiotic index and the pollen grain viability of V. goudotiana. Floral
buds in different development stages were fixed in Farmers solution. The slides
were prepared by squashing; the anthers were macerated in 1% acetic carmine
and the slides were observed under optical microscope. The species has 18
chromosomes and it is diploid, which is in agreement with the literature. The
meiosis was normal, with a recombination index of 26.2. However, some
abnormalities as sticky and delayed chromosomes, synchrony absence and fuse
fibers disturbance were observed. Post-meiotic products as triads, dyads, monads
and polyads would be resulted from these abnormalities and probably contribute
to the meiotic index value of 85.27%. To analyze the pollen grain viability, floral
buds close to the anthesis were collected in 70% ethanol. Their anthers were
macerated in Alexanders triple solution and the slides were observed under
optical microscope. The viable and non-viable pollen grains were counted,
resulting in pollen viability of 67.93%, which can be considered a low percentage.
The irregular meiosis is probably due to environment conditions, such as high
temperatures, and the fact that V. goudotiana is a wild species. Thus, its use in
genetic breeding programs should be cautious; its unbalanced gametes can
generate aneuploid progenies.
 43

3.3.3. INTRODUO

A espcie C. papaya L. dentro da famlia Caricaceae a que mais se

destaca economicamente, devido a seu valor comercial, e por apresentar diversas
aplicaes na indstria. Segundo dados da Secretria de Estado da Agricultura,
Abastecimento, Aquicultura e Pesca (SEAG, 2007), o Brasil o maior produtor e o
terceiro maior exportador de mamo, e responde por 25% de toda produo
mundial da cultura, com 1,6 milhes de toneladas por ano. O mamo
classificado como a stima fruta in natura exportada pelo pas, apresentando uma
rea cultivada de 30 mil hectares, sendo que estas esto concentradas nos
estados do Esprito Santo e Bahia, estes juntos so responsveis por 70% de
toda a produo mundial da fruta (SEAG,ES, 2007).
O mamoeiro cultivado mesmo sendo uma cultura com alta
representatividade econmica, ainda apresenta poucas pesquisas associadas a
reas de conhecimento bsico, importantes em programas de melhoramento
gentico (Bajpai e Shing, 2006). Um dos principais problemas da cultura est
associado a fatores como a suscetibilidade ao vrus, como no caso do vrus da
mancha anelar, e a ao de patgenos como o fungo Phytophtora Palmivora,
ressaltando ainda a necessidade do melhoramento de caracteres importantes
como a espessura e consistncia da polpa, alm da textura da casca (Costa e
Pacova, 2003).
Assim, importante se destacar o gnero Vasconcella, como portador de
importantes caractersticas agronomicas para programas de melhoramento do
mamoeiro.
Hajjar & Hodgkin (2007) destacam a importncia do uso de espcies
silvestres no melhoramento gentico das formas cultivadas, visando
introgresso de genes de interesse agronmico que possam vir a melhorar a
cultura. No caso do melhoramento da cultura do mamoeiro, a realizao de
estudos sobre o gnero Vasconcella muito importante, considerando que
algumas espcies do gnero apresentam caractersticas importantes para o
melhoramento da cultura.
Considerando-se que a introgresso de genes se d via hibridao
interespecfica e considerando que para atingir o sucesso na introgresso a
fertilidade dos gros de plen um fator a ser considerado, importante para o
 44

melhorista conhecer a capacidade de fertilizao das espcies que esto sendo

intercruzadas, em especial a espcie silvestre. O desenvolvimento normal da
meiose que garante uma boa fertilidade dos gros de plen, j que por meio
dela que se d a formao do gametfito masculino.
Durante a meiose possvel observar o pareamento dos cromossomos
homlogos, a formao da estrutura do complexo sinaptonmico, o evento de
permuta ou crossing over, a formao de quiasmas, e tambm o processo de
formao dos produtos haplides. Diversos genes atuam sobre a pr-meiose da
mesma forma que atuam sobre a ps-meiose (Kaul e Murthy, 1985), gerando
assim gros de plen anormais ou at mesmo inviveis (Horner e Palmer, 1995).
Bajpai e Singh (2006) relatam que as pesquisas citogenticas so poucas no
mamoeiro, mesmo sendo esta uma importante cultura nas regies tropicais e
subtropicais. Em se tratando de espcies silvestres da famlia Caricaceae essas
pesquisas so mais raras ainda. Damasceno Junior (2008) analisou a meiose da
forma cultivada e das espcies Vasconcella monoica e Jacarati spinosa,
confirmando que essas espcies so diplides e que apresentam algumas
anormalidades no decorrer da diviso celular; resultados esses concordantes com
os observados por Bajpai e Singh (2006).
Dando continuidade s pesquisas citogenticas em espcies da famlia
Caricaceae, esta pesquisa teve por objetivos avaliar o comportamento meitico da
espcie silvestre de V. goudotiana, bem como a viabilidade polnica da mesma, a
fim de se conhecer o comportamento da espcie para nortear futuros trabalhos de
melhoramento gentico da cultura do mamoeiro.

3.3.4. MATERIAL E MTODOS

3.3.4.1. Material Gentico

Plantas masculinas de V. goudotiana utilizadas foram cultivadas na casa
de vegetao do Centro de Cincias e Tecnologias Agropecurias (CCTA) da
Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro (UENF), localizada em
Campos dos Goytacazes, Estado do Rio de Janeiro, Brasil.
 45

3.3.4.2. Metodologias

Anlise da meiose

Para fazer a anlise meitica, dez botes florais/planta, em diferentes

estdios de desenvolvimento, foram coletados ao acaso, e fixados em Soluo de
Farmer (Berlyn & Miksche, 1976) por 24h, com renovao da soluo durante
este perodo, e mantidos no freezer a -200c at o momento do preparo da lmina.
Para a preparao das lminas os botes foram re-hidratados em gua
temperatura ambiente. As lminas foram preparadas por meio da tcnica de
esmagamento, e de cada boto floral foram retiradas quatro anteras grandes e
quatro anteras pequenas, sendo que foram preparadas duas lminas/boto,
sendo uma lmina com anteras grandes e a outra lmina com anteras pequenas.
As anteras foram esmagadas em soluo de carmim actico em 1%, os debris
foram retirados, e a lmina foi selada para observao.
Observaram-se as diferentes fases meiticas, sendo dada principal
ateno para a fase da prfase I e para possveis irregularidades. medida que
as irregularidades, como cromossomos retardatrios, cromossomos pegajosos,
segregao precoce, dentre outras, foram sendo observadas s mesmas foram
registradas. Foi tambm registrado os tipos de quiasmas, intersticial ou terminal, e
foi calculado o ndice de recombinao segundo Darlington (1958) citado por
Damasceno Junior (2008):

IR= n (nmero do conjunto haplide da espcie) + o nmero total de quiasmas.

ndice meitico

Para a determinao do ndice meitico (IM) botes florais na antese foram

coletados em soluo de etanol 70% e conservados na geladeira. A lmina foi
preparada utilizando a tcnica de esmagamento (squash) onde anteras foram
maceradas em soluo do corante carmim actico 1%. Foram contabilizadas 500
clulas/lmina, de produtos ps meiticos (polades, ttrades, trades, dades,
mnades). O IM de 90 a 100% indica que a espcie em estudo citologicamente
estvel, tendo facilidade na realizao de cruzamentos, j em caso de IM menor
que 90% a espcie avaliada considerada instvel citologicamente, o que
 46

significa que a espcie pode apresentar gametas desbalanceados e

conseqentemente gerar prognies desbalanceadas e infrteis.

A avaliao do ndice meitico foi estimada conforme Love (1951), onde:

IM = ( Nmero total de ttrades normais ) X 100

(Somatrio dos produtos ps meiticos)

Viabilidade Polnica

Botes florais prximos da abertura foram coletados em soluo de etanol

70% e armazenados em geladeira at o momento de preparo da lmina. Para a
realizao do estudo da viabilidade polnica da espcie foi utilizada a soluo
tripla de Alexander, sendo esta composta pelos corantes Laranja G, fucsina cida
e verde malaquita (Alexander, 1969). Foram coletados 10 botes florais por
planta, sendo que foram preparadas duas lminas por boto (repetio), e
contados 500 gros de plen por lmina, perfazendo um total de 50.000 gros de
plen classificados em viveis e inviveis.
As anteras foram maceradas sobre a lmina, sobre elas foi colocada uma
gota do corante Alexander (1969), e delicadamente foram esmagadas para
liberao dos gros de plen. Em seguida foram retirados os debris da lmina e
as mesmas foram observadas sob microscpio tico, campo claro. Em cada
lmina os gros de plen foram classificados e contados o nmero de gros de
plen viveis e os inviveis. Gros de plen viveis apresentam colorao
vermelho-prpura e os gros de plen inviveis apresentam colorao verde.
Foram tambm considerados como inviveis gros de plen que apresentaram o
citoplasma plasmolizado.

Captura das imagens

Aps o preparo das lminas nas diferentes etapas da avaliao, as

mesmas foram observadas sob microscpio tico Olympus BX 60 e as imagens
foram capturadas utilizando o programa Image Pro-Plus verso 5. 1 (Media
Cybenertics).
 47

Anlise Estatstica

Os resultados obtidos foram submetidos anlise de varincia a 5% de

probabilidade, utilizando o programa estatstico GENES (verso 2006) e foi
aplicado as mdias o teste Scott-Knott.

3.3.5. RESULTADOS E DISCUSSO

As observaes realizadas nas plantas de V. goudotiana, nas diferentes

fases meiticas, confirmaram que a espcie apresenta 2n=2x=18 cromossomos e
diplide (Figura 1A - 1G). Foi tambm observado que alguns cromossomos da
espcie aqui estudada apresentam regies cuja colorao se diferencia do resto
do cromossomo; essas regies podem indicar a presena de knobs (Figuras 1 A e
B). Ming et al (2008), avaliando cromossomos de Carica papaya, na fase de
paquteno, tambm relatam a ocorrncia de knobs, que so regies que
apresentam colorao diferenciada, com uma maior intensidade; tais regies
esto localizadas em alguns bivalentes, e correspondem a um total de 17% de
todo o genoma da cultura.
Damasceno Junior (2008), trabalhando com V. monica, Jacaratia spinosa
e Carica papaya, observou que tais espcies tambm apresentam um conjunto
cromossmico de 2n=2x=18 cromossomos, e que em C. papaya e V. monica
foram observados um par de cromossomos associados ao nuclolo; segundo o
autor tais cromossomos podem estar associados regio organizadora do
nuclolo (RON). Pode-se observar na Figura 1B a presena de um par de
cromossomos associado ao nuclolo, indicando que neste par pode estar
localizado a RON da espcie. As RON so regies stios da seqncia repetitiva
de DNA 45S (rDNA), responsveis em grande parte pela constituio dos
nuclolos. considerado um marcador citolgico, podendo estar na regio
terminal ou intersticial do cromossomo, gerando assim uma constrio secundria
e no ltimo caso gerando um satlite (Schubert, 2007).
Nesta pesquisa foi estimado o ndice de recombinao, que no caso foi de
26,2. Tal ndice referente taxa de permuta ou crossing over observada na
 48

espcie avaliada. O ndice de recombinao est associado configurao

cromossmica devido formao dos quiasmas durante o evento da permuta. De
acordo com Senda et al. (2005), a presena de cromossomos em basto
caracteriza a ocorrncia de apenas uma permuta, j cromossomos em anel,
caracterizam duas permutas. Damasceno Junior (2008), avaliando o
comportamento meitico de C. papaya e V. monica, relata que o ndice de
recombinao das espcies estudadas de 26,0 e de 25,8 respectivamente; o
autor descreve ainda a ocorrncia de um par de cromossomos em basto e oito
pares em anel, tal caracterstica foi observada em ambas as espcies avaliadas.
Neste trabalho no foram analisados os diferentes tipos de quiasmas para
estabelecer o ndice de recombinao, porm pode se observar na Figura 1C os
cromossomos ainda associados pelos quiasmas e a segregao normal onde se
observam os nove cromossomos nos plos celulares (Figura 1D).
A segunda fase foi normal, sendo possvel observar clulas com os quatro
ncleos resultantes da diviso meitica. A citocinese em angiospermas pode ser
simultnea ou sucessiva (Ramanna & Jacobsen, 2003), e em mamoeiro do tipo
simultnea, onde a celularizao ocorre aps a telfase II (Figura 1H) dando
origem as ttrades. Assim, pode-se concluir que a espcie aps meiose gera
gametas balanceados com nove cromossomos cada.
Foram observadas algumas anormalidades durante a diviso meitica em V.
goudotiana, como cromossomos retardatrios, segregao precoce dos
cromossomos, cromossomos pegajosos, e fibras dos fusos anormais. Algumas
dessas anomalias foram tambm observadas em mamoeiro (Damasceno Junior,
2008; Bajpai e Singh, 2006), em V. monoica, V. cundinamarcensis (Damasceno
Junior, 2008) e em V. pubescens (Zerpa, 1980).
Cromossomos retardatrios foram observados tanto na metfase I quanto
na metfase II (Figura 2 A e B), entretanto esta anomalia meitica foi tambm
registrada por Damasceno Junior (2008), que observou cromossomos
retardatrios em V. monica e C. papaya, porm apenas V. monica apresentou
microncleos em polades. Corra et al. (2005), avaliando o comportamento
meitico em espcies da famlia Araceae, relatam a ocorrncia de cromossomos
dispostos fora da placa equatorial durante a fase de metfase e cromossomos
retardatrios durante as fases de anfase e telfase, tanto na meiose I como na II.
 49

A B C D

E F G H

Figura 1. Diferentes fases da meiose em Vasconcella goudotiana 1A - Prfase I subfase

Zigteno onde se observa os filamentos (cromossomos) e o nuclolo (N) - 1B. Prfase I subfase
paquteno onde se observa os cromossomos mais condensados e alguns apresentando regies
mais condensadas ou knobs (seta) - 1C. Metfase I onde se observa os cromossomos ainda
associados pelos quiasmas (seta) - 1D. Anfase I onde se observa a segregao normal com 9
cromossomos nos plos celulares - 1E a 1H. Metfase II, Anfase II e Telfase II onde se observa
4 ncleos resultantes da meiose.

A B C D

Figura 2: Anomalias observadas na meiose de V. goudotiana onde se observa cromossomos

retardatrios na metfase I e metfase II (2A e 2B), segregao precoce e cromossomos
pegajosos (2C) e falta de sincronia na meiose I (2D).

.
 50

A presena de cromossomos retardatrios pode gerar gametas

desbalanceados ou aneuplides, j que os cromossomos retardatrios podem
ficar retidos no citoplasma, no acompanhando o conjunto de cromossomos que
segue a diviso celular normalmente, e no final serem eliminados na forma de
microncleos (Kodoru & Rao, 1981).
Outra anomalia meitica observada em V. goudotiana foi cromossomo
pegajoso (sticky chromosome) (Figura 2A, B e C). Esta anomalia, que est sob
controle gentico e ambiental, caracterizada pela aglomerao dos
cromossomos na clula podendo ocorrer em diferentes fases da meiose. Vrios
genes mutantes so relatados como responsveis por cromossomos pegajosos
em espcies vegetais e usualmente esta anomalia seguida por fragmentao
cromossmica, anomalias nas fibras do fuso acromtico, e meiose anormal.
Dentre os fatores ambientais a temperatura e a aplicao de herbicidas podem
ativar este tipo de anomalia (Koduru & Rao, 1981; Bajpai e Singh, 2006). Bajpai e
Singh (2006) relatam que em variedades comerciais de C. papaya esta foi a
anomalia de maior ocorrncia e variou de 21.6% a 44% e Damasceno Junior
(2008) observou cromossomos pegajosos em 12% e 28,8% das clulas
analisadas em C. papaya e em V. monoica, respectivamente.
A falta de sincronismo na diviso celular e a segregao precoce foram
tambm observadas durante a meiose em V. goudotiana. A falta de sincronismo
caracterizada quando duas fases distintas da diviso celular so observadas na
mesma clula (Figura 2 D). Estudos realizados em clulas-me de gro de plen
em plantas de mamoeiro hermafrodita e masculino revelaram a presena de um
par de cromossomos que apresenta uma separao precoce em relao aos
demais. Alguns autores associam a segregao precoce de cromossomo em
mamoeiro existncia de cromossomos sexuais, porm espcies com
cromossomos pequenos podem apresentar problemas de segregao durante a
meiose (Schubert, 2007) e este pode ser o caso das espcies Caricceas, j que
segregao precoce tem sido observada por outros autores (Storey, 1953; Bajpai
e Singh, 2006, Damasceno Junior, 2008 ).
A desorganizao das fibras do fuso acromtico tambm foi observada em
V. goudotiana (Figura 3). Durante a diviso celular o citoesqueleto sofre uma
transformao de uma configurao em outra apropriada para as diferentes
funes que apresenta durante a cariocinese e a citocinese (Shamina, 2005a). O
 51

ciclo do citoesqueleto em clulas-me de gros de plen parece ocorrer em dois

modos: com e sem a despolimerizao na prfase. Neste ltimo caso, na
interfase o rearranjo do citoesqueleto ocorre em um sistema perinuclear
semelhante a anel; aps o desarranjo do envelope nuclear no inicio da
prometafase, o anel se desfaz e as fibras do fuso (micro-tubos) invadem o ncleo
formando uma rede desorganizada. A formao das fibras do fuso bipolar,
cinetcoros e central, ocorrem nesta fase de desorganizao. As fibras bipolares
desenvolvidas se orientam ao longo do futuro eixo de diviso e convergem para
os plos formando as fibras metafsicas no final da prometafase (Shamina,
2005a). Dentre as anomalias da fibra observaram-se fibras em C e fibras
mltiplas (Figura 3).

A
B C

D E F

Figura 3. Anormalidades nas fibras do fuso observadas durante a metfase I e II em V.

goudotiana. A Fibras do fuso em C. B E. Fibras mltiplas tanto na metfase I (B) quanto na
metfase II (C-E). F. clula com segregao anormal dos cromossomos em funo do desarranjo
das fibras do fuso.

As fibras em C ocorrem devido a anormalidades que ocasionam a

curvatura dos feixes das fibras do fuso, enquanto que as fibras mltiplas ocorrem
ao acaso e regra geral elas causam o surgimento de polades em vez de dades
 52

na meiose I. Ambas as anomalias tm sido reportadas em outras espcies como

milho e hbridos intergenricos de cereais (Shamina, 2005b).
Todas essas anormalidades podem gerar gametas desbalanceados que
podem configurar em gametas no reduzidos (n=2n=18cromossomos) em vez de
gametas reduzidos (n=9 cromossomos) e em gametas aneuplides que podem se
configurar com gros de plen inviveis.

ndice Meitico e Viabilidade Polnica

A anlise de varincia dos dados referentes ao ndice meitico (Tabela 1)

foi significativa conforme pode ser verificado na Tabela 2. Apesar de a meiose ter
apresentado algumas anormalidades (Tabela 1) houve uma grande formao de
ttrades normais, o que indica uma formao de gametas balanceados na
espcie. Observa-se tambm que a formao dos produtos ps-meiticos variou
entre plantas bem como os ndices meiticos, j que houve diferena entre as
mdias dos gentipos. Em termos mdios, a espcie apresenta ndice Meitico
(IM) de 85,27% e segundo Love (1951), espcies que apresentam IM de 90 a
100% caracterizam espcies citolgicamente estveis, j espcies que
apresentam IM menor que 90% so consideradas instveis meioticamente;
portanto, a espcie analisada pode ser considerada instvel meioticamente, o que
significa que a espcie pode vir a apresentar gametas desbalanceados e
dificuldades para a obteno de prognies.

Tabela 1. Produtos ps-meiticos observados em Vasconcella goudotiana.

Produtos Ps-meiticos
Planta Total IM (%)*
Ttrades Trades Dades Monades Polades
1
1 8.302 1.081 03 01 19 9.880 88,82 a
2 6.754 520 41 06 165 7.486 90,22 a
3 6.668 750 25 07 463 7.913 84,27 b
4 7.587 997 170 0 248 9.002 84,28 b
5 8.043 942 654 06 353 9.998 80,45 b
Total 37.354 4.290 893 20 1.248 43.805 85,27
*Mdias seguidas pela mesma letra no diferem significativamente entre si, pelo teste Scott e
Knott, a 5% de probabilidade.

Como pode ser verificado foram observadas trades, dades, polades que
foram conseqncias das anormalidades observadas durante a meiose (Tabela
 53

1). Dades e trades podem gerar gametas no reduzidos do tipo 2n, j as

polades geram gametas desbalanceados devido presena de microncleos que
regra geral podem representar cromossomos retardatrios (Figura 3). Entretanto,
produtos ps-meiticos anmalos tm sido registrados em outras espcies como
V. pubescens, cuja meiose tambm apresentou produtos ps-meiticos
irregulares (Zerpa, 1980). Damasceno Junior (2008) estimou para C. papaya e V.
monica, ndices meiticos de 94,84% e 77,57% respectivamente, assim pode-se
inferir que V. goudotiana tem um ndice meitico mais alto do que V. monoica, que
tambm uma espcie silvestre do gnero Vasconcella.

A B C

E
D
F
Figura 4. Produtos ps-meiticos observados em V. goudotiana. A Ttrade. B Dade. C
Dade com microncleo (seta). D Trade com ncleos de tamanho desiguais. E Polade onde
se observa seis ncleos de tamanhos diferentes. F. Gros de plen sem a devida degenerao da
calose.

A viabilidade polnica das plantas de V. goudotiana (Tabela 3 e Figura 5)

variou de 48,50% a 85,05%, sendo que em mdia a viabilidade polnica da
espcie est em torno de 67,93%, o que considerado uma viabilidade polnica
baixa a mdia. Entretanto, considerando as inmeras irregularidades meiticas
observadas nas plantas este ndice j era esperado. Bajpai e Singh (2006)
avaliando a viabilidade polnica de dez variedades de mamoeiro observaram que
 54

este ndice variou de 11,64% a 83,95%; Damasceno Junior (2008) observou

valores de 96% e 70,93% para as espcies C. papaya e V. , respectivamente.
Mendes (1994) relata que a presena de ttrades anormais um fator indicativo
de ocorrncia de um processo meitico irregular, que conseqentemente leva ao
desenvolvimento de gros de plen com a diminuio da taxa de viabilidade
polnica.

Tabela 2. Resumo a anlise da varincia dos dados do ndice Meitico em

Vasconcella goudotiana

ndice Meitico Viabilidade Polnica

QM
FV GL
Trat. 4 177,4140** 2109, 7727**
Res. 45 30,4252 132,5824

Mdias 85,508 68, 294**

CV% 4,4837 20, 5863
*Significativo em nvel de 1% de probabilidade; ** Significativo em nvel de 5% de probabilidade;
CV% = Coeficiente de Variao Gentico.

Figura 5. Viabilidade polnica em V. goudotiana onde se observa um gro de plen vivel (seta
preta) e dois gros de plen inviveis do tipo plasmolisados (seta curta). Barra = 5 m.
 55

Tabela 3. Nmero de gros de plen viveis (GPV), gros de plen inviveis

(GPI), gros de plen plasmolisados (GPP), total de gros de plen inviveis
(TGPI), total de gros de plen (TGP) e viabilidade polnica (VP) observados nas
plantas de V. goudotiana.

Gros de plen inviveis

Planta GPV TGP VP (%)*
GPI GPI GPP
1 8.511 764 732 1.496 10.007 85,05 1a
2 7.832 1.295 850 2.145 9.977 78,50 ab
3 6.297 2.473 1.260 3.733 10.030 62,78 b
4 4.881 3.898 1.285 5.183 10.064 48,50 c
5 6.522 2.730 808 3.538 10.060 64,83 b
Total 34.043 11.251 4.935 16.095 50.138 67,93
*Mdias seguidas pela mesma letra no diferem significativamente entre si pelo teste Scott Knott
a 5% de probabilidade.

Segundo Corra et al., (2005), as alteraes ocorridas durante a meiose,

teoricamente devero, se refletir na viabilidade polnica dos gros de plen, j que
o carter de fertilidade do gro de plen totalmente dependente do sucesso
durante o processo de meiose. A ocorrncia de gros de plen inviveis pode vir
a ter uma maior relao com a segregao irregular dos cromossomos, do que os
outros eventos irregulares observados como a citomixia e o atraso dos
cromossomos detectados em anfase I e II (Damasceno Junior 2008).
Com base nos dados observados neste trabalho conclui-se que a espcie
V. goudotiana apresenta meiose irregular devido provavelmente s condies
ambientais, j que esta espcie se desenvolve em regies altas com
temperaturas mais amenas. Conseqentemente, essas irregularidades
observadas na meiose ocasionaram o surgimento de produtos ps-meiticos
anmalos e uma viabilidade polnica baixa. Assim, para que esta espcie seja
utilizada em programas de melhoramento via hibridao necessrio que haja
uma programao cuidadosa no nmero de cruzamento a serem realizados, j
que a mesma apresenta uma baixa proporo de gametas viveis.
 56

3.3.6. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS

Alexander, M. P. (1969) Diferential staining of aborted and nonaborted pollen.

Stain Techn, 44: 117-122p.

Bajpai, A.; Singh, A. K. (2006) Meiotic Behavior of Carica papaya L.; Spontaneous
chromosome instability and elimination in important cvs. in North Indian
conditions. Cytologia, 71(2): 131-136.

Berlyn, G. P. and Miksche, J. P. (1976) Botanical microtechnique and

cytovhemistry. Iowa State University Presse, Iowa-USA. 326 pp.

Corra, M.G.S.; Viegas, J.;Silva, J.B.da; Avila, P.F.V.de; Busato, G.C.; Lemes,
J.S. (2005) Meiose e viabilidade polinca na famlia Araceae. Acta Botnica
Brasileira,19(2):295-303.

Costa, A. de F. S. da; Pacova, B. E. V. (2003) Caracterizao de cultivares,

estratgias e perspectivas do melhoramento gentico do mamoeiro. In:
Martins, D. dos S.; Costa, A. de F. S. da (eds.) A cultura do mamoeiro
Tecnologia de Produo, INCAPER, Vitria, ES, p. 59-102.

Damasceno Junior, P. C. (2008) Estudos citogenticos, genticos e moleculares,

como ferramenta auxiliar no melhoramento gentico do mamoeiro. (Tese
doutorado) Campos do Goytacazes RJ Universidade Estadual do Norte
Fluminense UENF, 151p.

Hajjar R & Hodgkin T (2007) The use of wild relatives in crop improvement: a
survey of development over the last 20 years. Euphytica 156: 1-13.

Horner, H. T.; Palmer, R. G. (1995) Mechanisms of genic male sterility. Crop

Science, 35(6): 1527-1535p.
 57

Kaul, M. L. H. & Murthy T. G. K. (1985) Mutant genes affecting higher plant

meiosis. Theoretical Applied Genetics 70: 449-466.

Kodoru, P. R. K.; Rao, M. K. (1981) Cytogenetics of synaptic mutants in higher

plants. Theor. Appl. Genet., 59: 197-214.

Love, R. M. (1951) Varietal diferences in meiotic chromosomes behavior of

Brazilian wheats. Agronomy Journal, 43: 72-76.

Media Cybernetics (2004) Image-Pro plus, version 5.1 for Windows. Media
Cybernetics Inc, Maryland, USA.

Mendes, M. da Silva. (1994) Viabilidade do gro de plen de Solanum ssp.

Dissertao( Tese de mestrado em Agronomia) Universidade Federal de
Pelotas, Pelotas.

Ming, R.; Hou, S.; Feng, Y.; Yu, Q.; Dionne-Laporte, A.; Saw, J. H.; Senin, P.;
Wang, W.; Ly, B. V.; Lewis, K. L. T.; Salzberg, S. L.; Feng, L.; Jones, M. R.;
Skelton, R. L.; Murray, J. E.; Chen, C.; Qian, W.; Shen, J.; Du, P.; Eustice, M.;
Tong, E.; Tang, H.; Lyons, E.; Paull, R. E.; Michael, T. P.; Wall, K.; Rice, D. W.;
Albert, H.; Wang, M. L.; Zhu, Y. J.; Schatz, M.; Nagarajan, N.; Acob, R. A.;
Guan, P.; Blas, A.; Wai, C. M.; Ackerman, C. M.; Ren, Y.; Liu, C.; Wang, J.;
Wang, J.; Na, J. K.; Shakirov, E. V.; Haas, B.; Thimmapuram, J.; Nelson, D.;
Wang, X.; Bowers, J. E.; Gschwend, A. R.; Delcher, A. L.; Singh, R.; Suzuki, J.
Y.; Tripathi, S.; Neupane, K.; Wei, H.; Irikura, B.; Paidi, M.; Jiang, N.; Zhang,
W.; Presting, G.; Windsor, A.; Navajas-Perez, R.; Torres, M. J.; Feltus, F. A.;
Porter, B.; Li, Y.; Burroughs, A. M.; Luo, M. C.; Liu, L.; Christopher, D. A.;
Mount, S. M.; Moore, P. H.; Sugimura, T.; Jiang, J.; Schuler, M. A.; Friedman,
V.; Mitchell-Olds, T.; Shippen, E. E.; Pamphilis, C. W. de; Palmer, J. D.;
Freeling, M.; Paterson, A. H.; Gonsalves, D.; Wang, L.; and Alam, M. (2008)
The draft genome of the transgenic tropical fruit tree papaya (Carica papaya
Linnaeus). Nature, 452: 991-997.
 58

Ramanna M. S. & Jacobsen E (2003) Relevance of sexual polyploidization for

crop improvement a review. Euphytica 133: 3-18.

Shamina, N. V (2005a) Formation of division spindles in higher plant meiosis. Cell

Biology International 29: 307-318.

Shamina, N. V (2005b) A catalogue of abnormalities in the division spindles of

higher plants. Cell Biology International 29: 384-391.

SEAG (Secretria da Agricultura, Abastecimento e aqicultura e Pesca).

Disponvel em: www.seag.es.gov.br. Acesso em: 10/09/2008.

Senda, T.; Hiraoka, Y.; Tominaga, T. (2005) Cytological affinities and interfertilities
between Lolium temulentum and L. persicum (Poaceae) accessions.
Hereditas, 142: 45-50.

Shubert, I (2007) Chromosome evolution. Current Opinion in Plant Biology 10:

109-115.

Storey, W.B., (1953) Genetics of the papaya. J.Hered. 44:70-78.

Zerpa, D. M. (1980) Comportamento meiotico de la descendncia hibrida

producida al transferor el character bisexual de C. pubescens e C. stipulata.
Ver. Fac. Agronomia, Maracay, Venezuela, 1-4: 5-47.
 59

4. CONCLUSO GERAL

O presente trabalho teve por objetivo caracterizar citologicamente a espcie

Vasconcella goudotiana, que pertence famlia Caricaceae e apresenta
caractersticas desejveis podendo ser utilizada em programas de melhoramento
gentico do mamoeiro (Carica papaya L.). Para tal, sementes foram colocadas
para germinar e plantas foram cultivadas em casa de vegetao. Considerando
que esta espcie originada das terras altas e baixas temperaturas, fez-se uma
breve descrio botnica das plantas que foram cultivadas na casa de vegetao.
A espcie diica e apresentam folhas palmipartidas de colorao verde. Nas
plantas masculinas o tamanho das folhas apresentam, em mdia, comprimento de
25,98 cm e 31,20 cm de largura; as flores esto dispostas em inflorescncias que
apresentam, em mdia, 24,44 botes ou flores por inflorescncia. Quanto s
plantas femininas, as folhas apresentam comprimento mdio de 22,71 cm e 27,9
cm de largura. As flores femininas so isoladas e surgem nas axilas foliares. O
gineceu gamocarpelar e o pistilo e pluricarpelar com seis carpelos. O ovrio
apresenta em mdia de 264 vulos. As plantas masculinas floresceram antes das
femininas e levaram em mdia oito meses para o florescimento. Uma diferena
marcante entre plantas masculinas e femininas o recorte das folhas que nas
masculinas apresentam os fololos mais estreitos do que as femininas; essa
diferena permite identificar o sexo das plantas antes da florao. Alm da
descrio botnica foi determinado um caritipo convencional, analisado a meiose
e os produtos ps-meiticos, bem como a viabilidade polnica. Para o caritipo
 60

observou-se que a espcie apresenta 18 cromossomos, sendo cinco pares do tipo

metacntrico e quatro pares do tipo submetacntrico (2n=2x=18= 5II M + 4II SM).
O caritipo do tipo simtrico, indicando a similaridade no tamanho dos
cromossomos e o comprimento do lote haplide estimado para a espcie foi de
23,08 m. O tamanho dos cromossomos da espcie variou de 3,06 m (o maior
par) a 2,03 m (o menor par). No foi observada nenhuma diferena entre os
pares de cromossomos homlogos que pudesse indicar a presena de
cromossomos associados ao sexo da espcie. Na analise meitica que foi
realizada em botes florais de diferentes estdios de desenvolvimento, observou-
se clulas com a diviso normal, gerando no final produtos ps-meiticos
balanceados e normais. Entretanto, vrias anomalias foram observadas como
cromossomos pegajosos, cromossomos retardatrios, segregao precoce, falta
de sincronia da diviso II e distrbios nas fibras do fuso acromtico tanto na
diviso I quanto na II. Essas anomalias meiticas se reverteram em produtos ps-
meiticos anormais; assim foram observados trades, dades, nmades e polades
alm de ttrades, fazendo com que a espcie apresentasse um ndice meitico de
85,27% e uma viabilidade polnica de 67,93%. Com base nos resultados sugere-
se que o cultivo dessa espcie possvel nas condies locais e em casa de
vegetao, porm o uso da mesma em programas de hibridao interespecfica
deve ser bem programado, j que em virtude das anomalias apresentadas que
induziram a um baixo ndice meitico e a uma baixa viabilidade polnica e podem
gerar prognies desbalanceadas (aneuplides ou duplicadas) ou mesmo ter um
baixo ndice de fertilizao ou vingamento das flores polinizadas e
conseqentemente baixa obteno de frutos com sementes hbridas.
 61

5. REFERNCIAS

Alexander M.P. (1969) Differential staining of aborted and non aborted pollen.
Stain Tech. 44:111-122.

Alvizo, V.H.F., Rojkind, M.C. (1987) Resistencia al virus mancha anular del
papaya en Carica cauliflora. Rev. Mex. de Fitopat. 5:61-62

Aramuganathan, K & Earle, E. D. (1991) Estimation of nuclear DNA content of

plants by flow cytometry. Plant Molecular Biology Reporter, 9: 229-233.

Badillo, V. M. (1971) Monografia de la famlia Caricaeae. Editorial Nuestra

Amrica C. A. Maracay, Venezuela, 221p.

Badillo, V.M. (1993) Segundo Esquema Caricaceae. Revista de La Facultad de

Agronoma. Maracay, Venezuela.

Badillo, V.M. (2000) Carica L. VS. Vasconcella St.Hil. (Caricaceae) con la

rehabilitacion de este ultimo. Ernestia. Maracay, Venezuela. 74-79p.

Bajpai, A.; Singh, A. K. (2006) Meiotic Behavior of Carica papaya L.; Spontaneous
chromosome instability and elimination in important cvs. in North Indian
conditions. Cytologia, 71(2): 131-136.
 62

Caetano-Pereira, C. M., Defani-Scoarize, M. A., Pagliarini, M S., Brazil, E. M.

(1998) Syneytes, abnormal cytokinesis and spindle irregularities in maize
microsporogenesis. Maydica 43: 235-252.

Chen, M. H., Chen, C. C., Wang, D. N., Chen, F. C., (1991) Somatic
embryogenesis and plant regeneration from immature embryos of Carica
papaya x Carica Cauliflora cultured in vitro. Candian Journal of Botany,
Ottawa, vol 69, n0 9, p. 1913-1918,

Coelho, L.G.M., Battistin, A.(1996) Estudo dos caritipos em espcies de Adesmia

DC. nativas no Rio Grande do Sul. In: 42 Congresso Nacional de Gentica.
Caxambu, Revista Brasileira de Gentica (supplement), v. 19, n. 3, p. 130.

Costa, F. R., Pereira, T. N. S., Hodnett, G. L., Pereira, M. G., Stelly, D. M. (2008)
Fluorescent in situ hybridization of 18S and 5S rDNA in papaya (Carica
papaya L.) and wild relatives. Caryologia (No Prelo).

Consolaro, M. E. L., Pagliarini, M. S. and Chaves, L. J. (1996) Meiotic behavior,

pollen fertility and seed production in Brazilian populations of Centella asiatica
(L) Urban (Umbelliferae). Cytologia 61: 5761.

Dafni, A. (1992) Pollination ecology a pratical approach. New York: Oxford

University Press Inc., 250p.

Damasceno Junior, P. C. (2008) Estudos citogenticos, genticos e moleculares,

como ferramenta auxiliar no melhoramento gentico do mamoeiro. (Tese
doutorado) Campos do Goytacazes RJ Universidade Estadual do
Norte Fluminense UENF, 151p.

Dantas, J. L. L.; Dantas, A. C. V. L.; Lima, J. F.(2002) Mamoeiro. In: Bruckner,

C.H. (Ed.) Melhoramento de fruteiras tropicais. Viosa: UFV. Pp.309-349.

Darlington, C.D., Ammnal, E. J. K. (1945) Chromosome atlas of cultivated plants.

George Allen and Unwin Ltd.,London.
 63

Datta, P. C. (1971) Chromossomal byotipes of Carica papaya L. Cytologia

36:555-562.

Defani-Scoarize, M.A., Pagliarini, M.S. and Aguiar, C.G. (1996) Meiotic behavior of
inbred lines of maize (Zea mays L.). Nucleus 39: 10-18.

Drew, R.A.; O"Brien, C.M.; Magdalita, P.M.; Drew,R.A.(1998) Development of

Carica interspecific hybrids. Acta Horticulture, 461: 285-291.

Fernndez-Calvn, B.; Orellana, J.; Pignone, D. (1995) Genome analysis of

triploids using mathematical models. I. Effects of translocations not detected by
conventional staining techniques. Hereditas, 122: 41-45

Ferreira, M.A.M.M., Aguiar-Perecin, M.L.R. (1996) Padro de bandas C em

Capsicum baccatum. Brazilian Journal of Genetics (Supplement) 19(3):
136.

Guerra, M., (1986) Reviewing the chromosome nomenclature of Levan et al.

Revista Brasileira de Gentica, 4:741-743.

Guerra, M. (1988) Introduo a Citogentica Geral. 1 ed. Editora Guanabara,

1988.

Guerra, M. e Souza, M J. (2002) Como observar cromossomos: um guia de

tcnicas em citogentica vegetal, animal, e humana. FUNPEC, Ribeiro
Preto - SP. 131 pp.

Gupta, P. K., and Priyadarshan P.M., (1987) Analysis of meiosis in triticale (

Triticosecale wittmack) x rye (Secale cereal L.)F1 hybrids at three ploidy
levels. Theoretical and Applied Genetics, 73: 389-898.
 64

Heslop-Harrison J. & Heslop-Harrison Y (1970) Evaluation of pollen viability by

enzymatically induced fluorescent: intracellular hydroliis of fluorescein
diacetato. Stain Technology 45: 115-120.

Horner, H. T.; Palmer, R. G. (1995) Mechanisms of genic male sterility. Crop

Science, 35(6): 1527-1535p.

Huziwara Y (1962) Karyotype analysis in some genera of compositae. VIII. Further

studies on the chromosome of aster. Americam Journal of Botany 49: 116-119.

Johansen, A. D. (1940) Plant Microtechnique. McGraw Hill, New York. 523pp

Jong, J. H. Wolters A. M. A., Kok J. M., Verhaar, H. and Van Eden J., (1993)
Chromosome pairing and potential for intergeneric recombination in some
Hypotetraploid somatic hybrids of Lycopersicon esculentum , Solanum
tuberosum. Genome, 36: 1032-1041

Kaul, M. L. H., and Murthy, T. G. K. (1985) Mutants genes affecting higher plant
meiosis. Theor. Appl. Genet. 70: 449466.

Kodoru, P. R. K.; Rao, M. K. (1981) Cytogenetics of synaptic mutants in higher

plants. Theor. Appl. Genet., 59: 197-214.

Kumar, L. S. S., Abraham, (1942) A chromosome number in Carica. Current

Science 11:58.

Kumar, L. S. S., Abraham, A., Srinivasan, V. K. (1945) the cytology of Carica

papaya. Indian Journal of Agriculture Science 15: 242-253.

Levan, A., Frediga, K., And Sandberg, A., (1964) Nomenclature for centromeric
position on chromosomes. Hereditas, 52: 201-220.
 65

Liberato, J.R.; Vanetti, C.; Rodrigues, C.H.; Dias. V.P.(1993) Ocorrncia de

podrido de Phytophthora em mamoeiro (Caricapapaya L.) no estado do
Esprito Santo. Fitopatologia Brasileira, Brasilia 18: 324.

Love, R. M. (1951) Varietal diferences in meiotic chromosomes behavior of

Brazilian wheats. Agronomy Journal, 43: 72-76.

Maffei, E.M.D., Marin-Morales, M.A., Ruas, P.M., Ruas, C.F. (1996) Anlise de
assimetria cariotpica realizada em populaes de Mikania micrantha HBK.
(Asteraceae). Brazilian Journal of Genetics (Supplement), 19(3): 131.

Magdalita, P. M.; Villegas, V. N.; Pimentel, R. B.; Bayot, R. G. (1988) Reaction of

papaya (Carica papaya) and related species to ringspot virus. J. Crop
Sci.,13:129-132

Manshardt, R.M., Wenslaff, T.F. (1989) Interspecific hybridization of papaya with

other species. J. Am. Soc. Hortic. Sci. 114:689-694.

Mayeda, L. C. (1997) Estudo citogentico em dez taxons do gnero Passiflora L.

(Passifloraceae). Dissertao de mestrado. Escola Superior de Agriocultura
Luiz de Queiroz. USP, Piracicaba. 89p

Mercado-Ruaro, P., Delgado-Salinas, A. (1998) Karyotypic studies on species of

Phaseolus (Fabaceae: phaseolinae). American Journal of Botany 85(1): 1-
9.
Pagliarini, M. S.(2000) Meiotic behavior of economically important plant species:
The relationship between fertility and male sterility. Genet. Mol. Biol. 23:
997-1002.

Pagliarini M & Pozzobon M. T. (2004) II Curso de citogentica aplicada a

recursos genticos vegetais. EMBRAPA CENARGEN DF.

Sharma, A K & Sharma, A. (1994) Chromosome Techniques: a manual.

Harwood Academic Press, Switzerland. 368 pp.
 66

Scheldeman, X., Romero, J., Damme, P.V., (2001) Highland papayas in souther.
Equador: Need for conservation Vascocella, actions procedings of the
International symposium on tropical and subtropical fruits Australia.Acta
Horticulturae. Disponvel em
(http://www.tropicallab.ugente.bee/vasconcellabiotope.htm) Acessado em:
08/12/2007.

Singh, R. J. (1993) Plant cytogenetics. United States: CRC Press. Inc., 391p.

Shubert, I (2007) Chromosome evolution. Current Opinion in Plant Biology 10:

109-115.

Souza Jnior, M. T. (2000) Mamo transgnico: Uso da engenharia gentica para

obter resistncia ao vrus da mancha anelar. Biotecnologia Cincia e
Desenvolvimento, 2(13): 132-137.

Souza, M. M., Pereira, T. N. S., Rodrigues, R., Dutra, G. A., Sudr, C. P. (2000)
Irregularidade meitica em pimenta. Horticultura Brasileira 18: 748-749
(Suplemento).

Stace, C. A.(2000) Cytology and cytogenetics as a fundamental taxonomic

resource for the 20st and 21st centuries. Taxon,49, p. 451-476.

Storey, W.B., (1941) The botany and sex relationiship of the papaya. Papaya
production in the Hawai Agricultural Experiment Station 87:5-22.

Techio, V. H.; Davide, L. C.; Pereira, A. V. (2006) Meiosis in elephant grass

(Pennisetum purpureum), pearl millet (Pennisetum glaucum) (Poaceae,
Poales) and their interspecifi c hybrids. Genetics and Molecular Biology, 29 (2):
353-362.
 67

Techio, V. H. ; Davide, Lisete Chamma ; Nunes, J. D. ; Pereira, A. V.(2007)

Variao cromossmica numrica em Pennisetum. Cincia e Agrotecnologia,
Lavras-MG, v. 31, p. 398-405.

Tilquin, J.P., Brower K., and Horwat F., (1984) Unsual cytological patterns in
microsporogenesis in a cultivar of Fuchsia. 1Multiple spindle . Theoretical and
Applied Genetics, 67:413-417.