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UNIVERSIDAD JUREZ AUTNOMA DE TABASCO

DIVISIN ACADMICA DE CIENCIAS BIOLGICAS

DESARROLLO DE UN POLMERO NATURAL PARA EL


TRATAMIENTO DE AGUAS SUPERFICIALES

TESIS

QUE PARA OBTENER EL TTULO DE


MAESTRO EN CIENCIAS AMBIENTALES

PRESENTA:

MA. MARTHA SANDOVAL ARREOLA

ASESOR:

DR. JOS RAMN LAINES CANEPA

VILLAHERMOSA, TABASCO. NOVIEMBRE 2013


.
DEDICATORIA
i

A Dios

A mis padres

Jess y Enedina

A mis hijas

Karla y Brenda

A Ral

Con todo mi amor.


AGRADECIMIENTO
ii

A mi director de tesis de la UJAT, Dr. Jos Ramn Laines Canepa por los apoyos
otorgados, revisiones y facilidades para la realizacin de este trabajo.

Al Dr. Jos Roberto Hernndez Barajas por sus comentarios y aportaciones que
me ayudaron a mejorar mi trabajo.

A M. C. Roco Lpez Vidal por sus aportaciones que me ayudaron a mejorar mi


trabajo.

Al Snodo conformado por Dr. Jos Roberto Hernndez Barajas, Dr. Jos Ramn
Laines Canepa, M. C. Roco Lpez Vidal, M. C. Israel vila Lzaro y M.I.P.A.
Rosalinda Fras de la O por sus valiosos comentarios y correcciones.

A la Dra. Teresa Hernndez Sotomayor del CICY de Mrida, Yucatn por


aceptarme y darme todas las facilidades en el rea de Transduccin de seales.

Al M. C. Armando Muoz Snchez del CICY de Mrida, por el apoyo tcnico en los
anlisis de electroforesis en gel de poliacrilamida.

Al M. en I. Ral Ramrez Quiroz por su apoyo incondicional y paciencia en todos


los momentos de mayor presin.

A la Universidad Jurez Autnoma de Tabasco por brindarme sus instalaciones


para llevar a cabo este trabajo y por haber formado parte importante en mi carrera
acadmica.

Al CONACYT, por el apoyo econmico otorgado durante el desarrollo de mis


estudios de posgrado.

A mis amigos Beatriz Rodas Junco y Wilberth Alfredo Poot Poot, Rudy Sols
Silvn, Jos Aurelio Sosa Olivier, Karla Cmara Moguel, Israel vila Lzaro, Joel
Moo Milln, Roberto Jusseff Pech, por todo el apoyo brindado en este trabajo.

Gracias
iii

La naturaleza no hace nada superfluo, nada intil y sabe sacar mltiples efectos
de una sola causa

Coprnico
INDICE
DEDICATORIA ............................................................................................................................................................................I
iv
AGRADECIMIENTO ................................................................................................................................................................ II
INDICE ........................................................................................................................................................................................IV
INDICE DE FIGURAS..............................................................................................................................................................VI
INDICE DE TABLAS ...............................................................................................................................................................VI
RESUMEN ....................................................................................................................................................................................1
I INTRODUCCIN .....................................................................................................................................................................2
II MARCO TERICO................................................................................................................................................................4
2.1 DEFINICIN DE AGUA POTABLE. ........................................................................................................................................ 4
2.2 LEGISLACIN VIGENTE PARA EL TRATAMIENTO DE AGUA SUPERFICIAL. ........................................................................ 4
2.3 PROCESO DE POTABILIZACIN. ......................................................................................................................................... 5
2.4 DESCRIPCIN DE LAS ETAPAS DEL PROCESO DE POTABILIZACIN. ................................................................................. 6
2.5 PRINCIPALES PRODUCTOS COAGULANTES........................................................................................................................ 8
2.6 FACTORES QUE INFLUYEN EN LA COAGULACIN. .......................................................................................................... 10
2.7 PROTENAS. ..................................................................................................................................................................... 12
2.8 ELECTROFORESIS DE PROTENAS EN GEL DE POLIACRILAMIDA PAGE-SDS. ............................................................. 16
III ANTECEDENTES ..............................................................................................................................................................18
3.1 EFECTO DE LOS PARMETROS DE OPERACIN DEL ENSAYO. ........................................................................................ 18
3.2 EFICIENCIA DE COAGULACIN. ....................................................................................................................................... 18
3.3 ESTUDIOS DE COMPARACIN DE EFICIENCIA DE COAGULACIN. .................................................................................. 19
3.4 CALIDAD DEL AGUA TRATADA. ....................................................................................................................................... 19
3.5 DETERMINACIN DE LOS MECANISMOS SEGUIDOS CON EL USO DE SEMILLAS DE MORINGA COMO COAGULANTE. .... 19
3.6 ESTUDIOS DE EFECTO BACTERIOLGICO DEL COAGULANTE DE MORINGA................................................................... 20
3.7 CARACTERIZACIN DEL COAGULANTE DE MORINGA OLEIFERA. ................................................................................... 20
IV JUSTIFICACIN.................................................................................................................................................................23
V OBJETIVOS...........................................................................................................................................................................26
5.1 OBJETIVO GENERAL. ....................................................................................................................................................... 26
5.2 OBJETIVOS PARTICULARES.............................................................................................................................................. 26
VI. HIPTESIS.........................................................................................................................................................................26
VII MATERIALES Y MTODOS.........................................................................................................................................27
7.1 CARACTERIZACIN DEL AGUA CRUDA. ........................................................................................................................... 27
7.2 DETERMINACIN DE DOSIS PTIMA DE LAS SOLUCIONES OBTENIDAS DE LAS SEMILLAS DE MORINGA OLEIFERA. ... 27
7.3 OBTENCIN DE LA DOSIS PTIMA DE COAGULACIN CON EL SULFATO DE ALUMINIO. ............................................. 30
7.4 COMPARACIN DE LA EFICIENCIA DE COAGULACIN DE LOS COAGULANTES OBTENIDOS. ........................................ 30
7.5 CARACTERIZACIN DE LOS EXTRACTOS CRUDOS OBTENIDAS DE LAS SEMILLAS DE MORINGA OLEIFERA. ................. 30
7.6 ETAPAS GENERALES DE LA INVESTIGACIN................................................................................................................... 32

7.7 DISEO EXPERIMENTAL.................................................................................................................................................. 34


7.8 ANLISIS ESTADSTICOS.................................................................................................................................................. 34
VIII RESULTADOS Y DISCUSIN.....................................................................................................................................35
v
8.1 CARACTERIZACIN DEL AGUA CRUDA. ........................................................................................................................... 35
8.2 CARACTERIZACIN DEL AGUA DE MAR........................................................................................................................... 35
8.3 DETERMINACIN DE DOSIS PTIMA PARA LA REMOCIN DE TURBIEDAD DE LOS COAGULANTES DE MORINGA Y
SULFATO DE ALUMINIO EN AGUAS DE 15, 36 Y 100 NTU.................................................................................................. 36
8.4 COMPARACIN DE LA EFICIENCIA DE COAGULACIN DE LOS COAGULANTES OBTENIDOS. ......................................... 41
8.5 CARACTERIZACIN DE LOS EXTRACTOS CRUDOS OBTENIDAS DE LAS SEMILLAS DE MORINGA OLEIFERA. ................ 46
IX CONCLUSIONES ................................................................................................................................................................51
X LITERATURA CITADA.....................................................................................................................................................53
ANEXOS .....................................................................................................................................................................................58
ANEXO 1. NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-127-SSA1-1994 ..................................................................................... 59
ANEXO 2. REACTIVOS PARA ELECTROFORESIS EN GEL DE POLIACRILAMIDA ..................................................................... 60
ANEXO 3. PROTOCOLO DE LA ELECTROFORESIS. ................................................................................................................. 63
ANEXO 4. CURVA PATRN DE SERUM DE ALBUMINA BOVINA ............................................................................................ 65
ANEXO 5. ARCHIVO FOTOGRFICO ....................................................................................................................................... 66
ANEXO 6 RECONOCIMIENTOS ............................................................................................................................................ 72
INDICE DE TABLAS vi

TABLA 1. LMITES PERMISIBLES MICROBIOLGICOS PARA EL AGUA POTABLE ........................................................................... 4


TABLA 2.LMITES PERMISIBLES FSICOS Y ORGANOLPTICOS PARA EL AGUA POTABLE ........................................................... 4
TABLA 3. COAGULANTES INORGNICOS ........................................................................................................................................ 9
TABLA 4. COADYUVANTES DE LA COAGULACIN ....................................................................................................................... 10
TABLA 5. PRINCIPALES MTODOS PARA CUANTIFICACIN DE PROTENAS Y SUS RANGOS DE SENSIBILIDAD........................ 15
TABLA 6. PORCENTAJE DE LA POBLACIN CON SERVICIO DE AGUA POTABLE POR ENTIDAD FEDERATIVA, 1990, 2000,
2005 Y 2006 ................................................................................................................................................................... 23
TABLA 7. EVOLUCIN HISTRICA DE LA COBERTURA DE AGUA POTABLE EN TABASCO. ........................................................ 24
TABLA 8. COMPOSICIN DEL MARCADOR MOLECULAR ............................................................................................................. 32
TABLA 9. CARACTERSTICAS FISICOQUMICAS DEL AGUA DEL RO SAMARIA .......................................................................... 35
TABLA 10. CARACTERSTICAS FISICOQUMICAS DEL AGUA DE MAR COLECTADA EN LA PLAYA DE CHILTEPEC, PARASO,
TABASCO. .......................................................................................................................................................................... 35
TABLA 11. DOSIS PTIMAS DE LOS COAGULANTES PARA TURBIEDAD..................................................................................... 37
TABLA 12. DOSIS PTIMA PARA REMOCIN DE COLOR ............................................................................................................ 39
TABLA 13. RESULTADOS DE REMOCIN DE TURBIEDAD EN LOS DIFERENTES TRATAMIENTOS............................................. 43
TABLA 14. RESULTADOS DE REMOCIN DE COLOR EN LOS DIFERENTES TRATAMIENTOS. .................................................... 44
TABLA 15. CONTENIDO TOTAL DE PROTENAS EN LOS EXTRACTOS CRUDOS DE MORINGA .................................................... 46
TABLA 16. CONTENIDO TOTAL DE PROTENAS EN LOS EXTRACTOS CRUDOS DE MORINGA MOLIDA USANDO NITRGENO
LQUIDO. ............................................................................................................................................................................ 47
TABLA 17. DETERMINACIN DE LOS PESOS MOLECULARES ..................................................................................................... 49

INDICE DE FIGURAS
FIGURA 1. PROCESO DE POTABILIZACIN ..................................................................................................................................... 5
FIGURA 2. DESESTABILIZACIN DE LA CARGA ELCTRICA DE UN COLOIDE ............................................................................... 7
FIGURA 3. PROTENAS TRIDIMENSIONALES............................................................................................................................... 12
FIGURA 4. FRMULA GENERAL DE LOS AMINOCIDOS .............................................................................................................. 12
FIGURA 5. FORMACIN DEL ENLACE PPTIDICO ....................................................................................................................... 13
FIGURA 6. DESNATURALIZACIN DE UNA PROTENA ................................................................................................................ 14
FIGURA 7. FORMULA QUMICA DEL REACTIVO DE BIURET ....................................................................................................... 15
FIGURA 8. MOLCULA DE SDS ................................................................................................................................................... 17
FIGURA 9. EXTRACCIN SOXHLET. A) PROCESO DE EXTRACCIN, B) ACEITE EXTRADO, C) POLVO DE SEMILLAS ............... 28
FIGURA 10. EXTRACCIN DEL COAGULANTE DE LAS SEMILLAS DE MORINGA OLEIFERA. ...................................................... 29
FIGURA 11. ETAPAS GENERALES DEL PROCESO DE INVESTIGACIN ........................................................................................ 32
FIGURA 12. DIAGRAMA DE FLUJO DEL PROCESO DE OBTENCIN DEL COAGULANTE EXTRADO DE LAS SEMILLAS DE
MORINGA ........................................................................................................................................................................... 33
FIGURA 13. REMOCIN DE TURBIEDAD CON SULFATO DE ALUMINIO PARA AGUA DE DIFERENTE TURBIEDAD ................... 36
FIGURA 14. REMOCIN DE TURBIEDAD CON SOLUCIN DE MORINGA EN CLORURO DE SODIO 1N PARA AGUAS DE
DIFERENTE TURBIEDAD.................................................................................................................................................... 36
FIGURA 15. REMOCIN DE TURBIEDAD CON LA SOLUCIN DE MORINGA EN AGUA DE MAR PARA AGUAS DE DIFERENTE
TURBIEDAD ....................................................................................................................................................................... 36
FIGURA 16. REMOCIN DE TURBIEDAD CON LA SOLUCIN DE MORINGA EN AGUA DESTILADA PARA AGUAS DE DIFERENTE
TURBIEDAD ....................................................................................................................................................................... 36
FIGURA 17. PRUEBA DE JARRAS CON SULFATO DE ALUMINIO .................................................................................................. 37
vii
FIGURA 18. FLOCULACIN -COAGULACIN DE LOS EXTRACTOS DE MORINGA ......................................................................... 38
FIGURA 19. EFICIENCIA DE REMOCIN DE COLOR CON SULFATO DE ALUMINIO ..................................................................... 38
FIGURA 20. EFICIENCIA DE REMOCIN DE COLOR DE LAS SEMILLAS DE MORINGA EN SOLUCIN DE CLORURO DE SODIO 1N
........................................................................................................................................................................................... 38
FIGURA 21. EFICIENCIA DE REMOCIN DE COLOR DE LAS SEMILLAS DE MORINGA EN SOLUCIN AGUA DE MAR.................. 39
FIGURA 22. EFICIENCIA DE REMOCIN DE COLOR DE LAS SEMILLAS DE MORINGA EN SOLUCIN DE AGUA DESTILADA ...... 39
FIGURA 23. REMOCIN DE TURBIEDAD EN UN AGUA CON TURBIEDAD INICIAL DE 15 NTU ................................................. 40
FIGURA 24. REMOCIN DE TURBIEDAD EN UN AGUA CON TURBIEDAD INICIAL DE 36 NTU ................................................. 40
FIGURA 25. REMOCIN DE TURBIEDAD EN UN AGUA CON TURBIEDAD INICIAL DE 100 NTU .............................................. 40
FIGURA 26. REMOCIN DE COLOR DE LA SOLUCIN DE MORINGA EN CRUDA CON COLOR INICIAL DE 21.4 UNIDADES DE
COLOR EN LA ESCALA PLATINO COBALTO ....................................................................................................................... 41
FIGURA 27. REMOCIN DE COLOR DE LA SOLUCIN DE MORINGA EN CRUDA CON COLOR INICIAL DE 42.4 UNIDADES DE
COLOR EN LA ESCALA PLATINO COBALTO ....................................................................................................................... 41
FIGURA 28. REMOCIN DE COLOR DE LA SOLUCIN DE MORINGA EN CRUDA CON COLOR INICIAL DE 93 UNIDADES DE
COLOR EN LA ESCALA PLATINO COBALTO ....................................................................................................................... 41
FIGURA 29. VALORES PROMEDIOS ( ERROR ESTNDAR) DE LA REMOCIN DE TURBIEDAD DE LOS TRATAMIENTOS
EVALUADOS. LOS NMEROS ENTRE PARNTESIS INDICAN EL NMERO DE OBSERVACIONES POR TRATAMIENTO.
LETRAS DIFERENTES INDICAN DIFERENCIAS ENTRE LOS TRATAMIENTOS (P < 0.05) ............................................... 42
FIGURA 30. VALORES PROMEDIOS ( ERROR ESTNDAR) DE LA REMOCIN DE COLOR DE LOS TRATAMIENTOS EVALUADOS.
LOS NMEROS ENTRE PARNTESIS INDICAN EL NMERO DE OBSERVACIONES POR TRATAMIENTO. LETRAS
DIFERENTES INDICAN DIFERENCIAS ENTRE LOS TRATAMIENTOS (P < 0.05) ............................................................. 42
FIGURA 31. VALORES PROMEDIOS (ES) DE PH DE LOS TRATAMIENTOS EVALUADOS. ........................................................ 45
FIGURA 32. VALORES PROMEDIOS (ES) DE LOS SLIDOS DISUELTOS TOTALES DE LOS TRATAMIENTOS EVALUADOS. ..... 45
FIGURA 33. VALORES DE LA ALCALINIDAD DE ENTRADA Y LA OBTENIDA EN EL AGUA TRATADA EN LOS DIFERENTES
TRATAMIENTOS................................................................................................................................................................. 45
FIGURA 34. VALORES OBTENIDOS EN EL CONTENIDO DE MATERIA ORGNICA DEL AGUA CRUDA Y EN EL AGUA TRATADA EN
LOS TRATAMIENTOS A BASE DE SEMILLAS DE MORINGA. ............................................................................................... 45
FIGURA 35. ELECTROFORESIS EN GEL DE POLIACRILAMIDA AL 12% PARA LA MORINGA EN AGUA DESTILADA TRATADO
CON -MERCAPTOETANOL. .............................................................................................................................................. 48
FIGURA 36. ELECTROFORESIS EN GEL DE POLIACRILAMIDA AL 12% PARA LA MORINGA EN CLORURO DE SODIO 1N (4
PRIMEROS) Y EN AGUA DE MAR (3 LTIMOS) TRATADO CON -MERCAPTOETANOL. .................................................. 48
FIGURA 37. ELECTROFORESIS EN GEL DE POLIACRILAMIDA AL 12% PARA LA MORINGA EN EN AGUA DE MAR TRATADO CON
-MERCAPTOETANOL. ...................................................................................................................................................... 48
UNIVERSIDAD JUREZ AUTNOMA DE TABASCO
DIVISION ACADMICA DE CIENCIAS BIOLGICAS
MAESTRA EN CIENCIAS AMBIENTALES

RESUMEN 1

El tratamiento de aguas usando coagulantes naturales es una propuesta


innovadora y sustentable que pudiera disminuir el uso de agentes qumicos como
el sulfato de aluminio, del que se sabe, que en dosis elevadas, tiene efectos
nocivos en la salud. En este trabajo se compara y caracteriza la eficiencia de
remocin de turbiedad y color del coagulante natural extrado de las semillas de
Moringa oleifera y el sulfato de aluminio as como la influencia de los mismos en
las propiedades del agua tratada en muestras de agua tomadas del ro Samaria en
el municipio de Nacajuca, Tabasco.

El coagulante de las semillas de moringa se extrae en tres medios diferentes:


agua destilada, cloruro de sodio 1N y agua de mar. El comportamiento de la
eficiencia de remocin de los extractos de moringa y el sulfato de aluminio se
determina mediante pruebas de jarras usando las dosis de 0, 5, 10, 15, 20, 30 y
40 mgL-1. La dosis ptima del sulfato de aluminio se encuentra en un rango de 10
a 20 mgL-1. Esta dosis fue usada como criterio de comparacin para el anlisis
estadstico considerando las variables turbiedad, color, pH, slidos disueltos
totales (SDT), alcalinidad y materia orgnica. El resultado de este anlisis indica
que la eficiencia de remocin de turbiedad y color es similar entre los tratamientos
sulfato de aluminio, moringa en cloruro de sodio y moringa en agua de mar, pero
diferente al tratamiento de moringa en agua destilada, de acuerdo con la prueba
de comparacin de medias de Tukey con una confiabilidad del 95%.

La caracterizacin de los extractos crudos se llev a cabo determinando el


contenido de protenas, usando dos mtodos diferentes de molienda. La
determinacin de los pesos moleculares se realiza usando electroforesis en gel al
12 % de acrilamida, siguiendo el protocolo de Laemmli (1970).

Desarrollo de un polmero natural para el tratamiento de aguas superficiales


Ing. Ma. Martha Sandoval Arreola
UNIVERSIDAD JUREZ AUTNOMA DE TABASCO
DIVISION ACADMICA DE CIENCIAS BIOLGICAS
MAESTRA EN CIENCIAS AMBIENTALES

I INTRODUCCIN 2

Los coagulantes qumicos son sustancias de origen natural o artificial que se


adicionan al agua para disminuir la carga orgnica, inorgnica y biolgica,
mediante la formacin de productos insolubles que tienden a precipitar, quitndole
al agua olor, color y turbiedad. La carga orgnica es producto de la
descomposicin de plantas y animales; la inorgnica, de la lixiviacin de los
suelos, tales como arcillas, arenas, lodos, carbonatos y calcio y la biolgica, se
origina por bacterias, plancton, algas o virus. El tamao de las partculas de la
carga flucta entre 1 y 100 nm. Por lo que se clasifican como sustancias coloidales
con cargas elctricas, positivas o negativas, que las hace repelerse entre s e
impedir su aglomeracin y por lo tanto su sedimentacin por gravedad.

Los coagulantes qumicos se han utilizado desde los aos sesenta, siendo el
sulfato de aluminio ((Al2SO 4)3.18H2O), (mejor conocido como alumbre) y el cloruro
de aluminio (AlCl3) los ms utilizados en los pases en vas de desarrollo en el
proceso de potabilizacin del agua, por ser econmicos, de fcil acceso y de alta
efectividad para ayudar a la remocin de color, turbiedad y microorganismos
patgenos, tales como bacterias y virus (Trejo, 2004). En los pases desarrollados
han sido reemplazados por policlorosulfato de aluminio bsicos y policlorosulfato
de aluminio de alta basicidad cuya frmula general corresponde a
Al(OH) lClm(SO4) nMp (M representa un metal alcalino y l,m,n,p el nmero de moles
por mol de aluminio) por la mayor potencia coagulante y floculante de estas sales
y mucho menor riesgo de solubilizacin del aluminio en el agua tratada.

Adems de estas opciones, se han desarrollado diversos estudios que proponen


el empleo de coagulantes polimricos naturales obtenidos de diversas plantas,
rboles o restos de animales, considerados macromolculas, como por ejemplo: la
celulosa y sus derivados, las protenas, el almidn de yuca como un agente
coadyuvante en la remocin de color y turbiedad en mezclas con sulfato de
aluminio (Sols Silvn et al. 2012), el quitosano, (Fuentes et al.2008), biopolmero
que presenta una buena remocin de partculas suspendidas, el nopal mexicano
(Opuntia ficus indica) (Almendrez, 2004). De igual manera se prob la eficiencia
de la Cactus lefaria, (Martnez et al. 2003), reportando valores de eficiencias entre
80 y 90%.

En este grupo, uno que ha despertado gran inters a la comunidad cientfica es el


coagulante que se extrae de las semillas del rbol de Moringa oleifera. Este rbol

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pertenece a la familia moringaceae, es originario del noroeste de la India y se


caracteriza por tener un rpido crecimiento y gran adaptabilidad a distintas zonas
climticas. Su efecto clarificante ya era conocido desde pocas remotas por las 3
mujeres rurales de Sudn, que lo utilizaban para tratar las agua de alta turbiedad
del Nilo (Jahn, 1986).

Diversos estudios han demostrado que la actividad coagulante de las semillas de


moringa es comparable con la obtenida por el uso de sulfato de aluminio,
recomendndolo como un sustituto eficaz, barato y sin riesgo de salud para la
poblacin consumidora del agua tratada (Castro y Silva, 2004; Arnoldsson et al.
2008; Ridwan et al. 2011), por lo que se le pudiera considerar como un competidor
potencial de los coagulantes inorgnicos actuales en la clarificacin de aguas.

En el presente trabajo se compara la eficiencia de remocin de los extractos


crudos de moringa obtenidos mediante tres mtodos de extraccin y el sulfato de
aluminio evaluando turbiedad y color mediante pruebas de jarras, asimismo se
determina su efecto en la calidad del agua tratada.

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II MARCO TERICO
4

2.1 Definicin de agua potable.


Se denomina agua potable a aquella que cumple con las normas de calidad
promulgadas por autoridades locales e internacionales, en ellas se establecen
valores mximos y mnimos para las caractersticas microbiolgicas, fsicas,
organolpticas, qumicas y radiactivas. El agua potable debe ser inodora, incolora
e inspida.

2.2 Legislacin vigente para el tratamiento de agua superficial.


La Norma Oficial Mexicana NOM-127-SSA1-1994 (Anexo1) regula la calidad del
agua para uso y consumo humano asimismo, indica los tratamientos a los que
debe someterse para alcanzar los lmites permisibles en cuanto a sus
caractersticas microbiolgicas, fsicas, organolpticas, qumicas y radiactivas al
final de un proceso de potabilizacin.

Las caractersticas microbiolgicas se presentan en la Tabla 1.


Tabla 1. Lmites permisibles microbiolgicos para el agua potable

CARACTERSTICA LMITE PERMISIBLE

Organismos coliformes totales Ausencia o no detectables


E.coli coliformes fecales u organismos termotolerantes Ausencia o no detectables
Fuente: NOM-127SSA1-1994

Las caractersticas fsicas y organolpticas debern ajustarse a lo establecido en


la Tabla 2.

Tabla 2.Lmites permisibles fsicos y organolpticos para el agua potable

CARACTERSTICA LMITE PERMISIBLE

Color 20 unidades de color verdadero en la escala de platino-cobalto.


Olor y sabor Agradable (se aceptarn aquellos que sean tolerables para la mayora de
los consumidores, siempre que no sean resultado de condiciones
objetables desde el punto de vista biolgico o qumico).
Turbiedad 5 unidades de turbiedad nefelomtricas (NTU) o su equivalente en otro
mtodo.
Fuente: NOM-127SSA1-1994

De igual manera, el contenido de aluminio residual por normatividad tiene un lmite


mximo permisible de 0.20 mgL-1.

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2.3 Proceso de potabilizacin.


El agua procedente de diversos efluentes como aguas subterrneas o
superficiales requiere de una serie de operaciones de tratamiento que aseguren 5
una calidad aceptable desde el punto de vista sanitario. Al proceso de conversin
de agua comn en agua potable se le denomina potabilizacin.

Los procesos son muy variados, dependiendo de la calidad de agua que se va a


tratar y la procedencia de sta, si la fuente de agua es superficial, el tratamiento
ms comn consiste de las siguientes etapas:

a) Pretratamientos
b) Mezcla rpida
c) Floculacin
d) Sedimentacin
e) Filtracin
f) Desinfeccin con cloro u ozono

Cada una de estas etapas permite lograr la calidad deseada en el agua tratada y
lista para ser consumida.

En la Figura 1 se muestra el esquema de un proceso de potabilizacin tpico.

Figura 1. Proceso de potabilizacin

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2.4 Descripcin de las etapas del proceso de potabilizacin.

2.4.1 Pretratamientos 6
Los pretratamientos comprenden operaciones mecnicas, fsicas y/o qumicas que
tienen por objeto separar del agua la mayor cantidad posible de materias que por
su naturaleza o tamao puedan ocasionar problemas en el tratamiento. Los
procesos de pretratamiento en aguas potables pueden incluir:

a) Remocin de materiales flotantes, que se emplean cuando se requiera


retirar del agua material sobrenadante para que posteriormente pueda ser
tratada por los procesos convencionales, se incluyen aqu los procesos de
desbaste con rejillas o tamices
b) Remocin de materiales suspendidos, usados cuando existe en el agua un
exceso de material suspendido, en especial arcillas y algas que puedan
interferir en los siguientes procesos. Se emplean desarenadores,
presedimentadores con o sin aplicacin de qumicos, prefiltros y
microtamices.

2.4.1.1 Desbaste
La operacin de desbaste es llevada a cabo de forma casi exclusiva mediante
rejas, que retienen objetos generalmente flotantes, tales como hojas, palos, ramas
y hasta peces. Se colocan en la captacin, antes de los sistemas de bombeo as el
desbaste tienen como objetivo evitar obstrucciones en las distintas unidades de la
instalacin, separando y evacuando las materias arrastradas por el agua cruda.

2.4.1.2 Tamices y microtamices


El tamizado se emplea en numerosos campos del tratamiento de agua y puede
considerarse como una filtracin sobre soporte delgado, segn la dimensin de los
orificios de paso se tiene:

Macrotamizado: para orificios superiores a 0.3 mm. empleado para retener


residuos flotantes o semiflotantes (vegetales o animales: insectos, ramas, hierbas,
algas, etc.).

Microtamizado: para malla inferior a 100 micras utilizado para retener materias en
suspensin de muy pequeas dimensiones. Se recomiendan cuando el agua
presente algas o microorganismos en tal cantidad que sea imprescindible
removerlos antes de aplicar un tratamiento o cuando permita la potabilizacin del
agua sin necesidad de otro tratamiento distinto de la desinfeccin.

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2.4.1.3 Desarenado
En el desarenado se pretende eliminar las partculas superiores a 200 micras
Tiene por objeto extraer del agua cruda la grava, arena y partculas minerales ms 7
o menos finas para evitar que se produzcan sedimentos en canales y tubera,
protegiendo las bombas y otros equipos de la abrasin. Los desarenadores se
sitan frecuentemente en la captacin. La extraccin de la arena se puede realizar
directamente con una bomba aspirante, montada sobre un puente mvil, por
barrido con cadenas sin fin, puentes de rasquetas o emulsores de aire.

2.4.2 Mezcla rpida.


El agua captada del ro, despus del pretratamiento, llega a una estacin de
bombeo que la conduce hacia un canal parshall de mezcla rpida en donde ocurre
la precloracin y adicin del coagulante qumico como el sulfato de aluminio y con
polmeros en cantidades mnimas.

2.4.3 Coagulacin/Floculacin.

La sedimentacin de una suspensin coloidal es el resultado de dos acciones


diferentes.

La coagulacin es un proceso de desestabilizacin qumica de las partculas


coloidales que se producen al neutralizar las fuerzas que las mantienen
separadas, por medio de la adicin de los coagulantes qumicos y la aplicacin de
la energa de mezclado. La adicin de un coagulante neutraliza las cargas de los
coloides, produciendo un colapso de la nube de iones que los rodean de modo
que les permite disminuir la distancia entre ellos produciendo su aglomeracin,
como se observa en la Figura 2.

Figura 2. Desestabilizacin de la carga elctrica de un coloide

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La segunda fase es la formacin de partculas sedimentables a partir de las


partculas coloidales desestabilizadas; proceso que recibe el nombre de
floculacin. Consiste en la agitacin lenta del agua para permitir el crecimiento y 8
aglomeracin por puentes qumicos o enlaces fsicos, de los flculos recin
formados con la finalidad de aumentar el tamao y peso necesarios para
sedimentar con facilidad, aglomerados mayores capaces de sedimentar.

2.4.4 Sedimentacin.
Despus de que el agua ha concluido la etapa de floculacin es conducida a
estanques de decantacin cuya finalidad es permitir la cada, precipitacin o
decantacin de las partculas e impurezas transformadas en flculos al fondo del
estanque, la sedimentacin se lleva a cabo durante varias horas. Del fondo de los
sedimentadores se extraen los flculos sedimentados. El agua limpia se extrae por
la parte superior para ser conducida a la etapa de filtracin.

2.4.5 Filtracin.
Consiste en hacer pasar el agua a travs de medios filtrantes (por ejemplo arena,
grava, tierras diatomceas) la mayora de las partculas que an se encontraban
en suspensin quedan retenidas en esta etapa. El agua de esta etapa sale
cristalina y es conducida a la etapa final de desinfeccin.

2.4.6 Cloracin o desinfeccin.


Consiste en la inyeccin de cloro que destruye los ltimos microorganismos que
an podran estar presentes en el agua. El cloro se inyecta a travs de
dosificadores automticos en cantidades entre 0.6 y 0.8 mgL -1.

2.5 Principales productos coagulantes.


Los coagulantes se pueden clasificar en dos grupos:

a) Coagulantes inorgnicos

b) Coagulantes orgnicos, (dentro de este ltimo se encuentran los coagulantes


de origen natural).

2.5.1 Coagulantes inorgnicos:


Los principales coagulantes inorgnicos se muestran en la Tabla 3.

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Tabla 3. Coagulantes inorgnicos

NOMBRE FRMULA 9

Sulfato de aluminio hidratado Al2(SO4)318H2O


Sulfato ferroso FeSO4
Sulfato frrico Fe2(SO4)3.
Cloruro frrico FeCl3
Aluminato sdico Na2Al2O4
Sulfato cprico CuSO4.5H2O
Cloruro de aluminio AlCl3
Polmeros de alumnio PAC: Aln(OH)mCl(3n-m)H2O donde 0 <
m < 3n.

2.5.2 Coagulantes orgnicos.


Los coagulantes orgnicos, polmeros orgnicos o polielectrlitos, son grandes
molculas orgnicas sintticas o naturales formadas por la unin de grupos
qumicos repetitivos de estructura definida, que les confiere unas determinadas
propiedades.

2.5.2.1 Coagulantes orgnicos naturales.


Entre estos se encuentran los derivados del almidn, la celulosa, las protenas, la
semilla de durazno, mandioca o yuca, Moringa oleifera, exudado gomoso de
Samanea Saman, corteza de Cactus lefaria, almidn de pltano, pencas de Tuna
opuntia, Cochinellifera, kitosan, Alginato, semillas de Leucaena eucocephala,
exudado gomoso de Cedrela odorata.

2.5.2.2 Coagulantes orgnicos sintticos.


Macromolculas de cadena larga (oxido de polietileno, poliacrilamida),
polielectrolitos aninicos, polielectrolitos cationico, polielectrolitos anfolitos.

2.5.3 Coadyuvantes de la coagulacin.

La hidrlisis de los coagulantes en el agua produce una disminucin del pH al


secuestrarse gran cantidad de iones OH para la formacin de los complejos de
tipo hidrxido. Por ello, generalmente es necesario el empleo de algunas
sustancias coadyuvantes que generalmente representan un aporte de alcalinidad
que permite que el tratamiento contine. Las ms utilizadas se muestran en la
Tabla 4.

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Tabla 4. Coadyuvantes de la coagulacin

COADYUVANTE FRMULA 10
Sosa (carbonato sdico.) Na2CO3
Cal viva (xido de calcio) CaO
Cal hidratada (hidrxido de calcio) Ca(OH)2

2.6 Factores que influyen en la coagulacin.


La coagulacin es probablemente la fase ms importante del tratamiento del agua,
la optimizacin de este proceso depende de una serie de variables, siendo las
principales las siguientes:

2.6.1 pH del agua.


El pH es la variable ms importante en el proceso de coagulacin, para cada agua
existe un rango de pH ptimo para la cual la coagulacin tiene lugar rpidamente,
ello depende de la naturaleza de los iones y de la alcalinidad del agua. La
solubilidad en el agua de las molculas que conforman las partculas coloidales es
fuertemente dependiente del pH, de tal manera que muchas de stas pueden
sedimentar espontneamente al ajustar el pH al punto isoelctrico. Por otro lado,
la hidrlisis de los coagulantes es asimismo muy dependiente del pH. El rango de
pH es funcin del tipo de coagulante a ser utilizado y de la naturaleza del agua a
tratar; si la coagulacin se realiza fuera del rango de pH ptimo entonces se debe
aumentar la cantidad del coagulante; por lo tanto la dosis requerida es alta.

2.6.2 Caractersticas fsicas y qumicas del agua.


Para que la coagulacin-floculacin sea efectiva es necesario que exista
compatibilidad qumica entre el coagulante y las partculas coloidales, que de
acuerdo a sta, presentan mayor o menor afinidad al coagulante. La presencia de
otros iones, como por ejemplo calcio y magnesio, puede cambiar radicalmente
esta afinidad. Debido a que pueden modificar el pH ptimo, el tiempo requerido
para la floculacin, la cantidad de coagulantes requerido o la cantidad residual del
coagulante dentro del efluente.

2.6.3 Dosis de coagulante.


La cantidad de coagulante influye directamente en la eficiencia de la coagulacin.
Poca cantidad del coagulante, no neutraliza totalmente la carga de la partcula,
ocasionando una formacin de microflculos escasa, por lo tanto, la turbiedad
residual es elevada, por otro lado, alta cantidad de coagulante produce la inversin
de la carga de la partcula, conduce a la formacin de gran cantidad de
microflculos con tamaos muy pequeos con velocidades de sedimentacin muy
bajas, por lo que la turbiedad residual es igualmente elevada.

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El pH de operacin de los tratamientos para corregir la turbiedad y el color est


comprendido entre 6 y 8, con las dosis habituales de coagulantes (entre 10 y 100
mgL-1) las especies metlicas predominantes en los procesos que utilizan sulfato 11
de aluminio, son hidrxidos insolubles, por lo que es muy importante el control del
proceso para evitar la solubilizacin que ocurre a pH superior, lo que implicara la
presencia de aluminio residual.

2.6.4 Temperatura del agua.


La variacin de 1C en la temperatura del agua conduce a la formacin de
corrientes de densidad (variacin de la densidad del agua) de diferentes grados
que afectan a la energa cintica de las partculas en suspensin, por lo que la
coagulacin se hace ms lenta; temperaturas muy elevadas tampoco favorecen la
coagulacin. Una disminucin de la temperatura del agua en una unidad de
decantacin conlleva a un aumento de su viscosidad; esto explica las dificultades
de la sedimentacin de los flculos.

2.6.5 Fuerza de agitacin.


En el transcurso de la coagulacin floculacin se realiza la mezcla de productos
qumicos en dos etapas: En la primera etapa, la mezcla es enrgica y de corta
duracin (60 seg. mximo.) llamado mezcla rpida, tiene por objeto dispersar la
totalidad del coagulante dentro del volumen del agua a tratar,, por lo que se
requiere de agitacin violenta e inyeccin del coagulante en la zona ms
turbulenta para su dispersin uniforme y rpida y asegurar que se produzca la
reaccin qumica de neutralizacin de cargas correspondiente. En la segunda
etapa la mezcla es lenta y tiene por objeto permitir los contactos entre los flculos,
la turbiedad y el color, la mezcla debe ser lo suficiente para crear diferencias de
velocidad del agua dentro de la unidad pero no muy grande, ya que los flculos
corren el riesgo de romperse; an si el tiempo es no ms del tiempo ptimo de
floculacin. La floculacin puede ser mejorada por la adicin de un reactivo de
floculacin o ayudante de floculacin.

2.6.6 Nucleacin.
La presencia de ncleos en las aguas a tratar favorece la coagulacin.

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2.7 Protenas.

2.7.1 Definicin. 12
Son polmeros lineales de L-aminocidos unidos mediante enlaces peptdicos. Las
protenas son macromolculas muy verstiles, que desempean tanto funciones
estructurales como dinmicas. (Figura3).

Figura 3. Protenas tridimensionales


Fuente: Voet, J. y Voet. D. Bioqumica. Tercera edicin.

2.7.2 Aminocidos.
Los aminocidos son las molculas unitarias, los monmeros de las protenas .
(Figura 4). Todos los aminocidos tienen una estructura comn, que consiste en
un tomo de carbono, el carbono alfa unido a un grupo carboxilo, un grupo amino
y un tomo de Hidrgeno. La cuarta valencia del carbono alfa se completa con un
grupo atmico de estructura variable, R (Radical).

Figura 4. Frmula general de los aminocidos

En el aminocido de estructura ms sencilla, la glicina, R es un tomo de


Hidrgeno. Exceptuando la glicina, en todos los dems aminocidos el carbono
alfa es un carbono asimtrico o quiral.

En solucin acuosa, los aminocidos por lo general tienen carga elctrica, ya que
tanto el grupo amino como el carboxilo son ionizables. El grupo amino es bsico y
adquiere carga positiva cuando capta un protn. El grupo carboxilo, es cido,
puede ceder un protn y adquirir carga negativa. Segn la concentracin de
protones libres disponibles en el medio donde se encuentre (segn el pH), el

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aminocido ser un catin, un anin, o un in dipolar, si ambos grupos se ionizan


simultneamente.
13
Se dice que los aminocidos son anfolitos o anfteros, pues tienen la capacidad
de comportarse como bases o como cidos; esta capacidad los faculta para actuar
como amortiguadores del pH.

Segn la composicin de sus radicales, los aminocidos se clasifican en apolares,


polares con densidad de carga y polares con tendencia a ionizarse, es decir, con
tendencia a adquirir carga neta. Entre los ltimos estn los aminocidos bsicos y
los cidos, que son los que llevan otro grupo amino o carboxilo, respectivamente,
en su radical.

2.7.3 Enlace peptdico.


Es el enlace que establecen entre s los aminocidos. El enlace peptdico se
produce al reaccionar el grupo amino de un aminocido con el grupo carboxilo de
otro aminocido. Los aminocidos as combinados se llaman restos o residuos de
aminocidos.

Al formarse la unin peptdica (Figura 5), se desprende una molcula de agua. De


manera que la reaccin en la cual se enlazan los aminocidos es una
condensacin. La inversa, en la cual el enlace peptdico se rompe y se obtienen
aminocidos libres, es una hidrlisis.

Formacin del
enlace
peptidico por
eliminacin de
una molcula
de agua

Figura 5. Formacin del enlace pptidico

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2.7.4 Niveles estructurales de las protenas.


Los niveles estructurales de las protenas se deben a las interacciones que se dan
entre grupos como puentes de hidrgeno, interacciones hidrofbicas (todas ellas 14
uniones no covalentes) y puentes disulfuro o cuando la protena se forma por dos
o ms cadenas polipeptdicas unidas entre s por uniones no covalentes entre los
radicales. La estructura primaria de las protenas corresponde al acomodo de la
cadena peptdica. La estructura secundaria de las protenas se debe a la
formacin de puentes de hidrgeno entre restos de amino y carboxilo de residuos
de aminocidos no adyacentes de la cadena. La estructura terciaria ocurre cuando
se atraen distintas regiones de la estructura secundaria y la estructura cuaternaria
se observa en protenas que constan de ms de una cadena polipeptdica.

2.7.5 Desnaturalizacin.
La desnaturalizacin es la destruccin de la conformacin nativa de una protena,
sin que se vea afectada su estructura primaria. La protena conserva la cadena,
pero no su estructura espacial. Cuando una protena se desnaturaliza, la funcin
biolgica se pierde, ya que sta se halla estrechamente ligada a la forma (Figura
6).

Dado que la conformacin nativa de una protena est sostenida por uniones
relativamente dbiles, muchos agentes son capaces de afectarla, por ejemplo:
calor, radiaciones, congelamientos repetidos, grandes presiones, cidos o bases
muy concentrados que provocan marcados cambios de pH.

Figura 6. Desnaturalizacin de una protena

2.7.6 Mtodos para cuantificacin de protenas.


Para la cuantificacin de protenas en una muestra existen diferentes mtodos,
Estos mtodos se basan en: a) la propiedad intrnseca de las protenas para
absorber luz en la regin ultravioleta, b) para la formacin de derivados qumicos,
o c) la capacidad que tienen las protenas de unirse a ciertos colorantes. Los ms
usados se muestran en la Tabla 5, as como sus rangos de sensibilidad.

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Tabla 5. Principales mtodos para cuantificacin de protenas y sus rangos de sensibilidad.

LONGITUD DE ONDA, RANGO DE


MTODO 15
nm SENSIBILIDAD (g)
280 100-3000
205 3-100
280 a 260 100-3000
Absorcin 235 a 280 25-700
224 a 236 5-180
215 a 225 2-45

Biuret 1000-10000
500 25-100
Lowry 660 2-30
Derivado colorimtrico
750 1-2
Bradford 465-595 1-15
BCA 562 0.5-10.

2.7.6.1 Mtodo de Biuret.


Se usa normalmente para determinar la concentracin de protenas de una
muestra usando espectroscopia ultravioleta-visible a una longitud de onda de 560
nm (para detectar el ion Cu2+). Mediante la formacin de un complejo coloreado
entre el Cu2+ y los grupos NH de los enlaces peptdicos en medio bsico (Figura
7).

Figura 7. Formula qumica del reactivo de Biuret

2.7.6.2 Mtodo de Bradford.


Se basa en la unin de un colorante, Comassie Blue G-250 a las protenas. El
colorante, en solucin cida, existe en dos formas una azul y otra naranja. Las
protenas se unen a la forma azul para formar un complejo protena-colorante con
un coeficiente de extincin mayor que el colorante libre.

Este compuesto interacciona con aminocidos bsicos (especialmente arginina) y


aromticos. Esta unin del colorante con las protenas provoca un cambio en el
mximo de absorcin del colorante desde 465 a 595 nm. Por lo tanto, este mtodo
se basa en la propiedad del Azul Brillante de Coomasie G-250 de presentarse en
dos formas con colores diferentes, rojo y azul. La forma roja se convierte en azul
cuando el colorante se une a la protena

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2.7.6.3 Mtodo de BCA.


El cido bicinconnico, sal sdica, es un compuesto capaz de formar un complejo 16
prpura intenso con iones Cu1+ en medio alcalino. Los iones Cu+ producidos, se
unen a dos molculas de BCA y al hacerlo, les cambian la estructura electrnica
de tal manera que ahora absorbe luz a 562 nm y aparece la coloracin prpura.
Este reactivo forma la base de un mtodo analtico capaz de monitorizar el in
cuproso producido en una reaccin entre las protenas con Cu 2+ en medio alcalino
(reaccin de Biuret). La estabilidad del reactivo y el cromforo proporciona un
mtodo para la cuantificacin de protenas que es sencillo, rpido, muy sensible y
que muestra una gran tolerancia a compuestos que afectan a otros mtodos.

2.8 Electroforesis de protenas en gel de poliacrilamida PAGE-SDS.


La electroforesis en geles de poliacrilamida (PAGE) es uno de los mtodos ms
utilizados para la purificacin, anlisis y caracterizacin de protenas. La
electroforesis de protenas en geles de poliacrilamida puede llevarse a cabo en
condiciones nativas (ND-PAGE) o desnaturalizantes (PAGE-SDS). Las diferencias
entre uno y otro tipo radican en los componentes de los geles y del tampn de
electroforesis, as como el tratamiento de las muestras. En el primer caso, las
protenas mantienen su estructura tridimensional y las diferentes cadenas
polipeptdicas pueden permanecer unidas, separndose no slo en funcin de su
carga elctrica, sino tambin segn su tamao y forma. Por el contrario, cuando
las protenas se solubilizan en presencia del detergente aninico SDS ste se une
a las protenas, rompiendo interacciones hidrofbicas y desnaturalizndolas.

Actualmente existen dos sistemas de electroforesis de protenas en geles de


poliacrilamida en base a los tampones empleados:

a) El sistema contino de Weber y Osborn. En este sistema existe un nico gel


separador que emplea el mismo tampn en los tanques y en el gel.
b) El sistema discontinuo desnaturalizante SDS o de Laemmli que es el ms
ampliamente utilizado. Este mtodo es excelente para identificar y
monitorear las protenas durante un proceso de purificacin, tambin se
emplea para la determinacin del peso molecular de las subunidades de
protenas.

Este protocolo se basa en la presencia de SDS (dodecil sulfato de sodio) y -


mercaptoetanol para desnaturalizar las protenas, rompiendo las interacciones no
covalentes que determinan la estructura terciaria y cuaternaria de las mismas. Las
protenas se disocian en subunidades y se unen con cargas negativas (SDS). Esta
unin relativamente uniforme permite a las protenas migrar en un campo elctrico

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y separarse segn su masa/tamao, explotando diferencias de movilidad


provocadas por el campo elctrico a las que se les somete. La Figura 8 muestra la
estructura de la molcula de SDS. 17

Figura 8. Molcula de SDS

El anin de SDS se une a las protenas en una proporcin aproximada de 1


molcula de SDS por cada 2 residuos de aminocido formando una estructura en
forma de varilla rgida con un dimetro de unos 18 . Las cadenas alifticas del
SDS se orientan hacia el interior interaccionando con los grupos hidrofbicos de la
protena, mientras que los grupos sulfato cargados del detergente se orientan
hacia el disolvente.

El sistema de Laemmli utiliza tampones de diferente pH y composicin para


generar un gradiente de voltaje y un pH discontinuo entre el gel de apilamiento y el
gel de resolucin. Un gel de apilamiento de acrilamida al 4% (pH 6.8) se vierte en
la parte superior de una solucin de gel de resolucin de acrilamida al 12% (pH
8.8). El gel de apilamiento (con un tamao de poro grande) sirve para concentrar
todas las protenas en la parte superior del gel de resolucin. Despus de entrar
en el gel de resolucin (que tiene un tamao de poro ms pequeo) las protenas
se separan segn su tamao molecular relativo. Para la visualizacin de las
protenas se utilizan diferentes mtodos de tincin, siendo el ms comn el azul de
coomassie.

2.8.1 Determinacin del peso molecular.


Para determinar el peso molecular de protenas se compara el RF de la protena
problema con el de protenas de referencia cuyo peso molecular se conoce. El RF
es una medida convencional de la movilidad de la protena relativa al frente de
migracin y se define como la distancia desde el inicio del gel separador hasta el
centro de cada banda dividida entre la distancia a la que ha migrado el in lder.
El frente del gel se determina por la posicin de un compuesto de referencia de
movilidad mxima, como puede ser el colorante azul de bromofenol.

Distancia que migra al frente del gel


RF Distancia que migra una determinada protena

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III ANTECEDENTES 18

Capacidad coagulante de los extractos crudos de las semillas de Moringa


oleifera.

Las propiedades coagulantes de las semillas de Moringa oleifera han sido


ampliamente estudiadas en las dos ltimas dcadas, desarrollndose en
diferentes aspectos como eficiencia, calidad del agua tratada, los parmetros con
que se llevan a cabo los estudios o los mecanismos que se siguen en la
coagulacin; todo ello para determinar si este coagulante puede ser una posible
alternativa en el tratamiento de agua potable en reas rurales.

3.1 Efecto de los parmetros de operacin del ensayo.


La mayora de los estudios se han enfocado en la realizacin de ensayos de
floculacin y coagulacin para determinar la eficiencia de remocin de turbiedad y
color en diferentes tipos de aguas crudas. Se analiza la calidad del agua tratada,
as como la influencia que ejercen los parmetros adoptados en los ensayos.
Muyibi y Evison (1995), estudian la respuesta del ensayo de coagulacin
floculacin en funcin de parmetros combinados de agitacin, tiempo del ensayo
y la turbiedad inicial. La eficiencia del proceso mejora cuando se tienen aguas de
alta turbiedad inicial. Gmez (2010), realiza un estudio completo, para comprobar
el efecto de las variables dosis, turbiedad y diferentes soluciones con agua y con
soluciones de cloruro de sodio, con semillas de moringa molida con y sin cscara
sobre la eficiencia de coagulacin, concluyen que el uso de soluciones de NaCl
potencializa el efecto de coagulacin.

3.2 Eficiencia de coagulacin.


Mendoza et al. (2000), encuentra una buena eficiencia de remocin de turbiedad
por debajo de los lmites mximos permitidos (<5 NTU) y una disminucin de color
de 30 a 5-10 UC, evalan los parmetros del agua tratada de pH y la alcalinidad y
reportan que no hay cambios significativos. Se ha encontrado que la eficiencia de
coagulacin con el uso de semillas de moringa en agua destilada, es de
aproximadamente 78%, sin embargo, Okuda et al. (2001), mejor el mtodo de
extraccin empleando soluciones de NaCl, KCl, KNO3 y NaNO3, con lo cual la
eficiencia se incrementa hasta un 95%, lo que lo hace comparable con la eficiencia
lograda con el sulfato de aluminio. Concluye que no hay diferencia en la eficiencia
de coagulacin con el uso de las diferentes sales y proponen que la mejora en la
eficiencia de la coagulacin se debe aparentemente al mecanismo de salado de

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las protenas en el que la sal aumenta la disociacin protena-protena o protena-


polisacrido, que lleva al aumento de solubilidad de la protena a medida que se
incrementa la fuerza inica de la sal. 19

3.3 Estudios de comparacin de eficiencia de coagulacin.


Ledo et al. (2009), compararon la eficiencia de coagulacin de la moringa con el
sulfato de aluminio en el tratamiento de aguas de baja turbiedad, variando las
dosis y controlando los valores de pH, encontrando curvas de comportamiento de
moringa comparada con el sulfato de aluminio. En todas las dosis encontr que la
eficiencia de los extractos de moringa son un poco inferiores (del 74 al 88%) a las
del sulfato de aluminio (del 80 al 85%). Arnoldson et al. (2008); realizaron sus
estudios utilizando diferentes mtodos de preparacin del coagulante (moringa en
agua destilada y moringa en agua de la llave) concluyendo que el uso de agua de
la llave como disolvente proporciona resultados ms eficientes y baratos. De igual
manera, Yarahmadi et al. (2009), realizaron un estudio comparativo acerca de la
eficiencia de la Moringa oleifera y el policloruro de aluminio para aguas de baja,
media y alta turbiedad, reportando que existe una mayor eficiencia en aguas de
alta turbiedad (99.4%) cuando se emplea Moringa oleifera como coagulante y la
eficiencia es muy similar a la obtenida con el policloruro, mientras que la eficiencia
de la moringa disminuye en las aguas de baja turbiedad hasta un 55%, lo que no
ocurre con el policloruro (eficiencia de 89%).

3.4 Calidad del agua tratada.


Snchez (2004), evalu la calidad del agua tratada con Moringa oleifera y reporta
un incremento de materia orgnica por dos mtodos: oxidabilidad al permanganato
y determinacin de carbn orgnico total, ste ltimo, disminuye con el tiempo,
mientras que el ion nitrato y el ion amonio se incrementan, pero se mantiene
constante en el tiempo. Concluye que el pH, la alcalinidad y conductividad del
agua tratada no son influidas por el uso de moringa como coagulante lo que
proporciona una ventaja sobre los coagulantes inorgnicos. De igual manera,
Ndabigengesere y Narasiah (1998), verificaron los parmetros fisicoqumicos de
pH y conductividad con el empleo de Moringa oleifera encontrando que no hay
cambios significativos en el agua tratada, salvo en la carga orgnica por lo que se
requiere un tratamiento posterior.

3.5 Determinacin de los mecanismos seguidos con el uso de semillas de


moringa como coagulante.
En estudios muy recientes, se ha estudiado cmo se llevan a cabo los
mecanismos de coagulacin seguidos cuando se usan semillas de Moringa
oleifera en la coagulacin de aguas. Ndabigengesere et al. (1995), investigaron la
eficiencia y las propiedades de Moringa oleifera como coagulante natural y su

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mecanismo de coagulacin en el agua turbia. Sugiere que el mecanismo


predominante de coagulacin es el de adsorcin y neutralizacin de cargas.
Tambin Okuda et al. (2001b), investigaron el mecanismo de coagulacin- 20
floculacin en un extracto purificado de Moringa oleifera en solucin salina,
probando diferentes tipos de iones monovalentes y divalentes, ellos sugieren que
la coagulacin se lleva a cabo mediante una estructura tipo red que atrapa las
partculas coloidales y las precipita. De igual manera Ridwan et al. (2011),
describieron el mecanismo de coagulacin cuando se aplican las semillas de
Moringa oleifera en solucin de Cloruro de sodio a aguas turbias y duras,
encontrando que este tipo de aguas se ajusta a los modelos de ads orcin de
Langmuir y Freeunlich. Por otro lado, Ledo et al. (2009), midieron los potenciales Z
para comprender los mecanismos que se llevan a cabo en la coagulacin cuando
se usan soluciones de semillas de moringa, en agua destilada y propusieron que
los mecanismos que se siguen son de neutralizacin de cargas, adsorcin y
formacin de puentes. Muyibi y Evison (1994), estudiaron la eficiencia de
coagulacin de la Moringa oleifera en aguas duras encontrando que el mecanismo
que se sigue en este tipo de aguas corresponde al de adsorcin, las dosis de
remocin son mucho ms altas que para aguas turbias, alrededor de 650 -750
mgL-1.

3.6 Estudios de efecto bacteriolgico del coagulante de moringa.


Jahn (1986), estudi el efecto de las semillas de moringa en la eliminacin de
bacterias debido a su accin como coagulante, encontrando que una parte de
estas se retira junto con la materia coloidal removida, lo que le da una ventaja
adicional sobre los coagulantes inorgnicos. De igual manera se determin el
efecto de la extraccin del aceite en la accin coagulante de las semillas
encontrando que no afecta a su capacidad de coagulacin. Reporta que los
efectos sobre las bacterias patgenas no han sido estudiados.

La aplicacin a nivel industrial de la Moringa oleifera como coagulante solo ha sido


estudiada a nivel piloto por Sutherland (1994), mediante un sistema de mezcla
rpida y filtracin en cama de arena por gravedad, obteniendo eliminacin de
turbiedad menor a 5 NTU, De igual manera, Muyibi y Alfugara (2003b) y
Arnoldsson et al. (2008), coinciden con los resultados de Sutherland.

3.7 Caracterizacin del coagulante de Moringa oleifera.


Una de las principales desventajas que se han encontrado a su uso es el
incremento de la materia orgnica debido a que en los extractos crudos se
encuentran otro tipo de componentes que no presentan actividad coagulante tales
como carbohidratos, muy comunes en este tipo de semillas y altamente solubles
en agua. La consecuencia de esto, es la fcil degradacin del agua tratada que

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induce a su consumo inmediato. Por esta razn su utilizacin en gran escala no


ha sido posible.
21
El primer paso para promover el uso a gran escala de las semillas de moringa
como coagulante, es la aplicacin de un mtodo adecuado de purificacin de los
extractos crudos de moringa, que permita eliminar los componentes inactivos.
Como se sabe, para obtener los extractos crudos se han utilizado diferentes
disolventes como: agua destilada, soluciones con diferentes sales como NaCl,
KCl, KNO3 y NaNO 3 y otros como la propuesta de esta investigacin de utilizar
agua de mar. De igual manera adems de la purificacin, se requiere conocer la
naturaleza y caractersticas del componente activo de las soluciones .

En este sentido se han realizado varias investigaciones considerando la


naturaleza del solvente utilizado. Varios estudios han descrito al principal
componente activo en los extractos en que se utiliza agua destilada como una
protena, (Ghebremichael et al. 2005), aunque varan en la determinacin de sus
caractersticas, Gassenschmidt et al. (1994), determinaron un peso molecular de
6.5 kDa y un P.I. mayor de 9, Muyibi et al. (1995), identificaron el componente
activo como un polipptido que acta como un polielectrlito catinico.
Ndabigengesere et al. (1995), la han descrito como una protena dimrica con
masa molecular entre 12 y 14 kDa y punto isoelctrico entre 10 y 11 que
desestabiliza las partculas contenidas en el agua y flocula los coloides a travs de
un proceso de neutralizacin y adsorcin seguido por sedimentacin. (Okuda et al.
2001 a y b), comprobaron que el componente activo se encuentra en la fraccin de
protenas de pesos moleculares entre 12 a 14 kDa para la disolucin de agua
destilada con moringa, mientras que cuando el ingrediente activo se extrae con
solucin salina el peso molecular de ste fue de 3 kDa, lo que indica que no se
trata de el mismo ingrediente activo. Garca et al. (2010), en un estudio ms
reciente identificaron una protena de peso molecular de 17-26 kDa. De una
protena compuesta de 3 subunidades de peso molecular aproximado de 10 kDa,
que sugiere que el componente activo del extracto crudo puede estar formado por
un trmero con subunidades con enlaces S-S. El punto isoelctrico determinado
estuvo entre 10 y 11. Scaramal et al. (2010), encontraron valores de peso
molecular de 30 kDa aproximadamente para extractos en agua destilada.

Coelho et al. (2009), afirmaron que la protena que se encuentra en Moringa


oleifera es la lectina responsable de la coagulacin/floculacin del agua. Los
anlisis bioqumicos indican un contenido de 40% aproximado de protenas con un
alto contenido en glutamina, arginina y prolina y un total de 60 residuos,
(Gassenschmidt et al.1994).

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Campos et al. (2003), determinaron el perfil de aminocidos compuesto de 17


aminocidos: (cido asprtico (Asp), acido glutmico (Glu), serina (Ser), glicina
(Gli,) histidina (His), arginina (Arg), treonina (Tre), alanina (Ala), prolina (Pro), 22
tirosina (Tir), valina (Val), metionina (Met), cistina (Cis), isoleucina (Ile), leucina
(Leu), fenilalanina (Fen) y lisina (Lis)). El componente mayoritario fue el cido
glutmico (1.68%p/p), los aminocidos con carga negativa (Asp y Glu)
correspondieron al 2.01p/p% mientras que los aminocidos polares con carga
positiva (His, Arg y Lis) se presentaron en un porcentaje del 1.14%.
Responsabilizan a los componentes hidrofilicos de la actividad coagulante por
mecanismos de adsorcin y puentes qumicos.

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IV JUSTIFICACIN
23

Desde el punto de vista ambiental, el agua constituye la clave para un desarrollo


sostenible, su participacin en los diferentes procesos de los ecosistemas
constituye la clave de la vida.

En lo social, se sabe que una de cada tres personas vive en un pas con escasez
de agua entre moderada y alta, y es posible que para 2030 la escasez afecte a
casi la mitad de la poblacin mundial, ya que la demanda podra superar en un
40% a la oferta (CONAGUA; 2006), por ello, la disponibilidad de agua potable para
consumo humano, sobre todo en las zonas marginadas, es una prioridad que se
encuentra plasmada en la UNESCO, declarando al ao 2013 el ao Internacional
de la Cooperacin en la Esfera del Agua, plasmado dentro de los objetivos de
Desarrollo del milenio en la meta 7C del objetivo 7:que dice reducir para 2015 a
la mitad, la proporcin de personas sin acceso sostenible al agua potable y a
servicios bsicos de saneamiento.

En Mxico, al 2010, el porcentaje de viviendas con disponibilidad de agua fue de


casi 89% que corresponde a 74 millones de personas, el resto se abastecan de
agua entubada fuera de la vivienda pero dentro del terreno que habitan, de pozos,
ros o arroyos, de la llave pblica, o de otra vivienda. (INEGI, 2010)
Tabla 6. Porcentaje de la poblacin con servicio de agua potable por entidad federativa,
1990, 2000, 2005 y 2006

Entidad federativa 1990 2000 2005 2006


Estados Unidos Mexicanos 77.7 88.5 89.5 89.6
Aguascalientes 94.8 98.4 97.9 98
Baja California 77.6 93.5 95.3 93.3
Baja California Sur 87.2 94.5 87.6 86.7
Campeche 68.6 84.5 89.2 89.5
Coahuila de Zaragoza 91.1 99.2 97.3 97.9
Colima 91.3 97.6 98.3 97.9
Chiapas 56.8 75.5 74.3 74.5
Chihuahua 86 94.5 92.9 93.9
Distrito Federal 95.3 97.7 97.6 97.8
Durango 84.2 93.4 91.6 93
Guanajuato 81.4 93.4 93.5 93.5
Guerrero 54.3 70.3 68.6 70.6
Hidalgo 68.7 84.5 88 88.9
Jalisco 84.6 92.1 93.4 93
Mxico 84.2 92.4 93.3 92.4
Michoacn de Ocampo 77 90.6 89.8 90.7
Morelos 87.5 91.7 91.9 91.6
Nayarit 81.6 91.4 92 93.1
Nuevo Len 92.2 97 95.8 95.5

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Oaxaca 56.8 71.9 75.2 76.7


Puebla 69.8 83.1 85.5 85.3
Quertaro 82 94.5 93.6 93.1
Quintana Roo 86.3 94.8 94.4 92.8 24
San Luis Potos 65.1 78.8 83.5 84.9
Sinaloa 78.7 93.3 93.6 94.4
Sonora 89.8 97.6 95.4 95.3
Tabasco 55.1 72.3 76.6 76.9
Tamaulipas 79.9 94.7 95.1 96.4
Tlaxcala 90.6 96 97.9 98.2
Veracruz 57.1 70.2 76.5 76.8
Yucatn 69.7 94 96.3 96
Zacatecas 74.5 90.9 93.3 94.1
FUENTE: INEGI. Porcentaje de la poblacin con servicio de agua potable por entidad federativa,
1990 a 2006.

En el estado de Tabasco, la disponibilidad total de agua en la regin es de 165.5


km (miles de millones de m), de los cuales, el 90% proviene de fuentes
superficiales y el 10% restante de fuentes subterrneas, como se puede observar
en la Tabla 7, el porcentaje de cobertura ha ido en aumento.
Tabla 7. Evolucin histrica de la cobertura de agua potable en Tabasco.

1990 1995 2000 2005


55.4 44.6 65.1 34.9 72.8 27.2 76.6 23.4
Fuente: INEGI (1990-2006)

Actualmente existen 35 plantas potabilizadoras en operacin en el Estado de


Tabasco. En el municipio de Centro se cuenta con 15 plantas potabilizadoras.

De igual manera, desde el punto de vista de la salud, se sabe que los coagulantes
orgnicos naturales, no tienen ninguna repercusin en la salud del ser humano lo
que constituye una ventaja frente a los coagulantes inorgnicos debido a los altos
consumos de sulfato de aluminio en la alimentacin y sus efectos nocivos han sido
ampliamente estudiados y relacionados con enfermedades de tipo
neurodegenerativo como la atrofia pulmonar, el Alzheimer, as como su uso en
pacientes con enfermedades renales (Trejo, 2004; Suay y Ballester, 2002).

En lo econmico, el uso del coagulante extrado del rbol de moringa, implica un


desarrollo del campo mexicano. Actualmente, el rbol de Moringa ya se siembra
en toda la costa del Pacfico mexicano, desde Sonora y Sinaloa hasta el Istmo de
Tehuantepec, con el fin de explotar el alto contenido de aceite de las semillas,
para la produccin de biocombustibles, por lo que la aplicacin para la
potabilizacin del agua del residuo que se produce de este proceso, generara
ingresos adicionales para el campo mexicano.

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En el aspecto tcnico, se presentan varias ventajas:

a) Actualmente, la clarificacin del agua en los procesos de potabilizacin se 25


lleva a cabo empleando coagulantes inorgnicos como el sulfato de
aluminio, quienes presentan el inconveniente, que de no controlarse,
podran dejar aluminio residual en el agua tratada, estando en funcin de
factores como el pH, la temperatura y la concentracin de las sustancias en
el agua inicial antes del tratamiento, (Gardner y Gunn, 1995).

b) Se sabe que el uso de coagulantes de origen natural produce una menor


cantidad de lodos comparados con los producidos con el sulfato de
aluminio, por lo que constituye una ventaja con los mtodos tradicionales.

c) El uso de las semillas en el tratamiento de aguas, constituye un rea de


oportunidad para el desarrollo de tecnologas limpias, enfocadas a la
reingeniera para realizar las adaptaciones necesarias para desarrollar
procesos menos contaminantes contribuyendo con ello al desarrollo de una
poblacin con niveles de salud ms altos.

El presente trabajo, desde el punto de vista de las Ciencias Ambientales, busca


una alternativa en la clarificacin de aguas mediante la posibilidad el uso de un
polmero natural en reas donde el acceso al tratamiento convencional no es
posible por diversas cuestiones como distancia, recursos y otros.

Al vislumbrar el futuro es obvio que el inters de lo sustentable, de la eficiencia


econmica, con un enfoque social es fundamental. Se debe considerar al agua
superficial y residual como una materia prima, como un recurso, que es
aprovechable, por lo tanto es fundamental su tratamiento. El agua limpia es un
bien escaso, por lo que tratarla y conservarla, cuando se contamina es necesario.

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V OBJETIVOS 26

5.1 Objetivo General.

Evaluar la eficiencia de remocin de las soluciones coagulantes a base de


semillas de Moringa oleifera en la remocin de turbiedad y color presentes en
agua superficial.

5.2 Objetivos particulares.

5.2.1 Obtener la dosis ptima para las soluciones de moringa y el sulfato


de aluminio.

5.2.2 Determinar la capacidad de remocin de turbiedad y color de las


soluciones coagulantes y compararla con la eficiencia de remocin del
sulfato de aluminio grado reactivo.

5.2.3 Caracterizar los extractos crudos obtenidos en cada uno de los


mtodos de extraccin.

VI. HIPTESIS

La capacidad de remocin de turbiedad y color de las soluciones coagulantes con


Moringa oleifera son similares a la del sulfato de aluminio grado reactivo.

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VII MATERIALES Y MTODOS


27

7.1 Caracterizacin del agua cruda.


Las muestras de agua cruda se tomaron del ro Samaria que abastece a la planta
potabilizadora El Manguito del municipio de Nacajuca, Tabasco. La planta surte de
agua potable a las poblaciones de Nacajuca, Jalpa de Mndez y una zona de
Villahermosa. El ro Samaria corresponde a un brazo del ro Grijalva, desemboca
al norte del Golfo de Mxico en la barra de Chiltepec, Paraso, Tabasco. La
composicin de su suelo es muy semejante a la del ro Grijalva, principalmente
feozem, fluvisol y gleysol (INEGI, 2001), se caracteriza por presentar valores bajos
de turbiedad en temporada de estiaje y valores medios en periodos de lluvia.

Para el desarrollo de las pruebas se recolectaron 100 L de agua en el mes de


mayo de 2009, la temperatura media a la hora de toma de la muestra fue de 27C
y el pH fue de 7.81. Estos valores fueron determinados en el sitio, con un medidor
verstil marca HannaMR con precisin 0.1 pH. Las muestras se trasladaron al
laboratorio de la DACBiol donde se midi la turbiedad, empleando un turbidmetro
marca LaMotteMR con precisin 0.01 NTU-turbiedad el mtodo utilizado fue el de
la EPA 180.1 (EPA 1983, NOM-041-SSA1 1993, ISO 1990). El color se determin
con el mismo equipo, con una precisin de 0.1 UC-color; por el mtodo estndar
2120B. Los slidos disueltos totales se midieron con un equipo multiparmetro
marca HannaMRHI-9828.

La alcalinidad fue medida con pruebas de titulacin de acuerdo al mtodo


Estndar NMX-AA-036-SCFI-2001. La materia orgnica fue determinada por
oxidacin con permanganato de potasio (KMnO4), por ser el recomendado para
cantidades bajas de materia orgnica siguiendo la metodologa descrita en la
norma UNE-77004-2002.

7.2 Determinacin de dosis ptima de las soluciones obtenidas de las


semillas de Moringa oleifera.
Para conocer el comportamiento del coagulante extrado de las semillas de
Moringa oleifera se utiliz el equipo de prueba de jarras marca Phipps BirdMR PB-
700, para las dosis de coagulante de 0, 5, 10, 15, 20 30 y 40 mgL-1 usando los
extractos crudos de moringa para aguas de turbiedad inicial de 15, 36 y 100 NTU y
se procedi al mezclado usando la propuesta de Okuda et al. (2001), que consiste
de una mezcla rpida a 150 rpm durante 2 min seguida de una mezcla lenta a 30
rpm por 30 min y se dej sedimentar 30 min se midieron los valores finales de
turbiedad y color. Para las pruebas se realizaron 4 repeticiones para fines
estadsticos.

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Para esta determinacin se usaron los siguientes materiales y tcnicas.

7.2.1 Semilla de Moringa oleifera. 28


La semilla utilizada se adquiri en la empresa Pio Renova, ubicada en la Ciudad
de Mxico. Presentan una forma redonda, de color castao y con tres alas
blanquecinas, al quitar la cscara se encuentra un endospermo blanquecino
oleaginoso rico en protenas, vitaminas y minerales con una composicin
aproximada de 4% de humedad, 38.4% de protena cruda 34.7% de aceite, 3.5%
de fibra y 3.2% cenizas (Jahn et al.1986).

7.2.2 Caracterizacin del Agua de mar.


El agua de mar utilizada como disolvente en el tercer mtodo se tom de las
playas de Chiltepec, Paraso, Tabasco. La temperatura fue tomada en el sitio con
un medidor verstil marca HannaMR con precisin 0.1 pH. Los slidos disueltos
totales se midieron con un equipo multiparmetro marca HannaMRHI-9828

7.2.3 Extraccin del aceite de moringa.


La obtencin del extracto a partir de semillas de Moringa oleifera se realiz
siguiendo la recomendacin de Okuda et al. (2001), de acuerdo al siguiente
procedimiento: las semillas se secaron durante 24 h. en una estufa FelisaMR; FE-
291. Se pelaron y pulverizaron en un triturador manual Robot cuopeMR de acero
inoxidable. El polvo obtenido se coloc en los filtros del extractor SoxhletMR. Se
extrajo el aceite utilizando 300 mL de ciclohexano como disolvente por un tiempo
aproximado de 3 h. Terminada la extraccin, el residuo slido contenido en el filtro
se sec a 104C durante 24 h. para eliminar cualquier rastro de disolvente. El
residuo seco, se moli en un mortero de gata para darle uniformidad al grano y
se guardaron a temperatura ambiente en frascos hermticamente sellados de
vidrio para su posterior utilizacin. En la Figura 9, se observan a) el equipo de
extraccin, b) el aceite producto de la extraccin (mezcla de cido oleico, 74.71%,
Palmtico 6.86%, Araqudico 3.16% y behenico 5.20%), (Barbosa et al., 2010) y c)
el polvo de semillas de moringa despus de la extraccin.

a b c

Figura 9. Extraccin Soxhlet. a) Proceso de extraccin, b) aceite extrado, c) polvo de


semillas

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7.2.4 Preparacin de los extractos crudos a partir de semillas de moringa.


a) Preparacin de solucin madre con agua destilada:
Para extraer el coagulante, se disuelven 10 g. del polvo seco en 1 L de 29
agua destilada. Se agita durante 10 min a 60 rpm. Se filtra a vacio utilizando
papel filtro Whatman 40. Posteriormente en filtros Millex-HV 0.45 m. Esta
solucin se congela a 4C para evitar su envejecimiento, hasta el
momento de su uso. Esta es la solucin madre del extracto de moringa en
agua destilada con una concentracin de 10,000 mgL-1 (Figura 10).
b) Preparacin de solucin madre con cloruro de sodio:
Se disuelven 10 g. del polvo seco en un 1 L de solucin 1 N de cloruro de
sodio (40 g. de NaCl grado reactivo en 1 L de agua). Para extraer el
coagulante se repite el procedimiento anterior.
c) Preparacin de solucin madre con agua de mar:
Se disuelven 10 g. del polvo seco en un 1 L de agua de mar filtrada dos
veces previamente en manta de cielo y papel filtro Whatman 40 (para retirar
slidos). Para extraer el coagulante se repite el procedimiento anterior.

Figura 10. Extraccin del coagulante de las semillas de Moringa oleifera.

7.2.5 Preparacin de la solucin de Sulfato de aluminio.


La preparacin de la solucin madre de sulfato de aluminio se realiz con 2 g. de
sulfato de aluminio grado reactivo disuelto en un litro de agua destilada. Con una
concentracin de 2,000 mgL-1.

7.2.6 Preparacin de las aguas sintticas.


Con la finalidad de conservar gran parte de las caractersticas biolgicas, orgnica
e inorgnica del agua superficial, se utiliz el agua del ro Samaria como base
para la preparacin de las otras dos aguas sintticas, la primera por dilucin,
agregando agua destilada hasta llegar a la turbiedad de 15 NTU y la segunda se le
agreg suelo vertisol para alcanzar una turbiedad de 100 NTU.

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7.3 Obtencin de la dosis ptima de coagulacin con el Sulfato de aluminio.


Se agreg un litro de agua a cada uno de los 6 vasos del equipo de prueba de
jarras marca Phipps birdMR BP-700. A cada vaso, se le agreg la solucin de 30
sulfato de aluminio (Sulfato de aluminio) en concentraciones de 0, 5, 10, 15, 20,
25, 30, y 40 mgL-1. y se procedi al mezclado usando la propuesta de Okuda et al.
(2001), Se midieron los valores finales de turbiedad, color, empleando 4
repeticiones para fines estadsticos.

La dosis ptima seleccionada para el sulfato de aluminio fue aquella que


proporcion los mejores resultados de remocin de turbiedad y color cumpliend o
con la normatividad.

7.4 Comparacin de la eficiencia de coagulacin de los coagulantes


obtenidos.
Se utiliz la dosis ptima del Sulfato de aluminio como referencia para la
comparacin estadstica. Las mezclas que se utilizaron fueron Moringa en agua
destilada (MOAD), Moringa en Cloruro de sodio (MONA) y Moringa en agua de
mar (MOAM). Los tiempos de coagulacin, floculacin y sedimentacin de la
prueba de jarras fueron los propuestos por Okuda et al. (2001).

Para la medicin de la turbiedad y color tanto del agua cruda como el agua tratada
se emple un turbidmetro marca LaMotteMR con precisin 0.01 NTU-turbiedad
(mtodo EPA 180.1, TC-300e; ISO-7027, TC-3000.y el color con una precisin
0.1 C.U-color aparente (mtodo estndar 2120B). El pH y temperatura se
analizaron con un medidor verstil marca HannaMR con precisin 0.01 pH y 0.1C
de temperatura. Los slidos disueltos totales (SDT) y se midieron con un medidor
verstil marca HannaMR HI-9828.

La alcalinidad fue medida con pruebas de titulacin de acuerdo al mtodo


estndar NMX-AA-036-SCFI-2001. La materia orgnica fue determinada por
oxidacin con permanganato de potasio, por ser el recomendado para cantidades
bajas de materia orgnica siguiendo la metodologa descrita en la norma UNE-
77004-2002.

7.5 Caracterizacin de los extractos crudos obtenidas de las semillas de


Moringa oleifera.

7.5.1 Contenido total de protenas.


El contenido total de protenas de los extractos crudos de moringa fue
determinado por el mtodo del cido bicinconinico (BCA) de Pierce, por deteccin
colorimtrica, elaborando la curva patrn con Serum de Albumina Bovina (BSA) a

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las concentraciones de 0, 2, 4, 6, 10, 15, 20, 25 L determinando su absorbancia


en la longitud de onda de 562 nm.
31
La curva patrn se elabora con los datos obtenidos y se obtiene la lnea recta
mediante regresin lineal, enseguida, se mide por duplicado la longitud de onda de
las muestras problema colocando 5 L de muestra con 95 L de agua destilada.
Se prepara una mezcla de los reactivos A (carbonato de sodio, bicarbonato de
sodio, cido bicinconinico y tartrato de sodio 0.1 M) y el reactivo B (sulfato
cprico al 4%) en la proporcin de 50 partes de A y 1 parte de B. Se adiciona a
cada uno 1mL de la solucin recin preparada a cada uno de los tubos, agitando
en un vortex y se incubaron a 37C por 30 minutos. Transcurrido este tiempo se
procede a leer por duplicado en un espectrofotmetro UV-VIS Genesys Modelo
10S.

7.5.2 Concentracin de la protena.


Para tener una mejor determinacin de las bandas de protena se utiliz la tcnica
de precipitacin de protenas con cido tricloroactico (TCA) en base al siguiente
procedimiento:
Se aplic a las muestras de protenas la mezcla de 20% de TCA con muestras
(01:01, 10% de concentracin final de TCA).Se mantuvieron las muestras en hielo
por 30 min. A continuacin, se centrifugaron durante 20 min a 14000 rpm. La
protena sedimentada se lav despus con etanol/acetato de etilo (1:1) y se
centrifug 10 min a 14 000 rpm, tres veces.

7.5.3. Desnaturalizacin de las muestras de protenas.


Los pellets de protena final se disolvieron en tampn de Laemmli 2X. Se incuban
a 95C durante 10 minutos, a continuacin se enfriaron en hielo durante 5 min. y
se centrifugaron para iniciar su anlisis por electroforesis.

7.5.4 Determinacin de los pesos moleculares.


Las muestras de extracto crudo se analizaron por electroforesis en gel de
poliacrilamida (SDS) usando geles al 12% y siguiendo el protocolo de Laemmli
(1970). La solucin de azul de coomasie G-250 se us para visualizar las bandas
de protenas. Para estimar los pesos moleculares se uso un marcador molecular
marca Prestained SDS-PAGE Broad Range Catalog # 161-0318, compuesto de
las protenas de peso molecular conocido mostradas en la Tabla 8.

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Tabla 8. Composicin del marcador molecular

PESO MOLECULAR (Da)


PROTEINA 32
(calibrado en 4-12% de bis.tris HCl gel)
Miosina 196,439
.galactosidasa 102,686
Serum de albumina bovina 57,161
Ovalbumina 41,485
Anhidrasa carbonica 27,840
Tipsina soy vean inhibidor 20,613
Lisosima 15,044
Aprotinina 6,445

Para el clculo de los pesos moleculares se utiliz el software Quantity one 4.6.5.

La preparacin de reactivos para electroforesis de gel de poliacrilamida se detalla


en el Anexo 2. El protocolo seguido para la electroforesis en gel al 12% de
poliacrilamida se detalla en el Anexo 3.

7.6 Etapas generales de la investigacin.

Las etapas generales de la investigacin se muestran en la Figura 11.

Obtencin de los extractos crudos de Moringa olefera

Determinacin de dosis ptima

Comparacin de la eficiencia de coagulacin


de los coagulantes obtenidos.

Caracterizacin de los extractos crudos

Figura 11. Etapas generales del proceso de investigacin

El diagrama de flujo de la Figura 12 muestra la secuencia detallada de los


procesos anteriores.

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Obtencin de la semilla

33

Seleccin

Limpieza

Extraccin del aceite

Secado del residuo solido

Obtencin de los extractos crudos

Agitacin magntica con la solucin extractante

Filtrado al vacio y con filtros de 0.45 m

Mtodo de
Mtodo 1 Mtodo 2 Mtodo 3 Comparacin

MO/Sol de NaCl 1N MO/ Agua de mar MO/ Agua destilada Sulfato de Aluminio

Prueba de jarras

Agua con turbiedad Agua con turbiedad Agua con turbiedad


15 NTU 36 NTU 100 NTU

Comparacin con dosis ptima

Figura 12. Diagrama de flujo del proceso de obtencin del coagulante extrado de las semillas de
moringa

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DIVISION ACADMICA DE CIENCIAS BIOLGICAS
MAESTRA EN CIENCIAS AMBIENTALES

7.7 Diseo experimental.


Para la determinacin de la dosis ptima se utiliz un diseo simple
completamente al azar. La eficiencia de coagulacin de los extractos crudos se 34
determin para las dosis de 0, 5, 10, 15, 20, 30 y 40 mgL -1 y en aguas crudas de
15, 36 y 100 NTU de turbiedad. Se realizaron 4 repeticiones.

Se utiliz la dosis ptima del Sulfato de aluminio como referencia para la


comparacin estadstica nicamente para el agua del ro Samaria de 36 NTU de
turbiedad y 46.6 unidades de color en la escala platino-cobalto. Se realizaron 4
repeticiones. Las mezclas que se utilizaron fueron Moringa en agua destilada
(MOAD), Moringa en Cloruro de sodio (MONA) y Moringa en agua de mar
(MOAM).

La determinacin del contenido de protenas se llev a cabo mediante una


regresin lineal para determinar la curva patrn, considerando 3 repeticiones con 2
duplicados cada una para cada uno de los extractos de moringa. Para las
muestras problema se utilizaron 3 repeticiones con dos duplicados.

7.8 Anlisis estadsticos.


Se compararon las variables de respuestas cuantitativas, turbiedad y color, pH,
SDT, alcalinidad y materia orgnica del agua tratada cuando se aplicaron los
extractos crudos de moringa y con el sulfato de aluminio grado reactivo. Para
determinar diferencias estadsticas significativas, se realiz una prueba de ANOVA
(1 va). El contraste mltiple de medias de Tukey fue usado para contrastar los
datos obtenidos para cada una de las variables usando el paquete estadstico
STATGRAPHICS. Las grficas fueron elaboradas en el paquete estadstico
SIGMA PLOT.11 . Para los clculos de los pesos moleculares de las bandas
detectadas de protenas se utiliz el paquete estadstico Quantity one 4.6.5.

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VIII RESULTADOS Y DISCUSIN 35

8.1 Caracterizacin del agua cruda.


Los valores promedio de las caractersticas fisicoqumicas del agua proveniente
del ro Samaria se presentan en la Tabla 9. Todas las variables se midieron en el
laboratorio de la planta piloto 2, de la Divisin Acadmica de Ciencias Biolgicas
de la UJAT antes de la prueba de jarras.

Tabla 9. Caractersticas fisicoqumicas del agua del ro Samaria

PARMETRO UNIDAD DE MEDIDA


Turbiedad 36 NTU
Color 46.6 UC
Alcalinidad 116 mg de CaCO3/L
Materia orgnica 3.31 g/L de O2
pH 7.81
Conductividad elctrica 336 S/cm
Slidos disueltos totales (SDT) 0.168 ppt

Se puede observar que se trata de un agua alcalina con un pH superior a 7, con


un bajo contenido de materia orgnica.

8.2 Caracterizacin del agua de mar.


De igual manera, se midieron las caractersticas fisicoqumicas del agua de mar y
se reportan los valores promedios en la Tabla 10, que corresponde a una
composicin tpica de un agua marina con un porcentaje de sales alrededor del
3.5%
Tabla 10. Caractersticas fisicoqumicas del agua de mar colectada en la playa de Chiltepec,
Paraso, Tabasco.

Parmetro Unidad de medida


pH 6.9
Conductividad elctrica 57.72 S/cm
Slidos disueltos totales (SDT) 27.23 ppt
Salinidad 3.6 %

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8.3 Determinacin de dosis ptima para la remocin de turbiedad de los


coagulantes de moringa y sulfato de aluminio en aguas de 15, 36 y 100 NTU.
36
Los resultados para las condiciones ptimas de remocin de turbiedad usando
sulfato de aluminio, extracto de moringa disuelto en agua destilada, en cloruro de
sodio 1N y en agua de mar, se muestran en las Figuras de la 13 a la 16. Se us el
agua cruda del ro Samaria (36 NTU) y las aguas sintticas preparadas (15 y 100
NTU).
120
120

100
100 Turbiedad de 100 NTU
turbiedad de 100 NTU
Turbiedad de 36 NTU
Turbiedad de 36 NTU
Turbiedad de 15 NTU
Turbiedad de 15 NTU 80

Turbiedad, NTU
80
Turbiedad, NTU

60
60

40
40

20
20

0
0
0 10 20 30 40
0 10 20 30 40
Dosis de moringa en cloruro de sodio 1N, mgL-1
Dosis de sulfato de aluminio, mgL-1

Figura 13. Remocin de turbiedad con sulfato de Figura 14. Remocin de turbiedad con solucin de
aluminio para agua de diferente turbiedad moringa en Cloruro de sodio 1N para aguas de
diferente turbiedad

120 120

100
100

80
80
Turbiedad, NTU

Turbiedad, NTU

Turbiedad de 100 NTU


60 Turbiedad de 100 NTU
Turbiedad de 36 NTU
Turbiedad de 36 NTU
Turbiedad de 15 NTU 60 Turbiedad de 15 NTU
40

40
20

0 20

0
0 10 20 30 40
0 10 20 30 40
Dosis de moringa en agua de mar, mgL-1 Dosis de Moringa en agua destilada, mgL-1

Figura 15. Remocin de turbiedad con la solucin Figura 16. Remocin de turbiedad con la solucin de
de moringa en agua de mar para aguas de diferente moringa en agua destilada para aguas de diferente
turbiedad turbiedad

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La Tabla 11 muestra las dosis ptimas determinadas para cada uno de los
tratamientos:
Tabla 11. Dosis ptimas de los coagulantes para turbiedad 37
-1
DOSIS OPTIMA mgL
COAGULANTE
15NTU 36 NTU 100 NTU
Sulfato de aluminio 10 10 15
MONA 10 10 15
MOAM 10 10 25
No se No se No se
MOAD
alcanza alcanza alcanza

La dosis ptima determinada para el sulfato de aluminio se encuentra en un rango


de 10 a 15 mg L-1. La coagulacin se caracteriza por la precipitacin de grandes
flculos en un periodo aproximado de 30 minutos (Figura 17).

Figura 17. Prueba de jarras con sulfato de aluminio

La coagulacinfloculacin con extractos crudos de semilla de moringa se llev a


cabo con tres diferentes soluciones usando agua destilada, solucin de cloruro de
sodio 1N y agua de mar. Los extractos se prepararon usando la metodologa
estndar que ha sido propuesta en anteriores investigaciones con el fin de reducir
el nmero de parmetros desconocidos en la prueba. A todos los extractos se les
realiz la extraccin del aceite. Los resultados de dosis ptima se calcularon en
base a la cantidad inicial de semilla usada en la preparacin de los extractos. La
concentracin exacta de coagulante de los extractos crudos es desconocida.
Cuando se usa el coagulante de moringa en cloruro de sodio, las dosis ptimas
encontradas (entre10 y 15 mgL -1) son similares a las del sulfato de aluminio para
las tres turbiedades estudiadas. La solucin de moringa en agua de mar muestra
un incremento en la dosis en el agua de mayor turbiedad (25 mgL-1). La moringa
en agua destilada con las dosis evaluadas no alcanz valores dentro de la norma.

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Por otro lado, existe una diferencia en el tamao de los flculos obtenidos
comparados con el sulfato de aluminio, siendo ms pequeos y de color ms
claro y requirieron un mayor tiempo para sedimentar por lo que se presume que 38
son menos densos que los obtenidos con sulfato de aluminio. Un incremento en el
tiempo de sedimentacin cuando se usan extractos de moringa, implicara por lo
tanto una mejora en la eficiencia de remocin (Figura 18).

Muyibi et al. 2001), encontraron un comportamiento similar en aguas de baja


turbiedad. De igual manera Gmez, (2010), realiz un estudio para aguas de baja
turbiedad concluye que la eficiencia de coagulacin se mejora usando soluciones
de cloruro de sodio para aguas de baja turbiedad, reportando una dosis ptima de
25 mgL-1 con una eficiencia de 69% de remocin. Resultados inferiores a las dosis
ptimas obtenidas en este trabajo.

Figura 18. Floculacin-coagulacin de los extractos de moringa

Las Figuras 19 a la 22 presentan los resultados obtenidos en la remocin de color

100 100

80 Color de 93 UC 80
Color de 42.4 UC
Color de 21.4 UC
Color de 93 UC
60
Color de 42.4 UC
60
Color, UC

Color, UC

Color de 21.4 UC

40 40

20 20

0 0
0 10 20 30 40 0 10 20 30 40

Dosis de sulfato de aluminio, mgL-1 Dosis de moringa en cloruro de sodio 1N, mgL-1

Figura 19. Eficiencia de remocin de color con Figura 20. Eficiencia de remocin de color de las
sulfato de aluminio semillas de moringa en solucin de cloruro de sodio 1N

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100 100

Color de 93 UC 39
80 80
Color de 42.4 UC
Color de 93 UC
Color de 21.4 UC
Color de 42.4 UC
Color de 21.4 UC
60 60
Color, UC

Color, UC
40 40

20 20

0 0
0 10 20 30 40 0 10 20 30 40
-1
Dosis de moringa en agua de mar, mgL
Dosis de moringa en agua destilada, mgL.1

Figura 21. Eficiencia de remocin de color de las Figura 22. Eficiencia de remocin de color de las
semillas de moringa en solucin agua de mar semillas de moringa en solucin de agua destilada

La Tabla 12 muestra las dosis ptimas determinadas para cada uno de los
tratamientos:
Tabla 12. Dosis ptima para remocin de color

COAGULANTE DOSIS PTIMA mgL-1

Color 21.4 42.4 93


Sulfato de aluminio 0 15 15
MONA 0 15 25
MOAM 0 10 15
MOAD 0 20 27

La dosis ptima para el agua de 21.4 unidades de color no requiere adicin de


ningn coagulante, debido a que por sedimentacin natural llega a los valores de
los lmites permisibles. La dosis ptima para las aguas de 42.4 y 93 UC con el
sulfato de aluminio se alcanza con 15 mgL-1. La solucin de cloruro de sodio en el
valor ms alto de color requiere una dosis de 25 mgL-1 Mientras que en las
soluciones con agua destilada slo se alcanza el valor requerido en la norma en
las aguas con valores ms bajos de color. De acuerdo a Schwarz (2000), para
aguas de turbiedad abajo de 50 NTU el rango de la dosis de MO vara de 10 a 50
mgL-1, mientras que para aguas de turbiedad entre 50 y 150 NTU, la dosis vara
de 30 A 100 mgL-1 cuando se emplea agua como disolvente.

Cuando se grafican los resultados obtenidos por tipo de agua, se puede


comprobar el comportamiento descrito en varias investigaciones. Como puede
observarse,los resultados obtenidos indican una mayor eficiencia de coagulacin

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de los extractos de moringa cuando se usaron aguas de alta turbiedad que


cuando se usaron de baja turbiedad. Esto se describe en las Figuras 23 a la 25. A
medida que se incrementa la turbiedad, la eficiencia de remocin de los extractos 40
de moringa de agua de mar y solucion de cloruro de sodio, se aproximan a la del
sulfato de aluminio.

16 40

14
Sulfato de Aluminio
Sulfato de Aluminio
MONA
12 30 MONA
MOAM
MOAM
MOAD
MOAD

Turbiedad, NTU
Turbiedad, NTU

10

8 20

4 10

0 0
0 10 20 30 40 0 10 20 30 40

Dosis de coagulante, mgL-1 Dosis de coagulante, mgL -1

Figura 23. Remocin de turbiedad en un agua con Figura 24. Remocin de turbiedad en un agua con
turbiedad inicial de 15 NTU turbiedad inicial de 36 NTU

100

80
Sulfato de Aluminio
Turbiedad, NTU

MONA
60 MOAM
MOAD

40

20

0
0 10 20 30 40

Dosis de coagulante, mgL-1


Figura 25. Remocin de turbiedad en un agua con turbiedad inicial de 100 NTU

De igual manera, el comportamiento de la eficiencia en la remocin de color,


observado en los cuatro tratamientos se muestra en las Figuras 26 a la 28,
exhibiendo un comportamiento similar a la turbiedad.

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50

30
Sulfato de Aluminio 41
MONA 40
MOAM
MOAD Sulfato de aluminio
MONA
Color, UC

20 30 MOAM

Color, UC
MOAD

20

10

10

0 0
0 10 20 30 40 0 10 20 30 40

.1
Dosis de coagulante, mgL -1 Dosis de coagulante, mgL

Figura 26. Remocin de color de la solucin de Figura 27. Remocin de color de la solucin de
moringa en cruda con color inicial de 21.4 unidades moringa en cruda con color inicial de 42.4 unidades
de color en la escala Platino Cobalto de color en la escala Platino Cobalto

100

80 Sulfato de Aluminio
MONA
MOAM
MOAD
60
Color, UC

40

20

0
0 10 20 30 40

Dosis de coagulante, mgL -1


Figura 28. Remocin de color de la solucin de moringa en cruda con color inicial de 93 unidades de color
en la escala Platino Cobalto

8.4 Comparacin de la eficiencia de coagulacin de los coagulantes


obtenidos.
La comparacin de la eficiencia de remocin de turbiedad de las semillas de
Moringa oleifera y el sulfato de aluminio se llev a cabo utilizando agua cruda con
36 NTU de turbiedad y 46.6 unidades de color. Para realizar la comparacin se
tom la dosis ptima del sulfato de aluminio de 15 mgL-1. Las variables de
respuesta fueron: turbiedad, color, (Figuras 29 y 30) y para evaluar la calidad del

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agua tratada se tomaron las variables alcalinidad, slidos disueltos totales (SDT),
materia orgnica y pH. Los resultados se muestran en las Figuras 31 a la 34.
42

Figura 29. Valores promedios ( Error estndar) de la remocin de turbiedad de los


tratamientos evaluados. Los nmeros entre parntesis indican el nmero de
observaciones por tratamiento. Letras diferentes indican diferencias entre los
tratamientos (P < 0.05)

Figura 30. Valores promedios ( Error estndar)


. de la remocin de color de los tratamientos
evaluados. Los nmeros entre parntesis indican el nmero de observaciones por
tratamiento. Letras diferentes indican diferencias entre los tratamientos (P < 0.05)

8.4.1 Turbiedad.
El anlisis de varianza de una va indica que existen diferencias estadsticas
significativa (P= 0.00001) entre los valores medios de turbiedad de los 4

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tratamientos evaluados con un 95% de confianza. Las medias obtenidas son:


15.830.72; 3.340.55; 2.870.30 y 1.60 0.26 para MOAD, MOAM, MONA, y
Sulfato de aluminio respectivamente (Figura 32). El contraste mltiple de media de 43
Tukey indica que los tratamientos MONA, MOAM y Sulfato de aluminio son
iguales y diferentes al tratamiento MOAD.

De acuerdo a este anlisis estadstico, los resultados obtenidos de turbiedad


residual en los tratamientos a base de semillas de moringa, indican que el
coagulante extrado, usando como solucin cloruro de sodio 1N y agua de mar
presenta una capacidad de remocin similar a la del sulfato de aluminio grado
reactivo. Los porcentajes de remocin alcanzados son superiores al 90%.

La Tabla 13, indica los porcentajes de remocin de turbiedad obtenidos en los


cuatro tratamientos.

Tabla 13. Resultados de remocin de turbiedad en los diferentes tratamientos

TURBIEDAD DE TURBIEDAD DE REMOCIN


TRATAMIENTO
ENTRADA (NTU) SALIDA (NTU) (%)
MOAD 36.0 15.83 56.02
MOAM 36.0 3.34 90.72
MONA 36.0 2.87 92.03
Sulfato de aluminio 36.0 1.6 95.60

Arnoldsson et al. (2008), usaron semillas de moringa con y sin extraccin de aceite
y como solvente agua destilada y agua de la llave. Se aplicaron estos reactivos
para aguas crudas con dos diferentes niveles de turbiedad: 15 y 50 NTU. Los
resultados de turbiedad residual obtenidos cuando usaron extraccin de aceite
fueron de 2.4 NTU para 15 NTU y 1.9 para 50 NTU con dosis ptima de 67 y 100
mgL-1 respectivamente. Cuando usaron soluciones preparadas con agua de la
llave el promedio de la turbiedad residual fue de 1.85 y de 1.3 NTU
respectivamente. El rango de dosis ptima fue menor al anterior en promedio de
33 mgL-1. La dosis ptima cuando se us agua destilada en este trabajo no fue
alcanzada, por lo que su valor debe ser mayor de 40 mgL -1.

La extraccin del coagulante de moringa en soluciones salinas ha mejorado la


eficiencia de remocin de turbiedad y color. Esto se observa en los resultados
obtenidos en las Figuras 28 a la 33. Cuando se realiz la comparacin estadstica
los resultados obtenidos indican que la eficiencia de remocin de los mtodos de
extraccin salinos es similar al sulfato de aluminio. Okuda et al. (2001), desarroll
este mtodo usando aguas sintticas de 50 NTU y encontr que las dosis
requeridas son 7 veces menores que cuando se utiliza agua ordinaria. Los

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resultados alcanzados en esta investigacin refuerzan esta aseveracin ya que la


dosis ptima para este mtodo fue de 15 mgL.1 y eficiencias de remocin mayores
al 92%. 44

La propuesta de uso del agua de mar como disolvente, proporcion resultados


similares a los obtenidos con soluciones de moringa-cloruro de sodio, esto, debido
a la gran cantidad de iones que contiene, sin embargo, se debe considerar una
serie de estudios ms a fondo para conocer el efecto de estos iones en la calidad
del agua tratada.

8.4.2 Remocin de color.


El anlisis de varianza de una va indica que existen diferencias estadsticas
significativas (P= 0.00001) entre los valores medios de color de los tratamientos
evaluados con un 95% de confianza. Las medias obtenidas de los 4 tratamientos
fueron 23.75 0.29; 1.780.63, 2.2 0.48 y 0.780.54, para MOAD, MOAM,
MONA, y Sulfato de aluminio respectivamente. El contraste mltiple de media de
Tukey indica que los tratamientos MONA, MOAM y Sulfato de aluminio son
iguales y diferentes al tratamiento MOAD.

La Tabla 14 indica los porcentajes de remocin de color obtenidos en los cuatro


tratamientos.
Tabla 14. Resultados de remocin de color en los diferentes tratamientos.

COLOR DE ENTRADA COLOR DE SALIDA REMOCIN


TRATAMIENTO
(UC) (UC) (%)
MOAD 46.6 23.75 49.03
MOAM 46.6 1.78 96.18
MONA 46.6 2.2 95.27
Sulfato de aluminio 46.6 0.78 98.32

Mendoza et al. (2000), en su estudio, utilizaron agua de la llave como disolvente y


reporta porcentajes de remocin de color del 83% para los valores de turbiedad
del 29 y 49 NTU alcanzando valores de remocin de color del 83%. En el
presente estudio la remocin de color se realiz con moringa disuelta en agua
destilada, por lo que la eficiencia de remocin fue menor, resultados congruentes
con varias investigaciones realizadas al respecto, ya mencionadas anteriormente.

La mejora en la eficiencia de coagulacin con el uso de soluciones salinas como


disolvente se explica por la posible ruptura de enlaces polipeptidos entre protenas
y entre polisacridos-protenas debido al incremento de la solubilidad de las
protenas por adicin de sales, mejor conocido como efecto de salado (Voet y
Voet 1990).

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8.4.3 Efectos en la calidad del agua tratada. 45


La calidad del agua obtenida en los tratamientos de coagulacin se midi
considerando las variables de pH, alcalinidad, materia orgnica y SDT, los
resultados obtenidos se muestran en las Figuras 31 a la 34.

7.9 0.25
7.8
7.7

TDS, PPT
0.2
7.6
7.5 0.15
7.4
7.3 0.1
pH MONA MOAM MOAD MONA MOAM MOAD
AGUA TRATADA AGUA CRUDA AGUA TRATADA AGUA CRUDA

Figura 31. Valores promedios (ES) de pH de los Figura 32. Valores promedios (ES) de los slidos
tratamientos evaluados. disueltos totales de los tratamientos evaluados.

120 8
118 7
alcalinidad, mg de HCO3/L

116
6
g/L de O

114
112 5
110 4
108 3
106
2
104
102 1
100 0
MONA MOAM MOAD Sulfato de MONA MOAM MOAD
aluminio
Agua tratada Agua de entrada M.O. DE AGUA TRATADA M.O. AGUA CRUDA

Figura 33. Valores de la alcalinidad de entrada y la Figura 34. Valores obtenidos en el contenido de
obtenida en el agua tratada en los diferentes materia orgnica del agua cruda y en el agua tratada
tratamientos. en los tratamientos a base de semillas de moringa.

Se observa que el sulfato de aluminio en el tratamiento produce un descenso en


el pH (7.09) y alcalinidad del agua tratada (107 mgL-1), resultados ya conocidos en
estudios previos (Yarahmadi, 2009), mientras que el pH y alcalinidad en el agua
tratada con moringa no se afecta, manteniendo el valor inicial (7.85 y 116 mgL -1).
Los valores de SDT se encuentran muy por debajo del lmite mximo permisible
de la norma NOM-127 SSA1-1994. Resultados similares a los obtenidos por

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Arnoldsson et al., (2008) quienes reportan que el uso de moringa no tiene efecto
en el pH y la alcalinidad y conductividad del agua tratada, lo cual significa una
ventaja considerable respecto al sulfato de aluminio puesto que no se requiere la 46
adicionar lcalis como cal, soda ash o soda custica (Cogollo, 2010).

En la Figura 34 se observa un incremento de la materia orgnica en los


tratamientos a base de Moringa oleifera (Ndabigengesere y Narasiah,1995;
Ghebremichael 2007) reportaron que el uso de MO lleva generalmente a un
incremento de Carga orgnica (COD).

8.5 Caracterizacin de los extractos crudos obtenidas de las semillas de


Moringa oleifera.

8.5.1 Contenido total de protenas de los extractos crudos.


Los valores obtenidos en la determinacin del contenido total de los extractos
preparados se presentan en la Tabla 15: que como previamente se habia indicado
se realizaron por tripilicado.
Tabla 15. Contenido total de protenas en los extractos crudos de moringa

MUESTRA 1 MUESTRA 2
EXTRACTO MEDIA PROTENA PROTENA PROTENA
ABSORBANCIA ABSORBANCIA
CRUDO (NM) (G/5 L) (G/L) (mg/L)
(NM) (NM)
0.219 0.293
MOAD 0.398 0.154 0.217 8.32 1.7 1700
0.158 0.080
0.573 0.406
MONA 0.209 0.301 0.37 14.94 2.99 2990
0.009 0.125
0.118 0.350
MOAM 0.403 0.340 0.33 13.21 2.64 2640
0.347 0.419

En la Tabla 16 se presentan los resultados obtenidos cuando se realiz una ligera


modificacin en el mtodo de molienda de las semillas, usando nitrogeno lquido
para mejorar la molienda de la semilla.

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Tabla 16. Contenido total de protenas en los extractos crudos de moringa molida usando
nitrgeno lquido.
47
MEDIA MEDIA
EXTRACTOS MEDIA PROTENA PROTENA PROTENA
muestra muestra
CRUDOS (nm) (g/5 L) (g/L) (mg/L
1 (nm) 2(nm)
Moringa en
0.416 0.514 0.465 15.82 3.16 3160
agua destilada
Moringa en
solucin de 0.610 0.459 0.5345 18.18 3.64 3640
NaCl 1 N
Moringa en
0.504 0.496 0.5 17.01 3.40 3400
agua de mar

Okuda, (2001), desarroll un mtodo para extraer el componente activo de la


moringa en base a soluciones salinas y determin el contenido total de protenas
para extractos crudos de moringa, reportando un valor de 3166 mg BSA L -1, De
igual manera, Scaramall et al. (2012), determina para soluciones salinas y agua
los contenidos totales de protenas. En la extraccion con NaCl 1 N obtuvo un valor
de 4499.19 mg de BSA L-1 y para el extracto con agua de 1832.6 mg de BSA L-1.

La diferencia en los valores obtenidos en estas 3 investigaciones indica que el


contenido de protenas extradas depende del mtodo de extraccin y de
purificacin usado. Esto es un factor muy importante si se considera que las
protenas son los agentes coagulantes de las semillas de moringa. Por lo que una
mayor concentracin se reflejara en una mejor eficiencia en la clarificacin de
aguas. Los valores ms bajos en el contenido de protenas, se reportan para los
extractos que utilizan agua destilada.

8.5.2 Determinacin de los pesos moleculares de las protenas.


Los pesos moleculares de las protenas se determinaron mediante electroforesis
en gel de poliacrilamida al 12 % en presencia de -mercaptoetanol. Fue necesario
realizar concentracin de protenas por el metodo descrito en la metodologia. El
extracto crudo con agua destilada, mostr muchas dificultades para la
concentracin de las protenas.

Los resultados obtenidos para el extracto con agua destilada se muestran en la


Figura 35.

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48

Figura 35. Electroforesis en gel de poliacrilamida al 12% para la moringa en agua destilada tratado con -
mercaptoetanol.

Los resultados obtenidos para el extracto con solucin de cloruro de sodio 1N y


solucin de agua de mar se muestra en la Figura 36 y37.

Figura 36. Electroforesis en gel de poliacrilamida al 12% para la moringa en cloruro de sodio 1N (4 primeros) y en
agua de mar (3 ltimos) tratado con -mercaptoetanol.

Figura 37. Electroforesis en gel de poliacrilamida al 12% para la moringa en en agua de mar tratado con -
mercaptoetanol.

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Tabla 17. Determinacin de los pesos moleculares

Peso molecular
N bandas 49
Extractos crudos aprox. de las bandas
detectadas
kDa
16
Moringa en agua destilada 2
14
32.35
Moringa en solucin de
3 5.99
cloruro de sodio 1N
4.73
32.35
Moringa en agua de mar 3 6
4.73

Como puede observarse en los resultados de la Tabla 17, en el extracto de MO


con agua destilada se observan dos bandas muy prximas de pesos moleculares
aproximados de 16 y 14 respectivamente, por lo que este resultado sugiere la
existencia de un dmero con dos subunidades de diferente peso molecular
alrededor de 15 kDa. Estas unidades estn probablemente unidas por enlaces S-
S. Garca Fayos et al. (2010), encontraron un trmero con unidades de peso
molecular aproximado de 10. Drries (2005) sugiere la posible presencia de otras
bandas correspondiente a isoformas de la misma protena. De igual manera en su
trabajo, indica la presencia de protenas de peso molecular ms elevado, solo
presentes durante los dos primeros das. En la Figura 37 se observa una protena
de peso molecular mayor. El peso molecular del heterodmero es de 30 kDa. Este
resultado comparado con lo que reporta la literatura coincide con Santos et al.
(2005) y Scarmal et al. (2012), quienes reportan un peso molecular de 30 kDa.

Para las protenas detectadas en el extracto crudo de MO en cloruro de sodio, se


encontraron dos bandas de pesos moleculares de 6 y 4.73 que forman un
heterodmero de 11 kDa, Ghebremichael et al. (2005) y Gassenschmidt et al.
(1994), encontraron una protena catinica de peso molecular de 6.5 kDa.
Bodlund, (2013) realiz un estudio de diversas semillas entre ellas las de moringa
determinando para las protenas de sta un valor de 6.5 kDa cuando ha sido
purificada y la presencia de otras bandas cuando se trata del extracto crudo. En la
presente investigacin se encontr una protena con ese peso molecular, sin
embargo, tambin se encuentra presente una protena de PM aproximado de 30
kDa lo cual pudiera reforzar la sugerencia de Dorries (2005) de una posible
degradacin de las protenas por efecto de glucosinolatos y sus derivados lo que
afectara la estabilidad de las muestras.

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En el caso del agua de mar, no se encuentran datos de comparacin, sin


embargo, en la Figura 36 se puede observar el mismo tipo de protenas que las
obtenidas con extractos crudos de moringa en cloruro de sodio por lo que este 50
comportamiento indica una probable similitud en el tipo de protenas que se
extraen con el cloruro de sodio.

El mecanismo sugerido por Gassenschmidt (1994), para las pequeas protenas


es que estas tienen carga positiva y se unen a la superficie de las partculas de
carga negativa. Esto lleva a la formacin de partculas con diferentes zonas de
carga y debido a la colisin entre ellas, se promueve la formacin de los flculos.

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IX CONCLUSIONES
51
En esta investigacin se estableci como objetivo general evaluar la eficiencia de
remocin de turbiedad y color de las soluciones coagulantes a base de semillas de
Moringa oleifera en el tratamiento de aguas para consumo humano, estableciendo
como hiptesis a comprobar que la capacidad de remocin de turbiedad y color en
todos los tratamientos era similar.

Para cumplir con este objetivo general, se plantearon varios objetivos particulares.
En uno de estos, se compar mediante un anlisis de varianza de una va
(ANOVA) con un 95% de confiabilidad los resultados obtenidos en las pruebas de
jarras de eficiencia de remocin, de los parmetros turbiedad y color para
establecer si eran o no similares. Se compar, en el agua tratada, el
comportamiento de los parmetros pH, TDS, alcalinidad y contenido de materia
orgnica para conocer cmo influye el coagulante en la calidad del agua.

Otro aspecto a evaluar fue determinar el comportamiento de la eficiencia de


remocin de turbiedad y color, utilizando diferentes dosis de solucin coagulante,
para establecer en las aguas de diferente turbiedad, la dosis ptima. En este
punto slo se usaron las dosis de 0, 5, 10, 15, 20, 30 y 40 mgL -1, lo cual fue una
limitante para la solucin de moringa en agua destilada, ya que no alcanz la dosis
optima al requerir una mayor cantidad de coagulante.

Para hacer un estudio ms completo, se utilizaron aguas de diferente turbiedad


(15, 36 y 100 NTU) para comprobar el comportamiento de los coagulantes en la
remocin de turbiedad y color a medida que en el agua de entrada estas variables
aumentan o disminuyen.

Otro objetivo particular, de vital importancia para investigaciones posteriores, fue


el de caracterizar los extractos crudos que actuaban como coagulantes en cada
una de las soluciones de moringa, para ello, se determinaron los pesos
moleculares de las protenas que actan como coagulantes en las soluciones con
moringa

Los resultados obtenidos en esta investigacin permiten llegar a las siguientes


conclusiones:

-Las eficiencias de remocin con MONA, MOAM y sulfato de aluminio, muestran


valores superiores al 90%. El resultado ms alto en la remocin de turbiedad se

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obtiene con el Sulfato de aluminio (95.60%), seguido de la solucin de Moringa


en cloruro de sodio 1N (92.03%).
52
-La extraccin del coagulante con agua destilada no representa un mtodo
adecuado para el tratamiento de agua superficial con turbiedad de 36 NTU por su
baja eficiencia de remocin (49.94%y 49.03% para turbiedad y color
respectivamente). Por lo que la hiptesis planteada en esta investigacin solo se
cumple parcialmente.

-El agua de mar como disolvente, proporcion resultados similares a la solucin


con Cloruro de sodio, en cuanto a eficiencia de remocin, contenido total de
protenas y pesos moleculares de stas.

-Se confirma que la eficiencia de remocin utilizando Moringa oleifera en


soluciones salinas constituye un mtodo de tratamiento competitivo con las sales
metlicas de sulfato de aluminio. Y se abre una posibilidad de sustitucin del
aluminio por los efectos adversos a la salud y como una alternativa a ser utilizado
en zonas rurales.

-La eficiencia de remocin de los extractos salinos de moringa mejora a medida


que la turbiedad del agua se incrementa.

- Los agentes activos en la solucin acuosa de Moringa oleifera son protenas


dimricas con un peso molecular 30 kDa.

-Los agentes activos de las soluciones salinas de Moringa oleifera son protenas
de pesos moleculares entre 6 y 5 formando un heterodmero de peso molecular de
11 -12 kDa.

Los extractos crudos de moringa como coagulantes, ocasionan un incremento de


materia orgnica en el agua tratada, debido a que el coagulante est constituido
principalmente por protenas y se utilizan en forma cruda, es decir sin un proceso
de purificacin, por lo que se sugiere realizar su purificacin para obtenerlo con un
alto grado de pureza, lo que tendra por efecto una disminucin considerable de la
materia orgnica presente en el agua tratada y se potencializara su aplicacin a
otros niveles de tratamiento.

El uso de semillas de moringa podra ser un mtodo promisorio para la etapa de


coagulacin-floculacin-sedimentacin para la obtencin de agua potable. Se
sugiere la continuacin de estos estudios para el diseo de estrategias de
purificacin que permitan aislar la protena coagulante de las semillas de moringa.

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ANEXOS

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Anexo 1. Norma Oficial Mexicana NOM-127-SSA1-1994

59

PARMETRO LMITE MAXIMO TRATAMIENTO


PERMISIBLE
CARACTERSTICAS 2 NMP/100 ml Desinfeccin con cloro, compuestos de cloro,
BACTERIOLGICAS COLIFORMES ozono o luz ultravioleta.
TOTALES
2 UFC/100 ml
No detectable Desinfeccin con cloro, compuestos de cloro,
COLIFORMES NMP/100 ml Cero ozono o luz ultravioleta.
FECALES UFC/100 ml
20 unidades de Coagulacin-floculacin-precipitacin-
COLOR color verdadero filtracin; cualquiera o la combinacin de
CARACTERSTICAS en la escala de ellos, adsorcin en carbn activado u
FSICAS Y platino-cobalto. oxidacin.
ORGANOLPTICAS Agradable Coagulacin-floculacin-precipitacin-
OLOR Y SABOR filtracin; cualquiera o la combinacin de
ellos, adsorcin en carbn activado u
oxidacin.
5 unidades de Coagulacin-floculacin-precipitacin-
AGUA PARA USO TURBIEDAD turbiedad filtracin; cualquiera o la combinacin de
NORMA Y CONSUMO nefelomtricas ellos, adsorcin en carbn activado u
OFICIAL HUMANO. (UTN) oxidacin.
MEXICANA
1000 ppm Coagulacin-floculacin-sedimentacin-
NOM-127-
LMITES SLIDOS filtracin y/o intercambio inico.
SSA1-1994
PERMISIBLES DE DISUELTOS
CALIDAD Y TOTALES
TRATAMIENTOS Aluminio 0.20 Intercambio inico u smosis inversa.
A QUE DEBE Arsnico 0.05 Coagulacin-floculacin-precipitacin-
SOMETERSE EL filtracin; cualquiera o la combinacin de
AGUA PARA SU ellos, intercambio inico u smosis inversa.
POTABILIZACIN. CARACTERSTICAS Bario 0.70 Intercambio inico u smosis inversa.
QUMICAS Cadmio 0.005 Intercambio inico u smosis inversa.
-
Cianuros (como CN ) 0.07 Intercambio inico u smosis inversa.
Cloro residual libre 0.2-1.50
-
Cloruros (como Cl ) 250.00 Intercambio inico, smosis inversa o
destilacin.
Cobre 2.00 Intercambio inico u smosis inversa.
Cromo total 0.05
Dureza total (como 500.00 Ablandamiento qumico o intercambio inico.
CaCO3)
Fenoles o 0.001 Adsorcin en carbn activado u oxidacin con
compuestos ozono.
fenlicos
Fierro 0.30 Oxidacin-filtracin, intercambio inico u
smosis inversa.
-
Fluoruros (como F ) 1.50 Osmosis inversa o coagulacin qumica
Manganeso 0.15 Oxidacin-filtracin, intercambio inico u
smosis inversa.
Mercurio 0.001 Proceso convencional: coagulacin-
floculacin-precipitacin-filtracin. Procesos
especiales: en carbn activado granular y
smosis inversa con carbn activado en
polvo.

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Anexo 2. Reactivos para electroforesis en gel de poliacrilamida

1. Preparacin de reactivo Laemmlli 3 X 60


REACTIVOS DOSIS
1.5 M Tris-HCl, pH 8,8 3.12 mL
glicerol grado analtico 3.13 mL
SDS al 20% (2 g. de SDS en 10 mL) 7.5 mL
0,005% (p / v) de azul de bromofenol 5 mg
-mercaptoetanol grado analtico 3.75 g

Tris (hidroximetil) aminometano (C4H11NO3; Mr = 121,14).

Pesar todo y aforar a 25 mL y agitar en un tubo falcon

2. Preparacin la solucin 1.5 M tris-HCl pH 8.8


REACTIVOS DOSIS
Tris base 91 g.
Agua destilada 500 mL
HCl 1N

Disolver los 91 g. de tris base en 300 mL de agua destilada, ajustar el pH a 8.8


con el HCl 1N. Adicionar Agua hastas un volumen total de 500 mL. Filtrar la
solucin a travs de un filtro de 0.45 m. Mantener a 4C hasta un mes.

3. Preparacin la solucin 0.5 M tris-HCl pH 6.8


REACTIVOS DOSIS
Tris base 6.05 g.
Agua destilada 100 mL
HCl 1N

Disolver los 6.05 g. de tris base en 40 mL de agua destilada, ajustar el pH a 6.8


con el HCl 1N. Adicionar Agua hasta un volumen total de 100 mL. Filtrar la
solucin a travs de un filtro de 0.45 m. Mantener a 4C hasta un mes.

4. SDS AL 10%
Colocar 1 g. de SDS en 10 Ml de agua destilada en un tubo falcon. Usar de
inmediato.

5. Persulfato de amonio al 10%


Mezclar un gramo de Persulfato de amonio en 10 Ml de agua destilada. Agitar.

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Solucin amortiguadora de corrida SDS


REACTIVOS DOSIS
Trisma base 24 g. 61
Glicina 115.2 g.
Dodecil sulfato (SDS) 4 g.

Se pes todo y se puso a agitar en un vaso de 1 litro de agua destilada hasta


disolucin completa con agitacin magntica, posteriormente se vaci a una
probeta de 4 litros y se aforo con agua destilada. Se guarda en refrigeracin hasta
su uso (se puede usar hasta 4 corridas).

6. Reactivo de tincin
REACTIVOS DOSIS
Azul de coomasie G-250 o.1%
cido actico 10%
Alcohol metlico 50%
Agua destilada 40%

Se disuelve el colorante en el componente metanol y el agua primero, y aadir el


cido actico. Filtrar la solucin final a travs de Whatman N 1 de papel si es
necesario.

7. Preparacin de geles
Las siguientes cantidades estn adaptadas para 2 mini-geles de 1 mm de espesor
desde el aparato de Bio-Rad.
MINIGELES
Gel de separacin 7.5% 10% 12% 15%
Acrilamida bis 30:0.08% 2.5 mL 3.33 mL 4 mL 5 mL
d-H20 4.85 mL 4.02 mL 3.35 2.35 mL
1.5 M tris-HCl pH 8.8 2.5 mL 2.5 mL 2.5 mL 2.5 mL
SDS (10%) 100 L 100 L 100 L 100 L
PERSULFATO DE AMONIO 10% 50 L 50 L 50 L 50 L
TEMED 10 l 10 L 10 L 10 L
Gel de apilamiento
Acrilamida bis 30:0.08% 1.3 L Running buffer (4 L)
d-H20 5.64 mL TRIS 24 grs
1.5 M tris-HCl pH 8.8 2.5 mL GLICINA 115.2 gr
SDS (10%) 100 L SDS 4 gr.
PERSULFATO DE AMONIO 10% 50 L
TEMED 10 L
Bisacrilamida, o N,N'-metilenbisacrilamida (C7H10N2O2; Mr = 154.17)
Acrilamida (C3H5NO; Mr = 71.08)

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8. Solucin amortiguadora SDS para corrida


Tampn de electroforesis 4 litros
Trisma base 24 g 62
Glicina 115.2 g
SDS 4g
Puede ser utilizado por 4 carreras.

9. Solucin desteidora
Reactivos
50% metanol 150 mL
10% cido actico 30 mL
40% de metanol

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Anexo 3. Protocolo de la electroforesis.

Se limpiaron con alcohol las placas de vidrio y peines antes de puesta en 63


marcha en el soporte.
Se coloca sobre el agitador magntico un vaso de precipitado de 50 mL (ya
insertada la mosca) y se inicia la preparacin de la mezcla para preparar el
gel de apilamiento, siempre en agitacin y poniendo al final el Persulfato
de amonio y la N,N,N,N tetraetildiamina (TEMED). Se deja agitar todo
durante unos minutos para que se mezcle bien.
Se vierte dentro de los cristales para formar el gel hasta que el nivel de gel
alcanza una posicin de 0.5-1 cm de la parte inferior del peine que formar
los pozos de carga. Se utiliza una micropipeta de 5 mL con mucho cuidado
cuidando no formar burbujas, pegando la punta de vidrio con firmeza y sin
dejar de apretar.
Utilizando una pipeta Pasteur, correr muy cuidadosamente etanol puro
hacia abajo el borde de la placa en el sandwich. El etanol tiende a
extenderse a travs de la superficie de la mezcla de gel observando que no
haya fugas. Espere 30 a 40 min. Retirar el etanol. Secar con pequeas tiras
de papel introducidas por la parte superior de manera cuidadosa.
Preparar el gel de apilamiento agregando el TEMED hasta el final. Con
ayuda de una micropipeta de 1000 L se va adicionando esta mezcla al gel
separador con los peines ya semicolocados. Rpidamente se insertan los
peines de tal manera a evitar todo contacto directo entre el gel y el aire, a
continuacin, aadir el resto de gel, checar que el gel quede hasta el tope y
que no haya burbujas de aire atrapadas en el gel. En esta etapa se puede
almacenar el cassette durante 24-48 h., envueltas en papel mojado y Saran
wrap a 4C.
Se retiran con cuidado los peines. Y se limpian las pocetas con papel filtro
cortado en tiras.
Cargar las muestras considerando la cantidad de protena deseada, con
una punta de carga a la parte inferior del gel. Llene el tanque con el tampn
de electroforesis. En una de las pocetas se carga el marcador molecular.
Conecte la fuente de alimentacin al aparato y pasar 100 volts a travs del
gel hasta que la muestra est totalmente concentrada en una banda
delgada.
Una vez transcurrido este tiempo, se retira el buffer y se pone el soporte los
geles sobre papel absorbente.
Se desprende el cristal pequeo y el gel queda en el cristal grande con
ayuda de una esptula de plstico se retira primero con la parte donde
estn las pocetas.

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Se vaca la solucin de azul de coomasie en un recipiente con tapa para


cubrir el gel colocndolos en el red rotor durante 60 minutos.
Para la destincin del gel, se vaca el azul de coomasie nuevamente a su 64
recipiente, se agrega la solucin desteidora y se agita durante 30 minutos,
se repite el procedimiento tres veces o hasta que el gel quede blanco. Ya
desteido el gel, se prepara el acetato, mojarlo en un balde con agua
destilada y extenderlo sobre el marco hasta que no quede ninguna burbuja,
colocar los geles en forma horizontal ordenada y cubrir con el otro acetato
mojado y extendido, pasar agua hasta que no quede ninguna burbuja.
Asegurar con pinzas y dejar secar durante 24 horas.

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Anexo 4. Curva patrn de serum de albumina bovina

65
0.8

0.7

0.6

y = 0.0294x
R = 0.9837
0.5
Absorbacia, nm.

0.4

0.3

0.2

0.1

0 g. De BSA
0 5 10 15 20 25 30

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Anexo 5. Archivo fotogrfico

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ANEXO 6 Reconocimientos

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