UNIDAD N 3:

Tema 2: REPLICACIN DEL ADN

Blgo. Ms. Pablo Chuna Mogolln

Profesor Auxilar T.C.
Area Biologa
Departamento Acadmico de Ciencias - UPAO
 REPLICACION DEL DNA
La replicacin es el proceso mediante el cual, a partir de
una molcula de DNA doble hlice, se sintetizan dos
molculas idnticas. Tiene lugar cada vez que se divide
una clula, ya que las dos clulas hijas han de tener
exactamente, la misma dotacin gentica que la
progenitora.

CARACTERISTICAS

Semiconservativa
Bidireccional
Semidiscontnua
Asimtrica
Asincrnica
Es multifocal en eucariotas
Requiere de Cebadores
Ocurre en el perodo S.
 Es semiconservativa

A partir de la doble hlice de una molcula de DNA se originan dos molculas de DNA,
ambas compuestas por una cadena original (preexistente) y una cadena nueva (recin
sintetizada).
Es decir, que las dos cadenas de la molcula progenitora se separan y sirven cada una de
molde para la sntesis de una nueva cadena hija complementaria, siguiendo la regla
normal de apareamiento.

Nucletidos

Molcula parental Ambas cadenas parentales Dos molculas de DNA

de DNA Sirven como molde hijas idnticas
 Es Bidireccional
Origen de Origen de
replicacin replicacin
Al abrirse la doble hlice se
forma una estructura llamada
burbuja de replicacin, cuyo
tamao aumenta a medida
que avanza la separacin de Origen de Cadena parental
replicacin
las dos cadenas de DNA, Cadena hija
evento que se produce en
forma simultnea en los 2
extremos de la burbuja.
Cada burbuja, tiene dos
Burbuja de
horquillas de replicacin que a replicacin
partir de ese punto de origen
comn avanzan en ambas
direcciones opuestas
Dos molculas de DNA hijas
 Es Semidiscontnua

La cadena hija que adopta

como molde a la cadena
progenitora que corre en
direccin 35 se sintetiza
en forma continua, al
crecer en direccin 53,
y se denomina cadena
adelantada (leading
strand).

La otra cadena hija, cuyo molde es la cadena del DNA progenitora que corre
en direccin 53 es sintetizada de un modo singular, ya que para poder
crecer en esa direccin debe sintetizarse en direccin opuesta al avance de la
horquilla de replicacin. El problema se supera haciendo de que la sntesis
sea discontinua, lo cual significa que la nueva cadena se sintetiza de a
pequeos fragmentos y se le llama cadena retrasada (lagging strand).
 La sntesis de la cadena
retrasada se lleva a cabo en la
direccin opuesta a la del
movimiento de la horquilla de
crecimiento, a partir de una
serie de iniciadores de RNA
cortos formados por la
primasa en mltiples sitios de
la segunda cadena molde. Los
segmentos resultantes de
RNA ms DNA se conocen
como fragmentos de Okasaki.
 La Replicacin es Multifocal en Eucariotas
En eucariotas, para poder llevar a cabo la replicacin en un tiempo razonable, ha de
ser multifocal, es decir, empezar por muchos puntos a la vez. Se ha comprobado que
en el DNA de clulas de mamferos existen cerca de 50 000 a 100 000 replicones.
En cambio la replicacin del DNA bacteriano es monofocal, es decir, existe un slo
origen de replicacin.
Requiere de Cebadores
Para empezar la sntesis de
DNA se requiere una cadena
de nucletidos para
agregarle un nuevo
nucletido. Cada fragmento
de Okazaki se inicia con un
RNA cebador primer (~10
bases de largo).

Ocurre en Fase S del ciclo

celular. La replicacin del DNA
ocurre con alta fidelidad dentro de
un perodo de tiempo determinado
en forma precisa dentro del ciclo
celular.
Sntesis de DNA = replicacin
 REQUERIMIENTOS DE LA REPLICACION
EN PROCARIOTAS EN EUCARIOTAS

DNA Helicasa. DNA Helicasa.

Protenas SSB (Single- Strand binding). Protenas RFA y RFC
Topoisomerasas I y II (girasa) Topoisomerasas I y II
RNA primasa. RNA primasa.
DNA Polimerasas (DNA Pol) DNA Polimerasas (DNA Pol)
I, II y III ,, , ,
Pirofosfatasa. Pirofosfatasa.
DNA Ligasa DNA Ligasa
DNA molde o template DNA molde o template
Cebadores Cebadores
Los 4 desoxirribonucletidos trifosfato: Los 4 desoxirribonucletidos trifosfato:
(dATP, dCTP, dGTP, dTTP) (dATP, dCTP, dGTP, dTTP)
Mg++ Mg++
Abrazadera PCNA (Proliferating cell nuclear antigen)
ORC (origin recognition complex)
RNAH asa Nucleasa reparadora
 DNA POLIMERASAS (DNA Pol)
La DNA Polimerasa, agrega un nucletido al extremo 3 de la cadena de DNA en
crecimiento y forma un enlace fosfodister entre este extremo y el grupo 5-fosfato de
nucletido entrante.
El nucletido trifosfato entrante provee la energa necesaria para esta reaccin por la
hidrlisis de los dos fosfatos terminales (PPi).
Este pirofosfato es luego hidrolizado a fosfato inorgnico (Pi), lo cual permite que la
reaccin de polimerizacin sea irreversible.
 DNA HELICASAS y
PROTENAS SSB.
Una helicasa y las protenas de unin a las
monocadenas (SSB) trabajan para desenrollar y
mantener las cadenas de DNA separadas antes
del avance de la horquilla de replicacin
Las helicasas son enzimas capaces de despla-
zarse a lo largo del DNA utilizando la energa de
la hidrlisis del ATP, para separar las cadenas.
Las protenas SSB mantienen las cadenas
separadas
 Topoiso
merasas

Las Topoisomerasas tipo I

relajan el DNA, por corte y
cierre de una cadena del
DNA.

Las Topoisomerasas tipo

II cambian la topologa del
DNA mediante el corte y la
reparacin del DNA
bicantenario.
ETAPAS DE LA REPLICACION

INICIACION
Reconocimiento de orgenes de replicacin
Separacin de hebra
Posicionamiento de maquinaria de
replicacin

ELONGACION
Crecimiento bidireccional de la horquilla de
replicacin
Replicacin semiconservativa,
semidoscontinua, coordinada.

TERMINACION
Reconocimiento de seales de terminacin
Desensamble de replisomas
1) INICIACION
La sntesis del DNA se inicia en regiones especiales llamadas orgenes de replicacin.
Los orgenes de replicacin tpicamente contienen mltiples secuencias repetidas
cortas. Estos segmentos de DNA singulares son reconocidos por protenas
multimricas que se unen al origen y, a su vez, reclutan hacia ste otras enzimas de la
replicacin.
1) INICIACION
La sntesis del DNA se inicia en regiones especiales llamadas orgenes de replicacin.
Los orgenes de replicacin tpicamente contienen mltiples secuencias repetidas
cortas. Estos segmentos de DNA singulares son reconocidos por protenas
multimricas que se unen al origen y, a su vez, reclutan hacia ste otras enzimas de la
replicacin.
 La iniciacin de la replicacin del DNA
en E. coli, se produce por la unin de
la protena dnaA al nico origen de
replicacin (oriC), seguida por la
fijacin de la DnaB, una helicasa que
disocia el DNA a la altura de la
horquilla.
La asociacin de la primasa (dnaG) a
este complejo forma un primosoma.
Tras la sntesis del iniciador la primasa
se separa.
2) ALARGAMIENTO DE LAS CADENAS:

Una vez que el origen de replicacin se ha formado, el alargamiento para formar la cadena
adelantada progresa sin mayor dificultad.
Una primasa se une a un sitio adyacente a la helicasa en el segmento monocatenario del
molde de la cadena retrasada e inicia la sntesis de otro iniciador de RNA, el mismo que la
polimerasa procede a alargar para formar otro fragmento de Okasaki.
El ncleo polimersico que sintetiza la cadena adelantada se desplaza, junto con su
abrazadera de subunidad , a lo largo de su molde en la direccin del movimiento de la
horquilla, y as alarga la cadena.
 Una vez que los cebadores de la
cadena retrasada han sido elongados
por la DNAP III, ellos son removidos Por
la RNAHasa + DNA polimerasa I y sta
ltima rellena dichos espacios.
La enzima tiene actividad polimerasa
53, 3 5 exonucleasa
(proofreading) en una sola cadena
polipeptdica. La exonucleasa 53
remueve los cebadores, mientras que la
polimerasa funciona simultneamente
llenando los espacios con DNA por
elongacin del extremo 3 del fragmento
de Okasaki adyacente. El enlace
fosfodister final entre los fragmentos es
catalizado por la DNA ligasa
3) TERMINACIN
La replicacin finaliza cuando una horquilla de replicacin se encuentra con el otro lado
del cromosoma circular en el lugar de terminacin, la regin ter ( ). La regin ter est
formada por un par de secuencias ter de repeticiones invertidas.
Cada secuencia ter evita una progresin posterior de una de las horquillas de replicacin
cuando se une una protena de unin ter (TBP) de 26 KDa.
Las dos molculas hijas de DNA se separan porque acta una topoisomerasa de tipo II.

(T1)

(T2)
 LA DNA POLIMERASA HACE UNA LECTURA DE
PRUEBA (PROOFREADING)
Muchos errores de copiado
que se producen durante la
replicacin del DNA son
corregidos por la funcin
de lectura de prueba de la
DNA Polimerasa, que
pueden reconocer bases
errneas (mal apareadas)
en el extremo 3 de la
cadena en crecimiento y
luego extraerlas por medio
de una actividad inherente
de exonucleasa 3 5.
 DNA POLIMERASAS EUCARIOTICAS: , , , y .

Las enzimas son similares a aquellas involucradas en la replicacin

del DNA bacteriano. La DNA topoisomerasa II est involucrada en
aliviar superenrollamientos positivos en el DNA, mientras que la
helicasa desenrolla las dos cadenas.
LA DNA Pol- tiene baja procesividad y una primasa asociada y
carece de actividad exonucleasa. Est involucrada en la sntesis de
la cadena retrasada. Es fuertmente inhibida por afidicolina (fuerte
tambin para y )
DNA Pol tiene alta procesividad en presencia de PCNA (tiene una
funcin homloga a la subunidad de Pol III de E. coli ) y no tiene
asociada una primasa, sugiriendo que replica la cadena lder
eucaritica.
DNA Pol es encontrada en la mitocondria y replica su DNA.
DNA Pol y tienen buena procesividad y estn involucradas en la
reparacin del DNA.
INICIO DE REPLICACION
EN EUCARIOTAS

Los origenes de replicacin

contienen contienen tramos de
ADN especiales, compuestos por
cientos de nucletidos. Todos
poseen una secuencia comn
denominada ARS (autonomous
replication sequence).

El ADN de los orgenes de

freplicacin se halla asociado aun
complejo de protenas llamadas
ORC (origin recognition complex).

El ORC es requerido durante la

activacin de los orgenes de
replicacin.

En G1, Factores de replicacin

defosforilados se unen al ORC
para formar complejo de pre-
replicacin.
Al comienzo de la fase S, ORC
recluta a otras protenas por
ejemplo la denominada MCM
(minichromosome maintenance
proteins) y cdc6 (cell division cycle)-
con las cuales integra un cimplejo
mayor llamado pre-RC (pre
replication complex).
Este cataliza el inicio de la
replicacin despues de ser inducido
por el factor SPF (S-phase promoting
factor), este tambin es llamado FPR
(factor promotor de la replicacin).

La unin de cdc45 activa el MCM

helicasa y facilita la unin de RPA,
una protena de unin a cadena
simple (SSB).
Adems de participar en la activacin de los orgenes de replicacin, el ORC impide que el
ADN se reduplique dos veces durante la fase G2, por lo que evita que la clula comience la
mitosis teniendo un nmero de molculas de ADN mayor que el normal.
 La DNA Polimerasa , que posee actividad de primasa, inicia la sntesis del DNA a travs de
la formacin de un RNA cebador seguido por una cadena corta de nucletidos de DNA. Una
vez que la DNA polimerasa coloc entre 30 y 40 nucletidos, la DNA polimerasa completa
la replicacin sobre las cadenas lder y retrasada.
La DNA polimerasa tambin parece participar en la replicacin nuclear. Estudios recientes
muestra que la DNA Pol replica la cadena lder.
Los cebadores son eliminados por una nucleasa reparadora y su lugar lo ocupa una pieza
equivalente de DNA, sintetizada por la DNAP- . El proceso culmina al actuar la DNA ligasa.
 REMOCIN DE CEBADORES DNA LIGASA
RNase R1 remueve RNA primer Cataliza formacin del enlace fosfo-
Endonuclease: remueve ribonucletidos y la diester entre dos fragmentos de
DNA Pol sintetiza los deoxiribonucleotidos Okazaki
 INHIBIDORES DE SINTESIS DE DNA

Quinolonas, cido nalidxico: se unen a la DNA girasa. La unin del antibitico al complejo
DNA-girasa inhibe la replicacin del DNA.
Las quinolonas y las nuevas fluoroquinolonas, como ciprofloxacina y norfloxacina son
antibiticos de amplio espectro y especialmente utilizados en infecciones urinarias y en
infecciones por Escherichia coli y Salmonella.