Evaluacin de dos fitohormonas para la propagacin in

vitro de Anthurium veitchii.

DEFINICIN DEL PROBLEMA:

El cambio climtico representa actualmente una de las principales amenazas a la
biodiversidad, las sociedades humanas y la economa mundial. Este fenmeno
implica una serie de modificaciones en el clima atribuidas directa o indirectamente
al ser humano que alteran la composicin de la atmosfera global, (Caldasia. 2011).
La gran mayora de las especies de plantas silvestres que son angiospermas solo
producen semillas si los agentes polinizadores han transferido previamente el polen
de las anteras a los estigmas de sus flores. Si este servicio no se realizara, muchas
especies que interactan entre s y muchos procesos del ecosistema
desapareceran, (Oikos. 2011).

Adems de que ciertas plantas pueden presentar problemas en su reproduccin

sexual o asexual, o que la germinacin de la semilla pueda tardar aos en germinar
o incluso esta no se d.

Genero Anthurium son plantas ornamentales que por general tiene dificultades en
su forma de reproduccin por semillas ya que no es muy eficiente adems lenta
y que puede llevar tiempo en la germinacin o que esta no se manifieste y por lo
consiguiente la semilla pierda su poder germinativo, adems de que existe una gran
variedad de especies silvestres que pertenecen a este gnero, y que son
econmicamente atractivas.

Es por eso que existen mtodos o tcnicas que ayudan a ciertas problemticas de
las plantas ya sea de reproduccin o de propagacin entre otras, La tcnica de
cultivo de tejidos vegetales en in Vitro puede proporcionar ayuda a cualquier
especie vegetal para que siga existiendo dentro de su habitad natural

A s que en este proyecto se hace necesario establecer un mtodo de propagacin

masivos para aquellas plantas ornamentales en este caso Anthurium veitchii una
especie silvestre que en cultivo in vitro no se ha desarrollado una metodologa para
su propagacin de hecho no existe reportes de la especie en in vitro, y con la ayuda
de ciertas fitohormonas y tomando referencia de literatura de otra especie parecida
ideare un mtodo eficiente para la propagacin de plantas completas.
JUSTIFICACIN:

En el mundo la biodiversidad vegetal se ha visto sometida a rpidos cambios en las

ltimas dcadas, y esto se nota en que la diversidad de plantas locales que parecen
haber disminuido en la mayora de lugares y en la mayor parte de los hbitats, estos
descensos han afectado obligatoriamente a las poblaciones de plantas
polinizadoras por animales, sobre todo a las que dependen por completo, de los
insectos como vectores para la transportacin del polen, lo que sugiere un descenso
general de los recursos florales para los polinizadores (Harley,2009).

Por ese motivo la polinizacin de Anturios es ms difcil ya que los encargados

naturalmente es decir insectos han sufrido por la modificacin de sus hbitats y del
medio ambiente y esto da a lugar a una prdida de los servicios del insecto hacia
la planta, con un importante impacto negativo tanto ecolgico como econmico, y
que podra afectar el mantenimiento de la diversidad de esta planta o de muchas
plantas silvestres, a la estabilidad de su ecosistema, supervivencia del cultivo en su
hbitat .

Adems de que la produccin de Anturios en general tiene dificultades en su forma

ex Vitro ya que su reproduccin por semillas no es muy eficiente y lenta ya que
tarda un aproximado de 9 meses en madurar, lo que da lugar a que esta semilla
pierda su poder germinativo en cuestiones de das (Anthura, 1998). Existen otras
formas de reproducir implementando ciertas prcticas durante todo el ao sin
embargo esto implica gastos y poca productividad, adems que la demanda de
Anturios es cada vez ms grande (Ruiz, 2000).

Debido a la creciente demanda de Anturios como planta ornamental y a que los

mtodos de propagacin tradicionales sufren de gran desventaja ya sea en tiempo
y costo, la propagacin in vitro de cultivos celulares vegetales representa una
estrategia viable, en menor tiempo y se obtiene un gran nmero de plantas, adems
que nos permite controlar ciertos factores como gentica, y fitopatogenos que
puedan afectar a la planta, es por eso que el presente proyecto se usaran tcnicas
de micropropagacion para satisfacer estas necesidades .
Se considera la importancia de abordar por primera vez Anturios silvestres en 1997
por Pierik quien estableci tcnicas de multiplicacin en in Vitro, adems que hoy
en da diversos grupos han innovado cada uno en sus procedimientos con diferentes
fitohormonas (Kunisaki, et al 1980), pero no en todas las especies silvestre ya que
existe una gran variedad de ellas que an no han sido sometidas a cultivo in vitro.
(Yixun et al., 2009).

Es por ese motivo que en este proyecto establecer un mtodo de propagacin in

Vitro para Anthurium veitchii como especie silvestre, ya que no sea encontrado
reportes en micropropagacion in Vitro, adems que el medio a utilizar se
implementara fitohormonas en diferentes concentracin, para obtener respuesta
benficas para esta especie, ya sea en mayor cantidad de brotes y desarrollo
radicular de la plntula. Al final del proyecto se realizara una pequea discusin de
los resultados obtenidos de Anthurium veitchii y los reportes en literatura de
Anthurium andreanum ya que esta especie es la ms investigada in Vitro dentro de
Genero Anthurium..
MARCO TERICO.
Antecedentes:
Dentro del campo de la Biotecnologa vegetal, la multiplicacin de plantas en sin
lugar a dudas la ms popular de la aplicacin del cultivo in vitro( Pierik,1990),
logrando la propagacin masiva a travs de la morfognesis in vitro, que se define
como la gnesis de nuevas formas de estructuras y organizacin tisular que puede
presentarse a travs de dos posibles rutas: la organognesis y la embriognesis
somtica; es decir la formacin de rganos o embriones de donde previamente no
existan (Mijangos, 1996). Aunque ambas vas se han empleado exitosamente en la
propagacin acelerada de genotipos promisorios, ya que estas ofrecen un gran
nmero de plantas y la produccin de las mismas, aunada a la garanta de
homogeneidad gentica cuando se parte de explantes apropiado. (Silvia Montes,
2004)

El gnero Anthurium (Araceae) tiene gran importancia econmica a nivel mundial

principalmente por la presencia de inflorescencias muy atractivas en A. andraeanum
y A. scherzerianumo El crecimiento lento y la ausencia de mtodos de propagacin
a gran escala pueden ser obstculos para la comercializacin de algunas especies
silvestres con potencial econmico. Las tcnicas de cultivo in vitro han permitido la
propagacin masiva de muchas especies, entre ellas algunas arceas (Pierik et al.
1974).

El cultivo in Vitro de Anturio fue desarrollado inicialmente por Pierik en 1974 y

posteriormente ha sido abordado por otros investigadores (Kunisaki et al 1997), en
donde se han utilizado diferentes tipos de explantes y variedades en diferentes
medios de cultivo, utilizando frecuentemente el medio descrito por Murashige &
Skoog (1962) con modificaciones, suplementado con diferentes concentraciones de
auxinas y citocininas para la induccin de callos.

Anthurium andraeanum fue la primera especie de este gnero que se micropropag

con xito (Pierik et al. 1974). Estudios posteriores originaron un procedimiento bien
definido (Pierik el al. 1979). Un procedimiento muy similar permiti la
micropropagacin de A. scherzerianum (Geier 1982, 1986, 1987).
Generalidades de Anturio (Anthurium sp.)
Clasificacin taxonmica.

El Anthurium pertenece a la familia de las Arceas la cual es muy compleja, estando

compuesta por ms de 3,000 especies, clasificadas en 107 gneros que a su vez
se engloban en 8 subfamilias. El Anthurium es el gnero ms grande de sta familia
siendo originario de los bosques lluviosos de Colombia, Ecuador y Centroamrica.
Se trata de plantas herbceas y perennes, varan en su hbito de crecimiento en
funcin de la especie, pude ser terrestre y/o epfito. Este gnero comprende ms de
1,000 especies de las cuales las ms conocidas y con mayor inters comercial son:
A. andreanum, A. scherzerianum, A. watermaliense, A. crystallium y A. clarinerviun
(Anthura, 1998).

Taxonoma del Anturio (Anthura, 1998):

REINO: Plantae

SUBREINO: Embryobionta

DIVISIN: Magnoliophyta

CLASE: Liliopsida

SUBCLASE: Arecidae

ORDEN: Arales

FAMILIA: Araceae

GENERO: Anthurium

ESPECIE: Anthurium veitchii

Caractersticas botnicas.

Segn la descripcin de Murgua (1996) las races de Anturio son fibrosas,

cilndricas, de consistencia carnosa y no son muy profundas, blancas y produce
varias races adventicias (Meja, 2007). Las hojas de Anturio son alternas, con un
pecolo banalmente envainado y una lamina expandida, simple y entera, de borde
liso. Lo que se conoce comercialmente como flor es en realidad una hoja modificada
llamada espata.

El tallo de Anturio es caulinar, simple y herbceo cuando la planta es joven y

semileoso cuando la planta es adulta, y posee una inflorescencia en una espdice
que se yergue sobre la base de la espata, y que contiene las flores verdaderas;
estas son muy numerosas, pequeas, hermafroditas con un ovario, dos carpelos y
cuatro anteras. En el momento en que las flores maduran y estn listas para ser
polinizadas el espdice aparece hmedo y brillante (Roger et al 2001).

Los frutos del Anturio se presentan como unas protuberancias verrugosas sobre el
espdice y son unas bayas globulosas amarillas o rojas que contienen una o dos
semillas pequeas de color amarillo (Williams et al. 1980).

Propagacin

El Anturio se puede propagar tanto por semilla como por mtodos vegetativos. La
reproduccin por semilla no es muy eficiente para el Anturio, ya que es muy lenta y
tarda unos 9 meses en madurar y las semillas pierden su poder germinativo en
cuestin de das. Esta forma de reproducir el Anturio se puede practicar durante
todo el ao pero requiere de un sustrato de alta porosidad como el musgo o la hierba
(Peat Moss), con temperaturas entre 20 y 25 C y humedad relativa entre 90 a 95%
la germinacin es lenta y los primeros brotes se observan a los 2 meses despus
de sembrarla (Anthura, 1998).

Dentro de la reproduccin vegetativa que es otro mtodo de multiplicacin del

Anturio se encuentran los mtodos (Arces, 1997):

Esquejes apicales: consiste en remover lo que se llama popularmente la

copa de la planta, la cual no debe tener flores, deben cosecharse con equipo
desinfectado y sembrarse a mediana profundidad.
Divisin de las plantas: mtodo til mtodo de reproduccin, especialmente
en el caso de A. scherzeranum, consiste en dividir las plantas, separando
estacas o rizomas de 5 a 7 centmetros o comnmente denominados
hijuelos que brotan de las plantas madres.
 Acodo areo: es la induccin del crecimiento de races areas y tallos
laterales a partir de plantas bien desarrolladas que se han levantado del
suelo y tienen las races expuestas. Las races se envuelven con sustrato
con alto contenido de materia orgnica, de manera que cuando las races
areas comienzan a desarrollarse en el medio propagativo, se puede
proceder a separar el acodo que ser en realidad una planta enraizada.

Distribucin geogrfica del Anturio.

De acuerdo con el taxonomista Engler, quien vivi alrededor del ao 1900, habiendo
coleccionado y descrito un gran nmero de variedades. Las variedades de Anturio
son comunes a travs de Centro y Sur Amrica, el lmite del rea de distribucin
termina cerca de Mxico en la ciudad de Orizaba.

Las variedades de Anturio pueden ser encontradas en reas muy diversas y con
amplias diferencias climatolgicas. Desde las regiones secas del Oeste de Mxico
hasta los bosques lluviosos tropicales de Amrica del Sur. La Altitud est
relacionada con las especies, el rango va desde el nivel del mar hasta una altura de
3,000 metros. El mayor desarrollo de los gneros ha tomado lugar en Los Andes,
Centro y Sur Amrica entre 10 grados de Longitud y 5 grados de Latitud con una
temperatura mnima de 10C (Anthura, 1998).

Establecimiento de cultivos vegetales.

El cultivo de tejidos, en su acepcin amplia, puede ser definido como un conjunto

muy heterogneo de tcnicas que presentan en comn el hecho de que un explante
(una parte separada del vegetal que pueden ser protoplastos, clulas, tejidos u
rganos) se cultiva aspticamente en un medio artificial de composicin qumica
definida y se incuba en condiciones ambientales controladas (Garca Olmedo &
Et.Al, 2010).

Factores que intervienen en el cultivo de tejidos

El inoculo o explantes
Es el rgano, tejido o fragmento de tejido o clulas, extrado del material parental
para iniciar el cultivo in Vitro. La eleccin del explante adecuado constituye el primer
paso para el establecimiento de los cultivos, ste variar de acuerdo al objetivo
perseguido. En general, factores como el genotipo, edad de la planta y su estado
fisiolgico son importantes de considerar (Abdelnour-Esquivel & Escalant, 1994).

Factores fsicos
1. pH: El grado de acidez o alcalinidad (pH) del medio de cultivo es importante
y especfico para cada tipo de plantas, al igual que ocurre en el suelo, por los
que se hace necesario ajustarlo a los requerimientos de la especie en
estudio. Sin embargo, el pH adecuado para las plantas estar en un rango
de 4.5 a 7.
2. Intercambio gaseoso: los gases ms corrientes O2 (Oxgeno), con CO2
(dixido de carbono), y C2H4 (Etileno).
3. La humedad: en condiciones in Vitro la humedad dentro de los recipientes es
casi 100%. Por eso la planta en general no desarrolla adecuados sistemas
de regulacin hdrica tales como cera, estomas, cutcula, etc.
4. La luz: en condiciones in Vitro clsicas, la intensidad y calidad de la luz es
muy baja (10 W/m2 en comparacin de condiciones naturales donde la luz
puede representar hasta 900 W/m2). La calidad de luz tambin es muy baja
y se recomienda mezclar diferentes tipos de luz en una misma sala para tener
diferentes longitudes de ondas.
5. Fotosntesis: es el proceso por el medio del cual las plantas en la presencia
de luz, agua y en los cloroplastos incorporan el dixido de carbono para
formar los compuestos orgnicos que le permitirn crecer y reproducirse.
6. Fotomorfognesis: la luz es un factor importante en la morfognesis. La
morfognesis funciona con la presencia de pigmentos susceptibles a
radiacin azul y roja. Las funciones ms conocidas son las del pigmento
susceptible al rojo: fitocromo (rojo 660 nm y rojo lejano 730 nm); expansin
foliar, elongacin de entrenudos, diferenciacin de estomas, sntesis de
clorofila, etc.
Medio de cultivo
 Un medio de cultivo puede ser definido como una formulacin de sales
inorgnicas y compuestos orgnicos requeridos para la nutricin y manipulacin
de los cultivos (Garca Olmedo & Et.Al, 2010), sobre o dentro del cual crecen los
explantes (inculos). Para su uso, el medio de cultivo se esteriliza ya sea en
autoclave o por filtracin a travs de filtros de papel miliporosos.

Fitohormonas

Las fitohormonas se caracterizan por participar en variadas respuestas

morfogenticas y de crecimiento de manera pleotrpica, esto quiere decir, que una
misma hormona participa en diferentes procesos y adems, que dependiendo de su
concentracin, la misma hormona puede ser estimulatoria o inhibitoria de una
misma respuesta. Por otra parte, varias hormonas pueden afectar una misma
respuesta, lo cual indica que hay una aparente redundancia en el control de un
mismo efecto. Cada respuesta ocurre en un tiempo determinado en el desarrollo de
la planta y se presenta solamente en un tejido especfico u rgano (Srivastava
2002), de acuerdo con su estructura y funcin fisiolgica, las hormonas han sido
clasificadas en varios grupos que comprenden a las auxinas, citoquininas (CK),
cido abscsico (ABA), giberelinas (GA), etileno, jasmonatos (JA), cido saliclico
(SA), brasinosteroides, poliaminas. En el 2008, dos grupos independientemente
identificaron las strigolactonas como un nuevo tipo de hormonas que inhibe la
ramificacin vegetal (Kamiya 2010).

Auxinas
Las auxinas fueron las primeras fitohormonas identificadas y es precisamente el
cido indol actico AIA, la principal auxina endgena en la mayora de las plantas
(Srivastava 2002), se encuentran en la planta en mayores cantidades en las partes
donde se presentan procesos activos de divisin celular, lo cual se relaciona con
sus funciones fisiolgicas asociadas con la elongacin de tallos y coleptilos,
formacin de races adventicias, induccin de floracin, diferenciacin vascular,
algunos tropismos y promocin de la dominancia apical (McSteen y Zhao 2008).

Citoquininas
Las citoquininas han sido consideradas estructuralmente como derivadas de
adeninas o purinas, y dentro de este grupo se incluyen la kinetina, zeatina y
benzilaminopurina. Debido a su variacin estructural se ha llegado a clasificar en
citoquininas isoprenoides y aromticas (Sakakibara 2006), es considerado el
responsable de los procesos de divisin celular, entre los que se encuentran la
formacin y crecimiento de brotes axilares, la germinacin de semillas, la
maduracin de cloroplastos, la diferenciacin celular (Klee y Estelle 1991) y tambin
el control de varios procesos vegetales como el retardo de la senescencia y en la
transduccin de seales (Sakakibara 2006). Se cree que las citoquininas son
sintetizadas en tejidos jvenes o meristemticos como pices radiculares, yemas
del tallo, ndulos de races de leguminosas, semillas en germinacin, especialmente
en endospermos lquidos y frutos jvenes.

Giberelinas
Las giberelinas son un grupo de diterpenoides que se definen ms por su estructura
que por su actividad biolgica, contrario a lo que ocurre con las auxinas y las
citoquininas (Yamaguchi y Kamiya 2000), Las giberelinas biolgicamente activas,
actan como reguladores esenciales del desarrollo de las plantas y cubren todos
los aspectos de la historia de vida de las plantas, modulando varias respuestas del
crecimiento como la germinacin de semillas, el crecimiento del tallo, la
partenocarpia, la expansin foliar, la elongacin de la raz, la floracin y la liberacin
de enzimas hidrolticas en algunos tejidos (Ueguchi-Tanaka et l. 2007).

cido abscsico
El cido abscsico ABA es un sesquiterpenoide particularmente importante en la
respuesta a estrs y desempea un papel importante en procesos fisiolgicos,
cuyos efectos varan dependiendo del tejido y estado de desarrollo de la planta.
Entre sus mltiples funciones, se incluye la induccin de sntesis de protenas LEA
(Late Embriogenesis Abundant), con lo cual se promueve la tolerancia del embrin
a la deshidratacin y acumulacin de protenas de almacenamiento. Adems se le
atribuye el mantenimiento de la dormancia de semillas; en hipoctilos, epictilos y
coleptilos inhibe el crecimiento y elongacin; y en hojas promueve su senescencia
(Finkelstein et l. 2008).

En general, se considera un antagonista de las hormonas de crecimiento como

auxinas, giberelinas o citoquininas.

Etileno
El etileno es un gas incoloro, es una molcula orgnica con actividad biolgica,
producida por todas las plantas, algunos hongos, levaduras y bacterias (Srivastava
2002), Dentro de sus funciones fisiolgicas ms investigadas, se encuentran las
relacionadas con la abscisin de hojas, marchitamiento de flores, maduracin de
frutos y otros procesos relacionados con el envejecimiento, pues se plantea su
participacin en la degradacin de clorofila y peroxidacin de lpidos de membranas.
Tambin favorece la epinastia de hojas, la germinacin de semillas, pone fin a la
dormancia de brotes y promueve la sntesis de enzimas relacionadas con defensa
a patgenos, daos mecnicos o en situaciones de estrs, entre otros (Santner y
Estelle 2009).

Jasmonatos
Los jasmonatos JA, incluyen el cido jasmnico, sus steres y otros metabolitos
intermedios. Son ciclopentanonas cuyos niveles se incrementan rpidamente en
respuesta a perturbaciones mecnicas, ataques de insectos o infecciones por
patgenos, est integrada en procesos de sealizacin corriente arriba y corriente
abajo, que incluyen la interaccin con otras hormonas, con protenas
mitognicamente activadas (MAP), cascadas de quinasas, enzimas fosfatasas y
sistemas de calcio/calmodulina (Howe y Jander 2008)..

cido saliclico
El cido saliclico es un compuesto fenlico presente en todos los rganos
vegetales. Tiene impacto significativo tanto en el desarrollo y crecimiento de la
planta, como en los procesos de fotosntesis y transpiracin ya que est relacionado
con la toma y transporte de iones, as como con, la estructura de los cloroplastos y
la anatoma de la hoja. Por otra parte, se le ha asignado una fuerte responsabilidad
como seal endgena en la resistencia a patgenos y en la Resistencia Sistmica
Adquirida SAR (Marisol Cruz Aguilar, 2015).

Tcnicas de propagacin in Vitro

A. Cultivo de rganos

Corresponde al cultivo de un rgano de la planta con el fin de propagar la planta.

Cultivo de meristemos o de pices, microestacas, cultivo de embriones.

B. Callos

Corresponde a un conjunto de clulas procedentes de la desorganizacin de un

tejido o de una suspensin de clulas. El callo tiene la peculiaridad de presentar
clulas no diferenciadas para su ltima funcin pero que conservan el poder de
dividirse (clula meristemtica o embriognica).

C. Suspensin de clulas

Las suspensiones celulares consisten de clulas libres y microagregado de clulas

en medio lquido en movimiento.

D. Cultivo de protoplastos

Es el cultivo de clulas sin pared pectocelulsica. Es decir, clulas con componentes

vivos rodeados solamente por la membrana citoplsmica. Debido a la ausencia de
pared celular los protoplastos son adecuados para trabajos en manipulacin
gentica que no seran posibles con plantas o clulas intactas, adems son muy
utilizados para estudios fisiolgicos, bioqumicos y biofsicos.

E. Cultivo de anteras

Consiste en el cultivo de anteras enteras con polen inmaduro, el polen se divide

para formar embriones o callo. Cuando stos se transfieren a los medios de
regeneracin se forman plantas. Por lo general el cultivo de anteras se utiliza para
la obtencin de plantas haploides. Estas se regeneran por medio de la
embriognesis somtica a partir del polen, directamente o por la va de
organognesis a partir de un callo. Algunas veces se cultiva el polen una vez aislado
de la antera y se llama cultivo de polen o de microesporas.

F. Morfognesis

La embriognesis somtica y la organognesis son dos procesos morfognicos muy

frecuentes en el cultivo in Vitro de especies vegetales. La embriognesis somtica
es el proceso por el cual se obtiene una estructura similar a un embrin cigtico sin
que medie la fertilizacin de las gametas, mientras que por organognesis pueden
obtenerse tallos, races o flores. Estos rganos son inducidos a partir de una clula
o de un grupo de clulas que, segn las condiciones de cultivo, tienen la propiedad
de mantenerse en activa divisin (Garca Olmedo & Et.Al, 2010).

G. Morfognesis directa o indirecta

Los procesos de morfognesis son directos cuando los tallos, races, flores o
embriones se producen directamente a partir de los tejidos de partida (explante
inicial), y es indirecta cuando la regeneracin de tallos, races, flores o embriones
ocurrir de manera directa (Gisbert Domnech, 2011).

H. Embriognesis somtica

La embriognesis se refiere a la formacin de un embrin somtico a partir de

clulas somticas que no son el producto de la fusin de gametos. Esta terminologa
fue utilizada por Tokin (1963) para describir la formacin de un individuo a partir de
una o varias clulas somticas. Sin embargo, este fenmeno no debe confundirse
con la organognesis. (Abdelnour-Esquivel & Escalant, 1994). La embriognesis
somtica se puede obtener directamente a partir de clulas aisladas o utilizando
callos (Medina, 2011).

I .Organognesis

En contraste con la embriognesis somtica, la organognesis comprende el

desarrollo de yemas o de meristemos radicales a partir de los explantes
directamente o a partir de los callos (Roca & Mroginski, 1991).
OBJETIVO.

Establecer una metodologa para la propagacin de Anthurium veitchii, mediante el

empleo de tcnicas de cultivo de tejidos celulares vegetales in Vitro.

Objetivos especficos.
1. Determinar el efecto de las siguientes fitohormonas ANA,IBA (Auxina) y BAP
(Citocinina) para la formacin de brotes en Anthurium veitchii.
2. Determinar el efecto de las siguientes fitohormonas ANA,IBA (Auxina) y BAP
(Citocinina) para la formacin de raz en Anthurium veitchii.

METODOLOGA.

El presente trabajo se llevara acabo en el laboratorio de crecimiento y desarrollo de

plantas de la Universidad Nacional de Colombia sede Medelln , ubicada en la
ciudad de Medelln, Antioquia, Cl. 59a #63-20 con las siguientes coordenadas
6 15 43.88 N, 75 34 37.09 W.

Descripcin del rea de trabajo.

reas con las que cuenta el laboratorio:

a) preparacin de medios, como su nombre lo indica se hace la preparacin de

medios que sern utilizados en in Vitro adems de que en esa rea se
almacenan el material de vidrio plstico , reactivos qumicos y ciertos equipos
de laboratorio como potencimetro, refrigerador, autoclave, entre otros.
b) rea de transferencia, en esta rea se realiza el trabajo de excision,
inoculacin y transferencia de los materiales a los medios de cultivo, hay que
mencionar que se debe de tener los mximos cuidados de asepsia, para lo
cual se cuenta con campanas de flujo laminar que cuenta con una filtros de
purificacin de aire, utensilios aspticos toda la zona debe estar de forma
asptica
c) cuarto de crecimiento, es donde los cultivos in Vitro se incuban con ambiente
controlado (luz, temperatura etc) y se desarrollan.
Material biolgico:
El material a utilizar son brotes de Anthurium veitchii previamente cultivados en in
Vitro por medio de semillas establecidas en un medio MS que se llev acabo en el
laboratorio de crecimiento y desarrollo de plantas.

Preparacin del medio MS (Murashige y Skoog, 1962).

En un matraz de 1000 mL, se aadir 500 mL de agua destilada, posteriormente
se le agregara 10 mL de Macroelementos, ((NH4) NO3, MgSO4.7H2O, KNO3,
KH2PO4, CaCl2.2H2O), 10 mL de Microelementos, ( FeSO4.7H2O, Na2EDTA,
H3BO3, MnSO4.4H2O, ZnSO4.7H2O, Na2MoO4.2H2O, CuSO4.5H2O,
CoCl2.6H2O, KI) 10 ml de quelatos, tiamina HCL 0.1 mL/ L -1, mio-inocitol 1 g/ L-1 y
como fuente de carbono 30 gr de sacarosa. Se aforara a 1000 ml. pH 5.6 0.1, el
cual se ajustara con una solucin de hidrxido de sodio o de cido clorhdrico al 1
N, una vez obtenido el pH deseado, se agregara 2.5 g de phytagel.

Hay que mencionar que la preparacin del medio se realizara para 6L con
400mL y se utilizara el mismo procedimiento para todo, el medio se
dispersara en 32 matraces de 200mL.

Se agregara las fitohormonas ANA,IBA (Auxina) y BAP (Citocinina) en direfentes

concentraciones , dependiendo del diseo experimental (tabla 1) . Y para a la parrilla
de calentamiento para que los medios hiervan durante 1 minuto.

Por ltimo el medio se verter en frascos de cristal tipo gerber (10 frascos por
tratamiento) llegando a un total de 320 unidades experimentales con sus
respectivos tratamientos (20 ml). Finalmente, se esteriliz a 15 libras durante 15
minutos, y se coloc en un lugar fresco para observar si el medio sufri o no de
contaminacin.
Trasplante del material vegetal.
Los instrumentos a utilizar (pinzas) previamente esterilizadas, se sumergir en
etanol al 96% y se flamear antes del trasplante de cada inoculo en el medio de
cultivo.

El material vegetativo se maneja bajo condiciones aspticas.

Para el trasplante utilizar brotes de la especie Anthurium veitchii, cultivados

previamente en el laboratorio el laboratorio de crecimiento y desarrollo de plantas
de la Universidad Nacional de Colombia sede Medelln, y distribuir sobre el medio
de cultivo contenido en el frasco, hay que mencionar que cada unidad experimental
consta de 4 brotes, cerrando y sellando los frascos con kleen pack, y etiquetar para
su posterior incubacin.

La incubacin ser dentro del laboratorio en el rea de aclimatacin a una

temperatura de ..y un fotoperiodo .horas luz/oscuridad a una intensidad
lumnica . lux durante . das.

DISEO EXPERIMENTAL:

El experimento se estableci bajo un DCA con un arreglo factorial 1x2 , los factores
son las siguientes fitohormonas IBA, ANA (Auxina) y BAP (Citocinina) en el medio
MS (Murashige y Skoog 1962), de los cuales se evaluara la combinacin en las
siguientes concentraciones de cada una (IBA 0mg/L, 0.05mg/L, 0.2 mg/L,
0.35mg/L) (ANA- 0mg/L, 1mg/L, 3mg/L, 5mg/L) (BAP 0mg/L, 1.5mg/L, 3mg/L,
4.5mg/L) (tabla 1), con 10 rplicas en cada tratamiento, haciendo un total de 320
unidades experimentales.

Las variables de respuesta son cantidad de brotes y cantidad de races.

Tabla 1 Diseo experimental DCA con arreglo factorial

BAP 0 1.5 3 4.5

IBA

0 T1 T2 T3 T4
0.05 T5 T6 T7 T8
0.2 T9 T10 T11 T12
0.35 T13 T14 T15 T16
ANA
0 T17 T18 T19 T20
1 T21 T22 T23 T24
3 T25 T26 T27 T28
5 T29 T30 T31 T32