Universidad Politcnica Metropolitana de Puebla

Anlisis de aseguramiento de calidad a materia prima y producto

terminado

MAQUIN S.A de C.V

Presenta:
Karen Sofa Jurez Zambrano

Carrera:
Ingeniera en Biotecnologa

Lugar y fecha:
Puebla, Puebla. 02 de Junio 2017

Asesor industrial: Asesor acadmico:

Ing. Guillermo Garca Bez Dr. Rafael Torres Montiel
 Dictamen de aprobacin

Puebla, Puebla 02 de Junio de 2017

____________________________________
Asesor industrial
Ing. Guillermo Garca Bez
Ingeniero de microbiologa
MAQUIN S.A. de C.V.

___________________________________
Asesor acadmico
Dr. Rafael Torres Montiel
Encargado del laboratorio de Microbiologa
Universidad Politcnica Metropolitana de Puebla

___________________________________
Karen Sofa Jurez Zambrano
Estudiante
Universidad Politcnica Metropolitana de Puebla

2
 ndice

1. Introduccin .................................................................................................................. 5
2. Objetivos........................................................................................................................ 6
2.1 Objetivo general: ....................................................................................................... 6
2.2 Objetivos especficos: .............................................................................................. 6
3. Marco terico ................................................................................................................ 7
3.1 Maquin SA. DE. C.V ................................................................................................. 7
3.2 Agentes utilizados en elaboracin de los productos ........................................... 8
3.3 Calidad del agua ..................................................................................................... 10
3.4 Parmetros de calidad del agua ........................................................................... 11
3.5 Pruebas fisicoqumicas para evaluar la calidad de agua ................................. 14
3.6 Proceso de purificacin de agua .......................................................................... 15
3.7 Mtodos de limpieza, lavado y sanitizacin ........................................................ 18
3.7.1 Agentes sanitizantes usados en MAQUIN S.A. DE C.V .............................. 19
3.7.2 Validacin de sanitizacin por colorimetra (Bioluminiscencia) ................... 20
3.8 Indicadores biolgicos: Microorganismos indicadores de calidad .................. 21
3.8.1 Medios de cultivo necesarios para el anlisis ................................................ 22
3.8.2 Mtodos para el anlisis microbiolgico .......................................................... 23
4. Materiales y mtodos ................................................................................................ 24
4.1 Evaluacin de calidad del agua desionizada en cuarto de preparacin de
locin ............................................................................................................................ 25
4.2 Preparacin de medios de cultivo ........................................................................ 27
4.3 Preparacin de diluciones y muestras microbiolgicas .................................... 28
4.4 Preparacin de locin ............................................................................................. 30
5. Resultados .................................................................................................................. 31
5.1 Cuenta de microorganismo coliformes totales en placa ................................... 31
5.2 Validacin de sanitizacin en cuarto de preparacin de locin ....................... 32
6. Revisin bibliogrfica................................................................................................. 35

3
 ndice de ilustraciones

Tabla 1: Materia que ofrece MAQUIN S.A. de C.V .................................................. 7

Tabla 2: Aplicacin a materiales que ofrece MAQUIN S.A. de C.V ......................... 7
Tabla 3: Indicadores de calidad de agua. .............................................................. 11

Ilustracin 1: Concentrado para locin ............................................................................................... 8

Ilustracin 2: Frmula cloruro de benzalconio ................................................................................... 8
Ilustracin 3: Escala de pH ................................................................................................................ 13
Ilustracin 4: Especificaciones dureza de agua. Obtenido de http://www.hannainst.es ................. 14
Ilustracin 5: Especificaciones de ozono residual. Obtenido de http://www.hannainst.es ............. 15
Ilustracin 6: Cuando el agua cargada con calcio y magnesio pasa por la resina, sta captura los
iones de calcio (Ca) y desprende iones de sodio (Na). ...................................................................... 16
Ilustracin 7: Actuacin de osmosis inversa ..................................................................................... 17
Ilustracin 8: Agitadores de acero inoxidable .......................................Error! Bookmark not defined.
Ilustracin 9: Instrumento utilizado para medir la luz emitida ......................................................... 20
Ilustracin 10: Cultivo de hongos ..........................................................Error! Bookmark not defined.
Ilustracin 11: Cultivo de levadura en placa .........................................Error! Bookmark not defined.
Ilustracin 12: Cuarto de preparacin de locin: agitador. .............................................................. 25
Ilustracin 13: Prueba de dureza ...................................................................................................... 26
Ilustracin 14: Comparacin en checker disc.................................................................................... 26
Ilustracin 16: Medios de cultivo mtodos estndar........................................................................ 27
Ilustracin 17: Peptona en frascos .................................................................................................... 28
Ilustracin 18: Muestra de toallitas hmedas Bio Wipies................................................................. 28
Ilustracin 19: Toallas hmedas Chicolastic...................................................................................... 29
Ilustracin 20: Concentrado y locin ........................................................................................... 29
Ilustracin 21: Incubacin de muestras por duplicado. .................................................................... 32
Ilustracin 22: Frotis.......................................................................................................................... 33
Ilustracin 23: Ingresar nuevamente el hisopo................................................................................. 33
Ilustracin 24: Ruptura del bulbo...................................................................................................... 34
Ilustracin 25: Agitacin del tubo. .................................................................................................... 34
Ilustracin 26: Ingresar tubo a luminmetro. ................................................................................... 34
Ilustracin 27: Lectura de URL. ......................................................................................................... 35

4
 1. Introduccin

En toda industria alimenticia y de elaboracin de productos de consumo humano se

requiere que la calidad de estos sean los ms adecuados para cuidar la salud y en
casos simples evitar sanciones que organizaciones encargadas lo demanden. Para
evaluar la calidad de un producto es necesario conocer el material que se requiere
y determinar si est en condiciones ptimas, ya que los microorganismos se
encuentran distribuidos en el ambiente.
En MAQUIN S.A DE C.V. las toallas hmedas, telas y fibras usadas para fabricar
productos de higiene pueden generar y proveer condiciones donde los
microorganismos pueden brotar si no se emplea un manejo adecuado en escenarios
profilcticos con condiciones desfavorables, es por eso que se analiza el producto
terminado para verificar y/o cuantificar la existencia de microorganismos a travs de
anlisis microbiolgicos obedeciendo normas de calidad que indican la manera
correcta de realizar estas pruebas.
Se llevan a cabo dos etapas para verificar la calidad, en primer lugar, se examina
que la materia prima que se emplea cuente con los requerimientos necesarios para
fabricar los productos de higiene que la fbrica ofrece, tales como pH, dureza,
turbidez, cloro, etc., la primera etapa de anlisis de materia prima conlleva el medir
condiciones, este proceso inicia observando el tratamiento de agua cruda donde en
el objetivo es eliminar componentes qumicos que afectan o deterioran las
caractersticas que demandan las normas en cuanto a creacin de los productos
ofertados como lo son las toallas hmedas, es por esto que la bsqueda de agentes
vivos y qumicos inicia a partir de la materia prima.
La segunda etapa es llevada a cabo con base a informacin y pasos que dictan las
normas mexicanas de calidad, en este caso se examinan indicadores de
contaminacin microbiolgica en los productos ya terminados y listos para liberar y
ofrecer a los clientes.
Los resultados favorecen a una propuesta de mejora para extremar precauciones y
por ende evitar microorganismos perjudiciales en el material y producto terminado
puesto a que el desarrollo microbiano destruye grandes cantidades de factores que
ayudan a la conservacin del producto lo que ocasionara prdida de clientes, dinero
y problemas legales.

5
 2. Objetivos

2.1 Objetivo general:

Examinar el producto final y materia prima a travs de pruebas qumicas y
microbiolgicas para asegurar que la calidad de los productos sea la correcta.

2.2 Objetivos especficos:

Evaluar la efectividad y calidad de las operaciones unitarias que se llevan a

cabo durante el tratamiento de agua para obtencin de agua des ionizada.

Aplicar tcnicas microbiolgicas y fisicoqumicas para determinar la

presencia y/o cantidad de microorganismos y sustancias presentes en
materia y producto terminado.

Obedecer normas de calidad especficas para cada procedimiento.

6
 3. Marco terico
3.1 Maquin SA. DE. C.V
Maquinsa es uno de los principales fabricantes de insumos para la industria
higinico desechable en Mxico. (Industrias Maquin SA DE CV, 2011)

Materia prima para industria

Lnea Nonwoven Lnea laminados
Nonwoven Backsheet 35GSM Hidrofbico con algodn Laminado blanco 20.5 gsm
Nonwoven flico blanco 20.5 gsm
Transfer Layer Aqua 40 gs Laminado blanco 23 GSM

ADL Blanco 54 GSM

Nonwoven Transfer Layer ADL Verde 40GSM Laminado Verde 20.5 GSM

Nonwoven Transfer Layer ADL Violeta 40GSM

Nonwoven Transfer Layer Verde 25GSM

Nonwoven Wettable 15.0cm 35GRM2 Laminado Verde 23 GSM

Nonwoven Wettable 18.0cm 35GRM2

Subcapa Blanca ADL Blanco 40GSM

Tabla 1: Materia que ofrece MAQUIN S.A. de C.V

Aplicaciones de materia prima

Higinico desechable Mdico-quirrgico Hogar- limpieza

Paales Guantes Toallas de limpieza

Toallas femeninas Cofias Manteles de un solo uso

Protector para adulto Cubre bocas Alfombras
Toallitas hmedas Cubiertas para tratamientos Ropa de cama
Panty protectoes Diversos usos mdicos Fundas para almohada
Tabla 2: Aplicacin a materiales que ofrece MAQUIN S.A. de C.

7
3.2 Agentes utilizados en elaboracin de los productos
Locin
Para la preparacin de locin es importante utilizar agua des
ionizada puesto a que algunos de los agentes utilizados como
conservadores o estabilizadores de pH afectan las
caractersticas de la locin, por otra parte, la generacin de
seres microscpicos se presentara en caso de no obtener un
buen tratamiento de agua en la obtencin de agua des
ionizada.
Concentrado
La empresa se encarga de adquirir diferentes tipos de
concentrados o fragancias, teniendo un nmero considerable
Ilustracin 1:
de proveedores.
Concentrado para
locin
Cloruro de benzalconio
Usado en la produccin de locin como agente conservador, sin embargo, existen
propiedades contra el origen de microorganismos.
Formula:
C17H30ClN
Compuesto de amonio cuaternario.

Ilustracin 2: Frmula cloruro de benzalconio

Propiedades fsico-qumicas:
Fragmentos gelatinosos blanco amarillentos.
Higroscpico; no contiene ms del 10% en agua.
Soluble en agua y etanol.
Poco soluble en benceno.
Casi insoluble en ter (1 gramo de la forma anhidra es soluble en 100 mL de
ter y en 6 mL de benceno).
Su solucin acuosa suele ser ligeramente alcalina, bajo agitacin produce
espuma.
Forma una masa fundida transparente al calentarse.
Mecanismo de accin:
En solucin acuosa se disocian en un catin (acta como bactericida) y en
un anin inactivo.

8
Accin bactericida a tres niveles:
Alteracin de la membrana celular.
Desnaturalizacin de protenas.
Inactivacin enzimtica.
Estos mecanismos de accin son debido a su estructura anfiptica; gracias a las
cadenas carbonadas (hidrfobas) penetra en las membranas, mientras que a travs
del nitrgeno catinico (hidrfilo) interacciona con los fosfatos de los fosfolpidos.
Por esta alteracin se produce una salida del material citoplasmtico hacia el
exterior y la alteracin celular. Es activo a cualquier pH, pero su pH ptimo de
actuacin es el alcalino. Su actividad se refuerza por los alcoholes. Tienen
propiedades emulsionantes y detergentes. (Massans, 2012)
Espectro de actividad:
Es desinfectante de bajo nivel.
La actividad bacteriosttica/bactericida depende de la concentracin y de
condiciones de la zona a desinfectar.
Presenta elevada y rpida actividad frente bacterias Gram positivas, aunque se han
descrito resistencias en Staphylococcus aureus resistentes a meticilina. A mayor
concentracin tambin son activas sobre algunas Gram negativas. Pseudomonas y
algunas especies de Enterobacterias se consideran resistentes, hasta el punto que
Pseudomonas podra contaminar las soluciones desinfectantes. (Massans, 2012)
Aplicaciones como antispticos
Lavado de manos y desinfeccin preoperatoria de la piel: se utilizan
soluciones alcohlicas de concentracin 0.05-0.1% (en caso de alergia a la
clorhexidina o a compuestos yodados).
Lavado de mucosas: soluciones alcohlicas al 0.01%
Lavado de heridas pequeas y abrasiones: soluciones alcohlicas al 0.1%.
Tambin es muy adecuado para usarlo como conservador oftlmico. (Palomares,
2011)

9
cido ctrico y lctico
Usados como buffer en la preparacin de locin, equilibrando el pH a valores de
5.5 cuyo valor es el requerido para no daar la piel.
cido ctrico
El cido ctrico es uno de los aditivos ms utilizados por la industria. Se obtiene por
fermentacin de distinta materia prima, especialmente la melaza de caa de azcar.
El cido ctrico es un cido orgnico tricarboxlico que est presente en la mayora
de las frutas, sobre todo en ctricos como el limn y la naranja.
(BRISTHARLABORATORIOS, 2010)
Es un buen conservante y antioxidante natural que se aade industrialmente en el
envasado de muchos alimentos como las conservas vegetales enlatadas. En
bioqumica aparece como una molcula intermediaria en el ciclo de los cidos
tricarboxlicos, proceso realizado por la mayora de los seres vivos. El cido ctrico
disminuye el pH; al actuar como quelante; previene la oxidacin enzimtica.
(BRISTHARLABORATORIOS, 2010)
cido lctico
El cido lctico (C3 H6 O3) es una molcula monocarboxlica orgnica utilizada para
estabilizar el pH de locin para toallas hmedas.

3.3 Calidad del agua

Existen estndares de calidad que indican cuando el agua es confiable, estas son
utilizadas para compararlas con muestras de agua que se desea analizar para
observar las variaciones existes y arreglar los rasgos que indican errores en
cualquier proceso para obtencin de agua potable.
Hay normas que se basan normalmente en niveles de toxicidad cientficamente
aceptables tanto para los humanos como para los organismos acuticos.
(OrganizacionesUnidas, 2014)

Parmetros Descripcin
Parmetros fsicos Solidos o residuos, turbiedad, color, olor,
temperatura
Parmetros qumicos Grasas, conductividad elctrica, alcalinidad,
aluminio, amonio, antimonio, arsnico, asbesto,
bario, boro, cadmio, cianuro, zinc, cloruros,
cobre, cromo, dureza, fenoles, fluoruros,
fosfatos, hidrocarburos, hierro, manganeso,
materia orgnica, mercurio, nitritos y nitratos,
oxgenos disuelto, pH, plaguicidas, plata,
plomo, selenio, sulfato.
 Parmetros biolgicos
Tabla 3: Indicadores de calidad de agua.
Algas, bacterias (coliformes termo tolerantes y
coliformes totales), protozoarios, rotferos,
coppodos y crustceos (daphnia) e insectos,
bacterias heterotrficas

3.4 Parmetros de calidad del agua

Indicadores fsicos
Slidos totales
Es el residuo remanente despus de evaporar una muestra de agua a 103C
105C. Incluye los slidos sedimentables, los slidos suspendidos totales, los
slidos disueltos totales y los coloidales, de los cuales, los dos ltimos hacen
referencia a los slidos filtrables que se obtienen despus de evaporar a 103-105C
una muestra previamente filtrada con un filtro de 1.2 m. Los slidos disueltos
totales son slidos en solucin verdadera o sales solubles, con tamao de dimetro
menor a 0.001 m; mientras que los slidos en estado coloidal tienen un tamao
mayor de 0.001 a 1 m. Por otro lado, los slidos no filtrables o slidos suspendidos
totales son partculas superiores a 1.2 m que son retenidos mediante una filtracin.
Los tamaos de estas partculas por lo general son de 1.2 a 10 m y su presencia
produce la turbiedad del agua. Por ltimo, los slidos sedimentables son partculas
orgnicas y biolgicas cuyo tamao de partcula son mayores a 10 m que se
depositan en el fondo de un vaso cnico, llamado cono de Imhoff, de 1L durante 1
hora; ste mide la cantidad de fango de decantacin primaria. (OMS, 2006)
El STD es una medida de la concentracin total de iones en solucin. A su vez, la
palatabilidad del agua con una concentracin de SDT1 menor que 600 mg/l suele
considerarse buena, pero a concentraciones mayores de aproximadamente 1000
mg/l la palatabilidad del agua de consumo disminuye significativa y
progresivamente. Los consumidores tambin pueden considerar inaceptable la
presencia de concentraciones altas de SDT debido a que genera excesivas
incrustaciones en tuberas, calentadores, calderas y electrodomsticos. (OMS,
2006)
Turbiedad
Originada por partculas en suspensin o coloidales (arcillas, limo, tierra finamente
dividida, etc.), que pueden proceder del agua de origen, como consecuencia de un
filtrado inadecuado, o debido a la resuspensin de sedimentos en el sistema de
distribucin. Otra posible causa es debido a la presencia de partculas de materia
orgnica en algunas aguas subterrneas o el desprendimiento de biopelculas en el
sistema de distribucin. Este indicador se mide en turbidmetro o nefelmetro. Las
unidades que se usan son las NTU (Nephelometer Trubidity Unit) o UNT2. Por otro

1
Slidos Disueltos Totales
2
Unidad Nefelomtrica de Turbidez

11
lado, este indicador del agua se considera un factor importante de aceptabilidad del
agua debido a la percepcin que las personas pueden tener de la misma. Por lo
general, el agua con una turbiedad menor que 5 UNT suele ser aceptable para los
consumidores, aunque esto puede variar en funcin de las circunstancias locales.
(OMS, 2006).
Color
En cuanto al color del agua de consumo, lo ideal es que no tenga ningn color
apreciable, pues influye mucho en la percepcin de las personas sobre la calidad
del agua, actuando, as como un indicador de aceptabilidad. Por lo general, el color
del agua se debe principalmente a la presencia de materia orgnica coloreada,
presencia de hierro, manganeso y otros metales, bien como impurezas naturales o
como resultado de la corrosin. De igual manera, otra posible causa es la
contaminacin de la fuente de agua con vertidos industriales. En general, se puede
deber a diversas causas, es por ello necesario determinar el origen de la coloracin
y en caso necesario actuar sobre ello.
Temperatura
La temperatura es uno de los parmetros ms importantes de la calidad del agua,
pues influye en el retardo o aceleracin de la actividad biolgica, la absorcin de
oxgeno, precipitacin de compuestos, formacin de depsitos, desinfeccin, y en
los procesos de mezcla, floculacin, sedimentacin y filtracin. (OMS, 2006)
Indicadores Qumicos
pH (Potencial de Hidrgeno)
El pH es una de las pruebas ms comunes para conocer parte de la calidad del
agua. El pH indica la acidez o alcalinidad, en este caso de un lquido como es el
agua, pero es en realidad una medida de la actividad del potencial de iones de
hidrgeno (H+). Las mediciones de pH se ejecutan en una escala de 0 a 14, con 7.0
considerado neutro. Las soluciones con un pH inferior a 7.0 se consideran cidos.
Las soluciones con un pH por encima de 7.0, hasta 14.0 se consideran bases o
alcalinos. Todos los organismos estn sujetos a la cantidad de acidez del agua y
funcionan mejor dentro de un rango determinado.
La escala de pH es logartmica, por lo que cada cambio de la unidad del pH en
realidad representa un cambio de diez veces en la acidez. En otras palabras, pH
6.0 es diez veces ms cido que el pH 7.0; pH 5 es cien veces ms cido que el pH
7.0. (Carbotecnia, 2014)

12
Ilustracin 3: Escala de pH

Alcalinidad
La basicidad o alcalinidad del agua es la capacidad que tiene la misma de
neutralizar los cidos. De esta manera, representa la presencia de sustancias
bsicas en el agua, sales de cidos dbiles o bases de cidos fuertes. As pues, se
reconoce por la presencia de iones [OH-] hidrxidos, [CO32-] carbonatos, y
[HCO3-] bicarbonatos.
En aguas naturales se debe a la presencia de iones carbonatos [CO 32-] y
bicarbonatos [HCO3-] que ingresan al agua debido a la accin del CO2 sobre los
materiales naturales del suelo; mientras que tambin puede deberse a la presencia
de bases fuertes que llegan al agua principalmente debido a la contaminacin
industrial.
Es de suma importancia el control de la alcalinidad para garantizar una buena
calidad el agua, pues contribuye a su estabilidad y a controlar su capacidad
corrosiva de tuberas, ya que en presencia de iones Ca 2+ o Mg2+ (dureza) forma
precipitados que ocasionan problemas de taponamiento y obstaculizan el flujo en
las tuberas. (OMS, 2006)
Dureza
Es la concentracin de compuestos minerales de cationes polivalentes que hay en
una determinada cantidad de agua. Los compuestos Ca2+ y Mg2+ (expresados como
mg/l CaCO3), ingresan al agua en el proceso natural de disolucin de las
formaciones rocosas presentes en el suelo. (Guerrero, y otros, 2012)
Indicadores biolgicos
El agua es un medio donde literalmente miles de especies biolgicas habitan y
llevan a cabo su ciclo vital. El rango de los organismos acuticos en tamao y
complejidad va desde el muy pequeo o unicelular hasta el pez de mayor tamao y
estos miembros de la comunidad biolgica son en algn sentido parmetros de la
calidad del agua, dado que su presencia o ausencia pueden indicar la situacin en
que se encuentra un cuerpo de agua. (Garca, 2009)

13
3.5 Pruebas fisicoqumicas para evaluar la calidad de agua

Medicin de pH y cloro con Kit

Phenol Red es el reactivo qumico
encargado de medir el pH y el OTO que
mide el cloro total. Se echan las gotas de
uno y otro en sendas muestras de agua y
como resultado nos da un color que
tenemos que comparar con una escala de
colores. (Poolaria, 2015)

Medicin de dureza
Kit de Hanna
Determina la dureza total del agua va un mtodo titramtrico. El calcio y el
magnesio forman un complejo con EDTA y el punto final de reaccin lo indica el
cambio de color del indicador de rojo a azul. (Hanna Instruments, 2011)

Ilustracin 4: Especificaciones dureza de agua. Obtenido de http://www.hannainst.es

Dureza por cantidad de gotas:

1 - 4 muy blanda
5 - 8 blanda
9 - 12 media
13 - 16 dura
17 muy dura

14
Medicin de ozono residual

El Ozono es un agente oxidante y un germicida. Se utiliza para la oxidacin de

materia orgnica, que produce color u olor en el agua potable.
La reaccin entre el ozono y el reactivo origina una coloracin rosa en la muestra
que es proporcional a la concentracin de ozono.

Ilustracin 5: Especificaciones de ozono residual. Obtenido de http://www.hannainst.es

3.6 Proceso de purificacin de agua

Consiste en la purificacin de agua proveniente de ros, lagos, agua de lluvia y
pozos que contenga compuestos que sean dainos para el ser humano. Hay una
serie de procesos que deben llevarse a cabo con el fin de asegurar que el agua es
segura para beber. (Carbotecnia, 2014)
Proceso bsico para purificar el agua:
1. Cloracin
El cloro es el desinfectante ms usado para reducir o eliminar los microorganismos,
tales como bacterias y virus, que pueden estar presentes en los suministros de
agua. La adicin de cloro para el agua potable ha reducido en gran medida el riesgo
de enfermedades transmitidas por el agua, algunos responsables de enfermedades
como la difteria, las fiebres tifoideas y el clera.
La dosificacin segn la OMS, la concentracin de cloro libre en el agua tratada
debe estar entre 0.2 y 0.5 mg/l (ppm). (OrganizacionesUnidas, 2014)
2. Filtro de sedimentos
La filtracin en el proceso de purificacin elimina los sedimentos slidos
suspendidos en el agua. Este filtro atrapa partculas relativamente grandes que
pueden estar presentes en el agua como tierra, arena, limo y partculas de suciedad
orgnica o inorgnica. Obviamente, es necesario comenzar nuestro proceso de
purificacin con este paso bsico con el fin de eliminar estas partculas grandes que
podran ensuciar u obstruir los equipos utilizados en las etapas posteriores. Los ms
comunes son los filtros de lecho profundo o multimedia que utilizan medios
granulares como zeolita, arena slica, antracita, entre otros para retener las

15
partculas slidas y es necesario hacer una limpieza de lecho mediante un
retrolavado. (Carbotecnia, 2014)
3. Carbn Activado
Una vez que el agua pasa a travs de los filtros mecnicos, posteriormente pasa al
purificador de carbn activado granular. Errneamente llamado filtro de carbn
activado, porque en el sentido estricto, la palabra filtro se refiere al proceso
mecnico de retener partculas suspendidas, en cambio el carbn activado hace un
proceso conocido como adsorcin qumica, dnde la materia orgnica se adhiere a
la pared del carbn por una funcin qumica. En esta etapa se elimina nos los
pesticidas, plaguicidas y otros contaminantes orgnicos (especialmente orgnicos
voltiles) adems de eliminar el cloro aadido en la primera etapa, mediante una
reaccin qumica reductora. El carbn tambin hace un trabajo excelente para
eliminar los trihalometanos THM3. (Carbotecnia, 2014)
4. Intercambio Inico
Eliminacin de varios elementos que causan la dureza. Se refiere como el agua
dura a la presencia de calcio y magnesio y que sobrepasa los niveles permisibles.
Se utiliza un tanque que se llena con una resina
de intercambio inico, cargado negativamente.
Las perlas sintticas sirven como base para que
se lleve a cabo ese intercambio. (Carbotecnia,
2014)

Ilustracin 6: Cuando el agua cargada con calcio y magnesio pasa por

la resina, sta captura los iones de calcio (Ca) y desprende iones de sodio (Na).

Cuando el agua pasa a travs de la resina de intercambio inico, los iones de

dureza, que llevan una carga positiva fuerte, desplazan a los iones de sodio ms
dbilmente cargadas. Los iones de dureza (calcio y magnesio) son as atrapados a
travs de la atraccin electromagntica de las partculas de resina. Los lechos de
intercambio inico son entonces limpiados y regenerados, a intervalos
determinados en funcin del volumen de agua de forma automtica. El proceso de
regeneracin implica inundar la cama con una solucin salina (sodio) sobresaturada
que barre de manera efectiva los iones de dureza dejando a la resina lista para el
siguiente ciclo de suavizacin del agua. (Carbotecnia, 2014)

3
Sub-productos qumicos que resultan de la interaccin del cloro y la materia orgnica en descomposicin.
Estos productos qumicos son cancergenos, y los altos niveles han sido encontrados en los suministros de
agua locales.

16
 5. Pulidor o pre-filtro de 1 micra
En este paso se coloca un filtro de cartucho desechable para atrapar partculas
mayores a 1 micra que pueden ser perjudiciales en la smosis inversa, adems de
retener partculas de la resina de intercambio inico de la etapa anterior.
(Carbotecnia, 2014)
6. smosis Inversa
La smosis inversa es una tecnologa que se ha vuelto muy popular sobre todo por
la mejora en el sabor del agua. Mucha gente ha odo hablar sobre el proceso de
smosis. La smosis es un proceso natural mediante el cual el agua pasa a travs
de una membrana debido a un diferencial de presin entre un lado de la membrana
y el otro.
En la smosis inversa se
utiliza alta presin para forzar
el agua a travs de una
membrana mientras que las
impurezas se quedan
retenidas. En otras palabras,
la presin alta hace que las
impurezas sean retenidas de
un lado de la membrana.
Slo el agua pura es capaz
Ilustracin 7: Actuacin de osmosis inversa
de atravesar la membrana;
incluso las impurezas
disueltas (sales y minerales) que no se pueden eliminar por filtracin convencional
son capturadas y eliminadas por el sistema de purificacin de smosis inversa. Se
elimina el 99,5% de las impurezas disueltas. (Carbotecnia, 2014)

7. Luz Ultravioleta UV
Dado que el cloro no remueve todos los microorganismos, se emplean dos
tecnologas libres de qumicos para desinfeccin para asegurar que el agua
purificada permanece absolutamente y completamente libre de cualquier tipo de
contaminacin microbiolgica. La desinfeccin ultravioleta es la primera de estas
tecnologas. En este proceso, el agua pasa a travs de una cmara especial que
integra una fuente de luz ultravioleta. Esta luz ultravioleta acta como un poderoso
agente esterilizante. Si hay proliferacin de bacterias, virus u otros contaminantes
microbiolgicos estn presentes en el agua, la luz ultravioleta de alta longitud de
onda, destruye el material gentico dentro de estos organismos, eliminando la
posibilidad de la reproduccin y la proliferacin bacteriana o viral. (Carbotecnia,
2014)

17
 8. Ozonizacin
La ozonizacin deja un residual que asegura que nuestra agua purificada
permanece libre de contaminacin microbiolgica durante un tiempo ms, si sta va
a mantenerse almacenada durante un tiempo corto, o la ozonificacin directo en
botellas o garrafones para mantener en condiciones estriles el recipiente en los
puntos de venta antes de ser consumidos. (Carbotecnia, 2014)
En el proceso se toma de oxgeno molecular bsico (O2) y pasa a travs de una
cmara especial en el que se expone a una carga elctrica de alto voltaje. (Este tipo
de generacin de ozono se llama de descarga de corona.) La electricidad hace que
la molcula de oxgeno para dividir y recombinar en 3 oxgenos en vez de dos y
convertirla en ozono (O3). El ozono en forma de gas se inyecta con un burbujeador
en un tanque de residencia o mediante un ventury a la tubera del agua producto
para hacerla llegar al agua purificada. (Carbotecnia, 2014)
9. Almacenamiento.
Despus de que el agua ha pasado a travs los siete pasos anteriores ingresa a la
fase de almacenamiento y recirculacin. Este sistema de almacenamiento y
recirculacin ha sido diseado el agua mantenga su pureza y no entrar en contacto
con cualquier material o sustancias que podran comprometer en modo alguno la
calidad del agua. Este almacenamiento puede ser un tanque plstico grado
alimenticio o de acero inoxidable. (Carbotecnia, 2014)

3.7 Mtodos de limpieza, lavado y sanitizacin

La limpieza se efecta usando, combinando o separadamente, mtodos fsicos, por
ejemplo, restregando con cepillos de diferente clase. El lavado se efecta con
medios qumicos, por ejemplo, el uso de detergentes, lcalis o cidos. El calor es
un factor adicional importante en el uso de los medios qumicos y se deber tener
cuidado al seleccionar las temperaturas de acuerdo a los detergentes que se utilicen
y las superficies de trabajo. (Bravo, 2004)
Desinfeccin: Proceso fsico o qumico que inactiva agentes patgenos como
bacterias, virus y protozoos.

Agentes limpiadores
Los agentes limpiadores son componentes qumicos elaborados para eliminar la
suciedad y los depsitos de minerales. (Bravo, 2004)

18
Propiedades:
Completa y Excelente Excelentes
rpida accin propiedades de
solubilidad humectante. enjuague.
No corrosivos Excelente Accin
Brindan accin germicida
completo emulsionante No txicos
ablandamiento Excelente
del agua. dispersin o
suspensin
Detergentes
Todos los detergentes contienen agentes tensoactivos, es decir son sustancias que
disminuyen la tensin de la superficie entre el detergente y la superficie sucia de
manera que el detergente pueda penetrar y soltar la suciedad. (Bravo, 2004)
Clasificacin:
Alcalinos Tetrasodicos Brax
Glucnico Carbonato de sodio Sosa caustica
Tetrafostafo Polifosfatos Sulfonico
cidos Fosfato trisdico

3.7.1 Agentes sanitizantes usados en MAQUIN S.A. DE C.V

Acido: Considerado tradicionalmente como cualquier compuesto qumico que,
cuando se disuelve en agua, produce una solucin con una actividad de catin
hidronio mayor que el agua pura, esto es, un pH menor que 7. (Industrias Maquin
SA DE CV, 2011)
Pentaquat: Sal cuaternaria de amonio de quinta generacin al 10%. (Industrias
Maquin SA DE CV, 2011)
Alcohol isoproplico: Alcohol incoloro, inflamable, con un olor intenso y muy miscible
con el agua. (Palomares, 2011)

19
3.7.2 Validacin de sanitizacin por colorimetra (Bioluminiscencia)
La Bioluminiscencia se basa en la medicin de ATP4 presente en todas las clulas
como fuente de energa. El ATP emite un color al reaccionar con una enzima
llamada luciferasa, se combina con el ATP para producir luz mediante la siguiente
reaccin:
Luciferina5 + luciferasa + ATP = LUZ
Si colocamos la luciferina y la luciferasa en un hisopo y el ATP es provisto por una
muestra (hisopado) podemos medir el ATP cuantificando la luz producida en la
reaccin. (RODRGUEZ JACHO , 2016)
La validacin de limpieza por Bioluminiscencia en un mtodo instantneo que
permite a las empresas verificar los niveles de residuos orgnicos, clulas vivas y
muertas, plantas y vegetales, bacterias, levaduras y mohos, alimentos, etc. ya que
en todos ellos est presente el ATP. (RODRGUEZ JACHO , 2016)
El aumento de la carga microbiana, residuo de productos, etc. aumenta el nivel de
luz, por lo tanto el ATP ser un parmetro de la contaminacin, la unidad de medida
para la luz emitida es RLU6.

Ilustracin 8: Instrumento utilizado para medir la luz emitida

Luminmetro
Despus de la limpieza todas las fuentes de ATP deberan quedar reducidas
significativamente. El sistema mide la cantidad de luz generada y provee
informacin del nivel de contaminacin en contados segundos. (Castillo, 2014)

4
Adenosin trifosfato
5
Protena que se utilizan para la obtencin de luz en organismos bioluminiscentes mediante la actividad
cataltica de la enzima luciferasa correspondiente, reaccionan con oxgeno (oxidacin). Por el cambio, la
mayora de los grupos funcionales removidos de la luciferina liberan energa en forma de luz.
6
Unidades Relativas de Luz

20
3.8 Indicadores biolgicos: Microorganismos indicadores de calidad
La aplicacin de tcnicas modernas para el anlisis microbiolgico permite
evidenciar la vigilancia y control sanitario, para abatir riesgos a la salud. (Zuiga ,
Tejeda, & Concha, 2006)
Mesfilos aerobios (o cuenta total)
Indica el grado de contaminacin de una muestra y las condiciones que han
favorecido o reducido la carga microbiana. Desde luego, no se aplica a alimentos
fermentados, y puede dar escasa informacin sobre el 16 manejo del alimento
cuando ste es poco favorable para el desarrollo microbiano por su pH Aw, por
ejemplo. Se lleva a cabo a partir de diluciones decimales de la muestra, que se
inoculan en placas vertidas de agar triptona glucosa extracto o agar cuenta
estndar. Las placas se incuban en condiciones de aerobiosis, a 35 C durante 24
a 48 horas. Es importante aplicar las reglas para el recuento, de la NOM-092-SSA1-
1994. Bienes y Servicios. Mtodo para la cuenta de Bacterias Aerobias en Placa.
Cuenta de hongos y levaduras
Los hongos y las levaduras se encuentran ampliamente distribuidos en el ambiente,
por lo que son frecuentes en la microbiota habitual de muchos alimentos; se
dispersan fcilmente por el aire y el polvo. Debido a su crecimiento lento y a su baja
competitividad, los hongos y levaduras se manifiestan en los alimentos donde las
condiciones no favorecen el crecimiento bacteriano, por ejemplo: pH cido, baja
humedad, alto contenido en sales o carbohidratos, baja temperatura de
almacenamiento, presencia de antibiticos u otros antibacterianos. Como grupo
indicador son tiles para evidenciar grado general de contaminacin en alimentos
con estas caractersticas o cuando los mesfilos aerobios no son tiles, como en
alimentos fermentados. Se lleva a cabo a partir de diluciones decimales de la
muestra, que se inoculan en placas vertidas de papa dextrosa agar (PDA) y agar
extracto de malta (AEM) acidificados con cido tartrico, para favorecer a los
hongos y levaduras e inhibir bacterias (NOM-111-SSA1-1994. Bienes y Servicios.
Mtodo para la cuenta de mohos y levaduras en alimentos).
Las bacterias del grupo coliforme se definen como: bacilos cortos, Gramnegativos,
anaerobios facultativos, no esporulados, que fermentan la lactosa a 35 C, en
menos de 48 h, con produccin de cido y gas. Incluye los gneros: Escherichia,
Enterobacter, Klebsiella y Citrobacter. Se consideran un excelente indicador de la
eficiencia de los procesos de sanitizacin y desinfeccin, as como de calidad
sanitaria en agua, vegetales y diversos productos procesados. (Camacho, 2009)
Se basa generalmente en la capacidad de fermentar lactosa. Se pueden utilizar los
mtodos del nmero ms probable (NMP MPN por sus siglas en ingls) que es un
mtodo estadstico en tres etapas y permite el hallazgo de cantidades muy bajas de
coliformes. Tambin se pueden detectar por cuenta en placa utilizando agar bilis-
rojo violeta (ABRV RVBA por sus siglas en ingls) en el cual las colonias

21
fermentadoras de lactosa causan el vire del indicador; pueden detectarse por
filtracin en membrana (Millipore) e incubacin en medios adecuados, por mtodos
rpidos como Petrifilm y reacciones cromognicas o fluorognicas. (Bravo, 2004)
Coliformes fecales
Los de origen fecal son capaces de fermentar la lactosa tambin a 44.5 C; se
consideran el indicador ms adecuado de contaminacin con heces de animales y
humanos, por ejemplo, en pescados y mariscos, carnes, leche, alimentos RTE,
entre otros. La determinacin se hace a partir de la segunda etapa (confirmativa)
del mtodo de NMP, cultivando en caldo lactosado con incubacin a 44.5 C.
Generalmente se combinan las determinaciones, segn se requiere.

3.8.1 Medios de cultivo necesarios para el anlisis

Agar Bilis y rojo violeta

Medio de cultivo selectivo para la investigacin presuntiva y recuento de coliformes7
en alimentos, productos lcteos y otros materiales de importancia sanitaria.
En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes
necesarios para el crecimiento bacteriano, las sales biliares y el cristal violeta
inhiben el desarrollo de la flora Gram positiva, la lactosa es el hidrato de carbono
fermentable, y el rojo neutro es el indicador de pH. El agar es el agente solidificante.
Los coliformes son bacterias que fermentan la lactosa, acidifican el medio y
producen un viraje del indicador de pH al color rojo intenso. Debido a esto se
observan como colonias de color purpura, de 1 a 2mm de dimetro, rodeadas de
una zona rojiza de bilis precipitada. (Britanialab, 2010)
Agar Mtodos estndar
El agar mtodos estndar es un medio utilizado para el recuento de bacterias
aerbicas a partir de agua, aguas residuales, alimentos y productos lcteos. Este
medio tambin es conocido como agar cuenta estndar.
El agar mtodos estndar fue desarrollado por Buchbinder Baris and Goldstein en
1953 como un requerimiento de la American Public Health Association. Este medio
se formula con los ingredientes originales. El extracto de levadura y la peptona de
casena han sido utilizados en medios diseados para estudiar la presencia de
microorganismos termoflicos en productos lcteos desde 1928.
La peptona de gelatina y el extracto de levadura proporcionan la fuente de carbono
y nitrgeno. La dextrosa es el carbohidrato fermentable y el agar es adicionado
como agente solidificante. (Roa, 2015)

7
Designa a un grupo de especies bacterianas que tienen ciertas caractersticas bioqumicas en comn e
importancia relevante como indicadores de contaminacin del agua y los alimentos

22
Agar Papa Dextrosa
Potato Dextrose Agar (PDA, por sus siglas en ingls) es un medio de propsito
general para levaduras y mohos que puede ser suplementado con cidos o
antibiticos para inhibir el crecimiento bacteriano. Es recomendado para uso con
mtodos de conteo en placa para alimentos, productos lcteos y pruebas realizadas
en cosmticos. El agar papa dextrosa (PDA) puede ser usado para el cultivo de
levaduras y mohos clnicamente significativos. La base (infusin de papa)
nutricionalmente rica, estimula la esporulacin de los mohos y la produccin de
pigmentos en algunos dermatofitos (Roa, 2015)

3.8.2 Mtodos para el anlisis microbiolgico

Los mtodos para analizar muestras microbiolgicas estn basados en las normas
mexicanas que indican la manera correcta de realizar las pruebas.
Las normas necesarias para realizar los anlisis son:
NOM-092-SSA1-1994
Mtodo para estimar la cantidad de microorganismos presentes en alimentos, agua
potable y agua purificada a travs de colonias en un medio de cultivo slido
incubado aerbicamente.
NOM-110-SSA1-1994
Mtodo de preparacin de diluciones para anlisis microbiolgico de productos
alimenticios.
NOM-111-SSA1-1994
Mtodo para determinar el nmero de moho y levadura presente en productos
destinados al consumo humano por medio de la cuenta en placa a 25 1C.
NOM-113-SSA1-1994
Mtodo para determinar el nmero de microorganismos coliformes totales presentes
en productos alimenticios a travs de la tcnica de cuenta en placa.

23
 4. Materiales y mtodos

Materiales necesarios para pruebas qumicas y microbiolgicas:

Evaluacin qumica de agua en tratamiento y locin

Material Equipo Reactivos
Pizeta 500mL Potencimetro
Rojo fenol
Frascos estriles de 50mL
Vasos de plstico de 50mL
2 viales de cristal. Kit de medicin de pH y Ortotolidina
cloro. Rango: pH (6.8-8.2) (Solucin
y cloro (0.2-3 ppm) OTO)
Kit de medicin de dureza. Indicador
Rango: 40 a 500 mg/L (ppm) EDTA
CaCO3
Kit de medicin de ozono. Reactivo HI
93711-0
(Cloramina)

Preparacin de medios de cultivo/ Preparacin de diluciones y muestras

microbiolgicas/ Cuenta de microorganismo coliformes totales en placa
Material Equipo

Agar BYRV Autoclave con termmetro y manmetro,

calibrada con termmetro de mximas y
mnimas.

Agar PDA Parrilla con agitacin y temperatura

Agar para mtodos estndar Refrigerador

Papel aluminio Bascula
Agua des ionizada
Esptulas Bala magntica
45 placas Petri por cada 1.5Lts. Incubadora con termostato que evite
variaciones mayores de 10 C, provista
de un termmetro calibrado
Contador de colonias
3 Matraces 2Lts
Probeta
Frascos de vidrio de 250 Ml
Papel aluminio

24
 Preparacin de locin
Concentrado
Parrilla con agitacin
cido Lctico 88% o Ctrico (50%
Volumen/Volumen)

Cloruro de Benzalconio al 50% Potencimetro calibrado

Alcohol etlico Matraz de 2L
Probeta de plstico de 50mL
Tela

4.1 Evaluacin de calidad del agua desionizada en cuarto de preparacin de

locin
Durante el tratamiento de agua.

Ilustracin 9: Cuarto de preparacin de locin: agitador.

Medicin de cloro residual:

Se realiza despus de que se ha aadido el cloro al agua para revisar que el proceso
de cloracin est funcionando.
Purgar 2L de agua.
Enjuagar el comparador con el agua a analizar.
Tomar una muestra en el medidor de cloro.
Aadir de 3 a 4 gotas de solucin OTO.
Agitar y observar la lectura.
Anotar el resultado expresado en mg/l de cloro residual libre.

25
Medicin de pH
Realizar en etapa de carbn activado.
Tomar muestra de agua.
Aadir de 3 a 4 gotas de rojo fenol.
Tapar y agitar.
Observar, hasta que el color coincida con el de la muestra de agua.
Observar el valor de pH.

Medicin de dureza:

Ilustracin 10: Prueba de dureza

Enjuagarlo con la muestra de agua y llenarlo hasta la marca.

Aadir las gotas necesarias de EDTA y agitar el vaso hasta que cambie el
color de rosa a azul.

Medicin de ozono:
Realizar despus de etapa de
ozonizacin.
Llenar cada vial de cristal con 5 mL
de muestra.
Insertar uno de los viales en el
orificio izquierdo del checker
disc. Ilustracin 11: Comparacin en checker disc.

26
 Aadir agua desionizada al otro vial hasta la marca de 10 ml. Colocar la
tapa y agitar para mezclar.
Quite la tapa y aadir 1 paquete de reactivo HI 93711-0. Coloque la tapa y
mezcle.
Espere 2 minutos.
Sujete el checker disc de forma que una fuente de luz ilumine las muestras
desde la parte posterior de las ventanas.
Mantener el checker disc a una distancia de 30-40 cm para comparar el
color y parar cuando se encuentre el color coincidente.
Lea el valor en la ventana de resultado directamente en mg/l (o ppm) de
Ozono.

4.2 Preparacin de medios de cultivo

Para medios BYRV, PDA y estndar

1. Realizar clculos para preparar 1.5Lts de agar.
2. Pesar el agar necesario para cada tipo de medio en el matraz de 2Lts.
3. Agregar agua des ionizada.
4. Calentarlo hasta generar una mezcla homognea y el color torne semi
transparente dependiendo su color original.
5. Tapar con aluminio y cinta testigo
6. Meter a la autoclave y dejar 15 minutos a 121C.
7. Sacarlos de la autoclave y verter cada agar en la cantidad establecida de
placas Petri.

Ilustracin 12: Medios de cultivo mtodos estndar

27
4.3 Preparacin de diluciones y muestras microbiolgicas

Duracin del procedimiento: Las diluciones de la muestra deben ser preparadas

inmediatamente antes del anlisis y stas deben ser usadas para inocular el medio
de cultivo dentro de los 20 minutos posteriores a su preparacin.
Preparacin de peptona
1. Pesar 1 gramo de peptona.
2. En 1 lt de agua desionizada diluir el gramo de peptona y poner en la parrilla
mezcladora sin temperatura.
3. Verter 90 mL en los frascos y taparlos con aluminio.
4. Meterlos a esterilizar a la autoclave
a 121C por 15 min.
5. Cuando la peptona este a
temperatura ambiente se puede utilizar y
en caso de no usarla se guarda en el
refrigerador.
6. El nmero de preparacin se coloca
en el frasco para su identificacin.

Ilustracin 13: Peptona en frascos

Preparacin de la muestra
Muestras de toalla hmeda, fibra, tela:

1. Cortar con material estril 10 gramos

de la muestra.
2. Agregar directamente en el frasco que
contiene peptona.
3. Sembrar respecto a los procedimientos
de bacterias, Coliformes totales y
Hongos y Levaduras.

Ilustracin 14: Muestra de toallitas hmedas

Bio Wipies

28
Ilustracin 15: Toallas hmedas Chicolastic

Muestras liquidas: locin, concentrado o agua:

Prueba biolgica:
1. Tomar 1 mL de locin.
2. Colocar directamente en las cajas Petri.

Ilustracin 16: Concentrado y locin

Prueba qumica:
Medir pH y asegurarse que se encuentre en un rango de 5.5.

29
4.4 Preparacin de locin
Para un litro de solucin:
En un frasco mbar colocar 500mL de agua y 500mL de cido lctico 88% en este
orden.
Preparacin de cido Lctico o Ctrico 50%
1. Calcular la cantidad de locin a preparar.

= ()

2. Calcular la cantidad de los componentes

(%) = 100

Despejando Volumen de concentrado

=
100
Por ejemplo, para 1660 Litros de Locin
5
= = 83
100 1660
La cantidad restante es de agua:
83 (Concentrado) + 1577 (Agua) = 1660 litros de locin final.

cido lctico
1. En un frasco mbar de 1 litro agregar 500mL de agua desionizada y 500mL
de cido lctico al 88%.
2. Colocar en el agitador
3. Colocar una bala magntica y encender equipo de agitacin
4. Durante 3 minutos el agua desionizada y cido lctico se agitara para realizar
una solucin homognea.
cido ctrico

30
 1. En un vaso de precipitado de 1 litro agregar 600ml de agua desionizada,
mediante la bscula pesar 600gr de cido ctrico.
2. Colocar el vaso de precipitado en agitador y colocar bala magntica
3. Encender agitador y agregar despacio el cido ctrico en vaso de precipitado
para evitar que se realicen grumos.
4. Durante 7 minutos el agua desionizada y cido ctrico se agitar para realizar
una solucin homognea.

Preparacin de locin para corrugados de prueba:

1. Agregar al matraz la cantidad de agua necesaria dependiendo la cantidad de
concentrado. (Algunos concentrados contienen 70mL, dependiendo esta
cantidad se agrega agua, cloruro de benzalconio y se ajusta pH).
2. Obtener una muestra del pH inicial de la solucin. (verificar en potencimetro)
3. Agregar cido ctrico o lctico hoja de referencia a la solucin realizada.
4. Utilizando el potencimetro, verificar el pH de la solucin realiza a 5.50 (
0.5)
5. Tomar una muestra de retencin en un vaso estril de 100mL

5. Resultados
5.1 Cuenta de microorganismo coliformes totales en placa

1. Distribuir las cajas estriles en la mesa de trabajo de manera que la

inoculacin; la adicin de medio de cultivo y homogenizacin, se puedan
realizar cmoda y libremente.
2. Marcar las cajas en sus tapas con los datos pertinentes previamente a su
inoculacin y correr por duplicado.
3. Colocar en cajas Petri por duplicado 100 L (1mL) de muestra lquida directa
o de dilucin primaria utilizando para tal propsito una pipeta estril.
4. Verter de 15 a 20 mL de medio BYRV fundido y mantenido a 45 1,0 C en
bao de agua. El tiempo transcurrido entre la dilucin primaria y el momento
en que se vierte el medio de cultivo, no debe exceder de 20 minutos.

31
 5. Mezclar cuidadosamente el inculo con el medio con seis movimientos de
derecha a izquierda, seis movimientos en el sentido de las manecillas del
reloj, seis movimientos en el sentido contrario al de las manecillas del reloj y
seis de atrs para adelante, sobre una superficie lisa y nivelada. Permitir que
la mezcla solidifique dejando las cajas
Petri y reposar sobre una superficie
horizontal fra.
6. Invertir las placas y colocarlas en la
incubadora a 35C durante 24 2 horas.
7. Despus del periodo especificado para
la incubacin, contar las colonias con el
contador de colonias.

Ilustracin 17: Incubacin de muestras por duplicado.

5.2 Validacin de sanitizacin en cuarto de preparacin de locin

Lugar de toma de muestra:

Cuarto de preparacin de locin:
El tanque de preparacin de locin.

1. Tomar hisopo de prueba de bioluminiscencia con cuidado por medio del

bulbo, se extraer con mucho cuidado, procurando no tocar el hisopo o la
parte interior del dispositivo de muestreo.
2. Con mucho cuidado se realizar un frotis de 10x10 cm para superficies
planas. (Ver Ilustracin 22)
3. Despus de pasar el hisopo por la superficie que desea probar, coloque el
hisopo nuevamente en el tubo. (Ver Ilustracin 23)
4. Sujetar firmemente el tubo del hiposo y con el pulgar y el dedo ndice, romper
la vlvula de apertura doblando el bulbo hacia adelante y hacia atrs. Apretar
el bulbo dos veces para expulsar todo el lquido por el eje del hisopo. (Ver
Ilustracin 24)
5. Humedecer la cabeza del hisopo en el lquido sacudiendo suavemente
durante 5 a 10 segundos. (Ver Ilustracin 25)
6. Para realizar la lectura insertar el hisopo en el luminmetro y presionar el
botn OK. (Ver Ilustracin 26)
7. Despus de obtener la lectura, compararla con la tabla que se muestra a
continuacin, en base a esos datos se tomara la decisin si el rea esta
sanitizada o no.

32
 Limpio Sucio
Preparacin de 5 URL > 5 URL
locin

Linea de toalla 10 URL >10 URL

hmeda

Ilustracin 18: Frotis.

Ilustracin 19: Ingresar nuevamente el hisopo.

33
Ilustracin 20: Ruptura del bulbo.

Ilustracin 21: Agitacin del tubo.

Ilustracin 22: Ingresar tubo a luminmetro.

34
Ilustracin 23: Lectura de URL.

6. Revisin bibliogrfica

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