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CULTIVO Y AISLAMIENTO DE
PATGENOS VIABLES
NDICE DE CONTENIDOS
Introduccin
Preparacin de medios artificiales
Condiciones para el aislamiento de patgenos
Microorganismos y oxgeno
Incubacin en condiciones anaerobias
Incubacin de microorganismos capnfilos
Temperatura de incubacin, pH, humedad
Realizacin
pruebas
susceptibilidad
Qu es un medio de cultivo
Medios deshidratados
Cientos de formulaciones
Empresas del sector farmacutico
dedicadas a la produccin y control de
calidad de los medios
Placas de petri y tubos con todos los
medios necesarios
EXISTEN CIENTOS DE
FORMULACIONES
DISPONILES EN EL
MERCADO
Preparacin de medios de cultivo artificiales
Preparacin
Esterilizacin
Autoclave
Tindalizacin
Filtracin
Luz UV
Estufas a 180 C
xido de etileno
Adicin de sustancias termolbiles
Vertido en placas de petri (medios slidos) o
tubos (medios lquidos o medios slidos)
Condiciones para el desarrollo de patgenos
Medio de cultivo
No exigentes (nutrientes (C, N, S, P) sales, tampn)
Exigentes (dem. + sustancias complejas (sangre, suero,
huevo, patata, factor X, factor V, vitaminas)
Condiciones ambientales adecuadas
Atmsfera adecuada
Temperatura adecuada
Humedad
Tiempo de incubacin
pH
Ausencia de factores inhibidores o antagonistas del
crecimiento
Relaciones de los microorganimos
con el oxgeno
Aerobios
Anaerobios facultativos
Anaerobios
Estufas para anaerobios
Bolsas para anaerobios
(generan H2 y CO2) (Gas-Pak)
Microaerfilos
Frascos con vela
Agar semislido
Capnfilos
Atmsfera de CO2
Sistemas Gas Pak, Bio Bag
(bicarbonato y cidos)
Utilizacin de estufas de CO2
Sistemas para anaerobiosis
Sistemas para incubacin de
microorganismos capnfilos
Estufas CO2
Temperatura de incubacin
35-37 C
30 C
Otras temperaturas
Elevadas (42 C)
Bajas (4C) enriquecimiento en fro
Intermedias (22 C)
Tiempo de incubacin
pH
Clasificacin de los medios de cultivo
Medios de enriquecimiento
Medios diferenciales
Medios selectivos
Medios cromognicos
Ejemplos de medios de aislamiento primario o
medios de crecimiento y medios enriquecidos
Agar nutritivo
Agar infusin de cerebro y corazn (BHIA)
Agar triptona soja (TSA)
Agar sangre
Agar chocolate
Agar CLED (urocultivo)
Agar de Meller-Hinton
Caldo de carne picada
Caldo tioglicolato
Agar BHIA (Infusin de cerebro y corazn )
Componentes Cantidad
Agar sangre
Triptona
Hidratos de carbono
NaCl
Tampn
Agar
5% sangre desfibrinada
Objetivo
Enriquecimiento de especies de Salmonella en muestras de heces,
aguas fecales, etc.
Subcultivar al cabo de 8-12 horas en medio ms selectivo (agar SS o
agar sulfito de bismuto)
Medios selectivos
Moderadamente selectivos
MacConkey
EMB
Altamente selectivos
Agar salino manitol Staphylococcus
Medio SS Salmonella y Shigella
Agar Hektoen Salmonella y Shigella
Agar sulfito de bismuto Salmonella y Shigella
Agar xylosa-lisina-dexosicolato Salmolella y Shigella
Agar PEA Gram positivos
Agar Columbia CNA Gram positivos
Agar MacConkey
Colonias rojas/rosa
Fermentadores de lactosa
No patgenos (E. coli, Klebsiella,
Citrobacter)
Colonias transparentes
No fermentan la lactosa
Patgenos (Pseudomonas,
Salmonella, Shigella, Yersinia,
Proteus)
Agar entrico Hektoen
Agente inhibidor
Agar XLD,
EMB, MacConkey;
SS; HE; ADC
Agar SM
Medios cromognicos
Medios diferenciales
Incorporan sustancias cromognicas
Deteccin de actividades enzimticas caractersticas
de determinados gneros o especies de bacterias
- galactosidasa
- glucosidasa
- glucuronidasa
- galactosidasa
ONPG ONP + galactosa
Incoloro amarillo
Ejemplos de medios cromognicos
CPS ID3
Chromogenic UTI (infecciones tracto urinario)
ChromAgar Orientation
UriSelect 4 (urocultivos)
Un ejemplo de medio
cromognico
ChromAgar Candida
Permite diferenciar e
identificar tres especies
de este gnero
(colonias verdes,
azules y transparentes)
Medios especficos