UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO ZOOTECNIA

1 de enero de 2014

EFECTO DE INHIBIDORES DE LA
CADENA RESPIRATORIA

INTRODUCCIN:

Como ya fue descrito en un post anterior, los inhibidores de la Cadena de

Transporte de Electrones (CTE) son substancias que se enlazan a alguno de los
componentes de la cadena de transporte de electrones bloqueando su capacidad
para cambiar de una forma reversible desde la forma oxidada a la forma reducida
y viceversa.

Esta inhibicin resulta en una acumulacin de los componentes en sus formas

reducidas antes del punto de inhibicin, y la presencia de las formas oxidadas de
los componentes de la CTE despus del punto de inhibicin.

Debido a que en presencia de estos inhibidores no se libera energa, la sntesis

de ATP tambin se detiene. Los ms importantes inhibidores conocidos de la
cadena de transporte de electrones son el Amital, la Rotenona, el Antimycin A, el
Monoxido de Carbono (CO), la Azidasdica y los Cianuros.

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Material:

Material biolgico:
Homogenizado de hgado de pollo

Material y equipo de laboratorio:

Pipetas
Tubos de vidrio

Reactivos:
Fosfato monosdico
2,6-diclorofenolindofenol
Malonato
Cianuro de sodio
Barbiturato de sodio

Sustratos:
Succinato (natural)
P-fenilendiamina (artificial)

A) SISTEMA DEL SUCCINATO:

COMPONENTES TUBOS DE VIDRIO

1 2 3 4 5 6

Buffer fosfato de sodio 0.1 M pH 7,4, ml 1,5 1,2 1,0 0,5 0,5 0,5

2,6-diclorofenolindofeol 0,02; ml 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0

Succinato 0,1M; ml 0,2 - 0,2 0,2 0,2 0,2

Malonato 0,1M; ml - - - 0,5 - -

Cianuro de sodio 0,1M ; ml - - - - 0,5 -

Barbiturato de sodio 0,1M ;ml - - - - - 0,5

Homogenizado heptico, ml - 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5

Mezclar el contenido de cada sistema de

reaccin

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RESULTADOS Y OBSERVACIONES:
Tubo 01: El tubo presenta el color natural del 2,6-diclorofenolindofeol que es de
color azul, se determina que no hubo oxidacin ni reduccin porque no hubo
cambio de color.

Tubo 02: El buffer cumple la funcin de amortiguar para que no cambie el pH. El
tubo da un color azul claro dando a entender que el colorante se ha reducido
(recibido electrones o hidrgenos) pero cul fue el agente que hizo que se
reduzca el colorante? fue la enzima succinato deshidrogenasa que se encuentra
en las mitocondrias del homogenizado heptico. Crendose una reaccin redox
pues el succinato se oxido y 2,6-diclorofenolindofeol se reducido.

Tubo 03: El tubo se decolora formndose una leuco base. En este tubo hubo una
doble carga de sustrato pues se agreg succinato exgeno (Succinato 0,1M; ml) y
endgeno (homogenizado hepatico) generando que el colorante se reduzca
totalmente.

Tubo 04: En este tubo colocamos el buffer, 2,6-Diclorofenol que esta esperando a
que llegue al cambio de color, el succinato endgeno mas una sustancia que va a
competir un INHIBIDOR donde se une al sitio activo de la enzima porque el
succinato con el malonato se parecen estructuralmente, Entonces no deja que se
pase los agentes reductores pero estos se quedan con ganas de recibir por lo
tanto hay INHIBICION porque hay menor reduccin del agente oxidante o la
presencia de inhibidor competitivo.

Tubo 05: En este tubo el succinato no tiene interferencia y pierde sus electrones
por lo cual se est oxidando y lo est recibiendo el colorante, por lo tanto se
reduce el colorante en el tubo cambiando de color en verde claro.

Tubo 06: En este tubo el barbiturato est permitiendo el pasaje de electrones por
lo tanto el oxidante est reduciendo dependiendo el sitio que acta el Inhibidor por
lo que bloquea la cadena respiratoria.

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B) SISTEMA DE LA P-FENILENDAMINA
(DONADOR ARTIFICIAL DE ELECTRONES ):

COMPONENTES TUBOS DE VIDRIO

1 2 3 4 5

Buffer fosfato de sodio 0.1 M pH 7,4, ml 2,0 1,5 1,0 1,0 1,0

Malonato 0,01M; ml - - 0,5 - -

Cianuro de sodio 0,1M; ml - - - 0,5 -

Barbiturato de sodio 0,1M; ml - - - - 0,5

p-fenilendamina; ml 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5

Homogenizado heptico, ml - 0,5 0,5 0,5 0,5

Mezclar el contenido de cada sistema de

reaccin

RESULTADOS Y OBSERVACIONES:
Tubo 01: el tubo presenta el color un color translucido

Tubo 02: en este tubo el color se torna marrn claro

Tubo 03: el tubo presenta un color marrn arenoso

Tubo 04: la mezcla toma un color marrn claro

Tubo05: el tubo presenta un color marrn ms oscuro.

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