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Un caso ficticio
El dueo de una granja ecuestre not recientemente que uno de sus caballos ha estado
teniendo dificultad para moverse y ha desarrollado hbitos alimenticios deficientes. El veterinario
examina al caballo, recoge una muestra de su sangre, y la enva al laboratorio de diagnstico de la
FACEN para descartar causas microbianas de estos sntomas. Mientras se aguardaban los
resultados, el caballo se recupera en gran medida luego de una semana. Los tests inmunolgicos y
bioqumicos descartaron la presencia de infecciones activas. Sin embargo, al dueo de la granja le
preocupa una enfermedad muscular particularespasmo muscular equino (EME, una enfermedad
ficticia)que se ha presentado con sntomas similares ocasionalmente en sus caballos.
Consecuentemente, solicita que el laboratorio de investigacin animal le haga pruebas a este
caballo para detectar la presencia de EME. Los estudios han mostrado que EME ocurre como
resultado de una mutacin de un solo aminocido en el gen prototipo (gen SKL) que codifica los
msculos esquelticos. Al gen mutante se lo denomina gen mSKL.
El laboratorio de investigacin animal decidi estudiar el gen SKL del caballo para buscar la
mutacin utilizando una tcnica distinta de los vectores plasmdicos.
Preguntas
Qu tcnica considerara utilizar para clonar el gen SKL a fin de diferenciarlo del gen
mSKL?
Qu pasos estn involucrados en la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)?
a. Paso de calentamiento. Por qu?
b. Paso de enfriamiento. Por qu?
c. Paso de elongacin. Por qu?
d. Ciclos de repeticin de a, b, y c. Por qu?
e. Anlisis de los productos resultantes. Por qu?
Puede utilizar otros trminos para describir los pasos a, b, y c en la pregunta de arriba? El
paso de calentamiento (a) se ha puesto como ejemplo.
a. Desnaturalizacin
b.
c.
Cules son las temperaturas usuales para los pasos de calentamiento, enfriamiento y
elongacin?
a.
b.
c.
Cules son los principales ingredientes necesarios para la PCR?
a. Una copia de
b. Dos
c. Cuatro tipos de dNTPs:
d. La enzima
e. Termociclador
Cul es el DNA objetivo en este escenario?
Qu nucletidos son las piezas fundamentales del DNA?
a. dTTP
b.
c.
d.
Si se determina que el gen SKL tiene 1 kbp de longitud, puede ser un buen candidato
para PCR?
Cul debe ser el tamao o rango What should be the standard size or range for the
complementary PCR primers?
Which end of the primers is important for annealing?
a. Extremo 3'
b. Extremo 5'
c. Ambos extremos
Cul es la secuencia de nucletidos preferida en el extremo 3' de los cebadores/primers ?
Cul debe ser el porcentaje de G+C en un cebador?
Si la siguiente secuencia representa al gen SKL, qu par de cebadores sera adecuado
para realizar la PCR?
Si la secuencia del gen SKL de arriba es el gen objetivo, qu otro trmino podra utilizar
para describir el siguiente cebador?
Si la secuencia del gen SKL de arriba es el gen objetivo, cul sera la hebra de DNA
resultante al utilizar el siguiente cebador?