I.

PRACTICA N
II. CONTEO DE GLBULOS BLANCOS Y GLBULOS ROJOS DIFERENCIACIN CELULAR
III. INTRODUCCIN

El presente informe de prctica de conteo de los glbulos blancos (leucocitos) es muy importante
ya que sirve para el diagnstico y seguimiento de infecciones, y puede ser el primer signo en las
leucemias. Tambin el conteo de glbulos rojos o hemates es fundamental para el diagnstico
de las causas de las anemias, hay anemias que afectan la disminucin de la cifra de glbulos
rojos. Para ello se trabaj con muestra de sangre ovina contenida en un tubo de coleccin de
tapa morado conteniendo un anticoagulante EDTA, luego con la ayuda de la pipeta de Thoma se
llen la cmara de Neubauer para realizar el conteo, posteriormente se prepara la confeccin de
extendidos (frotis) de sangre para realizar la diferenciacin celular de los glbulos blancos.

3.1. OBJETIVO
a. OBJETIVO GENERAL
Realizar un recuento celular de glbulos blancos y glbulos rojos en la cmara de
Neubauer, luego hacer una diferenciacin celular.

b. OBJETIVOS ESPECFICOS
- Diferenciar morfolgicamente los distintos tipos de leucocitos en frotis coloreados.
- Conocer el procedimiento para el recuento de leucocitos en cmara de Neubauer.
- Desarrollar destreza en la realizacin de frotis sanguneo para posterior observacin
microscpica.
IV. REVISIN BIBLIOGRFICA
SANGRE: es un tejido que se
caracteriza por ser de
consistencia lquida. Tiene un
color rojo brillante en el interior
de las arterias y color rojo
oscuro cuando circula por las
venas.
Tiene una consistencia densa y
viscosa. Es 4 a 5 veces ms
viscosa que el agua. Tiene una
densidad de 1040 a 1069
unidades. Posee un olor sui
generis. El sabor es
ligeramente salado.
La sangre est compuesta por
el plasma, sustancia
intercelular lquida y un
conjunto de clulas,
suspendidas en el plasma. Las
clulas de la sangre y estructuras similares a las clulas son: los glbulos rojos (eritrocitos o
hemates), glbulos blancos (leucocitos) y plaquetas. (Karp, 2009).
 (Espinoza, 2009).

RECUENTO CELULAR: Los recuentos celulares son una serie de procedimientos que tienen
por objeto determinar el nmero de cada uno de los tipos celulares que estn comprendidos en
una unidad de volumen de sangre (generalmente, en 1 mm3).
Todos los recuentos celulares constan de 3 fases:
1 Dilucin de la sangre.
2 Cmputo del nmero de clulas.
 3 Clculo matemtico del nmero de clulas presentes en 1 mm3 de sangre.
Los recuentos celulares pueden realizarse mediante mtodos manuales (recuentos en cmara)
o automticos (recuentos en contadores electrnicos).

Conteo de glbulos blancos (WBC, por sus siglas en ingls)

Si tiene una infeccin, los glbulos blancos atacan y destruyen las bacterias o virus que la
causan. Los glbulos blancos son ms grandes que los glbulos rojos, y normalmente se tienen
menos. Cuando tiene una infeccin, el nmero de glbulos blancos puede aumentar.

Conteo de glbulos rojos (RBC, por sus siglas en ingls)

Si el conteo de glbulos rojos es bajo (lo que se conoce como anemia), su cuerpo podra no
estar recibiendo el oxgeno que necesita. Si el conteo es demasiado alto (una enfermedad
llamada policitemia), existe el riesgo de que los glbulos rojos se aglutinen y bloqueen vasos
sanguneos diminutos.
(Cristaldo, 2008).

V. MATERIALES Y MTODOS
5.1. MATERIALES

a. Materiales Biolgicos
- Sangre de ovino en tubo de coleccin con EDTA.

b. Materiales Qumicos
- Solucin de Turk (para glbulos blancos)
- Solucin de Gower (para glbulos rojos)
- Colorante Wright
- Solucin amortiguadora
- Aceite de inmersin

c. Equipos e Instrumentos
- Cmara de Neubauer
Tambin se llama cmara cuentaglbulos o hemocitmetro, presenta un
portaobjetos de vidrio grueso que lleva grabados en su superficie tres prismas
paralelos. El prisma central est dividido en dos por un surco transversal. Sobre las
dos mitades se han trazado unos retculos. Los dos prismas laterales estn elevados
0,1 mm con lo que al colocar un cubreobjetos queda constituido un espacio entre el
prisma central y el cubreobjetos y es donde se colocar la muestra de sangre diluida
para efectuar el recuento. El retculo de Neubauer delimita 400 cuadraditos
pequeos con una superficie de 1/400 mm2. Los 4 cuadrados de las esquinas
denominados 1, 3, 7 y 9 se utilizan para el recuento de leucocitos y estos estn a su
vez subdivididos en 16 partes llamados terciarios. El cuadrado central, se utiliza para
contar los eritrocitos, y est dividido en 25 cuadrados terciarios, cada uno de los
cuales mide 0'2 X 0'2 mm (0'04mm2) y cada uno de estos se dividen en 16
cuadrados ms pequeos.
 - Pipetas diluidoras de Thoma
Las pipetas de dilucin son pipetas de cristal que consta de un tubo capilar graduado
marcado con 0,5 en la quinta seal y con 1 en la dcima seal, seguido en su extremo
proximal de una dilatacin o bulbo que lleva una perlita en su interior para facilitar la
mezcla. Por encima del bulbo lleva un capilar corto por donde se introduce el tubo
aspirador y con una seal 101 en la pipeta de eritrocitos y una seal 11 grabado en la
pipeta de dilucin de los leucocitos. La pipeta de recuento de los eritrocitos es roja y la
de leucocitos es blanca. La pipeta de dilucin de eritrocitos tiene una capacidad de 100
veces el volumen del capilar y la de los leucocitos 10 veces el volumen del capilar. En
la pipeta de eritrocitos cuando la sangre es aspirada, hasta la seal de 0'5 y el lquido
de dilucin es aspiracin hasta la seal 101, la dilucin resultante es de 1/200. En caso
de las pipetas de dilucin de leucocitos cuando el envase de la muestra de sangre se
hace en la marca 11, se realiza una dilucin 1/10.Una vez que se llena la ampolla el
capilar no contiene clulas ya que han sido arrastradas por el lquido de dilucin. Para
observarlo en la cmara de recuento habr que vaciar su contenido antes.

Pipetas diluidoras: A = pipeta para recuento de glbulos rojos. B = pipeta para recuento de glbulos blancos.
5.2. METODOLOGA

Paso 1. Aspire la gota de sangre en una pipeta Thomas (11), de mezcla para leucocitos calibrada
hasta la marca 0,5 y seguidamente aspirar sin formacin de burbujas el reactivo de Turk hasta
la marca 11. Agite la pipeta vigorosamente durante 1-2 minutos. En la pipeta de mezcla se
produce una dilucin 1:20.
Nuevamente aspire la gota de sangre (muestra de eritrocitos) utilizando la pipeta Thomas (101)
hasta la marca 0,5 y seguidamente aspire sin formar burbujas, el reactivo de Gower (para
recuento de glbulos rojos) hasta la marca superior 101. Agite durante 1 o 2 minutos. En la pipeta
de mezcla se produce una dilucin 1:200.

Paso 2.
Llenado de la cmara de Neubauer
1. Coloque el cubreobjeto sobre la cmara de Neubauer.
2. Deseche las tres primeras gotas de la sangre diluida en la pipeta.
3. Coloque la muestra de leucocitos en uno de los compartimientos de la cmara y la muestra
de eritrocitos en el otro compartimiento, cuidando de no rebosar el compartimiento calibrado.
Si son visibles burbujas de aire o ha entrado lquido en las ranuras a travs de los bordes,
entonces debe limpiarse a cmara y llenarse de nuevo.
4. Deje reposar las muestras de 2 a 3 minutos para permitir la sedimentacin de los glbulos.

Paso 3.
Recuento en el microscopio ptico y clculo de la concentracin de clulas
paso 4.
realizar Frotis coloreado de sangre

Un frotis bien confeccionado debe constar de una zona inicial

gruesa (cabeza 1), una zona central (cuerpo 2) de mediano
espesor (zona ideal para la lectura) y la zona final (cola 3)
delgada que termina en un borde convexo en forma de
serrucho.
Una vez obtenido el frotis sanguneo, se le dejar secar entre 15 y 20 minutos.
- Luego se coloca la preparacin en un soporte y se cubre con el colorante de Wright, dejndolo
por espacio de 5 minutos.
- Posteriormente se aade solucin amortiguada tamponada en partes iguales hasta obtener un
brillo metlico, dejando 6 minutos adicionales.
- Finalmente se lava con agua corriente y se deja secar.
- Se coloca en el microscopio y, con pequeo aumento, se revisa la calidad de la coloracin, la
cantidad aproximada de glbulos blancos y se escoge el sitio para iniciar el recuento. Se coloca
una gota de aceite de inmersin y se enfoca a un aumento de 100x
- La forma de los glbulos rojos se examinar detenidamente observando adems del color
(cantidad de hemoglobina), presencia de plaquetas, su agrupacin y distribucin.
- Posteriormente, se hace el recuento diferencial de glbulos blancos en 100 clulas, para lo cual
se deber conocer las diferencias entre neutrfilos, eosinfilos, linfocitos y monocitos.
VI. RESULTADOS

Se realiz el conteo de los glbulos blancos y glbulos rojos y tambin la diferenciacin de los
leucocitos. Encontrndose ..
VII. DISCUSIONES

Para evaluar a los leucocitos primero se realiza un conteo mediante mtodos electrnicos o con
las pipetas de Thoma. 0.5 1 11
Las pipetas se llenan de sangre hasta la marca de 0.5 y el resto, con la solucin de Turk (a base
de cido actico glacial y violeta de genciana), hasta la marca de 11 para lograr una dilucin de
1:20; se mezcla perfectamente evitando que se salga lquido.
Despus de unos minutos, se eliminan tres gotas, y las siguientes son empleadas para llenar el
hemocitmetro. ste debe tener un cubreobjetos especial y limpio que se coloca sobre las barras
humedecidas con agua (no poner saliva). Hay que dejar unos minutos en reposo para que
sedimenten las clulas y efectuar la cuenta de manera cmoda (en caso de tener otras
actividades, dejar el hemocitmetro sobre un papel hmedo y bajo una caja de Petri para evitar
que se deshidrate la muestra). (Muoz y Bouda, 2007)

La sangre anticoagulada se deposita en un lquido que permite evidenciar los leucocitos,

mantenindolos visibles, mientras que los eritrocitos son hemolizados. El recuento del nmero
de leucocitos o glbulos blancos se expresa por mm3 (milmetro cbico).
(Muoz y Morn, 2005)

Las clulas ms abundantes son, con gran diferencia, los eritrocitos. Son clulas anucleadas y
quedan teidos de color anaranjado plido. Se puede observar distinta intensidad de coloracin
entre el centro y la periferia, debido a su forma caracterstica de disco bicncavo.
Si recorremos la extensin lentamente, de vez en cuando nos llamarn la atencin los leucocitos,
generalmente ms grandes que los eritrocitos y con sus ncleos intensamente teidos de color
azulvioleta. Las plaquetas son difciles de identificar porque se confunden con partculas de polvo
u otras impurezas que aparecen dispersas por la extensin, pero son bastante abundantes.
(Borbolla, 2005)

VIII. BIBLIOGRAFIA

Borbolla, J R. (2005); Principios de hematologa. Primera edicin, Mxico, D.F. Masson Doyma
Mexico, S.A.

Espinoza, E. (2009). Manual de hematologa. Unison, Mxico. Universidad de Sonora.

Muoz, M E. & Morn, C G. (2005). Manual de procedimientos de laboratorio en tcnicas bsicas de

hematologa. Lima: Ministerio de Salud, Instituto Nacional de Salud.

Nuez, L. & Bouda, J. (2007). Patologa Clnica Veterinaria. Segunda edicin. Mxico. Universidad
Nacional Autnoma de Mxico.

Karp G. (2009). Biologa Celular y Molecular. 5 edicin. Mxico. Edit McGraw-Hill Interamericana.

Cristaldo, D O. (2008) Pruebas que Conforman el Hemograma. Curso Parmetros Del

Hemograma. Utilidad E Interpretacin. Resolucin 811/08 C.D. Corrientes, 16 de octubre de 2008.