PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATLICA DEL ECUADOR

FACULTAD DE MEDICINA

CARRERA DE BIOQUMICA CLNICA

Laboratorio de Biologa Molecular

Alumno: Melany Loachamin Grupo: 2

Fecha de entrega: mircoles 20 de Diciembre, 2017.

PRCTICA #8

TEMA: Electroforesis de gel en agarosa

OBJETIVOS:

INTRODUCCIN:

Una tcnica que se usa para separar fragmentos de ADN y otras macromolculas por tamao y
carga.

La electroforesis en gel es una tcnica utilizada para separar fragmentos de ADN segn su
tamao.

Las muestras de ADN se cargan en pozos (ranuras) en un extremo de un gel y se aplica una
corriente elctrica para arrastrarlas a travs del gel.

Los fragmentos tienen carga negativa, por lo que se mueven hacia el electrodo positivo. Puesto
que todos los fragmentos de ADN tienen la misma cantidad de carga por masa, los fragmentos
pequeos atraviesan el gel ms rpido que los grandes.

Cuando un gel se tie con un pigmento que se une al ADN, los fragmentos de ADN pueden
verse como bandas, las cuales representan un grupo de fragmentos de ADN del mismo
tamao.

La electroforesis en gel es una tcnica utilizada para separar fragmentos de ADN (u otras
macromolculas, como ARN y protenas) por su tamao y carga. La electroforesis consiste en
aplicar una corriente a travs de un gel que contiene las molculas de inters. Con base en su
tamao y carga, las molculas se desplazarn por el gel en diferentes direcciones o a distintas
velocidades, con lo que se separan unas de otras.

[De dnde viene el nombre "electroforesis"?]

^1start superscript, 1, end superscript

Todas las molculas de ADN tienen la misma cantidad de carga por masa. Debido a esto, la
electroforesis en gel separa los fragmentos de ADN nicamente por su tamao. La
electroforesis nos permite ver cuntos fragmentos diferentes de ADN estn presentes en una
muestra y cun grandes son unos con respecto a otros. Tambin podemos determinar el
tamao absoluto de un fragmento de ADN examinndolo junto a una "escala" estndar de
fragmentos de tamao conocido.
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Cmo se mueven los fragmentos de ADN a travs del gel?

Una vez que el gel est en la cmara, cada una de las muestras de ADN que queremos analizar
(por ejemplo, cada reaccin de PCR o cada plsmido digerido con enzimas de restriccin) se
transfiere cuidadosamente a uno de los pozos. Un pozo se reserva para el marcador de peso
molecular, un estndar de referencia que contiene fragmentos de ADN de longitudes
conocidas. Los marcadores de ADN comerciales cubren diferentes intervalos de tamaos, por
lo que trataremos de usar uno con buena "cobertura" en el intervalo de tamaos en el que
esperamos encontrar nuestros fragmentos.

A continuacin, se aplica energa elctrica a la cmara y empieza a fluir corriente a travs del
gel. Los grupos fosfato de su esqueleto de azcares-fosfato le otorgan una carga negativa a las
molculas de ADN, por lo que comienzan a moverse a travs de la matriz de gel hacia el polo
positivo. Cuando el sistema est encendido y pasa corriente por el gel, se dice que el gel
est corriendo.

Visualizacin de los fragmentos de ADN

Una vez que los fragmentos se han separado, podemos examinar el gel y saber el tamao de
las bandas que se encuentran en l. Cuando un gel se tie con un pigmento que se une al ADN
y se coloca bajo luz UV, los fragmentos de ADN brillarn, lo cual nos permite ver el ADN
presente en distintos lugares a lo largo del gel.

Una "lnea" de ADN bien definida en un gel se llama banda. Cada banda contiene un gran
nmero de fragmentos de ADN del mismo tamao que han viajado juntos a la misma posicin.
Un fragmento nico de ADN (o incluso un pequeo grupo de fragmentos de ADN) no sera
visible por s mismo en un gel.

Al comparar una banda en una muestra con el marcador de peso molecular, podemos
determinar su tamao aproximado. Por ejemplo, la banda brillante del gel anterior tiene un
tamao aproximado de 700700700pares de bases (pb).

RESUMEN:

En la presente prctica se ejecut la tcnica electroforesis con gel agarosa para determinar la
cantidad y calidad de ADN en muestras de sangre, isopado bucal, suspensin bacteriana y
kiwi realizadas anteriormente. Se prepar la muestra y el gel de agarosa al 1% donde se corren
las muestras de ADN. Finalmente se realiz la observacin de las bandas en el equipo Gel Doc
XR+ BIO-RAD.
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PROCEDIMIENTO:

PREPARAR 400 ml de tampn TAE 1X (cada grupo)

Colocar en matraz 80 mL del tampn de electroforesis TAE 1X, pesar 0.8 g de la agarosa y
mezclar ( concentracin final de la agarosa: 1%)

Fundir la solucin de agarosa en un microondas de 1 a 2 minutos aprox. En ciclos de 10

RESULTADOS:

CONCLUSIONES:

CUESTIONARIO

Que es un agente intercalante de DNA y cuantos conoce?

Que indica la intensidad de las bandas en el gel

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Calcular los tamaos de sus bandas obtenidad en su experimento y adjuntar la imagen la

informe

BIBLIOGRAFA