Abdul Rohim Analisa Kandungan

UJI FITOKIMIA, TOKSISITAS SERTA ANTIOKSIDAN EKSTRAK PROPOLIS

PEMBUNGKUS MADU LEBAH Trigona Incisa DENGAN METODE 2,2-diphenyl-1-
picrylhidrazyl (DPPH)

THE PHYTOVHEMICAL TEST, BRINE SHRIMP LETHALITY TEST, AND ACTIVITY

ANTIOXIDANT FROM EXTRACTS OF PROPOLIS Trigona Incisa WITH 2,2-Diphenyl-1-
Picrylhidrazyl (DPPH) METHOD

Aswin Thamrin1, Erwin1*, Syafrizal2

1
Jurusan Kimia, FMIPA, Universitas Mulawarman Samarinda
2
Jurusan Biologi, FMIPA, Universitas Mulawarman Samarinda
*Corresponding Author : winulica@yahoo.co.id

ABSTRACT
Phytochemical test, test the mortality of larvae shrimp (Brine Shrimp Lethality Test) and test the antioxidant
activity of secondary metabolites extract of propolis Trigona Incisa been done. Based on the test results of
phytochemical screening of secondary metabolites contained in propolis extracts showed that the crude extract contains
phenolic compounds and alkaloids. Ethanol fraction containing alkaloids and phenolic compounds. Ethyl acetate
fraction containing alkaloid compounds. Mortality of shrimp larvae test performed to determine the toxicity values
propolis extract obtained values of 50% Lethal Concentration (LC50) at 249.6079 ppm for ethanol fraction as the most
active fraction. Based on the test of antioxidant activity with DPPH values obtained Inhibition Concentration 50%
(IC50) in the crude extract of 139.47 ppm ethanol, ethanol fraction at 109.44 ppm, 91.42 ppm ethyl acetate fraction and
vitamin C amounted to 59.44 ppm , It can be stated that the most active fraction is the fraction of ethyl acetate with
IC50 value of 91.42 ppm..

Keywords : Propolis, Trigona Incisa, Antioxidant Activity.

PENDAHULUAN langsung, namun karena sifatnya yang lengket

Antioksidan merupakan substansi nutrisi
maupun non-nutrisi yang terkandung dalam
bahan pangan, yang mampu mencegah atau
memperlambat terjadinya reaksi oksidasi dalam
tubuh. Antioksidan sangat bermanfaat bagi
kesehatan dan kosmetik serta berperan penting
dalam mempertahankan mutu produk pangan.
(Heo dkk., 2005 dan Tamat dkk., 2007). Propolis
merupakan salah satu bahan yang mengandung
antioksidan alami dari senyawa metabolit
sekunder berupa fenol dan flavonoid. Menurut
Robinson (1995) dikutip Jaya et al., (2006)
menjelaskan bahwa kemampuan propolis sebagai
antioksidan dapat menangkap radikal hidroksi
dan superoksida kemudian menetralkan radikal
bebas, sehingga melindungi sel dan
mempertahankan keutuhan struktur sel dan
jaringan serta dapat melindungi membran lipid
terhadap reaksi yang merusak.
Menurut Krell (1996) dikutip Lasmayanty
(2007), lebah Trigona Incisa tidak populer karena
produktivitas madunya sangat rendah, namun
propolis yang dihasilkannya lebih banyak
dibandingkan dengan lebah jenis lainnya.
Propolis mentah dapat dikonsumsi secara
pada suhu ruang menyebabkan kesulitan dalam
mengkonsumsinya. Propolis mentah dapat
diproses menjadi bubuk propolis atau dengan
mengekstrak propolis cair sebelum dikonsumsi.
Eksraksi propolis dilakukan dengan metode
ekstraksi kimia (Winarno, 1981).
Menurut Sarwono (2001), propolis banyak
mengandung senyawa organik, diantaranya yaitu
damar malam, minyak yang mudah menguap dan
mineral. Berdasarkan penelitian sebelumnya hasil
analisis fitokimia pada ekstrak etanol propolis
positif mengandung senyawa flavonoid dan
fenolik (Sholikhah, 2012). Dalam dunia
pengobatan, propolis juga dapat digunakan untuk
mengobati saluran pernapasan karena
mempunyai sifat antibakteri.
Berdasarkan uraian di atas, perlu dilakukan
penelitian untuk mengetahui jenis senyawa
metabolit sekunder yang terkandung di dalam
propolis, fraksi apa yang paling aktif terhadap
larva udang (Artemia salina L.) melalui uji BSLT
(Brine Shrimp Lethality Test), dimana akan
ditentukan efektivitas daya racun dari setiap
fraksi (Meyer dkk., 1982) serta untuk mengetahui
besarnya aktivitas antioksidan dengan metode

54 Kimia FMIPA Unmul

Jurnal Kimia Mulawarman Volume 14 Nomor 1 November 2016
Kimia FMIPA Unmul
peredaman radikal 2,2-diphenyl-1-picrylhidrazyl
(DPPH) dari ekstrak propolis
METODOLOGI PENELITIAN
Pengambilan sampel propolis dilakukan
secara manual. Tahap selanjutnya adalah sampel
kemudian dimaserasi dengan pelarut etanol 70 %
dan dipekatkan dengan menggunakan rotari
evaporator dan di diamkan di dalam desikator
selanjutnya dirotari evaporator kembali untuk
mandapatkan ekstrak kasar/total. Kemudian
ekstrak kasar/total difraksinasi menjadi fraksi
etanol dan fraksi etil asetat. Setelah didapatkan
ekstrak kasar dan kedua fraksi, kemudian akan
dilakukan analisis fitokimia dan uji mortalitas
larva udang (brine shrimp lethality test) serta
akan dilakukan uji aktivitas antioksidan dengan
menggunakan metode peredaman radikal bebas
2,2-diphenyl-1-picrylhidrazyl (DPPH) dengan
menggunakan alat spektrofotometer.
Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian
ini adalah rotari evaporator, beaker gelas,
erlenmeyer, gelas ukur, corong, corong pisah,
neraca analitik, tabung reaksi, pipet volume,
saringan, panci, gelas, pipet tetes, mikropipet
ukuran 100-1000 µL, labu ukur, batang
pengaduk, kertas saring Whatman no.1,
aluminium foil, lampu TL, hot plate, freezer dan
spektrofotometer UV-Vis.
Bahan
Bahan-bahan yang digunakan adalah
propolis, etanol, etil asetat, kloroform, heksana,
dietil eter, H2SO4, asam asetat glasial,
Bi(NO3)3.5H2O, HgCl2, HNO3 pekat, KI, FeCl3,
HCl, serbuk Mg, aquades, air laut, DMSO, DPPH
(2,2-diphenyl-1-picrylhidrazyl) dan Vitamin C.
Prosedur Penelitian
Persiapan Sampel
Propolis Trigona Incisa yang diambil dari
Kebun Raya Samarinda didiamkan selama
semalam. Setelah didiamkan akan mengeras atau
memadat dan setelah memadat dihaluskan.
Ekstraksi Senyawa Metabolit Sekunder
Sampel propolis yang telah dihaluskan
ditimbang sebanyak 100 gr kemudian dimaserasi
dengan etanol 70 % sebanyak 250 mL dengan
kurun waktu selama 3-7 hari (Ditjen POM,
1986). Terlebih dahulu dilakukan pengenceran
etanol 96 % menjadi 70 % dengan menggunakan
labu takar. Kemudian disaring dan pelarut
diuapkan dengan rotari evaporator. Selanjutnya
menguapkan pelarut aquadest yang ada dalam
Kimia FMIPA Unmul
P-ISSN 1693-5616
E-ISSN 2476-9258
ekstrak dengan menggunakan desikator selama 7
hari. Kemudian diambil 100 ml dan diuapkan
kembali dengan rotari evaporator hingga kental
sehingga diperoleh ekstrak kasar etanol.
Selanjutnya ekstrak kasar etanol tersebut
difraksinasi. Caranya adalah sebagai berikut:
ekstrak kasar etanol yang telah bebas etanol
ditambahkan campuran etanol dan etil asetat
dengan perbandingan (v/v). Fraksinasi dilakukan
dengan corong pisah, sehingga diperoleh 2 fraksi,
yaitu fraksi etanol dan faksi etil asetat. Fraksi etil
asetat dipekatkan dengan rotari evaporator dan
disebut sebagai ekstrak fraksi etil asetat,
dilakukan berulang sebanyak 3 kali fraksinasi
sehingga di dapatkan 3 hasil ekstrak fraksi etil
asetat. Selanjutnya fraksi etanol yang tersisa
kemudian dipekatkan dengan rotari evaporator
dan hasilnya disebut sebagai ekstrak fraksi
etanol.
Pada ekstrak kasar dan kedua fraksi (fraksi
etil asetat dan fraksi etanol) kemudian akan
dilakukan analisis fitokimia dan uji mortalitas
larva udang (brine shrimp lethality test).
Selanjutnya ekstrak kasar dan kedua fraksi
dilakukan uji aktivitas antioksidan dengan
menggunakan metode peredaman radikal bebas
2,2-diphenyl-1-picrylhidrazyl (DPPH) dengan
menggunakan spektrofotometer.
Analisis Fitokimia
1. Uji Alkaloid (Uji Meyer’s dan
Dragendroff)
Ekstrak kasar etanol propolis dan fraksi-
fraksinya ditambahkan 10 mL kloroform-
amoniak, lalu disaring kedalam tabung reaksi.
Filtrat ditambah dengan beberapa tetes asam
sulfat 2 M dan dikocok sehingga terbentuk dua
lapisan. Lapisan asam (terdapat pada bagian atas)
dipipet ke dalam tabung reaksi lain, lalu
ditambah pereaksi Meyer’s (5 gram KI dilarutkan
dalam 90 mL air dan ditambahkan perlahan-lahan
HgCl2 sambil diaduk dan diencerkan sampai
volume 100 mL) dan pereaksi Dragendroff
(campuran Bi(NO3)3.5H2O dalam asam nitrat dan
larutan KI). Adanya alkaloid ditunjukkan dengan
terbentuknya endapan putih dengan pereaksi
Meyer’s dan endapan jingga sampai merah coklat
dengan pereaksi Dragendroff (Darwis, 2000).
2. Uji Saponin/Uji Forth
Ekstrak kasar etanol propolis dan fraksi-
fraksinya diekstraksi dengan dietil eter sebanyak
tiga kali, dari fraksi ekstrak tersebut dihasilkan
fraksi yang larut dalam dietil eter dan yang tidak
larut dalam dietil eter. Fraksi yang tidak larut
dalam dietil eter kemudian ditambahkan air
55
Abdul Rohim
kurang lebih 5 mL dalam tabung reaksi kemudian
dikocok. Ekstrak positif mengandung saponin
jika timbul busa dengan ketinggian 1-3 cm yang
bertahan selama 15 menit (Kadarisman, 2000).
3. Uji Steroid dan Triterpenoid/ Uji
Lieberman-Burchard
Ekstrak kasar etanol propolis dan fraksi-
fraksinya yang larut dalam dietil eter dari uji
saponin dipisahkan, lalu dtambah dengan
CH3COOH glasial dan H2SO4 pekat. Larutan
dikocok perlahan dan dibiarkan selama beberapa
menit. Steroid memberikan warna biru atau hijau,
sedangkan triterpenoid memberikan warna merah
atau ungu ( Kadarisman, 2000).
4. Uji Flavonoid
Ekstrak kasar etanol propolis dan fraksi-
fraksinya ditambah dengan 100 mL air panas,
dididihkan selama 5 menit, kemudian disaring.
Filtrat sebanyak 5 mL ditambah sedikit serbuk
Mg dan 1 mL HCl pekat, kemudian dikocok
kuat-kuat. Uji positif ditunjukkan oleh
terbentuknya warna merah, kuning, atau jingga
(Chozin, 1996).
5. Uji Fenol
Ekstrak kasar etanol propolis dan fraksi-
fraksinya ditambahkan beberapa tetes FeCl3 1 %
dalam air atau etanol. Ekstrak positif
mengandung fenolik apabila menghasilkan warna
hijau, merah, ungu, biru atau hitam pekat
(Kadarisman, 2000).
Uji Mortalitas Larva Udang (Brine Shrimp
Lethality Test)
Sebanyak 10 mg telur udang (Artemia
salina L.) ditambahkan 100 mL air laut yang
telah disaring. Selanjutnya diberi pencahayaan
lampu TL agar menetas sempurna. Setelah 48
jam telur udang menetas dan siap untuk di uji
cobakan (Kadarisman, 2000).
Ditimbang ekstrak kasar sebanyak 0,2 gr
dan dilarutkan dengan air laut hingga volumenya
mencapai 100 mL dalam labu ukur, untuk
membuat konsentrasi sampel 2000 ppm. Sampel
dengan konsentrasi 1000 ppm; 500 ppm; 250
ppm; 125 ppm; 62,5 ppm; 31,2 ppm; 15,6 ppm
dan 7,8 ppm dibuat dari pengenceran sampel dari
konsentrasi 2000 ppm. Masing-masing sampel
kemudian dipipet sebanyak 2500 µL dan
dimasukkan kedalam tabung reaksi, kemudian
ditambah 2500 µL air laut yang berisi 10 larva
udang pada setiap sampel sehingga volume
sampel menjadi setengahnya (1000 ppm; 500
ppm; 250 ppm; 125 ppm; 62,5 ppm; 31,2 ppm;
15,6 ppm dan 7,8 ppm). Jumlah larva udang yang
mati dihitung setelah 24 jam dan dianalisa untuk
56
Analisa Kandungan
menentukan nilai Lethality Consentration LC50.
Kontrol dikerjakan sama dengan perlakuan
sampel, tetapi tanpa penambahan ekstrak kasar.
Ekstrak sampel yang sukar larut dapat
ditambahkan DMSO 1 % satu sampai tiga tetes
(Kadarisman, 2000). Setiap sampel dilakukan uji
mortalitas sebanyak tiga kali (triplo). Ekstrak
fraksi etil asetat dan fraksi etanol juga dilakukan
uji mortalitas larva udang (Brine Shrimp
Lethality Test) dengan prosedur yang sama
seperti pada ekstrak kasar (Wijaya, 2006). Data
yang diperoleh dimasukkan ke dalam lembar
pengamatan.
Uji Aktivitas Antioksidan
Uji peredaman pereaksi DPPH dilakukan
dengan mengacu pada metode (Bouftira, 2007)
menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada
suhu kamar (25oC) pada panjang gelombang 516
nm dan larutan DPPH (2,2-diphenyl-1-
picrylhidrazyl) digunakan sebagai radikal bebas
serta vitamin C sebagai pembanding.
1. Penyiapan Larutan DPPH
Kristal DPPH ditimbang sebanyak 8 mg
dan dilarutkan dengan 100 mL etanol di dalam
labu ukur gelap sehingga didapatkan larutan
DPPH dengan konsentrasi 0,08 mg/mL yang
digunakan pada pengujian. Larutan disimpan
pada tempat tertutup rapat dan terlindung dari
cahaya.
2. Penentuan Panjang Gelombang Serapan
Maksimum DPPH
Pipet sebanyak 1 mL larutan DPPH 0,08
mg/mL dan ditambahkan dengan 1 mL etanol.
Setelah dibiarkan selama 30 menit ditempat gelap
serapan larutan diukur dengan spektrofotometer
UV-Vis pada panjang gelombang 516 nm untuk
mendapatkan panjang gelombang maksimum.
3. Pembuatan Konsentrasi Ekstrak Sampel
Ekstrak ditimbang 20 mg, kemudian
dilarutkan dengan etanol sampai volumenya 40
mL. Dengan demikian diperoleh konsentrasi
larutan ekstrak sampel (ekstrak kasar etanol dan
masing-masing fraksi) yaitu 500 ppm. Kemudian
ekstrak kasar dan masing-masing fraksi dengan
konsentrasi 500 ppm diencerkan untuk
mendapatkan konsentrasi 10, 25, 50, 75 dan 100
ppm dengan menggunakan mikro pipet dan
masing-masing konsentrasi dibuat 3
pengulangan.
4. Pembuatan Konsentrasi Vitamin C
(Pembanding)
Kimia FMIPA Unmul
Jurnal Kimia Mulawarman Volume 14 Nomor 1 November 2016 P-ISSN 1693-5616
Kimia FMIPA Unmul E-ISSN 2476-9258

Vitamin C baku ditimbang sebanyak 10 AKN = Absorbansi control negatif (berisi 1 ml

mg dan dilarutkan dengan etanol sampai metanol + 1 ml DPPH)
volumenya 10 mL menggunakan labu ukur, (Karamac dkk., 2002).
sehingga didapat larutan induk vitamin C dengan
konsentrasi 1000 ppm, kemudian diambil 1 mL HASIL DAN PEMBAHASAN
larutan induk vitamin C dan dilarutkan dengan Uji Fitokimia
etanol sampai volumenya 10 mL menggunakan Berdasarkan uji skrining fitokimia ekstrak
labu ukur coklat, sehingga didapat konsentrasi kasar, fraksi etanol dan fraksi etil asetat dari
vitamin C 100 ppm. Setelah itu, dari konsentrasi propolis yang diperoleh adalah sebagai berikut:
vitamin C 100 ppm dibuat seri konsentrasi
larutan vitamin C dengan konsentrasi berturut- Tabel 1. Hasil Uji Fitokimia dari Ekstrak Kasar dan
turut 5, 10, 15, 20 dan 25 ppm dengan Kedua Fraksi Propolis
menggunakan mikro pipet dan masing-masing Jenis Ekstraksi
konsentrasi dibuat 3 pengulangan. Uji Fitokimia Ekstrak Fraksi Fraksi Etil
Kasar Etanol Asetat
Penentuan Persen Peredaman
Alkaloid + + +
1. Sampel propolis
Masing-masing konsentrasi ekstrak (10, Fenolik + + -
25, 50, 75 dan 100 ppm) dipipet sebanyak 1 mL
Steroid - - -
dan dimasukan ke dalam tabung reaksi.
Kemudian ditambahkan 1 mL larutan DPPH - - -
Flavonoid
0,024 mg/mL, dihomogenkan dan diinkubasi
selama 30 menit ditempat gelap. Selanjutnya Saponin - - -
diukur absorbansinya dengan spektrofotometer
Triterpenoid - - -
UV-Vis pada panjang gelombang maksimum.
2. Vitamin C (Pembanding)
Masing-masing konsentrasi vitamin C Berdasarkan hasil dari uji fitokimia pada
(konsentrasi 1, 1,5, 2, 2,5, 3 ppm) dipipet ekstrak kasar etanol, fraksi etanol dan fraksi etil
sebanyak 1 mL dan dimasukan ke dalam tabung asetat propolis Trigona Incisa, dapat diketahui
reaksi. Kemudian ditambahkan 1 mL larutan jenis metabolit sekundernya sesuai dengan tabel
DPPH 0,024 mg/mL, dihomogenkan dan 4.2. Pada ekstrak kasar diketahui positif
diinkubasi selama 30 menit ditempat gelap. mengandung alkaloid, fenolik, dan saponin. Pada
Selanjutnya diukur absorbansinya dengan fraksi etanol diketahui positif mengandung
spektrofotometer UV-Vis pada panjang alkaloid dan fenolik, sedangkan pada fraksi etil
gelombang maksimum. asetat diketahui hanya positif mengandung
alkaloid saja.
Analisis Data
Nilai dengan kematian 50% dalam 1 hari Uji Mortalitas Larva Udang (BSLT)
(LC50 dalam unit waktu) ditentukan dengan Berdasarkan uji mortalitas larva udang
menggunakan Analisis Probit SAS. Efektivitas (BSLT) ekstrak kasar, fraksi etanol dan fraksi
dari fraksi-fraksi terhadap larva (Artemia salina etil asetat dari propolis yang diperoleh adalah
L.) dinyatakan dalam LC50 (ppm) 24 jam setelah sebagai berikut:
perlakuan.
Presentase aktivitas antioksidan dari Tabel 2. Hasil Uji Mortalitas Larva Udang (BSLT)
ekstrak dalam menangkap atau meredam radikal dari Ekstrak Kasar dan Kedua Fraksi
bebas DPPH yang dinyatakan dalam % inhibisi, Jenis Ekstrak Nilai LC50 (ppm)
yang diperoleh dengan menggunakan rumus : Ekstrak kasar 355,46
%AA = 100 – {[(AB – AA)] x 100 / AKN} Fraksi etanol 249,60
Keterangan : Fraksi etil asetat 276,35
%AA = Persentase aktivitas antioksidan
AA = Absorbansi blanko (berisi 1 ml ekstrak Menurut Mc Laughlin (1998) dalam
dalam metanol + 1 ml metanol) pengamatan potensi bioaktivitas ini dilakukan
AB = Absorbansi sampel (berisi 1 ml ekstrak berdasarkan nilai Lethal Concentration 50 %
dalam metanol + 1 ml DPPH) (LC50) yaitu suatu nilai yang menunjukkan

Kimia FMIPA Unmul 57

Abdul Rohim Analisa Kandungan

konsentrasi zat toksik yang dapat mengakibatkan
kematian organisme sampai 50 %. Apabila LC50
< 30 ppm maka ekstrak sangat toksik dan
berpotensi mengandung senyawa bioaktif
antikanker. Meyer (1982) menyebutkan tingkat
toksisitas suatu ekstrak :
LC50 ≤ 30 ppm = Sangat toksik
31 ppm ≤ LC50 ≤ 1.000 ppm = Toksik
LC50 > 1.000 ppm = Tidak toksik
Berdasarkan hasil uji mortalitas larva
udang dari ekstrak kasar etanol diperoleh nilai
LC50 355,4602 ppm; pada ekstrak fraksi etanol
diperoleh nilai LC50 249,6079 ppm dan pada
ekstrak fraksi etil asetat diperoleh nilai LC 50
276,3536 ppm. Nilai ini menunjukkan bahwa
pada konsentrasi tersebut, ekstrak sampel mampu
membunuh larva udang sampai 50 % populasi.
Nilai LC50 dari uji mortalitas larva udang
diperoleh dengan menggunakan Analisis Probit
SAS.
Berdasarkan data tersebut menunjukkan
bahwa fraksi etanol memiliki bioaktivitas paling
tinggi terhadap larva udang yang ditunjukkan
dengan nilai LC50 paling kecil yaitu 249,6079
ppm. Nilai ini menunjukkan bahwa pada
konsentrasi 249,6079 ppm fraksi etanol mampu
membunuh larva udang sampai 50 % populasi.
Semakin kecil nilai LC50 (Lethal Concentration
50 %) dari suatu sampel maka semakin tinggi
toksisitasnya.
Tingginya toksisitas dari fraksi etanol
terhadap larva udang jika dibandingkan dengan
ekstrak kasar dan fraksi etil asetat diperkirakan
karena konsentrasi kandungan senyawa alkaloid
yang cukup tinggi, hal tersebut dikarenakan pada
fraksi etanol senyawa alkaloid lebih aktif dalam
fase yang polar.
Pada ekstrak kasar nilai LC50 diperoleh
sebesar 355,4602 ppm yang berarti bioaktivitas
pada ekstrak kasar lebih rendah dibandingkan
dengan fraksi etanol dan fraksi etil asetat. Hal ini
dimungkinkan karena rendahnya konsentrasi
pelarut yang terkandung didalam ekstrak kasar
tersebut.
Walaupun tingkat toksisitas dari ekstrak
kasar dan fraksi etil asetat lebih kecil dari
toksisitas fraksi etanol, namun semua ekstrak ini
tetap dikatakan toksik karena berdasarkan studi
yang dilakukan Meyer (1982), senyawa kimia
dikatakan berpotensi aktif bila mempunyai nilai
LC50 kurang dari 1.000 ppm. Dengan demikian
dapat dikatakan bahwa ekstrak kasar etanol,
fraksi etanol dan fraksi etil asetat berpotensi aktif
karena nilai LC50 yang dihasilkan kurang dari
1.000 ppm.
Uji Aktivitas Antioksidan
Berdasarkan uji aktivitas antioksidan
ekstrak kasar, fraksi etanol dan fraksi etil asetat
dari propolis yang diperoleh adalah sebagai
berikut:
Tabel 3. Hasil Uji Aktivitas Antioksidan dari
Ekstrak Kasar dan Kedua Fraksi Propolis
Jenis Ekstrak Nilai IC50 (ppm)
Ekstrak kasar 139,47
Fraksi etanol 109,44
Fraksi etil asetat 91,42
Berdasarkan hasil analisa data dengan
menggunakan regresi linear sederhana sehingga
diperoleh grafik linear dan persamaan regresi
linear antara konsentrasi ekstrak kasar etanol,
fraksi etanol dan fraksi etil asetat dari sampel
propolis dengan persen peredaman radikal DPPH
(%AA) dapat dilihat pada lampiran 15,16,17 dan
vitamin C sebagai pembanding pada lampiran 18.
Parameter yang digunakan untuk uji
penangkapan radikal DPPH adalah nilai IC 50
(Inhibition Concentration 50). Nilai IC 50
didefinisikan sebagai besarnya konsentrasi
ekstrak yang dapat menghambat aktivitas radikal
bebas DPPH sebesar 50 %. Dimana nilai IC 50
diperoleh dari suatu persamaan regresi linear
yang menyatakan hubungan antara konsentrasi
ekstrak uji dengan persen penangkapan radikal.
Nilai IC50 yang semakin kecil menunjukkan
aktivitas antioksidan pada bahan yang diuji
semakin besar. Untuk melihat besarnya nilai IC 50
dari masing-masing ekstrak serta vitamin C,
dapat dilihat pada grafik berikut ini:
139.47
150 109.44
91.42
100 59.44
50
0
Ekstrak Fraksi Fraksi Vitamin
Kasar Etanol Etil C
asetat
Nilai IC50
Gambar 1. Grafik nilai IC50 pada ekstrak kasar,
fraksi etanol, fraksi etil asetat dan
vitamin C

58 Kimia FMIPA Unmul

Jurnal Kimia Mulawarman Volume 14 Nomor 1 November 2016
Kimia FMIPA Unmul
Pada gambar 1, dapat dilihat bahwa nilai
IC50 dari ekstrak kasar dan kedua fraksi yaitu
fraksi etanol dan fraksi etil asetat semuanya lebih
besar dari vitamin C yang digunakan sebagai
pembanding, hal ini dikarenakan ekstrak propolis
bukan merupakan senyawa murni tetapi masih
mengandung senyawa-senyawa lain yang
kemungkinan tidak memiliki daya aktivitas
antioksidan. Semakin kecil nilai IC50 berarti
semakin tinggi aktivitas antioksidan. Secara
spesifik, suatu senyawa dikatakan sebagai
antioksidan sangat kuat apabila nilai IC50 ≤ 50
ppm, kuat apabila nilai IC50 antara 50-100 ppm,
sedang apabila nilai IC50 antara 101-150 ppm dan
lemah apabila nilai IC50 lebih dari 151 ppm.
Berdasarkan klasifikasi di atas, dapat
disimpulkan bahwa pada ekstrak kasar dan fraksi
etanol memiliki potensi antioksidan yang
dikategorikan sedang dikarenakan nilai IC50
untuk ekstrak kasar yaitu sebesar 139,47 ppm dan
untuk fraksi etanol nilai IC50 yaitu sebesar 109,44
ppm, sedangkan untuk fraksi etil asetat
dikategorikan sebagai antioksidan kuat
dikarenakan memiliki nilai IC50 sebesar 91,42
ppm.
Berdasarkan penjelasan diatas, dapat
dikatakan bahwa fraksi etil asetat memiliki
aktivitas antioksidan paling kuat jika
dibandingkan dengan ekstrak kasar dan fraksi
etanol. Hal ini dikarenakan pada fraksi etil asetat
kemungkinan terdapat kandungan senyawa aktif
yang berbeda dengan ekstrak lainnya dan jumlah
yang berbeda pula (Yulianti, 2013). Dimana
dalam penelitian ini untuk fraksi etil asetat,
senyawa metabolit sekundernya yaitu alkaloid
diduga terkonsentrasi, sehingga daya aktivitas
antioksidannya paling kuat. Untuk fraksi etanol
memiliki aktivitas antioksidan yang hampir
mendekati fraksi etil asetat, yaitu memiliki daya
antioksidan sedang. Fraksi etanol mengandung
senyawa metabolit sekunder alkaloid dan fenolik,
dimana kekuatan antioksidan pada fraksi etanol
ini dikategorikan sedang. Hal ini kemungkinan
terjadi dikarenakan adanya senyawa alkaloid dan
fenolik yang belum terkonsentrasi. Sedangkan
untuk ekstrak kasar etanol yang juga
mengandung senyawa alkaloid dan fenolik
memiliki tingkat aktivitas antioksidan yang sama
dengan fraksi etanol yaitu dikategorikan sedang.
Hal ini dimungkinkan terjadi karena adanya
aktivitas antioksidan yang tidak sinergis terhadap
fraksi etanol yang dimana senyawa metabolit
sekundernya masih bercampur baik senyawa
Kimia FMIPA Unmul
P-ISSN 1693-5616
E-ISSN 2476-9258
yang bersifat polar maupun non polar sehingga
menyebabkan aktivitas antioksidannya menurun.
Jika hasil uji aktivitas antioksidan
dihubungkan dengan nilai LC50 yang diperoleh,
dapat diketahui bahwa fraksi etil asetat memiliki
aktivitas antioksidan paling kuat dengan nilai
IC50 91,42 ppm dan nilai LC50 yang diperoleh
dari fraksi etil asetat adalah 276,3536 ppm. Dari
hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa pada
konsentrasi 91,42 ppm, fraksi etil asetat mampu
menangkap radikal DPPH sebesar 50%. Dalam
hal ini fraksi etil asetat mempunyai aktivitas
antioksidan lebih besar dibandingkan dengan
fraksi etanol dan ekstrak kasar. Sedangkan nilai
LC50 yang diperoleh, menunjukkan bahwa pada
konsentrasi 276,3536 ppm fraksi etil asetat
mampu membunuh larva udang sampai 50%
populasi. Artinya dapat dikatakan bahwa fraksi
etil asetat dikategorikan bersifat toksik karena
nilai LC50 dibawah dari 1000 ppm. Hasil analisis
untuk fraksi etanol memiliki nilai IC50 sebesar
109,44 ppm, sehingga aktivitas antioksidan yang
dimiliki pada fraksi etanol dikategorikan sedang,
dikarenakan nilai IC50 untuk fraksi etanol berada
pada rentang 101-150 ppm. Akan tetapi pada
fraksi etanol ini masih belum baik untuk
digunakan sebagai antioksidan, karena dilihat
dari nilai LC50 yang diperoleh adalah 249,6079
ppm. Hal ini menunjukkan bahwa fraksi etanol
dikategorikan masih bersifat toksik, karena nilai
LC50 masih dibawah 1000 ppm. Sedangkan pada
ekstrak kasar, nilai IC50 yang diperoleh adalah
139,47 ppm. Sehingga dapat dikatakan bahwa
daya aktivitas antioksidan yang dimiliki pada
ekstrak kasar dikategorikan sedang dan nilai
LC50 yang diperoleh adalah sebesar 355,4602
ppm. Jadi dapat dikatakan bahwa pada ekstrak
kasar juga tidak baik digunakan sebagai
antioksidan karena dilihat dari nilai LC50 yang
diperoleh sangat tinggi dan dan dikategorikan
masih bersifat toksik.
Salah satu senyawa yang berpotensi
sebagai antioksidan adalah senyawa alkaloid,
karena pada umunya alkaloid mencakup senyawa
bersifat basa yang mengandung satu atau lebih
atom nitrogen, biasanya dalam gabungan, sebagai
bagian dari sitem siklik. Alkaloid seringkali
beracun bagi manusia tetapi banyak yang
mempunyai kegiatan fisiologi yang menonjol,
jadi dapat digunakanakan secara luas dalam
bidang pengobatan (Harborne, 1996).
Sebagian alkaloid juga memiliki kemampuan
sebagai antioksidan, contohnya indol alkaloid
seperti strisin dan brusin bila dilihat dari
59
Abdul Rohim Analisa Kandungan

strukturnya dapat menghambat O2 serat kafein IC50 yang diperoleh adalah 139,47 ppm, untuk
dapat bertindak sebagai perdam hidroksil radikal. fraksi etanol yang diperoleh adalah 109,44
Senyawa berbasis nitrogen dari bahan alam ppm dan fraksi etil asetat yang diperoleh
berpotensi menghambat berbagai proses adalah 91,42 ppm.
oksidatif. Senyawa radikal turunan dari senyawa
amina memiliki tahap terminasi yang sangat DAFTAR PUSTAKA
lama, dengan demikian mampu menghentikan Achmad, S. A. 1986. Kimia Organik Bahan
reaksi rantai radikal secara efisien. Berikut adalah Alam. Jakarta: Karunika.
prediksi mekanisme reaksi peredaman radikal Harborne, J.B. 1987. Metode Fitokimia.
bebas oleh golongan senyawa alkaloid secara Bandung: Penerbit ITB.
rumus umumnya. Mahani. et al. 2011. Keajaiban Propolis Trigona.
Pustaka Bunda. Jakarta.
DPPH DPPH-H Sholikhah, M. 2012. Analisis Fitokimia dan Uji
R
Daya Antimikroba Ekstrak Produk
Sarang Lebah Trigona incisa Terhadap
R N R
H R Streptococcus sobinus dan Candida
albicans. Skripsi Fakultas Matematika
R-RH R-R R-R dan Ilmu Pengetahuam Alam
:UNMUL.
Gambar 2. Prediksi reaksi dari peredaman radikal Suranto, A. 2007. Dahsyatnya Propolis Untuk
bebas oleh golongan senyawa alkaloid Menggempur Penyakit. PT. Agromedia
secara rumus umum. Pustaka, Jakarta.

Hidrokuonin Kuonin

Gambar 3. Prediksi reaksi dari peredaman radikal

bebas oleh golongan senyawa fenolik
secara rumus umum.

KESIMPULAN
Adapun kesimpulan dari penelitian ini adalah
sebagai berikut :
1. Berdasarkan hasil dari uji fitokimia
didapatkan hasil diantaranya, pada ekstrak
kasar dan fraksi etanol yaitu alkaloid dan
fenolik, sedangkan pada fraksi etil asetat
hanya terdapat alkaloid saja.
2. Berdasarkan hasil uji mortalitas larva udang
(BSLT) didapatkan nilai LC50 untuk masing-
masing ekstrak yaitu , untuk ekstrak kasar
nilai LC50 yang diperoleh 355,4602 ppm,
fraksi etanol yang diperoleh 249,6079 ppm
dan pada fraksi etil asetat yang diperoleh
276,3536 ppm.
3. Berdasarkan uji aktivitas antioksidan dengan
metode DPPH didapatkan nilai IC50 masing-
masing ekstrak yaitu, untuk ekstrak kasar nilai

60 Kimia FMIPA Unmul