FACULTAD DE INGENIERÍA Grupo: 5 (Carbohidratos)

ESCUELA DE QUÍMICA Nombre y apellido (Cédula)

DEPARTAMENTO DE QUÍMICA TECNOLÓGICA
BIOQUÍMICA ARIAS, Adeny 17.519.277
DQ9Q08 OSTOS, Oscar 20.695.240
Fecha: 02/07/2014

PRIMER PARCIAL

Lea detenidamente el parcial. No es necesario que lo imprima íntegro, ni que imprima las figuras,
puede limitarse a responder las preguntas. Puede presentarlo impreso, manuscrito o combinando
adecuadamente ambas formas. Las partes manuscritas deben ser realizadas utilizando bolígrafo de
tinta negra. Sea breve y concreto y use un lenguaje técnico-científico. No devanee en lenguaje
periodístico. Evite el “copiar-pegar”, prefiera en su lugar un análisis en sus propias palabras. Cuide la
ortografía y redacción, son parte de la evaluación, pues no puede tener puntaje completo una
respuesta que tuvo que ser leída tres veces para ser comprendida.
¡Éxito!

1.- Observe la siguiente figura y diga qué biomoléculas/órganos/estructuras reconoce. Explique qué
detalle lo hizo identificarlo(a). (3 puntos)

2.- En el siguiente texto, se le da una de las aplicaciones de la bioquímica. Diga cuál cree usted que
es y porqué. (2 puntos)

Con una simple toma de sangre de una vena localizada en la parte interior del codo, se puede
analizar la cantidad de fosfatasa alcalina (FA) en sangre. Este examen se suele usar para analizar la
FA producida en los huesos. Los niños tienen niveles de fosfatasa alcalina superiores a los de los
adultos, pues sus huesos en pleno crecimiento producen niveles de FA más altos. Estos niveles
pueden llegar hasta 500 UI/L cuando se dan aumentos repentinos en el crecimiento. Es por esto que
el examen no se suele hacer en niños y los resultados anormales se refieren a los adultos. El valor
normal es 20 a 140 UI/L (unidades internacionales por litro).

3.- Sólo una de las siguientes afirmaciones es incorrecta. Diga cuál es y explique por qué. (2 puntos)
a) Los aminoácidos hidrofóbicos tienden a rechazar el ambiente acuoso y, por lo tanto, residen
predominante dentro de las proteínas.
b) Los grupos α-COOH y α-NH2 de los aminoácidos son capaces de ionizarse (al igual que los
grupos-R ácidos y básicos de los aminoácidos).
c) Los aminoácidos hidrofílicos se encuentran predominantemente en las zonas internas de las
proteínas protegidos del ambiente acuoso de la célula.
d) Los aminoácidos tienen un ácido carboxílico y un grupo amino unido al mismo átomo de carbón
tetraédrico. Además del grupo R, la cuarta substitución en el carbono es el hidrógeno.

4.- Dada la siguiente curva de titulación de la alanina: (2 puntos)

a) diga qué es pI.
b) diga cuál especie predomina a pH 10,5 y porqué.

5.- a) En las siguientes imágenes diga qué nivel(es) estructural(es) de la proteína reconoce y explique
porqué.
b) Diga cuál(es) nivel(es) estructural(es) de la proteína no fue(ron) representada(s). (3 puntos)

a) b)

6.- Explique porqué cuando usted busca en internet “Desnaturalización de proteínas, le aparece la
siguiente imágen: (4 puntos)

7.- A continuación se representa el resultado de una electroforesis (un gel de SDS-PAGE).

Suponiendo que el investigador reporta haber aplicado en los carriles 1 a 8:
 1: Marcador de masa molecular (MW en KDa se puede distinguir a la izquierda del carril).
2: extracto primario de la fuente proteica.
3, 4 y 5: fracciones #12, #13 y #14 tomadas de una filtración en gel.
6, 7 y 8: fracciones #8, #9 y #10 de una resina de intercambio iónico.
a) ¿cuál es la masa molecular aproximada de la proteína mayoritaria en el extracto primario?
b) explique qué no concuerda con las supuestas muestras provenientes de la filtración en gel.
c) si el objetivo era purificar la proteína mayoritaria, diga que ventajas y desventajas ve usted en los
dos métodos (filtración en gel o intercambio iónico) y porqué. (6 puntos)
 RESPUESTAS

RESPUESTA 1

Representación Biomolécula Observación

Carbohidrato Se observa una cadena polisacárida ramificada
con estructuras cíclicas de seis miembros como
sistemas de anillos planos (unidad repetitiva).

Ácido nucleico Representación generalizada del modelo para la

conformación tridimensional del DNA según
Watson y Crick (Estructuras secundaria y
terciaria del DNA).
Lípido Se observa un conjunto de representaciones en
tres dimensiones de varios ácidos grasos, en las
cuales puede distinguirse la cabeza polar
correspondiente a un grupo carboxilo (Rojo) y la
parte hidrófoba (Gris).
Célula eucariota Ilustra una perspectiva de la sección transversal
idealizada de una típica célula eucariótica.
Pueden distinguirse características como el
núcleo, mitocondrias, retículos, entre otros.
Ácido graso Pueden distinguirse los átomos

Proteína Ilustra en forma tridimensional la estructura de

un oligómero (estructura cuaternaria). Pueden
distinguirse dos cadenas polipeptídicas
(estructura terciaria), así como también
segmentos helicoidales y al azar (estructura
secundaria).

RESPUESTA 2

La aplicación de la bioquímica mencionada en el texto es la química clínica, área de la patología

clínica que generalmente se encarga del análisis de propiedades bioquímicas de fluidos corporales
con el fin de suministrar información para la prevención, diagnóstico, pronóstico y tratamiento de
enfermedades. En este caso, se habla sobre el examen que se realiza a la sangre para medir el nivel
de fosfatasa alcalina (proteína que se encuentra en todos los tejidos corporales) con la finalidad de
diagnosticar o descartar enfermedades del hígado o de los hueso para su posterior tratamiento
médico.

RESPUESTA 3

La afirmación incorrecta es la “C”, debido a que los aminoácidos hidrofílicos, por su afinidad por al
agua, tienden a interactuar con el ambiente acuoso (no están protegidos del contacto directo con el
agua, como sí es el caso de los aminoácidos hidrofóbicos), por lo que, de hecho, se encuentran
predominantemente en las superficies externas de las proteínas, no en las zona internas.
RESPUESTA 4

a) El punto pI corresponde al punto isoeléctrico. Este representa el pH en el que una

determinada molécula o superficie (particularmente aminoácidos y/o proteínas) presentan una
carga eléctrica neta igual a cero. A cualquier pH por debajo del punto isoeléctrico, las
proteínas poseen una carga neta positiva; caso contrario para un pH por encima de su pI,
tienen una carga neta negativa. Valiéndose de esta propiedad, las proteínas pueden
separarse en función de su punto isoeléctrico en un gel de poliacrilamida usando una técnica
llamada “isoenfoque”, el cual utiliza un gradiente de pH. Para un aminoácido con una sola
amina y un grupo carboxilo, el pI se puede calcular como el promedio de los pKa de esta
molécula.

b) Puede observarse en la curva de titulación de la alanina que para un pH igual a 10,5 (mayor
que el pKa del α-COOH, que es aproximadamente igual a 10), la especie predominante será

el anión , debido a que el grupo amino (-NH2) y el grupo carboxilo (-COOH)

que caracteriza a los aminoácidos y pueden ionizarse en medio acuoso, son los responsables
de su anfoterismo, es decir, pueden actuar como ácidos o como bases, en función del pH del
medio (los compuestos que son capaces de aceptar o ceder protones se denominan anfóteros
o anfolitos): el grupo α-COOH se comporta como un ácido débil y el grupo amino, como una
base débil. Por ello, la carga de los aminoácidos varía en función del pH. Para cualquier pH
mayor que el pKa de un grupo ionizable en particular, este se desprotonará
predominantemente, y para cualquier pH menor se protonará.

RESPUESTA 5

Representación Nivel estructural Nivel estructural Observación

apreciado no apreciado
 Primario  Secundario Puede distinguirse claramente los
 Terciario aminoácidos que conforman la cadena
 Cuaternario polipeptídica mostrada y la secuencia
en que estos se encuentran.

 Secundario  Primario Puede distinguirse la descripción de la

 Terciario orientación espacial de las cadenas
 Cuaternario polipeptídicas (segmentos α-hélice
unidos a conformaciones β-laminar y
partes al azar), así como también los
pliegues y dobleces debidos a las
fuerzas estabilizadoras en dos
proteínas del tipo globular para, con en
conjunto, formar un dímero. De igual
manera, pueden apreciarse algunos
enlaces entre cadenas laterales y
coordinación de iones metálicos.

RESPUESTA 6

La conformación nativa de una proteína, además de ser altamente ordenada y flexible, es un estado
muy delicado sujeto a alteración por agentes químicos y/o físicos sin ningún cambio en la secuencia
de aminoácidos. La desnaturalización es un proceso en el que las proteínas o ácidos nucleicos
pierden su estructura cuaternaria, terciaria y secundaria que está presente en su estado nativo,
mediante la aplicación de una cierta tensión externa o la adición un compuesto tal como un ácido o
una base fuerte, una sal inorgánica concentrada, un disolvente orgánico (por ejemplo, alcohol o
cloroformo), radiación o calor. La magnitud de la pérdida de actividad biológica es variable, va desde
parcial hasta completa. En muchas proteínas la desnaturalización no es reversible; esto depende del
grado de modificación de las estructuras de la proteína.

Un ejemplo clásico de desnaturalización de proteínas es la cocción de un huevo. Las proteínas en la

clara de los huevos, que son en gran parte albúminas en agua, se desnaturalizan y se coagulan
durante la cocción (Temperatura mayor o igual a 40°C), pasando de ser transparente y líquida a ser
una masa sólida y blanca. El calor puede ser utilizado para romper los enlaces de hidrógeno y las
interacciones hidrófobas no polares. Esto ocurre porque el calor aumenta la energía cinética y hace
que las moléculas vibren de manera rápida y violentamente se rompan los enlaces y las cadenas de
aminoácidos se desenredan y se alargan, lo que permite que reacciones químicas se produzcan (los
átomos que anteriormente estaban unidos se vuelven disponibles para unirse con otras moléculas).
Algo similar ocurre cuando se bate un huevo, los enlaces internos se rompen como resultado de la
aplicación de la fuerza física. En ambos casos la desnaturalización es irreversible; no hay una manera
de que el huevo pueda volver a tomar su estado natural.

RESPUESTA 7

a) Partiendo del carril 1 (en el cual se tiene una mezcla de diferentes proteínas pre-teñidas, de
las cual se conoce su peso molecular) por comparación con el carril 2, puede estimarse la
masa molecular del extracto primario de la fuente proteica de interés, ya que puede
observarse una región de mayor concentración entre los valores 49 y 62 KDa (su movilidad
electroforética). Puede concluirse entonces que el peso molecular aparente de la proteína en
estudio es aproximadamente igual a 49 KDa, Cabe destacar que estas determinaciones
poseen un margen de error de ~10%.

b) La filtración en gel es una técnica de purificación muy extendida y apreciada debido a su

sencillez y eficacia en la resolución de mezclas complejas de macromoléculas, que permite
separar moléculas en función de su tamaño molecular, al hacer pasar una mezcla de solutos
en la parte superior de una columna que contiene partículas de gel dilatadas; las moléculas de
la mezcla penetrarán en las partículas del gel si sus dimensiones moleculares son más
pequeñas que los poros de los gránulos dilatados. Es decir, que las moléculas más pequeñas
de soluto entrarán y penetrarán dentro de los gránulos del gel en una mayor proporción que
las moléculas más grandes. Debido a esta mayor interacción con la fase estacionaria, las
moléculas más pequeñas tienen una velocidad de migración menor, y una menor masa
molecular, puesto que el peso molecular es, en general, función del tamaño molecular. Por lo
tanto, las fracciones #12, #13 y #14 no corresponden a una muestra del extracto primario de la
fuente proteica de interés, debido a que se esperaría que la zona de movimiento lento de
solutos más pequeños (zona menos concentrada) en cada uno de los carriles (3, 4 y 5) se
encontrase a la par de la región obtenida en el carril 2, y no se evidencia de esa manera.

c) Cuando los solutos que se van a separar pueden existir como iones cargados positiva o
negativamente, el procedimiento de cromatografía de intercambio iónico es una técnica muy
efectiva y con un poder resolutivo muy alto. En contraste con la cromatografía de filtración en
gel, la fase estacionaria de la cromatografía de intercambio iónico es una sustancia sólida que
participa realmente en el proceso intercambiándose directamente con los componentes de la
mezcla. Si una mezcla contiene un número determinado de solutos, cada uno con una carga
neta positiva diferente, se intercambiarán en distintos grados con la resina, como puede
observarse en los carriles 6, 7 y 8. El eludio que sale de la parte inferior de la columna se
puede recoger sistemáticamente en fracciones pequeñas, y la presencia de soluto se
determina mediante un método apropiado. Esta se aplica en una matriz de carga opuesta a la
de la proteína que se quiere purificar y se debe tener un pH determinado, por lo que se corre
el riesgo de que estas se desnaturalicen. Es por ello que resulta más conveniente y efectiva la
técnica de cromatografía de filtración en gel, porque la matriz diferencial se realiza
aprovechando las variaciones en tamaño y forma molecular, no hay interacción con la fase
estacionaria, lo que no hay riesgo de alteraciones en el soluto, a pesar de que este método
requiere de varios pasos por el gel de manera que exista cada vez una gradiente mayor entre
los pesos moleculares de las muestras, es particularmente mejor que la anterior.