Regeneración ósea

Índice
 Introducción. Definiciones.
 Hueso. Estructura y función
 Células
 Factores de crecimiento
 Matriz extracelular
 Ingeniería tisular
 Conclusiones y perspectivas
Regeneración ósea
Bibliografía:
• Frontiers in Tissue Engineering, Pergamon, 1998
• Principles of tissue engineering, Lanza, Langer, Vacanti, Academic Press, 2013
• Tissue engineering, Blitterswijk, London Academic, 2007
• D. W. Hutmacher, J. T. Schantz, C. X. F. Lam, K. C. Tan, and T. C. Lim, “State of the art and
future directions of scaffold-based bone engineering from a biomaterials perspective.,” J.
Tissue Eng. Regen. Med., vol. 1, no. 4, pp. 245–60
• Bose S Roy M Bandyopadhyay A “Recent advances in bone tissue engineering
scaffolds.”Trends in biotechnology 2012 vol: 30 (10) pp: 546-54
• Liu, Y., Lim, J., & Teoh, S.-H. (2013). Review: Development of clinically relevant scaffolds for
vascularised bone tissue engineering. Biotechnology Advances, 31(5), 688–705.
• H. Deplaine, M. Lebourg, P. Ripalda, A. Vidaurre, P. Sanz-Ramos, G. Mora, F. Prõsper, I.
Ochoa, M. Doblaré, J. L. Gõmez Ribelles, I. Izal-Azcárate, and G. Gallego Ferrer,
“Biomimetic hydroxyapatite coating on pore walls improves osteointegration of poly(L-
lactic acid) scaffolds,” J. Biomed. Mater. Res. - Part B Appl. Biomater., vol. 101 B, pp. 173–
186, 2013.
• M. Lebourg, J. S. Antón, and J. L. G. Ribelles, “Hybrid structure in PCL-HAp scaffold resulting
from biomimetic apatite growth,” J. Mater. Sci. Mater. Med., vol. 21, no. 1, pp. 33–44,
2010.
Introducción

La ingeniería tisular aplicada al hueso pretende la regeneración o aumento de un

órgano extremadamente complejo. Se debe diseñar un dispositivo fisiológico y
funcionalmente dinámico, que no produzca respuesta inmunológica, que sea
biocompatible y que sea biomecánicamente equivalente al hueso que reemplaza.

El dispositivo debe ser una combinación de un scaffold sintético que sirve de soporte
a productos naturales: células , factores solubles y matriz extracelular (de origen
natural o sintético).
Hueso. Estructura y función. Tejido calcificado.

Se trata de una superestructura mineralizada en la que se distingue el hueso

cortical y el hueso trabecular (esponjoso). La estructura está relacionada con sus
funciones: protección, locomoción, o con sus características fisiológicas:
necesidades metabólicas, balance del calcio, etc. El hueso cortical constituye el 80%
del esqueleto.
Hueso. Estructura y función.

Figure 19.1 An overview of a macroscopic

aspect of a right femur (thigh bone, (A))
showing the mechanically strong cortical bone
on the outside and the inner spongious bone in
this metaphysic end of the bone; (B) is a detail
of the cortical bone and the inner spongious
bone showing the trabeculae of which it is
composed; (C) is a detail of spongeous bone
where a single trabecula is pictured with bone
marrow cavities, lined with endosteum, on each
side. The cavities make this type of bone rather
porous as compared to the more dense cortical
bone; (D) shows a woven type of bone that is
typically young and unorganised; (E) is an
example of lamellar bone that has been
remodelled into a more mechanically strong
type of bone. On top of (D) an example of an
osteoblast is portrayed that can typically be
found in areas of active bone formation. Similar
to this, an osteoclast is found in the same areas
for further remodelling of the bone (insert
below (D)). Note the channel of resorbed bone
behind the osteoclast.
Hueso. Matriz

La matriz orgánica constituye el aproximadamente 35% de peso del hueso seco. Su

principal componente es el colágeno tipo I. (90%) con el 10% restante de otros
componentes. Proporciona la estructura y dirige a través de diversos factores de
señalización la diferenciación celular, mitogénesis y competencia. El anclaje de las
células a la ECM inicia una serie de procesos en cascada que regulan tales procesos.
La matriz inorgánica representa el 60-70% del peso del hueso seco y contiene
alrededor del 99% del Ca, el 85% del P y 40-60% del Mg y Na. Proporciona alicuotas de
minerales para la homeoestasis y funciona como una catedral para la hematopoyesis.
El equilibrio del sistema esquelético viene regulado, principalmente, por el Ca, P y Mg
que se obtienen a partir de la vitamina D, la hormona paratiroidea (PTH) y la
calcitonina.
El calcio regula procesos como el potencial de acción y la permeabilidad de la
membrana celular. El fósforo interviene en la síntesis de nucleótidos, fosforilación de
proteinas y ensamblaje de la membrana celular. El magnesio es un importante
cofactor para ciertas reacciones enzimáticas y neuromusculares.
Hueso. Estructura y función. Tejido calcificado. Hueso cortical

La estructura está diseñada para asegurar la máxima respuesta frente a cargas de

compresión y torsión. Existe, además, una red de canales vasculares, linfáticos y
nervios (Harvesian y Volkmann) que proporcionan el intercambio metabólico y de
factores de señalización como las hormonas. La importancia de la vascularización se
hace patente porque el sistema se asegura de que ninguna célula se encuentre más
alejada de 300 micras de un vaso sanguíneo.
La complejidad de la estructura del hueso cortical (con el sistema Harvesian, y las
matrices orgánica e inorgánica) conduce a un producto con extraordinarias
propiedades físicas y fisiológicas muy difícil de reproducir artificialmente.
Hueso. Estructura y función. Tejido vascular.

El hueso alberga la médula ósea:

localizada en los huesos tubulares,
vertebras, costillas, esternón, y huesos
planos de la pelvis y el cráneo. Contiene
las células hematopoyeticas,
eritopoyeticas y linajes granoloyticos, así
como las células madre no diferenciadas
que pueden reponer diferentes fenotipos.
Es decir, contiene los elementos
necesarios para mantener la dinámica
fisiología del hueso.
Hueso. Estructura y función. Tejido vascular.
Hueso. Células

Celulas osteoprogenitoras o células madre ósea son

células indeferenciadas, alargadas con citoplasma
poco prominente, que proceden de las células
mesenquimales primitivas y forman una población de
células troncales capaces de dividirse y dar origen a
células que se diferencian a osteoblastos.
Estas células se encuentran en las superficies externas
e internas de los huesos (células periósticas y células
endósticas). Son capaces de dividirse y proliferar, y
tiene la capacidad de diferenciarse a tres tipos
celulares, además de los osteoblastos: adipositos,
condroblastos y fibroblastos
Hueso. Células

Los osteoblastos son las células que forman el hueso.

Proceden de las células mesenquimales. Son células
secretoras que expresan factores (proteínas
morfogenéticas de hueso, BMP, factores de crecimiento
tipo β, tipo insulina I y II, interleuquinas-1, y plaquetas).

También expresan osteoides, un producto cuya matriz

extracelular conduce al colágeno tipo I. Los osteoides se
producen a razón de 2-3 µm/día. Cuando alcanzan unas
20 µm empieza a mineralizarse a razón de 1-2 µm/día.
Son responsables de la calcificación de la matriz
mediante de la secreción de pequeñas vesículas
matriciales las cuales tienen gran cantidad de fosfatasa
alcalina.
La vida media de los osteoblastos humanos varía de una
a diez semanas. Después de lo cual desaparecen por
apoptosis, convirtiéndose en revestimiento del hueso, o
bien, alrededor de un 15% en osteocitos.
Hueso. Células

El osteocito es la célula ósea madura, es de forma

aplanada, está rodeada por la matriz ósea que secretó
antes como osteoblasto. El osteocito es un osteoblasto
diferenciado.
Los osteocitos son células relativamente inactivas aunque
son cruciales para mantener el hueso. Son responsables
de la interacción entre osteoclastos y osteoblastos
transmitiendo señales que ponen en marcha o anulan los
procesos de generación de hueso.
Hueso. Células

Osteocalastos son células multinucleadas que llevan a

cabo la resorción ósea, función contraria a la aposición
de hueso. Se originan a a partir de los monocitos y
segregan interleuquinas -1,-3,-11.
Como consecuencia de su actividad, inmediatamente
por debajo del osteoclasto se forma una excavación
poco profunda llamada laguna de resorción.

El balance entre osteoblastos y osteoclastos afecta a la

aposición-reposición del hueso en un proceso dinámico
de modelado y remodelado.
El hueso humano se remodela a una velocidad de un 2-
10 % por año, dependiendo del hueso, pudiendo
alcanzar hasta un 20% por año.
Hueso. Regeneración ósea

Fase de inflamación:
• Traumatismo
• Daño en los vasos sanguineos que interrumpe el flujo sanguíneo a los osteocitos y
provoca necrosis
• Liberación de mediadores de la inflamación
• Células inflamatorias que migran al foco de la fractura: leucocitos, células
polimorfonucleares, macrófagos, linfocitos

Fase de reparación:
• El coágulo de fibrina facilita la migración celular, proliferación y formación de matriz
extracelular.
• Los osteoclastos reabsorben el tejido necrótico.
• Nuevos brotes vasculares
• La composición del callo óseo se va modificando progresivamente. Las células
mesenquimales van sustituyendo la primera matriz de fibrina por tejido fibroso rico
en Col I y Col III, luego se transforma en fibrocartílago y luego se mineraliza. Con
aumento de ALP y Col I
• El proceso concluye con la osificación del tejido del callo.

Fase de remodelación:
• El hueso inmaduro del callo se sustituye por hueso laminar.
• Se reabsorben las trabéculas mal orientadas y se sustituyen por otras orientadas en
la dirección de las líneas de tensión.
Hueso. Remodelado óseo

(A)
Figure 19.3 Schematic
representation of the
sequential steps in fracture
healing: (A) a fresh hematoma
is formed, (B) inflammatory (B)
and mesenchymal cells arrive
after small vessels have
invaded the area, (C) callus is
formed by both endosteal and
periosteal reaction and (D) the
callus is remodeled.
(C)

(D)
 Hueso. Remodelado óseo

Tiempos orientativos de remodelado:

• Hueso trabecular 3 a 6 meses
• Hueso cortical 6 a 12 meses

Defectos críticos

Irene Lara, Tesis Doctoral UPV 2015

Ingeniería tisular

El hueso tiene capacidad autoregenerativa, que ha sido explotada desde hace más
de 300 años. A pesar de los avances en biología celular y molecular, imitar el hueso
natural con sus funciones y capacidades biológicas no es todavía posible. Sin
embargo, promover la formación de hueso a partir de la ingeniería de tejidos es
posible.
Para ello es necesario tener en cuenta una serie de factores:
- Células. Pueden proceder de un autoinjerto, aloinjerto o xenoinjerto. Las
primeras presentan el problema de disponer de cantidad suficiente de células,
mientras que en los otros casos es el riesgo de transmisión de enfermedades el
principal problema. Se han producido osteoblastos a partir de células madre
mesenquimales, MSCs, obtenidas de la médula ósea a partir del aislamiento,
separación, expansión y derivación del fenotipo de ostoblasto.
- Matriz extracelular. Tales células necesitan el entorno adecuado para que sean
viables. Si la formación de agregados y vascularización no está presente, se
produce cartílago en lugar de hueso.
- Si se parte de células tipo osteoblasto (obtenidas a partir del periosto) el
problema principal radica en mantener el fenotipo ya que es frecuente que se
produzca la desdiferenciación.
 Hueso. Osteointegración, osteoconducción y osteoinducción

Biomateriales como ayuda a la reparación y/o regeneración de un defecto del hueso

Osteointegración: Conexión directa estructural y funcional entre el

hueso vivo, ordenado y la superficie del implante sometido a carga
funcional. No se forma cápsula fibrosa entre el material y los tejidos
biológicos.

Osteoconducción: El implante poroso actúa sólo como un andamiaje

que permite el crecimiento de nuevos vasos sanguíneos y la migración
de células para la invasión de tejido neoformado. Favorece el que las
células se adhieran, proliferen, migren y depositen hueso. En general, las
cerámicas son osteoconductivas.

Osteoinducción: Material activo que favorece la formación de hueso

mediante la señalización y el reclutamiento de células mesenquimales
pluripotenciales. Se puede potenciar injertando ciertos péptidos
(fibronectina, laminina,..) derivados de la ECM al polímero que
constituye el scaffold.
Hueso. Ingeniería Tisular del Hueso

Scaffolds
• Resistencia mecánica aunque se usan fijaciones que hacen que el scaffold recién
implantado no tenga que soportar toda la carga.

• Tiempo de degradación adecuado a los tiempos de remodelación ósea

• Mantenimiento de las propiedades mecánicas durante un tiempo suficiente durante el

proceso resorción.

• Porosidad suficiente para permitir la vascularización ( gargantas de interconexión

entre poros como mínimo de 100 µm y recomendado en muchos artículos del orden
de 300 o 400 µm)

• Liberación de factores angiogénicos para inducir la vascularización y factores de

crecimiento de la familia de las proteínas morfogenéticas óseas, BMP
Regeneración ósea. Scaffolds

Los principales candidatos para soportar las células y suministrar BMPs son:
- Cerámicas
- Polímeros naturales como colágeno, chitin, chitosan, alginato, o chondroitin
sulfato son materiales versátiles usados ampliamente en aplicaciones de
ingeniería tisular de hueso.
- Polímeros sintéticos como, por ejemplo ácido poliláctico, PLA, poliglicólico, PGA,
policaprolactona, polipropileno fumarato PPF.

El scaffold debería favorecer la adhesión celular la proliferación y diferenciación

para la regeneración del hueso.
En todos los casos deben ser tenidos en cuenta factores de diseño como: topografía
superficial, carga superficial, hidrofilicidad/hidrofobicidad y porosidad. Además, la
naturaleza dinámica del hueso hace que se requieran factores diseñados con
diferentes cinéticas de liberación que se adapten a la remodelación del hueso.
Hueso. Ingeniería Tisular del Hueso

Fig. 1A–C A paradigm shift is

taking place in orthopaedic and
reconstructive surgery from
using medical devices and tissue
grafts to engineering a tissue
engineered construct (C) that
uses biodegradable scaffolds (A)
combined with cells (B) or
biological molecules (B#) to
repair and/or regenerate
tissues.
Regeneración ósea. Scaffolds. Factores solubles

Dirigen la progresión de las células y su forma de organización para constituir un

nuevo tejido. Para su suministro es preciso desarrollar portadores que funcionen
como una ECM que posicione y proporcione BMPs en el lugar adecuado para
producir el efecto adecuado.
Regeneración ósea. Diferenciación de MSCs a osteoblastos

PCL/Vidrio Bioactivo
PCL HAp

Factor de transcripción Runx2 (Runt related transcripción factor 2):

La expresión de Runx2 es la primera evidencia de diferenciación
osteogénica.

Colágeno tipo I y osteopondina: Se expresan de forma temprana en

células osteoprogenitoras.

Fosfatasa alcalina (ALP), Osteocalcina (OCN): marcadores de

diferenciación del preosteoblasto. Aparecen cuando se inicia la
mineralización.
Runx2 OCN
Mineralización: tinciones del calcio

Von Kossa: Tiñe de tonos de marrón y negro los depósitos de

fosfato inorgánico en hueso.
Regeneración ósea. Scaffolds

Material compuesto PLLA/HAp con o sin un recubrimiento de hidroxiapatita

biomomética, Deplaine 2013

FIGURE 1. SEM
micrographs of the PLLA
(A, B) and PLLA/HAp (C, D)
scaffolds at different
magnifications showing
the macroporosities and
microporosities. The
incorporation of HAp did
not modified scaffold’s
morphology. It was not
possible to observe
hydroxyapatite particles in
the organic PLLA matrix
even at high
magnifications.
Regeneración ósea. Scaffolds

Tratamiento en fluido corporal simulado, SBF

Cristales de
hidroxiapatita
(EDX)

FIGURE 2. SEM micrographs of the

surface and section of PLLA and
PLLA/HAp composite scaffolds after 14
and 21 days of immersion in SBF at two
magnifications: low and high. All the
samples were treated with air plasma
before their immersion in SBF to favor
hydroxyapatite nucleation.
Regeneración ósea. Scaffolds

Implante en el cóndilo femoral de oveja Tejido neo-formado en el interior de los poros, con
apariencia de tejido fibroso en el caso del PLLA y con características de tejido óseo con gran
numero de osteoides en el caso del material compuesto.

FIGURE 8. Masson’s trichrome of the histologies

of the tissue regenerated by the PLLA, PLLA/Hap,
and PLLA/HAp/SBF scaffolds 6 weeks after the
implantation: (A) View of the PLLA implant inside
the structure of the subchondral bone, (B) detail
of the edge between the implant and host bone
tissue, (C) detail of the scaffolds and tissue
regenerated inside their pores and (D) area
percentage occupied by osteoids inside the
scaffolds determined by ImageJ software (a total
of 10 fields per sample were used for the
quantification). For the analysis p < 0.05 was
considered as significant. Implants were placed
in lesions performed in the femoral condyle of 3-
month-aged healthy sheep. Tissue filling the
pores of the scaffolds can be observed, but only
in the PLLA/HAp/SBF scaffold it includes the
presence of osteoids (asterisk). Scale bar: 200 lm
for (A) and 100 lm for (B) and (C).
Regeneración ósea. Scaffolds

Los resultados indican un mejor rendimiento con respecto a la regeneración ósea de los
scaffolds mineralizados con una capa de apatita biomimética antes de la implantación.

FIGURE 9. Immunofluorescence images

for collagen I, osteocalcin, and
ostepontin of the histologies of the
tissue regenerated by the PLLA,
PLLA/Hap, and PLLA/HAp/SBF scaffolds 6
weeks after implantation. The implants
were placed in lesions performed in the
femoral condyle of 3- month-aged
healthy sheep. Images showed the
presence of collagen I filling the pores of
the scaffolds in all cases, but in the
PLLA/HAp/SBF scaffold the quantity was
significantly higher as shows the
corrected total fluorescence (CTF) graph.
For the analysis p < 0.05 was considered
as significant. Bone markers as
osteoclacin and osteopontin resulted
positive in all the materials. Scale bar:
100 lm.
Regeneración ósea. Scaffolds
Fig. 7 The evolution of mineral layer deposition
after SBF immersion of untreated samples over
Material compuesto PCL/Hap, Lebourg, 2010
one (a), two (b) or three (c) weeks for neat PCL
(left) and PCL15HAp (right) (bar size 30 µm
excepted PCL15HAp (a), 60 µm)

En inmersion en SBF se forma una capa

de hidroxiapatita que penetra en los
microporos formando una estructura
continua que se aprecia después de la
pirólisis

Muestra
pirolizada para
hacer
desaparecer el
polímero,
Regeneración ósea. Scaffolds

Hutmacher 2007

Fig. 3 Constructs with BMSC sheet-scaffolds (mPCL-TCP) were implanted into nude rat, harvested
after 28, 56 and 84 days. (A) Gross appearance of BMSC sheet-scaffolds constructs with
osteogenic induction (Right) and non-induction (control) (Left) after 4 weeks. (B) X-ray detected
bone like tissue formation in 28 day (C) 56 day (D) 84 day implants. (E) X-ray image of constructs
without cell seeding (Control). (F) Micro-CT demonstrated the overall highly mineralized tissue
similar to cortical (golden) and cancellous (red) bone in implanted constructs after 28 day. (G)
Micro-CT images disclosed the hard tissue formation within constructs. Mineralized tissue with
similar density with cancellous bone was detected (darker areas) while the lighter colour
represented cortical bone. (H) Fluorescence was detected on the formed bone tissue after 28
days; the fluorescence came from the cFDA labeled BMSC.
 Regeneración ósea. Scaffolds

Injerto de hueso: autólogo, alogénico o xenogénico

http://www.lovimedic.com.mx/index.html

Origen equino Origen bovino

Granulados de hidroxiapatita sintética o fosfatos de calcio (βTCP)

http://www.globalsources.com/

Hidroxiapatita bifásica 60% sintética

y el 40% de fosfato tricálcico beta,
gránulos de injerto óseo y preformas
para odontología y ortopedia.
Regeneración ósea. Scaffolds

Impresión 3D. Policaprolactona

http://www.osteopore.com.sg/

Osteoplug™ is a bioresorbable implant that is used for covering trephination

burr holes in neurosurgery. Its interconnecting porous matrix architecture
allows it to be rapidly saturated with marrow, blood and nutrients for bone
growth and remodeling. Long-term clinical trials showed significant bone
regeneration, re-covering the burr hole as the material is slowly resorbed by
the body and replaced by autologous bone. It has superior mechanical
strength and the scaffold architecture minimizes potential injuries to the
exposed brain through the burr holes.

Osteomesh™ is a bioresorbable implant used in craniofacial surgery to

repair various types of fractures, like the orbital floor fracture and to fill
surgical defects. Its unique architecture allows rapid saturation with
marrow, blood and nutrients, thus providing the patient's own cells with
chemical signals that are required for bone growth and remodeling. The
mesh offers a rigid yet flexible scaffold with sufficient mechanical strength
that supports bone in-growth and it degrades as bone regeneration and
remodeling takes place. Long term clinical trials showed significant bone
regeneration, as the material is slowly resorbed by the body and replaced
by autologous bone.
Regeneración ósea. Scaffolds
http://www.surginnova.com/

Relleno de defectos óseos, Sustituto óseo reabsorbible Material sintético para

compuestos por fosfato compuesto de colágeno injertos óseos que actúa
tricálcico e hidroxiapatita. porcino y fosfato de calcio. como factor de crecimiento
Cumplen con las normas Osteoconductivo y del proceso natural.
ISO 13779-1, ASTM F1185 y hemostático. Nanoestructura eficaz de
ASTM F1088. hidroxiapatita (HA)
nanocristalina
Matriz Ósea Desmineralizada
osteoconductiva, osteogénica
y osteoinductivo. Fácil de usar
y de preparar, segura y
esterilizada con radiaciones
gamma.
Regeneración ósea. Scaffolds

Vidrios Bioactivos GlassBONE™ indicado en la medicina regenerativa, es un sustituto

óseo sintético y bioactivo indicado para aplicaciones ortopédicas que
se presenta en forma de gránulos.GlassBONE™ combina una acción
biológica natural y una seguridad óptima para obtener resultados
fiables y reproducibles.

GlassBONE™, obtenido a partir de una tecnología innovadora, es un

vidrio bioactivo 45S5 compuesto de óxido de silicio, de sodio, de
fósforo y de calcio. Todos estos elementos están presentes de forma
natural en el cuerpo y están reconocidos como actores
imprescindibles en el proceso de formación y mineralización del
hueso. Esta bioactividad marca un nuevo avance en los productos de
regeneración ósea.
Regeneración ósea. Tendencias futuras

Los trabajos futuros deben dirigirse hacia la imitación de los procesos naturales en
el hueso, controlando la angiogénesis y osteogénesis.
Además del material que constituye el scaffold , la porosidad, tamaño del poro y
distribución juegan un papel crucial.
El scaffold debe ser biodegradable, soportando las cargas mecánicas y permitiendo
que el nuevo tejido formado vaya tomando su lugar.
Sería necesaria la liberación de factores de forma secuencial a medida que se va
produciendo la remodelación del tejido.
Además de las consideraciones del rendimiento del scaffold, es necesario
considerar las condiciones de fabricación. A partir de un punto de vista clínico ,
debe ser posible fabricar el scaffold de forma reproducible y con calidad
controlada, además de bajo coste .
Serán necesarios algunos procesos de fabricación para conseguir la incorporación
de células y / o moléculas biológicas durante el proceso de fabricación del scaffold.