RPIF TESTES DE DEGRADAÇÃO FORÇADA PARA

2013 FÁRMACOS E MEDICAMENTOS

05
Francisco C. Alcântara1, Vanessa C. Rescia1, Maria A. Santos1,
Claudete J. Valduga1
¹Universidade Anhanguera de São Paulo – UNIAN-SP, Unidade Maria Cândida,
São Paulo, SP, Brasil.

RESUMO
Estudos de estabilidade dos fármacos e medicamentos compreendem uma etapa extremamente
importante do processo de pesquisa e desenvolvimento de novos medicamentos. Tais estudos são
necessários, primariamente, para garantir a segurança dos medicamentos quanto aos possíveis efeitos
indesejáveis que podem causar aos usuários e, também são uma ferramenta preditiva da etapa de
desenvolvimento farmacotécnico. Por isso, o objetivo deste trabalho foi apresentar um roteiro simples e
resumido para estudos de degradação forçada. São apresentados aqui os testes utilizados pela indústria
farmacêutica, seguindo critérios da ANVISA e órgãos reguladores internacionais, como hidrólise ácida e
básica, oxidação, fotodegradação, efeito da temperatura e temperatura em presença de umidade. Métodos
analíticos adequados permitem identificar e quantificar os produtos de degradação, fornecendo
informações extremamente úteis, sobre a via de degradação dos fármacos e medicamentos em estudo, e
quais alternativas farmacotécnicas, embalagens e logística são as mais adequadas para prolongar sua vida
útil. Um bom delineamento, configurado para atingir uma degradação máxima de 10-20%, pode ter um
impacto econômico muito grande, tanto para as indústrias, quanto para os governos, em termos de saúde
pública, e para o consumidor final.

Palavras-chave: Teste de degradação forçada, fármacos, medicamentos, métodos analíticos.

ABSTRACT
Stability studies of drugs and medicines comprise an extremely important step in the research and
development process of new medicines. Such studies are needed, primarily, to ensure the safety of
medicines for the possible side effects that they may cause to users and are also a predictive tool in
pharmaceutics development stage. Therefore, the aim of this paper is to present a simple and summarized
script for forced degradation studies. Here we present those tests used by the pharmaceutical industry,
according to criteria of ANVISA and international regulatory agencies such as acidic and basic hydrolysis,
oxidation, photodegradation, effect of temperature and temperature in the presence of moisture.
Appropriate analytical methods allow qualifying and quantifying degradation products, providing extremely
useful information on the degradation pathway of drugs and medicines under study, and which
pharmacotechnical alternatives, packaging and logistics are the most appropriate to prolong their life. A
good design, configured to achieve maximum degradation rate of 10-20 %, can have a significant economic
impact, both for industries and for governments, in terms of public health - and for end consumers.

Key-words: Degradation stress test, drugs, medicines, analytical methods.

Endereço para correspondência

Claudete Justina Valduga
Rua Maria Cândida, 1813 – 02071-013, São Paulo, SP, Brasil.
Fone: +55-11-2967-9148
email: Claudete.valduga@aedu.com
Alcântara, et al./Rev. Pesq. Inov. Farm. 5(1), 2013, 38-48.

INTRODUÇÃO A realização do teste de degradação

forçada, assim como o desenvolvimento do
método analítico para a identificação e
No intuito de garantir a segurança da população
quantificação dos produtos de degradação, são de
que faz uso de medicamentos, regulamentos cada
extrema importância para as indústrias
vez mais rígidos têm sido impostos às indústrias
farmacêuticas (Aubry; Tattersall; Ruan, 2009, p.
farmacêuticas pelas agências reguladoras de
139-163). Porque, no momento do registro, pós-
diversos países (Hasija et al., 2013; Brummer,
registro e renovação, o estudo de estresse,
2011). Essas agências reguladoras compõem o ICH
acompanhado de sua análise crítica deverá ser
(International Conference on Harmonisation -
contemplado (Silva et al., 2009; Bajaj; Silgla;
Comitê Internacional de Harmonização de
Skhuja, 2012; Castro; Rau, 2013; Blessy et al.,
Requisitos Técnicos para o Registro de Produtos
2013).
Farmacêuticos para Uso Humano) para normatizar
Os requisitos para os testes de
e regulamentar o registro de fármacos para uso
degradação forçada dependerão das necessidades
humano, protegendo a população de danos
do projeto e do estágio de desenvolvimento do
causados pela presença de impurezas em
fármaco ou do medicamento. Geralmente, são
medicamentos (Singh; Rehman, 2012; Castro;
realizados no início do processo de
Rau, 2013; Blessy et al., 2013; Análise, 2014).
desenvolvimento de medicamentos, onde o
O teste de degradação forçada, ou teste
fármaco é submetido a uma série de condições,
de estresse é definido como ensaio de
tais como hidrólise (ácido-base), fotoestabilidade,
estabilidade para fármacos e medicamentos sob
oxidação por peróxido e temperatura, a fim de
condições extremas, mais ainda do que aquelas
avaliar os subprodutos resultantes e suas
utilizadas para o estudo de estabilidade acelerada
possíveis vias de degradação (Silva et al., 2009;
(Klick et al., 2005; Silva et al., 2009; Brasil, 2012).
Singh; Rehman, 2012; Hotha et al., 2013). Para
Estes testes mostram uma tendência dentro do
isso, é necessário desenvolver um método
planejamento para o desenvolvimento de uma
analítico capaz de detectar a perda do fármaco e
forma farmacêutica (Alsante; Martin; Baertschi,
identificar os produtos de degradação (Hotha et
2003; Singh; Rehman, 2012). Pois, a investigação
al., 2013). O mais adequado é que o
da estabilidade intrínseca do fármaco fornece
monitoramento ocorra através de um único
abordagens de formulação e indica tipos de
método analítico, mas quando não é possível
adjuvantes, aditivos de proteção específicos e de
analisá-los conjuntamente através da mesma
acondicionamento, que, provavelmente,
metodologia analítica, métodos distintos devem
melhorarão a integridade do fármaco e do
ser desenvolvidos (Aubry; Tattersall; Ruan, 2009,
produto (Aulton, 2005; Silva et al., 2009;
p. 139-163; Hicks, 2012).
Brummer, 2011). O teste é utilizado como
Em resumo, os estudos de degradação
indicador de estabilidade e pode ser preditivo da
forçada são realizados para alcançar os seguintes
chance de sucesso dos produtos antes dos
objetivos:
estudos de estabilidade (Alsante; Martin;
1. Estabelecer vias de degradação de fármacos e
Baertschi, 2003; Aubry; Tattersall; Ruan, 2009, p.
medicamentos (Reynolds et al., 2002; Kats, 2005;
139-163; Cione; Tonhi; Silva, 2011, p. 25-36;
Hotha et al., 2013; Blessy et al., 2013).
Hotha et al., 2013; Hossain et al., 2013).
2. Diferenciar os produtos de degradação que
Os estudos de degradação forçada
estão relacionados com o fármaco daqueles que
também são utilizados para facilitar o
são gerados a partir de excipientes e/ou
desenvolvimento de uma metodologia analítica,
adjuvantes numa formulação (Reynolds et al.,
fornecendo condições de obter uma melhor
2002; Kats, 2005; Brummer, 2011; Blessy et al.,
compreensão do ingrediente ativo e a
2013).
estabilidade de produtos durante a fase de
3. Elucidar a estrutura dos produtos de
desenvolvimento (Aubry; Tattersall; Ruan, 2009,
degradação (Reynolds et al., 2002; Blessy et al.,
p. 139-163; Cione; Tonhi; Silva, 2011, p. 25-36).
2013).
Também, podem fornecer informações sobre as
4. Determinar a estabilidade intrínseca de um
possíveis reações de degradação e produtos
fármaco na formulação (Blessy et al., 2013).
formados (Reynolds et al., 2002; Castro; Rao,
5. Elucidar os mecanismos de degradação, tais
2009; Singh; Rehman, 2012; Hotha et al., 2013).
como hidrólise, oxidação, termólise ou fotólise do

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fármaco e do medicamento (Blessy et al., 2013;
ICH Q1A(R2), 2003; Reynolds et al., 2002; Singh;
Bakshi, 2000).
6. Desenvolver um método analítico adequado
para indicar a estabilidade (Cione; Tonhi; Silva,
2011, p. 25-36).
7. Compreender as propriedades físico-químicas
das moléculas do fármaco (Brummer, 2011).
8. Gerar formulações mais estáveis (Blessy et al.,
2013).
9. Produzir um perfil de degradação semelhante
ao que seria observado em um estudo formal de
estabilidade, sob as condições preconizadas pelos
guias do ICH (ICH guidelines. 2014).
10. Resolver problemas relacionados à
estabilidade (Brummer, 2011).
O objetivo deste trabalho é fornecer
orientações para o planejamento e execução de
experimentos preditivos de estabilidade para
fármacos e medicamentos em fase de
desenvolvimento, utilizando como ferramenta o
teste de degradação forçada.
LEGISLAÇÃO VIGENTE SOBRE
TESTES DE DEGRADAÇÃO
FORÇADA
Estudos de degradação forçada estão descritos
em várias diretrizes internacionais. O ICH publicou
um conjunto de diretrizes que foram discutidas,
aprovadas e adotadas pelas autoridades
reguladoras norte-americana, européia e
japonesa (ICH guidelines, 2014).
Na maioria dos casos, as diretrizes do ICH
só se aplicam aos pedidos de comercialização de
novos produtos, ou seja, eles não se aplicam à
fase de estudos clínicos. No entanto, uma vez que
as condições utilizadas para a degradação forçada
são definidas apenas em termos gerais, é possível
aplicá-las para o desenvolvimento de métodos
analíticos que indiquem a estabilidade durante a
fase clínica. As mesmas condições de degradação
podem, então, ser aplicadas ao medicamento,
durante o desenvolvimento e comercialização
(Singh; Bakshi, 2000; Kats, 2005).
As principais diretrizes do ICH aplicáveis a
estudos de degradação forçada são mostradas na
Tabela 1.
A Agência Nacional de Vigilância Sanitária
(ANVISA) na Resolução - RDC N° 45, de 09 de
agosto de 2012, no artigo 36, publicou a
determinação dos testes de degradação forçada
nos fármacos. Eles podem ajudar a identificar seus
prováveis produtos de degradação e o
procedimento analítico a ser adotado no estudo
de estabilidade, sendo que a natureza dos testes
depende do tipo de molécula a ser estudada
(Brasil, 2012; Brasil, 2013).
Tabela 1. Principais diretrizes do ICH para estudos
de degradação forçada.
Norma Protocolo
Stability Testing of New Drug
ICH
Substances and Products (ICH Q1A(R2)
Q1A(R2)
guideline, 2003)
Photostability Testing of New Drug
ICH Q1B Substances and Products (ICH Q1B
guideline, 1996)
ICH Q1C
Stability Testing for New Dosage Form
(ICH Q1C guideline, 1996)
Bracketing and Matrixing Designs for
Stability Testing of New Drug
ICH Q
Substances and Products (ICH Q1D
guideline, 2002)
Validation of Analytical Procedures:
ICH Q2B Methodology (ICH Q2B guideline,
2005)
ICH Impurities in New Drug Substances
Q3A(R2) (ICH Q3B(R2) guideline, 2006)
ICH Impurities in New Drug Products (ICH
Q3B(R2) Q3B(R2) guideline, 2006)
Fonte: Adaptado de Klick et al., 2005; Hasija et al., 2013.
Os efeitos da temperatura, umidade,
oxidação, incidência de luz e a susceptibilidade à
hidrólise em ampla faixa de pH, devem ser
incluídos; e quando não realizado algum dos
testes citados, deve-se apresentar uma
justificativa técnica. A rota de degradação e o
desenvolvimento e validação dos métodos
analíticos podem ser estabelecidos através da
análise dos produtos de degradação gerados nos
testes, que podem ser feitos em apenas um lote
(Brasil, 2012; Brasil, 2013).
Quando demonstrado que alguns
produtos de degradação não são formados sob as
condições de estabilidade acelerada e de longa
duração, não é necessário avaliá-los. As impurezas
de síntese, que não são produtos de degradação,
não necessitam ser descritas no estudo de
estabilidade, desde que se assegure que elas não
interfiram na identificação dos produtos de
degradação (Brasil, 2012).
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O estudo de fotoestabilidade é realizado
com o objetivo de demonstrar que a exposição à
luz não resulta em alterações significantes na
molécula do fármaco. Ele deve ser constituído de
duas partes: degradação forçada e teste
confirmatório, podendo ser realizado apenas com
um lote do fármaco. Quando não realizado este
teste deve-se apresentar uma justificativa técnica
com evidência científica de que o fármaco não
sofre degradação na presença de luz (Brasil,
2012).
As amostras submetidas aos estudos de
degradação forçada devem ser acondicionadas
em recipientes quimicamente inertes e
transparentes, deve-se usar uma variedade de
condições de exposição, dependendo da
fotossensibilidade da substância e da intensidade
da fonte usada. Deve-se limitar a exposição do
fármaco e finalizar os estudos antes de
decomposição excessiva. Os níveis de exposição
usados devem ser justificados (Brasil, 2012).
Se os produtos de degradação não forem
formados nos estudos confirmatórios, não há
necessidade de avaliação dos mesmos. Se o
fármaco for testado durante a fase de
desenvolvimento, as características de
fotoestabilidade devem ser confirmadas em um
lote representativo de produção. Se esses
resultados não forem conclusivos, os testes
devem ser repetidos com até dois lotes adicionais
representativos de produção (Brasil, 2012).
A fonte de luz utilizada no teste deve vir
acompanhada da especificação espectral do
fabricante e estar de acordo com o protocolo
definido. A temperatura deve ser acompanhada
para minimizar sua influência nos resultados dos
testes, ou ainda pode-se utilizar uma amostra-
controle na ausência de luz, nas mesmas
condições do teste. Pode ser utilizada uma fonte
de luz similar ao padrão de emissão D65/ID65,
como uma lâmpada fluorescente artificial
combinando emissão visível e ultravioleta (UV)
(Brasil, 2012).
Conforme definido na ISO 10977 (1993), o
padrão internacional reconhecido para luz do dia
é D65 e o equivalente ao padrão de luz indireta de
interiores é ID65. Para eliminar radiações de
fontes de luz emitindo radiação significativa
abaixo de 320 nm deve ser utilizado filtro. A
amostra pode ainda ser exposta à combinação da
lâmpada branca fluorescente fria, similar à ISO
10977 (1993) e da Lâmpada fluorescente UV, com
espectro distribuído entre 320 e 400 nm, e
emissão máxima de energia entre 350 e 370 nm
(Brasil, 2012).
Uma proporção significativa da luz
ultravioleta deve estar entre as bandas de 320 e
360 nm e entre 360 e 400 nm. Se forem utilizadas
outras condições na realização dos testes, deve-se
justificar os motivos. As amostras devem ser
expostas a, no mínimo, 1,2 milhões de lux horas,
integrados a uma energia de ultravioleta próxima
de, no mínimo, 200 watt hora/m2 para estudos de
confirmação (Brasil, 2012).
As amostras sólidas devem ser
acondicionadas em recipientes de vidro ou
plástico e cobertos, espalhadas de forma a não
ultrapassar a espessura de 3 mm. As amostras
líquidas devem ser expostas em recipientes
quimicamente inertes e transparentes (Brasil,
2012).
De acordo com a RDC 45/2010 havia a
exigência do relatório de estudo de estabilidade
conter obrigatoriamente as informações sobre a
quantificação de produtos de degradação e
método analítico correspondente, ou a
justificativa técnica para a não realização, porém
sem um direcionamento de quais testes se
deveriam realizar. Havia sido dada uma ênfase
maior ao teste de degradação por
fotoestabilidade.
Somente em 20 de Dezembro de 2013 a
ANVISA publicou a RDC 58 que estabelece
parâmetros para a verificação de produtos de
degradação em medicamentos, para elaboração
do perfil de degradação correspondente e para a
notificação, identificação e qualificação de
produtos de degradação em medicamentos ao
longo do prazo de validade do medicamento. Este
teste se aplica aos medicamentos com
substâncias ativas sintéticas e semi-sintéticas,
classificados como novos genéricos e similares.
A ANVISA exige que o estudo de
degradação forçada deve ser realizado em um
lote, em escala laboratorial, piloto ou industrial do
medicamento e que para fins de comparação a
execução do estudo, deve ser feita também com o
medicamento, com a matriz (em alguns artigos é
referida como placebo) e com o fármaco isolado e
associado. O estudo deverá ser realizado em
todas as concentrações do medicamento (Brasil,
2013).
A amostra deverá ser submetida às
seguintes condições de degradação forçada:
aquecimento; umidade; solução ácida; solução
básica; solução oxidante; exposição fotolítica; e
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íons metálicos. Caso alguma das condições não degradação não exceder o limite adequado
possa ser empregada devido às características observado em estudos de toxicidade.
intrínsecas à amostra, deve-se justificar
tecnicamente à ANVISA (Brasil, 2012; Brasil, Tabela 2. Relação entre dose máxima diária do
2013). fármaco e limites dos produtos de degradação
Preconiza-se também que os estudos de para notificação, identificação e qualificação na
degradação forçada devem promover degradação ANVISA.
superior a 10% (dez por cento) e inferior àquela Dose máxima 2
1 Limites
que levaria à degradação completa da amostra e diária
possa comprometer o teste. Solicita-se que nos Limites de ≤1g 0,1 %
casos em que a degradação for inferior a 10 %, a notificação >1g 0,05 %
empresa deve apresentar justificativa técnica
fundamentada (Brasil, 2013). 1 % ou 5 mg ITD, o
< 1 mg
Justifica-se a exigência do teste, pois os que for menor
resultados servirão de base para o 0,5 % ou 20 mg ITD,
Limites de > 1 mg-10 mg
desenvolvimento e validação da metodologia o que for menor
identificação
analítica dos produtos de degradação formados e 0,2 % ou 2 mg ITD,
para a análise crítica do perfil de degradação do > 10 mg-2 g
o que for menor
medicamento. Na análise crítica do perfil de
>2g 0,1 %
degradação deverá ser contemplada a verificação
da pureza do pico cromatográfico do fármaco no 1,0 % ou 50 mg ITD,
< 10 mg
medicamento e a avaliação dos fatores que o que for menor
podem interferir na estabilidade do medicamento 0,5 % ou 200 mg
(Brasil, 2013). > 10 mg a
Limites de ITD, o que for
100 mg
Os testes e os respectivos resultados dos qualificação menor
ensaios de degradação forçada deverão ser 0,2 % ou 3 mg ITD,
refeitos e reapresentados quando forem > 100 mg – 2 g
o que for menor
solicitadas ao órgão regulador alterações ou
>2g 0,15 %
inclusões na rota de síntese do fármaco; ou 1
mudanças quantitativas e qualitativas de Quantidade máxima do fármaco administrado por dia.
2
Limites dos produtos de degradação são expressos como a
excipiente na composição do medicamento. Na percentagem do fármaco ou como a ingestão total diária
existência de mais de um fabricante do fármaco, (ITD) de um produto de degradação.
os resultados de degradação forçada deverão ser Fonte: Adaptado da RDC 58/2013 da ANVISA (Brasil, 2013).
avaliados para cada fabricante (Brasil, 2013).
A necessidade de notificação, O fabricante do medicamento não será
identificação e qualificação dos produtos de dispensado de identificar os produtos de
degradação no decorrer do estudo de estabilidade degradação. Os limites de aceitação para cada
do medicamento deverá ser avaliada com base produto de degradação individual e o limite total
nas informações contidas na Tabela 2. de produtos de degradação deverão ser incluídos
Para a ANVISA, o produto de degradação nas especificações de liberação do medicamento
poderá ser considerado qualificado quando e do estudo de estabilidade e se superarem o
atender ao menos uma das seguintes condições limite de notificação também (Brasil, 2013).
(Brasil, 2013): A ANVISA poderá solicitar o inicio do
I - o produto de degradação for um metabólito monitoramento de determinados produtos de
significativo encontrado durante estudos em degradação para medicamentos registrados antes
humanos ou animais; desta resolução, caso existam evidências de
II - a quantidade observada e o limite de aceitação toxicidade ou perda de eficácia (Brasil, 2013).
proposto de um produto de degradação Esta Resolução se aplica aos registros de
estiverem adequadamente justificados em medicamentos ou inclusão de nova concentração
literatura científica ou compêndios oficiais; ou ou nova forma farmacêutica, bem como à
III - a quantidade observada e o limite de renovação de registro e às alterações pós-registro
aceitação proposto para um produto de de medicamentos. Os medicamentos já

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registrados devem se adequar na próxima
renovação de registro (Brasil, 2013).
Sobre os testes de hidrólise (ácido-base),
de oxidação por peróxido e temperatura, a
legislação brasileira ainda não é clara e, portanto
esses testes foram abordados de acordo com o
que preconizam os guias do ICH (ICH guidelines,
2014) e Food and Drug Administration (FDA) (FDA
Guidance, 1998), em conjunto com a experiência
profissional para a realização destes testes.
TESTE DE DEGRADAÇÃO
FORÇADA
a) Considerações gerais
Existem muitos guias de grande utilidade como
ponto de partida para a implantação de uma
rotina de estudo de degradação forçada. No
entanto, alguns detalhes práticos fogem do
escopo de tais guias, desta forma, este trabalho
traz informações complementares que podem
ajudar na implementação deste tipo de estudo.
O ICH, por exemplo, em seu guia Q1A(R2)
Stability Testing of New Drugs Substances and
Products, preconiza que: “Os testes de estresse do
fármaco podem ajudar a identificar os prováveis
produtos de degradação. Que por sua vez, podem
ajudar a estabelecer as vias de degradação e a
estabilidade intrínseca da molécula, e auxiliar na
validação de métodos indicadores de estabilidade.
A natureza do teste de estresse dependerá do
fármaco e da forma farmacêutica do
medicamento (Ngwa, 2010; Castro; Rau, 2013).
Esta informação é suficiente para alertar uma
companhia farmacêutica da necessidade de
monitorar o seu produto durante as diversas
etapas de desenvolvimento e tempo de prateleira
(ICH Q1A(R2), 2003).
O teste de degradação forçada indica
previamente os possíveis produtos de
degradação, que podem surgir durante os estudos
de estabilidade acelerada e de longa duração, que
predispõem o tempo de vida útil do
medicamento. Porém, o método analítico dever
ser indicador de estabilidade, ou seja, deve ser
suficientemente seletivo para detectar o fármaco
e os produtos de degradação concomitantemente
(Ngwa, 2010; Hossain et al., 2013). A identificação
de tais produtos permite identificar as principais
vias de degradação (térmica, por hidrólise
peroxidativa e fotolítica) (Ngwa, 2010; Singh;
Rehman, 2012). Essas informações são
extremamente importantes para o
desenvolvimento da formulação mais adequada e
estável e também quando se troca de fornecedor
do princípio ativo (API) (Ngwa, 2010).
No Brasil, inicialmente, este assunto foi
explorado de forma muito comercial, vinculando a
execução dos testes de degradação forçada à
aquisição de equipamentos sofisticados para a
realização dos mesmos. Assim como aconteceu há
alguns anos antes com a validação de métodos
analíticos. Isso, de uma forma geral, assustou
muitos profissionais e limitou o investimento das
indústrias farmacêuticas nacionais para o
desenvolvimento desta prática. Embora houvesse
a necessidade de realizar estes testes,
principalmente para registro de novos produtos, a
saída era contratar empresas terceirizadas para
sua realização.
Quando as indústrias farmacêuticas
lançam mão deste tipo de serviço, elas deixam de
formar e manter em seu quadro, especialistas
com qualidade e conhecimento técnico, capazes
de realizar diferentes tipos de estudos científicos.
Por isso, existe uma carência muito grande de
profissionais que saibam realizar e interpretar
esses estudos, com rigor analítico e científico
necessário. Além de ter um grande impacto
econômico para as empresas que dependem da
terceirização.
Assim, para cumprir a proposta deste
trabalho, a seguir são mostradas algumas
sugestões para condução de um estudo de
degradação forçada, de forma clara e objetiva, a
fim de dar ao profissional maior segurança ao
implementar este estudo.
b) Modelo de implementação
É preciso compreender que para a realização do
teste de degradação forçada, é necessário
provocar a degradação significativa do fármaco,
do fármaco na matriz, bem como da matriz, para
desenvolver um método analítico adequado. As
condições de estresse impostas às amostras não
podem ser muito severas, a fim de evitar
degradação extrema e fora da realidade de uma
condição normal de estocagem (Reynolds et al.,
2002). É desejável promover uma degradação de
10 a 20%, semelhante ao que pode ocorrer
durante o estudo de estabilidade e/ou ao longo
da vida útil do produto (Baertschi, 2011; Blessy et
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al., 2013). Ao se atingir uma taxa de degradação
suficiente para realizar o estudo, as condições de
estresse são finalizadas.
O estudo de degradação forçada pode
servir como uma alternativa para monitorar o
produto, bem como para prever suas vias de
degradação. Já que, não é viável o
acompanhamento em tempo real (estabilidade de
longa duração) devido à brevidade dos
cronogramas de desenvolvimento, características
do processo, excipientes e outros fatores
ambientais (Ngwa, 2010; Brummer, 2011; Blessy
et al., 2013).
Usualmente, os experimentos de
degradação forçada são conduzidos com um lote
do medicamento, comparando-se com o fármaco
isolado e os componentes da matriz, sob
condições típicas de degradação, como variação
da temperatura, umidade; e quando apropriado,
oxidação, fotólise e suscetibilidade à hidrólise por
extensa variação dos valores de pH (Silva et al.,
2009). Na Tabela 3 são mostradas as condições de
estresse para fármacos e medicamentos na forma
sólida ou em solução/suspensão (ICH, 2014;
Ngwa, 2010; Brummer, 2011; Blessy et al., 2013).
São descritas as condições gerais de degradação,
sem especificar a solubilidade das amostras.
Porém, existem condições experimentais
adequadas para amostras solúveis e insolúveis em
água. Na Tabela 4 são mostradas as condições
típicas de estresse para fármaco, medicamento e
matriz (somente os excipientes) solúveis em água,
segundo o que preconiza o guia Q1A(R2) do ICH
(ICH Q1A(R2), 2003; Baertschi, 2011).

Tabela 3. Condições típicas de estresse para fármacos e medicamentos, em seus diferentes estados
físicos/formas de apresentação, baseadas nos protocolos do ICH.
Fármaco Medicamento
Condição Exemplos
Solução/
Sólido Sólido Solução/ suspensão
suspensão
Ácido/Base 0,01 a 0,1 N - X - X

Oxidação 0,3 % de H2O2 - X - X

Fotodegradação 1200 lux/hora X X X X
Temperatura 10 a 70 °C X X X X
10 a 70 °C
Temperatura/umidade X - X -
60 - 90 U.R.
Nota: para eliminar o efeito matriz, utiliza-se a mesma como controle a fim de excluir as impurezas que não são produtos de
degradação; por exemplo, impurezas decorrentes de excipientes.
Fonte: Adaptado de Reynolds et al., 2002; Brummer, 2011.

Tabela 4. Configuração de um estudo de degradação forçada para fármacos, medicamentos e matriz, solúveis
em água, seguindo condições preconizadas pelo ICH.
Volume da
Condição Adicionar Submeter à
solução estoque

Controle 1 mL 1 mL de água Temperatura ambiente protegido da luz

Ácido 1 mL 1 mL de HCl 1N 50 °C/24 horas
Base 1 mL 1 mL de NaOH 1N 50 °C/24 horas
Temperatura 1 mL 1 mL de água 60 °C/24 horas
Oxidação 1 mL 1 mL de H2O2 3% 50 °C/24 horas
Fotodegradação 1 mL 1 mL de água Exposição > 1,2 milhões de lux hora
1 mL de HCl 1N/
Branco ácido/base - 50 °C/24 horas
1 mL de NaOH 1N
Branco peróxido - 1 mL de H2O2 3% 50 °C/24 horas

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Alcântara, et al./Rev. Pesq. Inov. Farm. 5(1), 2013, 38-48.

A Tabela 5 mostra uma configuração de que preconiza o guia do ICH - Q1A(R2), também
condições de estresse para estudos de amostras para o fármaco, o medicamento e a matriz
que sejam insolúveis em água, ainda seguindo o (Baertschi, 2011; ICH Q1A(R2), 2003).

Tabela 5. Configuração de um estudo de degradação forçada para fármacos, medicamentos e matriz,

insolúveis em água, seguindo condições preconizadas pelo ICH.

Quantidade de
Condição Adicionar Submeter à
amostra

Temperatura ambiente
Controle 1 3 - 5 mg -
protegido da luz
*
Ácido 3 - 5 mg 1,5 – 2,5 mL de HCl 1N 50 °C/24 horas
*
Base 3 - 5 mg 1,5 – 2,5 mL de NaOH 1N 50 °C/24 horas

Temperatura 3 - 5 mg - 60 °C/24 hours

*
Oxidação 3 - 5 mg 1,5 – 2,5 mL H2O2 1% 50 °C/24 horas

Fotodegradação 3 - 5 mg - Exposição > 1,2 milhões de lux hora

1,5 – 2,5 mL HCl 1N/

Branco ácido/base - 50 °C/24 horas
1,5 – 2,5 mL 1N NaOH

Branco peróxido - 1,5 – 2,5 mL H2O2 1% 50 °C/24 horas

*Adicionar quantidade suficiente de solvente orgânico, para solubilizar a amostra, evitar a utilização de metanol; usar
preferencialmente acetonitrila.

Decorrido os tempos pelos quais as c) Interpretação dos dados

amostras são submetidas às condições de
estresse descritas nas tabelas anteriores,
neutralizam-se as soluções com ácido ou base
antes da diluição final, se necessário.
Posteriormente, as mesmas são diluídas à
concentração nominal do ensaio com diluente
adequado à análise, verificando se não há
precipitação. As amostras são comumente
analisadas por cromatografia líquida, utilizando
detector de arranjo de diodos (DAD/PDA) com
varredura de 200 a 400 nm, pois a maioria dos
fármacos absorve nesta faixa de comprimento de
onda, embora os detectores DAD possam
trabalhar de 190 a 800 nm.
Cabe salientar que as condições
experimentais apresentadas nas tabelas
anteriores servem como sugestão para iniciar os
estudos de estresse, com o objetivo de promover
uma degradação na faixa de 10-20%. Não
havendo degradação nestas condições, essas
podem ser extrapoladas a fim de se atingir a taxa
desejada, levando-se em conta o bom senso a
respeito das características inerentes às amostras
e condições de armazenamento.
O método analítico é desenvolvido com o
intuito de detectar o fármaco e todos os possíveis
produtos de degradação obtidos através das
condições de estresse anteriores. Os
cromatogramas gerados nos múltiplos
comprimentos de onda fornecem informações
sobre a degradação do fármaco ao se avaliar a
pureza de pico. Como sugestão, utiliza-se um
limite de 990 para quem trabalha com a
plataforma Chemstation (ou a critério do
especialista, de acordo com a plataforma
utilizada), tanto para a cromatografia líquida de
alta eficiência, quanto para eletroforese capilar,
equipados com DAD.
Na interpretação dos dados é importante
saber o que é produto de degradação do fármaco,
componentes da matriz, ou impurezas geradas
pela degradação da mesma. Através do balanço
de massas de ativo e produtos gerados é possível
determinar a taxa de degradação.
Se a pureza do pico falhar, devem-se
verificar os parâmetros de integração antes de
alterar o método analítico. Porém, se mesmo

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Alcântara, et al./Rev. Pesq. Inov. Farm. 5(1), 2013, 38-48.
assim o valor de pureza não for atingido, o
método cromatográfico deve ser modificado,
alterando-se a rampa do gradiente do solvente
orgânico, ajustando o pH da fase móvel ou
alterando a fase estacionária.
CONCLUSÃO
As condições de estresse mais relevantes em um
estudo típico de degradação, seguindo um roteiro
simples e fácil de ser implantado, são exposição à
luz, calor, umidade, hidrólise (ácido/base) e
oxidação, ou ainda uma combinação desses
parâmetros. Um delineamento individual deve ser
configurado para atingir uma degradação na faixa
de 10 a 20%, pois acima disso estará fora dos
requisitos de estabilidade do medicamento e,
portanto, fora da realidade. Para atingir esta faixa
de degradação, as condições de estresse podem
variar em função da estrutura do fármaco, o tipo
de medicamento e as condições de
armazenamento. A partir dos testes de estresse
podem ser gerados produtos de degradação, que
facilitam o desenvolvimento de um método
analítico para determinação dos subprodutos
relevantes. Contudo, devido à peculiaridade de
cada fármaco e medicamento, o delineamento do
estudo torna-se uma das grandes dificuldades de
sua realização, ao mesmo tempo em que se
coloca como desafio necessário aos profissionais,
que devem agir com bom senso e de acordo com
seus conhecimentos, a fim de gerar redução de
tempo e custo no desenvolvimento de produtos
farmacêuticos.
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