Académique Documents
Professionnel Documents
Culture Documents
1
Además, estudios de personas infectadas por VIH han demostrado que la presencia
de una copia del alelo Δ32 retarda la progresión de la condición clínica por
aproximadamente 2 años. Un solo alelo CCR5-Δ32 resulta en una expresión
disminuida de moléculas CCR5 normales en las células T CD4+ lo que podría
explicar el efecto en la tasa de progresión de la enfermedad. A nivel laboratorio, se
ha identificado al receptor CCR5 como el correceptor esencial en cepas virales con
tropismo para los macrófagos, que son las más comúnmente encontradas en la fase
inicial de la infección. La evidencia indica que este receptor, junto con CD4, es
necesario para la infección de los macrófagos/monocitos.
Finalmente, sabríamos que es posible que un individuo con el alelo CCR5-Δ32
pueda no infectarse VIH R5.
2
JUSTIFICACIÓN
A nivel mundial el virus del VIH constituye un importante problema de salud pública
ya que no existe una cura para eliminar el virus del organismo y los programas para
la prevención no son adecuados ni abarcan en su totalidad a toda la población como
consecuencia de ello la incidencia de las personas que contraen el virus va en
aumento y como en la mayoría de los casos no se diagnostica de manera temprana
por lo que no se da un tratamiento oportuno y llegando a ser una de las principales
causas de muerte a nivel mundial. Para poder infectar a las células el virus del VIH
necesita unirse a través de sus glicoproteína 120 (gp120) a ciertos receptores
principalmente el receptor CD4, CCR5 y CCX4, si existe alguna mutación en algunos
de estos receptores le es muy difícil al virus entrar a la célula para replicarse. En
México hay pocos estudios de las mutaciones en los genes de estos principales
receptores. Es por esto que es de mucha importancia que se realicen
investigaciones para el receptor CCR5 ya que se sabe que la deleción en el gen
CCR5∆32 brinda un cierto grado de resistencia frente al virus y/o una baja
progresión de la enfermedad.
3
OBJETIVOS
Objetivo general
Objetivos específicos
4
MARCO TEÓRICO
Figura 1. Estructura del VIH. La membrana que cubre el virus es adquirida a la salida
de la célula hospedera, en la cual contiene glicoproteínas virales de estructura
(gp120 y gp141). La proteína p17 de la matriz, se encuentra ligada a su membrana.
Adaptado de Avila-Rios y Reyes-Teran, 2009.
5
Figura 2. Genoma del VIH. Su genoma viral incluye 3 genes principales gag, pol y
env, que codifican para proteínas estructurales. Cuenta con 6 marcos abiertos de
lectura (ORF) que originan las proteínas accesorias reguladoras del virus (Vif, Vpr,
Vpu, Tat, Rev y Nef). En sus extremos se encuentran regiones largas terminales de
repetición (LTR) en el cual se incluyen el inicio de la transcripción, contienen
regiones promotoras (U3) y de unión de factores de transcripción celular (U5), así
como regiones para favorecer la dimerización y encapsulamiento del genoma del
virus dentro del virión. Además de Matriz (MA), Cápside (CA, Nucleocápside (NC),
Proteasa (PR), Transcriptasa inversa (RT), Integrasa (IN), glicoproteína de superficie
(gp120) y glicoproteína transmembranal (gp41). Adaptado de Ávila-Ríos y Reyes-
Terán, 2009.
El VIH se caracteriza por un alto grado de variabilidad genética in vivo, está causado
por dos tipos de retrovirus el VIH-1 y el VIH-2, de los cuales el primero se presenta
mundialmente. Estudios reportados para secuencias del gen gag y env revelan la
existencia de 3 grupos genéticos: M, O Y N (3).
6
Grupo O (Outlier o externo): Tiene una prevalencia de 0.4 %, endémico de Camerún
y países próximos en África Central.
Grupo N (New): Es el más reciente identificado y con un número de pacientes
limitados (7).
Con respecto al VIH-2, es predominante en África Occidental, se caracteriza por ser
menos virulento que el VIH-1, con un mayor periodo de latencia, menor actividad
replicativa y tasas de progresión más lenta (7).
INTEGRACIÓN
El ADN viral se integra en un cromosoma de la célula hospedera a través de la
enzima integrasa con el fin de establecer una infección productiva. La integrasa
remueve dos nucleótidos de los extremos del genoma viral, para catalizar la reacción
de transferencia de hebra del ADN, generando un corte escalonado en el ADN del
hospedero uniéndolo al ADN viral (4).
El ADN viral también puede tener 3 destinos diferentes: los dos extremos del ADN
viral pueden unirse formando círculos de 2 LRT, sufrir una combinación homologa
originando círculos de un LTR o puede autointegrarse produciendo una estructura
circular rearreglada. Los sitios de integración en los cromosomas de las células
hospederas son importantes para el virus y el hospedero, ya que influye en la
expresión eficiente del genoma viral y en la activación o inactivación de la
transcripción de genes celulares, respectivamente (2).
8
su función consiste en fosforilar la región C-terminal de la ARNPII para la activación
de la enzima (2).
Los eventos de corte y empalme son fundamentales para la producción de diversas
especies de ARNm, responsables de la síntesis de las proteínas virales durante el
ciclo de replicación del VIH. Los ARNm con pocos eventos de corte y empalme
originan las proteínas virales estructurales, mientras que los ARNm con múltiples
eventos típicamente originan las proteínas accesorias/reguladoras. La cantidad
relativa de ARNm con múltiples eventos contra los no cortados o con un solo evento
de corte y empalme la controla la proteína Rev (regulador de la expresión viral).
9
Figura 3. Esquema del ciclo biológico del VIH. 1) Unión de la gp120/gp41 a los
receptores de membrana y fusión. 2) Transcripción inversa del material genético del
virus. 3) Integración del ADN viral en el ADN de la célula hospedadora. 4)
Transcripción del ADN proviral y formación del ARN mensajero viral 5) Traducción y
síntesis de las proteínas necesarias para la formación de viriones. 6) Ensamblaje de
los virus inmaduros. 7) Salida de los viriones al medio extracelular totalmente
formados. (Adaptado de Rodríguez Da Silva, 2015).
10
seroconvertir, siendo evaluados de acuerdo con niveles de carga viral y decremento
de células CD4+ o bien en estudios comparativos entre grupos de individuos
infectados con diferente velocidad de progresión (5).
ALELO CCR5delta32
Este polimorfismo se caracteriza por codificar para una proteína incompleta incapaz
de llegar a la superficie celular, no existiendo el receptor para el VIH lo cual impide la
entrada del virus a la célula, proporciona resistencia casi completa
al VIH-1 en el estado homocigoto y resistencia parcial
con una progresión de la enfermedad más lenta en el estado heterocigoto. Esta
deleción tiene una prevalencia en caucásicos: En el norte de Europa, es
prácticamente ausente en África, Asia y nativos de América, rara en Australia y
Afroamericanos. En México tiene una frecuencia de 3 a 4% poblacional, sin tener
relación con antecedentes caucásico (6).
FACTORES INMUNOLÓGICOS
El complejo principal de hiscompatibilidad (MHC) son reguladores de la respuesta
inmunológica son genes que se localizan en el cromosoma 6, éstos genes se dividen
en MHC clase I, II y III principalmente sin embargo, en humanos conocido como
HLA, el de clase I y II son altamente polimórficos y cada uno es expresado por tres
regiones diferentes: HLA-A, HLA-B y HLA-C para el de clase I mientras que los
genes implicados en el de clase II son HLA-DQ, HLA-DR y HLA-DP. Las variaciones
11
de estos haplotipos afectan principalmente la composición del surco que tiene
contacto con los antígenos por lo que se ve afectado la presentación del antígeno a
las células CD4+ y CD8+ y por consiguiente que se inicie la respuesta ante
microorganismos y sustancias extrañas a nuestro organismo (8).
FACTORES GENÉTICOS
Ciertas mutaciones en alelos que promueven la expresión de receptores en las
células del sistema inmunológico, los cuales activan una respuesta al activarse por
diversas citocinas, en el caso del VIH el principal receptor de las cepas virales de
VIH-1 cuyo tropismo es a los macrófagos y además no provocan sincicio es CCR5
(receptor 5 de las quimiocinas β) a diferencia del receptor CXCR4 ( Receptor 4 de
las quimiocinas α) cuyo tropismo es a las células CD4+ y promueven sincicio a los
linfocitos T, otros receptores de quimiocinas β que el VIH-1 usa es el CCR2b y
CCR3 (12).
12
células CD4+ de manera lenta, además en la forma homocigota de esta mutación en
el gen del receptor CCR5 muestran resistencia frente al virus por lo que el virus
nunca se activa en su organismo y no da lugar al SIDA (14).
FACTORES VIROLÓGICOS
Estos son factores ajenos al huésped y están relacionados con la variabilidad
genética del virus así como también como su evolución puesto que algunas cepas
menos evolucionadas son más susceptibles al ataque del sistema inmunológico del
huésped y tienen menor capacidad evasiva. Los principales genes del virus del VIH
son los genes estructurales que codifican a proteínas de la capside, envoltura y
enzimas para su replicación, genes reguladores como tat y rev principalmente y
genes accesorios los cuales están relacionados con la patogenia como vif, vpu, nef y
vpr, cualquier mutación en estos genes afecta el ciclo de replicación del virus y por lo
tanto que la progresión de la enfermedad sea lenta promoviendo que el sistema
inmunológico tenga un mayor control ante el virus (15).
13
glicoproteína 41, ésta sirve para que la membrana del virus se pueda fusionar con la
membrana de la célula. Según la capacidad de la glicoproteína ya sea de unirse al
correceptor CCR5 se le denomina cepa R5 trópica o si se une al correceptor CXCR4
se le llama cepa X4 trópica, sin embargo, hay algunas cepas que se unen a ambos
de manera indiferente y se les denomina cepas con tropismo dual (17).
Se han llevado a cabo estudios sobre las quimiocinas del receptor CCR5 nativas y
se ha comprobado que inhiben la infección del VIH-1 in vitro ya que previenen la
unión de la glicoproteína GP120 de la envoltura del virus por la unión de la
quimiocina con su receptor disminuyendo los niveles de correceptor de la superficie
celular implicando un aumento en el bloqueo estérico y por tanto una baja
regulación de este receptor. Por ello este receptor ha sido estudiado mucho y se ha
usado como diana farmacológica en el tratamiento contra el VIH usando análogos
bloqueantes de estos receptores, cada vez que tengan mayor afinidad a ellos, para
evitar que el virus infecte más células y se replique desenfrenadamente, muchos
antiretrovirales utilizados contra el VIH tienen este mecanismo farmacológico de
bloqueante estérico del receptor CCR5 (11).
Según CONASIDA el SIDA debe ser considerada una emergencia en salud a nivel
todo el mundo y en México se ha establecido como un problema a nivel nacional
teniéndose como objetivo evitar que esta enfermedad se extienda en la población en
general, en el año 2001 se registró una incidencia de 3579 casos, una morbilidad de
51 196 y una prevalencia de 19 899 personas. Para el año 2013 la prevalencia fue
14
de 180 000 personas, una incidencia de 9 300 casos nuevos y una mortalidad en el
año 2012 de 4 974 estimándose una tasa de mortalidad a causa del SIDA por 100
000 habitantes de 4.2 (21).
ESTIMACIÓN ALTA
ESTIMACIÓN MEDIA
ESTIMACIÓN BAJA
ESTIMACIÓN ALTA
ESTIMACIÓN MEDIA
ESTIMACIÓN BAJA
15
Actualmente según la Dirección general de epidemiologia y la Secretaria de Salud
con información actualizada para el segundo trimestre del 2017 en México la
incidencia de VIH y SIDA es de 3 260 y 2 338 respectivamente, la prevalencia de
VIH y SIDA fue de 68 213 y 76 010 respectivamente, la tasa de mortalidad del SIDA
por cada 100 000 habitantes fue de 3.93 en el 2016. Los estados con mayor tasa de
incidencia del VIH en este mismo año fueron Tabasco con 9.3, Campeche con 9.0,
Yucatán con 8.5, Colima con 6.0 y Veracruz con 4.9 (23).
En México no hay muchos estudios sobre la mutación en el gen CCR5, sin embargo,
existe un estudio relativamente reciente que mostro que el 18% de los individuos con
VIH estudiados tenían la deleción del gen en forma heterocigota y 0% en forma
homocigota, mientras que en individuos sanos el 13.7% se encontraba de forma
heterocigota y el 3.9% de forma homocigota (20).
16
HIPÓTESIS
La prevalencia de la mutación alélica CCR5∆32 en la población mexicana tanto en
pacientes portadores del virus de VIH como en los individuos sanos es baja.
17
DISEÑO METODOLÓGICO
Es un estudio prospectivo, transversal, observacional y descriptivo. Se tomará en
cuenta diversos puntos del territorio mexicano con la mayor cantidad de inmigrantes
provenientes del continente europeo para cumplir con la delimitación del tema.
VARIABLES
Variable independiente:
Variable dependiente:
18
METODOLOGÍA
Se tomarán las muestras sanguíneos por punción venosa con vacoutainer con tubos
que contengan anticoagulante EDTA a los individuos que acepten formar parte del
estudio. La sangre total se pasarán a tubos eppendorf de 1.7 mL para la posterior
extracción de ADN por el método de gustincich.
Posteriormente se realizará una PCR para amplificar el gen de interés con las
siguientes volúmenes de reacción y condiciones de termociclado para la PCR:
Condiciones de termociclado.
19
Los amplicones obtenidos en la PCR se utilizarán para la genotipificacióndel gen
CCR5 mediante la metodología Taqman Genotyping assays (IDT) y obtener la
información de si existe la mutación en ∆32 del gen CCR5.
20
CRONOGRAMA
Meses
DIC ENE FEB MAR ABR MAY JUN JUL AGO SEP OCT NOV DIC ENE
Actividades
Selección de
la
investigación X
y revisión
bibliográfica
Diseño de la
X
investigación
Realización y
corrección del X X
protocolo
Recolección
X X X X X X X X X
de muestras
Análisis de las
muestras y
llevar a cabo X X
la
metodología.
Interpretación
de resultados
X X
y análisis
estadístico
Presentación
X X
de resultados
21
BIBLIOGRAFÍA
1. Arhel NJ y cols. 2007. HIV-1 DNA Flap formation promotes uncoating of the pre-
integration complex at the nuclear pore. The EMBO Journal 26(12):3025-3037.
4. Greene WC, Peterlin BM. 2002. Charting HIV’s remarkable voyage through the
cell: Basic science as a passport to future therapy. Nature Medicine 8(9): 673-680.
5. Lamotte José. 2004. Infeccion-enfermedad por vih/ sida. Revista Medisan. 8 (4):
49-63.
9. Xia Huang et al. 2009. Association of HLA-A, B, DRB1 alleles and haplotypes with
HIV-1 infection in Chongqing, China. Biomed central. 9 (201): 1-9.
22
10. Rucevic Marijana et al. 2016. Analysis of Major Histocompatibility Complex-
Bound HIV Peptides Identified from Various Cell Types Reveals Common Nested
Peptides and Novel T Cell Responses. Journal of Virology. 90 (9): 8605-8620.
12. Choe H. 1996. The β-chemokine receptors CCR3 and CCR5 facilitate infection
by primary HIV-1 isoletes. Cell. 85: 1135-48.
13. Liu R.1996. Homozygous defect in HIV-1 coreceptor accounts for resistance of
some multiply-exposed individuals to HIV-1 infection. Cell. 86: 367-77.
14.Anjali Joshu et al. 2016. CCR5 promoter activity correlates with HIV disease
progression by regulating CCR5 cell surface expression and CD4 T cell apoptosis.
Nature. 7 (232): 1-11
15. Wang B y cols. 2003. First demonstration of a lack of viral sequence evolution in
a nonprogressor, defining replication-incompetent HIV-1 infection. Virology.
312(1):135-50.
17. Moreno V. y cols. 2008. New CCR5 inhibitor antiretroviral drugs and integrase
inhibitors. Revista clínica española. 208 (9): 463-466.
18. Sorce S, Krause KH. 2011. The chemokine receptor CCR5 in the central nervous
system. Prog Neurobiol 93(2):297–311.
19. Anuroopa Gupta, Harish Padh. 2012. The global distribution of CCR5 delta 32
23
polymorphism: role in HIV-1 protection. BMC Infectous Deseases. 12 (1).
20. Veladez Nina y cols. 2011. Implicación del alelo CCR5-Δ32 en la progresión
clínica de pacientes VIH-1+ en Yucatán, México. Salud pública de México. 53 (6):
463-468.
22. Valdespino José. 2007. Prevalencia de infección por VIH en la población adulta
en México: una epidemia en ascenso y expansión. Salud pública de México. 49 (3).
24