UNIVERSIDADE FEDERAL DE ITAJUBÁ - UNIFEI

INSTITUTO DE RECURSOS NATURAIS - IRN

DISCIPLINA: MICROBIOLOGIA DO SOLO

PROFESSOR Dr.ROGÉRIO MELLONI

ROTEIRO - AULA PRÁTICA I

ANÁLISE QUANTITATIVA DE FUNGOS E BACTÉRIAS DO SOLO

1. INTRODUÇÃO

Apesar de certas limitações, a técnica da diluição em série e plaqueamento é

largamente utilizada em Microbiologia para o exame quantitativo e/ou qualitativo de
populações microbianas: bactérias, actinomicetos, fungos, etc. de um solo.

2. OBJETIVOS

Quantificar e qualificar populações de fungos e bactérias de amostras de solo pelo

método da diluição e plaqueamento.

3. MATERIAIS NECESSÁRIOS

 Amostras de solo peneiradas em malha de 2 mm

 Erlenmeyers com 90 mL de água destilada e esterilizada ou solução salina
0,85% Na Cl, contendo esferas de vidro.
 Tubos de ensaio com 9 mL de água destilada e esterilizada ou solução salina
0,85% NaCl
 Pipetadores automáticos de 1 mL e 0,1 mL
 Ponteiras amarelas e azuis esterilizadas
 Placas de Petri com meios de cultura para fungos (Agar Sabouraud Dextrose ou
Meio Martin)
 Placas de Petri com meios de cultura para bactérias (Meio Agar Nutriente)
 Alça de Drigalsky
 Estantes (racks) para tubos
 Canetas para retroprojetor
 Câmara de segurança biológica desinfetada
 Estufa de cultivo regulada para 28 °C
 Mesa agitadora
 Agitador de tubos

4. PROCEDIMENTO

Preparar as diluições base 10, iniciando com a suspensão de 10g de terra úmida em
90 mL de água em erlenmeyer (10 -1). Agitar em mesa agitadora por 15 minutos.
Retirar uma alíquota de 1 mL do erlenmeyer e adicionar em 9 mL de água do tubo
(10-2). Agitar o tubo e retirar uma alíquota de 1 mL e passar para outro tubo (10-3) e
assim sucessivamente até a diluição 10 -5. Inocular 0,1 mL de cada tubo para placas
de Petri com meios de cultura específicos. Distribuir o inóculo com alça de
Drigalsky, anotar a diluição e amostra, e incubar em estufa a 28°C por 7 dias. Fazer
a contagem das colônias utilizando contador automático, se necessário. Expressar os
resultados em UFC (unidades formadoras de colônias) por grama de solo seco.

Para fungos: usar as diluições 10-1, 10-2, 10-3.

Para bactérias: usar as diluições 10 -3, 10-4, 10-5.

5. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

MOREIRA, F.M.S.; SIQUEIRA, J.O. Microbiologia e bioquímica do solo. Lavras:

UFLA, 2002. 625p.