ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DEL LITORAL

FACULTAD DE INGENIERÍA MECÁNICA Y CIENCIAS DE LA PRODUCCIÓN

INGENIERÍA EN ALIMENTOS

Análisis Químico e Instrumental de los Alimentos

TRABAJO DE INVESTIGACIÓN

TEMA:

Cromatografía.

Alumno:

Borbor Vera Steven Israel

PARALELO:

TÉRMINO:

2S- 2017
Contenido
1.INTRODUCCIÓN .......................................................................................................................... 3
2.TERMINOLOGÍA EN GENERAL .................................................................................................... 3
2.1 DEFINICIONES ...................................................................................................................... 3
2.2 MÉTODOS PRINCIPALES ...................................................................................................... 3
3. FUNDAMENTOS FÍSICO-QUÍMICOS DE LA SEPARACIÓN ........................................................... 4
3.1 ADSORCIÓN ......................................................................................................................... 4
3.2 REPARTO.............................................................................................................................. 4
3.3 INTERCAMBIO IÓNICO......................................................................................................... 5
3.4 EXCLUSIÓN POR TAMAÑOS AFINIDAD ............................................................................... 5
4. TÉCNICAS CROMATOGRÁFICAS ................................................................................................. 5
4.1 PAPEL ................................................................................................................................... 5
4.2 CAPA LÍQUIDA ..................................................................................................................... 6
4.3 FINA ..................................................................................................................................... 6
4.4 LÍQUIDA EN COLUMNA ....................................................................................................... 6
Bibliografía .................................................................................................................................... 7
1. INTRODUCCIÓN
La cromatografía es una técnica que permite la separación de los componentes de una mezcla
debido a la influencia de dos efectos contrapuestos. Retención que es el efecto producido sobre
los componentes de la mezcla por una fase estacionaria, que puede ser un sólido o un líquido
anclado a un soporte sólido; y Desplazamiento que es el efecto ejercido sobre los componentes
de la mezcla por una fase móvil, que puede ser un líquido o un gas.

La característica que distingue a la cromatografía de la mayoría de los métodos físicos y químicos

de separación es que se ponen en contacto dos fases mutuamente inmiscibles. Una fase es
estacionaria y la otra móvil. Una muestra que se introduce en la fase móvil es transportada a lo
largo de la columna que contiene una fase estacionaria distribuida.

Las especies de la muestra experimentan interacciones repetidas (repartos) entre la fase móvil
y la fase estacionaria. Cuando ambas fases se han escogido en forma apropiada los componentes
de la muestra se separan gradualmente en bandas en la fase móvil.

2. TERMINOLOGÍA EN GENERAL
2.1 DEFINICIONES
 Cromatografía
La cromatografía es un método físico de separación en el que los componentes a separar
se distribuyen entre dos fases, una de las cuales está en reposo (fase estacionaria)
mientras que la otra (fase móvil) se mueve en una dirección definida.
 Cromatograma
Una gráfica u otro tipo de presentación de la respuesta de un detector, la concentración
de un analito en el efluente u otra magnitud usada como medida de la concentración en
el efluente, frente al volumen de efluente o al tiempo. En la cromatografía plana,
"cromatograma" puede referirse al papel o capa con las zonas separadas.
 Cromatografiar
Separar por cromatografía.
 Cromatógrafo
El instrumento empleado para realizar una separación cromatográfica.

Ilustración 1: Cromatógrafo de Gases

2.2 MÉTODOS PRINCIPALES

 Cromatografía frontal
Procedimiento en el que la muestra (líquida o gaseosa) se alimenta de forma continua
al lecho cromatográfico. No se utiliza ninguna fase móvil adicional.
 Cromatografía de desplazamiento
Procedimiento en el cual la fase móvil contiene un compuesto (el desplazante) que es
retenido más fuertemente que los componentes de la muestra analizada. La muestra se
 alimenta al sistema en forma discreta, como una pequeña cantidad en un intervalo
breve.
 Cromatografía de elución
Procedimiento en el que la fase móvil se pasa de forma continua a través o a lo largo del
lecho cromatográfico y la muestra se suministra al sistema de forma discreta, como una
pequeña cantidad en un tiempo breve.

3. FUNDAMENTOS FÍSICO-QUÍMICOS DE LA SEPARACIÓN

3.1ADSORCIÓN
La adsorción es la propiedad que tienen ciertos sólidos de aumentar la concentración en su
superficie de otras sustancias. La separación se debe a las diferencias de adsorción de los
componentes de una mezcla sobre la fase estacionaria. La fase estacionaria ha de ser un
sólido polar de gran superficie (adsorbente). La fase móvil puede ser un gas o un líquido
dando lugar a la cromatografía gas-sólido (CGS) o líquido-sólido (CLS).

El grado de adsorción varía según la naturaleza y superficie específica de los adsorbentes y

naturaleza de los solutos.

Los enlaces entre moléculas adsorbidas y el adsorbente han de ser débiles para que su
fijación sea reversible, las uniones son debidas a fuerzas intermoleculares (interacciones
dipolo-dipolo o puentes de hidrógeno). Como regla general, las polaridades del adsorbente
y de los solutos han de ser opuestas.

3.2 REPARTO
La cromatografía de reparto es la más usada, se basa en la distribución del soluto entre dos
fases liquidas, se denominan con base en cómo se une la fase liquida al soporte:

Cromatografía líquido, liquido, la fase liquida se retiene sobre el soporte de adsorción, no

se puede hacer gradiente de elución.

Cromatografía con fases químicamente enlazadas, se puede hacer gradiente. Los tipos de
cromatografía de reparto se clasifican de acuerdo con las polaridades de la fase móvil y
estacionaria como:

Normal: fase estacionaria es polar

Reversa: fase estacionaria es no polar

Ilustración 2: Cromatografía de reparto

 3.3 INTERCAMBIO IÓNICO
La cromatografía de intercambio iónico (cromatografía iónica) es un proceso que permite la
separación de iones y moléculas polares basado en las propiedades de carga de las
moléculas. Puede ser usada en casi cualquier tipo de molécula cargada, incluyendo grandes
proteínas, pequeños nucleótidos y aminoácidos. La solución que se inyecta es usualmente
llamada muestra y los componentes separados individualmente son llamados analitos. Es
usada a menudo en purificación de proteínas, análisis de agua o control de calidad.

Ilustración 3: Cromatografía Intercambio Iónico

3.4 EXCLUSIÓN POR TAMAÑOS AFINIDAD

La cromatografía por afinidad es un tipo de cromatografía de líquidos que se basa en
la unión reversible entre el analito de interés y un ligando específico, inmovilizado en un
soporte sólido inerte. Cuando la muestra pasa por la columna, sólo son retenidas las
moléculas que se unen de manera selectiva al ligando por afinidad y las que no se unen
avanzan con la fase móvil. Después, los analitos retenidos pueden ser arrastrados
cambiando las condiciones de la fase móvil.

Ilustración 4: Cromatografía de afinidad

4. TÉCNICAS CROMATOGRÁFICAS
4.1PAPEL
La cromatografía en papel es una técnica utilizada para análisis inorgánico cualitativo,
permite llevar a cabo la separación e identificación de iones, trabajando con cantidades
mínimas de sustancia. Pertenece al tipo de “Cromatografía de partición” se fundamenta en
que las sustancias problema, pueden tener diferentes coeficientes de reparto en dos
disolventes de inmiscibilidad limitada, uno permanece fijo en la superficie del papel “fase
estacionaria” generalmente en agua, la fase móvil constituida generalmente por una mezcla
de disolventes parcialmente miscibles en ella. Hay varios tipos de cromatografía, la
ascendente (papel hacia arriba), descendente (papel invertido), radial y de separación de
zonas y sectores.

4.2CAPA LÍQUIDA
La cromatografía en capa fina presenta una serie de ventajas frente a otros métodos
cromatográficos (en columna, en papel, en fase gaseosa) ya que el utillaje que precisa es
más simple. El tiempo que se necesita para conseguir las separaciones es mucho menor y la
separación es generalmente mejor. Pueden usarse reveladores corrosivos, que sobre papel
destruirían el cromatograma. El método es simple y los resultados son fácilmente
reproducibles, lo que hace que sea un método adecuado para fines analíticos.

4.3FINA
La cromatografía en capa fina es una técnica analítica rápida y sencilla. Entre otras cosas
permite: ‐ Determinar el grado de pureza de un compuesto. Se puede determinar así, por
ejemplo, la efectividad de una etapa de purificación. ‐ Comparar muestras. Si dos muestras
corren igual en placa podrían ser idénticas. Si, por el contrario, corren distinto entonces
no son la misma sustancia. ‐ Realizar el seguimiento de una reacción. Es posible estudiar
cómo desaparecen los reactivos y cómo aparecen los productos finales o, lo que es lo
mismo, saber cuándo la reacción ha acabado.

La muestra a analizar se deposita cerca de un extremo de una lámina de plástico o aluminio

que previamente ha sido recubierta de una fina capa de adsorbente (fase estacionaria).
Entonces, la lámina se coloca en una cubeta cerrada que contiene uno o varios disolventes
mezclados (eluyente o fase móvil).

A medida que la mezcla de disolventes asciende por capilaridad a través del adsorbente, se
produce un reparto diferencial de los productos presentes en la muestra entre el disolvente
y el adsorbente.

4.4LÍQUIDA EN COLUMNA
En esta modalidad la fase estacionaria está formada por pequeñas partículas que rellenan
un tubo o columna. Este tubo puede ser de vidrio, acero u otro material inerte. Podemos
considerar desde el punto de vista cronológico dos tipos de cromatografía líquida en
columna, la llamada C.L. en columna, clásica y la C.L. en columna instrumental, también
llamada cromatografía líquida de alta resolución o HPLC, en siglas inglesas. La C.L. clásica
tiene su origen en los experimentos de Tswett, y se caracteriza por los siguientes
aspectos:

 La preparación de la fase estacionaria suele ser manual

 El flujo de fase móvil es por gravedad
 Aplicación manual de la muestra
 La separación requiere varias horas
 Se recogen fracciones que posteriormente son analizadas por otras técnicas
 La eficacia de las separaciones es pequeña
Bibliografía
DABRIO M.V., Cromatografía y electroforesis en columna. Springer,
Barcelona 2000.
BRAITHWAITE, A. y SMITH, F.J,Chromatographics Methods. 5h ed., Chapman
& Hall, London, 1996.
Rouessac, F; Rouessac,A; Ourisson,G. Análisis Químico. Métodos y Técnicas
Instrumentales Modernos. . Editorial Mc Graw Hill.. 2003.