Universidad de Las Américas

Facultad de Ingenierías y Ciencias Agropecuarias

Ingeniería en Biotecnología
Formato unificado para informe de laboratorio

INTEGRANTES:
● Geoconda Cañizares
● Giselle Salazar
● Yessenia Haro
● Katherine Avilés

TEMA DE LA PRÁCTICA: Espectrofotometría

NÚMERO DE LA PRÁCTICA:
Práctica No: 8

INTRODUCCIÓN

La espectrofotometría es una técnica utilizada para medir la absorción de energía emitida

por una fuente (Espectrofotometría de absorción) o también es la medición de la “emisión
de la energía tras ser excitados por una REM incidente (Espectrofotometría de emisión)” .
Las medidas de las longitudes de ondas absorbidas van desde “220 a 800 nm” (Silva y
García, 2006). Aunque para, las prácticas de análisis químico cuantitativo es más utilizado
“la espectrofotometría de absorción de luz ultravioleta y visible del espectro
electromagnético” (Hernández y González, 2002).

La absorbancia de la luz visible (400-750 nm) es llamada colorimetría, donde se ocupan

aparatos de filtros. Por otro lado, esta misma técnica que absorbe la luz ultravioleta (220-
400 nm) e infrarroja (750-800 nm), medibles por el equipo, es llamada espectrofotometría;
en el cual se ocupan monomarcadores, sistemas de detección más sensibles como prismas
o redes de difracción (Ralph, 2003).

Las curvas de calibración se obtienen a través de estas técnicas. La concentración viada a

diferentes diluciones patrón o estándar (por lo mínimo tres datos) hacen que la absorbancia
que se mida sea de diferentes longitudes de ondas. Los resultados de estas mediciones
depende de qué tan limpio esté el equipo para evitar las interferencias. Al igual, se evitan
“las fluctuaciones bruscas de luz, ya que afectan al sistema óptico del equipo”;dándose un
desgaste con el tiempo. Así mismo, se debe tener cuidado, en el uso de los materiales
como las cubetas, que no se las debe coger de “las caras por la que incide el rayo de luz”
(García, Colom y Jaramillo, 2003).

Las interferencias también son evitadas mediante el uso de blancos en la curva de

calibrado. Los blancos son “las disoluciones que contienen todos los reactivos y disolventes
usados en el análisis, pero sin analito” (Harris, 2006). Estas muestras son importantes ya
que miden las impurezas que existan en los reactivos.

OBJETIVO GENERAL
Conocer la técnica instrumental de Espectrofotometría
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OBJETIVOS ESPECÍFICOS
● Determinar experimentalmente el espectro de absorbancia del dicromato y
establecer su punto de mayor absorbancia.
● Elaborar una curva de calibración a partir de la determinación de la absorbancia a la
longitud de onda de máxima absorción de cuatro disoluciones de dicromato de
concentración conocida.
● Calcular experimentalmente la absorbancia de una muestra problema y elaborar una
curva de calibración para determinar su concentración.

MATERIALES Y MÉTODOS

Materiales
● 1 pipeta volumétrica de 1 ml
● 1 pipeta volumétrica de 2 ml
● 1 pipeta volumétrica de 5 ml
● 1 balón aforado de 25 ml
● 4 balón aforado de 50 ml
● 4 vasos de precipitación de 50 ml
● 4 cubetas para espectrofotómetro

Reactivos
● 100 ml de solución de dicromato de potasio 0,25 g/L
● Agua destilada

Equipos
● 1 espectrofotómetro

Métodos
Primero a partir de una disolución de trabajo previamente preparada de concentración 0,25
g/L de dicromato de potasio se preparó 4 disoluciones más diluidas de dicromato de potasio
que se usaron en el espectrofotómetro:
● Disolución 1: se diluyó 2 ml de solución concentrada con agua en un matraz aforado
de 50 ml.
● Disolución 2: se diluyó 4 ml de solución concentrada con agua en un matraz aforado
de 50 ml.
● Disolución 3: se diluyó 6 ml de solución concentrada con agua en un matraz aforado
de 50 ml.
● Disolución 4: se diluyó 10 ml de solución concentrada con agua en un matraz
aforado de 50 ml.
Luego de preparar las disoluciones se procedió a calcular la molaridad de todas las
disoluciones incluida la disolución concentrada, posteriormente con la disolución 4 se midió
el espectro de absorción del dicromato de 325 a 505 nm, para lo cual primero se realizó un
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blanco con agua pura, tomando valores cada 10 nm, seguido de esto se repitió la operación
de manera más fina en la región donde se observó una mayor absorbancia, para luego
tomar valores cada 2 o 5 nm. Finalmente se midió la absorbancia de la solución patrón y de
la muestra problema a la longitud de onda de máxima absorción del dicromato.

RESULTADOS

Tabla 1. Concentraciones de las soluciones patrón a distintos grados de disolución.

Solución Grado de dilución (mL) Concentración (M)

1 2 en 50 3,40 x 10-5

2 4 en 50 6,80 x 10-5

3 6 en 50 1,02 x 10-4

4 10 en 50 1,70 x 10-4

Tabla 2. Absorbancia de la solución 4 a diferentes longitudes de onda. (de 325 nm a

555 nm en intervalos de 10 nm)

Longitud de onda Absorbancia

(nm)
Blanco Solución

325 0,229 0,384

335 0,184 0,402

345 0,157 0,426

355 0,145 0,438

365 0,132 0,423

375 0,110 0,370

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385 0,100 0,301

395 0,096 0,226

405 0,101 0,178

415 0,089 0,193

425 0,068 0,115

435 0,065 0,107

445 0,065 0,102

455 0,054 0,085

465 0,038 0,063

475 0,033 0,052

485 0,037 0,049

495 0,042 0,050

505 0,045 0,049

515 0,047 0,049

525 0,047 0,048

535 0,047 0,047

545 0,047 0,047

555 0,046 0,046

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Tabla 3. Absorbancia de las soluciones patrón a la longitud de onda de su máximo

(361).

Solución Concentración (M) Blanco Absorbancia

1 3,40 x 10-5 0,126 0,236

2 6,80 x 10-5 0,126 0,362

3 1,02 x 10-4 0,127 0,471

4 1,70 x 10-4 0,092 0,399

Figura 1. Espectro de absorción del dicromato de potasio (Longitud de onda vs

Absorbancia)
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Figura 2. Curva de calibración de las soluciones patrón (Concentración vs Absorbancia)

Coeficiente de absortividad k = 1112,6

Tabla 4. Concentración de la solución mezcla y su absorbancia a la longitud de onda

de su máximo (361).

Solución mezcla Concentración Absorbancia

1,76 x 10-4 0,459

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DISCUSIÓN

En la tabla 2 se recogen las longitudes de onda de 325 nm a 55 nm en intervalos de 10 nm

que corresponden a los máximos de absorbancia de las diferentes sustancias, los registros
de espectrofotometría a distintos tiempos se muestran en la tabla 2 ,en la que se obtiene
una mayor absorbancia del blanco de 0.229 a una longitud de 325 nm mientras que en la
sustancia se tiene una mayor absorbancia de 0,438 en una longitud de onda de 325 nm ,lo
que explica que el rayo de luz pase a traves del medio absorbente en el que la intensidad
disminuye mientras que la concentración aumenta del medio absorbente(Porta &
Universidad Politécnica de Madrid,1972).
En la solución 3 se obtuvo mayor absorbancia a una concentración de 1,02 x 10-4, lo que
indica que la absorbancia es directamente proporcional a la concentración de la solución
absorbente.(Garcia ́ & Martin
́ ez, 2012).
En la figura 1 se muestra la gráfica de espectro de absorción en la que se observa que
desciende hasta que se mantiene constante en una concentración de 0.05 y esto se debe
a la estructura atómica y las condiciones del medio(pH, temperatura, fuerza iónica,
constante dieléctrica),lo que indica que el coeficiente de extinción molecular de la sustancia
conocido como k varía con la longitud de onda de luz mientras que los espectros
moleculares de banda se encuentran con menor proporción definidos ,en las que pueden
ser regiones que no necesariamente se pueda identificar y por ello aparecen las curvas de
absorción que muestra la intensidad de máximos y mínimos que a su vez depende del
disolvente ,mediante el cual se puede obtener aplicaciones base en el análisis y precisión
,así como en la medida del color de los filtros y colorantes.(Aristarain, 1991)
En la figura 2 se muestra una curva de calibración, en la que mediante la ecuación se
observa un ajuste de 0,4314 lo que indica que los datos no forman una línea recta ,con el
que se identifica que el r2 no es tan correcto .Además la figura varía de acuerdo a que tan
diluido este la concentración (Universidad de Barcelona,2012)
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CONCLUSIONES

 La espectrofotometría es un método analítico indirecto que permite identificar la

presencia de un analito en una muestra problema, por tanto en la presente práctica a
partir de la longitud de onda de máxima absorción del dicromato fue posible
determinar la concentración molar t de las cuatro disoluciones, además de la
elaboración de una curva de calibración la cual facilita el cálculo de la concentración
del analito en una disolución desconocida como la de la solución problema, debido a
que el método se basa en una relación proporcional entre la concentración y una
señal analítica determinada.
 Por medio de esta práctica se logró identificar la relación que existe entre la
concentración y la absorbancia, que a medida que disminuya la absorbancia
disminuirá la concentración de sustancia aumentara su transmitancia
 Se logró comprobar que la absorbancia equivale al logaritmo inversa de la
transmitancia por lo que mediantes las formulas aplicas se observa el
comportamiento.
 El espectrofotómetro es de gran utilidad ya que nos permitió crear medición en base
a la radiación de dos rayos.

BIBLIOGRAFÍA

● Harris, D. 2006. Análisis químico cuantitativo. Sexta edición; Editorial Reverté S.A.
Barcelona-España
● Donezar, M., Porta, . C. J., & Universidad Politécnica de Madrid. (1972).
Espectofotometria de emisión y de absorción atómica aplicadas al análisis de suelos
y aguas. Madrid: Universidad Politécnica.
● Garciá Martínez, Eva Maria ́ . (2012). Aplicación de la ley de Lambert-Beer en
espectroscopía UV-visible.
● Aristarain, L. F. (1991). Espectro de absorcion infrarroja de Aristarainita: Discusion.
La Plata: Univ., Fac. de Ciencias Naturales y Museo.
● Universidad de Barcelona. (2012). Preparación de la curva de calibrado. Barcelona:
Audiovisuals Universitat de Barcelona.
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ANEXOS

Anexo 1. Hoja de datos

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Anexo 2.

Anexo 3.
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Anexo 4.

Anexo 5.