1.

RESULTADOS
1.1.Resultados obtenidos.

Imagen 1. Resultados de la electroforesis de la práctica del grupo 1 y 2, curso de la mañana de

7:15 a 9:15.
Por Ing. María José Vallejo

1 2 3 4 5 6 7

Imagen 2. Resultados de la electroforesis de la muestra del grupo 2, conformado por siete

alumnos, curso de la mañana de 7:15 a 9:15.
Por Ing. María José Vallejo
 Imagen 3. Imagen de la barra de la electroforesis de Evelyn Ramos (izquierda) y Sergio Guerrón
(derecha) marcados de color amarillo. Amabas barras son el resultados de muestras de Acelga
(Beta vulgaris var. cicla)
Por Ing. María José Vallejo

1.2.Discusión.

Al conocer que el marcador que usamos fue E-Gel™ High Range Quantitative DNA Ladder
debido a que los datos a obtener serian cadenas de DNA genómicos, es decir un número
grande de pares bases (bp) mientras que E-Gel™ Low Range Quantitative DNA Ladder se
utiliza para cadenas de RNA y proteínas. En base a la imagen 4 se puede conocer
aproximadamente el número de pares bases (bp) y el peso en nano-gramos (ng) que contiene
la barra obtenida por electroforesis en nuestra práctica.

Imagen 4: Rango del Marcador, E-gel range DNA ladder 1% agarose

 Obtenido de: (Biotech, 2018)

Imagen 5: Rango del Marcador, E-gel range DNA ladder 0.8% agarose

Obtenido de: (ESPE, 2018)

Donde comparado con nuestros resultados:

Imagen 6: Resultados de electroforesis realizada por Evelyn Ramos (izquierda) y Sergio Guerrón (derecha),
muestra acelga obtenida anteriormente, marcada en color amarillo.

Por consiguiente:

El resultado obtenido mediante electroforesis realizado por Evelyn Ramos (izquierda), se

puede observar una barra muy marcada, esto quiere decir que el procedimiento se siguió
correctamente, y la electroforesis fue un éxito. En cuestión del análisis del resultado mostrado
en la imagen 6 (barra izquierda) en comparación con la imagen 4 (1% agarosa) y 5 (0.8
agarosa), se puede observar que la barra es de 10 Kb.
El resultado obtenido mediante electroforesis realizado por Sergio Guerrón (derecha), se
puede observar una barra un poco dispersa, esto se puede dar debido a que al momento de
insertar la pipeta en el gel, no ingresa correctamente en el posillo por ende la muestra puede
desbordarse del mismo, a pesar de esto puede considerarse que el procedimiento se siguió
correctamente, y la electroforesis tuvo éxito. En cuestión del análisis del resultado mostrado
en la imagen 6 (barra derecha) en comparación con la imagen 4 (1% agarosa) y 5 (0.8
agarosa), se puede observar que la barra es de 10 Kb.

Al comparar las barras obtenidas marcadas con amarillo y las demás barras en la imagen 3, se
puede observar claramente que las demás barras están algo opacas, esto es debido a que son
muestras diferentes, es decir que estas muestras tienen una secuencia genómica más pequeña.

En cuanto a las barras dispersas o que no se observan muy bien se puede concluir que estos
resultados poco convenientes se dan por un mal pipeteo por parte del estudiante, ya sea por
presencia de aire en la punta de la micropipeta, mala homogenización de la muestra de ADN
con el colorante o por que se atravesó la agarosa con la punta de la micropipeta.

1.3.Cuestionario.

Determine el tamaño de las muestras de DNA en bp obtenidas, comparando con el

inserto.

1 2 3 4 5 6 7 8 9
10

Como podemos apreciar en los pocillos 1 y 9 una una ligera corrida de ADN se podría decir
que el ADN esta entre los 800bp en el pocillo 9 y los del pocillo 1 a unos 400bp

Investigue una Tabla de concentraciones en % de agarosa para fragmentos de DNA

separado de varios tamaños en kb.

Las agarosas disponibles comercialmente presentan una amplia gama de grados de pureza y
especificaciones. Un aspecto importante de las agarosas es su estado físico. La agarosa
estándar gelifica a 35°C y funde a 80-90°C, aunque las hay modificadas por adición de grupos
hidroxietilo, que gelifican a menos de 30°C y funden a 65°C. Estos datos son importantes, ya
que finalizada la electroforesis, el gel se puede licuar a temperatura superior a la de fusión y
así separar el DNA en disolución. (Morales, 2017)

Obtenido de: http://www.cultek.com/inf/otros/soluciones/Soluciones-Electroforesis-protocolos.pdf

¿Qué es la Agarosa y para qué sirve?

La agarosa es una fracción extraída del agar y es la responsable fundamental del poder
gelificante de éste, producto natural que forma una matriz inerte de extenso uso en técnicas de
separación tales como Electroforesis, Cromatografía y otras, empleadas en el campo de la
Bioquímica y Biología Molecular. Asimismo, es un producto neutro y fácilmente
derivatizable, por lo que es sencillo fijar a su estructura proteínas tales como enzimas,
antígenos o anticuerpos. La ausencia de toxicidad que presenta la hace muy cómoda para el
trabajo (Laboratorios Conda, 2010).

¿Qué es el Bromuro de Etidio, para qué sirve y que daños causa?

Compuesto fluorescente y aromático empleado frecuentemente en biología molecular para
marcar los ácidos nucleicos con la técnica de electroforesis en gel de agarosa ya que cuando
se expone esta sustancia a la luz ultravioleta, emite una luz anaranjada que se intensifica
después de unirse a la molécula de ADN (UNAM, 2017).

Puede causar los siguientes problemas por Inhalación: El polvo es muy tóxico por la
inhalación. La inhalación del polvo irrita las vías respiratorias. Ingestión: Tóxico por
ingestión. Contacto de piel: Causa la irritación de la piel. Puede provocar la inflamación y/o
la decoloración de la piel después del contacto. El contacto manchará la piel de color púrpura.
Contacto con los ojos: Provoca irritación, enrojecimiento y dolor ocular. Exposición crónica:
Puede provocar daños genéticos hereditarios (mutágeno) (Universidad Politécnica de
Valencia, 2012).

¿Qué es el Syber Safe, para qué sirve y que daños causa?

Es un sustituyente de bromuro de etidio, que se une de manera no covalente a los ácidos
nucleicos. Este colorante tiene una fluorescencia a 280, una excitación máxima a 502 nm y
una emisión máxima a 530 nm. Con este colorante, el DNA puede visualizarse con una luz
ultravioleta en el rango de 470 a 530 nm (López & Sandoval, 2016).
Compuestos que cumplen con la función del bromuro de etidio pero que no tienen efecto
mutagénico. Como el bromuro de etidio se intercala en el ADN, posiblemente puede
ser cancerígeno o teratógeno. Es irritante a los ojos, piel, mucosas y el tracto respiratorio. Los
efectos sanitarios de la exposición a este compuesto no han sido todavía investigados
profundamente. (Morales, 2017)
¿Cuáles son las condiciones necesarias para un buen corrimiento electroforético?

- Evite picar el gel, con la micro punta de la pipeta ya que esto impedirá que exista un
buen desarrollo y migración de las muestras.
- Cerciórese de que no existan derrames de líquido y conecte la fuente a la corriente
eléctrica
- Programe la cámara en el voltaje adecuado aproximadamente 90 Volt sy el tiempo
aproximado de 30 minutos.

2. CONCLUCIONES

 Se logró identificar y conocer el procedimiento adecuado para realizar una

cuantificación de DNA.
 Se visualizaron los fragmentos de DNA de distinto tamaño en forma de bandas
generadas por la electroforesis horizontal con la ayuda del transiluminador.
 Se determinó la manera correcta y más efectiva para colocar las muestras de DNA en
los pocillos.
 Se logró conocer el funcionamiento de los reactivos y equipos que se utiliza en la
electroforesis.
 Se determinó que es muy importante la preparación adecuada de geles ya que las
concentraciones varían dependiendo del caso que se vaya a analizar.
 Para un buen resultado en la electroforesis se debe aplicar minuciosamente los
protocolos anteriormente estudiados para garantizar una buena muestra.
 La cantidad y calidad de muestra de DNA utilizada es fundamental para obtener un
corrido mucho más puro, concentrado y bien separado, permitiendo que se visualice
mejor las bandas.

3. RECOMENDACIONES
 Tener cuidado de no perforar los pocillos con la punta de la micropipeta al momento
de colocar la muestra.
 Realizar los procedimientos de extracción de ADN de manera adecuada, para obtener
buenos resultados en la electroforesis.
  Al momento de ingresar al laboratorio siempre usar el mandil ya que anteriormente se
utilizaba bromuro de etidio.

4. BIBLIOGRAFÍA

Biomodel. (2015). Electroforesis de proteinass y de ácidos nucleicos. Obtenido de

http://biomodel.uah.es/tecnicas/elfo/inicio.htm

Khan Academy. (2017). MÉTODOS DE ANÁLISIS DEL ADN. Obtenido de Electroforesis en gel:
https://es.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-technology/dna-sequencing-pcr-
electrophoresis/a/gel-electrophoresis

Laboratorios Conda. (2010). Obtenido de Agarosas - descripción:

https://www.condalab.com/es/productos/agaroses/agarosa-descripcion/

López, A., & Sandoval, S. (2016). Electroforesis. Obtenido de Metodologia del ADN recombinante:
http://highered.mheducation.com/sites/dl/free/6071513669/1086947/13_CHAPTER_13_ARM
ENDARIZ_117_126.pdf.

Morales, I. (2017). Obtenido de ELECTROFORESIS:

http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Exposicion_electroforesis_5087.pdf

Padilla, C., Martínez, E., Bárcena, A., & Concepción, A. (2015). Electroforesis de ácido nucleico en
geles de agarosa. Aislamiento y caraterización electroforética de DNA plásmico. Obtenido de
https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-
mol/pdfs/17%20ELECTROFORESIS%20ACS%20NUCLEICOS%20GELES%20AGAROS
A.pdf

UNAM. (2017). Portal Académico. Obtenido de Bromuro de Etidio:

https://portalacademico.cch.unam.mx/glosario/BromuroEtidio

Universidad Politécnica de Valencia. (2012). Servicio Integrado de Prevención y Salud Laboral.

Obtenido de Procedimiento standard para trabajo con bromuro de etidio:
https://www.sprl.upv.es/D7_2_11_b.htm

5. ANEXOS
Anexo 1 Procedimiento esquemático de la electroforesis
 Figura 4. Electroforesis. Obtenido de: (Biomodel, 2015)

Anexo 2

Figura 5. Indicador del marcador que se utilizó en la práctica. Por Joseph Quinga