Arbeitsanleitung EDN

Manual

EDN ELISA

EDN ELISA Kit

Para la determinación in vitro de EDN (neurotoxina derivada de
eosinófilos) en las heces, orina, suero y plasma

EU: IVD / CE
US: Sólo para uso en investigación.No debe utilizarse en los procedimientos de diagnóstico.

Válido desde: 29.07.2014

K 6811

Immundiagnostik AG, Stubenwald-Allee 8a, D-64625 Bensheim

Tel.: +49 6251 70190-0 Fax: + 49 6251 849430
e.mail: info@immundiagnostik.com www.immundiagnostik.com
Manual EDN

Tabla de Contenido
1. INTENCIÓN DE USO 02
2. INTRODUCCIÓN 02

3. MATERIAL SUMINISTRADO 02
4. MATERIAL REQUERIDO PERO NO SUMINISTRADO 03
5. ALMACENAMIENTO Y PREPARACIÓN DE REACTIVOS _ 03
6. ALMACENAMIENTO Y PREPARACIÓN DE MUESTRAS 04
Almacenamiento de muestras 04
Extración de muestras de heces 04
Dilución de muestra 06
7. PROCEDIMIENTO DE ENSAYO 07
Principios de la prueba 07
Procedimiento del Test 07
8. RESULTADOS 08
9. LIMITACIONES 09
10. CONTROL DE CALIDAD 09
Rangos de referencia 09
11. CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO 10
Precision y reproducibilidad 10
Sensibilidad analítica 10
Especificidad analítica 10
Recuperación final 11
Recuperación de la dilución 11
12. PRECAUCIONES 12
13. CONSEJOS TÉCNICOS 12
14. NOTAS GENERALES SOBRE EL TEST Y PROCEDIMIENTOS DEL TEST 12
15. REFERENCIAS 13

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 Manual EDN

1. INTENCIÓN DE USO
El ELISA descrito está pensado para la determinación cuantitativa de EDN
(neurotoxina derivada de eosinófilos, la proteína de eosinófilos x, EPX) en suero,
plasma, orina y heces. Es sólo para uso diagnóstico in vitro.

2. INTRODUCCIÓN
La EDN (neurotoxina derivada de eosinófilos, la proteína de eosinófilos x, EPX),
es una glicoproteína catiónica, que se libera por eosinófilos activados, tiene una
fuerte característica citotóxica y desempeña un papel importante en la prevención
de infecciones de virus. Es liberado por los gránulos de eosinófilos en los lugares
donde los eosinófilos se encuentran principalmente: en la piel, pulmones, tracto
gastrointestinal y urogenital, es decir, en los órganos que actúan como un punto
de entrada para los patógenos. La acumulación de EDN en el intestino se asocia
con inflamación y daño tisular.
La medición de EDN en las heces puede servir como un parámetro objetivo para
determinar presencia de inflamación crónica clínica o sub-clínica situada en el
área gastrointestinal. En el caso de la colitis ulcerosa y la enfermedad de Crohn,
la medición EDN permite la evaluación de la actividad de una enfermedad y la
predicción de una recaída.
Indicaciones
• Morbus Crohn
• La prueba de la alergia a los alimentos y la incompatibilidad
• Evaluación de una dieta de eliminación
• Prueba de integridad dañada de la mucosa intestinal (por ejemplo,
enfermedad inflamatoria intestinal crónica, cáncer de colon)
• Prueba de parásitos intestinales / parasitosis
3. MATERIAL SUMINISTRADO
Cat. No. Etiqueta Componentes del Kit Cantidad

K6811 PLATE PLATE EDN ELISA PLATE 12 x 8 pocillos

K6811 WASHUF WASHBUF EDN ELISA WASHBUF 2 x 100 ml

K6811 IDK Extract IDK Extract® EDN ELISA IDK Extract 2 x 100 ml

K6811 ASYBUF ASYBUF EDN ELISA ASYBUF 50 ml

2 x 5 viales
K6811 STD STD EDN ELISA STD
(500µl lyo.)

02
 Manual EDN

Cat. No. Label Kit components Quantity

2 x 1 vial
K6811 CTRL 1
CTRL 1 EDN ELISA CTRL 1 (500µl lyo.)
2 x 1 vial
K6811 CTRL 2
CTRL 2 EDN ELISA CTRL 2 (500µl lyo.)

K6811 CONJ
CONJ EDN ELISA CONJ 200 µl

K6811 SUB SUB EDN ELISA SUB 15 ml

K6811 STOP STOP EDN ELISA STOP 15 ml

4. MATERIAL REQUERIDO PERO NO SUMINISTRADO

• Agua Ultra Pura*
• Balance de Laboratorio
• Pipetas de precision calibrada y tips 10–1000 µl
• Papel de aluminio para cubrir la placa de microtitulación
• Plato agitador de Microtitulación horizontal
• Pipetas Multicanales o pipetas repetidoras
• Centrifuga, 3000 g
• Vortex
• Vasos de vidrio de laboratorio o viales plásticos, tazas, etc.
• Lector de placas de titulación (requiere filtros ver capítulo 7)
* Immundiagnostik AG recomienda el uso de Agua Ultra Pura (Agua Tipo 1; ISO 3696), que
está libre de iones disueltos y coloidales y las moléculas orgánicas (libre de partículas> 0,2
micras) con una conductividad eléctrica de 0.055 S / cm a 25 ° C ≥( 18,2 MΩ cm).

5. Almacenamiento y Preparación de reactivos

• Para ejecutar la prueba más de una vez, asegúrese de que los reactivos se almacenan en
las condiciones indicadas en la etiqueta. Preparar sólo la cantidad adecuada necesaria
para cada ejecución. El kit se puede usar hasta 4 veces dentro de la fecha de caducidad
indicada en la etiqueta.
• Reactivos con un volumen inferior a 100 µl deben ser centrifugados antes de su uso
para evitar la pérdida de volumen .
• El Buffer concentrado de lavado ELISA (WASHBUF) debe ser diluido 1:10 en agua
ultra pura antes de su uso (100 ml de concentrado + 900 ml de agua ultrapura), mezclar
bien. Los cristales podrían aparecer debido a la alta concentración de sal en las soluciones

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 Manual EDN
madre. Los cristales deben volver a disolver a 37 ° C antes de la dilución de las
soluciones Buffer. El Buffer concentrado es estable a 2-8 ° C hasta la fecha de
caducidad indicada en la etiqueta. La solución Buffer diluido (Buffer de lavado) se
puede almacenar en un matraz cerrado a 2-8 ° C durante un mes.

• El Buffer de extracción concentrado IDK Extract® debe diluirse con agua ultrapura
1: 2,5 antes de su uso (100 ml concentrado + 150 ml de agua ultrapura), mezclar bien.
Los cristales podrían presentarse debido a la alta concentración de sal en las acciones de
la solución. Antes de la dilución, los cristales deben volver a disolver a 37 ° C en un baño
de agua. El Buffer de extracción concentrado IDK Extract® es estable a 2-8 ° C hasta
la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. Solución buffer diluido (buffer de
extracción) se puede almacenar en un matraz cerrado a 2-8 ° C durante tres meses.

• Los estándares liofilizados (STD) y controles (Ctrl) son estables de 2-8 ° C hasta la
fecha de caducidad indicada en la etiqueta. Antes del uso, el STD (estándares) y CTRL
(controles) deben ser reconstituidos con 500 µl de agua ultra pura. Deje que el contenido
del vial para disolver durante 10 minutos y mezclar bien por inversión suave para
asegurar la reconstitución completa. Los estandares y controles reconstituidos pueden
almacenarse a 2-8 ° C durante cuatro semanas.

• El conjugado (CONJ) debe ser diluido 1: 101 en tampón de lavado (100 µl CONJ +10
ml de Buffer de lavado). El conjugado diluido es estable a 2-8°C hasta la fecha de
caducidad indicada en la etiqueta. El conjugado diluido no es estable y no se puede
almacenar.

• Todos los demás reactivos están listos para usar. Los reactivos de prueba son estables
hasta la fecha de caducidad (ver etiqueta del paquete del test) cuando se almacena a 2-8 °
C.

6. ALMACENAMIENTO Y PREPARACIÓN DE MUESTRAS

Almacenamiento de muestras
Las heces puras pueden ser almacenados durante 72 horas a temperatura
ambiente (15-30 ° C) y 4 ° C o durante 8 semanas a -20 ° C.
Extractos de heces (1: 100) se pueden almacenar durante 1 día a temperatura
ambiente (15-30 ° C), durante 5 días a 2-8 ° C o durante siete días a -20 ° C.
Evite más de dos ciclos de congelación-descongelación.

Extracción de muestras de heces

Buffer de extracción diluido IDK Extract® se utiliza como un buffer de
extracción de la muestra. Recomendamos la siguiente preparación de la muestra:

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 Manual EDN
Sistema de aplicación de las muestras de heces (SAS) (Cat. No.: K 6998SAS)

Tubo de muestras de heces – Instrucciones para su uso

Tenga en cuenta que el factor de dilución de la suspensión de heces final depende
de la cantidad de muestra de heces utilizado y el volumen del Buffer.

SAS con Buffer de extracción 1.5 ml:

Aplicar una cantidad de heces: 15 mg
Volumen del buffer: 1.5 ml
Factor de dilución: 1:100
Por favor, siga las instrucciones para la preparación de muestras de heces
utilizando el SAS de la siguiente manera:
a) La muestra de heces en bruto tiene que ser descongelados. Para las muestras
particularmente heterogéneas se recomienda una homogeneización mecánica
usando un aplicador, asa de inoculación o dispositivo similar.
b) Llenar el tubo de muestra vacía con 1,5 ml listo para usar del buffer de
extracción IDK Extract® antes de utilizarlo con la muestra. Importante: Deje que
el buffer de extracción alcance la temperatura ambiente.
c) Desenrosque el tubo (parte de color naranja de la tapa) para abrir. Inserte la
varilla de medición de color naranja en la muestra. La parte inferior de la varilla
tiene muescas que deben ser cubiertos por completo con las heces después de
insertarlo en la muestra. Colocar la varilla de medición en el tubo. Al poner la
palanca en el tubo, el exceso de material se eliminó, dejando 15 mg de muestra a
ser diluida. Atornillar firmemente para cerrar el tubo.
d) Agitar bien el tubo hasta que no exista materia fecal que permanezca en las
muescas. Importante: Por favor, asegúrese de que usted tiene una suspensión
homogénea al máximo después de la agitación. Especialmente con muestras más
sólidas, sumergiendo la muestra en el tubo con buffer de ~ 10 minutos mejora el
resultado.
e) Permitir que la muestra repose durante unos 10 minutos hasta que los
sedimentos se ha asentado. El material flotante como cáscaras de los granos
puede ser descuidado.
f) Desenroscar con cuidado la tapa completa del tubo incluyendo el anillo azul
más la varilla de nivel. Descarta la tapa y la varilla de medición. Asegúrese de
que el sedimento no se disperse de nuevo.

Dilución I: 1:100

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 Manual EDN
Dilución de muestras

Muestras de heces
El sobrenadante de la extracción (dilución I) se diluye 1: 4 con buffer de lavado.
Por ejemplo:
100 µl dilución I + 300 µl buffer de lavado = dilución II (1:4)
Dilución Final: 1:400*
* Se recomienda una dilución de 1:1000 para muestras colectivas con valores elevados
esperados.
Para análisis, pipeta de 100 µl de dilución II por pocillo.

Muestras de Orina
Le recomendamos analizar orina recogida dentro de las 24 horas, por lo que la
concentración de EDN se expresa en mg / día. Si una muestra de orina de 24 h no
está disponible, la orina desde un solo punto de tiempo puede ser analizada. En
este caso, la creatinina urinaria también debe ser cuantificada, y los resultados se
presentan como EDN creatinina µg / mmol.
Dentro de los 30 min de recogida la orina, ésta se separa por centrifugación, dos
veces durante 10 min a 1350 g y 4 ° C. El sobrenadante se transfiere a un nuevo
tubo de plástico. Antes del análisis, las muestras de orina deben ser diluidas 1:
400 con ASYBUF (Buffer de ensayo).
Por ejemplo:
10 µl muestra + 190 µl ASYBUF = dilución I (1:20)
15 µl dilución I + 285 µl ASYBUF = dilución II (1:20)
Dilución Final: 1:400
Para análisis, pipeta 100 µl de dilución II por pocillo.

Muestras Suero/plasma
Muestras de suero / plasma frescas recogidas deben de ser centrifugadas en una
hora. Almacenar las muestras a -20 ° C, si no se sometieron a ensayo en el mismo
día. Las muestras lipémicas o hemolíticas pueden dar resultados erróneos. Las
muestras deben mezclarse bien antes de ensayar. Recomendamos los análisis por
duplicados para cada muestra.
Las muestras de suero/plasma deben diluirse con ASYBUF 01:40 (Buffer de
ensayo), antes del análisis.
10 µl muestras + 390 µl ASYBUF
Dilución final: 1:40
Para análisis, pipeta 100 µl de la dilución por pocillo.

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 Manual EDN
7. PROCEDIMIENTO DE ENSAYO
Principio de la prueba
El ensayo utiliza la técnica de sándwich de ambos lados de ELISA,con dos
anticuerpos seleccionados (monoclonales y policlonales) que se unen alEDN
humano.
Patrones de ensayo, controles y muestras prediluidos de pacientes que contienen
EDN humano, se añaden a los pocillos de la microplaca que se reviste con un
anticuerpo monoclonal de alta afinidad al anti-anticuerpo EDN. Después del
primer período de incubación, el anticuerpo inmovilizado en la pared de los
pocillos de microtitulación captura el EDN humano de la muestra. A
continuación, el anticuerpo EDN policlonal de conejo conjugado con peroxidasa
anti-humana, se añade a cada pocillo de microtitulación y un sándwich de
anticuerpo de captura - EDN humana - se forma como peroxidasa-conjugado. La
Tetrametilbencidina se utiliza como un sustrato para la peroxidasa. Finalmente,
se añade una solución ácida de parada para terminar la reacción. El color cambia
de azul a amarillo. La intensidad del color amarillo es directamente proporcional
a la concentración de EDN. Se genera una curva de respuesta a la dosis de la
unidad de absorbancia (densidad óptica, DO a 450 nm) vs a la concentración,
usando los valores obtenidos a partir del standard. El EDN presente en las
muestras de pacientes, se determina directamente a partir de esta curva.

Procedimiento del test

Antes de su uso en el ensayo, permitir que todos los reactivos y muestras lleguen
a la temperatura ambiente (15-30 ° C) y mezclar bien.
Marcar las posiciones STD /SAMPLE/CTRL (standards/muestra/controles) en
una hoja de protocolo.
Tome las tiras de microtitulación del kit. Almacenar las tiras no utilizadas a 2-8 °
C. Las tiras son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.
Se recomienda llevar las muestras por duplicado.
Lavar cada pocillo 5 veces por dispensación de 250 µl de WASHBUF diluido
1. (Buffer de lavado) en cada pocillo. Después de la etapa de lavado final, eliminar
el buffer de doble residencia tocando la placa sobre papel absorbente.

Añada 100 µl de STD/SAMPLE/CTRL (standard/muestra/controles)

2.
dentro de cada pocillo.
Cubrir la placa con fuerza y se incuba durante 1 hora a temperatura
3.
ambiente (15–30 °C) en una mezcladora horizontal.
Desechar el contenido de cada pocillo. Lavar 5 veces por dispensación de 250 µl
4. de WASHBUF diluido (Buffer de lavado) en cada pocillo. Después de la etapa de
lavado final, eliminar el buffer residual tocando la placa sobre papel absorbente.

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 Manual EDN

5. Añada 100 µl de conjugado dentro de cada pocillo.

Cubrir la placa con fuerza e incubar por 1 hora a temperatura ambiente
6.
(15–30 °C) en un mezclador horizontal..
Descarta el contenido de cada pocillo. Lavar 5 veces dispensando 250 µl
7. de WASHBUF diluido (tampón de lavado) en cada pocillo. Después de la
etapa de lavado final, eliminar el tampón residual golpeando
cuidadosamente la placa en papel absorbente..
8. Añada 100 µl de SUB (substrato) dentro de cada pocillo.
a temperature ambiente (15–30 °C) en la
9. Incubar por 10–20 minutos
oscuridad*.
10. Añada 100 µl de STOP (solución de parada) dentro de cada pocillo, mezcle fuertemente

Determinar la absorción de inmediato con un lector de ELISA a 450 nm frente a

620 nm (o 690 nm) como referencia. Si no hay ninguna longitud de onda de
11. referencia está disponible, sólo lectura a 450 nm. Si la extinción del más alto
nivel supera el rango del fotómetro, la absorción se debe medir inmediatamente
a 405 nm frente a 620 nm como referencia.

* La intensidad del cambio de color es sensible a la temperatura. Se recomienda observar el cambio

de color y detener la reacción de la buena diferenciación.

8. RESULTADOS
Los siguientes algoritmos se pueden usar alternativamente para calcular los resultados.
Nos encomendamos recursos mediante el "algoritmo de 4 parámetros".

1. Algoritmo de 4 parámetros
Se recomienda utilizar una ordenada lineal de la densidad óptica y una abscisa
logarítmica de la concentración. Cuando se utiliza un eje de abscisas logarítmica,
el calibrador cero se debe especificar con un valor de menos de 1 (e. g. 0.001).

2. Cálculo punto a punto

Recomendamos una ordinaria lineal de la densidad óptica y una abscisa lineal
para la concentración.

3. A l g o r i t m o Spline
Recomendamos una ordinaria lineal para la densidad óptica y una abcisa linel para
la concentración .

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La plausibilidad de los pares de valores debe ser examinado antes de la evaluación

automática de los resultados. Si esta opción no está disponible con el programa
utilizado, los valores apareados deben ser evaluados de forma manual.

Muestras de heces y orina

Para el cálculo de la concentración de EDN en muestras de heces y orina,
el resultado
puede ser multiplicado por el factor de dilución 400 o por 1000 cuando se
ha utilizado una dilución de 1:1000.

Muestras de Suero/plasma
Para el cálculo de la concentración de EDN en el plasma / suero el resultado se debe
multiplicar por el factor de dilución 40.
En caso de que otro factor de dilución se ha utilizado, multiplicar el
resultado obtenido .por el factor de dilución utilizado

9. LIMITACIONES
Las muestras con concentraciones por encima del rango de medición deben diluirse
más y re-ensayadas. Por favor, considere esta dilución más alta en el cálculo de los
resultados.
Las muestras con concentraciones inferiores al rango de medición no pueden ser
claramente cuantificadas.
El límite superior del rango de medición se puede calcular
: como
La concentración más alta de la curva estándar × factor de dilución de la
muestra que se utilizará
El límite inferior del rango de medición se puede calcular como:
LoB × factor de dilución de la muestra que se utilizará

10. CONTROL DE CALIDAD

Immundiagnostik recomienda el uso de controles externos para el control de
calidad interno, si es posible.
Las muestras de control se deben analizar con cada ejecución. Resultados,
generados a partir de la lisis de las muestras de control analógica, deben ser
evaluados para la aceptabilidad utilizando métodos estadísticos apropiados. Los
resultados de las muestras de los pacientes pueden no ser válidas si dentro del
mismo ensayo uno o más valores de la muestra de control de calidad están fuera
de los límites de la mesa aceptaciones.
Rangos de referencia
1 g heces es equivalente a 1 ml.
Heces (n = 53): 357.6 ng/ml
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 Manual EDN

Basado en estudios de personas Immundiagnostik evidentemente sanos (n = 53), se

estimó un valor medio de 357,64 ng heces / ml. Por la presente, el valor de 1,700 ng /
ml de heces se debe considerar como el límite superior de la prueba.
Orina (n = 50): 81.8 (26.7–164.2) µg/mmol Creatinina
Suero (n = 52): 26.4 (8.3–66.4) ng/ml
Plasma (n = 52): 18.1 (6.2–49.8) ng/ml
Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios rangos de referencia.

11. CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO

Precisión y reproducibilidad
Dos muestras de pacientes fueron medidas usando el ensayo.
Intra-ensayo (n = 23)
Muestra EDN [ng/ml] CV [%]
1 303.6 7.0
2 760.5 5.7

Inter-ensayo (n = 14)
Muestra EDN [ng/ml] CV [%]
1 378.6 9.5
2 722.9 6.2

Especificidad
La especificidad del anticuerpo fue analizada midiendo la reactividad cruzada
frente a un rango de compuestos con estructuras similares al EDN. La
especificidad es calculada en porcentaje, basado en la reactividad cruzada de
estos compuestos con el anticuerpo anti-EDN comparado con el antigeno EDN:
Lactoferrina 0%
sIgA 0%
PMN-Elastasa 0%
Albumina Humana 0 %

Sensibilidad Analítica
El estándar Zero se midió 21 veces. El límite de detección se estableció como
B0 + 2 SD y estima en 0,164 ng / ml.
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 Manual EDN

Recuperación enriquecida:
Dos muestras fueron enriquecidas con 4 diferentes EDN standard y medidas usando
este ensayo (n = 2).
Muestra no EDN
enriquecida Enriquecido EDN esperado
Sample [ng/ml]
medido
[ng/ml] [ng/ml]
[ng/ml]
0.672 1.5 2.172 2.181
0.672 2.0 2.672 2.546
A
0.672 2.5 3.172 2.962
0.672 4.0 4.672 4.551
1.294 0.5 1.794 1.994
1.294 1.5 2.794 3.156
B
1.294 2.0 3.294 3.674
1.294 3.5 4.794 5.284

Recuperación de la dilución
Las muestras de dos pacientes fueron diluidas y analizadas. Los resultados se muestran a
continuación (n = 2):
EDN esperado EDN medido
Muestra Dilución
[ng/ml] [ng/ml]
1:200 798.10 798.10
1:400 451.30 399.05
A
1:800 231.10 199.53
1:1600 109.40 99.76
1:200 281.20 281.20
1:400 175.40 140.60
B
1:800 85.10 70.30
1:1600 32.30 35.15

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 Manual EDN

12. PRECAUCIONES
Todos los reactivos en el paquete del kit son para uso diagnóstico in vitro.

• Los materiales humanos usados en los componentes del kit pasaron pruebas que
demostraron ser negativas para el VIH, la hepatitis B y la hepatitis C. Sin embargo, por
razones de seguridad, todos los componentes del kit deben ser tratados como potencialmente
infecciosos.
• Los reactivos del kit contienen azida de sodio o Proclin como bactericidas. La azida sódica
y Proclin son tóxicos. Sustratos para las reacciones enzimáticas de color son tóxicos y
cancerígenos. Evite el contacto con la piel o las membranas mucosas.

• La solución de parada consiste en ácido sulfúrico diluido, un ácido fuerte. Aunque diluido,
que aún debe ser manejado con cuidado. Puede causar quemaduras y debe ser manejado
con guantes, protección ocular y ropa de protección adecuada. Cualquier derrame debe
limpiarse inmediatamente con abundante cantidad de agua. No vapor de la respiración y
evitar la inhalación.
13. CONSEJOS TÉCNICOS
• No intercambie diferentes números de lote de ningún componente del equipo en el mismo
recomienda no una los pocillos de diferentes placas de microtitulación para el análisis,
incluso si son del mismo lote.

• Las muestras de control se deben analizar con cada ejecución.

• Los reactivos no deben utilizarse después de la fecha de caducidad indicada en la etiqueta

del kit.
• La solución de sustrato debe permanecer incolora hasta su uso.

• Para asegurar resultados exactos, adecuada adherencia de los selladores de placas durante
los pasos de incubación es necesario.

• Evite la formación de espuma al mezclar los reactivos.

• No mezclar los tapones y tapas de diferentes reactivos.

• El ensayo debe realizarse siempre según el manual adjunto.

14. NOTAS GENERALES SOBRE LA PRUEBA Y PROCEDIMIENTO

DE ENSAYO
• Este ensayo se produce y se distribuye de acuerdo a las directrices IVD de 98/79 / CE.

• Deben ser seguidas las directrices para los laboratorios médicos

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 Manual EDN

• El tiempo de incubación, la temperatura de incubación y el volumen del pipeteado de los

componentes se definen por el productor. Cualquier variación del procedimiento de prueba,
que no está coordinado con el productor, puede influir en los resultados de la prueba.
Immundiagnostik AG, por tanto, no se hace responsable de los daños derivados del uso
incorrecto.
• Las reclamaciones de garantía y quejas con respecto a las deficiencias, deben ser
registrados dentro de los 14 días después de la recepción del producto. El producto se
debe enviar a un Immundiagnostik AG junto con una queja por escrito.

15. REFERENCIAS
1. Konikoff,M. R. et al. Potential of blood eosinophils, eosinophil-derived neuroto-
xin, and eotaxin-3 as biomarkers of eosinophilic esophagitis. Clin. Gastroenterol.
Hepatol. 4, 1328–36 (2006).
2. Lotfi,R. & Lotze, M.T. Eosinophils induce DC maturation, regulating immunity. J.
Leukoc. Biol. 83, 456–60 (2008).
3. Bentz, S. et al. Clinical relevance of IgG antibodies againstfood antigens in Crohn’s
disease: a double-blind cross-over diet intervention study. Digestion 81, 252–64
(2010).
4. Kalach, N. et al. Intestinal permeability and fecal eosinophil-derived neurotoxin
are the best diagnosis tools for digestive non-IgE-mediated cow’s milk allergy in
toddlers. Clin. Chem. Lab. Med. 51, 351–61 (2013).

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 Manual EDN

Símbolos Usados:

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