UNIVERSIDAD AGRARIA DEL ECUADOR

CAMPUS GUAYAQUIL

ASIGNATURA:

BIOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR

PRACTICA # 5

TEMA:

EXTRACCIÓN DEL ADN DE EUCARIONTES

ALUMNO:

ARIANA YAMILE URBINA ALVAREZ

CURSO:

INGENIERÍA AGRÍCOLA CON MENCIÓN AGROINDUSTRIAL

SEMESTRE:

SEGUNDO “B”

PROFESOR:

ING. PAULA PINTO

AÑO LECTIVO 2016-2017

PRACTICA # 5

TEMA O TITULO DE LA PRACTICA: EXTRACCION DE ADN DE EUCARIONTES

OBJETIVO DE LA PRÁCTICA:
Reconocer y realizar un protocolo complejo para la extracción de ADN de células eucariontes.

RESULTADO DE APRENDIZAJE DEL ESTUDIANTE:

En esta práctica aprendí a diferenciar la extracción de ADN procarionte del eucarionte por la
complejidad del mismo.

INTRODUCCIÓN
Todas las células, a excepción de las células a nucleadas de los eritrocitos maduros en humanos,
contienen ADN en sus núcleos celulares. También podemos encontrar ADN dentro de otros
compartimentos celulares diferentes al núcleo, como las mitocondrias y los cloroplastos. La cantidad
de ADN presente en algunos tejidos es muy pequeña; por este motivo no representa una fuente
conveniente de extracción, aislamiento y purificación, para ser empleado en diferentes estudios de
carácter genético, biológico. y/o bioquímico. Muchos tejidos contienen alta actividad de
desoxirribonucleasa (DNA asa) que rompe la macromolécula en pequeños fragmentos. Para
seleccionar un tejido como fuente de ADN debe reunir dos condiciones: contener gran cantidad de
material genético y poseer baja actividad de DNA (asa).

El tejido linfoide, y en este caso el timo y el bazo representan materiales biológicos que son
utilizados con mucha frecuencia como fuente de cantidades considerables de ADN para diferentes
estudios.

Después de extraído el ADN suele ser rápidamente desnaturalizado y por lo tanto se debe tener
mucho cuidado en su remoción, aislamiento y purificación con el fin de obtener un producto que
conserve la identidad e integridad estructural con el ADN de la célula de la cual proviene. El estrés
o tensión mecánica o físico química, que acompañan los procesos de purificación de las moléculas
de ADN deben ser evitadas al máximo y las nucleasas inhibidas.

EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS

 3 microtubos
 Centrífuga
 Placa calefactora
 Vaso de precipitado de 500 ml
 Pipeta automática
 Puntas de pipetas automáticas
 Palillos de dientes estériles
 Muestra de camarón (previamente macerado)
 Etanol 70%
  Papel aluminio y un pedazo de plumaflex fino
 Kit comercial para extracción de ADN:
o Agua ultra pura con DRPS
o Buffer GT
o DEPC
o Silice 40 μL

PROCEDIMIENTO/FLUJO/DESCRIPCIÓN

1. Colocar una pequeña muestra de camarón dentro de un microtubo de 1.5 ml y luego agregar
900 μL de GT Buffer. Luego homogenizar bien con la ayuda de un macerador estéril.
2. Centrifugar a 450 rpm por 3 minutos
3. Colocar 40 μL de silice en un microtubo con la ayuda de una pipeta automática de 50 μL
4. Después de la centrifugación del primer tubo, transferir 600 μL del sobrenadante con la
ayuda de la pipeta automática de 100 μL en el tubo que contiene sílice. Homogenizar bien.
5. Centrifugar 450 rpm durante 1 minuto. Luego vaciar el sobrenadante superior en un
cristalizador.
6. Lavar el sedimento de sílice con 500 μL de tampón GT con DRPS. Homogenizar con la ayuda
de la pipeta automática soltando el pellet para que el sedimento quede totalmente
resuspendido.
7. Centrifugar 450 rpm durante 15 segundos. Eliminar el sobrenadante en el cristalizador
8. Añadir 1 ml de etanol de 70% para lavar el sedimento de sílice. Homogenizar hasta que la
solución de sílice quede totalmente resuspendida.
9. Centrifugar 450 rpm durante 15 segundos. Luego decantar el etanol en el cristalizador con
la ayuda de una pipeta automática.
10. Calentar en una placa calefactora un vaso de precipitado de 500ml con agua y cubrirla con
papel aluminio.
11. Añadir 1 ml de DEPC en el precipitado de sílice para resuspenderla. Homogenizar hasta que
la solución quede totalmente suspendida.
12. Colocarlo en un plumaflex con pequeños huecos y colocar los microtubos en el mismo, luego
llevarlo al vaso de precipitado previamente calentado con agua (baño maría) durante 10
minutos a una temperatura 55 °C. Luego llevarlo a la centrifuga a 450 rpm durante 2
minutos.
13. Transferir 500 μL de sobrenadante a un nuevo microtubo. Rotular el microtubo con la fecha,
el grupo y el nombre del ADN que se examinó.

RESULTADOS

Observe que el microtubo de la muestra ya extraída el ADN de camarón queda transparente, es

decir, que aprendimos un método de extracción de ácidos nucleicos eucariontes.
CONCLUSIONES:

Comprobé que el método de extracción de ADN de células eucariotas es más complejo que el de las
células procariotas eso tiene que ver por la composición de cada célula.

BIBLIOGRAFÍA:

https://biologiamolecularinteractiva.files.wordpress.com/2013/01/laboratorio-no-2-
extraccion-de-adn.pdf

ANEXOS (FOTOS):

PROCEDIMIENTO DE LA PRÁCTICA

Figura1. Coger el microtubo poner la muestra Figura2. Centrifugar la muestra

adentro y agregar los 900 μL de GT Buffer

Figura 3. Colocar los 600 del sobrenadante en Figura 4. Volver a centrifugar a 450 rpm
el otro microtubo que contiene la solución de durante 15 segundos.
sílice y homogenizar.
Figura 5. Colocar y lavar el sedimento con la Figura 6. Sacar el etanol que se le agrego
ayuda del tampón de GT con DRPS previamente previamente después de su centrifugación.
eliminado el sobrenadante.

Figura 7. Calentar la placa calefactora con agua Figura 8. Añadir 1 ml de DEPC en el

precipitado de sílice para resuspenderla
y cubierta de papel aluminio para realizar el
baño María.

Figura 9. Colocar el microtubo en la centrifuga Figura 10. Sacar 500 μL de sobrenadante a un

nuevo microtubo, después rotular con nombre
durante 2 minutos en 450 rpm previamente
del ADN, fecha y grupo.
realizado el baño María.