Las células no teñidas son prácticamente transparentes

El poder de resolución del microscopio, es la capacidad que posee un objetivo para distinguir
la distancia mínima entre dos puntos del objeto para que se puedan visualizar como dos
puntos separados.
Es el responsable de la calidad, claridad, nitidez y fineza detallada de la imagen, y
depende de la longitud de onda del haz de luz utilizando la apertura numérica del objetivo
empleado.

Poder de resolución = 0.2 µm por lo que se requiere de una amplificación entre 1000 – 1400x

Poder de resolución del ojo humano = 0.2 mm

Para aprovechar esta ventaja de los microscopios, se han desarrollado técnicas tintoriales que
destacan las características morfológicas de los microorgranismos.

COLORANTES

Colorantes naturales, extraídos de plantas o animales y colorantes artificiales, aquellos de

minerales procesados y manipulados en el laboratorio.

Quimicamente un colorante está constituido de un Cromóforo + Auxócromo. El Cromóforo es

todo grupo aislado, covalente e insaturado, que tiene una absorción característica en la región
UV o Visible.

CROMOFORO.- Capacidad que tiene la molécula para que sus electrones ABSORVAN energía o
luz visible, se exciten y emitan diversos colores de acuerdo con la longitud emitida como
resultado del cambio en el nivel energético.

Sus grupos funcionales son dobles y triples enlaces de carbono-carbono, anillos aromáticos,
grupos carbonilos, imino, diazo, nitro, etc.

AUXOCROMOS.- Grupos funcionales o radicales que constituyen una molecula y poseen carga
parcial positiva.

Intensificar la formación de color, desplazar a los cromóforos hacia longitudes de ondas largas
para aumentar la intensidad. Metilo, halógeno, hidroxi, alcoxi y amino.

Permiten hacer visibles los objetos traslucidos montados en el microscopio.

Revelan su forma y tamaño

Muestran presencia de estructuras internas y externas

Producen reacciones químicas específicas.

Tinción Simple (Se utiliza un solo colorante)

Tinción Diferencial (Se utiliza más de un colorante)

TINCION DE GRAM

Basada en las características de la pared celular de las bacterias; las Gram – tienen una capa
fina de peptidoglicanos y las gram+ pero no cuentan con membrana celular externa.

La safranina de (contraste) tiene un sistema de anillos se encuentra en la posición intermedia

de oxidación (se encuentra el catión).

Capaz de combinarse con elementos celulares de carga negativas.

Carl Weigert mejoro la tinción de Gram añadiendo (safranina) después de lavar con etanol.

Las Gram + resisten al lavado de etanol por tener capa gruesa de PEPTIDOGLICANO en su
pared celular.

El violeta genciana tiene afinidad con el peptidoglicano; el lugol impide la salida del colorante
primario.

Por la formación de un complejo cristal violeta-yodo que satura los espacios del
peptidoglicano de la pared bacteriana.

El alcohol-acetona, la cual deshidrata la pared bacteriana y cierra los poros de la misma,

también destruye la membrana externa de las bacterias Gram-, debido a que es soluble a
solventes orgánicos. Las Gram + al contener una gran cantidad de peptidoglicano retienen con
mayor fuerza este complejo; mientras que las Gram – no lo pueden retener por tener menos
cantidad de peptidoglicano.

Se coloca la safranina como colorante secundario, contratincion o de contraste.

Hay bacterias que pueden verse como gram + y gram- (llamada tinción variable secundaria a
alteración en nutrientes, temperaturas, pH o concentración de electrolitos ).

FIJACION: Para preservar la arquitectura estructural y química de las células.

Fijadores físicos y químicos (como la desecación, calor seco, calor húmedo, ultrasonido
y microondas) y (oxidantes y reductores: formaldehido, etanol, metanol, ácido acético,
acetona)
Método químico, para precipitar proteínas, antes de teñir. Ya que son liquidos con potencial
alto de difusión intracelular y detienen procesos enzimáticos.

Los reactivos poseen la capacidad de interactuar con biomoleculas (proteínas, glicoproteínas,

peptidoglicanos, lípidos, glicolipidos, pigmentos y ácidos nucleicos)

TINCION PRIMARIA

DECOLORACIÓN

TINCION DE CONTRASTE

Las bacterias una de sus características, como su morfología, está definida por el
tamaño, la forma, el arreglo y la estructura.

1. Forma redondeada denominadas cocos,

2. Forma cilíndrica, denominadas bacilos
3. Forma de espirales, denominadas espirilos.