Sarmiento Yengle, Valery RoxanaLUMINOL

Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
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DE
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Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
Dr. ORLANDO GONZALES NIEVES
RECTOR
AS
IC
G
Dr. RUBÉN VERA VÉLIZ
LO
VICERRECTOR ACADÉMICO
O
BI
AS
Dr. WEYDER PORTOCARRERO CÁRDENAS
VICERRECTOR DE INVESTIGACIÓN
CI
EN
CI
Dr. JOSÉ MOSTACERO LEÓN

DE
DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

CA
TE
Dr. FREDDY PELÁEZ PELÁEZ
DIRECTOR DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE CIENCIAS

IO
BIOLÓGICAS
BL
BI
ii
PRESENTACIÓN
Señores miembros de jurado:
AS
IC
En cumplimiento con las disposiciones del reglamento interno vigente de grados y títulos
G
de la Escuela Académico Profesional de Ciencias Biológicas, Facultad de Ciencias
LO
Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, me es honroso someter a vuestra
O
consideración y elevado criterio, el presente trabajo de investigación titulado “Validación
BI
de las técnicas Blue Star Forensic y Luminol para detección de sangre en manchas de
interés criminalístico en el laboratorio, Trujillo, 2015”.

AS
CI
EN
Con el cual cumplo uno de los requisitos indispensables para optar el título profesional de
Biólogo.
CI
DE
Trujillo, octubre del 2015.

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__________________________________________________
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Br. Valery Roxana Sarmiento Yengle

BI
iii
JURADADO DICTAMINADOR
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LO
Dr. SANTOS ENRIQUE PADILLA SAGÁSTEGUI
O
PRESIDENTE
BI
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EN
_____________________________________________
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Dr. JOSÉ ANTONIO SALDAÑA JIMÉNEZ

DE
SECRETARIO
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______________________________________________
Dr. CARLOS HELI QUIJANO JARA
BI
VOCAL
iv
DEL ASESOR
El que suscribe, profesor asesor de la presente tesis titulada: “Validación de las técnicas
AS
Blue Star Forensic y Luminol para detección de sangre en manchas de interés
IC
criminalístico en el laboratorio, Trujillo, 2015”.
G
LO
CERTIFICA:
O
BI
Que la investigación ha sido desarrollada en conformidad con los objetivos propuestos y
AS
las orientaciones pertinentes; por tal razón el informe ha sido redactado y revisado con mi
asesoramiento, acogiendo las observaciones y sugerencias alcanzadas. Por lo tanto

CI
autorizo a la Br. Valery Roxana Sarmiento Yengle a continuar con los trámites
EN
correspondientes.
CI
DE
_______________________________
Dr. Santos Enrique Padilla Sagástegui
CA
ASESOR
TE
IO
BL
BI
APROBACIÓN
Los profesores que suscriben, miembros del jurado dictaminador, declaran que la presente
AS
tesis titulada: Validación de las técnicas Blue Star Forensic y Luminol para detección de
IC
sangre en manchas de interés criminalístico en el laboratorio, Trujillo, 2015, ha cumplido
G
con los requerimientos formales y fundamentales, siendo aprobada por UNANIMIDAD.
LO
O
Trujillo, octubre del 2015.
BI
AS
_____________________________________________
CI
Dr. SANTOS ENRIQUE PADILLA SAGÁSTEGUI
EN
PRESIDENTE
CI
DE
_____________________________________________
CA
Dr. JOSÉ ANTONIO SALDAÑA JIMÉNEZ
SECRETARIO
TE
IO
BL
______________________________________________
Mg. CARLOS HELÍ QUIJANO JARA
BI
VOCAL
vi
DEDICATORIA
AS
A Dios todo poderoso por haberme dado la
IC
vida, por guiarme, cuidarme, bendecirme y
darme la fortaleza necesaria día a día para
G
seguir adelante y poder cumplir con todos
mis objetivos trazados.
LO
O
BI
A mi padre Alex Sarmiento, por su amor y
AS
compromiso hacia mis estudios y por hacer de
mí una profesional destacada, siendo mí apoyo
incondicional en cada momento.
CI
EN
CI
DE
A mi madre Ysabel, por su amor, motivación

y por hacer de mí una mejor persona con
CA
valores humanos para servir a la sociedad.

TE
IO
BL
A mis hermanas Catherine y Patricia,

quienes están en los momentos más difíciles y
alegres de mi vida brindándome su apoyo
BI
para superar las adversidades de la vida y

motivarme profesionalmente.
vii
AGRADECIMIENTO
AS
A la Universidad Nacional de Trujillo porque
a través de sus docentes de la Facultad de
IC
Ciencias Biológicas, me transmitieron
enseñanzas y conocimientos en diferentes
G
áreas durante mi vida universitaria que me
ayudan a ser una gran profesional.
LO
O
Al Dr. Enrique Padilla Sagástegui, por su
BI
asesoramiento, dirección y apoyo
incondicional, impartiéndome sus
conocimientos, deseándome e
AS
incentivándome a seguir creciendo e
investigando.
CI
EN
Al Departamento de Criminalística – La
CI
Libertad, quien pudo hacer posible la

realización de la presente tesis, a
Capitán Sarmiento y a Superior
DE
Cabrera, quienes me asesoraron y

apoyaron en todo momento con sus
conocimientos y experiencias. A Carlos, por su cariño y motivación,
CA
por estar siempre a mi lado

apoyándome constantemente a
cumplir con mis metas y objetivos en
TE
mi vida profesional.
IO
BL
A mis amigos Albert, Elvia y

Giancarlos, asimismo familiares
quienes en todo momento estuvieron
BI
brindándome su apoyo y celebrando

mis logros como si fueran los suyos.
viii
ÍNDICE
AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO ii
AS
PRESENTACIÓN iii
IC
MIEMBROS DEL JURADO iv
G
LO
DEL ASESOR v
O
APROBACIÓN vi
BI
DEDICATORIA vii
AGRADECIMIENTO
AS viii
CI
ÍNDICE ix
EN
RESUMEN x
CI
ABSTRACT xi
DE
INTRODUCCIÓN 1
CA
MATERIAL Y MÉTODOS 10
TE
RESULTADOS 20
IO
DISCUSIÓN 25
BL
CONCLUSIONES 30
BI
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 31
ANEXOS 37
ix
RESUMEN
AS
El estudio del tipo de interacción involucrada en la formación de luz azul brillante o
quimioluminiscencia se desarrolló en condiciones de laboratorio, utilizando material
IC
biológico y productos químicos en condiciones de manchas sobre diferentes sustratos
G
LO
siguiendo la metodología de Fernanda y Sorieth, obteniendo como resultados valores de
sensibilidad (1,000 y 0,9773), especificidad (0,9811 y 0,9107), Valor Predictivo Positivo
O
BI
(0,9792 y 0,8958), Valor Predictivo Negativo (1,000 y 0,9808) e Índice de concordancia
entre los observadores (0,99 y 0,94) para las técnicas Blue Star Forensic y Luminol
AS
respectivamente con un Índice de Kappa de 0,9297, llegando a concluir que las técnicas
CI
Blue Star Forensic y Luminol tiene alta validez en la detección de manchas de sangre que
EN
pueden ser usadas en procesos criminalísticos ya que los criterios de sensibilidad y

CI
especificidad tienen valor de concordancia casi perfecta tomando como referencia la
escala del índice de Kappa, por lo tanto ambas tienen reacción positiva solo en células
DE
sanguíneas siendo indiferente a los extractos vegetales y otros fluidos biológicos puestos
CA
en diferentes sustratos o soportes sin influencia en la reacción, no obstante, se determinó
que la técnica Blue Star Forensic es más sensible y específica que la técnica de Luminol.
TE
IO
BL
PALABRAS CLAVES: quimioluminiscencia, validación, Blue Star Forensic y Luminol.

BI
ABSTRACT
AS
The study of the type of interaction involved in the formation of bright blue light or
chemiluminescence developed under laboratory conditions, using biological material and
IC
chemicals in terms of spots on different substrates using the methodology of Fernanda and
G
LO
Sorieth, obtaining as results sensitivity values (1.000 and 0.9773), specificity (0.9811 and
0.9107), positive predictive value (0.9792 and 0.8958), negative predictive value (1.000
O
BI
and 0.9808) and Index of agreement between observers ( 0.99 and 0.94) for technical Blue
Star Forensic Luminol respectively and a Kappa index of 0.9297, reaching the conclusion
AS
that the Blue Star Forensic techniques and have high validity Luminol to detect blood
CI
stains that may It is used in criminology processes and that the criteria for sensitivity and
EN
specificity are worth almost perfect agreement by reference to the scale of Kappa therefore
CI
both have positive reaction only in blood cells remain indifferent to the plant extracts and
DE
other biological fluids positions on different substrates or substrates without influence on
the reaction, however, it was determined that Blue Star Forensic technique is more
CA
sensitive and specific than Luminol technique.

TE
KEYWORDS: chemiluminescence, validation, and Blue Star Forensic Luminol.

IO
BL
BI
xi
I. INTRODUCCIÓN
Entre las investigaciones mencionadas en la actualidad están las
AS
relacionadas con los procesos forenses por el aumento de casos imprevistos contra
IC
la humanidad, ya sea un crimen, accidente, desastre natural, conflicto armado o de
G
otro tipo, dejando vestigios en la “escena del delito” o el lugar en el cual se ha
LO
producido el incidente conteniendo rastros de las actividades efectuadas (Almog, y
O
col., 2009); no obstante estas investigaciones requieren la aplicación de métodos y
BI
técnicas idóneas que permitan determinar o confirmar la existencia y
AS
reconstrucción del acto “delictivo” y tener la posibilidad de la identificación y la
CI
intervención de los hechos para su esclarecimiento (Silveyra, 2006).
EN
Los casos más frecuentes en la aplicación de la investigación forense son los

CI
homicidios, conocidos como delito, que consiste en una acción u omisión,

DE
mediante el cual se priva de la vida a otra persona, ya sea dolosa o culposamente,

CA
que en muchos casos, las evidencias son barridas y limpiadas de la escena, o los
causantes o victimarios se valen de cualquier tipo de sustancias químicas

TE
(solventes orgánicos, inorgánicos o detergentes) para limpiar o borrar de manera

IO
exhaustiva la evidencia (Shanan, y col., 2007); de tal manera que los profesionales
BL
en estas investigaciones o “peritos” llegan a la escena del hecho a localizar e

BI
identificar los indicios y evidencias que puedan encontrarse en dicha escena, es
posible que las pruebas más pertinentes e importantes no resulten evidentes ni
directamente perceptibles a simple vista, por lo que es necesario la inspección con
diferentes técnicas y procedimientos básicos para detectar pruebas materiales,
como por ejemplo, el uso de fuentes de luz manuales (detectar pisadas), polvos
diversos (revelan huellas dactilares) o el uso de productos químicos como luminol
AS
y blue star forensic para visualizar rastros de sangre (Almog, y col., 2009).
IC
G
De modo tradicional, en las escenas delictuales, la evidencia de vital
LO
importancia para lograr el esclarecimiento y una condena al culpable es la
O
hematológica, por tal motivo, es imprescindible que los investigadores cuenten
BI
con el conocimiento de las técnicas más eficaces y convenientes para recogerlas,
AS
ya que existen casos en que las evidencias sanguíneas presentes en la escena de
CI
los hechos, se han deteriorado, ya sea por el lapso de tiempo, por condiciones
EN
ambientales (temperatura, humedad y polvo) o por fines particulares del
victimario (Villarreal-Sotelo, y col., 2009).

CI
DE
En este sentido, cuando los peritos recogen las evidencias “supuestamente”

CA
hematológicas en la escena, se adopta la decisión de llevar a cabo otros exámenes
en el laboratorio, mediante métodos de orientación, confirmación, especie,

TE
individualidad (grupos sanguíneos y ADN) y otros como la antigüedad de las

IO
muestras, el lugar de procedencia, forma y tamaño de la manchas (Villanueva,

BL
1998) y para estos casos, se requiere un alto conocimiento de los métodos, puesto
BI
que una elección inadecuada de la técnica o una interpretación errónea del
resultado, puede hacer perder el valor de un elemento de prueba que, finalmente
puede ser trascendental (Monteiro, 2010). Asimismo, estos métodos facilitan al
profesional forense la obtención de datos y resultados verdaderos, por ser fáciles
de usar, no requiriendo condiciones inalcanzables para aportar información
valiosa por los buenos resultados analíticos, los cuales ayudan a la investigación,
AS
facilitan el desarrollo del proceso pericial y la rápida acción por parte de las
IC
autoridades competentes (Almog, y col., 2009), por tal motivo es fundamental que
G
estos métodos sean estudiados y validados para la obtención de resultados
LO
confiables, como lo sostiene Monteiro (2010).
O
BI
La validación consiste en establecer una evidencia documentada que
AS
permita asegurar la consistencia de un procedimiento o técnica, a partir del cual se
CI
pueda obtener un resultado que satisfaga de manera consistente las
EN
especificaciones de calidad, permitiendo hacer fundamentaciones acertadas y
apropiadas para brindar información acerca de la precisión y exactitud inherente

CI
del resultado final (Desain, 1992), por lo tanto con la validación de las técnicas de
DE
luminol y blue star forensic, se pretende aportar pruebas que han sido sometidas a
CA
diferentes condiciones, las cuales permiten alcanzar resultados confiables, de alta
sensibilidad, alta especificidad y con altos parámetros de calidad que soporten la

TE
más dura controversia jurídica en los estrados judiciales (Monteiro, 2010).

IO
BL
Dada la información bibliográfica que antecede, existen algunas

BI
experiencias tales como la prueba de quimioluminiscencia descubierta
accidentalmente por Albrecht (1928) con el nombre de 5-amino-2,3-dihidro-1,4-
ftalazinadiona, quien publicó su obra “La quimioluminiscencia del Luminol”,
indicando que existe una sustancia que producía una emisión de luz tenue azul
brillante cuando era adicionado peróxido de hidrógeno en presencia de un
catalizador como el cobre, hierro y cobalto, cuya prueba fue confirmada con la
AS
propuesta de Huntress, y col., (1934) y publicado en el artículo "The oxidation of
IC
3-aminophthalhydrazide ("Luminol") as a lecture demonstration of
G
chemiluminescence," en el Journal of the American Chemical Society; pero
LO
Specht (1937), científico forense del Instituto de Medicina Legal y Criminalística
O
de Jena, realizó los primeros estudios para la aplicación del luminol en la escena
BI
del delito, basando sus estudios en distintos test para detectar sangre sobre
AS
diferentes superficies; encontrando una gran efectividad reactiva, a pesar de que
CI
habían sido modificadas y limpiadas físicamente.
EN
En 1951, el luminol ya se aplicaba en distintos casos como herramientas de

CI
refuerzo para la investigación criminal, por lo que fue reconfigurado para una
DE
mayor efectividad y mejora en su utilización y resultados; utilizando la molécula

CA
descrita por Albrecht, pero adicionándole carbonato de sodio, perborato de sodio y
agua destilada, con la finalidad de detectar pequeñas cantidades de sangre, no

TE
obstante el carbonato de sodio producía una reacción lenta y poca luminosidad;

IO
por otra parte, al perborato de sodio se volvía muy inestable y toxica (Dilbeck,
BL
2006), por lo que Weber en 1966 modificó la fórmula, reemplazando el perborato

BI
de sodio por peróxido de hidrogeno en un medio hidratado de agua destilada,
dando como resultado un Luminol termolábil y con un tiempo de duración muy
corto, pero que ofrecía una reacción luminosa que se podía fotografiar en total
oscuridad (Buendía, 2008).
AS
Asimismo, en España se realizaron investigaciones sobre la sensibilidad del
IC
luminol para detectar machas de sangre lavadas y aparentemente invisibles a
G
simple vista, al finalizar la investigación demostraron que el luminol es muy
LO
eficaz para la detección de sangre en manchas que han sido lavadas hasta diez
O
veces, además que la extracción y amplificación del ADN se puede dar con
BI
muestras de sangre que han sido lavadas hasta tres veces (Castelló y Feucht,
2002).
AS
CI
EN
En este contexto, se estudiaron las técnicas de orientación que permiten la
detección previa de la muestra a analizar, utilizando Bencidina, Luminol, O-

CI
Toluidina y Fenolftaleína, sobre diferentes muestras contaminadas con diversas

DE
sustancias, llegando a concluir que existían errores en los resultados de algunas

CA
técnicas debido a la contaminación de las muestras, arrojando falsos positivos
para las pruebas de Bencidina, O-Toluidina y Fenolftaleína y verdaderos positivos

TE
y negativos para la prueba de luminol, destacando la sensibilidad y especificidad

IO
de la técnica (Negre, y col.,2003).

BL
BI
Siguiendo con los estudios en estos temas, en Brasil utilizaron pruebas de
Bencidina, Luminol, O-Toluidina y Fenolftaleína para determinar sangre en
diferentes manchas elaboradas, empleando variantes de tiempo y almacenamiento
de la muestra con doce meses de antigüedad, obteniendo resultados poco sensibles
para la técnica de Fenolftaleína, poco específicos para la técnica de O-Toluidina y
resultados fiables de sensibilidad y especificidad para las técnicas de Bencidina y
AS
luminol (Castello, y col., 2004).
IC
G
Asimismo en el 2005, se realizaron investigaciones para evaluar pruebas
LO
presuntivas de luminol, piramidón y fenolftaleína como confirmatorias de
O
Absorción – Elución y Aglutinación, con la finalidad de determinar su
BI
sensibilidad e interferencia al ser sometidas a diferentes soportes y condiciones
AS
físicas, demostrando que las pruebas presuntivas tenían mayor sensibilidad
CI
respecto a las pruebas confirmatorias, ya que estas requieren de muestras que no
EN
hayan sido lavadas o modificadas (Villegas, y col., 2005); no obstante la prueba
presuntiva de luminol era toxico y destruía el ADN, por lo tanto la compañía

CI
“Blue Star”, encomendó crear una nueva fórmula a base de Luminol que elimine
DE
estos inconvenientes con lo que se descubrió la fórmula definitiva de luminol y le

CA
llamó blue star forensic, cuyos estudios de sus propiedades revelaron que su
importancia reside en la reacción de quimioluminiscencia que da con peróxidos en

TE
presencia de complejos de hierro como catalizadores y conserva el ácido

IO
desoxirribonucleico (ADN) sin alterarlo ni modificarlo, además que este no

BL
presentaba riesgos para la salud humana (Blum, y col., 2006).

BI
A partir del descubrimiento del blue star forensic se comenzaron a realizar
nuevas investigaciones, como las pruebas presuntivas de sangre: Luminol, Verde
de Leucomalaquita, Fenolftaleína, Hemastix, Hemident y Bluestar, aplicados en
manchas sometidas a diluciones con productos químicos de limpieza y fluidos
corporales demostrando que verde de leucomalaquita era específico, pero su
AS
sensibilidad era 10 veces menor al luminol y destruía el ADN, fenolftaleína tenía
IC
sensibilidad a la mayoría de las pruebas, pero era inespecífica y reducía la
G
cantidad de ADN recuperable; en cambio, Hemastix no eran muy específico y
LO
Hemident era específico y sensible, pero destruía el ADN, mientras que luminol y
O
bluestar eran las mejores pruebas de sangre presuntiva, ya que tenían la mayor
BI
sensibilidad y especificidad y no destruían el ADN, no obstante su única
AS
desventaja era que debían ser usados con muy poca luz u oscuridad total (Webb,
CI
2006).
EN
A través del tiempo, se desarrollaron otros estudios para evaluar los

CI
reactivos frente al análisis del ADN en manchas de sangre con las técnicas de
DE
luminol, fluoresceína y blue star forensic sobre trozos de tela y alfombras

CA
manchadas con sangre y rociadas con los reactivos para el análisis por
polimorfismo de repeticiones cortas en tándem, demostrando que una vez

TE
completo los perfiles de los 13 principales Sistemas de Índice Combinado de

IO
ADN por polimorfismo de repeticiones cortas en tándem se obtenían hisopos de

BL
cada trozo de alfombra, concluyendo que luminol, fluoresceína y blue star

BI
forensic no inhiben el análisis de polimorfismo de repeticiones cortas en tándem
(Jakovich, 2007).
En Colombia se realizaron estudios de validación de las técnicas de Blue
star Forensic Free y Trevenon Roland-Piramidon, utilizando cien muestras con
diferentes sustancias colocadas en diferentes tipos de telas concluyendo que las
AS
técnicas eran altamente sensibles y medianamente específicas para la
IC
determinación de manchas de sangre (Arbeláez y Ríos, 2009).
G
LO
En Perú se utilizan las técnicas de luminol y blue star forensic en escenas
O
delictuales para detectar manchas de sangre que no son apreciables al ojo humano,
BI
con la sospecha que haber sido limpiadas, lavadas, pintadas o modificadas para
AS
beneficios particulares, o en todo caso, confundidas con manchas coloreadas de
CI
diferentes origen, que pueden ser pigmentos naturales de otros seres vivos y que a
EN
simple vista pueden confundirse con sangre, como es el caso de los carotenoides,
en sus variaciones anaranjado (caroteno), rojo (licopeno) y amarillo (luteína), que

CI
se les encuentra en raíces, tallos, frutos, flores y hojas de los vegetales, que
DE
posiblemente resulte una reacción positiva con luminol, permitiendo su

CA
visualización por fluorescencia; sin embargo solo se procesan como acciones de
rutina las manchas de sangre, sin reportes oficiales a la sociedad, siendo esto
TE
fundamental por su gran importancia en el esclarecimiento de delitos, por tal

IO
motivo se hace imprescindible la validación de las técnicas de blue star forensic y

BL
luminol con la finalidad de aportar al sistema judicial evidencias que sean

BI
realizadas con técnicas probadas, de alta sensibilidad, con altos parámetros de
calidad que soporten la más dura controversia judicial permitiendo la rápida acción
por partes de las autoridades competentes, es por ello y dado los antecedentes con
la información bibliográfica nos planteamos el objetivo de validar las técnicas blue
star forensic y luminol para la detección de manchas de sangre en condiciones
comparativas con otros fluidos como orina, semen y saliva, además de extractos
AS
del bulbo de Beta vulgaris “beterraga”, Daucus carota “zanahoria” y Raphanus
IC
sativus “rabanito” y frutos de Fragaria vesca “fresa”, Solanum lycopersicum
G
“tomate” y Vitis vinífera “uva”, por tener pigmentos de color rojo, con tendencia a
LO
confundirse con manchas de sangre de interés criminalístico con la determinación
O
de parámetros cualitativos de sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo,
BI
valor predictivo negativo e índice de concordancia para ambas técnicas.
AS
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI
II. MATERIAL Y METODOS
2.1. Universo
AS
Diferentes tipos de manchas, con sangre o sin sangre, tratadas o no tratadas.
IC
2.2. Muestra
G
Las muestras estuvieron constituidas por manchas de sangre humana por contener
LO
hemoglobina (Anexo 1), obtenidas del Hospital de Sanidad de la Policía Nacional
O
de Perú, extraída por punción venosa del brazo de diez voluntarios mayores de 18
BI
años clínicamente sanos, dispuestas en tubos de ensayo 1x18 con anticoagulante
AS
Acido Etilendiaminotetraácetico (EDTA) y conservada a temperatura ambiente en
gradillas de aluminio durante una hora, manchas de sangre de origen animal

CI
(vacuno, porcino, ovino ) obtenidas del Camal El Porvenir en tubos de ensayo
EN
etiquetados conteniendo anticoagulante EDTA, manchas de fluidos biológicos de

CI
origen humano (orina, saliva y semen), donados por diez voluntarios mayores de 18
DE
años clínicamente sanos, informados previamente de la investigación y recolectados
en frascos de vidrio etiquetados y esterilizados (Anexo 2 y 3), asimismo, manchas

CA
de extractos vegetales por sus pigmentos rojizos (Anexo 4), en buen estado de
TE
conservación procesados en un extractor (Anexo 5) obtenidos de los mercados
públicos de Trujillo depositados en frascos de vidrio estériles y por ultimo manchas

IO
de productos químicos seleccionados según su condición física y sus fechas de

BL
vencimiento (Anexo 6), todas procesadas en el Laboratorio de Biología Forense de

BI
la Policía Nacional del Perú – Trujillo, como se detalla en la Figura N° 1.
10
2.3. Selección de muestras y sustratos
El material biológicos de origen humano, animal, vegetal que presentan aspecto
coloreados en la medula del bulbo de Beta vulgaris, Daucus carota, Raphanus
AS
sativus y los frutos de Fragaria vesca, Solanum lycopersicum y Vitis vinífera;
IC
asimismo productos químicos como lugol, café, coca cola y vino tinto, fueron
G
seleccionados por poseer en su estructura interna o externa elementos capaces de
LO
activar la reacción de quimioluminiscencia, los mismos que fueron distribuidos en
O
sustratos de diferente naturaleza mayormente encontradas en escenas delictuales
BI
(piso no pulido, alfombra, tierra y algodón) en donde fueron dispuestos por un
AS
tiempo aproximado de cuatro a cinco horas hasta la evaporación del agua y el
CI
tratamiento con los reactivos blue star forensic y luminol en condiciones de
EN
oscuridad (Gutiérrez y col., 2003). En este contexto las manchas fueron sometidas a
diferentes condiciones físicas (temperatura y lavado) y sustancias químicas

CI
(reactivos) que pudieran interferir en la reacción de quimioluminiscencia como se

DE
detalla en la Figura N°2, ilustrado en los Anexos 7 – 14.

CA
TE
IO
BL
BI
11
SANGRE
AS
Productos Biológicos
IC
G
LO
O
BI
Sangre Extractos Fluidos Sangre UNIVERSO
Humana Vegetales Corporales Animal
AS
CI
EN
CI
DE
MUESTRA
CA
TE
IO
BL
Figura N° 1: Representación esquemática de la distribución de los productos biológicos desde su origen para obtener el
BI
universo muestral y las muestras correspondientes
MANCHAS DE
AS
IC
Tratamiento
G
LO
O
BI
Temperatura Lavado Reactivos
AS
T°
CI
EN
CI
5 veces 10 15 veces
DE
veces
CA
(2) 1ml
TE
1 3H 1 3 (2) (2) 1ml 1g 1g 1

H (2) H H (2) (2) (2) (2) (2)
IO
(2) (2) (2)

BL
Figura N° 2: Representación esquemática del tratamiento físico y químico de las manchas de sangre.
BI
12
2.4. Preparación de diluciones de sangre y reactivos
2.4.1. Sangre
Se prepararon diluciones de sangre con agua destilada en probetas de 100
AS
ml, utilizando pipetas de 1 mililitro (1/100), obteniendo concentraciones de
IC
1/100; 1/2; 1/4; 1/8; 1/16; 1/32; 1/64 y 1/128 (Anexo 15), las que fueron
G
agregadas mediante goteo estático a telas de algodón blanco estéril de dos
LO
centímetros cuadrados colocadas sobre láminas excavadas de porcelana
O
marcadas según su concentración, se dejó secar en cabina de flujo laminar
BI
para su posterior análisis (Tabla N° 1).
AS
Tabla N°1: Diluciones elaboradas para la preparación manchas de sangre y evaluación
CI
del comportamiento de los reactivos frente a cada concentración de sangre.
EN
N° Diluciones de Sangre Volumen de dilución (ml) Volumen de agua

muestra destilada (ml)
CI
1 1/100 1 ml de sangre concentrada 99 ml

DE
1 1/2 50 ml de dilución 1/100 50 ml

CA

TE

IO

BL

BI
1 1/128 50 ml de dilución 1/64 50 ml
2.4.2. Reactivos
Blue Star Forensic: Dos tabletas de blue star forensic (uno de color beige y
AS
un comprimido blanco) fueron sacados de sus bolsas selladas y se
IC
añadieron a 175 ml de agua destilada en una botella de spray, la solución se
G
agitó suavemente por balanceo de la botella durante aproximadamente 5
LO
minutos hasta que se observó la disolución (Anexo 16).
O
BI
Luminol: Diez gramos de carbonato de sodio y 0,2 g de luminol
AS
premezclado con 180 ml de agua destilada fueron agregados a 180 ml de
CI
peróxido de hidrógeno al 3%. Después de mezclar la solución se colocó en
EN
una botella de spray para su posterior uso (Anexo 17).

CI
2.5. Tratamiento de muestras

DE
Una vez colocadas las manchas de diferente origen en los sustratos y asignadas
CA
con un código numérico en forma aleatoria (Anexo 18 y 19) mantenidos ocultos
hasta el final de la investigación (para evitar sesgo en los datos), se dejó secar a
TE
temperatura ambiente y analizó en oscuridad aplicando los reactivos (blue star

IO
forensic y luminol) en presencia de los controles (control positivo, muestra de

BL
sangre humana conocida y control negativo, agua destilada) para verificar su

BI
efectividad determinando la presencia o ausencia de la quimioluminiscencia
(Anexo 20), dando un valor positivo para las muestras que al agregar el reactivo
14
emitían una luz azul brillante en la oscuridad inmediatamente y hasta por un
minuto después de agregado el reactivo, mientras que negativo para las muestras
que al agregar el reactivo presentaban ausencia de la luz azul brillante, hasta un
AS
minuto después de agregar el reactivo (Vidotto y Queiroz, 2011).
IC
2.6. Análisis estadístico
G
Para la interpretación de los resultados cualitativos obtenidos, siguiendo la
LO
metodología de Cueva y Alejo (2010), se emplearon los análisis estadísticos de
O
sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo, valor predictivo negativo,
BI
índice de concordancia, índice de kappa y límite de detección de cada técnica
AS
expresados en fórmulas matemáticas, para conocer el valor numérico de sus
CI
atributos empleando una tabla de contingencia tabulados como:
EN
 Verdaderos positivos (a): muestras con sangre que arrojan un resultado
positivo.
CI
 Falsos positivos (b): muestras con sangre que arrojan un resultado negativo.
DE
 Falsos negativos (c): muestras sin sangre que arrojan un resultado positivo.
CA
 Verdaderos negativos (d): muestras sin sangre que arrojan un resultado
negativo.
TE
IO
BL
BI
15
Tabla 4: Tabla de contingencia para resultados positivos y negativo de acuerdo a cada

muestra.
Muestras
AS
Quimioluminiscencia Con sangre No sangre Totales
(humano y animales) (vegetales, fluidos y
IC
productos químicos)
G
Positiva Verdaderos positivos Falsos positivos Positivos
LO
(a) (b) a+c
Negativa Falsos negativos Verdaderos negativos Negativo
O
(c) (d) b+d
BI
AS
CI
Sensibilidad: Proporción de los individuos clasificados como positivos
EN
identificándose correctamente por la prueba en estudio.
verdaderos positivos (a)

CI
S=
total de casos positivos (a + c)
DE
Especificidad: Proporción de los individuos clasificados como negativos

CA
identificándose correctamente por la prueba en estudio.

TE
verdaderos negativos (d)

E =
total de casos negativos (d + b)
IO
BL
Valor Predictivo Positivo: Representa la probabilidad de que alguien con un

BI
resultado positivo en la prueba en estudio, tenga la característica de interés.
16
verdaderos positivos (a)

VPP =
verdaderos positivos + falsos positivos (a + b)
AS
Valor Predictivo Negativo: Representa la probabilidad de que alguien con un
IC
resultado negativo en la prueba en estudio no tenga la característica de interés.
G
verdaderos negativos (d)
VPN =
LO
verdaderos negativos + falsos negativos (d + c)
O
BI
Índice de concordancia (PC): Procedimiento para determinar la concordancia
AS
entre observadores o intraobservador, consiste en comparar las opiniones, juicios
o resultados emitidos u obtenidos por dos personas diferentes o por la misma

CI
persona en dos ocasiones diferentes, donde:
EN
CI
A + D
PC =
A+B+C+D
DE
CA
 A: Resultado de la suma de verdaderos positivos para todos los analistas que
participan en la investigación.
TE
 B: Resultado de la suma de los falsos positivos para todos los analistas que
IO
BL
 C: Resultado de la suma de los falsos negativos para todos los analistas que
BI
17
 D: Resultado de la suma de los verdaderos negativos para todos los analistas
que participan en la investigación.
AS
Índice de Kappa: Medida estadística que ajusta el afecto del azar (CA) en la
IC
proporción de la concordancia observada (CO) para elementos cualitativos,
G
mejora la estimación del porcentaje de concordancia ya que descuenta la
LO
proporción de la misma que puede ocurrir por azar, donde:
O
BI
(𝑅 × 𝑇) + (𝑆 × 𝑈) a+d
CA = CO =
(𝑉 × V) V
AS
CI
EN
CO − CA
k=
1 − CA
CI
DE
CA
 CA: Medida estadística que ajusta el afecto de la concordancia al azar.
 CO: Medida estadística que ajusta el afecto de la concordancia observada.

TE
 R: Sumatoria de verdaderos positivos con falsos negativos de todos los analistas

IO

BL
 S: Sumatoria de falsos positivos con verdaderos negativos de todos los analistas

BI
18
 T: Sumatoria de verdaderos positivos con falsos positivos de todos los analistas
 U: Sumatoria de falsos negativos con verdaderos negativos de todos los analistas
AS
IC
 V: Sumatoria de verdaderos positivos, falsos positivos, falsos negativos y
G
verdaderos negativos de todos los analistas que participan en la investigación.
LO
O
BI
Tabla N° 5: Escala de interpretación de los valores del índice de concordancia y el
índice de Kappa de acuerdo a Cueva y Alejo (2010).
Valor de Kappa AS
Fuerza de Concordancia
CI
<0 Pobre
EN
0 – 0,20 Leve
0,21 – 0,40 Baja
CI
0,41 – 0,60 Moderada

0,61 – 0,80 Buena
DE
0,81 – 1,0 Casi perfecta

CA
TE
IO
BL
BI
19
III. RESULTADOS
Los resultados se presentan en cuatro tablas, numeradas de 6 a 9; de las cuales la N° 6,
AS
refiere las calificaciones de positivo y negativo con los reactivos blue star forensic y
luminol en cada uno de los soportes, la N° 7 refiere el número de resultados de dos
IC
observadores anónimos con los reactivos blue star forensic y luminol, la N° 8 los
G
resultados cualitativos utilizando el reactivo luminol y la N°9, los valores del análisis
LO
estadístico para sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo, valor predictivo
O
negativo, índice de concordancia e índice de kappa entre ambas observaciones.
BI
AS
Tabla N° 6: Resultados cualitativo tras la evaluación de las muestras tratadas (cuatro por
ensayo) con los reactivos Blue Star Forensic y Luminol en condiciones de oscuridad.
CI
SustanciaMancha de: Nº Blue Star Luminol Soporte
EN
muestras Forensic
OBSERVACIONES O1 O2 O1 O2
Agua Agua destilada -------- negativo negativo negativo negativo Tela
CI
destilada
Sangre Sangre humana -------- Positivo Positivo Positivo Positivo Tela
humana
DE
Alfombra
Piso no pulido
Sangre de ave Positivo Positivo Positivo Positivo Tela
CA
4 Tierra
Alfombra
TE
Piso no pulido
Sangre de ovino 4 Positivo Positivo Positivo Positivo Tela
Tierra
IO
Alfombra
BL
Piso no pulido
Sangre
Sangre de vacuno Positivo Positivo Positivo Positivo Tela
4 Tierra
BI
Alfombra
Sangre de porcino Piso no pulido
4 Positivo Positivo Positivo Positivo Tela
Tierra
20
Continuación…
Sangre expuesta a 4 Positivo Positivo Positivo Positivo

Alfombra
30ºC por (1) una hora. Tela
Sangre expuesta a Positivo Positivo Positivo Positivo Alfombra
AS
4
50ºC por 1 hora. Tela
Sangre expuesta a 4 Positivo Positivo Positivo Positivo Alfombra
IC
30ºC por 3 horas. Tela
Sangre expuesta a 4 Positivo Positivo Positivo Positivo Alfombra
G
Tto de 50ºC por 3 horas. Tela
manchas Sangre lavada 5 veces
LO
4 Positivo Positivo Positivo Positivo Alfombra
con agua a chorro. Tela
Sangre lavada 10 veces 4 Positivo Positivo Positivo Positivo Alfombra
O
BI
Sangre lavada 15 veces 4 Positivo Positivo Positivo Positivo Alfombra
AS
Sangre + 1 mililitro 4 Negativo Negativo Positivo Positivo Alfombra
de hipoclorito de sodio Positivo Positivo Positivo Positivo Tela
Sangre + 1 mililitro 4 Positivo Positivo Negativo Negativo Alfombra
CI
de ácido acético. Positivo Positivo Positivo Positivo Tela
Sangre + 1 mililitro de Positivo Positivo Positivo Positivo Alfombra
EN
4
peróxido de hidrogeno Positivo Positivo Positivo Positivo Tela
Sangre + 1 gramo de 4 Positivo Positivo Positivo Positivo Alfombra
CI
detergente en polvo Positivo Positivo Positivo Positivo Tela

Sangre + 1 gramo Positivo Positivo Positivo Positivo Alfombra
4 Positivo Positivo Positivo Positivo Tela
de hidróxido de sodio
DE
Dilución de sangre Tela

al 1/100 4 Positivo Positivo Positivo Positivo
CA

TE

IO

Dilución al 1/16 4 Positivo Positivo Negativo Negativo
BL
al 1/32 4 Positivo Positivo Negativo Negativo

BI

21
Continuación…
Alfombra
Beta vulgaris 4 Piso no pulido
“Beterraga” Negativo Negativo Negativo Negativo Tela
AS
Tierra
Alfombra
IC
Daucus carota Piso no pulido
“Zanahoria” 4 Negativo Negativo Negativo Negativo
Tela
G
Tierra
LO
Alfombra
Raphanus sativus Piso no pulido
4
“Rabanito” Negativo Negativo Negativo Negativo
O
Tela
BI
Tierra
Alfombra
Fragaria vesca Piso no pulido
4
AS
“Fresa” Negativo Negativo Negativo Negativo Tela
Tierra
CI
Alfombra
Solanum lycopersicum Piso no pulido
EN
4
Producto “Tomate” Negativo Negativo Negativo Negativo Tela
vegetal
Tierra
CI
Alfombra
Vitis vinífera Piso no pulido
“Uva” Negativo Negativo Negativo Negativo
DE
4 Tela
Tierra
CA
Alfombra
4 Piso no pulido
TE
Orina Negativo Negativo Negativo Negativo Tela

Tierra
IO
Alfombra
4 Piso no pulido
Saliva Negativo Negativo Negativo Negativo
BL
Tela
Fluido Tierra
biológico
BI
Alfombra
Piso no pulido
4
Semen Negativo Negativo Negativo Negativo Tela
Tierra
22
Continuación…
Alfombra
Lugol Negativo Negativo Negativo Negativo Piso no pulido
AS
4 Tela
Tierra
Alfombra
IC
Piso no pulido
Producto Café Negativo Negativo Negativo Negativo Tela
G
4
Químico Tierra
LO
Alfombra
Piso no pulido
Gaseosa “Coca Cola” Negativo Negativo Negativo Negativo Tela
O
4
Tierra
BI
Negativo Negativo Positivo Positivo Alfombra
Piso no pulido
AS
Vino tinto
4 Negativo Negativo Negativo Negativo Tela
Tierra
CI
EN
Tabla N° 7: Número de casos con resultado cualitativo de verdaderos positivos (a),

CI
falsos positivos (b), falsos negativos (c), y verdaderos negativos (d), obtenidos por dos
DE
observadores anónimos para las muestras tratadas con Blue Star Forensic.
Muestras
CA
Observador 1 Observador 2
Quimiolu- Con sangre No sangre Con sangre No sangre

TE
miniscencia (humana y animal) (vegetales, fluidos y (humana y animal) (vegetales, fluidos y

reactivos químicos) reactivos químicos)
IO
Positiva (a) (b) (a) (b)

BL
47 1 47 1
Negativa (c) (d) (c) (d)
BI
0 52 0 52
23
Tabla N° 8: Resultados cualitativo de verdaderos positivos (a), falsos positivos (b),

falsos negativos (c), y verdaderos negativos (d), obtenidos por los analistas para las
muestras rociadas con Luminol.
AS
Muestras
Observador 1 Observador 2
IC
Quimiolu- Con sangre No sangre Con sangre No sangre
G
miniscencia (humana y animal) (vegetales, fluidos y (humana y animal) (vegetales, fluidos y
LO
reactivos químicos) reactivos químicos)
Positiva (a) (b) (a) (b)
O
43 5 43 5
BI
Negativa (c) (d) (c) (d)
1 51 1 51
AS
CI
Tabla N°9:Análisis estadísticos de Sensibilidad, Especificidad, Valor Predictivo
EN
Positivo, Valor Predictivo Negativo, Índice de concordancia, Concordancia al Azar,
Concordancia Observada e Índice de Kappa para resultados cualitativos obtenidos por

CI
los analistas de cada muestras rociadas con blue star forensic y luminol.
DE
Reactivos Blue Star Forensic Luminol Concordancia

CA
Análisis Estadístico Observador Observador Observador Observador Entre

1 2 1 2 observadores
TE
Sensibilidad 1,0000 1,0000 0,9773 0,9773 ------

Especificidad 0,9811 0,9811 0,9107 0,9107 ------
IO
Valor Predictivo Positivo 0,9792 0,9792 0,8958 0,8958 ------

BL
Valor Predictivo Negativo 1,0000 1,0000 0,9808 0,9808 ------

Índice de concordancia 0,9900 0,9400 Casi perfecta
BI
entre los dos observadores

Concordancia al Azar 0,5018 Moderada
Índice de Kappa 0,9297 Casi perfecta
24
IV. DISCUSIÓN
En la tabla 6, se presentan los resultados de las observaciones en condición de
AS
positivos o negativos en los soportes o sustratos utilizados, pudiéndose definir con
IC
seguridad que las observaciones positivas solo se producen en manchas que han sido
G
causadas por sangre humana o de animales (vacuno, porcino, caprino y ave), cuyas
LO
razones científicas se pueden fundamentar por la presencia de peroxidasas que
O
reaccionan con el radical amino del reactivo luminol y con el radical carboxilo de las
BI
moléculas proteicas que se encuentran en la membrana celular, estimuladas por átomos
AS
de hierro presente en la molécula de hemoglobina de los glóbulos rojos, o de átomos de
CI
cobre o cobalto, como lo sostiene Albrecht (1928) en sus estudios sobre el luminol, por
EN
lo tanto se debe sostener que los extractos vegetales (“beterraga”, “zanahoria”,
“rabanito”, “fresa”, “tomate” y “uva”), fluidos biológicos (semen, saliva y orina) y

CI
productos químicos (lugol, café, gaseosa y vino), pueden presentar peroxidasas, pero no
DE
los radicales amino y carboxilo ni la presencia de hierro, cobre ni cobalto que son los
elementos químicos que estimulan la reacción de blue star forensic y luminol con las
CA
peroxidasas.
TE
IO
En la experiencia, utilizamos manchas de sangre de origen humano y animal

BL
(vacuno, porcino, ovino y ave) por contener en su estructura molecular hierro en el

BI
grupo Hem el cual reacciona directamente con los reactivos luminol (C8H7O2N3) y blue
star forensic (mezcla de luminol + agente oxidante + agente alcalino) en un medio
alcalino, en el que se disuelve y carga negativamente la molécula, con el oxidante
25
peróxido de hidrogeno, el cual libera y reemplaza dos nitrógenos, llevando a la molécula
al estado de excitación y finalmente un catalizador, que usualmente es una sal o metal de
transición como lo indica Cuellar (1998) en su estudio sobre Hematología.
AS
IC
Esta reacción se fundamenta, porque el hierro (Fe2+) de la hemoglobina es un
G
poderoso catalizador, que permite una excelente optimización de la oxidación con los
LO
reactivos blue star forensic y luminol (Álvarez, y col., 2004) mediante la secuencia de
O
reacciones detallas por estudios de sistemas redox, concordando con Cedrón (2011) en
BI
su estudio del luminol como molécula destacada y Montserrat, y col (2014), en sus
AS
estudios de implementación de métodos de luminol y o-toluidina para detección de
CI
sangre y comparación de su utilidad explicada y fundamentada del siguiente modo:
EN
1. La base atrapa los hidrógenos unidos a los átomos de nitrógeno.

CI
2. La reacción del di anión resultante con oxígeno molecular permite el intercambio

DE
de las amidas por los ésteres correspondientes, mediante una adición cíclica
CA
formándose nitrógeno molecular.
3. El peróxido formado, se rompe dando lugar al anión 3-aminoftalato.

TE
4. La ruptura del peróxido de hidrógeno da lugar a la molécula en estado excitado.

IO
5. La molécula excitada en estado basal, libera energía en forma de luz, de una

BL
coloración azul brillante.

BI
6. La reacción mostrada es lenta, pero se acelera en presencia de hierro (Fe) presente
en la hemoglobina originando que el proceso sea más rápido y produciendo la luz
de manera casi inmediata al contacto con los reactivos.
26
Asimismo, en las reacciones de sangre más un mililitro de hipoclorito de sodio,
resulta un falso negativo, debido a que el anión hipoclorito (ClO) tiene capacidad Redox,
por lo cual le confiere una marcada actividad perjudicial frente a todos los compuestos
AS
orgánicos incluida la hemoglobina, concordante con los reportes de Cedrón (2011) en
IC
sus estudios del luminol como molécula destacada, similar a la reacción de sangre más
G
un mililitro de ácido acético, que resulta un falso negativo con el luminol, debido a que
LO
los radicales hidroxilos quedan libres al producirse la reacción, lo cual impide la
O
producción de luminiscencia , concordante con Doménech y col, (2004), quienes
BI
estudiaron el potencial redox de agentes oxidantes.
AS
CI
En el mismo contexto, la reacción de sangre diluida a concentraciones 1/16, 1/32,
EN
1/64 y 1/128, reportan falsos negativos con la técnica de luminol, lo que significa la
diferencia de sensibilidad y especificidad de los reactivos; por lo tanto, se deduce que

CI
blue star forensic, tiene mayor límite de detección, ya que tiene respuesta positiva a
DE
1/128 ml de concentración, a diferencia de luminol, que solo presenta respuesta positiva

CA
a 1/8 ml de concentración, debido a la estructura química del blue star forensic (fórmula
patentada y no disponible para su publicación) como lo sostiene Dilbeck (2006) en sus

TE
estudios del uso de blue star en casos criminales y Webb (2006) en su estudio de
IO
comparación entre luminol y blue star forensic. Al analizar muestras de extractos

BL
vegetales por contener pigmentos con tendencia al rojo semejante a la sangre, como es el
BI
caso de las antocianinas y los carotenoides, en sus variaciones anaranjado (caroteno),
rojo (licopeno) y amarillo (luteína), y por presentar en la composición química de sus
células peroxidasas y catalasas, entre la que destaca la catalasa, que es una enzima que
27
se encuentra en las células animales y protistas, la cual utiliza como cofactor al grupo
Hem y la peroxidasa, una enzima que presenta como grupo prostético al grupo Hem
como lo refiere SISIB (2015) al determinar la actividad de la peroxidasa y su
AS
regeneración, quien sostiene que los pigmentos vegetales contenidos en los extractos
IC
(“beterraga”, “zanahoria”, “rabanito”, “fresa”, “tomate” y “uva”) inhibían la reacción de
G
quimioluminiscencia por no presentar radicales amino y carboxilo en las moléculas
LO
proteicas de las membranas celulares, como se indica en el anexo N° 4, donde aparecen
O
solo radicales oxidrilos y metilos, al igual que en los fluidos biológicos de origen
BI
humano (orina, saliva y semen) que también poseen peroxidasas y catalasas,
AS
determinando, la baja capacidad reactiva de estas enzimas, ya que ni con la técnica de
CI
blue star forensic ni luminol se obtuvo emisión de luz azul brillante tal como lo indican
EN
Gutiérrez y Carmona (2004) en sus estudios de validación de los métodos de Trevenon-
Roland y Verde de Leucomalaquita como pruebas presuntivas en la investigación en

CI
manchas de sangre y fluidos.

DE
CA
Sin embargo, la reacción positiva del vino tinto con Luminol, teniendo como
sustrato alfombra, puede deberse a la presencia de los elementos químicos contenidos en

TE
el vino, por algún proceso de degradación por acción bacteriana y por la presencia de
IO
alcoholes, ácido láctico, ácido Succínico y ácido Acético; además de sales como
BL
fosfatos, cloruros, yodo, bromo y flúor, como lo sostiene Cooper (2001) en sus estudios
BI
sobre el efecto del Blue Star Forensic en la tipificación de manchas diversas para
identificación de ADN, a lo que le llamó falso positivo.
28
Dada esta fundamentación teórica, los resultados tienen coherencia con los
valores en la tabla N° 7 y 8, en las que consolidan los resultados con los valores
verdaderos positivos elevados para blue star forensic (N° 7) y luminol (N° 8) durante la
AS
experiencia desarrollada con la participación de dos observadores con experiencia en
IC
procesos criminalísticos, con la finalidad de contrastar los reportes de observación, lo
G
que nos permite afirmar con seguridad que los resultados tienen confiabilidad por los
LO
resultado obtenidos en la tabla N° 9, en la cual la sensibilidad, especificidad y valor
O
predictivo, tienden a la perfección (valor 1) como lo refiere Castelló y Feucht, (2002) en
BI
sus estudios de revelado de manchas latentes, especificidad del Luminol y evaluación de
AS
su efecto sobre el estudio del ADN. Este mismo criterio se tiene en cuenta para la
CI
concordancia, siguiendo la escala del índice de kappa, cuyos valores se acercan a la
EN
unidad (1), concordante con Fernanda y Sorieth, (2009) en su estudio de validación de
los métodos Bluestar Forensic y Trevenon Rolamidón – Piramidón como pruebas en la

CI
investigación de sangre.
DE
CA
Por lo tanto, con la validación o comprobación y certificación con evidencias
convenientemente documentadas de las técnicas blue star forensic y luminol,

TE
demostramos un alto grado de confianza, seguridad en el método analítico y en la

IO
calidad de los resultados ya que son altamente sensibles y presentan una especificidad
BL
mayor al 90%, lo que las hace muy útiles en la detección de manchas de sangre de
BI
interés criminalístico permitiendo la disminución del número de fallas y repeticiones,
como lo demostraron Castelló, y col., (2004) y Webb (2006), evaluando y comparando
la efectividad del luminol y blue star forensic.
29
V. CONCLUSIONES
AS
Las técnicas de blue star forensic y luminol tienen alta validez en la detección de
IC
manchas de sangre que pueden ser usadas en procesos criminalísticos.
G
Los criterios de sensibilidad y especificidad tienen valor de concordancia casi perfecta
LO
tomando como referencia la escala del índice de Kappa.
O
BI
Las técnicas de blue star forensic y luminol tienen reacción positiva solo en células
sanguíneas y es indiferente a los extractos vegetales y otros fluidos biológicos.
AS
El sustrato o soporte no tiene influencia en la reacción de la sangre encontrada en las
CI
EN
manchas con los reactivos de blue star forensic y luminol.
La técnica de blue star Forensic tiene un límite de detección de sangre mayor que la
CI
técnica de luminol.
DE
CA
TE
IO
BL
BI
30
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Specht, W. 1937. Die Chemiluminescenz des Hämins, ein Hilfsmittelzur Auffindung
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IC
G
LO
O
BI
AS
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI
36
AS
IC
G
LO
O
BI
AS
ANEXOS
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI
37
AS
IC
G
LO
O
BI
1. AS
Estructura del grupo prostético Hem (Fe2+ con seis ligaciones, en la parte inferior
CI
con la hemoglobina, en el centro con cuatro átomos de nitrógeno y la parte
EN
superior libre para un ligante exógeno, que en general es el oxígeno

Hemoglobina/oxigeno (Barni y col., 2007).
CI
DE
CA
TE
IO
BL
2. Fluidos biológicos de origen humano (orina, saliva y semen), y recolectados en

frascos de vidrio etiquetados y esterilizados, listos para ser procesados en
BI
condición de mancha.
38
Fecha: ____, ____, ____ Hora: _________
Nombre completo del donante: ________________________________________________
AS
Las muestras donadas se utilizarán según fines convenientes del investigador en la realización
de la tesis denominada “Validación de las técnicas Blue Star Forensic y Luminol para
IC
detección de sangre en manchas de interés criminalístico en el laboratorio, Trujillo, 2015”.
G
Por tal motivo:
LO
¿Desea usted participar en la investigación como donante deorina, saliva y semen?
O
______________
BI
Donante Muestra tomada por
___________________________
AS _______________________________
CI
Firma Firma
EN
3. Formato de información previa hacia los voluntarios para la toma de muestra de

fluidos biológicos.
CI
___________________________ _______________________________
Documento de identidad Documento de identidad
DE
CA
TE
IO
BL
BI
4. Extractos vegetales depositados en frascos de vidrio estériles listos para ser

procesados en condición de mancha.
39
Extracto Pigmento Composición química

vegetal vegetal
Beta vulgaris
AS
“Beterraga” Antocianina
IC
G
Daucus carota Beta - Caroteno
“Zanahoria”
LO
O
BI
Raphanus sativus
“Rabanito” Rabinitina
Antocianina
AS
CI
Fragaria vesca
“Fresa”
EN
CI
Solanum lycopersicum
DE
“Tomate” Licopeno
CA
Antocianina
TE
Vitis vinífera
“Uva”
IO
BL
5. Estructura molecular de la composición química de los pigmentos presentes en

cada producto vegetal.
BI
40
AS
IC
G
LO
O
BI
6. Productos químicos seleccionados según su condición física y sus fechas de
vencimiento listos para ser procesados en condición de mancha.
AS
CI
A B C
EN
D
CI
DE
CA
7. Manchas sometidas a condiciones de temperatura, listas para ser analizadas con los
TE
reactivos de quimioluminiscencia; siendo A: 30 °C por una hora, B: 30 °C por dos

horas, C: 50 °C por una hora y D: 30 °C por dos horas.
IO
BL
BI
41
A B C
AS
IC
G
LO
8. Manchas sometidas a condiciones de lavado, listas para ser analizadas con los
O
reactivos de quimioluminiscencia; siendo A: 5 lavadas, B: 10 lavadas y C: 15
BI
lavadas.
AS
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
9 - 14.- Manchas sometidas a sustancias químicas (reactivos) que pudieran

BI
interferir en la reacción de quimioluminiscencia, listas para ser analizadas con

los reactivos de quimioluminiscencia; donde 10: NaOH, 11: C2H4O2, 12: NaClO,
13: H2O2 Y 14: Detergente.
42
AS
IC
G
LO
15.- Diluciones de sangre con agua destilada en concentraciones de 1/100; 1/2; 1/4; 1/8;
O
1/16; 1/32; 1/64 y 1/128, listas para ser procesadas en condición de mancha.
BI
AS
CI
EN
CI
DE
16, 17.- Preparación del reactivo Blue Star Forensic utilizando dos tabletas del reactivo
CA
añadidas en 175 ml de agua destilada para su posterior aplicación sobre las muestras.
TE
IO
BL
BI
43
18.- Codificación numérica en forma aleatoria de las manchas de diferente origen en los
sustratos para ser aplicadas con el reactivo Blue Star Forensic.
Orden Código de Productos vegetales Soporte o sustrato
AS
la muestra
1 3 Alfombra
Beta vulgaris “Beterraga”
IC
2 80 Piso no pulido
3 6 Tela
G
4 51 Tierra
5 2 Alfombra
LO
6 58 Daucus carota “Zanahoria” Piso no pulido
7 92 Tela
O
8 57 Tierra
9 7 Alfombra
BI
10 69 Raphanus sativus “Rabanito” Piso no pulido
11 14 Tela
AS
12 25 Tierra
13 77 Alfombra
14 97 Fragaria vesca “Fresa” Piso no pulido
CI
15 78 Tela
16 96 Tierra
EN
17 11 Alfombra
18 66 Solanum lycopersicum “Tomate” Piso no pulido
CI
19 67 Tela
20 88 Tierra
21 4 Alfombra
DE
22 64 Vitis vinífera “Uva” Piso no pulido

23 27 Tela
24 20 Tierra
CA
Orden Código Fluidos de origen humano Soporte o sustrato

25 15 Alfombra
Orina
TE
26 82 Piso no pulido
27 86 Tela
28 55 Tierra
IO
29 17 Alfombra
30 91 Saliva Piso no pulido
BL
31 32 Tela
32 62 Tierra
BI
33 9 Alfombra
34 95 Semen Piso no pulido
35 30 Tela
36 61 Tierra
44
Continuación…
Orden Código de Fluidos de origen animal Soporte o sustrato

la muestra
37 81 Alfombra
AS
38 65 Sangre de ave Piso no pulido
39 26 Tela
IC
40 100 Tierra
41 5 Alfombra
G
42 83 Sangre de ovino Piso no pulido
43 90 Tela
LO
44 56 Tierra
45 99 Alfombra
O
46 60 Sangre de vacuno Piso no pulido
47 89 Tela
BI
48 10 Tierra
49 52 Alfombra
AS
50 68 Sangre de porcino Piso no pulido
51 63 Tela
CI
52 87 Tierra
Orden Código de Productos químicos Soporte o sustrato
EN
la muestra
53 23 Alfombra
54 70 Lugol Piso no pulido
CI
55 45 Tela
56 21 Tierra
DE
57 42 Alfombra
58 72 Café Piso no pulido
59 54 Tela
60 53 Tierra
CA
61 34 Alfombra
62 73 Gaseosa “Coca Cola” Piso no pulido
TE
63 39 Tela
64 46 Tierra
65 35 Alfombra
IO
66 84 Vino tinto Piso no pulido

67 22 Tela
BL
68 75 Tierra
BI
45
Continuación…
Orden Código de Tratamiento de muestras Soporte o sustrato

la muestra
69 13 Sangre expuesta a30ºC por (1) Alfombra
AS
70 37 una hora Tela
71 79 Alfombra
IC
72 93 Sangre expuesta a50ºC por 1 hora Tela
73 41 Alfombra
G
74 74 Sangre expuesta a30ºC por 3 horas Tela
75 1 Alfombra
LO
77 48 Alfombra
O
78 8 Sangre lavada 5 veces con agua Tela
79 98 Alfombra
BI
81 28 Alfombra
AS
83 36 Sangre + 1 mililitro de hipoclorito Alfombra
de sodio
CI
84 94 Tela
85 24 Alfombra
Sangre + 1 mililitro de ácido acético Tela
EN
86 40
87 19 Sangre + 1 mililitro de peróxido de Alfombra
88 59 hidrogeno Tela
CI
89 76 Sangre + 1 gramo de detergente Alfombra

90 71 en polvo Tela
DE
91 85 Sangre + 1 gramo de hidróxido de Alfombra

92 44 sodio (0,1 N) Tela
Orden Código de Diluciones de sangre Soporte o sustrato
la muestra
CA
93 29 Dilución de sangre al 1/100 Tela

TE

IO

BL

BI
46
19.- Codificación numérica en forma aleatoria de las manchas de diferente origen en los
sustratos para ser aplicadas con el reactivo Luminol.
Orden Código de Productos vegetales Soporte o sustrato
AS
la muestra
1 4 Alfombra
Beta vulgaris “Beterraga”
IC
2 54 Piso no pulido
3 6 Tela
G
4 35 Tierra
5 98 Alfombra
LO
6 50 Daucus carota “Zanahoria” Piso no pulido
7 9 Tela
O
8 43 Tierra
9 97 Alfombra
BI
10 47 Raphanus sativus “Rabanito” Piso no pulido
11 21 Tela
AS
12 38 Tierra
13 80 Alfombra
14 83 Fragaria vesca “Fresa” Piso no pulido
CI
15 75 Tela
16 93 Tierra
EN
17 96 Alfombra
18 45 Solanum lycopersicum “Tomate” Piso no pulido
CI
19 22 Tela
20 39 Tierra
21 92 Alfombra
DE
22 51 Vitis vinífera “Uva” Piso no pulido

23 26 Tela
24 33 Tierra
CA
Orden Código Fluidos de origen humano Soporte o sustrato

25 78 Alfombra
Orina
TE
26 76 Piso no pulido
27 82 Tela
28 91 Tierra
IO
29 16 Alfombra
30 81 Saliva Piso no pulido
BL
31 25 Tela
32 32 Tierra
BI
33 14 Alfombra
34 84 Semen Piso no pulido
35 23 Tela
36 2 Tierra
47
Continuación…
Orden Código de Fluidos de origen animal Soporte o sustrato

la muestra
37 90 Alfombra
AS
38 46 Sangre de ave Piso no pulido
39 27 Tela
IC
40 34 Tierra
41 94 Alfombra
G
42 86 Sangre de ovino Piso no pulido
43 5 Tela
LO
44 37 Tierra
45 8 Alfombra
O
46 44 Sangre de vacuno Piso no pulido
47 30 Tela
BI
48 36 Tierra
49 89 Alfombra
AS
50 53 Sangre de porcino Piso no pulido
51 31 Tela
CI
52 41 Tierra
Orden Código de Productos químicos Soporte o sustrato
EN
la muestra
53 29 Alfombra
54 66 Lugol Piso no pulido
CI
55 74 Tela
56 72 Tierra
DE
57 48 Alfombra
58 68 Café Piso no pulido
59 57 Tela
60 58 Tierra
CA
61 79 Alfombra
62 77 Gaseosa “Coca Cola” Piso no pulido
TE
63 69 Tela
64 65 Tierra
65 64 Alfombra
IO
66 73 Vino tinto Piso no pulido

67 59 Tela
BL
68 70 Tierra
BI
48
Continuación…
Orden Código de Tratamiento de muestras Soporte o sustrato

la muestra
69 62 Sangre expuesta a30ºC por (1) Alfombra
AS
70 95 una hora Tela
71 20 Alfombra
IC
72 3 Sangre expuesta a50ºC por 1 hora Tela
73 42 Alfombra
G
75 15 Alfombra
LO
77 10 Alfombra
O
79 49 Alfombra
BI
81 12 Alfombra
AS
83 13 Sangre + 1 mililitro de hipoclorito Alfombra
de sodio
CI
84 28 Tela
85 71 Alfombra
Sangre + 1 mililitro de ácido acético Tela
EN
86 24
87 17 Sangre + 1 mililitro de peróxido de Alfombra
88 85 hidrogeno Tela
CI
89 18 Sangre + 1 gramo de detergente Alfombra

90 7 en polvo Tela
DE
91 19 Sangre + 1 gramo de hidróxido de Alfombra

92 63 sodio (0,1 N) Tela
Orden Código de Diluciones de sangre Soporte o sustrato
la muestra
CA

TE

IO

BL

BI
49
AS
IC
G
LO
O
BI
AS
Codificación de muestras aleatorizadas
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
20.- Análisis de muestra de sangre humana conocida como control positivo, y agua
destilada como control negativo para verificar la efectividad de las técnicas antes de ser
BI
agregadas a las muestras.
50
AS
IC
G
LO
O
BI
21.- Soporte de piso no pulido conteniendo manchas de sangre, extractos vegetales,
fluidos biológicos y productos químicos, listos para ser analizados con los reactivos de
AS
quimioluminiscencia.
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
22.- Soporte de tierra conteniendo manchas de sangre, extractos vegetales, fluidos

BI
biológicos y productos químicos, listos para ser analizados con los reactivos de
51
AS
IC
G
LO
O
BI
AS
23.- Soporte de alfombra conteniendo manchas de sangre, extractos vegetales, fluidos
CI
biológicos y productos químicos, listos para ser analizados con los reactivos de
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI
24.- Soporte de tela de algodón conteniendo manchas de sangre, extractos vegetales,

fluidos biológicos y productos químicos, listos para ser analizados con los reactivos de
52
AS
IC
G
LO
O
BI
AS
25.- Aplicación de los reactivos Blue Star Forensic y Luminol sobre muestras de
CI
sangre, extractos vegetales, fluidos biológicos y productos químicos en sustrato de piso
no pulido, con la presencia de los dos observadores.
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI
sangre, extractos vegetales, fluidos biológicos y productos químicos en sustrato de tierra,
con las medidas de seguridad adecuadas.
53
AS
IC
G
LO
O
BI
AS
sangre, extractos vegetales, fluidos biológicos y productos químicos en sustrato de tierra,
con las medidas de seguridad adecuadas.
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
28.- Resultados del análisis de muestra de sangre humana conocida como control
BI
positivo, y agua destilada como control negativo para verificar la efectividad de las
técnicas antes de ser agregadas a las muestras.
54
A B C
AS
IC
G
LO
28.- Resultados de luminiscencia negativa para las muestras de fluidos biológicos
O
después de haber agregados los reactivos Blue Star forensic y Luminol, en donde A:
BI
muestra de orina, B: muestra de semen y C: muestra de saliva.
AS
CI
EN
A B C D
CI
DE
F
CA
E
TE
IO
BL
29.- Resultados de luminiscencia negativa para muestras de extractos vegetalestras

agregar Blue Star forensic y Luminol (A: muestra de Beterraga, B: muestra de
BI
zanahoria, C: muestra de rabanito, D: muestra de fresa, E: muestra de tomate y F:

muestra de uva.
55
AS
IC
G
LO
O
BI
AS
CI
EN
CI
DE
CA
TE
30.- Resultados de luminiscencia positiva tras la aplicación de reactivos Blue Star

Forensic sobre muestras de sangre de origen animal
IO
BL
BI
56
AS
IC
G
LO
O
BI
AS
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
31.- Resultados de luminiscencia positiva tras la aplicación de reactivos Luminol sobre

muestras de sangre de origen animal.
BI
57

Sarmiento Yengle, Valery RoxanaLUMINOL

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Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

Dr. ORLANDO GONZALES NIEVES

Dr. JOSÉ MOSTACERO LEÓN

DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Dr. FREDDY PELÁEZ PELÁEZ

DIRECTOR DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE CIENCIAS

Señores miembros de jurado:

interés criminalístico en el laboratorio, Trujillo, 2015”.

Trujillo, octubre del 2015.

Br. Valery Roxana Sarmiento Yengle

Dr. JOSÉ ANTONIO SALDAÑA JIMÉNEZ

asesoramiento, acogiendo las observaciones y sugerencias alcanzadas. Por lo tanto

Dr. JOSÉ ANTONIO SALDAÑA JIMÉNEZ

A mi madre Ysabel, por su amor, motivación

valores humanos para servir a la sociedad.

A mis hermanas Catherine y Patricia,

para superar las adversidades de la vida y

Libertad, quien pudo hacer posible la

Cabrera, quienes me asesoraron y

por estar siempre a mi lado

A mis amigos Albert, Elvia y

brindándome su apoyo y celebrando

AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO ii

quimioluminiscencia se desarrolló en condiciones de laboratorio, utilizando material

sensibilidad (1,000 y 0,9773), especificidad (0,9811 y 0,9107), Valor Predictivo Positivo

pueden ser usadas en procesos criminalísticos ya que los criterios de sensibilidad y

especificidad tienen valor de concordancia casi perfecta tomando como referencia la

en diferentes sustratos o soportes sin influencia en la reacción, no obstante, se determinó

PALABRAS CLAVES: quimioluminiscencia, validación, Blue Star Forensic y Luminol.

chemiluminescence developed under laboratory conditions, using biological material and

other biological fluids positions on different substrates or substrates without influence on

sensitive and specific than Luminol technique.

KEYWORDS: chemiluminescence, validation, and Blue Star Forensic Luminol.

Entre las investigaciones mencionadas en la actualidad están las

Los casos más frecuentes en la aplicación de la investigación forense son los

homicidios, conocidos como delito, que consiste en una acción u omisión,

mediante el cual se priva de la vida a otra persona, ya sea dolosa o culposamente,

causantes o victimarios se valen de cualquier tipo de sustancias químicas

(solventes orgánicos, inorgánicos o detergentes) para limpiar o borrar de manera

en estas investigaciones o “peritos” llegan a la escena del hecho a localizar e

identificar los indicios y evidencias que puedan encontrarse en dicha escena, es

posible que las pruebas más pertinentes e importantes no resulten evidentes ni

directamente perceptibles a simple vista, por lo que es necesario la inspección con

diferentes técnicas y procedimientos básicos para detectar pruebas materiales,

diversos (revelan huellas dactilares) o el uso de productos químicos como luminol

ambientales (temperatura, humedad y polvo) o por fines particulares del

victimario (Villarreal-Sotelo, y col., 2009).

En este sentido, cuando los peritos recogen las evidencias “supuestamente”

hematológicas en la escena, se adopta la decisión de llevar a cabo otros exámenes

en el laboratorio, mediante métodos de orientación, confirmación, especie,

individualidad (grupos sanguíneos y ADN) y otros como la antigüedad de las

muestras, el lugar de procedencia, forma y tamaño de la manchas (Villanueva,

que una elección inadecuada de la técnica o una interpretación errónea del

resultado, puede hacer perder el valor de un elemento de prueba que, finalmente

puede ser trascendental (Monteiro, 2010). Asimismo, estos métodos facilitan al

profesional forense la obtención de datos y resultados verdaderos, por ser fáciles

de usar, no requiriendo condiciones inalcanzables para aportar información

especificaciones de calidad, permitiendo hacer fundamentaciones acertadas y

apropiadas para brindar información acerca de la precisión y exactitud inherente

diferentes condiciones, las cuales permiten alcanzar resultados confiables, de alta

sensibilidad, alta especificidad y con altos parámetros de calidad que soporten la

más dura controversia jurídica en los estrados judiciales (Monteiro, 2010).

Dada la información bibliográfica que antecede, existen algunas

experiencias tales como la prueba de quimioluminiscencia descubierta