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Incluya, cuando
corresponda, el símbolo y ecuación que representa al concepto:
• Factor de separación
Define que tan selectiva es una columna para separar dos picos. La columna
puede ser selectiva a una separación, que se identifica por un valor alto de
este factor. El factor de selectividad α de una columna para dos especies A
y B se define como:
• Resolución
Se define como:
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Donde Rs es la resolución, tRA y tRB son los tiempos de retención de los
componentes A y B, y aA y aB son las anchuras de los picos del
cromatograma de los anteriores componentes.
Eficiencia
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Si H tiene un valor pequeño, la distancia entre platos es menor y por tanto la
eficiencia será mayor. Por el contrario, si H es grande la columna es poco
eficiente para separar ese componente ya que sus moléculas estarán muy
difundidas.
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• Tiempo de retención (tR)
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Tiempo requerido para que una especie no retenida alcance el detector. Es
el tiempo de migración de la especie no retenida; es el tiempo necesario para
que, por término medio una molécula de la fase móvil pase a través de la
columna.
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cadena octil y C-18 una octadecil). La más hidrofóbica es, en este caso, la
fase estacionaria, eluyendo los compuestos hidrofílicos más rápidamente que
los hidrofóbicos, que interaccionan con la fase estacionaria. También hay
empaquetamientos poliméricos alternativos a la sílice que ofrecen similares
características con mayor resistencia dinámica y más amplio rango de
estabilidad de pH. Existen dos variantes de la cromatografía en fase reversa:
Gradiente de elución
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de las ecuaciones empleadas para la isocrática y se adaptan casi
empíricamente. La relación del cambio de la composición de la fase móvil
durante el transcurso de la elución en gradiente puede ser descrita por la
pendiente del gradiente como (∆∅/𝑡𝐺 ) dónde (G) simboliza la progresión del
gradiente:
Siendo (∅) el volumen de fase del modificador, (tG) el tiempo del gradiente,
(S) la pendiente del (ln k') frente a (∅) (o la relación lineal de fuerza del
solvente).
Factor de capacidad:
• Elución isocrática
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La separación de los compuestos mediante elución isocrática puede
describirse utilizando las siguientes ecuaciones:
• Resolución:
Acetofenona Densidad:
1030 kg/m3;
C8H8O1
1,03 g/cm3
Punto de Fusión:
293,15 K (20 °C)
Punto de fusión:
475,15 K (202 °C)
Benzofenona Apariencia: Sólido
blanco C13H10O
Densidad:
1110 kg/m3;
1,11 g/cm3
Masa molar:
182.217 g/mol
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Butilparabeno
Masa molar: C11H14O3
194.227
g/mol
Propiofenona Apariencia:
líquido incoloro a C9H10O
amarillo pálido
Densidad: 1,01
g·cm-3
Punto de Fusión:
18 °C
Punto de fusión:
115-
118 ° C
Punto de
ebullición: 297-
298 ° C
Propilparabeno Apariencia: sólido
C10H12O3
Masa molar: 180,18
g mol -1
Densidad:
01:28 g cm -3 (25 °
C, sólido)
1.063 g cm -3 (102
°
C, líquido)
Punto de fusión:
369,2 K
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Ketoprofeno
Masa molecular:
254.28 g/mol C16H14O3
Punto de fusión: 94
-
97 ºC
3-nitrofenol
Masa molecular: C6H5NO3
139,11 g/mol
Punto de ebullición:
194 ° C / 70 mmHg
(Lit).
Punto de ebullición:
279 ° C (534 ° F;
552 K)
• Acetofenona
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Acetofenona comercial puede ser obtenido a partir de benceno con anhídrido
acético o cloruro de acetilo de Friedel-Crafts proceso. Se puede también
obtenerse por medio de una oxidación de etilbenceno ir, como un
subproducto decumeno o de acrilonitrilo.
• Benzofenona
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En aplicaciones biológicas, benzofenonas se han utilizado ampliamente
como sondas fotofísicas para identificar y mapear las interacciones
péptidoproteína.
• Butilparabeno
• Propiofenona
• Etilparabeno
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• Propilparabeno
Usa como conservador para cosméticos (es el segundo producto de este tipo
más utilizado) y en combinación con metilparabeno se utiliza en
formulaciones farmacéuticas parentales. Para productos de cuidado para la
piel y comida. Tiene una toxicidad generalmente baja por ingestión. Puede
irritar los ojos, la piel, el tracto intestinal y el respiratorio con el contacto, la
ingestión y la inhalación, respectivamente. También es combustible.
• Ketoprofeno
• 3-nitrofenol
Usa principalmente para manufacturar tinturas, pigmentos, productos de
caucho y sustancias funguicidas.
• 4-nitrofenol
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puede absorberse por la piel. En contacto con los ojos produce
enrojecimiento y dolor.
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3-nitrofenol 1,3493 1,5371 0,7562
Etilparabeno 2,007 2,7739 1,1154
Acetofenona
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Benzofenona
Butilparabeno
Propiofenona
Etilparabeno
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Propilparabeno
Ketoprofeno
3-nitrofenol
4-nitrofenol
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Cambie la composición de la fase móvil de metanol a acetonitrilo:
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Acetofenona
Benzofenona
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Butilparabeno
Propiofenona
Etilparabeno
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Propilparabeno
Ketoprofeno
3-nitrofenol
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4-nitrofenol
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¿Cuál es la importancia del agua en la composición de la fase móvil?
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i) Con los hallazgos realizados hasta ahora, elabore una conclusión sobre el
efecto de la estructura de los solutos y la composición de la fase móvil
sobre la retención y la resolución.
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𝑡𝑅𝐴 = 1,185 𝑚𝑖𝑛
𝜎𝑇𝐴 = 0,5485 𝑠
𝜎𝑇𝐵 = 0,5490 𝑠
𝑘′ ∗ 𝑡𝑚 = 𝑡𝑅 − 𝑡𝑚
𝑘′ ∗ 𝑡𝑚 + 𝑡𝑚 = 𝑡𝑅
(𝑘′ + 1) ∗ 𝑡𝑚 = 𝑡𝑅
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b) Calcule la resolución, α, para los dos compuestos.
𝛼 = 1,0345
𝑅𝑠 = (2∆𝑡𝑅)/(𝑤𝐴 + 𝑤𝐵)
Dónde:
∆𝑡𝑅 = 𝑡𝑅𝐵 − 𝑡𝑅𝐴 = 1,196 𝑚𝑖𝑛 − 1,185 𝑚𝑖𝑛 = 0,011 𝑚𝑖𝑛 = 0,66 𝑠
𝑅𝑠 = 0,3
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3. Cambie gradualmente el porcentaje de metanol en intervalos de 10%
iniciando en 95% y terminando en 5% (95%, 85%, 75%, …, 5%). ¡Para cada una
de las composiciones obtenidas!:
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Porcentaje de metanol (65%):
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Porcentaje de metanol (55%):
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Porcentaje de metanol (45%):
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Porcentaje de metanol (25%):
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Porcentaje de metanol (5%):
Acetofenona (Compuesto A)
Porcentaje Tiempo retención Factor de Sigma total
Metanol (min) retención (s)
(% V/V)
95 1,185 0,0516 0,5485
85 1,1802 0,1096 0,5654
75 1,3109 0,2325 0,6243
65 1,5885 0,4935 0,7571
55 2,1774 1,0472 1,0401
45 3,4272 2,2222 1,6380
35 6,0793 4,7157 2,8960
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25 11,7073 10,0070 5,5334
15 23,6504 21,2358 11,0663
5 48,9946 45,0642 22,7749
Etilparabeno (Compuesto B)
Porcentaje Tiempo retención Factor de Sigma total
Metanol (min) retención (s)
(% V/V)
95 1,196 0,0526 0,5490
85 1,1987 0,1270 0,5739
75 1,3897 0,3066 0,6601
65 1,8506 0,7399 0,8785
55 2,9628 1,7856 1,4101
45 5,6471 4,3094 2,6934
35 12,1254 10,4002 5,7717
25 27,7601 25,0997 13,1177
15 65,4928 60,5755 30,6429
5 156,5566 146,1926 72,7735
4. Con los hallazgos realizados en esta sección, elabore una conclusión sobre
el efecto del porcentaje del modificador en la composición de la fase móvil
sobre la retención y la resolución. Si fuera contratado en un laboratorio para
separar, por medio de cromatografía líquida, de una mezcla los compuestos
acetofenona y etilparabeno ¿cuál sería la mejor composición de fase móvil
a emplear? Justifique su respuesta.
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Conclusiones
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Referencias Bibliográficas
http://www.med.ufro.cl/Recursos/Bioquimicaoffline/Apuntes/clinica1/espectrofotometria_imp.
pdf
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