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CONTENIDO:
DETERMUNACION DE SUBGRUPOS
DETERMINACION DE RH
PRUEBA DE COMPATIBILIDAD
Introducción:
La mayoría de los grupos sanguíneos ABO que se determinan en el banco de sangre cumplen con
las leyes establecidas de antígenos y anticuerpos recíprocos para ese sistema.
Los anticuerpos del sistema ABO existen en el individuo desde el momento en que son capaces de
tener una respuesta inmunológica y se producen contra los antígenos A y B.
Son de tipo natural, nacemos con ellos y son Ig M de gran capacidad inmunogenica
Los anticuerpos del sistema Rh son de tipo natural (nacemos con ellos) pero a diferencia de los
anteriores, estos tambien pueden ser adquiridos como consecuencia de una isoinmunización
inadecuada (incompatibilidad fetomaterna, transfusión incompatible…).
Los subgrupos son fenotipos ABO que difieren en la cantidad de antígeno presente en los
eritrocitos y en la saliva de los secretores. Se hallan con mayor frecuencia y tienen más relevancia
clínica los de A, que los de B.
Un grupo sanguíneo es una forma de agrupar ciertas características de la sangre que dependen de
los antígenos presentes en la superficie de los glóbulos rojos y en el suero de la sangre.
Esta ha sido la base para que se pueda clasificar a la sangre en seis grupos en cuanto al sistema
ABO: grupo A, grupo AB, grupo B y grupo O; y en dos con respecto al sistema Rh: Rh negativo o
Rh positivo. Lo que a la postre trae ocho grupos posibles por las combinaciones posibles entre
ambos sistemas.
Las transfusiones de sangre entre grupos incompatibles pueden provocar una reacción
inmunológica que puede desembocar en muerte.
Las personas con sangre del tipo A tienen glóbulos rojos que expresan antígenos de tipo A en su
superficie y anticuerpos contra los antígenos B en el suero de su sangre.
Las personas con sangre del tipo B tiene la combinación contraria, glóbulos rojos con antígenos
de tipo B en su superficie y anticuerpos contra los antígenos A en el suero de su sangre.
Los individuos con sangre del tipo O no expresan ninguna de los dos antígenos (A o B) en la
superficie de sus glóbulos rojos pero pueden fabricar anticuerpos contra ambos tipos, mientras
que las personas con tipo AB expresan ambos antígenos en su superficie y no fabrican ninguno
de los dos anticuerpos.
A causa de estas combinaciones, el tipo O puede ser transfundido sin ningún problema a cualquier
persona con cualquier tipo ABO y el tipo AB puede recibir de cualquier tipo ABO.
Los donantes de sangre y los receptores deben tener grupos compatibles. El grupo O- es
compatible con todos, por lo que quien tiene dicho grupo se dice que es un donante universal. Por
otro lado, una persona cuyo grupo sea AB+ podrá recibir sangre de cualquier grupo, y se dice que
es un receptor universal.
Material y equipo:
tubos de ensayo
portas
pipetas Pasteur
gradilla
muestra sanguínea anticoagulada con EDTA para obtener suero o plasma.
muestra sanguínea sin anticoagulante
Antisuero Anti-A, Anti-AB, Anti-B y Anti-D *
Eritrocitos con antígenos conocidos A1, A2, B y O
Centrifuga
Lámpara o lector caliente (para Rh)
Reactivo 1 Reactivo 2
Antisuero A monoclonal Antisuero AB monoclonal
Aspecto: transparente Aspecto:transparente
Color: azul Color: incoloro
Reactivo 3 Reactivo 4
Antisuero B monoclonal Antisuero D monoclonal
Aspecto: transparente Aspecto: transparente
Color: amarillo Color: incoloro
Técnica:
1. Centrifugar los tubos Vacutiner de muestra sanguínea anticoagulada con EDTA y el tubo
Vacutainer con muestra sanguínea sin anticoagulante, a una velocidad de 2500 r.p.m. por
10 minutos, pues se utilizaran plasma, suero y eritrocitos por separado.
2. Separar la fase plasmática del tubo que contenía EDTA. Separar tb la fase serica del tubo
que no contenía EDTA para realizar con ella el serogrupo. Ahora tendremos un tubo con
suero, otro con plasma, otro con hematíes CARGADOS y otro con un coagulo..
3. Tomar el sedimento del tubo centrifugado con EDTA, contendrá un boton de hematíes, que
habrá que lavar con salino fisiológico al 0.9 % (resuspender el boton con el salino ,
centrifugar y decantar por tres veces) para realizar con ellos el hemogrupo sin la
interferencia de aglutininas.
4. Ahora tendremos : muestra con plasma, muestra con suero y muestra con hematíes
problema lavados.
Inmucor anti-A1 Lectin se utiliza para diferenciar células rojas A1 de otros subgrupos A en pruebas
en tubo o en placa.
Realizar el mismo procedimiento con los restantes portas para enfrentarlos con la batería de
antisueros preparada (con la salvedad del porta de Rh que habrá que esperar dos minutos más y
leer sobre la lámpara.).
5. Tomar cuatro tubos, en cada tubo rotular con números, un número corresponde al que ya
traía la muestra, otro correspondiente del 1 al 4 y según el tipo de antisuero: Anti-A, Anti-
AB, Anti-B ó Anti-D. Ejemplo: 1, 213, Anti-A.
6. En cuatro tubos limpios hacer una dilución de 2-5 % de los hematíes lavados con salino
0.9%, de cada muestra. La dilución tomará un color rojo vivo característico.
7. Colocar en cada tubo rotulado una gota de la dilución de hematíes lavados preparada y
una gota de antisuero, según corresponda.
8. Al concluir lo anterior, llevar los tubos a la centrifuga y centrifugar por solo 15 segundos a
una velocidad de 1000 r.p.m. para observar mejor la reacción antigeno-anticuerpo
(formación de un botón).
9. Por ultimo leer los tubos, observando si hubo reacción o no, y correlacionando los datos
obtenidos con el método inverso para determinar el grupo sanguíneo.
Al utilizar lectinas se evidencia mejor los subgrupos: A1 y A2: con el extracto de Dolichos biflorus
se aglutinan los eritrocitos A1, pero no los de A2; y el anti H, semilla Ulex europeus, aglutina
eritrocitos que tienen antígeno H.
Tomar una gota de células rojas al 3-5% de muestra, donador o paciente ( lavadas previamente
con salíno 0.9%) y enfrentarlas al reactivo en gotero que tiene capacidad para aglutinar los
antígenos específicos del 20 % de la población con grupo A.
Tecnica:
1. Adicione una gota de una suspensión de eritrocitos bajo prueba del 3-5% en salina en
tubos adecuadamente marcados.
2. Adicione dos gotas de anti-H Lectina y mezcle completamente el contenido del tubo.
3. incube durante 5 minutos a temperatura ambiente.
4. Centrifugar de 15-30 minutos a 1000 rpm.
5. Agite suavemente el tubo y resuspenda el botón celular. Examine las reacciones
resultantes macroscópicamente. Registre resultados.
PACIENTE 1 + - ANTI A1
PACIENTE 2 - + ANTI A2
La hemólisis no debe interpretarse como un resultado positivo ya que esto puede indicar
una contaminación del reactivo.
Los subgrupos de B y D tambien existen, son menos frecuentes, pero son fuente de graves
consecuencias si no se detectan correctamente
1. Rotular los tubos de ensayo de la siguiente manera: en cada tubo rotular dos números
en la muestra, uno correspondiente del 1 al 4, el otro numero corresponde al que ya traía la
muestra, y con el tipo de eritrocitos con antigeno conocido: A1, A2, B y O. Ejemplo: 1, 213, A1;
,2 ,213, A2; etc.
2. Colocar en cada tubo rotulado dos gotas ya sea de plasma o suero según
corresponda y una gota de los eritrocitos con antigeno conocido.
4. Por ultimo leer los tubos, observando si hubo reacción o no, y correlacionando
los datos obtenidos con el método inverso para determinar el grupo sanguíneo.
Resultados:
Método directo o grupo hemático Grupo indirecto o grupo sérico
Muestra
Interpretación:
Para el método directo la lógica fue: si en un tubo hay formación de botón (reacción
antigeno-anticuerpo) quiere decir que los eritrocitos ensayados tienen el antigeno que
reacciona con los anticuerpos presentes en el antisuero para ese tubo; y si no presentan
aglutinación querrá decir que no corresponde el antigeno del eritrocito con el
anticuerpo del antisuero, o que el antigeno esta ausente en esos eritrocitos. Para el
método inverso el razonamiento fue: si en un tubo hay formación del botón (reacción
antigeno-anticuerpo) quiere decir que el plasma del paciente ensayado tiene los
anticuerpos que reaccionan con los eritrocitos con antigeno conocido, los cuales sirven
de reactivo para esta prueba. Por lo tanto una reacción positiva en este método
definitivamente indica que el paciente no tiene eritrocitos con antígenos que
reaccionarían con los anticuerpos de su plasma. De ahí que el método se le nombre
inverso o grupo sérico.
INTRODUCCIÓN:
El factor Rh se refiere a un tipo de antígenos que se adquieren de forma natural (como
los del grupo A, b, O), pero tambien de forma inmune y que se encuentran en los
glóbulos rojos de la sangre, cuando alguien tiene esos factores se le considera “Rh
Positivo” o que tiene factor rhesus o proteína Rh (pues está expresando el gen D).
Cuando no la tiene es “Rh Negativo”. El factor Rh es hereditario y se encuentra en varios
loci. Una gran parte de la población Rh positiva lo es, debido a la presencia en sus
hematíes de
Los antígenos del locus son el genotipo : D/d C/c E/e
Un alelo dominante D sobre otro d
Un alelo dominante E sobre otro e
Un alelo dominante C sobre otro c
Y en cada individuo, hay que hallar la combinación de los antígenos presentes, según se
exprese su fenotipo :
___/___
C/D/E C/D/e C/d/E C/d/e c/D/E c/D/e c/d/E c/d/e
MATERIAL:
Tubos de ensayo
Pipetas Pasteur
Gradilla
EQUIPO:
Centrifuga
MUESTRA BIOLÓGICA:
Eritrocitos lavados 3-5% del paciente
REACTIVOS:
Antisuero Anti-D
Suero anti globulina humana.
Suero reactivo control
Antisuero D monoclonal
Aspecto: transparente
Color: incoloro
TÉCNICA:
Determinación de Rh
Detección de sangre Du
Nota: esta técnica se le realiza a aquellas muestras con resultado negativo al factor D
pero Rh débilmente positivas
Los tubos que no tuvieron aglutinación en la determinación de Rh se incuban
15 min, y posteriormente se lavan 3 veces con sol. Salina
Previamente lavados se le agregan 2 gotas de suero de COOMBS.
Centrifugar 15 seg y observar, desprender boton
ESQUEMAS y RESULTADOS:
INTERPRETACIÓN:
Para el primer método:
Aglutinacion: Rh positivo
No aglutinación: realizar prueba de detección de sangre Du.
Detección de sangre Du
Aglutinación. D débil (Du positivo)
No aglutinación: Rh negativo
Con el descubrimiento del sistema Rh, se denominan Rh positivos a los hematíes que
son aglutinados por el anticuerpo anti-D y tambien a los que son aglutinados por los
anticuerpos del sistema C/c , E/e .
Esta prueba es importante en el diagnostico y estudio de la eritroblastosis fetal, en
la que los glóbulos rojos del niño se encuentran sensibilizados con anticuerpo
materno. Es útil también en el diagnostico de la anemia hemolítica adquirida
(anticuerpos sobre los glóbulo rojos del mismo paciente), así como la determinación
de eritrocitos sensibilizados en sangre usados para transfusión.
Las transfusiones de sangre entre grupos incompatibles pueden provocar una reacción
inmunológica que puede desembocar en hemólisis, anemia, fallo renal, shock, o muerte.
En conclusión los grupos Rh negativos pero Du positivos pueden generar shok en caso
de transfusión pues se comportan como Rh positivos débilmente.
OBJETIVO: determinación de los antigenos del sistema ABO, Rh (D) y determinacion del
grupo serico , en tecnica de gel.
FUNDAMENTOS:
deteccion de las reacciones de aglutinacion de los hematies. La aglutinacion se produce
al entrar en contacto los eritrocitos con los anticuerpos correspondientes.
MATERIAL
Pipeta automática 10 ul, 50ul, 1 ml.
Puntas de pipeta desechable
Tubos de vidrios
DEG sol
Centrifugas para tarjetas DG gel
Hematies de reactivos para grupo inverso.
MUESTRA BIOLOGICA:
Hematíes del paciente
REACTIVO:
Placa de gel
Reactivo de gel sol
TECNICA
1.- determinacion de los antigenos del sistema ABO/Rh.
-preparar una suspension de hematies al 5 % de DG sol. Asegurar la resuspencion de lso
hematies antes de utilizar.
Anadir en cada microtubulos indicados 10 ul de una suspension de hematies al 5%.
2.- determinacion de l grupo serico.
-homogenizar los hematies recativos A1/B
- dispersar el microtubulo N /a1 50 ul de hematies reactivos A1 en un microtubulo N/b 50
ul de hematies reactivos B.
-añadir suero o plasma.
3.- centrigugar en centrifuga para DG sol.
Leer los resultados.
RESULTADOS
INTERPRETACION DE RESULTADOS.
SISTEMA Rh
Micrutubo D Micrutubo D” Micrutubo INTERPRETACION
CTL
+ + - D positivo
- - - D negativo
- + - D débil parcial
+ - -
RESULTADO E INTERPRETACION
Resultado; A+
Resultado: B +
Es esencial que toda la sangre sea estudiada antes de la transfusión para: Asegurar que todos los
glóbulos rojos transfundidos son compatibles con los anticuerpos en el plasma del paciente, así
tambien como para evitar estimular la producción de nuevos anticuerpos contra los glóbulos rojos
en el receptor, especialmente anti-Rh D (o cualquier otro anticuerpo inducido o adquirido).
La prueba se realiza con eritrocitos normales incubados in Vitro con el suero de estudio. Durante
este periodo, si existe un anticuerpo, este se fija sobre su respectivo determinante antigénico. Una
vez fijados, los eritrocitos son igualmente lavados y se agrega el reactivo de Coombs,
produciendo aglutinación.
Una prueba de Coombs positiva significa que existen anticuerpos aglutinantes libres en el suero
de la persona, los cuales puedan ser igualmente auto-anticuerpos o isoanticuerpos.
Material y equipo:
Pipetas automáticas de 10 µl, 25 µl, 50 µl y 1 ml.
Puntas de pipetas desechables
Tubos de vidrio.
Incubador para tarjetas DG Gel.
Centrifuga para tarjetas DG Gel.
Material biológico:
Hematíes reactivo para investigación e identificación de anticuerpos irregulares de Diagnostic
Grifols, S.A.
Suero de hemoclasificación.
Muestras de sangre de extracción reciente, recogida con anticoagulante o sin anticoagulante.
Reactivos:
Tarjetas DG Gel.
DG Gel Sol.
*Reactivos:
Tarjetas DG Gel Coombs DG Gel Sol
Rango de temperatura: entre 2 y 25 ºC Rango de temperatura: entre 2 y
8ºC
Aspecto: transparente Aspecto: transparente
Color: verde Color: incoloro
Resultados:
Paciente: (AB+)
Donador 1: (A+)
Donador 2: (O+)
M1 m1 M2 m2 Autocontrol
GR de donador 1 + GR del paciente + GR de donador 2 + GR del paciente + GR del paciente +
suero del paciente suero de donador 1 suero del paciente suero de donador 2 suero del paciente
(- ) compatible (+)incompatible - + -
Interpretación:
Por lo antes expuesto se puede deducir que el donador 1 (A+) puede donar eritrocitos al paciente
(AB+), lo mismo que el donador 2 (O+) puede donarle eritrocitos; no así plasma por parte de
ambos donadores pues la prueba muestra que hubo reacción en ambas pruebas menores.
INTRODUCCIÓN
A causa de este fenómeno biológico en las transfusiones de sangre no es suficiente con conocer
que la sangre del donante y la del receptor son del mismo grupo, o bien que la del donante
pertenezca al grupo O (cero), sino que es necesario conocer si la compatibilidad es perfecta,
porque ningún otro fenómeno de inmunización interfiera. Es en este sentido por lo que son
empleadas las pruebas cruzadas.
Además de los 6 antígenos del sistema ABO en los eritrocitos humanos, existen numerosos
sistemas de aglutinógenos que contienen muchos antígenos individuales en los eritrocitos (más
de 500.000 millones posibles de fenotipos de grupos sanguíneos conocidos). Para evitar
accidentes transfusionales es indispensable tener en cuenta el sistema Rh además del ABO.
OBJETIVO:
Determinación de los antigenos del sistema ABO, Rh (D) y su compatibilidad entre un paciente
Donador y un Paciente Receptor.
MATERIAL EQUIPO
*5 Tubos de ensaye. Microcentrífuga.
*6 Pipetas Pasteur.
*1Gradilla.
Baño María ó Estufa.
*1 Bulbo.
*Papel Parafilm.
MUESTRA
Muestra de sangre con Anticoagulante EDTA.
REACTIVOS
TÉCNICA
SALINA RÁPIDA:
1. Agregar una gota de Eritrocitos Lavados.
2. Diluirlo al 3-5% con solución salina 0.9%.
3. Agregar 2 gotas de suero.
4. Centrifugar y observar, anotar desprendimiento del botón.
AGLUTINACIÓN– No es compatible.
NO AGLUTINACIÓN - Lavar 3 veces.
SALINA COOMBS:
1. Con solución salina 0.9% lavar los eritrocitos de los tubos q no
tuvieron aglutinación 3 veces.
2. Decantar y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs
AGLUTINACIÓN – No es compatible.
NO AGLUTINACIÓN - Lavar 3 veces.
RESULTADOS
Paciente: (B+)
Donador 1: (O+)
Donador 2: (A+)
SALINA RÁPIDA:
M1 m1 M2 m2 Autotestigo
GR de donador 1 GR del paciente GR de donador 2 GR del paciente GR del paciente
+ suero del + suero de + suero del + suero de + suero del
paciente donador 1 paciente donador 2 paciente
- 4+ 4+ 4+ -
M1 m1 M2 m2 Autotestigo
- 4+ 4+ 4+ -
Compatible No compatible No compatible No compatible Compatible
SALINA COOMBS:
M1 Autotestigo
- -
Compatible Compatible
Por lo tanto se puede decir que el donador 1 (O+) puede donar suero al paciente (B+), debido a que
en el suero no hay anticuerpos de ningún tipo que reaccionen con los antígenos de los eritrocios
del Donador 1. Mientras tanto el Donador 2 no puede donar al Paciente ni suero ni eritrocitos.
INTERPRETACIÓN
PRUEBA POSITIVA: Existe una aglutinación de las células sanguíneas que indica la
presencia del antígeno A o B. En el suero de Coombs notamos si esta la precencia de
Antígeno D en los eritrocitos. La hemólisis no se debe interpretar como resultado positivo
ya que puede indicar contaminación del reactivo.
CONCLUSIÓN
En las transfusiones de sangre no es suficiente con conocer que la sangre del donante y la del
receptor son del mismo grupo, o bien que la del donante pertenezca al grupo O (cero), sino que
es necesario conocer si la compatibilidad es perfecta, porque ningún otro fenómeno de
inmunización interfiera. Es en este sentido por lo que son empleadas las pruebas cruzadas.
Introducción:
Objetivo: Determinación de los antígenos del sistema ABO, Rh (D) y su compatibilidad entre un
paciente Donador y un Paciente Receptor.
Material y equipo:
5 Tubos de ensaye.
6 Pipetas Pasteur.
1Gradilla.
1 Bulbo.
Papel Parafilm.
Microcentrífuga.
Baño María ó Estufa.
Material biológico:
Muestras de sangre de extracción reciente, recogida con anticoagulante o sin
anticoagulante.
Reactivos:
Suero de Coombs*
Albúmina bovina °
*Suero anti-globulina humana Lote 406. Cad: 31/01/18. Color: verde. Aspecto: transparente.
°Albumina de bovino polimerizada Interbiol. Lote APO107. Cad: 15/01/19. Color: incoloro. Aspecto:
transparente.
Técnica:
7. Lavar tres veces, decantar, y quitar el exceso de salina con gasa y agregar 2 gotas de
reactivo de Coombs y centrifugar 20 segundos y observar:
Aglutinación o hemólisis: reportar incompatible.
No aglutinación: reportar compatible.
Resultados:
1 PRUEBA MAYOR 1: 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de G.R. al 3-5% del
donador 1.
2 PRUEBA MENOR 1: 2 Gotas de suero del donador 1 + 1 gota de G.R. al 3-5% del
paciente.
3 PRUEBA MAYOR 2: 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de G.R. al 3-5% del
donador 2.
4 PRUEBA MENOR 2: 2 Gotas de suero del donador 2 + 1 gota de G.R. al 3-5% del
paciente.
5 AUTOTESTIGO: 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de G.R. al 3-5% del paciente.
M1 m1 M2 m2 Autotestigo
Con albúmina. - - - - -
Después de incubación a 37 °C. - - - - -
Después de Coombs. - - - - -
Después de validación con glóbulos + + + + +
positivos.
Interpretación:
ESQUEMAS:
Conclusión:
FUNDAMENTO:
LISS es utilizado para reducir la fuerza iónica del medio de reacción en los procedimientos de
detección e identificación de anticuerpos y en las pruebas de compatibilidad. La presencia de este
reactivo refuerza la interacción antígeno - anticuerpo durante la incubación.
GENERALIDADES:
El uso de solución salina de baja fuerza iónica fue descrito inicialmente en 1964 por Hughes-Jones
y col. y Elliot y col., pero en ese tiempo su uso era limitado ya que la concentración molar obtenida
provocaba la hemólisis de los eritrocitos suspendidos.
En 1974, Low y Messeter describieron el uso rutinario de la solución Liss de 0,03 M que lograba
reducir el tiempo de incubación y no presentaba tendencia a la hemólisis al ser suspendidos en
salina a baja fuerza iónica, restableciendo la presión osmótica de la solución mediante la adición
de glicina.
Las soluciones de baja fuerza iónica son actualmente las más utilizadas en inmunohematología,
provocando un aumento en la velocidad de asociación entre antígenos y anticuerpos permitiendo
así acortar el tiempo de incubación de 60 minutos a 10-15 minutos, sin sacrificar la sensibilidad de
las mismas y sin costos elevados.Se ha observado que las reacciones antígeno-anticuerpo se ven
potenciadas al reducir la fuerza iónica del medio de reacción.
La fuerza iónica es uno de los factores más importantes que determinan la tasa y la cantidad de
captación de anticuerpos por parte de los eritrocitos. El uso de medios de reacción de baja fuerza
iónica permite disminuir el tiempo de incubación y potenciar las reacciones de los anticuerpos sin
incrementar las reacciones inespecíficas.
Los iones Na+ y Cl-, presentes en la solución salina fisiológica, se agrupan alrededor de las
moléculas de antígeno y anticuerpo neutralizando sus cargas opuestas, lo cual dificulta la unión
entre ellos. Este efecto se reduce utilizando soluciones de baja fuerza iónica y disminuyendo de
esta manera la incubación de las pruebas.
Después de que el anticuerpo se ha fijado al antígeno, los eritrocitos sensibilizados deben unirse
para dar lugar a la aglutinación visible; esta red también solidifica y estabiliza la reacción.
En esta etapa la reacción depende de factores como las características del anticuerpo, localización
en la membrana y número de sitios antigénicos, fuerzas que mantienen la distancia entre los
eritrocitos.
Las características del anticuerpo que deben considerarse son el tamaño del anticuerpo
involucrado y el número de sitios de combinación con el antígeno. Los anticuerpos IgM pueden
establecer puentes entre los eritrocitos y aglutinarlos espontáneamente en solución salina,
mientras que los IgG no, ya que las IgM, pentaméricas poseen 10 sitios de combinación con el
antígeno y las IgG dímeros sólo dos sitios.
Los eritrocitos tienen una carga neta negativa en su superficie, su interacción con los iones del
medio altera esta carga y producen una carga neta crítica denominada potencial zeta, y la
reducción de dicha carga permite que los eritrocitos se aproximen lo suficiente para que sean
aglutinados por medio de los IgG que los sensibilizaron.
Las soluciones de baja fuerza ionica empleadas en banco de sangre tienen un pH entre 6.5 – 7.0,
se recomienda una osmolalidad de 270 – 305 mosm/kg y una conductividad de 3.7 mm/cm. El
control diario implica el examen de su apariencia física: ausencia de turbidez, particulas o
sedimento, así como, corroborar la capacidad para generar hemólisis, crenacion o prueba de
coombs positiva en eritrocitos normales. Cada lote nuevo se valora mediante el rastreo de un
anticuerpo ya sea un anti- D, un anti- jk, anti- fy o anti- kell diluido; se compara su capacidad de
detección contra un medio salino normal incubando 10min a 37ºC, en LISS debe poder rastrearse
un anticuerpo, en tanto que en medio salino no.
MATERIAL Y EQUIPO:
Material Cantidad
10 Tubos de ensayo de 12 x 75
1 Gradilla
10 Pipetas pasteur
1 Bulbo
1 Marcador
1 Microcentrífuga
1 Baño María
MATERIAL BIOLOGICO:
REACTIVOS:
Reactivo de LISS
Reactivo de Coombs
TECNICA:
REACTIVOS UTILIZADOS:
PACIENTE: O (+)
DONADOR 1: O (+)
DONADOR 2: A (+)
RESULTADOS:
Tubo Resultado
M1 NEGATIVO
m1 NEGATIVO
M2 POSITIVO
M2 NEGATIVO
AUTOTESt. NEGATIVO
ESQUEMAS:
CONCLUSIONES:
la prueba de compatibilidad sanguínea en su modalidad con liss ofrece mucha ventaja al ser, al
igual que otros reactivos, un potencializador de la reacción antígeno-anticuerpo. Esto permite que
el operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certeza en los resultados que
obtenga.
El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contra los propios glóbulos
rojos (GR) de un individuo. Es una prueba que sirve para demostrar el revestimiento de los
eritrocitos in vivo, (mientras los eritrocitos están circulando en el individuo). La prueba se realiza
agregando directamente el reactivo de Coombs a los eritrocitos, previamente lavados para
eliminar otras proteínas no fijadas a el; una prueba directa positiva significa que la relación
antígeno-anticuerpo ocurrió in vivo, es decir que la fijación del anticuerpo sobre el antígeno se
realizo en el organismo del individuo en estudio.
MATERIAL
10 Tubos de 12/75
10 Pipetas Pasteur
1 Gradilla.
1 Bulbo.
Papel Parafilm.
Microcentrífuga.
Baño María a 37°C.
MUESTRA BIOLOGICA:
Suero de Coombs*
*Suero anti-globulina humana Lafon. Lote 406 Cad: 31/01/19. Color: verde. Aspecto: transparente.
TECNICA:
Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota de globulos rojos (3-
5%).
Centrifugar a 1000 rpm durante 20 seg.
Desprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacion.
Rotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones (½,¼,1/8...)
Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8.
Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotas de suero de
Coombs.
Colocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5%), mezclar completamente y
agregar al tubo #1
Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg.
LECTURA:
ESQUEMAS y RESULTADOS:
DILUCIONES
½ positiva
¼ positiva
1/8 positiva
1/16 negativa
1/32 negativa
1/64 negativa
1/128 negativa
1/256 negativa
CONCLUSION:
la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir la presencia de anticuerpos
en la superficie de los glóbulos rojos que se encuentran circulando en el paciente y se realiza para
investigar reacciones en transfusiones además sirve para la determinación de anemia hemolítica
autoinmune entre otras afecciones.
Fundamento:
Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que el individuo entra en contacto con el
medio ambiente y en el cual se encuentran microorganismos como algunas bacterias coliformes
que contienen sustancias químicas en su estructura parecidas a las de este sistema. Por
anticuerpos regulares debemos identificar a los que existen en todos los individuos y que éstos
tendrán durante toda su vida.
Los anticuerpos irregulares son los que no están de esa manera, aunque en el caso de los
naturales no se conoce a ciencia cierta qué o cómo se induce su producción. Los adquiridos se
conocen también como inmunes y son el resultado de la exposición a antígenos desconocidos por
el individuo al momento de la transfusión o en las mujeres por el embarazo; estos anticuerpos
son dirigidos contra antígenos de sistemas diferentes al ABO.
Los anticuerpos naturales regulares son preferentemente inmunoglobulinas M, las cuales fijan de
manera tan eficiente el complemento que pueden provocar lisis intravascular y ocasionar
insuficiencia renal o incluso la muerte del paciente. Los anticuerpos adquiridos o inmunes son
generalmente inmunoglobulinas G, las cuales producen hemólisis extravascular en el bazo o en el
hígado mediante fagocitosis del complejo eritrocito más anticuerpo.
Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) más comunes en nuestra población son los que
involucran a los sistemas MNSs, P1, Kidd (Jka, Jkb), Duffy (Fya, Fyb), Kell, Lewis y Diego.
MATERIAL EQUIPO
10 Tubos de ensaye. 1. Microcentrífuga.
10 Pipetas Pasteur. 2. Baño María ó Estufa.
1Gradilla.
1 Bulbo.
Papel Parafim.
MATERIAL BIOLOGICO:
Glóbulos rojos lavados al 3 - 5%
Suero
REACTIVOS
Reactivos:
1. Suero de Coombs*
2. Albúmina bovina
3. SOLUCION SALINA
4. SOLUCION DE LISS
SALINA RÁPIDA:
Agregar una gota de Eritrocitos Lavados.
Diluírlo al 3-5% con solución salina 0.9%.
Agregar 2 gotas de suero.
Centrifugar y observar, anotar desprendimiento del botón.
SALINA COOMBS:
1) Con solución salina 0.9% lavar los eritrocitos de los tubos q no
tuvieron aglutinación 3 veces.
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs
AGLUTINACIÓN – No es compatible.
NO AGLUTINACIÓN - Lavar 3 veces.
TECNICA LISS
1. Poner dos gotas de LISS en cada tubo, agregar una gota de eritrocitos lavados y al 3 - 5%,
según el número de tubo correspondiente,
2. Mezclar y centrifugar un minuto, decantar el sobrenadante y con la ayuda de una gasa
limpiar el exceso del reactivo.
3. Poner nuevamente 2 gota de LISS, resuspender por agitación, agregar 2 gotas de suero
problema, mezclar, incubar 15 minutos a 37º C. centrifugar 30 seg. A 1000 R.P.M.
4. Anotar los resultados.
13. Lavar tres veces, decantar, y quitar el exceso de salina con gasa y agregar 2 gotas de
reactivo de Coombs y centrifugar 20 segundos y observar:
Aglutinación o hemólisis: reportar incompatible.
No aglutinación: reportar compatible.
Resultados
ANTICUERPO IRREGULAR: Anticuerpo c.
Interpretación
Estos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo M y ocasionalmente tipo G, y debido a
esa temperatura de reacción carecen de importancia clínica salvo que su reacción ocurra también
a 37 °C, su importancia radica en pacientes que serán intervenido a 22 ºc como es el caso de
operación de corazón.
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura óptima de reacción a 37 °C, a Estos
anticuerpos tienen una relevante importancia clínica ya que se les asocia con reacciones
transfusionales de intensidad moderada a severa, que pueden ocasionar la muerte.
Esquemas:
CONCLUSION:
Es importante determinar los anticuerpos irregulares ya que estos anticuerpos tienen una
relevante importancia clínica ya que se les asocia con reacciones transfusionales de intensidad
moderada a severa.
FIN