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Manual de Banco de sangre

INMUNOHEMATOLOGIA.master análisis anitário

manual básico de banco de sangre Guaditoca Chaves Aguión


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CONTENIDO:

DETERMINACIÓN DE GRUPO SANGUÍNEO ABO Y RH. Grupos sérico y hemático.

DETERMUNACION DE SUBGRUPOS

DETERMINACION DE RH

DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO POR TECNICA DE GEL

PRUEBA DE COMPATIBILIDAD

PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGÍNEA (TÉCNICA SALINA)

PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUÍNEA (TÉCNICA ALBUMINA)

PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS.

DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO

IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES

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Determinación de grupo sanguíneo ABO y Rh

Introducción:

La mayoría de los grupos sanguíneos ABO que se determinan en el banco de sangre cumplen con
las leyes establecidas de antígenos y anticuerpos recíprocos para ese sistema.

Los anticuerpos del sistema ABO existen en el individuo desde el momento en que son capaces de
tener una respuesta inmunológica y se producen contra los antígenos A y B.
Son de tipo natural, nacemos con ellos y son Ig M de gran capacidad inmunogenica

Los anticuerpos del sistema Rh son de tipo natural (nacemos con ellos) pero a diferencia de los
anteriores, estos tambien pueden ser adquiridos como consecuencia de una isoinmunización
inadecuada (incompatibilidad fetomaterna, transfusión incompatible…).

Los subgrupos son fenotipos ABO que difieren en la cantidad de antígeno presente en los
eritrocitos y en la saliva de los secretores. Se hallan con mayor frecuencia y tienen más relevancia
clínica los de A, que los de B.

Un grupo sanguíneo es una forma de agrupar ciertas características de la sangre que dependen de
los antígenos presentes en la superficie de los glóbulos rojos y en el suero de la sangre.

Esta ha sido la base para que se pueda clasificar a la sangre en seis grupos en cuanto al sistema
ABO: grupo A, grupo AB, grupo B y grupo O; y en dos con respecto al sistema Rh: Rh negativo o
Rh positivo. Lo que a la postre trae ocho grupos posibles por las combinaciones posibles entre
ambos sistemas.

Las transfusiones de sangre entre grupos incompatibles pueden provocar una reacción
inmunológica que puede desembocar en muerte.

Las personas con sangre del tipo A tienen glóbulos rojos que expresan antígenos de tipo A en su
superficie y anticuerpos contra los antígenos B en el suero de su sangre.

Entre los individuos A, se distinguen 2 categorías: A1y A2.


La diferenciación entre ambas se realiza mediante la utilización de anticuerpos monoclonales y
lectinas naturales purificadas, específicas de grupo sanguíneo Dolichos biflorus (anti A1) y Ulex
europaeus (anti H).

Las personas con sangre del tipo B tiene la combinación contraria, glóbulos rojos con antígenos
de tipo B en su superficie y anticuerpos contra los antígenos A en el suero de su sangre.

Los individuos con sangre del tipo O no expresan ninguna de los dos antígenos (A o B) en la
superficie de sus glóbulos rojos pero pueden fabricar anticuerpos contra ambos tipos, mientras
que las personas con tipo AB expresan ambos antígenos en su superficie y no fabrican ninguno
de los dos anticuerpos.

A causa de estas combinaciones, el tipo O puede ser transfundido sin ningún problema a cualquier
persona con cualquier tipo ABO y el tipo AB puede recibir de cualquier tipo ABO.

Los donantes de sangre y los receptores deben tener grupos compatibles. El grupo O- es
compatible con todos, por lo que quien tiene dicho grupo se dice que es un donante universal. Por
otro lado, una persona cuyo grupo sea AB+ podrá recibir sangre de cualquier grupo, y se dice que
es un receptor universal.

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Material y equipo:

tubos de ensayo
portas
pipetas Pasteur
gradilla
muestra sanguínea anticoagulada con EDTA para obtener suero o plasma.
muestra sanguínea sin anticoagulante
Antisuero Anti-A, Anti-AB, Anti-B y Anti-D *
Eritrocitos con antígenos conocidos A1, A2, B y O
Centrifuga
Lámpara o lector caliente (para Rh)

Reactivo 1 Reactivo 2
Antisuero A monoclonal Antisuero AB monoclonal
Aspecto: transparente Aspecto:transparente
Color: azul Color: incoloro
Reactivo 3 Reactivo 4
Antisuero B monoclonal Antisuero D monoclonal
Aspecto: transparente Aspecto: transparente
Color: amarillo Color: incoloro

Reactivo 5: Dolichos biflorus (anti A1)


Reactivo 6: Ulex europaeus (anti H)
Reactivo 7: Salino al 0.9 %
Reactivo 8: Eritrocitos con antígenos conocidos A1
Reactivo 9: Eritrocitos con antígenos conocidos A2
Reactivo 10: Eritrocitos con antígenos conocidos AB
Reactivo 11: Eritrocitos con antígenos conocidos O

Técnica:
1. Centrifugar los tubos Vacutiner de muestra sanguínea anticoagulada con EDTA y el tubo
Vacutainer con muestra sanguínea sin anticoagulante, a una velocidad de 2500 r.p.m. por
10 minutos, pues se utilizaran plasma, suero y eritrocitos por separado.
2. Separar la fase plasmática del tubo que contenía EDTA. Separar tb la fase serica del tubo
que no contenía EDTA para realizar con ella el serogrupo. Ahora tendremos un tubo con
suero, otro con plasma, otro con hematíes CARGADOS y otro con un coagulo..
3. Tomar el sedimento del tubo centrifugado con EDTA, contendrá un boton de hematíes, que
habrá que lavar con salino fisiológico al 0.9 % (resuspender el boton con el salino ,
centrifugar y decantar por tres veces) para realizar con ellos el hemogrupo sin la
interferencia de aglutininas.
4. Ahora tendremos : muestra con plasma, muestra con suero y muestra con hematíes
problema lavados.

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Método directo porta hemogrupo

Es el más rápido de realizar.


Tomar cuatro portas y etiquetarl c/u con el número de muestra.
Dispensar una gota de sangre anticoagulada sobre el primer porta y extenderla formando un
circulo, añadir sobre ella una o dos gotas de antisuero azul (anti-A) y mezclar haciendo circulos
cuidadosamente o mover de un modo circular el porta.
Esperar para hacer la lectura.

Una franca aglutinación, es reacción positiva; ausencia de aglutinación lo contrario.


Una aglutinación débil : esperar un minuto más, repetir o testar si es un subgrupo A.

La diferenciación entre ambas se realiza mediante la utilización de anticuerpos monoclonales y


lectinas específicas de grupo sanguíneo Dolichos biflorus (anti A1) y Ulex europaeus (anti H).

Inmucor anti-A1 Lectin se utiliza para diferenciar células rojas A1 de otros subgrupos A en pruebas
en tubo o en placa.

Realizar el mismo procedimiento con los restantes portas para enfrentarlos con la batería de
antisueros preparada (con la salvedad del porta de Rh que habrá que esperar dos minutos más y
leer sobre la lámpara.).

Método directo tubo hemogrupo

5. Tomar cuatro tubos, en cada tubo rotular con números, un número corresponde al que ya
traía la muestra, otro correspondiente del 1 al 4 y según el tipo de antisuero: Anti-A, Anti-
AB, Anti-B ó Anti-D. Ejemplo: 1, 213, Anti-A.

6. En cuatro tubos limpios hacer una dilución de 2-5 % de los hematíes lavados con salino
0.9%, de cada muestra. La dilución tomará un color rojo vivo característico.

7. Colocar en cada tubo rotulado una gota de la dilución de hematíes lavados preparada y
una gota de antisuero, según corresponda.

8. Al concluir lo anterior, llevar los tubos a la centrifuga y centrifugar por solo 15 segundos a
una velocidad de 1000 r.p.m. para observar mejor la reacción antigeno-anticuerpo
(formación de un botón).

9. Por ultimo leer los tubos, observando si hubo reacción o no, y correlacionando los datos
obtenidos con el método inverso para determinar el grupo sanguíneo.

Métodos para fenotipar subgrupos A

Al utilizar lectinas se evidencia mejor los subgrupos: A1 y A2: con el extracto de Dolichos biflorus
se aglutinan los eritrocitos A1, pero no los de A2; y el anti H, semilla Ulex europeus, aglutina
eritrocitos que tienen antígeno H.
Tomar una gota de células rojas al 3-5% de muestra, donador o paciente ( lavadas previamente
con salíno 0.9%) y enfrentarlas al reactivo en gotero que tiene capacidad para aglutinar los
antígenos específicos del 20 % de la población con grupo A.

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Método para testar Subgrupos A2 con Inmucor anti-A1 Lectin


Tecnica:

1. Adicionar una gota de anti-A1 a tubos adecuadamente marcados.


2. Adicionar una gota de una suspensión de eritrocitos bajo prueba del 3-5% en salina.
Mezclar completamente el contenido del tubo.
3. Centrifugar de 15-30 minutos de 900-1000 rpm.
4. Agitar suavemente el tubo y resuspender el botón celular. Examinar las reacciones
resultantes macroscópicamente. Registrar resultados.

RESULTADOS ESPERADOS DE TIPIFICACION con Inmucor anti-A1 Lectin

GRUPO SANGUINEO Anti-A Anti-A1 Porciento


A1 + + 80% DE TODOS LOS
GRUPOS A
A1b + + 80% DE TODOS LOS
GRUPOS AB
A2 + _ 20% DE TODOS LOS
GRUPOS A
A2B + _ 20% DE TODOS LOS
GRUPOS AB

Método para testar Subgrupos A2 con ANTI-H (LECTINA) Ulex europeaus

Tecnica:

1. Adicione una gota de una suspensión de eritrocitos bajo prueba del 3-5% en salina en
tubos adecuadamente marcados.
2. Adicione dos gotas de anti-H Lectina y mezcle completamente el contenido del tubo.
3. incube durante 5 minutos a temperatura ambiente.
4. Centrifugar de 15-30 minutos a 1000 rpm.
5. Agite suavemente el tubo y resuspenda el botón celular. Examine las reacciones
resultantes macroscópicamente. Registre resultados.

RESULTADOS ESPERADOS DE TIPIFICACION con Inmucor ANTI-H (LECTINA) Ulex


europeaus

PROBLEMA: ANTI A1 ANTI H (ANTI A2) RESULTADO SUBGRUPO:

PACIENTE 1 + - ANTI A1
PACIENTE 2 - + ANTI A2

Una franca aglutinación, es reacción positiva; ausencia de aglutinación lo contrario.


Una aglutinación débil : esperar un minuto más, repetir o testar si es un subgrupo A.

La hemólisis no debe interpretarse como un resultado positivo ya que esto puede indicar
una contaminación del reactivo.

Los subgrupos de B y D tambien existen, son menos frecuentes, pero son fuente de graves
consecuencias si no se detectan correctamente

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Metodo inverso tubo serogrupo

1. Rotular los tubos de ensayo de la siguiente manera: en cada tubo rotular dos números
en la muestra, uno correspondiente del 1 al 4, el otro numero corresponde al que ya traía la
muestra, y con el tipo de eritrocitos con antigeno conocido: A1, A2, B y O. Ejemplo: 1, 213, A1;
,2 ,213, A2; etc.

2. Colocar en cada tubo rotulado dos gotas ya sea de plasma o suero según
corresponda y una gota de los eritrocitos con antigeno conocido.

3. Al concluir lo anterior, llevar los tubos a la centrifuga y centrifugar por solo 15


segundos a una velocidad de 1000 r.p.m. para observar mejor la reacción
antigeno-anticuerpo (formación de un botón).

4. Por ultimo leer los tubos, observando si hubo reacción o no, y correlacionando
los datos obtenidos con el método inverso para determinar el grupo sanguíneo.

Resultados:
Método directo o grupo hemático Grupo indirecto o grupo sérico
Muestra

Anti-A Anti- A1 Anti-B Anti-AB A1 A2 B


1 - - - - + + + O+
2 - - + + + + - B+
3 + + - + - - + A+
4 + - - +/- + - + A2 +
5 + + + + - - - AB +
6 + - + + + - - A2B +

Interpretación:
Para el método directo la lógica fue: si en un tubo hay formación de botón (reacción
antigeno-anticuerpo) quiere decir que los eritrocitos ensayados tienen el antigeno que
reacciona con los anticuerpos presentes en el antisuero para ese tubo; y si no presentan
aglutinación querrá decir que no corresponde el antigeno del eritrocito con el
anticuerpo del antisuero, o que el antigeno esta ausente en esos eritrocitos. Para el
método inverso el razonamiento fue: si en un tubo hay formación del botón (reacción
antigeno-anticuerpo) quiere decir que el plasma del paciente ensayado tiene los
anticuerpos que reaccionan con los eritrocitos con antigeno conocido, los cuales sirven
de reactivo para esta prueba. Por lo tanto una reacción positiva en este método
definitivamente indica que el paciente no tiene eritrocitos con antígenos que
reaccionarían con los anticuerpos de su plasma. De ahí que el método se le nombre
inverso o grupo sérico.

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INTRODUCCIÓN:
El factor Rh se refiere a un tipo de antígenos que se adquieren de forma natural (como
los del grupo A, b, O), pero tambien de forma inmune y que se encuentran en los
glóbulos rojos de la sangre, cuando alguien tiene esos factores se le considera “Rh
Positivo” o que tiene factor rhesus o proteína Rh (pues está expresando el gen D).
Cuando no la tiene es “Rh Negativo”. El factor Rh es hereditario y se encuentra en varios
loci. Una gran parte de la población Rh positiva lo es, debido a la presencia en sus
hematíes de
Los antígenos del locus son el genotipo : D/d C/c E/e
Un alelo dominante D sobre otro d
Un alelo dominante E sobre otro e
Un alelo dominante C sobre otro c
Y en cada individuo, hay que hallar la combinación de los antígenos presentes, según se
exprese su fenotipo :
___/___
C/D/E C/D/e C/d/E C/d/e c/D/E c/D/e c/d/E c/d/e

MATERIAL:
Tubos de ensayo
Pipetas Pasteur
Gradilla
EQUIPO:
Centrifuga

MUESTRA BIOLÓGICA:
Eritrocitos lavados 3-5% del paciente

REACTIVOS:
Antisuero Anti-D
Suero anti globulina humana.
Suero reactivo control
Antisuero D monoclonal
Aspecto: transparente
Color: incoloro

Suero anti globulina Humana


Aspecto: transparente
Color: verde

Reactivo control GAMMA-CLONE


Aspecto: transparente
Color: incolor

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TÉCNICA:
Determinación de Rh

Preparar una suspensión de glóbulos rojos al 3-5 % en solución salina. Los


glóbulos deben ser lavados previamente 5 veces con el objeto de eliminar las
proteínas del plasma y las que no esten pegadas covalentemente al hematíe.
Rotular 3 tubos, para la previa identificación de Rh.
Poner 1 gota de la suspensión lavada en cada tubo.
Añadir una gota de anti suero D monoclonal.
Mezclar y centrifuguar 20 segundos y leer.

Detección de sangre Du

Nota: esta técnica se le realiza a aquellas muestras con resultado negativo al factor D
pero Rh débilmente positivas
Los tubos que no tuvieron aglutinación en la determinación de Rh se incuban
15 min, y posteriormente se lavan 3 veces con sol. Salina
Previamente lavados se le agregan 2 gotas de suero de COOMBS.
Centrifugar 15 seg y observar, desprender boton

ESQUEMAS y RESULTADOS:

INTERPRETACIÓN:
Para el primer método:
Aglutinacion: Rh positivo
No aglutinación: realizar prueba de detección de sangre Du.

Detección de sangre Du
Aglutinación. D débil (Du positivo)
No aglutinación: Rh negativo

Con el descubrimiento del sistema Rh, se denominan Rh positivos a los hematíes que
son aglutinados por el anticuerpo anti-D y tambien a los que son aglutinados por los
anticuerpos del sistema C/c , E/e .
Esta prueba es importante en el diagnostico y estudio de la eritroblastosis fetal, en
la que los glóbulos rojos del niño se encuentran sensibilizados con anticuerpo
materno. Es útil también en el diagnostico de la anemia hemolítica adquirida
(anticuerpos sobre los glóbulo rojos del mismo paciente), así como la determinación
de eritrocitos sensibilizados en sangre usados para transfusión.
Las transfusiones de sangre entre grupos incompatibles pueden provocar una reacción
inmunológica que puede desembocar en hemólisis, anemia, fallo renal, shock, o muerte.

En conclusión los grupos Rh negativos pero Du positivos pueden generar shok en caso
de transfusión pues se comportan como Rh positivos débilmente.

DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO EN GEL. INTRODUCCION:


El sistema utilizado en inmunohematología para investigar e identificar antígenos y anticuerpos
antieritrocitarios en tarjeta es de tecnología de microtipificación y se basa en la separación por
tamaño de los eritrocitos aglutinados, durante un proceso de centrifugación en un gel poroso.
los aglutinados grandes quedan atrapados en la zona superior y los pequeños quedan
distribuidos a lo largo de la columna. Ello nos permite estandarizar la lectura de la reacción de
forma facil y reproductible por lo que disminuye el error del operario.

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OBJETIVO: determinación de los antigenos del sistema ABO, Rh (D) y determinacion del
grupo serico , en tecnica de gel.

FUNDAMENTOS:
deteccion de las reacciones de aglutinacion de los hematies. La aglutinacion se produce
al entrar en contacto los eritrocitos con los anticuerpos correspondientes.

La tarjeta DG gel es un soporte de plastico constituidos por microtubulos. Cada uno


esta formado por una columna y una camara de dispersion/incubacion donde el gel
reaccionará con los hematies y sus reactivos.

La tecnología de microtipificación en gel se basa en la separación por tamaño de los


eritrocitos aglutinados, durante un proceso de centrifugación en un gel poroso.

MATERIAL
Pipeta automática 10 ul, 50ul, 1 ml.
Puntas de pipeta desechable
Tubos de vidrios
DEG sol
Centrifugas para tarjetas DG gel
Hematies de reactivos para grupo inverso.

MUESTRA BIOLOGICA:
Hematíes del paciente

REACTIVO:
Placa de gel
Reactivo de gel sol

TECNICA
1.- determinacion de los antigenos del sistema ABO/Rh.
-preparar una suspension de hematies al 5 % de DG sol. Asegurar la resuspencion de lso
hematies antes de utilizar.
Anadir en cada microtubulos indicados 10 ul de una suspension de hematies al 5%.
2.- determinacion de l grupo serico.
-homogenizar los hematies recativos A1/B
- dispersar el microtubulo N /a1 50 ul de hematies reactivos A1 en un microtubulo N/b 50
ul de hematies reactivos B.
-añadir suero o plasma.
3.- centrigugar en centrifuga para DG sol.
Leer los resultados.

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RESULTADOS

NEGATIVO - Banda de hematies al fondo de la columna, resto de la columna sin


aglutinados

1+ Algunos aglutinados pequeñso en la columna


POSITIVO 2+ Algunos aglutinados a lo largo de la columna
3+ Banda superior de aglutinado muy visible

DP Doble poblacion (doble banda de hematies , en el fondo y en la parte superior.

INTERPRETACION DE RESULTADOS.

GRUPO HEMATICO GRUPO SERICO


microtubo microtubo microtubo microtubo MICROTUBUB MICROTUBUB ABO
A B AB CTL O N+ A O N+ B GRUP
O
- - - - + + 0
+ - + - - + A
- + + + - B
+ + + - - - AB

SISTEMA Rh
Micrutubo D Micrutubo D” Micrutubo INTERPRETACION
CTL
+ + - D positivo
- - - D negativo
- + - D débil parcial
+ - -

RESULTADO E INTERPRETACION

Resultado; A+

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Resultado: B +

Compatibilidad. Pruebas Cruzadas. Coombs directo e indirecto:


INTRODUCCIóN:

La transfusión de sangre o de hemoderivados de un donante a un receptor es una forma de


transplante, para requerir una óptima transfusión actualmente se requiere de aceptaciones
inmunológicas receptor - donante.

Es esencial que toda la sangre sea estudiada antes de la transfusión para: Asegurar que todos los
glóbulos rojos transfundidos son compatibles con los anticuerpos en el plasma del paciente, así
tambien como para evitar estimular la producción de nuevos anticuerpos contra los glóbulos rojos
en el receptor, especialmente anti-Rh D (o cualquier otro anticuerpo inducido o adquirido).

La prueba de Coombs se usa para determinar la presencia de anticuerpos no aglutinantes en el


suero de sujetos sensibilizados a uno o mas antígenos sanguíneos. Es útil en el estudio del suero
de mujeres con isoinmunización materno-fetal y se emplea también en la identificación de
anticuerpos autoinmunes, detección de algunos sistemas sanguíneos, etc.

La prueba se realiza con eritrocitos normales incubados in Vitro con el suero de estudio. Durante
este periodo, si existe un anticuerpo, este se fija sobre su respectivo determinante antigénico. Una
vez fijados, los eritrocitos son igualmente lavados y se agrega el reactivo de Coombs,
produciendo aglutinación.

Una prueba de Coombs positiva significa que existen anticuerpos aglutinantes libres en el suero
de la persona, los cuales puedan ser igualmente auto-anticuerpos o isoanticuerpos.

Material y equipo:
Pipetas automáticas de 10 µl, 25 µl, 50 µl y 1 ml.
Puntas de pipetas desechables
Tubos de vidrio.
Incubador para tarjetas DG Gel.
Centrifuga para tarjetas DG Gel.

Material biológico:
Hematíes reactivo para investigación e identificación de anticuerpos irregulares de Diagnostic
Grifols, S.A.
Suero de hemoclasificación.
Muestras de sangre de extracción reciente, recogida con anticoagulante o sin anticoagulante.

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Reactivos:
Tarjetas DG Gel.
DG Gel Sol.

*Reactivos:
Tarjetas DG Gel Coombs DG Gel Sol
Rango de temperatura: entre 2 y 25 ºC Rango de temperatura: entre 2 y
8ºC
Aspecto: transparente Aspecto: transparente
Color: verde Color: incoloro

TéCNICA: Método manual:

1. Dejar atemperar (18-25ºC) muestras y reactivo.


2. Inspeccionar el estado de las tarjetas antes de utilizar.
3. Identificar las tarjetas y muestras a utilizar.
4. Despegar con precaución la lamina de metal que cubre los microtubos para prevenir
contaminaciones cruzadas entre ellos.
5. Preparar una suspensión con hematíes al 1% en DG Gel Sol (10 µl de sedimento o
concentrado de hematíes en 1 ml de DG Gel Sol). Utilizar los hematíes del donante para la
PC mayor y hematíes del receptor para la PC menor. Asegurar la suspensión de los
hematíes antes de utilizar.
6. Dispensar en el tubo correspondiente, 50 µl de suspensión de los hematíes al 1% del
donante (PC mayor) o 50 µl de suspensión de los hematíes al 1% del receptor (PC menor).
7. Añadir 25 µl de suero o plasma del receptor (PC mayor) o 25 µl de suero o plasma del
donante (PC menor).
8. Preparar auto control con 50 µl de suspensión de los hematíes al 1% del receptor y 25 µl
de suero o plasma del receptor.
9. Incubar 15 minutos a 37 ºC.
10. Centrifugar en la centrifuga para tarjetas DG Gel.
11. Leer los resultados.

Resultados:

Paciente: (AB+)
Donador 1: (A+)
Donador 2: (O+)

M1 m1 M2 m2 Autocontrol
GR de donador 1 + GR del paciente + GR de donador 2 + GR del paciente + GR del paciente +
suero del paciente suero de donador 1 suero del paciente suero de donador 2 suero del paciente
(- ) compatible (+)incompatible - + -

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Interpretación:

Negativo: - Banda de hematíes en el fondo de la columna, resto de la columna sin aglutinados


visibles.
Positivo: +/- Escasos aglutinados de pequeño tamaño en la mitad inferior de la columna.
1+ Algunos aglutinados de pequeño tamaño en la columna.
2+ Aglutinados de tamaño pequeño o mediano a lo largo de la columna.
3+ Banda superior de aglutinados, de tamaño mediano en la mitad superior de la
columna.
4+ Banda de hematíes aglutinados en la parte superior de la columna.
DP: Doble población (doble banda de hematíes, en el fondo y en la parte superior de la
columna.

Por lo antes expuesto se puede deducir que el donador 1 (A+) puede donar eritrocitos al paciente
(AB+), lo mismo que el donador 2 (O+) puede donarle eritrocitos; no así plasma por parte de
ambos donadores pues la prueba muestra que hubo reacción en ambas pruebas menores.

PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUÍNEA(En salino):

INTRODUCCIÓN

Landsteiner constató que cuando un aglutinógeno se pone en contacto con la aglutinina


homóloga se produce una aglutinación.

La compatibilidad sanguínea es la posibilidad de mezcla de sangre sin que se produzcan


trastornos, tales como los fenómenos de la lisis o de la aglutinación.

A causa de este fenómeno biológico en las transfusiones de sangre no es suficiente con conocer
que la sangre del donante y la del receptor son del mismo grupo, o bien que la del donante
pertenezca al grupo O (cero), sino que es necesario conocer si la compatibilidad es perfecta,
porque ningún otro fenómeno de inmunización interfiera. Es en este sentido por lo que son
empleadas las pruebas cruzadas.

Además de los 6 antígenos del sistema ABO en los eritrocitos humanos, existen numerosos
sistemas de aglutinógenos que contienen muchos antígenos individuales en los eritrocitos (más
de 500.000 millones posibles de fenotipos de grupos sanguíneos conocidos). Para evitar
accidentes transfusionales es indispensable tener en cuenta el sistema Rh además del ABO.

Del sistema de antígenos Rh es el D el más antigénico, y el término Rh positivo indica que el


individuo presenta aglutinógeno D. El individuo Rh negativo no tiene antígeno D y forma la
aglutinina anti-D en contacto con éste.

Las reacciones antígeno-anticuerpo pueden observarse in vitro por:

- Hemólisis: la unión antígeno-anticuerpo se traduce en lisis de los eritrocitos en presencia


del complemento (siempre que el anticoagulante empleado no capture los
iones Ca y Mg necesarios para la activación del complemento).
- Aglutinación: los anticuerpos que reaccionan en medio salino se conocen como
anticuerpos completos o aglutinantes (comúnmente tipo IgM).

OBJETIVO:
Determinación de los antigenos del sistema ABO, Rh (D) y su compatibilidad entre un paciente
Donador y un Paciente Receptor.

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MATERIAL EQUIPO
*5 Tubos de ensaye. Microcentrífuga.
*6 Pipetas Pasteur.
*1Gradilla.
Baño María ó Estufa.
*1 Bulbo.
*Papel Parafilm.

MUESTRA
Muestra de sangre con Anticoagulante EDTA.

REACTIVOS

Antisuero RO-Antiglobulina humana (Poliespecífico Anti IgG C-d)


Para prueba de Coombs.
Aspecto: Transparente:
Color: Verde

TÉCNICA

Lavar los eritrocitos con solución salina (3 veces).

SALINA RÁPIDA:
1. Agregar una gota de Eritrocitos Lavados.
2. Diluirlo al 3-5% con solución salina 0.9%.
3. Agregar 2 gotas de suero.
4. Centrifugar y observar, anotar desprendimiento del botón.

PRUEBA MAYOR PRUEBA MENOR AUTOTESTIGO

G. Rojos del DONADOR G. Rojos del RECEPTOR G. Rojos del RECEPTOR


+ (paciente) (paciente)
Suero del RECEPTOR + +
(paciente) Suero del DONADOR Suero del RECEPTOR
(paciente)

SALINA 37° BAÑO MARÍA:


1. Incubar tubos a Baño maría a 37°C durante 1 hora (o 20 min).
2. Centirfugar después de haber pasado el tiempo.
3. Desprender el botón de eritrocitos y observar.

AGLUTINACIÓN– No es compatible.
NO AGLUTINACIÓN - Lavar 3 veces.

SALINA COOMBS:
1. Con solución salina 0.9% lavar los eritrocitos de los tubos q no
tuvieron aglutinación 3 veces.
2. Decantar y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs

AGLUTINACIÓN – No es compatible.
NO AGLUTINACIÓN - Lavar 3 veces.

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RESULTADOS

Paciente: (B+)

Donador 1: (O+)

Donador 2: (A+)

SALINA RÁPIDA:

M1 m1 M2 m2 Autotestigo
GR de donador 1 GR del paciente GR de donador 2 GR del paciente GR del paciente
+ suero del + suero de + suero del + suero de + suero del
paciente donador 1 paciente donador 2 paciente
- 4+ 4+ 4+ -

SALINA 37° BAÑO MARÍA:

M1 m1 M2 m2 Autotestigo
- 4+ 4+ 4+ -
Compatible No compatible No compatible No compatible Compatible

SALINA COOMBS:
M1 Autotestigo
- -

Compatible Compatible

Por lo tanto se puede decir que el donador 1 (O+) puede donar suero al paciente (B+), debido a que
en el suero no hay anticuerpos de ningún tipo que reaccionen con los antígenos de los eritrocios
del Donador 1. Mientras tanto el Donador 2 no puede donar al Paciente ni suero ni eritrocitos.

INTERPRETACIÓN

PRUEBA POSITIVA: Existe una aglutinación de las células sanguíneas que indica la
presencia del antígeno A o B. En el suero de Coombs notamos si esta la precencia de
Antígeno D en los eritrocitos. La hemólisis no se debe interpretar como resultado positivo
ya que puede indicar contaminación del reactivo.

PRUEBA NEGATIVA: La no aglutinación indica un resultado negativo e indica que las


células son negativas para Antígenos del sisitema ABO y D

CONCLUSIÓN
En las transfusiones de sangre no es suficiente con conocer que la sangre del donante y la del
receptor son del mismo grupo, o bien que la del donante pertenezca al grupo O (cero), sino que
es necesario conocer si la compatibilidad es perfecta, porque ningún otro fenómeno de
inmunización interfiera. Es en este sentido por lo que son empleadas las pruebas cruzadas.

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“Prueba de compatibilidad sanguínea (técnica albumina)”

Introducción:

La tipificación de sangre identifica el tipo sanguíneo determinando antígenos presentes en los


eritrocitos, detecta aloanticuerpos en contra esos antígenos. Así los aloanticuerpos pueden
aparecer naturalmente o ser inducidos y pueden ser dirigidos contra del grupo conocido o a los
antígenos de superficie de los eritrocitos. La prueba de compatibilidad sanguínea o cross
matching esta formada por la prueba mayor y menor.La prueba de cruzamiento mayor para los
aloanticuerpos, consiste en probar el plasma del receptor contra los glóbulos rojos del donante.
Es incompatible cuando se genera una reacción hemolítica, los eritrocitos del donante se
destruyen por los aloanticuerpos del plasma del receptor. La prueba menor es una prueba para los
aloanticuerpos del plasma del donante en contra los glóbulos rojos del receptor. Una
incompatibilidad menor es una causa menos frecuente para causar una reacción en contra una
transfusión, porque el volumen de plasma del donante es menor y es diluido marcadamente en el
receptor. Para llevar a cabo dicho procedimiento se utilizan diversos reactivos como
potencializadores que mejoran la unión de eritrocitos con algún tipo de anticuerpo. Uno de esos
potencializadores es la albúmina. La albumina bovina polimerizada es un reactivo muy utilizado en
el laboratorio de inmunohematologia y en centros de bancos de sangre, funciona como un
potencializador que facilita la reaccion de aglutinación de eritrocitos sensibilizados. Al final de la
prueba se prueban los eritrocitos con el reactivo de Coombs. El principio de la prueba de Coombs
fue descrito por Moreschi en 1908, pero Coombs, Mourant y Race, en 1946, la introdujeron en el
estudio de los grupos sanguíneos y anticuerpos, cuando una parte de sangre (suero) fue usada
para la inoculación de animales para inmunizarlos con proteína humana, utilizando el anticuerpo
obtenido en la detección de los llamados anticuerpos incompletos. Esta prueba se usa para
determinar la presencia de anticuerpos no aglutinantes en el suero de sujetos sensibilizados a uno
o mas antígenos sanguíneos. Es útil en el estudio del suero de mujeres con isoinmunización
materno-fetal y se emplea también en otro tipo de pruebas como identificación de anticuerpos
autoinmunes, detección de algunos sistemas sanguíneos y pruebas de compatibilidad sanguínea.
La prueba indirecta se realiza con eritrocitos normales incubados in Vitro con el suero de estudio.
Durante este periodo, si existe un anticuerpo, este se fija sobre su respectivo determinante
antigénico. Una vez fijados, los eritrocitos son igualmente lavados y se agrega el reactivo de
Coombs, produciendo aglutinación. Una prueba de Coombs indirecta positiva significa que existen
anticuerpos libres en el suero de la persona, los cuales puedan ser igualmente auto-anticuerpos o
isoanticuerpos.

Objetivo: Determinación de los antígenos del sistema ABO, Rh (D) y su compatibilidad entre un
paciente Donador y un Paciente Receptor.

Material y equipo:
5 Tubos de ensaye.
6 Pipetas Pasteur.
1Gradilla.
1 Bulbo.
Papel Parafilm.
Microcentrífuga.
Baño María ó Estufa.

Material biológico:
Muestras de sangre de extracción reciente, recogida con anticoagulante o sin
anticoagulante.

Reactivos:
Suero de Coombs*
Albúmina bovina °

*Suero anti-globulina humana Lote 406. Cad: 31/01/18. Color: verde. Aspecto: transparente.
°Albumina de bovino polimerizada Interbiol. Lote APO107. Cad: 15/01/19. Color: incoloro. Aspecto:
transparente.

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Técnica:

1. Montar prueba mayor 1 y 2, prueba menor 1 y 2, y autotestigo, con el procedimiento ya


anteriormente conocido.
2. Agregar 2 gotas de albúmina al 22%.
3. Centrifugar 20 segundos.
4. observar aglutinación o hemolisis, o no aglutinación.
5. A los tubos con lecturas negativas, incubar 20 minutos en baño María a 37 °C.
6. Centrifugar y observar:
Aglutinación o hemólisis: reportar incompatible.
No aglutinación: llevar a Coombs.

7. Lavar tres veces, decantar, y quitar el exceso de salina con gasa y agregar 2 gotas de
reactivo de Coombs y centrifugar 20 segundos y observar:
Aglutinación o hemólisis: reportar incompatible.
No aglutinación: reportar compatible.

Resultados:

1 PRUEBA MAYOR 1: 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de G.R. al 3-5% del
donador 1.
2 PRUEBA MENOR 1: 2 Gotas de suero del donador 1 + 1 gota de G.R. al 3-5% del
paciente.
3 PRUEBA MAYOR 2: 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de G.R. al 3-5% del
donador 2.
4 PRUEBA MENOR 2: 2 Gotas de suero del donador 2 + 1 gota de G.R. al 3-5% del
paciente.
5 AUTOTESTIGO: 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de G.R. al 3-5% del paciente.

M1 m1 M2 m2 Autotestigo
Con albúmina. - - - - -
Después de incubación a 37 °C. - - - - -
Después de Coombs. - - - - -
Después de validación con glóbulos + + + + +
positivos.

Interpretación:

Prueba positiva: Alutinación o hemolisis. Indica no compatibilidad.


Prueba negativa:No aglutinación. Indica compatibilidad.

ESQUEMAS:

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Conclusión:

La prueba de compatibilidad sanguínea en su modalidad con albúmina bovina ofrece mucha


ventaja al ser, al igual que otros reactivos, un potencializador de la reacción antígeno-anticuerpo.
Esto permite que el operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certeza en los
resultados que obtenga.

PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS.

FUNDAMENTO:

LISS es utilizado para reducir la fuerza iónica del medio de reacción en los procedimientos de
detección e identificación de anticuerpos y en las pruebas de compatibilidad. La presencia de este
reactivo refuerza la interacción antígeno - anticuerpo durante la incubación.

GENERALIDADES:
El uso de solución salina de baja fuerza iónica fue descrito inicialmente en 1964 por Hughes-Jones
y col. y Elliot y col., pero en ese tiempo su uso era limitado ya que la concentración molar obtenida
provocaba la hemólisis de los eritrocitos suspendidos.

En 1974, Low y Messeter describieron el uso rutinario de la solución Liss de 0,03 M que lograba
reducir el tiempo de incubación y no presentaba tendencia a la hemólisis al ser suspendidos en
salina a baja fuerza iónica, restableciendo la presión osmótica de la solución mediante la adición
de glicina.
Las soluciones de baja fuerza iónica son actualmente las más utilizadas en inmunohematología,
provocando un aumento en la velocidad de asociación entre antígenos y anticuerpos permitiendo
así acortar el tiempo de incubación de 60 minutos a 10-15 minutos, sin sacrificar la sensibilidad de
las mismas y sin costos elevados.Se ha observado que las reacciones antígeno-anticuerpo se ven
potenciadas al reducir la fuerza iónica del medio de reacción.

La fuerza iónica es uno de los factores más importantes que determinan la tasa y la cantidad de
captación de anticuerpos por parte de los eritrocitos. El uso de medios de reacción de baja fuerza
iónica permite disminuir el tiempo de incubación y potenciar las reacciones de los anticuerpos sin
incrementar las reacciones inespecíficas.

Los iones Na+ y Cl-, presentes en la solución salina fisiológica, se agrupan alrededor de las
moléculas de antígeno y anticuerpo neutralizando sus cargas opuestas, lo cual dificulta la unión
entre ellos. Este efecto se reduce utilizando soluciones de baja fuerza iónica y disminuyendo de
esta manera la incubación de las pruebas.

En esta etapa de sensibilización, las posibilidades de asociación pueden incrementarse mediante


agitación, centrifugación y/o variación de la concentración del anticuerpo.

Después de que el anticuerpo se ha fijado al antígeno, los eritrocitos sensibilizados deben unirse
para dar lugar a la aglutinación visible; esta red también solidifica y estabiliza la reacción.

En esta etapa la reacción depende de factores como las características del anticuerpo, localización
en la membrana y número de sitios antigénicos, fuerzas que mantienen la distancia entre los
eritrocitos.

Las características del anticuerpo que deben considerarse son el tamaño del anticuerpo
involucrado y el número de sitios de combinación con el antígeno. Los anticuerpos IgM pueden
establecer puentes entre los eritrocitos y aglutinarlos espontáneamente en solución salina,
mientras que los IgG no, ya que las IgM, pentaméricas poseen 10 sitios de combinación con el
antígeno y las IgG dímeros sólo dos sitios.

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Los eritrocitos tienen una carga neta negativa en su superficie, su interacción con los iones del
medio altera esta carga y producen una carga neta crítica denominada potencial zeta, y la
reducción de dicha carga permite que los eritrocitos se aproximen lo suficiente para que sean
aglutinados por medio de los IgG que los sensibilizaron.

Las soluciones de baja fuerza ionica empleadas en banco de sangre tienen un pH entre 6.5 – 7.0,
se recomienda una osmolalidad de 270 – 305 mosm/kg y una conductividad de 3.7 mm/cm. El
control diario implica el examen de su apariencia física: ausencia de turbidez, particulas o
sedimento, así como, corroborar la capacidad para generar hemólisis, crenacion o prueba de
coombs positiva en eritrocitos normales. Cada lote nuevo se valora mediante el rastreo de un
anticuerpo ya sea un anti- D, un anti- jk, anti- fy o anti- kell diluido; se compara su capacidad de
detección contra un medio salino normal incubando 10min a 37ºC, en LISS debe poder rastrearse
un anticuerpo, en tanto que en medio salino no.

MATERIAL Y EQUIPO:

Material Cantidad
10 Tubos de ensayo de 12 x 75
1 Gradilla
10 Pipetas pasteur
1 Bulbo
1 Marcador
1 Microcentrífuga
1 Baño María

MATERIAL BIOLOGICO:

Glóbulos rojos lavados al 3 - 5%


Suero

REACTIVOS:

Reactivo de LISS
Reactivo de Coombs

TECNICA:

1.- Lavar los eritrocitos:

Separar el suero del paquete de glóbulos rojos.


Agregar cierta cantidad de eritrocitos a un tubo de ensayo y agregarle solución salina
Centrifugar y decantar
Repetir este proceso 3 veces

2.- Realizar la Prueba de LISS:

Enumerar los tubos


Poner dos gotas de LISS en cada tubo, agregar una gota de eritrocitos lavados y al 3 - 5%,
según el número de tubo correspondiente,
Mezclar y centrifugar un minuto, decantar el sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar
el exceso del reactivo.
Poner nuevamente 2 gota de LISS, resuspender por agitación, agregar 2 gotas de suero
problema, mezclar, incubar 15 minutos a 37º C. centrifugar 30 seg. A 1000 R.P.M.
Anotar los resultados.

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3.- A las pruebas negativas realizar Coombs:

Lavar 3 veces las células, agregar suero de Coombs, centrifugar 30 seg.


Leer aglutinaciones y anotar resultados.

REACTIVOS UTILIZADOS:

REACTIVO MARCA FECHA DE ASPECTO COLOR LOTE


CADUCIDAD
Suero Antiglobuina Lafon 31/ 01/ 2019 Transparente Verde 406
humana
LISS Casero 1 año Transparente Transpare
realizado en nte
CMN SIGLO ----------
XXI

PACIENTE: O (+)
DONADOR 1: O (+)
DONADOR 2: A (+)

RESULTADOS:

Tubo Resultado
M1 NEGATIVO
m1 NEGATIVO
M2 POSITIVO
M2 NEGATIVO
AUTOTESt. NEGATIVO

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

La hemólisis o la aglutinación representan un resultado positivo e indican la presencia de una


reacción antígeno-anticuerpo. Los resultados negativos no se vera aglutinación o hemolisis.

ESQUEMAS:

CONCLUSIONES:

la prueba de compatibilidad sanguínea en su modalidad con liss ofrece mucha ventaja al ser, al
igual que otros reactivos, un potencializador de la reacción antígeno-anticuerpo. Esto permite que
el operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certeza en los resultados que
obtenga.

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DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO

PRUEBA DE COOMBS DIRECTA

El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contra los propios glóbulos
rojos (GR) de un individuo. Es una prueba que sirve para demostrar el revestimiento de los
eritrocitos in vivo, (mientras los eritrocitos están circulando en el individuo). La prueba se realiza
agregando directamente el reactivo de Coombs a los eritrocitos, previamente lavados para
eliminar otras proteínas no fijadas a el; una prueba directa positiva significa que la relación
antígeno-anticuerpo ocurrió in vivo, es decir que la fijación del anticuerpo sobre el antígeno se
realizo en el organismo del individuo en estudio.

Las indicaciones principales de esta prueba son: diagnostico de enfermedades hemolíticas,


ictericia o anomalías en la apariencia de los glóbulos rojos bajo el microscopio, ya que estos
anticuerpos algunas veces destruyen los glóbulos rojos y causan anemia; para investigar
reacciones en transfusiones. Para investigar la inducción de drogas en células rojas sensibilizadas,
medicamentos (por ejemplo, quinidina, metildopa, procainamida y otros) que pueden llevar a la
producción de estos anticuerpos.

OBJETIVO: Determinar la presencia de anticuerpos en la superficie de los hematíes del individuo.

MATERIAL
10 Tubos de 12/75
10 Pipetas Pasteur
1 Gradilla.
1 Bulbo.
Papel Parafilm.
Microcentrífuga.
Baño María a 37°C.

MUESTRA BIOLOGICA:

Eritrocitos lavados de (3-5%) del donador o paciente.


REACTIVO:

Suero de Coombs*
*Suero anti-globulina humana Lafon. Lote 406 Cad: 31/01/19. Color: verde. Aspecto: transparente.

TECNICA:

Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota de globulos rojos (3-
5%).
Centrifugar a 1000 rpm durante 20 seg.
Desprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacion.
Rotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones (½,¼,1/8...)
Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8.
Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotas de suero de
Coombs.
Colocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5%), mezclar completamente y
agregar al tubo #1
Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg.

LECTURA:

Aglutina.- Prueba de Coombs directa es positiva.


No aglutina.- Prueba de Coombs directa es negativa.

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ESQUEMAS y RESULTADOS:

DILUCIONES
½ positiva
¼ positiva
1/8 positiva
1/16 negativa
1/32 negativa
1/64 negativa
1/128 negativa
1/256 negativa

CONCLUSION:

la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir la presencia de anticuerpos
en la superficie de los glóbulos rojos que se encuentran circulando en el paciente y se realiza para
investigar reacciones en transfusiones además sirve para la determinación de anemia hemolítica
autoinmune entre otras afecciones.

IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES

Fundamento:
Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que el individuo entra en contacto con el
medio ambiente y en el cual se encuentran microorganismos como algunas bacterias coliformes
que contienen sustancias químicas en su estructura parecidas a las de este sistema. Por
anticuerpos regulares debemos identificar a los que existen en todos los individuos y que éstos
tendrán durante toda su vida.

Los anticuerpos irregulares son los que no están de esa manera, aunque en el caso de los
naturales no se conoce a ciencia cierta qué o cómo se induce su producción. Los adquiridos se
conocen también como inmunes y son el resultado de la exposición a antígenos desconocidos por
el individuo al momento de la transfusión o en las mujeres por el embarazo; estos anticuerpos
son dirigidos contra antígenos de sistemas diferentes al ABO.

Los anticuerpos naturales regulares son preferentemente inmunoglobulinas M, las cuales fijan de
manera tan eficiente el complemento que pueden provocar lisis intravascular y ocasionar
insuficiencia renal o incluso la muerte del paciente. Los anticuerpos adquiridos o inmunes son
generalmente inmunoglobulinas G, las cuales producen hemólisis extravascular en el bazo o en el
hígado mediante fagocitosis del complejo eritrocito más anticuerpo.

Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) más comunes en nuestra población son los que
involucran a los sistemas MNSs, P1, Kidd (Jka, Jkb), Duffy (Fya, Fyb), Kell, Lewis y Diego.

OBJETIVO: identificación del anticuerpo irregular a través de las diferentes técnicas.

MATERIAL EQUIPO
10 Tubos de ensaye. 1. Microcentrífuga.
10 Pipetas Pasteur. 2. Baño María ó Estufa.
1Gradilla.
1 Bulbo.
Papel Parafim.

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MATERIAL BIOLOGICO:
Glóbulos rojos lavados al 3 - 5%
Suero

REACTIVOS
Reactivos:
1. Suero de Coombs*
2. Albúmina bovina
3. SOLUCION SALINA
4. SOLUCION DE LISS

TÉCNICA SOLUCION SALINA

Lavar los eritrocitos con solución salina (3 veces).

SALINA RÁPIDA:
Agregar una gota de Eritrocitos Lavados.
Diluírlo al 3-5% con solución salina 0.9%.
Agregar 2 gotas de suero.
Centrifugar y observar, anotar desprendimiento del botón.

SALINA 37° BAÑO MARÍA:


1) Incubar tubos a Baño maría a 37°C durante 1 hora (o 20 min).
2) Centirfugar después de haber pasado el tiempo.
3) Desprender el botón de eritrocitos y observar.
AGLUTINACIÓN– No es compatible.
NO AGLUTINACIÓN - Lavar 3 veces.

SALINA COOMBS:
1) Con solución salina 0.9% lavar los eritrocitos de los tubos q no
tuvieron aglutinación 3 veces.
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs
AGLUTINACIÓN – No es compatible.
NO AGLUTINACIÓN - Lavar 3 veces.

TECNICA LISS

1. Poner dos gotas de LISS en cada tubo, agregar una gota de eritrocitos lavados y al 3 - 5%,
según el número de tubo correspondiente,
2. Mezclar y centrifugar un minuto, decantar el sobrenadante y con la ayuda de una gasa
limpiar el exceso del reactivo.
3. Poner nuevamente 2 gota de LISS, resuspender por agitación, agregar 2 gotas de suero
problema, mezclar, incubar 15 minutos a 37º C. centrifugar 30 seg. A 1000 R.P.M.
4. Anotar los resultados.

A las pruebas negativas realizar Coombs:

1. Lavar 3 veces las células, agregar suero de Coombs, centrifugar 30 seg.


2. Leer aglutinaciones y anotar resultados.

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TECNICA ALBUMINA BOVINA


8. Agregar 2 gotas de albúmina al 22%.
9. Centrifugar 20 segundos.
10. observar aglutinación o hemolisis, o no aglutinación.
11. A los tubos con lecturas negativas, incubar 20 minutos en baño María a 37 °C.
12. Centrifugar y observar:
Aglutinación o hemólisis: reportar incompatible.
No aglutinación: llevar a Coombs.

13. Lavar tres veces, decantar, y quitar el exceso de salina con gasa y agregar 2 gotas de
reactivo de Coombs y centrifugar 20 segundos y observar:
Aglutinación o hemólisis: reportar incompatible.
No aglutinación: reportar compatible.

Resultados
ANTICUERPO IRREGULAR: Anticuerpo c.

Interpretación
Estos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo M y ocasionalmente tipo G, y debido a
esa temperatura de reacción carecen de importancia clínica salvo que su reacción ocurra también
a 37 °C, su importancia radica en pacientes que serán intervenido a 22 ºc como es el caso de
operación de corazón.

Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura óptima de reacción a 37 °C, a Estos
anticuerpos tienen una relevante importancia clínica ya que se les asocia con reacciones
transfusionales de intensidad moderada a severa, que pueden ocasionar la muerte.

Esquemas:

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CONCLUSION:
Es importante determinar los anticuerpos irregulares ya que estos anticuerpos tienen una
relevante importancia clínica ya que se les asocia con reacciones transfusionales de intensidad
moderada a severa.

FIN

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