DETERMINACIÓN DE ETANOL EN UNA BEBIDA ALCOHÓLICA POR

CROMATOGRAFÍA DE GASES.
Ana María Vera Escamillaa (1367108), Luisa Fernanda Santa Francob (1438887),Lina
Johanna Materon Canartec (1223066)
aanamar-1996@hotmail.com,
bluifernanda2005@hotmail.com,clina.materon@correounivalle.edu.co

Facultad de Ciencias Naturales y Exactas, Departamento de Química, Universidad del Valle,

Colombia.
Fecha de Realización: 04-06-2016
Fecha de Entrega: 07-06-2016.
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Resumen. Se determinó etanol en una muestra de aguardiente Blanco del Valle por cromatografía de gases,
haciendo uso de un cromatógrafo modelo GCMS-QP2010 marca Shimadzu, la cuantificación se realizo
mediante una curva de calibración por patrón interno obteniéndose una concentración de 33,25 ± 3,94 % (v/v).
Se hallaron los límites de cuantificación del método siendo de 31,60% (V/V) y un porcentaje de error del 14,70%

Palabras Clave: cromatografía de gases, curva de calibración, etanol

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1. DATOS CÁLCULOS Y RESULTADOS.

Tabla 1. Datos de los estándares preparados para la elaboración de curva de calibración
.
Estánda Volumen Área Volume Concentració Área CA/CP AA/AP
[EtOH]
r EtOH EtOH n BtOH n (%V/V) BtOH BtOH I I
1 0,5 0,50 34931733 1,0 0,99 12055367 0,50 0,29
2 1,0 1,00 49361337 1,0 0,99 76938106 1,01 0,64
3 1,5 1,50 53083541 1,0 0,99 77174488 1,51 0,69
4 2,0 2,00 90953139 1,0 0,99 89620648 2,02 1,01
5 2,5 2,50 91930392 1,0 0,99 65170255 2,52 1,41
6 3,0 3,00 89493466 1,0 0,99 54569187 3,03 1,64

Tabla 2. Datos usados para la curva de calibración. Con los datos de la tabla 2, se procede a realizarse
la curva de calibración, presentada en la gráfica 1.
Estándar [EtOH]/[ButOH] A-EtOH/A-ButOH
1 0,50 0,29 2.00
y = 0.5315x + 0.0089
A-EtOH/A-ButOH

2 1,01 0,64 1.50

3 1,51 0,69
1.00
4 2,02 1,01
5 2,52 1,41 0.50
6 3,03 1,64 0.00
Promedio 1,77 0,947 0.00 1.00 2.00 3.00 4.00
[EtOH]/[ButOH]
Desviación 0,423074225 0,231795319
Gráfica 1. Curva de calibración realizada con el
%CV 23,95787119 24,46535855 método de patrón interno.
Varianza 0,7159672 0,21491628
De acuerdo con el arreglo lineal aplicado, regresión Con estos valores ya estimados por el método de
por mínimos cuadrados. Se obtienen los datos mínimos cuadrados, se obtiene la ecuación de la
registrados en la tabla 3. recta.
𝒀 = (𝟎, 𝟓𝟑𝟏𝟓 ± 𝟎, 𝟏𝟐𝟗𝟑)𝑿 + (𝟎, 𝟎𝟎𝟖𝟗 ±
Tabla 3. Estimación lineal por medio del método 𝟎, 𝟐𝟓𝟗𝟏) [Ec. 1]
de mínimos cuadrados.
Con la ecuación 1 se procede a calcularse el
Variable Valor contenido de etanol en una muestra de
Sxy 0,778914534 Aguardiente blanco del valle, los resultados se
Sx 1,209857498 encuentran registrados en la tabla 4.
Sy 0,648983475
r 0,992023472 Con el resultado promediado de las tres muestras
tr 13,6310218
tomadas, se procede a realizarse el cálculo para la
tcrit (n-1=5) 2,571
cantidad de Etanol presente en la muestra teniendo
cuenta que sólo se tomaron 6 mL ± 0,028
Ho X y Y No correlacionan
H1 X y Y Correlacionan 1,9949 𝑚𝐿 𝐸𝑡𝑂𝐻
𝑉 100 𝑚𝐿 ∗
Criterio FALSO [𝐸𝑡𝑂𝐻] (% ) = 100 𝑚𝐿 𝑆𝑙𝑛 ∗ 100
Conclusión X y Y Correlacionan 𝑉 6 𝑚𝐿 𝐴𝑔𝑢𝑎𝑟𝑑𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒
[𝐸𝑡𝑂𝐻] = 33,25 % ± 3,94
Sxx 4,454907025
Syy 1,292210917
La cantidad de etanol reportada en la etiqueta de la
Sxy 2,367672027
botella de aguardiente señala
b 0,531475071 |33,25 − 29,00|
% 𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 = ∗ 100 = 14,70%
a 0,008906308 29,00
RSS 0,011284086
Sr 0,10622658
Sb 0,050328487
Sa 0,100775383

Tabla 4. Resultados según la curva de calibración para la determinación de la muestra

[EtOH]/[ButOH]

Incertidumbre
Aguardiente
Volumen de

Área ButOH

Desviación
Área EtOH

A-EtOH/A-
Muestra

[ButOH]
[EtOH]

ButOH

MA 6,00 1,9533 94451591 0,9900 89312466,000 1,973064607 1,058 0,083922 0,233

ML 6,00 2,2932 85027223 0,9900 68571511,000 2,316331667 1,240 0,09682389 0,269

Mlu 6,00 1,7383 90065867 0,9900 95599212,000 1,755892399 0,942 0,0816026 0,227

Promedio 6,00 1,9949 89848227 0,9900 84494396,333 2,015096224 1,080 0,08494059 0,236
Determinación de los límites analíticos del muestras se depositan en una bandeja, allí llega un
método. “brazo mecánico” y toma cada frasco y lo lleva a el
sistema de inyección en donde el muestreador
Tabla 5. Límites analíticos del método enjuaga la microjeringa con la muestra a medir,
inyectándola por la parte superior del frasco, que
Cromatografía de Gases para la determinación de tiene un tapón de septum de goma, posteriormente
Etanol. la microjeringa se inserta en un inyector, que está
en la parte superior del cromatografo, de ahí pasa
Valor (mL a una cámara de vaporización (figura 3.1), la
Límites Valor Etanol/100 mL de cámara se encuentra casi siempre a una
Aguardiente) temperatura por encima de los 50 ºC del
LOD 0,294791655 4,913194251 componente menos volátil de la muestra, allí ésta
se vaporiza, se mezcla con el gas portador (fase
LOQ 1,896145051 31,60241751 móvil) y es llevada a la columna. Cabe resaltar que
LC 3,982840903 66,38068172 el sistema de inyección se trabajó en modo “divisor
de muestra” que permite entregar una fracción de
Estos límites se determinan a partir de las muestra pequeña (1:50 a 1:500), el resto de
muestra se desecha, dado que se corre el riesgo
ecuaciones 2 a 4.
del taponamiento de la columna capilar a causa del
disolvente o la muestra misma.
Valor crítico. LC. Una de las ventajas de trabajar con un auto-
muestreador es que tiene una mejor precisión en
𝐿𝐶 =
1,645𝑆0 −𝑎
(Ec.2) condiciones de reproducibilidad en comparación a
𝑏 un analista que muestree manualmente, de igual
manera se puede resaltar el ahorro de tiempo, dado
Límite de Detección. que con el auto-muestreador se puede programar
el equipo para que trabaje solo [3, 4, 5]. Por otro lado
𝐿𝑂𝐷 =
3,29𝑆0 −𝑎
(Ec.3) una de las desventajas es que al trabajar en modo
𝑏 “divisor de muestra” la cantidad de analito que es
separada y llega al detector es muy pequeña, por
Límite de Cuantificación. lo tanto los límites de detección aumentan, lo que
𝐿𝑂𝑄 =
(𝑦𝑏+10𝑆0 )−𝑎
(Ec.4) es un gran inconveniente para el análisis de trazas
𝑏 [5].

2. DISCUSIÓN DE RESULTADOS.

La cromatografía de gases consiste en que la

muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de
una columna cromatográfica, en donde se va a
producir la elución por el flujo de una fase móvil de
gas inerte. Para hacer las mediciones se usó un
cromatografo de gases modelo GCMS-QP2010
marca Shimadzu, está compuesto de un sistema de
inyección de muestra, un sistema de gas portador,
una columna capilar y un detector de
espectrometría de masas [2].

Para la inyección de muestra, patrones y blanco se

usó un automuestreador con bandeja automática,
que al igual que la inyección manual, trabaja con
una microjeringa hipodérmica. Los frascos para las
Figura 3.1. Sistema de inyección “divisor de
muestra”
Para la introducción de la fase móvil se tiene un
sistema de gas portador, el cual contiene un
regulador de presión de dos etapas ubicado en el
cilindro contenedor del gas y un regulador de
presión dentro del cromatografo de gases.
Los períodos de entrada del gas oscilan entre 10-
15 psi, por encima de la presión del entorno, lo que
ocasiona una entrada de flujos de 1 a 25 mL/min.
El gas portador es un gas inerte, para esta
determinación se usó el helio [3].
La columna que se usó es una XTI-5 marca Restek,
es una columna hecha de cobre y tiene una fase
estacionaria que está compuesta por 5 % de difenil
y 95 % de dimetilpolisiloxano, posee un tamaño de
partícula de 0,25 µm [2]. La columna se encontraba
en forma de helicoide, y tenía un diámetro de 30
cm, esto con el fin de colocarla en el interior de un
termostato, de igual manera poseía un diámetro
interno de 0,25 mm. La fase estacionaria que posee
este tipo de columna tiene la ventaja de tener
diferentes polaridades en toda la estructura, por lo
tanto presentara una mejor selectividad.
El ingreso de la muestra se da por la acción de la
fase móvil, los analitos se distribuyen en la fase
estacionaria en orden creciente de polaridad
(primer tempo de retención), posteriormente se
introduce una nueva cantidad de fase móvil, con el
objetivo de que los analitos avancen hacia abajo de
la columna (segundo tiempo de retención),
finalmente se agrega una nueva cantidad de fase
móvil para el aislamiento de los analitos
individualmente, hasta que llegan al extremo de la
columna capilar (tercer y cuarto tiempo de
retención), es decir son eluidos o lavados de la
columna, allí se detectan o se recogen [3,5,6].
Una de las ventajas de trabajar con columnas
capilares en contraste con las columnas
empaquetadas es que al no llevar un soporte para
la fase estacionaria, hace que la columna se pueda
hacer más angosta y más larga ocasionando una
mayor eficiencia [3].
Por otro lado una de las desventajas de trabajar
con este tipo de columna es su fácil taponamiento,
a causa de su pequeño diámetro interno, lo que
conduce a trabajar con sustancias en lo posible
puras.
El detector de espectrometría de masas está
compuesto por una fuente de iones sencilla, que es
un filamento de wolframio, que se calienta y emite
electrones, después se aplica una diferencia de
potencial de 70 V, entre el filamento y un ánodo,
con el objetivo de acelerarlos hacia la muestra, que
está ubicada perpendicularmente al haz de
electrones (figura 3.2), al chocar la muestra y el haz
de electrones, se ioniza, generalmente se
producen iones con una sola carga positiva, estos
iones son atraídos a través de la rendija hacia una
primera placa de aceleración mediante una
diferencia de potencial (5 V), que se aplica también
entre las otras dos placas repulsoras (figura 2),
seguidamente entran en el analizador de masas,
que en este caso es un cuadrupolo, en donde los
iones se dispersan en base a su relación de masa-
carga, finalmente el haz de iones se convierte en
una señal eléctrica gracias a un multiplicador de
electrones, que actúa como detector y transductor,
que es transformada, precisada, almacenada y
registrada en la memoria de un computador, que
posee un software en donde se puede ver y
registrar el espectro de masas, los tiempos de
retención, etc. [2,3].
Figura 3.2. Fuente de iones por impacto de
electrones
La cuantificación de etanol se llevó a cabo en el
aguardiente Blanco del Valle, la cual es una bebida
hecha con alcohol etílico (componente principal), el
cual se sintetiza generalmente de la caña de azúcar
y se encuentra a una concentración aproximada de
29 % v/v, es fabricado por las industrias licoreras,
en cantidades excesivas es perjudicial para la salud
[1].
Los resultados obtenidos permiten determinar con
una precisión y una incertidumbre aceptable,
debido a que el límite de cuantificación, valor
mínimo que es capaz de detectar el método con la
incertidumbre generada por la curva de calibración,
da un resultado muy cercano al valor real reportado
para el “Aguardiente Blanco del Valle”, el error
encontrado respecto al límite de detección es de
6,89% y respecto al análisis realizado es de
14,70% el cual es un valor aceptable, aunque con
la sensibilidad presentada por el equipo con el cual
se analizaron las muestras, que es un equipo de
cromatografía de Gases acoplado a un analizador
de masas. Se encuentra que el compuesto de la
muestra presenta tres picos en el cromatograma y
aparece un derivado del butanol. El cual puede
haber alterado el resultado de obtenido.
Los límites de detección y cuantificación indican
que los valores y la sensibilidad de este método son
aceptables.
Las posibles fuentes de error, se encuentran en la
preparación de la muestra y como tal, errores
netamente experimentales, errores humanos de la
preparación de las muestras, debido a la alta
sensibilidad del equipo con el cual se trabaja el cual
puede detectar trazas, por lo tanto se puede
presentar un error, pero como fue evidenciado es
muy bajo comparado con otros análisis como lo fue
por medio de refractometría el cual fue de 64,1%
de error, se encuentra una mayor sensibilidad para
este método.
3. RESOLUCIÓN DE PRESUNTAS.
A. CON BASE EN LA INFORMACIÓN
SUMINISTRADA SOBRE LA
COLUMNA, DESCRIBA Y EXPLIQUE
DE QUE ESTA COMPUESTA LA FASE
ESTACIONARIA. ¿CUÁLES
INTERACCIONES (SOLUTO-FASE
ESTACIONARIA) PUEDEN DARSE CON
LA MUESTRA ESTUDIADA? ¿DICHAS
INTERACCIONES EXPLICAN EL
ORDEN DE ELUCIÓN OBSERVADO?
EXPLÍQUE.
La columna está hecha de cobre y tiene una
fase estacionaria que está compuesta por 5 %
de difenil y 95 % de dimetilpolisiloxano
Las interacciones que allí ocurren son entre la
nube electrónica Π (pi) de los fenilos y el grupo
OH, y son atribuidas a interacciones o fuerza
de Van der Waals. [1]
Las anteriores interacciones son la causa de
obtener un orden de elución como el que se
observó en la práctica, puesto que el 5% del
peso total de la fase estacionaria está
constituida por grupos fenilos, los cuales, se
encuentra con un grupo hidroxilo
correspondiente al etanol, y lo retienen por la
interacción de las fuerzas ya mencionadas,
para luego ser liberado debido a el flujo de la
fase móvil y así mientras la muestra se
encuentra atravesando la columna, éstos van
inmovilizando y liberando los grupos OH
constante mente hasta que estos sale de la
columna.
B. CALCULE LA EFICIENCIA DE LA
COLUMNA EN TÉRMINOS DEL
NÚMERO TOTAL DE PLATOS
TEÓRICOS (N), Y LA ALTURA
EQUIVALENTE A UN PLATO TEÓRICO
(H=L/N) EN mm.
Eficiencia de la columna:
- Número total de platos teóricos (N) =
Tiempo de retención (TR) = 1,65 min
Anchura de la base del pico (W)=0,45min
𝑇𝑅 2
N = 16( ) (ecu. 5)
𝑊
N= 16 (1,65 min / 0,45min) 2 = 215, 11
- Altura equivalente de un plato teórico (H):
L = longitud de la columna = 30 m
𝑳
𝑯= (ecu. 6)
𝑵
H= (30 m / 215,11) = 0,14 m
H = 140 mm.
C. ¿QUÉ CARACTERISTICA DEBE TENER
UN COMPUESTO PARA SER USADO
COMO PATRÓN INTERNO EN UNA
CUANTIFICACIÓN POR
CROMATROGRAFÍA DE GASES?
El estándar o patrón interno debe ser un compuesto
de estructura o naturaleza similar a la del analito
pero que no se encuentre presente en la muestra y
debe ser incorporado en una cantidad fija a los
estándares de trabajo y a la muestra.
4. CONCLUSIONES.
 El equipo de cromatografía de gases demostró
ser un equipo de fácil manipulación, al incluir
este un automuestrador que mejoro la
precisión del análisis.
 La determinación de Etanol por medio de CG-
MS, permite una mayor sensibilidad del
método y una mayor selectividad donde se
calcula con mayor exactitud el contenido de
etanol en una muestra de aguardiente.
 Al comparar los métodos de Refractometría y
GC-MS el error encontrado para la
determinación de Etanol en la misma muestra
de Aguardiente, se encuentra que es más
sensible el método de GC-MS.
 Los límites de cuantificación del método GC-
MS son más cercanos al valor real reportado
por la etiqueta.
.
5. REFERENCIAS.
[1] Aguardiente Blanco del Valle disponible en:
http://www.ilvalle.com.co/index.php. (revisado
04 de junio del 2016).
[2] Shimadzu Gas Chromatograph Mass
Spectrometer disponible en:
http://www.ssi.shimadzu.com/products/literatu
re/Mass_Spec/GCMS-QP2010_Plus_F.pdf.
(revisado 04 de junio del 2016).
[3] SKOOG, D. HOLLER, J. NIEMAN, T. Principio
de Análisis Instrumental. 6ta edición. Cengage
Learning Editores. DF. México, 2008. Pág. 17,
281-292, 470-472, 788-806.
[4] Cromatografía de gases disponible
en:https://rua.ua.es/dspace/bitstream/10045/8
247/4/T3gascromat.pdf. (revisado 04 de junio
del 2016).
[5] Cromatografía de gases disponible
en:http://www.mncn.csic.es/docs/repositorio/e
s_ES/investigacion/cromatografia/cromatograf
ia_de_gases.pdf. (revisado 04 de junio del
2016).
[6] Gas Chromatography disponible en:
http://teaching.shu.ac.uk/hwb/chemistry/tutori
als/chrom/gaschrm.htm. (revisado 04 de junio
del 2016).
[7] Hernandez, F. Foces, C. Martinez, M.
Cristalografía, editorial CSIC. España 2000. Pp
165