Plantas y Suelos 260: 69-77, 2004.

© 2004 Kluwer Academic Publishers. Impreso en los Países Bajos.

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Acidificación inducida del sistema radicular y su efecto sobre el exceso de

absorción de cationes por la fijación de N2 de Lupinus albus, cultivado en
suelo deficiente de fósforo.

J. Shen1,2,4, C. Tang3, Z. Rengel2 Y F. Zhang1

1Departamento de Nutrición Vegetal, Universidad Agrícola de China, clave Laboratorio de Interacciones Planta-
Suelo, Ministerio de Educación, Beijing 100094, PR China. 2Ciencias del Suelo y Nutrición Vegetal de la
Facultad de Ciencias de la Tierra y geográficas, Facultad de Ciencias Naturales y Agrícolas, la Universidad de
Western Australia, 35 Stirling Rd, Crawley WA6009, Australia. 3Departamento de Ciencias Agrícolas,
Universidad de La Trobe, Bundoora, Vic. 3086, Australia. 4Autor correspondiente*

Recibido el 7 de octubre de 2002. Aceptado en forma revisada el 26 de julio de de 2003

Palabras claves: liberación de protones, el equilibrio de la captación de catión-anión, la deficiencia de P, Lupinus

albus

Abstracto
Plantas de altramuz blanco (Lupinus albus L. cv. Kiev) se cultivaron en columnas de suelo en condiciones
controladas a 20/12 ◦C (12/12 h) durante 76 d para investigar el efecto de la deficiencia de fósforo (P) sobre la
acidificación raíz inducida y el exceso absorción de cationes por la fijación de N2 por las plantas. El fósforo se
añadió en cada columna como FePO4 a un nivel de 10 (P limitada) o 200 µg P g-1 (P adecuada). Con el
suministro de 10 µg P g-1 el crecimiento de plantas fue restringido de 58 días después de la siembra (DDS) y la
disminución de las concentraciones de P significativamente en los brotes a los 49 DDS y en las raíces de 40
DDS, en comparación con las plantas suministradas con 200 µg P g-1. Las concentraciones de fósforo en los
brotes de las plantas que recibieron 10 µg P g-1 disminuyó de manera constante desde 2,1 hasta 1,1 mg P g-1 de
peso seco de 40 a 76 DDS, pero las concentraciones de P en las raíces fueron constantes con el tiempo. La
absorción de P total aumentó con el tiempo con independencia del suministro de P, y la absorción de P por las
plantas a 10 µg P g-1 fue sólo 35-75% de los que en 200 µg P g-1. Plantas alimentadas con 10 µg P g-1 tenían
mayores concentraciones de Ca y Mg, pero menor concentración de S en los brotes que las plantas alimentadas
con 200 µg P g-1. Las concentraciones de cationes en exceso en plantas fueron mayores a 10 µg P g-1 de 200 µg P
g-1 después de 49 DDS. La deficiencia de fósforo disminuyó el pH de la solución de exudado de la raíz debido a
la liberación de protones (H +) a partir de raíces. El pH del exudado de la raíz solución disminuyó rápidamente
con el tiempo y se redujo a la más baja (4,28) a los 58 DDS en el tratamiento 10 µg P g-1. El pH que disminuyó
de la solución de exudado de la raíz se correlacionó con el aumento de las concentraciones de exceso de cationes
en plantas. El pH de la solución de exudado de la raíz mostró un patrón diferente de cambio con el tiempo en
comparación con la exudación de citrato, lo que sugiere que la exudación de aniones citrato contribuye sólo una
parte de la acidificación total, pero el exceso de absorción de cationes contribuye dominantemente liberación de
protones de las raíces de las plantas cultivadas en un suelo deficiente de P. En el tejido vegetal había una
acumulación significativa de citrato en el tratamiento de 10 µg P g-1en comparación con 200 µg P g-1después de
67 DDS. Los resultados sugieren que la deficiencia de P mejora la absorción de exceso de cationes y liberación
de protones concomitante, y los procesos no sincrónicos están involucrados en la acumulación de tejido y
exudación raíz de aniones orgánicos bajo deficiencia de P.

Introducción han desarrollado diversas estrategias morfológicas y

La deficiencia de fósforo es uno de los principales
problemas de nutrición. Es una limitante para el
rendimiento de las plantas, tanto en suelos ácidos
como calcáreos debido a la baja biodisponibilidad de
P (Barber, 1984; Marschner, 1995). Algunas especies
de plantas
fisiológicas para adquirir fósforo escasamente soluble
del suelo. Los mecanismos basados en respuestas
morfológicas incluyen en la elongación de la raíz
(Barber, 1984; Raghothama, 1999), estimular la
formación de pelos radiculares (Ma et al, 2001;.
Marschner, 1995), las asociaciones de micorrizas
(Smith et al., 1992),

* Fax: +86 10 62891016. E-mail: jbshen@mx.cei.gov.cn

2
y disminución de la radio de la raíz (Föhse et al.,
1991). Además, las estrategias fisiológicas se
caracterizan por un aumento de la acidificación de la
rizosfera (Hedley et al, 1982;. Hinsinger et al., 2003;
Marschner, 1995;. Tang et al, 2001), y el aumento de
la exudación de la raíz de quelatos orgánicos
(Dinkelaker et al, 1989;.. Gardner et al, 1983; Jones,
1998; Ryan y Delhaize, 2001), agentes reductores y
fosfatasa (Dracup et al, 1984;. Neumann et al, 1999,
2000) Altramuz blanco (Lupinus albus L.) es un
importante cultivo de grano y forraje ampliamente
cultivado en suelos infértiles. Bajo la deficiencia de
P, Altramuz blanco aumenta la formación de las
raíces, la liberación de H+ y exudación de citrato
(Dinkelaker et al, 1989;. Gardner et al, 1983;.
Lamont, 2003; Neumann et al., 1999). Por ejemplo,
la liberación neta mejorada de H+ a partir de raíces,
acidifica la rizosfera de pH 7.5 a 4.8 (Dinkelaker et
al., 1989, 1995) e incluso tan bajo como pH 3,6, en
algunos casos (Li et al., 1997). La concentración de
citrato en el sistema radicular puede llegar tan alto
como 100 𝜇mol g-1 de suelo, y la cantidad de
exudación de citrato de las raíces representa hasta un
23% del peso seco total de la planta (Dinkelaker et al,
1989, 1995;.. Gerke et al, 1994). Grandes cantidades
de liberación de protones y exudación de citrato
pueden facilitar la adquisición P por Altramuz
blanco del P soluble en suelos (Gerke et al, 1994;.
Hinsinger, 1998; Marschner, 1995; Raghothama,
1999).
La acidificación de la rizosfera y la exudación de
citrato inducido por la deficiencia de P se han
estudiado principalmente en Lupino blanco crecido
en soluciones de nutrición que contiene nitrato
(Gardner et al, 1983;.. Johnson et al, 1994, 1996a, b;
Keerthisinghe et al. , 1998; Neumann et al., 1999;
Neumann y Römheld, 1999; Shane et al, 2003;.. Watt
y Evans, 1999a, b), o en el suelo cultivado con
suministro de nitrógeno en forma de nitrato
(Dinkelaker et al, 1989 ;. Kamh et al, 1999) o nitrato
de amonio (Li et al, 1997), estas formas de nitrógeno
tienen una influencia marcada en la acidificación de
la rizosfera debido a influir en el equilibrio de anión
y la absorción de cationes por las plantas (Hinsinger,
2001; Hinsinger et al., 2003; Marschner, 1995). Sólo
unos pocos estudios utilizaron N2 fijación de las
plantas de Lupino blanco P deficientes para dilucidar
los cambios de pH causados por la liberación H+ y
exudados de la raíz (Sas et al, 2001;. Shen et al.,
2003; Tang et al., 1997, 2001). Las plantas
leguminosas que dependen de la fijación de N2
podrían tomar excesos de cationes sobre aniones, lo
que resulta en el aumento de la liberación de H+ con
una cantidad cada vez mayor de N2 fijado (Tang et
al., 1997, 2001). Por otra parte, se informó también
acidificación localizada de la rizosfera y exudación
de citrato previamente (Dinkelaker et al, 1989;
Keerthisinghe et al, 1998;. Neumann et al, 1999,
2000). Sin embargo, poco
Tabla 1. Nutrientes básicos aplicados al suelo como forma de
solución antes de la siembra. Los nutrientes añadidos se mezclaron
con el suelo y luego la mezcla de suelo fue colocado
cuidadosamente en macetas suelo-Columna de plástico (diámetro x
altura = 86 380 mm) para la siembra. Hubo 3-kg de suelo seco por
maceta
Fertilizante Dosis de aplicación (mg maceta-1)
K2SO4 400
CaCl2. 2H2O 500
MgSO4.7H2O 130
MnSO4.H2O 20
ZnSO4.7H2O 30
CuSO4.5H2O 6
H3BO3 2
Na2MoO4.5H2O 0.5
CaCl2• 2H2O 500
MgSO4.7H2O 130
Co2SO4.7H2O 1
se dispone de información acerca de los patrones de
cambio de pH causados por la liberación H+ por todo
el sistema de la raíz y exceso de absorción de
cationes de N2 fijados por Lupinus albus, cultivados
en suelos deficiente de P durante las diversas etapas
de crecimiento.
El objetivo del presente estudio fue investigar el
efecto de la deficiencia de P en acidificación inducida
en la raíz y el exceso de absorción de cationes por la
fijación N2 de altramuz blanco en diferentes etapas de
crecimiento, y evaluar la relación entre el balance de
absorción de anión-catión e H+ liberado, y los
aniones exudados derivados de ácidos orgánicos bajo
deficiencia de P.
Materiales y Métodos
Cultivo de plantas
Las semillas de altramuz blanco (Lupinus albus L.
cv. Kiev) fueron germinadas y cultivadas en macetas
de columna que contienen 3 kg de suelo, el suelo se
secó al aire. Arena marrón virgen (Uc4.22, Norte-
cote, 1971) se recogió de un sitio matorrales a 15 km
del sureste de Lancelin, WA (31.56 S, 115.20 E). La
fertilidad del suelo se caracterizó como sigue:
carbono orgánico 8,4 g kg-1, P disponible (Colwell P)
5 mg g-1, NO3-N 2 mg g-1 y NH4+-N 1 mg g-1. La
conductividad del suelo fue 0,0022 S m-1, y pH del
suelo fue de 5 (CaCl2) o 5,7 (H2O) (Shen et al.,
2003). La textura del suelo es arena 96%, 2% de limo
y 2% de arcilla. El contenido de oxi-hidróxidos son
muy bajos con 0,54% Fe2O3 y 0,11% Al2O3 (Brennan
et al., 1980). El fósforo se añadió en el suelo como en
FePO4 en una dosis de 10 (P limitada) o 200 𝜇g P g-1
(P adecuada). El nitrógeno se suministró sólo a través
de la fijación biológica de N2 a través de la
inoculación de las semillas con Bradyrhizobium sp.
(Lupinus) WU 425 mediante la adición de solución
de suspensión (Sas et al, 2001;.. Tang et al, 2001).

Se añadieron otros nutrientes básicos de acuerdo
con la Tabla 1. El experimento se realizó en un
invernadero de vidrio con temperatura controlada
de 20/12 ◦C (12-h día / 12-h noche) y humedad
relativa de 75-85%. El suelo fue regado hasta un
90% de capacidad de campo pesando macetas con
plantas una vez o dos veces al día. Tres repeticiones
de cada tratamiento se utilizaron para la colección
de exudado de la raíz, cosecha de la planta, y la
absorción de nutrientes y análisis de carboxilato a
cada uno de cinco cosechas. Las macetas eran
completamente aleatorias y reposicionados
semanalmente para minimizar cualquier efecto de
factores ambientales desiguales.
El muestreo de los exudados de la raíz y materiales
vegetales
Los exudados de la raíz se recogieron por percolación
de la columna de suelo que contiene las plantas
intactas con agua des ionizada durante 2 h (de 10:00
a 12:00 de la mañana) en 40, 49, 58, 67 y 76 DAS
(días después de la siembra) acuerdo con el método
descrito anteriormente (Shen et al., 2003). Una parte
lixiviada de 600 ml de agua desionizada se percoló a
través de la columna de suelo tres veces. El análisis
gravimétrico mostró que 300 ml de solución se
retiene dentro de la matriz del suelo, y por lo tanto el
volumen total de las concentraciones de carboxilato
calculado fue de 900 ml. El lixiviado comprendía
exudados de la raíz solubles en agua y se determinó
como el 'exudado de raíz'. El pH del lixiviado se
determinó inmediatamente después de la recogida de
solución de exudado de la raíz. Posteriormente,
Micropur (Sicheres Trinkwasser, Alemania) a 0,01 g
L-1 y tres gotas de H3PO4 concentrado se añadieron a
los exudados de la raíz recogidos para inhibir la
actividad de los microorganismos.
Una sub-muestra de 10 ml de la solución recogida se
mantuvo a 20- ◦C para el análisis posterior de
carboxilatos.
Después de cada toma de exudado de la raíz, las
plantas eran cosechadas, y se separaron las raíces y
brotes. Extracción de ácidos orgánicos a partir de los
materiales vegetales se realizó según el método
descrito por Neumann et al. (1999). Las muestras de
tejido de la planta se homogeneizaron usando
mortero de cerámica con 5% (v/v) H3PO4 en la
proporción de 1 ml de solución de H3PO4 al 0.1 g de
peso fresco de las plantas. Después de la
centrifugación durante 10 min a 10000 g, la solución
sobrenadante se diluyó 10 veces con solución tampón
de HPLC y se analizó por HPLC de fase inversa. Los
pesos de brote y raíz se registraron después de secar
en un horno a 70 ◦C durante 3 días. Después de la
molienda, se utilizaron los materiales vegetales
3
para la determinación de la composición mineral
incluyendo total de K, Na, Ca, Mg, P, S y Cl.
Mediciones
El pH de la solución de exudado de la raíz
De la solución recogida se sub- tomaron muestras,
siendo una cantidad de 30 ml por cada muestra, y el
pH se determinó utilizando un medidor Orion 940E
pH con un electrodo de vidrio combinado.
Aniones orgánicos
Se usaron 12 ácidos orgánicos para los tiempos de
retención y espectros de absorción, (ácido oxálico,
tartárico, fórmico, málico, malónico, láctico, acético,
maleico, cítrico, succínico, Maric fu- y ácidos
aconítico) para identificar la composición de aniones
orgánicos en extractos de tejidos o exudados de la
raíz. Las muestras de 10 ml de extractos de plantas o
exudados de la raíz se filtraron de manera estéril a
través de (Millex GS) miliporos filtros de 0,22 micras
y se analizaron directamente para aniones orgánicos
en una columna de fase inversa (Alltima C18 5
Micron, longitud 250 mm, ID 4,6 mm) usando HPLC
Waters (Shen et al., 2003).
Composición mineral de los tejidos vegetales
Las concentraciones del total K, Na, Ca, Mg, P y S se
determinaron en raíces y brotes después de digerir los
materiales vegetales en una mezcla de ácido nítrico
concentrado y perclórico (Johnson y Ulrich, 1959).
Las concentraciones del total K, Na, Ca, Mg y S se
determinaron utilizando inducción de emisión de
plasma acoplado a espectrometría. El fósforo se
sometió a ensayo utilizando el método de vanado-
molibdato (Westerman, 1990). Cloruros se analizó
colorimétricamente en el extracto de agua. Las
concentraciones de cationes en exceso [cmol (+) kg-1]
en plantas se calcularon como la suma de la carga
concentración de K+, Ca2+, Mg2+ y Na+ menos la
suma de H2PO4-, SO42- y Cl- acuerdo al método
descrito por Tang et al. (1997).
Estadística
Análisis de varianza para comparaciones entre las
medias se realizó utilizando el software estadístico
SPSS (SPSS, 1998).
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Figura 1. Pesos frescos de brotes y raíces (g planta-1) De altramuz

blanco con 10 (P Limitado) y 200 (P adecuada) μg P g-1 de suelo,
en diferentes etapas de crecimiento. Las barras verticales± en
=
símbolos = La
representan las medias ±SE (n=3 macetas replicadas).
barra separada representa LSD (P= 0.05) para cualquiera de las dos
medias de acuerdo con un análisis de varianza de los tratamientos.

Resultados

Crecimiento de la planta

Se observó una diferencia significativa en el peso

fresco entre 10 y 200 μg P g-1 en 58 DDS para los
brotes, esto se produjo antes de que se den los
cambios de peso en seco la parte aérea (Shen et al.,
2003), y en 67 DDS para las raíces (Figura 1). A
partir del día 58, las plantas tratadas con 10 μg P g-1
mostraron una reducción de crecimiento en
comparación con los de 200 μg P g-1. Los pesos
frescos de brotes de Altramuz blanco en 10 μg P g-1
eran 83%, 72% y 53%, respectivamente, de aquellos
a 200 μg P g-1 en 58, 67 y 76 DDS. Las plantas en los
dos tratamientos de P empezaron a florecer en 55
DDS, y el número de flores en plantas tratadas con
200 μg P g-1 fue mucho mayor que en 10 μg P g-1 en
58 DDS. A partir del día 58, las plantas que
recibieron 200 μg P g-1 también crecieron más alto
que los de 10 μg P g-1 (datos no mostrados).
Figura 2. Concentraciones de P y contenidos en las plantas de
Lupino blanco cultivadas a 10 o 200 g μg P-1 suelo para 76 d. Las
barras verticales±en símbolos
= representan las medias ±SE (n=3
= La barra separada representa LSD (P= 0,05)
macetas replicadas).
para cualquiera de las dos medias de acuerdo con un análisis de
varianza para los diferentes tratamientos.
Composición química de los tejidos vegetales
Las concentraciones de P en brotes de las plantas
alimentadas con 10 μg P g-1 fueron significativamente
más bajos que aquellos en 200 μg P g-1 desde 49 DDS,
y había las mayores concentraciones de P en las raíces
de las plantas tratadas con 200
 5
que las de 10 μg P g-1 de 40 a 76 DAS (Figura
2).Concentraciones de fósforo en los brotes de las
plantas que recibieron 10 μg P g-1 disminuyó de
manera constante desde 2,1 hasta 1,1 mg P g-1 del
peso seco de los brotes de 40 a 76 DDS. En contraste,
concentraciones de P en raíces y brotes de plantas
suministradas con 10 μg P g-1 no tuvieron cambios
significativos con el tiempo. En 200 μg P g-1, hubo
una tendencia para la disminución de las
concentraciones de P en brotes y raíces con el tiempo
de 40 a 76 DDS. Las concentraciones de P en brotes
y raíces de las plantas que recibieron 200 μg P g-1
fueron significativas inferior de 76 que en 40 DDS.
Se observaron las mayores concentraciones de P en
los brotes a los 58 en comparación con los de 49 y 76
DDS. La absorción total de P aumentó con el tiempo
independientemente de suministro de P, pero la
absorción de P por las plantas con 10 μg P g-1 fue
sólo 35-75% de lo que fue en 200 g P g-1 (Figura 2).
Plantas alimentados con 10 μg P g-1 suelo tuvieron
mayores concentraciones de Ca en brotes a los 49 y
67 DDS, y tenían mayores concentraciones de Mg en
brotes a los 49, 67 y 76 DDS (Figura 3). Las
concentraciones de Ca en las raíces fueron más altos
en 67 DAS en el tratamiento de 10 a 200 μg P g-1.
Plantas provistas con 10 μg P g-1 mostraron
concentraciones más altas de K en los brotes en 49
DDS, y en las raíces en 67 y 76 DAS en comparación
con las plantas que recibieron 200 μg P g-1. Sin
embargo, las concentraciones de Na en brotes eran
más bajos en 40 DDS en el tratamiento de 10 a 200
μg P g-1. Había una concentración más baja S en 58
DDS y mayor concentración Cl en 67 DDS en el
tratamiento de 10 a 200 μg P g-1. Sin embargo, no Figura 3. Las concentraciones de K, Na, Ca, Mg, S y Cl en brotes
hubo diferencias significativas en las concentraciones y raíces de Lupino blanco cultivados a 10 y 200 μg P g-1 suelo
de Na, Mg, S y Cl en las raíces entre los tratamientos por 76 días. Las barras verticales o símbolos representan las
de P. Concentraciones de Ca y Cl fueron más altos, y medias ±SE (n= 3 macetas replicadas). La barra separada
las concentraciones de Na, Mg y S fueron más bajos representa LSD (P= 0,05) para cualquiera de las dos medias de
acuerdo al análisis de varianza para los diferentes tratamientos.
en los brotes que en las raíces.

Exceso de absorción de cationes

Acidificación inducida de raíces
El cultivo de plantas disminuyó el pH del lixiviado del
suelo (exudados de la raíz) en comparación con el
control sin ningún tipo de plantas,
independientemente de tratamientos de P (Figura 4).
El pH de la solución de exudado de la raíz en el
tratamiento de 10 μg P g-1 fue significativamente
menor en 58 y 67 que en 40 o 49 DDS. En contraste,
para el tratamiento de 200 μg P g-1, el pH de la
solución de exudado de la raíz se mantuvo constante
con el tiempo. A los 58 y 67 DAS, el pH de las
soluciones colectadas de las plantas alimentadas con
10 μg P g-1 fue significativamente menor que la de las
plantas que recibieron 200 μg P g-1. No hubo
diferencia significativa en el pH de la solución de
exudados de raíz entre los tratamientos de 10 y 200
μg P g-1 a 40, 49 y 76 DDS.
Las concentraciones de exceso de cationes en las
plantas fueron significativamente mayores en los
tratamientos de 10 a comparación que 200 μg P g-1
en 49 y 76 DAS en los brotes, y sólo en el 76 DDS en
las raíces (Figura 5). Las concentraciones de cationes
en exceso en plantas tendían a ser más baja en 10 que
en 200 μg P g-1 suelo en 40 DDS a pesar de no existir
diferencias significativas. Sin embargo, a los 49
DDS, el tratamiento de 10 μg P g-1 sobrepasó el
tratamiento adecuado P en las concentraciones de
cationes en exceso en plantas. Las mayores
concentraciones de exceso de cationes para las
plantas cultivadas a 10 μg P g-1 se observó a los 49
DDS para los brotes y en 58 DDS para las raíces,
después las concentraciones disminuyeron con el
tiempo.
6

Figura 4. El pH en solución exudado de la raíz de Altramuz blanco

crecido a 10 o 200 μg P g-1 suelo para 76 d. Las barras verticales
en símbolos representan las medias ±SE (n= 3 macetas replicadas).
La barra separada representa LSD (P= 0,05) para cualquier par de
medias de acuerdo al análisis de varianza para los diferentes
tratamientos. Hubo una réplica de los tratamientos sin plantas.

Las plantas cultivadas a 200 μg P g-1 mostraron una

disminución con el tiempo de los contenidos en
concentraciones en exceso de cationes en brotes,
mientras que en las raíces hubo una concentración
aumentada de 40 a 58 DDS y luego se observaron una
disminución hasta 76 DDS. Había concentraciones
mayores de exceso de cationes en las plantas
cultivadas a 10 μg P g-1 en comparación con las
plantas que recibieron 200 μg P g-1 después de 49
DDS, y la diferencia en concentraciones de cationes
en exceso entre los tratamientos de P fue significativa
a los 49 y 76 DAS.

Las concentraciones de carboxilatos en las raíces y

brotes de las plantas y la exudación de citrato

Las concentraciones de citrato en brotes o raíces de
las plantas alimentadas con 10 μg P g-1 aumentó
significativamente con el tiempo de 40 a 76 DDS,
pero se mantuvo sin cambios para las plantas
alimentadas con 200 μg P g-1 durante el período
experimental (Figura 6). Las concentraciones de
citrato en brotes y raíces fueron significativamente
mayores en las plantas que recibieron 10 a
comparación de 200 μg P g-1 después de los 67 DDS.
Se observó el aumento de la exudación de citrato
de sistema radicular de Altramuz blanco en el
tratamiento P limitado en comparación con el
tratamiento adecuado P durante el período
monitoreado (Figura 6, calculado a partir de Shen et
al., 2003). Había una exudación mayor de citrato a
los 49 y 67 DDS en el tratamiento de 10 μg P g-1,
pero las tasas de exudados de citrato se mantuvo sin
cambios con el tiempo para las plantas alimentadas
con 200 μg P g-1 de 40 a 76 DDS.
Figura 5. Las concentraciones de exceso de cationes en brotes y
raíces de Lupino blanco cultivados a 10 o 200 µg P g-1 suelo
durante 76 d. Barras verticales en los símbolos representan las
medias ±SE (n= 3 macetas replicadas). La barra separada
representa LSD (P= 0,05) para cualquier par de medias de acuerdo
al análisis de varianza para los diferentes tratamientos.
Discusión
Efecto de la limitación de P en el crecimiento vegetal
y la absorción de P
En el presente estudio, la deficiencia de P condujo a
una disminución significativa en la biomasa de brotes
y raíces, pero el crecimiento de los brotes parecía ser
más sensibles a la deficiencia de P que el crecimiento
de las raíces. La disminución en el crecimiento de la
planta debido a la deficiencia de P también se
observó en la reducida

Figura 6. Concentraciones de citrato [µmol (g FW)--1] En tejidos
de brotes y raíces y exudación de citrato [µmol h-1 (g FW)--1] De
las raíces de Lupino blanco cultivadas con 10 y 200 µg P g-1 suelo
en diferentes etapas de crecimiento. Las barras verticales en
símbolos representan las medias SE (n= 3 macetas replicadas). La
barra separada representa LSD (P= 0,05) para cualquier par de
medias de acuerdo al análisis de varianza para los diferentes
tratamientos.
altura de la planta y el número de flores por planta
después de 58 DDS. El peso y la altura de planta
fresca fueron reducidos, estos fueron los primeros
síntomas visibles de deficiencia de P.
El aumento de peso fresco y contenidos de P en
las plantas con P adecuado en comparación con las
plantas con P limitado, mostraron que las plantas de
Lupino blanco podrían tomar grandes cantidades de P
de FePO4 añadido en el suelo, y que la cantidad de P
tomado aumentaron con las cantidades de FePO4
añadido en el suelo a pesar de que FePO4 es una
forma de P escasamente soluble, los resultados
mostraron un soporte para el punto de vista de que las
plantas de Lupino blanco tienen una gran capacidad
de movilización de la P poco soluble a través de
cambiar los procesos de la rizosfera, en particular,
con la exudación de citrato (Hinsinger, 1998;
Marschner, 1995; Venek-
7
laas et al., 2003). De la primera a cosechas finales,
las relaciones entre la absorción de P y P adicionado
son 25-50% para 10 μg P g-1 y 1.7 a 7.2% para 200
μg P g-1. Como nunca, porque P tiene una difusión
baja en el suelo, en particular FePO4, sólo el P cerca
de la superficie de la raíz tiene la oportunidad de ser
absorbidos. De acuerdo con la relación de 10%
[generalmente, 1-5% bajo condiciones de campo
(Marschner, 1995)] entre el volumen de la raíz y el
volumen total del suelo, sólo 3 mg y 60 mg FePO4
pueden ser absorbidos fácilmente por las plantas, y
luego el relaciones entre el P absorbido y FePO4
disponible se convierten en 250-500% y 17-72%, lo
que supone que mucho P podría movilizarse por el
suelo.
La diferencia significativa en las concentraciones
de P en los tejidos vegetales entre los tratamientos P
ocurrió antes de tomar los pesos frescos de las
plantas. La reducción del crecimiento de Lupino
blanco que recibió 10 μg P g-1 se correlacionó con la
disminución en las concentraciones de P en los
brotes, pero no tuvo correlación significativa con
concentraciones de P en las raíces. Los resultados
mostraron que las concentraciones de P en los brotes
no eran completamente dependientes de las
concentraciones de P en las raíces, siendo coherente
con el informe anterior (Marschner, 1995).
Acidificación inducida de la raíz y el exceso de
absorción de cationes
La disminución del pH de la solución de exudado de
la raíz mostró que el bajo suministro de P aumentó la
liberación de H+ a partir de raíces. En las legumbres
cultivadas simbióticamente, rizosfera-acidificación
pueden ser causados por balance catión-anión, la
excreción de aniones orgánicos y la fijación
simbiótica de nitrógeno (Marschner, 1995; Tang et
al., 1997). Bajo la condición experimental específica,
no es posible cuantificar por separado la contribución
de cada uno de estos procesos a un total de liberación
neta de protones. Por otra parte, en el presente
estudio, todos los procesos que ocurren en el suelo
podrían haber influido en el pH del lixiviado y de
hecho no se puede separar los protones de H+
liberados por otros procesos del suelo. Sin embargo,
la diferencia en pH entre tratamientos de P mostró un
claro efecto de la limitación de P sobre la liberación
de H+ a partir de raíces, porque la limitación de P
causó exceso de absorción de cationes, lo que resulta
en liberación de H+ de las raíces. Las raíces de las
plantas expulsar una cantidad neta de H+ para
mantener el equilibrio de carga cuando la absorción
de cationes excede la absorción de aniones
(Dinkelaker et al, 1989;.. Hedley et al, 1982;
Marschner, 1995;. Tang et al, 2001). En particular, el
exceso de captación de cationes por las plantas refleja
liberación H+ cuando N se suministra a través de la
fijación de N2 (Tang et al., 1997). En el presente
experimento con N2 fijado por Lupinus albus
cultivado en el suelo deficiente de P, la liberación de
H+ fue más probablemente causado por el exceso de
captación de cationes. La deficiencia de fósforo
aumentó la concentración de Ca
8
en brotes y raíces, y las concentraciones de Mg en
brotes, pero disminuyó la acumulación de S en los
brotes, mostrando que las concentraciones de los
cationes en exceso fue mayor en las plantas con P
deficientes que las que tenían P suficiente en las
plantas fijadoras de N2. Además, se observó una clara
correlación negativa entre el número de raíces
secundarias (Shen et al., 2003) y el pH de la solución
de exudado de la raíz, lo que supone que las raíces
secundarias de Altramuz blanco son el sitio principal
para liberar H+ bajo deficiencia de P, lo cual coincide
con otros estudios (Dinkelaker et al, 1989, 1995;.
Marschner, 1995; Neumann y Römheld, 1999; Watt
y Evans, 1999a;. Yan et al, 2002).
Relación entre la liberación de protones, la
acumulación y exudación de carboxilatos
La acumulación de citrato fue encontrado en brotes y
las raíces de plantas deficientes en P, que está de
acuerdo con la observación de la acumulación de
citrato en las raíces secundarias bajo deficiencia de P
(Neumann et al., 1999). Sin embargo, en el presente
estudio, las concentraciones de citrato en brotes y
raíces de las plantas alimentadas con 10 µg P g-1
suelo aumentó continuamente con el tiempo (Figura
6), mientras que se observó una exudación más alta
de citrato a 49 y 67 DDS en el tratamiento de 10 µg P
g-1 (Figura 6 calculado a partir de Shen et al., 2003).
Estos resultados mostraron que las altas
concentraciones de citrato en las plantas podrían ser
un requisito previo para la exudación de citrato, pero
la exudación de citrato no mostraron el patrón de
cambio consistente con el tiempo en comparación
con la acumulación de citrato en el tejido vegetal,
siendo coherente con los informes anteriores
(Keerthisinghe et al, 1998;. Neumann et al, 1999).
Además, la exudación de citrato mostró un patrón
claramente diferente de cambio con el tiempo en
comparación con el pH de la solución de exudado de
la raíz, que muestra una falta de dependencia de la
liberación de protones en la exudación de los aniones
citrato. Los resultados sugieren que la exudación de
citrato contribuye sólo una parte de la acidificación
total y el exceso de absorción de catión es el factor
dominante que afecta la liberación de protones por
las raíces de las plantas de Lupino blanco cultivadas
en suelo con P deficiente.
En conclusión, las plantas de Lupino blanco
pueden tomar grandes cantidades de P a partir de
FePO4 como una forma de P poco soluble a través de
cambiar los procesos de la rizosfera. La deficiencia
de fósforo de las plantas cultivadas en suelo con
fijación de N2 resultó en el exceso de absorción de
cationes y la liberación de protones, causando una
disminución de pH de la solución de exudado de la
raíz. La exudación de citrato no mostró el patrón de
cambio consistente con el tiempo en comparación
con la acumulación de citrato en el tejido vegetal. La
exudación de aniones citrato aporta sólo una parte del
total de acidificación,
pero el exceso de captación de cationes contribuye
dominantemente liberación de protones de las raíces de
las plantas de Lupino blanco cultivadas en suelo P-
deficiente.
Agradecimientos
Este estudio fue apoyado por becas de la MS- BRDP
(Proyecto No: G1999011709), por la Fundación
Nacional de Ciencias Naturales de China (Nº
30.000.102) y por AusAID.
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