Simpósio:

PLANEJAMENTO E CONDUÇÃO DE
ESTUDOS CLÍNICOS DE ALTA EVIDÊNCIA
CIENTÍFICA

Apresentação

A
importância dos Estudos Clíni-
cos Randomizados para a Práti-
ca Clínica Baseada em Evidên-
cia, bem como para o próprio
contexto científico, tem motivado algumas propos-
tas de orientação para sua elaboração, condução e
relato em jornais e revistas.

As recomendações do Consolidated
Standards of Reporting Trials - CONSORT, desen-
volvidas na década de 90 por investigadores e edito-
res interessados em assegurar a relevância e
confiabilidade dos resultados através de uma trans-
parência completa dos estudos, têm contribuído para
a qualidade do relato das pesquisas de intervenção
profilática ou terapêutica. Embora não recente ou
singular, ainda é necessária a divulgação dos itens
requisitados por essas recomendações entre a co-
munidade científica.
Assim foi idealizado este evento, com o objeti-
vo contribuir para o processo de reorientação do
planejamento, condução e relato de estudos clíni-
cos através da divulgação e discussão das recomen-
Profa. Dra. Anamaria Siriani de Oliveira
Coordenadora do Simpósio
Docente do Departamento de Biomecânica, Medicina e
Reabilitação do Aparelho Locomotor da FMRP-USP.
dações do CONSORT. A idéia de expô-las e discuti-
las em encontros possibilitou o intercâmbio de ex-
periência e conhecimento de diferentes membros
de grupos de pesquisa consolidados, pós-graduandos
e graduandos em iniciação científica de todas as
profissões da área da saúde, presentes no evento.
No entanto, valendo-se dos recursos das tecnologias
da informação e comunicação, como a divulgação
em lista de correio eletrônico, vídeo-conferência e
transmissão ao vivo via rede mundial de computado-

1
res, o evento alcançou dimensão nacional. P a r a
abertura do evento, no dia 5 de julho de 2008, o
Prof.Dr. Gordon Guyatt, membro do CONSORT Group
e criador da expressão “Medicina Baseada em Evi-
dência”, proferiu a palestra “Randomized trials: why
we need them, and why we need them done right”
por video-conferência, diretamente do Department
of Clinical Epidemiology & Biostatistics da McMaster
University, Halmiton, Ontario, Canadá.
O evento prosseguiu com as palestras: O que
é um Randomized Controlled Trial? do Prof. Dr.
Raphael Freitas de Souza, do Departamento de
Materias Dentários e Prótese da FORP-USP e mem-
bro da Cochrane Collaboration; CONSORT – check
list e fluxograma, das mestrandas do PPG em
Traumatologia, Ortopedia e Reabilitação do Aparelho
Locomotor, Laboratório de Análise da Postura e do
Movimento Humano-LAPOMH, Jaqueline Martins e
Letícia Mêlo Sousa; Contribuições do estatístico
para o atendimento ao CONSORT checklist, do
Prof. Dr. Edson Zangiacomi Martinez do Departa-
mento Medicina Social da FMRP-USP e do CEMEQ-
Centro de Métodos Quantitativos; e Processo de
Registro Nacional dos RCTs, da Dra Regina Celia
Figueiredo Castro, Coordenadora da área de Comu-
nicação Científica em Saúde BIREME/OPAS/OMS.
Ao final das palestras, uma atividade de tra-
balho em grupos para identificação do atendimento
2
aos itens do CONSORT em artigos científicos publi-
cados, foi monitorada pelos estudantes de pós-gra-
duação e iniciação científica do LAPOMH, como for-
ma de reforçar o reconhecimento dos itens
recomendados.
Apoiaram esta iniciativa a Cochrane
Collaboration, a Unidade de Pesquisa/DECIT/FINEP
e a Fundação de Apoio ao Ensino, Pesquisa e Assis-
tência do Hospital das Clínicas da Faculdade de Me-
dicina de Ribeirão Preto – HCFMRP/USP, a Comis-
são de Pós-Graduação e Programa de Pós-Graduação
em Traumatologia, Ortopedia e Reabilitação da
FMRP-USP, a Associação Brasileira de Pesquisa e
Pós-Graduação em Fisioterapia, e Biblioteca Virtual
em Saúde/OPAS/OMS.
O campus de Ribeirão Preto da USP, aponta-
do como um forte centro de produção e divulgação
de conhecimento científico em saúde, reafirma seu
papel de liderança através da iniciativa dos editores
da Revista Medicina do Hospital das Clínicas e da
Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, de apoiar
a publicação dos quatro capítulos que compões esta
edição, com as revisões que embasaram as pales-
tras apresentadas no referido evento. Esta publica-
ção amplia a perspectiva de divulgação de recomen-
dações que podem auxiliar os pesquisadores a planejar
e publicar os resultados de suas contribuições para
prática de saúde baseada em evidências científicas.
 SIMPÓSIO: Planejamento e condução de estudos clínicos de alta evidência científica
Capítulo I

O que é um estudo clínico

clínico
randomizado?
What is a randomized clinical trial?

Raphael F. de Souza1

RESUMO
O estudo clínico randomizado (ECR) é uma das ferramentas mais poderosas para a obtenção de
evidências para o cuidado à saúde. Apesar de algumas possíveis variações, baseiam-se na compara-
ção entre duas ou mais intervenções, as quais são controladas pelos pesquisadores e aplicadas de
forma aleatória em um grupo de participantes. O objetivo deste artigo foi descrever aspectos relativos à
validades externa e interna dos ECRs, bem como apresentar bases de dados para sua obtenção e
ferramentas para avaliação de qualidade.

Palavras-chave: Ensaio Clínico Controlado Aleatório. Ensaio Controlado Aleatório. Ensaio Clínico Con-
trolado. Medicina Baseada em Evidências.

O que é um estudo clínico fato de que os participantes recebem uma dentre as

randomizado?
O estudo clínico randomizado (ECR) consiste
basicamente em um tipo de estudo experimental, de-
senvolvido em seres humanos e que visa o conheci-
mento do efeito de intervenções em saúde. Pode ser
considerado como uma das ferramentas mais podero-
sas para a obtenção de evidências para a prática clíni-
ca. Associada a esse poder, encontra-se a simplicida-
de em seu desenho, quando comparado a outros tipos
de estudos1. Bons ECRs são capazes de minimizar a
influência de fatores de confusão sobre relações de
causa-efeito, quando comparados aos demais dese-
nhos, daí sua grande relevância como fonte de evi-
dências2. No caso específico do ECR, diferencia-se
dos demais tipos de estudos clínicos experimentais pelo
intervenções propostas de forma aleatória1.
No contexto da classificação dos estudos cien-
tíficos em saúde, pode-se dizer que os ECRs são, dentre
os estudos primários, os de maior relevância para a
clínica3. As revisões sistemáticas, apesar de serem
consideradas ainda mais relevantes, são estudos se-
cundários, ou seja, dependem de estudos primários com
qualidade para derivarem inferências. Daí a grande
importância dos ECRs como fonte de evidências tam-
bém para as revisões sistemáticas4.
A fim de determinar se um artigo científico re-
fere-se ao relato de um ECR, quatro características
fundamentais devem estar presentes em um artigo
científico. A primeira delas é a comparação entre in-
tervenções aplicadas à saúde de seres humanos, ou
seja, estudos sobre aspectos sem relação direta com

1. Docente da Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto da Correspondência:

Universidade de São Paulo. Departamento de Materiais Dentários e Prótese
Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto - USP.
Avenida do Café, s/nº
14040-050 - Ribeirão Preto, São Paulo, Brasil.

Artigo recebido em 18/12/2008

Aprovado em 20/05/2009

Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42(1): 3-8

Souza RF. O que é um estudo
clínico randomizado?
a saúde ou desenvolvidos em animais são desconside-
rados. Um segundo aspecto relevante é a natureza
prospectiva; as intervenções são planejadas antes e a
exposição é controlada pelos pesquisadores. Em ter-
ceiro lugar, duas ou mais intervenções são compara-
das no estudo. Por intervenção, entendem-se, além
de tratamentos para desordens físicas ou mentais, os
regimes preventivos, programas de detecção ou tes-
tes diagnósticos (uma pode ser um grupo controle/sem
tratamento). Além disso, uma ou mais das interven-
ções comparadas pode ser consistir em um grupo con-
trole, sem nenhum procedimento ativo. Por fim, a apli-
cação das intervenções deve ser aleatória, tendo ape-
nas a chance influenciando o processo5.
O desenho típico de um ECR pode ser obser-
vado na Figura 1. Uma primeira característica é o re-
crutamento de um grupo comum, a partir de uma po-
pulação de interesse. Em seguida é que se decidem
quais intervenções os participantes receberão, por meio
da randomização. Tecnicamente, esse processo en-
volve determinar a alocação por meio de números
obtidos por sorteio, ao invés de características da
amostra ou preferência dos participantes. Após a apli-
cação das intervenções, realiza-se a leitura de uma ou
mais variáveis de desfecho que, na figura, apresenta-
se como sucesso e insucesso6.
Variações6
Variações
O desenho típico de ECR, também denomina-
do ensaio randomizado de grupos paralelos, não é a
única forma de apresentação. Algumas variações são
comuns, e dentre elas encontra-se o uso de um perío-
do pré-teste, entre o recrutamento dos participantes e
a randomização. Por exemplo, pode se tratar todos os
Figura 1. Desenho típico de um ECR (adaptado de Hulley et al.6).
4
Medicina (Ribeirão Preto) 42 (1): 3-8
http://www.fmrp.usp.br/revista
participantes nesse estágio com um placebo ou trata-
mento ativo, com o intuito de detectar participantes
com baixa complacência. Conforme será explicado
na seção “Validade Interna”, a perda de participantes
durante a aplicação das intervenções pode gerar um
tipo de viés; portanto, seriam melhor que as perdas
acontecessem em um período prévio à alocação dos
participantes às intervenções.
Existe também a possibilidade de se aplicar um
desenho fatorial, ou seja, dois ou mais fatores de vari-
ação dentro do mesmo ECR. Supondo que um pes-
quisador quer testar para uma determinada desordem
muscular um procedimento fisioterápico vs. um pro-
cedimento inativo, um ECR seria facilmente delinea-
do. No entanto, poderia ser interessante testar tam-
bém em outro ECR o efeito de um antiinflamatório vs.
placebo; nesse caso, o mesmo ECR poderia compor-
tar ambos os fatores de variação, ou conjunto de in-
tervenções. Assim, seria delineado um estudo onde
quatro possibilidades existem, ou seja, o participante
recebe:
1) o tratamento fisioterápico e o antiinflamatório;
2) o tratamento fisioterápico e o placebo;
3) o procedimento inativo e o antiinflamatório; ou
4) o procedimento inativo e o placebo.
Dessa forma, têm se duas análises separadas,
em função de cada fator, e analisa-se também a inte-
ração entre ambos.
Por fim, é possível testar-se duas ou mais inter-
venções usando-se o mesmo participante. Esse tipo
de ECR é denominado cruzado (cross-over) e tem a
vantagem de ter o mesmo indivíduo como controle dele
mesmo, ou seja, emprega-se uma análise pareada ao
invés de grupos independentes. A maior vantagem
Medicina (Ribeirão Preto) 42 (1): 3-8
http://www.fmrp.usp.br/revista
desse processo é o aumento do poder estatístico, o
que possibilita testar hipóteses com um número me-
nor de participantes. Por outro lado, nem todas as in-
tervenções são reversíveis; por exemplo, seria impos-
sível conduzir um ECR cruzado para a maioria dos
procedimentos cirúrgicos. Além disso, caso haja um
efeito residual de uma intervenção durante a aplica-
ção da próxima, teríamos um viés importante (efeito
carry-over). Nesses casos, indica-se como norma o
planejamento de um período de washout entre as in-
tervenções, a fim de esperar a cessação do efeito re-
sidual. A Figura 2 contém um esquema de como se
estrutura um ECR cruzado. Nos ECRs em se
randomiza sequências de 3 ou mais intervenções para
cada participantes, usa-se o termo quadrado latino (em
inglês, Latin square).
Validade Exter na
Externa
Independente do desenho do ECR, algumas
características devem ser observadas, a fim de extra-
polar os resultados de um estudo para determinada
realidade clínica. Essa possibilidade de generalizar os
dados de pesquisa para uma circunstância cotidiana é
denominada validade externa. Quanto mais as carac-
terísticas consideradas pelo estudo forem próximas de
determinada realidade de trabalho, mais os resultados
do ECR podem ser extrapolados; ainda, mais relevan-
te se torna a evidência dentro dessa realidade. Como
um exemplo, seria improvável que amostras proveni-
entes de centros altamente especializados possam ser
representativas do que acontece em clínicas de aten-
ção básica. Especificamente, quatro aspectos básicos
determinam a validade externa:
Figura 2. Desenho de um ECR cruzado (adaptado de Hulley et al.6).
Souza RF. O que é um estudo
clínico randomizado?
1) participante;
2) intervenções;
3) ambiente;
4) desfechos7.
Com respeito aos participantes, é importante que
as características sejam próximas àquelas da popula-
ção de interesse. Aspectos como idade, gênero, seve-
ridade de doença e fatores de risco, co-morbidades
associadas devem ser vistos com atenção7. Em ECRs,
os participantes não são necessariamente pacientes,
podem ser voluntários, parentes dos pacientes (cuida-
dores de idosos com doença de Alzheimer, por exem-
plo) ou aglomerados (randomiza-se grupos como pos-
tos de saúde ou escolas)1. Intervenções podem apre-
sentar diferentes regimes de aplicação, com distinção
de dose, períodos e vias de administração. O uso de
tratamento simultâneo ao ECR, bem como categorias
dentro de certas modalidades, pode influenciar os re-
sultados e devem também ser pesados7. Além disso,
é de se esperar que diferentes ambientes de estudo
possam acarretar diferentes resultados. A pergunta
que se faz é o quanto o ambiente do estudo asseme-
lha-se à clínica, pois diferença em fatores como o ní-
vel de atenção (primária a terciária) e experiência do
profissional pode diminuir a validade externa7. Por fim,
o tipo e definição das variáveis de desfecho são alta-
mente importantes. Destaca-se o uso de variáveis de
pouca relevância clínica, ao invés daquelas de real valor
para o participante. É comum que variáveis secundá-
rias mostrem maior eficácia para determinado trata-
mento, porém essa diferença não é detectável clinica-
mente. Por exemplo, do que adiantaria um procedi-
mento capaz de aumentar a ejeção de sangue pelo
coração após infarto do miocárdio, caso não haja me-
lhoras na qualidade e expectativa de vida do pacien-
5
Souza RF. O que é um estudo
clínico randomizado?
te? Uma última característica relevante para os des-
fechos é que se considere o tempo de acompanha-
mento no ECR. Diferentes tempos podem apresentar
diferentes resultados7.
Validade Inter na
Interna
Questões referentes à validade interna direcio-
nam-se ao quanto o erro sistemático (viés) é minimi-
zado, independente das características descritas an-
teriormente. Quatro tipos principais de viés podem ser
considerados em um ECR: seleção, desempenho, de-
tecção e atrito. Cada um tem origem diferente e pode
ser minimizado por manobras específicas, como a ran-
domização7.
O viés de seleção simboliza a presença de al-
guma diferença sistemática entre os grupos compara-
dos. O ideal seria que os participantes fossem alocados
nos grupos sem nenhuma influência, e todo partici-
pante teria a mesma chance de ser alocado em qual-
quer um dos grupos ou sequência. Duas manobras
são utilizadas para minimizar essa fonte de viés. A
primeira delas, a randomização, implica em usar uma
sequência de alocação que previna o viés de seleção.
As intervenções são sorteadas para os participantes,
usando-se programas de computador ou tabelas de
números aleatórios, por exemplo. A segunda mano-
bra, a alocação oculta, parte do princípio de que há a
possibilidade de se rejeitar determinados participantes
em certos grupos. Por exemplo, poderia se evitar a
alocação de casos mais graves em grupos com uso de
placebo. Assim, uma forma de se evitar essa rejeição
seria ocultar a sequência de alocação antes de se apli-
car as intervenções. Não é sinônimo de cegamento,
porque ocorre em período mais precoce do estudo e
visa minimizar outro tipo de viés. A alocação oculta
em geral é possível por meio de um pesquisador sem
contato com os participantes e com o trabalho dos
demais7. Tecnicamente, emprega-se, um escritório ou
farmácia central (fora do ambiente de pesquisa), reci-
pientes pré-codificados serialmente, software capaz
de alocar após entrada de participante ou envelopes
opacos e selados4.
Por sua vez, o viés de desempenho consiste
naquelas diferenças sistemáticas no cuidado forneci-
do para os participantes em função dos grupos, e pode
se originar de diversas fontes. Contaminação (inter-
venção no grupo controle) e co-intervenção (cuidado
adicional a algum dos grupos) são possíveis causas.
Ainda, participantes podem relatar mais sintomas caso
6
Medicina (Ribeirão Preto) 42 (1): 3-8
http://www.fmrp.usp.br/revista
saibam a que grupo pertence e avaliadores de desfe-
cho podem realizar análises tendenciosas caso conhe-
çam o tratamento em curso. O manejo do viés de de-
sempenho se dá por meio do cegamento, que deve
ser realizado sempre que possível nas diversas partes
do estudo. Essas compreendem o pesquisador res-
ponsável por aplicar as intervenções, os participantes,
avaliadores de desfecho e mesmo o responsável pela
análise estatística.
Um terceiro tipo de viés é o de detecção, que
se refere às diferenças sistemáticas entre grupos du-
rante à análise dos desfechos. Também é minimizado
pelo cegamento, neste caso especificamente dos ava-
liadores de desfecho4.
Por fim, outra forma de erro sistemático é re-
presentada pelo viés de atrito, que corresponde à di-
ferença sistemática entre grupos devido à perda de
participantes do estudo. É sinônimo de viés de exclu-
são, e pode representar problemas quando os partici-
pantes deixam de retornar após o início das interven-
ções devido a, por exemplo, efeitos colaterais decor-
rentes de uma das intervenções4. Pode ser manejado
por meio de um número mínimo de perdas no acom-
panhamento; mais de 20% de perda em um estudo é
forte indicativo de viés, bem como perdas desiguais
nos diferentes grupos. Assim, é fundamental que os
autores descrevam se houve perdas em um ECR e os
motivos. Além disso, cada participante, mesmo que
não receba a intervenção alocada, deve ser analisado
ao fim do estudo como se tivesse recebido. A esse
princípio designa-se intenção-de-tratar.7
Bases de Dados
É possível conseguir referências de ECRs por
meio de bases de dados internacionais como o Medline,
EMBASE, ISI, entre outras. Bases regionais, como a
LILACS, podem e devem ser empregadas, principal-
mente quando características regionais podem influ-
enciar na validade externa. Independente do caso, uma
busca direta usando termos relativos aos participan-
tes, intervenções e desfechos de interesse poderiam
ser usados na base eletrônica; porém, a adição de ter-
mos relativos ao desenho torna a busca mais ágil. As
bases de dados em saúde podem fornecer descritores
referentes aos ECRs, como o termo “randomized
controlled trial [pt]” do MeSH (Medline). Buscas com
maior sensibilidade podem ser obtidas usando filtros
de busca, especialmente quando se trata de obter ECRs
para revisões sistemáticas, Quadro 14.
Medicina (Ribeirão Preto) 42 (1): 3-8
http://www.fmrp.usp.br/revista
Quadro 1
Estratégia de busca de alta sensibilidade para
identificação de ECR no MEDLINE (formato
PubMed)
#1 randomized controlled trial [pt]
#2 controlled clinical trial [pt]
#3 randomized [tiab]
#4 placebo [tiab]
#5 drug therapy [sh]
#6 randomly [tiab]
#7 trial [tiab]
#8 groups [tiab]
#9 #1 or #2 or #3 or #4 or #5 or #6 or #7 or #8
#10 animals [mh] not (humans [mh] and animals [mh])
#11 #9 not #10
Outra fonte importante para a obtenção de re-
gistros de ECRs é a Cochrane Central Register of
Controlled Trials (CENTRAL), da Biblioteca
Cochrane. A CENTRAL apresenta uma lista de resu-
mos de ECRs e estudos clínicos controlados, que fo-
ram obtidos por meio de busca manual de periódicos
em diversas áreas da saúde.
Ainda, mesmo outras fontes como bases de dis-
sertações e teses, resumos de conferências podem
fornecer informações úteis para a prática clínica.
Dados ainda não publicados em periódicos podem ser
conferidos com antecedência. Por fim, as revistas de
saúde baseada em evidências também são fontes im-
portantes, pois apresentam resumos críticos da litera-
tura corrente. Em geral, sua vantagem é facilitar para
o clínico a visualização de possíveis limitações de es-
tudos publicados recentemente.
Avaliação de Qualidade
Por fim, após a obtenção de ECRs a partir das
possíveis bases, seria interessante que o clínico con-
seguisse identificar limitações importantes. Caracte-
rísticas associadas à validade interna e externa po-
dem ser avaliadas sistematicamente por meio do co-
nhecimento de possíveis vieses. Essa avaliação, con-
tudo, pode ser facilitada por meio de instrumentos es-
pecíficos. Primeiramente, destaca-se o CONSORT,
por listar uma série de características que deveriam
Souza RF. O que é um estudo
clínico randomizado?
ser descritas em um ECR8. Destaca-se também o
recente método GRADE (Grading of Recommen-
dations Assessment, Development and Evaluation),
por classificar estudos de diferentes desenhos de acor-
do com a qualidade e relevância da evidência, separa-
damente9.
Com base nos quatro modos de controle de
vieses, é possível classificar a qualidade dos ECRs.
Algumas revisões sistemáticas da Colaboração
Cochrane têm apresentado um instrumento de análise
de qualidade com essas características, o qual pode
ser conferido abaixo:
1) Randomização
a) Adequada: um dos métodos a seguir foi descrito
pelo artigo: números gerados por computador
ou tabela de números aleatórios, cara ou coroa,
sorteios de cartas ou jogo de dados.
b) Não descrita;
c) Inadequada: sequência gerada por meio de nú-
mero de prontuário, data de nascimento ou nú-
meros alternados.
2) Alocação Oculta
a) Adequada: alocação gerada centralmente ou por
meio de envelopes opacos, selados e numera-
dos sequencialmente.
b) Não descrita;
c) Inadequada: houve alocação aberta e se os par-
ticipantes ou pesquisadores poderiam prever a
alocação.
3) Cegamento
Se houve cegamento (ou não) para as seguin-
tes partes:
a) Participantes (sim/ não / não descrito / não se
aplica);
b) Pesquisador (sim/ não / não descrito / não se
aplica);
c) avaliador de desfechor (sim/ não / não descrito
/ não se aplica);
d) analista dos dados (sim/ não / não descrito / não
se aplica).
4) Manejo de perdas e desistências
a) Sim: se há uma descrição clara sobre as dife-
renças entre dois ou mais grupos testados du-
rante o acompanhamento;
b) Não descrito;
c) Não.
7
Souza RF. O que é um estudo Medicina (Ribeirão Preto) 42 (1): 3-8
clínico randomizado? http://www.fmrp.usp.br/revista

Após a análise, é possível classificar os ECRs
como sujeitos a diferentes riscos de vies:
a) Baixo risco (possível viés com improvável influên-
cia sobre os resultados) se todos os critérios forem
adequados;
b) Risco moderado (possível viés que levanta alguma
dúvida referente aos resultados) se um ou mais
critérios são parcialmente adequados.
c) Alto risco (possível viés que enfraquece seriamen-
te a confiança nos resultados) se um ou mais crité-
rios são inadequados.

ABSTRACT
The randomized clinical trial (RCT) is one of the most powerful tools for the obtainment of evidence for
healthcare. Despite some possible variations, they are based on the comparison between two or more
interventions, which are controlled by researchers and randomly applied on a group of participants. The
aim of this study was to describe aspects of external and internal validity of RCTs, as well as to present
databases for their obtainment and quality assessment tools.

Key words: Randomized Controlled Trial. Controlled Clinical Trial. Evidence-Based Medicine.

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Coello P, Schünemann HJ; GRADE Working Group. GRADE: an
emerging consensus on rating quality of evidence and strength
of recommendations. BMJ 2008; 336: 924-6.

8
 SIMPÓSIO: Planejamento e condução de estudos clínicos de alta evidência científica
Capítulo II

Recomendações do en unciado
enunciado
CONSOR
CONSORT T par
para ela
a o rrelato de estudos
elato
clínicos controlados e rrandomizados
controlados andomizados
The CONSORT statement instructions for
reporting randomized clinical trials

Jaqueline Martins1, Letícia M. Sousa1, Anamaria S. Oliveira2

RESUMO
O raciocínio clínico e a tomada de decisão pelo profissional de saúde devem ter como base as evidên-
cias científicas relevantes e não apenas a intuição ou experiências clínicas prévias não-sistematizadas.
Estas evidências são adequadamente obtidas a partir de estudos clínicos controlados randomizados
(ECRs), cujas informações são frequentemente relatadas de forma incompleta, prejudicando a identi-
ficação de possíveis erros metodológicos. Com intuito de aprimorar o relato de ECR, um grupo de
cientistas e editores de periódicos médicos elaborou o enunciado CONSORT, constituído de uma lista
de checagem com 22 itens e um fluxograma dos participantes. Atualmente, o CONSORT se encontra
traduzido em diversas línguas e em versões adaptadas para atender aos diferentes modelos de estu-
dos. O presente trabalho pretendeu, portanto, facilitar a compreensão de tais instruções, assim como
sua divulgação na língua portuguesa, ao abordar brevemente os principais aspectos contidos na ver-
são revisada do enunciado CONSORT.

Palavras-chave: CONSORT. Ensaios Clínicos Controlados como Assunto. Ensaio Clínico Controlado
Aleatório. Ensaio Controlado Aleatório. Medicina Baseada em Evidências.

Informações mais detalhadas sobre os con-
ceitos apresentados e discutidos brevemente no pre-
sente trabalho podem ser encontradas em Altman
et al. 2008 e Boutron et al. 2008. Acesse também o
endereço eletrônico: http://www.consort-
statement.org/
Introdução
Atualmente, as práticas em saúde são norteadas
pelo conceito da medicina baseada em evidências, a
qual preconiza que o raciocínio clínico e a tomada de
decisão pelo profissional de saúde sejam fundamenta-
dos em evidências científicas relevantes e não apenas
com base na intuição ou em experiências clínicas pré-
vias não-sistematizadas.1,2,3 Sob esta perspectiva, o
profissional de saúde deve estar apto a identificar, na
literatura disponível, estudos que forneçam informa-
ções válidas e confiáveis relativas ao problema em
questão. A avaliação crítica desses estudos, entretan-
to, não depende somente da habilidade do profissional
em interpretar seus resultados, mas também da ma-

1. Mestranda. Departamento de Biomecânica, Medicina e Reabi- Correspondência:

litação do Aparelho Locomotor. Faculdade de Medicina de Ri- Profa. Dra. Anamaria Siriani de Oliveira
beirão Preto - USP. Laboratório de Análise da Postura e do Departamento de Biomecânica, Medicina e Reabilitação do
Movimento Humano - LAPOMH Aparelho Locomotor da FMRP-USP.
2. Docente. Departamento de Biomecânica, Medicina e Reabilita- Avenida dos Bandeirantes, 3900.
ção do Aparelho Locomotor. Faculdade de Medicina de Ribei- 14049-900 - Ribeirão Preto / SP
rão Preto - USP. Laboratório de Análise da Postura e do Movi-
mento Humano - LAPOMH Artigo recebido em 18/12/2008
Aprovado em 20/05/2009

Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42(1): 9-21

Martins J, Sousa LM, AS Oliveira.
Recomendações do enunciado CONSORT
neira como as informações são descritas pelos pes-
quisadores e responsáveis por sua divulgação. O rela-
to incompleto ou inadequado de informações sobre o
planejamento e condução do estudo prejudica a iden-
tificação de possíveis erros metodológicos, assim como,
dificulta o uso de suas conclusões pelos interessados,
uma vez que estes não conseguem avaliar criticamente
sua aplicabilidade clínica.4,5
A preocupação com o conteúdo das publica-
ções científicas é tema de discussão desde o final dos
anos 70, quando foi primeiramente abordada pelo Co-
mitê Internacional de Editores de Periódicos Médicos
(International Committee of Medical Journal
Editors - ICMJE) por meio da divulgação de reco-
mendações que deveriam ser consideradas ao se sub-
meter um trabalho para apreciação em periódicos
médicos.6 Algumas iniciativas semelhantes foram de-
senvolvidas nas duas últimas décadas, publicadas em
forma de tutoriais ou guias com instruções aos auto-
res sobre o relato transparente de estudos clínicos
controlados randomizados (ECR), estudos sobre
acurácia diagnóstica, assim como de revisões siste-
máticas e meta-análises de ECR e de estudos
observacionais, entre outros.5,7-10 Apesar destes es-
forços, o relato inadequado ainda é comumente en-
contrado em todas as áreas de pesquisa em saúde,
prejudicando assim a qualidade e utilidade das infor-
mações divulgadas na literatura.7
Falhas frequentes no relato de ECRs, conside-
rados padrão-ouro para fornecer evidências sobre a
eficácia relativa às intervenções terapêuticas, estimu-
laram um grupo de editores e pesquisadores a formu-
larem o enunciado CONSORT (Consolidated
Standards of Reporting Trials).4,11 Publicado em
1996 e revisado em 2001, este conjunto de critérios
auxilia os autores a aperfeiçoar a descrição de seus
achados através do emprego de uma lista de checagem
de 22 itens e um diagrama representando o fluxo dos
participantes durante cada estágio do estudo.4 O enun-
ciado CONSORT facilita a interpretação crítica dos
resultados, pois, permite que o leitor conheça detalhes
sobre o desenho do estudo, seu modo de condução e o
tipo de análise utilizada. Adicionalmente, evita a omis-
são de possíveis erros sistemáticos que compromete-
riam a validade e confiabilidade dos resultados e con-
sequentemente, sua aplicabilidade dentro do contexto
da medicina baseada em evidências.
Avaliações associando a adoção do enunciado
CONSORT com a melhora da qualidade do relato de
artigos publicados12,13 têm contribuído progressiva-
10
Medicina (Ribeirão Preto) 42 (1): 9-21
http://www.fmrp.usp.br/revista
mente para seu maior endossamento por jornais mé-
dicos, que atualmente representam mais de 300, e por
grupos editoriais como Council of Science Editors,
ICMJE e World Association of Medical Editors
(WAME). Neste sentido, a fim de reforçar sua utiliza-
ção, o enunciado CONSORT foi traduzido para dife-
rentes línguas, alcançando o número de dez traduções,
e apresenta várias extensões que abordam de forma
mais apropriada ECR caracterizados por diferentes
desenhos, dados e intervenções. Atualmente, as ex-
tensões do enunciado CONSORT se direcionam a
estudos clínicos desenhados em aglomerado (Cluster
trials), estudos de equivalência e não-inferioridade,
estudos de intervenções com ervas medicinais, inter-
venções não-farmacológicas, referentes aos efeitos
prejudiciais da intervenção e voltados para o relato de
resumos em jornais e conferências. 14-19
Assim, reconhecida a relevância do enunciado
CONSORT em promover o relato claro e completo
das pesquisas em saúde e os esforços desse grupo em
ampliar sua utilização através da extensão a diferen-
tes estudos clínicos e a diversas línguas, este trabalho
pretende abordar brevemente seus conceitos, auxili-
ando sua compreensão na língua portuguesa.
Lista de Checagem (Checklist)
As recomendações descritas abaixo foram
fundamentadas segundo a versão revisada do enun-
ciado CONSORT.4 Com o intuito de facilitar a in-
terpretação e utilização das instruções, foi mantida a
estruturação original em tópicos dos 22 itens da lista
de checagem (Quadro 1) acompanhada de um exem-
plo20 de ECR especificando todas as etapas listadas
ao final do texto (Quadro 2), cujo emprego auxilia o
relato adequado de informações sobre o desenho, modo
de condução e análise do estudo. Adicionalmente, as
modificações propostas para atender às necessidades
específicas de ECR não-farmacológicos18 foram con-
venientemente abordadas em alguns tópicos.
ITEM 1- Título e Resumo
Neste item é sugerido aos autores que decla-
rem explicitamente o modo como os participantes fo-
ram distribuídos para os grupos experimentais e a in-
clusão desta informação no título é fortemente reco-
mendada. Esta indicação surgiu da necessidade de
identificar e indexar adequadamente ECR em bases
eletrônicas, uma vez que muitos estudos são classifi-
cados de forma inapropriada. Para tanto, aconselha-
Medicina (Ribeirão Preto) 42 (1): 9-21 Martins J, Sousa LM, AS Oliveira.
http://www.fmrp.usp.br/revista Recomendações do enunciado CONSORT

QUADRO 1- Lista de Checagem: Itens Necessários ao Relatar Estudos Clínicos Controlados Randomizados

Extensão para Estudos

Seção Item Recomendação CONSORT Não-Farmacológicos

Título e Resumo 1 Como os participantes foram alocados para No resumo, descrição do tratamento experi-
as intervenções (“alocação randomizada”, “ran- mental e o de comparação, dos profissionais
domizado”, “randomicamente assinalados”) de saúde, centros e aspectos do cegamento

Introdução
(Embasamento Científico) 2 Contexto científico no qual a pesquisa se de-
senvolveu
Justificativa para realização do estudo
Métodos
Participantes 3 Critérios de elegibilidade para os participan- Quando aplicável, critérios de elegibilidade para
tes, os locais e ambientes onde os dados foram os centros e para aqueles realizando as inter-
coletados venções
Intervenções 4 Descrições detalhadas sobre as intervenções Descrições detalhadas sobre ambos os trata-
planejadas para cada grupo, como e quando mentos experimental e de comparação
4A foram realmente administradas
Descrever os diferentes aspectos inerentes à
intervenção.Quando aplicável, descrição dos
procedimentos de adaptação das intervenções
a cada participante
4B
Detalhes sobre como as intervenções foram
padronizadas
4C
Detalhes sobre como foi avaliada ou alcançada
a aderência dos profissionais de saúde ao pro-
tocolo
Objetivos 5 Especificar os objetivos e hipóteses do estudo
Variáveis de Resposta 6 Definir claramente as variáveis de resposta (pri-
márias e secundárias). Quando aplicável, des-
crever quaisquer métodos usados para melho-
rar a qualidade das mensurações (ex: treina-
mento dos avaliadores)
Tamanho Amostral 7 Como o tamanho da amostra foi determinado. Quando aplicável, detalhar se os participantes
Quando aplicável, descrever e justificar quais- foram aglomerados por centros e/ou profissi-
quer análises intermediárias e regras para in- onais de saúde e como isto foi realizado
terrupção do estudo
Geração da Sequência 8 Método utilizado para gerar a sequência de Quando aplicável, como os profissionais de
de Alocação alocação randomizada, incluindo informações saúde foram alocados para cada grupo do es-
sobre qualquer método de restrição (ex: por tudo
blocos, estratificação)
Mascaramento da Alocação 9 Método utilizado para implementar a sequên-
cia de alocação randomizada (ex: frascos enu-
merados, tabela de números aleatórios), escla-
recendo se a sequência foi omitida até o mo-
mento da alocação dos participantes
Implementação da Alocação 10 Quem gerou a sequência de alocação, quem Se aqueles administrando as co-internvenções
recrutou os participantes e quem os assinalou eram cegos ou não em relação ao assinalamento
para os grupos dos grupos
Cegamento 11A Indicar se os participantes, os indivíduos que
administraram as intervenções e os que avalia-
ram os resultados eram cegos em relação ao
grupo de intervenção.
11B Se realizado, descrever o método de cegamento
e informações sobre o grau de similaridade en-
tre as intervenções

11
Martins J, Sousa LM, AS Oliveira. Medicina (Ribeirão Preto) 42 (1): 9-21
Recomendações do enunciado CONSORT http://www.fmrp.usp.br/revista

Métodos Estatísticos 12 Métodos estatísticos usados pra comparar os Quando aplicável, relatar se os participantes
grupos em relação às variáveis primárias de foram aglomerados segundo os centros ou pro-
resposta; descrever quaisquer análises adicio- fissionais de saúde e como isto foi realizado
nais, como análises de subgrupo ou análises de
ajuste.
Resultados
Fluxograma 13 Fluxo dos participantes durante cada estágio O número de profissionais de saúde ou cen-
(recomenda-se a construção de um diagrama). tros realizando a intervenção em cada grupo e
Especificamente, descrever para cada grupo: o o número de pacientes tratados por cada pro-
número de participantes que foram alocados fissional de saúde ou em cada centro
randomicamente, os que receberam a interven-
ção planejada, os que completaram todo pro-
tocolo, os que foram incluídos nas análises
estatísticas; descrever e justificar quaisquer
desvios no protocolo pré-estabelecido

Implementação da Novo Descrever o tratamento experimental e o de

Intervenção Item comparação da maneira como foram realmente
implementados
Recrutamento 14 Datas definindo o período de recrutamento e
acompanhamento

Características Basais 15 Características clínicas e demográficas da amos- Quando aplicável, descrição dos profissionais
tra, referentes ao período pré-intervenção de saúde (volume de casos, qualificação, expe-
riência etc.) e centros (nível de complexidade)
em cada grupo

Números Analisados 16 Número de participantes (denominador) em

cada grupo incluídos em cada análise. Indicar
se as análises foram por “intenção de tratar”
(intention to treat analyses). Apresentar os re-
sultados em números absolutos, se possível
(ex: 5/15, não 30%)

Resultados e Estimativas 17 Descrever para cada resultado, primário e se-

cundário, um sumário dos valores observados
em cada grupo, o tamanho do efeito estimado
acompanhado de sua precisão (ex: intervalo de
confiança de 95%)

Análises Adicionais 18 Indicar a realização de análises múltiplas, in-

cluindo análises de subgrupos ou análises de
ajuste. Informar se estas análises foram pré-
estabelecidas ou exploratórias, ou seja, se fo-
ram planejadas ou sugeridas pelos achados.

Efeitos Adversos 19 Informar a ocorrência de eventos adversos ou

efeitos colaterais
Discussão
Interpretação 20 Interpretação dos resultados, levando em con- Adicionalmente, considerar a escolha da inter-
sideração as hipóteses do estudo, possíveis venção de comparação, o não cegamento ou
limitações e fontes potenciais de viéses, assim sua realização parcial, o nível desigual de ex-
como, os riscos associados às análises múlti- periência dos profissionais de saúde ou cen-
plas dos resultados tros em cada grupo

Generalização 21 Generalização (validade externa) dos achados Generalização (validade externa) dos achados
do estudo do estudo de acordo com a intervenção experi-
mental e de comparação, pacientes, profissio-
nais de saúde e centros envolvidos no estudo.
Evidências Vigentes 22 Interpretação geral dos resultados sob o con-
texto das evidências vigentes

12
Medicina (Ribeirão Preto) 42 (1): 9-21 Martins J, Sousa LM, AS Oliveira.
http://www.fmrp.usp.br/revista Recomendações do enunciado CONSORT

QUADRO 2- Lista de Checagem: Exemplo de Relato dos Itens Recomendado pelo Enunciado CONSORT
Seção Item Estudo Clínico Controlado Randomizado de Li et al.20
Título e Resumo 1 Título: Efetividade do modelo de terapeuta primário para reabilitação da artrite reumatóide:
Um estudo clínico controlado e randomizado
Resumo: Comparar o modelo de terapeuta primário (MTP), fornecido por um único terapeuta
primário treinado em reumatologia, com o modelo de tratamento tradicional (MTT), fornecido
por um fisioterapeuta (FT) e/ou terapeuta ocupacional (TO) generalista, para tratar pacientes
com artrite reumatóide (AR).
Introdução 2 Profissionais de cuidado em saúde estão explorando novos modelos de serviço para atender às
demandas do tratamento de artrite. Para nosso conhecimento, nenhum estudo tem sido condu-
zido para avaliar a efetividade do MTP em contraposição ao MTT, que é o padrão da maioria
das facilidades canadenses para reabilitação da artrite.
Métodos
Participantes 3 Paciente: Os candidatos elegíveis foram indivíduos que solicitaram FT e/ou TO e não tinham
recebido tratamento de reabilitação para AR nos 2 últimos anos.
Terapeutas: Todos os terapeutas primários foram fisioterapeutas e terapeutas ocupacionais
da Sociedade de Artrite que completaram o Programa de Treinamento em Avaliação de Poliartrites
(34 FT, 14 TO). Os FT e TO tradicionais exerceram uma prática generalista em setor ambula-
torial de hospitais (FT e TO), clínicas fundadas publicamente (principalmente FT) ou agências
de cuidado domiciliar (FT e TO).
Recrutamento: Devido ao fato de o MTP ter sido utilizado somente pela Sociedade de Artrite
e o MTT ser utilizado pela maioria das agências fundadas publicamente, nós conduzimos o
ECR dentro do contexto destes 2 ambientes de serviço em Ontário. Houve 2 tipos de clínicas de
fisioterapia fundadas publicamente: clínicas cujo proprietário é fisioterapeuta e clínicas cujo
proprietário é medico e que contrata fisioterapeutas e outros profissionais da saúde.
Intervenções 4 A duração da intervenção foi de 6 semanas. Grupo MTP: Os terapeutas primários poderiam
oferecer um ou uma combinação dos seguintes tratamentos: educação, incluindo o diagnóstico,
controle da dor, conservação de energia e princípios de proteção articular e uso adequado de
calçados; conselho quanto ao uso de modalidade física ou realização de exercícios específicos para
artrite; conselho ou prescrição de equipamentos de assistência/ mobilidade (incluindo bengalas,
andadores, cadeiras de roda e paciente); talas de membro superior/órteses para os pés; suporte
psicossocial e de mediação entre os pacientes e administração da unidade de saúde.Grupo MTT:
Todos os pacientes receberam educação no controle da dor. Em adição, fisioterapeutas puderam
oferecer um ou uma combinação dos seguintes tratamentos: modalidades físicas para dor, conse-
lho para exercício, conselho e prescrição de bengalas ou andadores. O tratamento da terapia
ocupacional poderia incluir equipamentos de assistência (ex. aumento dos assentos de vaso
sanitário), talas e órteses, e conselho e prescrição de protetores para mobilidade, incluindo
bengala, andadores, cadeiras de roda e pacientes.
4A Não se aplica
4B Todos os terapeutas primários completaram o Programa de Treinamento em Avaliação de
Poliatrites.
4C Terapeutas em ambos os grupos completaram um documento registrando os tratamentos ofere-
cidos em cada sessão.
Objetivos 5 Comparar o modelo de terapeuta primário (MTP), fornecido por um único terapeuta primário
treinado em reumatologia, com o modelo de tratamento tradicional (MTT), fornecido por um
fisioterapeuta (FT) e/ou terapeuta ocupacional (TO) generalista, para tratar pacientes com
artrite reumatóide (AR).
Variáveis de Resposta 6 Medidas de resultado primárias: definidas como a proporção de respondentes clínicos que
experimentaram melhora maior que 20% em 2 das seguintes medidas, obtidas pela comparação
dos valores basais e de 6 meses: função física (medida pelo Health Assessment Questionnaire
[HAQ]), dor (medida com a escala visual analógica [EVA]) e conhecimento da doença (medido
com o Arthritis Community Research e Evaluation Unit RA Knowledge Questionnaire).
Medidas de resultado secundárias: diferença na mudança da pontuação para The Stanford
Self Efficacy Scale, The RA disease activity index (RADAI) e The Coping Efficacy Scale.
Tamanho Amostral 7 Um total de 142 pacientes foi requerido pelo ECR, com base nas estimativas de um estudo piloto
(diferença de respondentes clínicos entre grupos=25%, nível α=0.05, poder=80%, taxa de atri-
to=20%). Nós estimamos um tamanho de amostra utilizando as medidas de resultado primárias.

13
Martins J, Sousa LM, AS Oliveira. Medicina (Ribeirão Preto) 42 (1): 9-21
Recomendações do enunciado CONSORT http://www.fmrp.usp.br/revista

Geração da Sequência 8 Nós utilizamos o algoritmo de triagem da Sociedade de Artrite para assinalar o local de trata-
de Alocação mento (ex. clínica ou domiciliar). Os pacientes foram estratificados pelo critério de classifica-
ção funcional do Colégio Americano de Reumatologia (CAR), previamente à randomização, já
que a função física tem sido identificada como uma variável de prognóstico para a incapacida-
de. Nós assinalamos os pacientes elegíveis para o MTP ou MTT em uma taxa de 1:1, utilizan-
do blocos de tamanho 6. Uma tabela de números randomizados gerada pelo computador foi
utilizada para randomização.
Mascaramento da Alocação 9 Não mencionado
Implementação da Alocação 10 Não mencionado
Cegamento 11A/B Não houve cegamento dos pacientes e terapeutas. O artigo não deixa claro se a análise de dados
foi cega.
Teste Qui-quadrado foi utilizado para analisar a associação entre o grupo de tratamento e a
proporção de respondentes clínicos (medida de resultado primária).
Análises adicionais: Regressão logística foi utilizada para avaliar a associação do grupo de
Métodos Estatísticos 12 tratamento com a medida de resultado primária através destes blocos de variáveis: variáveis
demográficas do paciente (idade, sexo, nível de educação, rendimento médio da casa), variáveis
relacionadas à doença (classe funcional do CAR, duração da doença). O nível de significância
estatística foi de P< 0.05 e foram calculados o Odds Ratio ajustado e o intervalo de confiança
de 95%. Medidas repetidas do teste ANOVA foram conduzidas para cada tratamento para
explorar mudanças nas medidas de resultado com o transcorrer do tempo. Post-hoc LSD test
foi também realizado.Teste T-Student foi utilizado para comparar a mudança nas pontuações
para cada medida de resultado individual entre MTP e MTT em 2 momentos.
Resultados
Fluxograma 13 Os dados são extensos e por isso não foram representados nesta tabela. Por favor, veja maiores
informações no artigo.
Implementação Novo Não mencionado ou não aplicável.
da Intervenção
Recrutamento 14 O recrutamento foi realizado entre novembro de 1999 e maio de 2002.
Características Basais 15 Idade, sexo, classe funcional do CAR, duração da doença, nível de educação, rendimento médio
da casa, estado civil, estado de emprego, condições de moradia (sozinho, com família, casa de
cuidados), medidas clínicas (dor, HAQ e conhecimento).
Números Analisados 16 Análises por tratamento: 111 pacientes foram incluídos nas análises de 144 pacientes rando-
mizados.
Resultados e Estimativas 17 Os dados são extensos e por isso não foram representados nesta tabela. Por favor, veja maiores
informações no artigo.
Análises Adicionais 18 Análises pré-especificadas: regressão logística. Análise exploratória: medidas repetidas do
teste ANOVA e teste Post-hoc LSD.
Efeitos Adversos 19 Não mencionado

Discussão A discussão é extensa e por isso será apresentada parcialmente nesta tabela. Por favor, veja
maiores informações no artigo.
Interpretação 20 O artigo apresenta muitas limitações do estudo que podem ser fontes potenciais de viés:
Idealmente, uma análise por “intenção de tratar” deveria ser conduzida para avaliar a efetivida-
de do tratamento. No entanto, isto não foi possível, de forma que os achados devem ser
interpretados com cautela devido ao potencial viés de atrito.
Generalização 21 Aspectos que devem ser considerados ao generalizar os resultados: Este estudo não incluiu
clínicas de fisioterapia privadas para fornecer a terapia tradicional ao grupo MTT, sendo que
em Ontário mais de 50% das clínicas de fisioterapia são privadas. Além disso, o MTT no setor
privado pode ser diferente do setor público. No entanto, como as clínicas privadas são dispo-
níveis somente para alguns indivíduos, uma comparação envolvendo apenas estas clínicas não
será generalizável para todos os pacientes que solicitam reabilitação para AR em Ontário.
Evidências Vigentes 22 Os resultados devem ser interpretados com cautela devido à alta taxa de atrito. No entanto,
nossos achados concordam com estudos prévios nos quais os tratamentos foram fornecidos
por um fisioterapeuta ou terapeuta ocupacional treinados em reumatologia. Outras pesquisas
devem ser direcionadas a compreender a efetividade e o valor econômico dos profissionais de
reabilitação com treinamento em reumatologia em diferentes modelos de saúde, tais como o
modelo médico de terapia e a telemedicina.

14
Medicina (Ribeirão Preto) 42 (1): 9-21
http://www.fmrp.usp.br/revista
se o uso de expressões como “os pacientes foram ran-
domicamente alocados” ou “o tratamento foi rando-
mizado” entre outras.
O resumo deve ser suficientemente detalhado
e transparente, uma vez que é o responsável por mo-
tivar a leitura do texto completo e, não raro, represen-
ta a única fonte de acesso a informações que possi-
velmente nortearão as decisões clínicas baseadas em
evidências. Os aspectos centrais do resumo, que de-
vem ser mencionados a fim de permitir a avaliação da
validade e aplicabilidade do estudo, podem ser consul-
tados em Hopewell et al.19 Resumos estruturados em
subtópicos com detalhes referentes ao desenho, modo
de condução, análise e conclusões do estudo garan-
tem uma maior qualidade e facilidade na busca de in-
formações quando comparados aos resumos tradicio-
nalmente descritos. Em relação aos estudos clínicos
não-farmacológicos, recomenda-se a descrição de da-
dos sobre os centros de recrutamento dos pacientes,
o número e nível de experiência dos profissionais de
saúde envolvidos, os diferentes grupos de compara-
ção e quais indivíduos foram mantidos cegos durante
o estudo.
ITEM 2- Introdução
A introdução geralmente expõe o contexto ci-
entífico no qual a pesquisa está sendo desenvolvida e
deve conter a justificativa para realização do referido
estudo, já que a exposição desnecessária de seres vi-
vos aos riscos inerentes à investigação científica é eti-
camente desaconselhável pela Declaração de Helsinki
(1997).21 Além disso, é preciso indicar os prováveis
benefícios da intervenção, bem como as explicações
plausíveis para suas ações, principalmente quando
existe pouca ou ainda nenhuma experiência prévia em
relação à intervenção a ser investigada. A inclusão de
uma revisão sistemática de estudos clínicos similares
ou a notificação da ausência dos mesmos é sugerida,
sendo também apropriada a descrição dos objetivos.
Métodos
ITEM 3- Participantes
Este item orienta quanto aos participantes da
pesquisa, que são definidos pelos critérios de inclusão
e pelo local e forma de recrutamento.
ITEM 3.a) Os critérios de inclusão
Precisam ser descritos claramente, não sendo
necessária a distinção com os critérios de exclusão.
Martins J, Sousa LM, AS Oliveira.
Recomendações do enunciado CONSORT
Nos estudos não-farmacológicos, os critérios de in-
clusão se estendem aos centros e aos responsáveis
por realizar as intervenções, pois o nível de complexi-
dade dos centros de coleta e o nível de experiência
dos profissionais de saúde podem afetar o efeito esti-
mado da intervenção em análise. Para tanto, o artigo
deve relatar o número e o tipo de centros e de profis-
sionais de saúde envolvidos no estudo.
ITEM 3.b) Local de coleta e recrutamento
Particularmente importante é o relato de quais-
quer fatores que comprometam a validade externa do
estudo, como o local de coleta e recrutamento, se hos-
pitais, clínicas ou comunidade e a forma de recruta-
mento, que pode ser caracterizada por anúncios ou
comparecimento voluntário, por encaminhamentos,
dentre outras.
ITEM 4- Intervenções
Este item refere-se à descrição das interven-
ções planejadas para cada grupo e como e quando
elas foram realmente administradas. O grupo controle
pode se apresentar em diferentes formas através de
uma intervenção usual, uma intervenção ativa, um
placebo ou ainda uma lista de espera. A informação
clara e completa de todos os procedimentos envolvi-
dos na intervenção é essencial para facilitar a compa-
ração do estudo, a reprodutibilidade e sua inclusão em
revisões sistemáticas. Em estudos não-farmacológi-
cos, como os de intervenção fisioterapêutica, é neces-
sário descrever o conteúdo, o número e duração das
sessões, duração da intervenção, os instrumentos utili-
zados para transmitir a informação, se a intervenção
foi monitorada e se foi individual ou em grupo. Neste
sentido, também é importante descrever procedimen-
tos para padronizar a intervenção oferecida, possibili-
tando o acesso a esse material através de um apêndi-
ce ou de um link on-line. Outro aspecto relevante é o
nível de aderência dos profissionais envolvidos ao pro-
tocolo proposto, pois isto pode influenciar a reproduti-
bilidade e aplicabilidade futura dos achados.
ITEM 5- Objetivo e hipótese
Segundo recomendado por este item, os auto-
res devem especificar os objetivos e hipóteses do es-
tudo. Os objetivos representam as questões que o es-
tudo se propôs a responder ou investigar, enquanto
que as hipóteses se referem aos resultados espera-
dos, ou ainda às respostas provisórias, que ao serem
confirmadas auxiliam os objetivos.4
15
Martins J, Sousa LM, AS Oliveira.
Recomendações do enunciado CONSORT
ITEM 6- Variáveis de resposta
Este item diz respeito às variáveis de resposta,
distinguidas em primárias e secundárias. A variável
de resposta primária é a variável de maior relevância
para o estudo, sendo pré-especificada e utilizada para
o cálculo do tamanho da amostra. As demais variá-
veis de interesse do estudo representam as variáveis
secundárias, que não necessariamente são planejadas
antes do início do estudo. A mensuração das variáveis
deve priorizar a utilização de escalas e instrumentos
validados, o que garante a qualidade das medidas e
permite a comparação com estudos similares. A des-
crição das mensurações deve ser feita em relação ao
início, periodicidade e término e para qualquer método
utilizado para melhorar sua qualidade, tais como a re-
alização da mensuração por mais de um avaliador, o
treinamento dos avaliadores e a manutenção dos ava-
liadores “cegos” quanto aos grupos de intervenção.
ITEM 7- Tamanho amostral e análises inter-
mediárias
ITEM 7.a) Tamanho da amostra
A determinação do tamanho da amostra requer
um planejamento cuidadoso, sendo realizada antes de
iniciar o estudo. A amostra precisa ser grande o sufi-
ciente para possibilitar uma alta probabilidade de de-
tectar diferenças estatisticamente e clinicamente sig-
nificativas, se estas existirem. Alguns estudos são
marcados pela diferença entre o tamanho da amostra
planejado e real ao término da pesquisa devido à in-
terrupção precoce, possivelmente motivada por razões
éticas, replanejamento do tamanho amostral e dificul-
dade de recrutamento. Nesses casos, geralmente se
verifica a utilização de análises intermediárias.
ITEM 7.b) Análises intermediárias
As análises intermediárias são geralmente uti-
lizadas para decidir se o recrutamento deve continuar,
aspecto este que precisa ser mencionado no artigo
quanto à quantidade e tipo de análises realizadas e se
estas foram planejadas previamente ao início do estu-
do ou algum tempo depois. Em relação aos estudos
não-farmacológicos, é importante relatar se as análi-
ses intermediárias foram feitas por aglomerado, sendo
cada aglomerado representado pelos indivíduos que re-
ceberam a intervenção de um mesmo profissional de
saúde. Este tipo de análise deve ser considerado, uma
vez que os indivíduos não são capazes de gerar obser-
vações independentes por terem recebido a interven-
ção de um mesmo pesquisador/profissional de saúde.
16
Medicina (Ribeirão Preto) 42 (1): 9-21
http://www.fmrp.usp.br/revista
ITENS 8 e 9- Referentes à alocação
A qualidade dos ECR está fortemente associa-
da ao processo de randomização, que pode ser enten-
dido pelas etapas de gerar uma sequência de alo-
cação randomizada (Item 8) e de mascarar esta
sequência (Item 9) de forma a não permitir que os
investigadores envolvidos com o recrutamento dos in-
divíduos a conheçam previamente. Assim, os autores
devem especificar o método utilizado para gerar esta
sequência de alocação randomizada (Item 8.a),
se randomizado ou quase-randomizado. A randomiza-
ção verdadeira ocorre quando o indivíduo é assinala-
do para um grupo com base no acaso, ou seja, tem
igual chance de ser distribuído/alocado para qualquer
um dos grupos de comparação. Para tanto, sugere-se
a utilização de uma tabela de números aleatórios, uma
sequência de números randomizados gerada pelo com-
putador ou o ato de jogar uma moeda. Nos métodos
quase-randomizados, a chance do indivíduo ser assi-
nalado para um determinado grupo já está definida
antes mesmo dele entrar em contato com o investiga-
dor. Este tipo de alocação determinística, em vez de
pelo acaso, ocorre sempre que os indivíduos são assi-
nalados para os grupos de acordo com seu número de
registro em uma instituição de saúde, número de car-
teira de identidade, data de nascimento ou ordem de
chegada, se par ou ímpar.
A randomização simples pode também ser subs-
tituída pela randomização restrita (Item 8.b) atra-
vés da utilização de métodos que visam equilibrar os
grupos quanto ao número de indivíduos (randomiza-
ção em bloco) ou quanto a algumas características da
linha de base, cuja diferença entre os grupos poderia
enfraquecer a credibilidade do estudo (randomização
por estratos). Para os estudos não-farmacológicos, o
processo de randomização deve ser relatado também
para os profissionais de saúde.
O mascaramento da sequência de alocação ran-
domizada é de considerável importância, pois sua não
realização pode invalidar o processo anterior de gera-
ção da sequência. Consiste em prevenir o conheci-
mento prévio da intervenção a ser assinalada, evitan-
do que aqueles envolvidos com o recrutamento dos
indivíduos sejam influenciados por este conhecimen-
to. Tal processo, sempre possível de ser realizado até
o momento em que o indivíduo é assinalado para um
dos grupos de intervenção, previne o viés de seleção
e precisa ser claramente distinguido do processo de
cegamento que se inicia somente após o término da
seleção e nem sempre é possível.
Medicina (Ribeirão Preto) 42 (1): 9-21
http://www.fmrp.usp.br/revista
Os autores devem relatar os procedimentos uti-
lizados para mascarar a sequência, sendo desejável o
envolvimento externo de indivíduos não relacionados
ao estudo e, quando não viável, a utilização de envelo-
pes opacos ou frascos, ambos selados e numerados
de acordo com a sequência aleatória previamente ge-
rada. É fundamental assegurar que os envelopes ou
frascos sejam abertos somente após serem registra-
dos com o nome do indivíduo e outros detalhes perti-
nentes.
ITEM 10- Implementação
O planejamento do estudo deve ser cauteloso
quanto a definir claramente aqueles que geraram a
sequência, que registraram os indivíduos e que os as-
sinalaram para os determinados grupos. O estudo pode
ser diferenciado em dois procedimentos definidos por
1) gerar e mascarar a sequência de alocação rando-
mizada e 2) procedimento de implementação dos
assinalamentos para cada grupo. Faz-se necessário
separar completamente os indivíduos envolvidos em
cada procedimento, uma vez que aquele responsável
por assinalar os indivíduos pode determinar o grupo
para o qual o indivíduo será alocado, se esteve envol-
vido com o processo de gerar a sequência de aloca-
ção. Assim, um indivíduo pode desempenhar mais de
uma função dentro do procedimento de gerar e mas-
carar a sequência, mas não pode estar envolvido com
a implementação e vice-versa.
ITEM 11- Cegamento
O cegamento consiste em manter a interven-
ção assinalada desconhecida pelos participantes, pro-
fissionais de saúde que administram a intervenção e
aqueles coletando os dados clínicos e analisando os
resultados. Considerando as diversas possibilidades de
cegamento, os autores devem relatar claramente para
quem o estudo foi cego, ao invés de utilizar termos
como “duplo cego”, sem maiores esclarecimentos. A
função desempenhada pelo processo de cegamento é
específica a cada indivíduo para o qual é realizado. No
caso de cegamento dos pacientes, tenta-se prevenir o
viés de execução resultante de efeitos não associados
com a intervenção recebida, sendo este efeito melhor
evidenciado com a utilização de grupo controle placebo.
O efeito placebo pode ser traduzido em expectativas
positivas ou ansiedade do paciente em relação a um
tratamento novo, bem como a baixas expectativas ou
tranquilidade do paciente submetido a um tratamento
usual. O cegamento dos profissionais de saúde que
Martins J, Sousa LM, AS Oliveira.
Recomendações do enunciado CONSORT
administram a intervenção também previne o viés de
execução, enquanto que o cegamento daqueles que
coletam as variáveis de resposta e analisam os resul-
tados previne o viés de detecção, evitando-se que dis-
ponham de atitudes e estímulos diferenciados aos pa-
cientes por reconhecer para qual intervenção ele foi
assinalado ou que selecionem os métodos estatísticos
baseados neste conhecimento prévio.
Alguns estudos não-farmacológicos apresentam
limitações para o cegamento, uma vez que as inter-
venções envolvem procedimentos conhecidos tanto
por aquele que as administram como pelo paciente.
Além disso, sinais e sintomas não previstos podem
evidenciar ao paciente e ao profissional da saúde a
intervenção recebida e administrada, comprometendo
o cegamento previamente planejado. A realização do
cegamento daqueles coletando as variáveis de res-
posta e analisando os resultados é particularmente
importante nestes casos marcados pela impossibilida-
de ou falhas de cegamento, sendo também recomen-
dada em estudos cujas variáveis de resposta são sub-
jetivas, como no caso do relato de dor.
Os desafios encontrados pelos estudos não-far-
macológicos para adotar estratégias de cegamento
requer aos autores relatarem detalhadamente o méto-
do utilizado e as similaridades entre as intervenções,
contribuindo com a exploração de formas diferentes
de implementar o cegamento.
ITEM 12- Métodos estatísticos
Os autores devem especificar os procedimen-
tos estatísticos utilizados durante todas as etapas de
realização do estudo e se estes foram planejados pre-
viamente ou sugeridos pelos achados. Geralmente, as
análises fornecem estimativas quanto à eficácia da
intervenção proposta ao comparar as variáveis pri-
márias de resposta observadas em cada grupo. Acon-
selha-se, preferencialmente, a descrição dos interva-
los de confiança do referido efeito estimado da inter-
venção em vez da utilização do P valor, que deve ser
mencionado em valores exatos, se empregado. As
análises adicionais, distinguidas em análises subgrupo
e análises de ajuste, devem ser realizadas com caute-
la e se possível pré-especificadas, pois muitas vezes
resultam em inferências equivocadas. As análises de
subgrupo visam identificar possíveis diferenças na efi-
cácia do tratamento proposto entre subgrupos com-
plementares, como por exemplo, ao estimar se os re-
sultados diferem entre os indivíduos de um mesmo
grupo de tratamento segundo características específi-
17
Martins J, Sousa LM, AS Oliveira.
Recomendações do enunciado CONSORT
cas, como por exemplo, sexo e faixa etária. As análi-
ses de ajuste, também desencorajadas pelo enunciado
CONSORT, representam quaisquer procedimentos
utilizados para homogeneizar as amostras em relação
a alguns aspectos da linha de base e, se necessárias,
não devem ser determinadas pela diferença de P va-
lor, mas por serem reconhecidas previamente como
importantes fatores prognósticos.
Resultados
ITEM 13- Fluxograma dos participantes
A interpretação dos resultados de ECR é influ-
enciada pela maneira como são descritas informações
sobre a distribuição dos participantes durante cada
etapa do estudo. Detalhes relativos ao recrutamento,
Avaliados para elegibilidade
(N = ....)
Registro de
pacientes
Randomizado
Alocados para intervenção A* (N = ....)
Alocação:
Receberam a intervenção conforme alocado (N = ....)
Pacientes
Não receberam a intervenção conforme alocado (N = ....)
Profissionais de saúde (N = ....), equipes (N = ....),
Alocação centros (N = ....) realizando a intervenção
daqueles
administrando Números de pacientes tratados por cada profissional de
pacientes saúde, equipe e centro (mediana, IIQ, min, máx)
Seguimento: Seguimento perdido (forneça razões) (N = ....)
Pacientes Intervenção descontinuada (forneça razões) (N = ....)
Análises: Analisados (N = ....)
Pacientes
Excluídos das análises (forneça razões) (N = ....)
Figura 1: Diagrama representando o fluxo dos participantes em cada etapa do estudo.
*A = Intervenção investigada; **B =Intervenção controle.
18
Medicina (Ribeirão Preto) 42 (1): 9-21
http://www.fmrp.usp.br/revista
alocação e seguimento dos indivíduos devem ser es-
pecificados para ambos os grupos. Os autores são ori-
entados a relatar: o número de participantes entrevis-
tados e consecutivamente selecionados para o estu-
do; o número de indivíduos alocados em cada grupo e
quantos destes receberam de fato a intervenção pro-
posta conforme planejada; o número de indivíduos
desistentes ou dispensados durante o seguimento, as-
sim como o número de indivíduos incluídos nas análi-
ses finais. Em estudos não-farmacológicos é neces-
sário descrever o número de centros e profissionais
envolvidos. A construção de um fluxograma é forte-
mente recomendada (Figura 1).
Adicionalmente, os autores devem informar e
justificar quaisquer eventuais desvios no protocolo pre-
viamente proposto, tais como modificações nos méto-
dos de análise dos dados, alterações nas avaliações
Excluídos (N = ....)
Não atenderam aos critérios de inclusão (N = ....)
Recusaram-se a participar (N = ....)
Outras razões (N = ....)
(N = ....)
Alocados para intervenção B** (N = ....)
Receberam a intervenção conforme alocado (N = ....)
Não receberam a intervenção conforme alocado (N = ....)
Profissionais de saúde (N = ....), equipes (N = ....),
centros (N = ....) realizando a intervenção
Números de pacientes tratados por cada profissional de
saúde, equipe e centro (mediana, IIQ, min, máx)
Seguimento perdido (forneça razões) (N = ....)
Intervenção descontinuada (forneça razões) (N = ....)
Analisados (N = ....)
Excluídos das análises (forneça razões) (N = ....)
Medicina (Ribeirão Preto) 42 (1): 9-21
http://www.fmrp.usp.br/revista
ou ainda nas intervenções após a alocação dos indiví-
duos. O uso do termo “desvio de protocolo” não é
suficiente para justificar a exclusão de participantes
após a randomização.
ITEM 14- Recrutamento e acompanhamento
Os autores devem descrever claramente o pe-
ríodo em que foi realizado o recrutamento, como tam-
bém informar durante quanto tempo os participantes
foram acompanhados e se houve encerramento do
estudo antes do previsto. Especificações quanto à taxa
de recrutamento (número de participantes recrutados
em determinado período de tempo), e se este ocorreu
conforme planejado podem ser úteis a outros pesqui-
sadores.
ITEM 15- Características clínicas e demográ-
ficas da amostra
Neste item é recomendada a descrição das
características clínicas e demográficas da amostra
referentes ao período anterior à intervenção, facili-
tando assim o julgamento, por parte do leitor, quanto
às particularidades dos resultados, sua relevância e
aplicabilidade clínica em indivíduos com característi-
cas semelhantes às da amostra submetida ao trata-
mento. A comparação destas características no perí-
odo anterior à intervenção permite avaliar similarida-
des entre os grupos. Ressalta-se, porém, que a aloca-
ção randomizada dos participantes visa garantir que
possíveis diferenças entre os grupos sejam advindas
do acaso e não consequentes a viéses de seleção.
De maneira prática, os dados podem ser apre-
sentados em tabelas. Sugere-se o uso de medidas de
tendência central e suas respectivas medidas de dis-
persão na descrição de variáveis quantitativas contí-
nuas. Já em relação às variáveis qualitativas ou quan-
titativas discretas, como por exemplo, níveis de seve-
ridade da doença ou número de partos, respectiva-
mente, devem ser apresentadas segundo a frequência
ou proporção observadas em cada grupo.
ITEM 16- Número de participantes incluídos
nas análises
Como já anteriomente descrito no item 15, os
autores devem relatar o número de participantes que
foram incluídos em cada grupo em cada análise do
estudo. Faz-se necessário indicar se as análises fo-
ram feitas por “intenção de tratar” (“intention to treat
analyses”), ou seja, todos os indivíduos foram anali-
sados conforme alocados. Para tanto, os resultados
Martins J, Sousa LM, AS Oliveira.
Recomendações do enunciado CONSORT
de cada grupo devem ser apresentados em números
absolutos e não em números fracionados (i.e., 5/15 e
não 30%), facilitando a identificação de falhas relati-
vas a não inclusão de participantes em todas as análi-
ses, uma vez que a exclusão destes, por desistência
ou não aderência ao protocolo, pode acarretar em con-
clusões errôneas quanto ao efeito estimado da inter-
venção.
ITEM 17- Variáveis de resposta, efeito esti-
mado e intervalo de confiança
Os autores devem formular um sumário repre-
sentando todas as variáveis de interesse analisadas pelo
estudo e utilizadas para o cálculo do tamanho do efeito
estimado do tratamento. O tamanho do efeito estima-
do deve ser descrito para ambos os grupos em conjun-
to, com os respectivos intervalos de confiança. O ta-
manho do efeito estimado segundo variáveis binárias
(p. ex., presença ou não de determinada característi-
ca) pode ser representado por meio de valores de ris-
co relativos, odds ratio, entre outros, enquanto que para
variáveis contínuas, o tamanho do efeito pode ser de-
monstrado, em conjunto com os intervalos de confian-
ça, por meio da diferença entre as médias obtidas atra-
vés da comparação entre os grupos. Estes valores são
mais facilmente interpretados se forem disponibilizados
em tabelas ao invés de descritos ao longo do texto.
Orienta-se também a descrição de todas as variáveis
de reposta conforme definidas previamente às inter-
venções e não somente as variáveis que obtiveram
diferenças estatisticamente significativas.
ITEM 18- Análises adicionais
Apesar de análises planejadas previamente for-
necerem resultados mais confiáveis, análises
exploratórias múltiplas realizadas posteriormente à in-
tervenção e sugeridas pelos dados são comumente
utilizadas nos estudos, mesmo que ofereçam um alto
risco de superestimar os resultados.4 Por este motivo,
os autores são orientados a especificar se as análises
utilizadas no estudo foram planejadas ou sugeridas
pelos achados. Recomenda-se ainda, conforme des-
crito no item 12, a descrição de análises de ajuste,
sendo aconselhável apresentar ambos os resultados,
ou seja, com e sem tais análises.
ITEM 19- Eventos adversos e efeitos colaterais
Os autores devem informar a ocorrência de
desfechos indesejáveis durante a realização da inves-
tigação, como eventos adversos ou efeitos colaterais.
19
Martins J, Sousa LM, AS Oliveira.
Recomendações do enunciado CONSORT
Apesar de não-intencionais, a existência de tais des-
fechos prejudica a aplicabilidade futura dos achados
clínicos do estudo, tornando necessário informar os
leitores sobre os possíveis riscos e benefícios associa-
dos à intervenção proposta. Os eventos adversos são
consequências, em muitos casos, da condição tratada,
enquanto que os efeitos colaterais são decorrentes da
intervenção proposta. Os autores devem indicar o
número de indivíduos afetados, a frequência e a natu-
reza dos desfechos mais graves, o método utilizado na
mensuração dos mesmos, justificando eventuais
descontinuidades no tratamento.
Discussão
ITEM 20- Interpretação
Este item sugere que os autores elaborem uma
discussão cuidadosa dos resultados observados, inter-
pretando-os segundo a(s) hipótese(s) do estudo. Ba-
sicamente, a discussão do trabalho deve conter: 1) uma
sinopse dos resultados principais; 2) considerações
sobre os possíveis mecanismos responsáveis pelos
desfechos; 3) argumentação crítica dos achados de
acordo com a literatura disponível, sendo desejável a
inclusão de uma revisão sistemática, sempre que dis-
ponível; 4) informações referentes aos eventuais ris-
cos e limitações do estudo, assim como, sobre os pro-
cedimentos utilizados para minimizar estes problemas;
5) um sumário final com as conclusões sobre as impli-
cações clínicas e científicas relevantes. Em estudos
não-farmacológicos, os autores devem discutir as im-
plicações terapêuticas da intervenção controle esco-
lhida (placebo, tratamento tradicional, lista de espera)
em contraste com a intervenção investigada, já que
em muitos casos, os procedimentos controles são
questionáveis por subestimarem a eficácia da inter-
venção proposta. O nível de experiência, e se esta
diferiu entre os investigadores envolvidos com a inter-
venção, é outro fator relevante que deve ser aborda-
do pelos autores. Adicionalmente, recomenda-se a dis-
cussão de aspectos referentes às limitações e viabili-
dade do cegamento.
ITEM 21- Generalização
Complementares ao item 20 devem ser consi-
derados alguns aspectos relativos à validade externa
do estudo, como as características dos participantes,
do local e da equipe, do regime de tratamento, entre
20
Medicina (Ribeirão Preto) 42 (1): 9-21
http://www.fmrp.usp.br/revista
outros relevantes. Deste modo, os autores devem in-
dagar e sugerir se os achados são aplicáveis, por exem-
plo, a outros indivíduos com idade, sexo ou comorbi-
dades diferentes, ou ainda, se resultados similares po-
dem ser obtidos em outros serviços com níveis de com-
plexidade diversos, isto é, serviços públicos ou priva-
dos; níveis de complexidade primária, secundária ou
terciária. A discussão de tais aspectos permite avaliar
a extensão na qual os resultados do estudo são
generalizáveis a outras circunstâncias, auxiliando o
leitor no processo de tomada de decisão baseada em
evidências científicas.
ITEM 22- Interpretação geral segundo evidên-
cias
Finalmente, ao concluir o trabalho, os autores
devem apresentar uma interpretação global dos resul-
tados sob o contexto da evidência científica vigente.
Recomenda-se, portanto, confrontar os resultados com
dados da literatura existente sobre o tema, sendo de-
sejável a inclusão de uma revisão sistemática de ECRs
similares. A existência de poucos ou nenhum estudo
semelhante prévio deve ser mencionada. Além de pro-
mover suporte aos achados, tais discussões colabo-
ram com a divulgação de outros estudos relevantes,
como também dos procedimentos mais usados e efe-
tivos sobre o tema em investigação.
Considerações Finais
Conforme exemplificado pelas recomendações
acima, o enunciado CONSORT tem como objetivo au-
xiliar o relato completo e transparente de informações
de ECR de modo a refletir na melhora da qualidade
das informações divulgadas na literatura de saúde e
assim, viabilizar a prática das idéias preconizadas pela
prática baseada em evidências. O presente trabalho
pretendeu, portanto, facilitar a compreensão de tais
instruções, assim como divulgá-las em Língua Portu-
guesa do Brasil, ao abordar brevemente os principais
aspectos contidos na versão revisada do enunciado
CONSORT.4 Sugerimos ainda, que algumas destas re-
comendações não sejam conferidas somente para o
relato adequado de informações relevantes ao térmi-
no das investigações científicas, mas que sejam tam-
bém empregadas já na fase de planejamento das mes-
mas, prevenindo surpresas desagradáveis ou desfe-
chos inapropriados e conseguinte limitação das con-
clusões realizadas.
Medicina (Ribeirão Preto) 42 (1): 9-21 Martins J, Sousa LM, AS Oliveira.
http://www.fmrp.usp.br/revista Recomendações do enunciado CONSORT

ABSTRACT
Clinical strategies and decision making in health care should be supported by the best available scien-
tific evidence not only on intuition neither on previous clinical experience. Randomized controlled trials
(RCT) are considered the gold standard for the assessment of interventions efficacy but inadequate
report difficulties their interpretation and identification of eventual bias. A group of scientists and editors
developed the CONSORT Statement to improve the quality of reporting of RCTs. The CONSORT state-
ment comprises a checklist of essential items that should be included in reports of RCTs and a diagram
for documenting the flow of participants through a trial. Nowadays, the CONSORT are translated to
several languages and it has been modified to attend different study designs. The present document
intended to improve the comprehension of CONSORT recommendations and to spread its use on
Portuguese language through a brief discussion of main aspects from the revised version of CONSORT
statement.

Keywords: CONSORT. Controlled Clinical Trials as Topic. Randomized Controlled Trial. Evidence-
Based Medicine.

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21
 SIMPÓSIO: Planejamento e condução de estudos clínicos de alta evidência científica
Capítulo III

Contrib uições do esta

Contribuições tístico par
estatístico paraao
atendimento aoCONSOR
CONSORT T Chec klist
Checklist
Contributions of the statistician for the accordance
with the CONSORT Checklist

Edson Zangiacomi Martinez

RESUMO
Este artigo é baseado na palestra com mesmo título apresentada pelo autor no encontro “Planejamento
e Condução de Estudos Clínicos de Alta Evidência Científica” organizado pelo Laboratório de Análise da
Postura e do Movimento Humano (LAPOMH) no dia 5 de julho de 2008 na Faculdade de Medicina de
Ribeirão Preto, USP. O artigo discute o papel do estatístico no delineamento, análise de dados e inter-
pretação de resultados de um ensaio clínico, e sua contribuição ao atendimento do CONSORT checklist.

Palavras-chave: CONSORT. Bioestatística. Biometria. Método de Bayes. Teorema de Bayes. Ensaio

Clínico.

Introdução tras etapas do planejamento e da conduta de um en-

O CONSORT (Consolidated Standards of
Reporting Trials) pode ser definido como um con-
junto mínimo de recomendações para a apresentação
dos resultados de ensaios clínicos controlados aleato-
rizados 1-3. Compreende um checklist contendo 22
itens essenciais para a apresentação dos resultados
do ensaio, além de um fluxograma que explicita o nú-
mero de indivíduos que compõem as fases de recruta-
mento, alocação em grupos, seguimento e análise de
dados. O checklist contém recomendações direcio-
nadas a cinco partes de uma publicação científica: o
título e o resumo, a introdução, os métodos, os resulta-
dos e a discussão. As contribuições de um estatístico
são essenciais não somente na escolha e na aplicação
de uma metodologia de análise de dados, mas em ou-
saio clínico. Como mencionado por Pocock 4, “It is a
common mistake to assume that the statistician need
only be concerned with the analysis of results. Of
course the statistician plays a major role as data
analyst but he should also be involved beforehand
in the study’s design and conduct.”
Pocock 4 ainda acrescenta: “I think an
experienced statistician should be a collaborating
scientist in ensuring that both protocol design and
the interpretation of trial findings conform to sound
principles of scientific investigation. In addition,
the statistician is often in a good position to act as
a ‘policeman’ in ensuring that satisfactory
organizational standards are maintened throughout
a trial.” Por outro lado, o estatístico é muitas vezes
requisitado para colaborar em um ensaio clínico ape-

1. Professor Associado. Departamento de Medicina Social da Correspondência:

Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de Departamento de Medicina Social
São Paulo Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto - USP
Av. Bandeirantes, 3900.
14049-900 - Ribeirão Preto – SP.
E-mail: edson@fmrp.usp.br

Artigo recebido em 18/12/2008

Aprovado em 20/05/2009

Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42(1): 22-30

Medicina (Ribeirão Preto) 42 (1): 22-30
http://www.fmrp.usp.br/revista
nas na etapa de análise de dados. Conforme Pocock 4,
“Unfortunately, statisticians are often used merely
as a technical service for analysing data.” O esta-
tístico pode ter uma participação bastante abrangente
nas etapas prévias à coleta dos dados, como na deter-
minação do tamanho amostral, nas estratégias de alo-
cação dos pacientes em grupos de tratamentos e no pla-
nejamento de análises interinas. É atribuída ao célebre
estatístico e geneticista inglês Ronald Aylmer Fisher
(1890-1962) a frase: “To call in the statistician after
the experiment is done may be no more than asking
him to perform a post-mortem examination: he may
be able to say what the experiment died of.”
O presente artigo tem por objetivo discutir como
o estatístico pode contribuir no atendimento dos dife-
rentes itens do CONSORT checklist, principalmente
no que se refere os itens sete (tamanho amostral) e
12 (análise estatística).
Tamanho Amostr al
Amostral
O item número sete do CONSORT checklist
mostra a importância de descrever como o tamanho
amostral utilizado no ensaio clínico foi determinado,
quando o estudo estava sendo delineado. O número
de participantes de um ensaio deve ser necessaria-
mente voltado ao item número cinco do CONSORT
checklist, que diz respeito aos objetivos e às hipóte-
ses do estudo. Isto significa que o pesquisador deve
estimar o número de pessoas que devem ser incluídas
no ensaio para que os seus propósitos sejam alcança-
dos de maneira satisfatória. Um ensaio clínico que
utiliza um tamanho amostral maior que o necessário
para atender aos seus propósitos pode infligir ques-
tões éticas, dado que um número desnecessário de
indivíduos é neste caso exposto a possíveis riscos,
desconfortos e inconvenientes trazidos pelo tratamento
ou outra intervenção em estudo. Além disso, implica
em desperdício de tempo e de recursos financeiros,
materiais e humanos. Por outro lado, um tamanho
amostral menor que o necessário traz resultados im-
precisos e consequentemente inconclusivos.
Outras questões relevantes em relação ao ta-
manho amostral são apresentadas por Pocock 4:
a) Qual é a principal medida de desfecho? O des-
fecho pode ser um evento binário, como morte/
sobrevida, cura/não cura, apresentou/não apresen-
tou uma reação adversa ao tratamento, ou uma
resposta contínua, como níveis séricos de coleste-
rol ou pressão arterial sanguínea. Pode ser ainda
Martinez EZ. Contribuições do estatístico para
o atendimento ao CONSORT Checklist.
uma escala, como a escala visual-analógica de dor.
Assim, o desfecho é representado por uma variá-
vel aleatória, que pode ter natureza quantitativa ou
qualitativa.
b) Como os dados serão analisados para que uma
diferença entre os tratamentos seja detectada?
A escolha de uma ferramenta estatística de análi-
se depende dos objetivos do ensaio, do desenho do
estudo e da natureza da variável de desfecho. Por
exemplo, os dados de um ensaio clínico com coleta
prospectiva de dados, onde se objetiva a compara-
ção entre os tempos de sobrevida entre dois gru-
pos paralelos de tratamento, podem ser analisados
com técnicas de análise de sobrevivência, enquan-
to os dados de um ensaio clínico onde se deseja
comparar as proporções de pacientes que respon-
deram a um tratamento ou a um placebo podem
ser analisados por um modelo de regressão logísti-
ca onde variáveis de confundimento podem ser pre-
vistas. A determinação do tamanho amostral deve
ser compatível à ferramenta estatística prevista para
a análise dos dados.
c) Que resultado seria encontrado no grupo de
controles? Para determinar o tamanho amostral,
precisamos de uma idéia prévia à coleta dos dados
do resultado que seria encontrado para os pacien-
tes que recebem o placebo ou o tratamento pa-
drão.
d) Qual seria a menor diferença entre os tratamen-
tos considerada importante do ponto de vista
clínico, e com qual grau de incerteza? Digamos
que, com base em estudos prévios, é esperado que
20% dos indivíduos que recebem o placebo apre-
sentam alguma melhora clínica (ver item anterior).
Para que o tratamento em estudo seja considerado
“útil”, qual deve ser a proporção mínima de indiví-
duos com melhora clínica no grupo que recebe este
tratamento? Se esta proporção for fixada em 30%,
isto significa que é estabelecido que a menor dife-
rença entre os tratamentos considerada importan-
te é 30% – 20% = 10%, e qualquer diferença entre
estas porcentagens menor que 10% não é conside-
rada importante do ponto de vista clínico.
Em um exemplo, um pesquisador deseja inves-
tigar o efeito de um tratamento com baixas doses de
aspirina em pacientes com angina crônica estável.
Pretende-se conduzir um ensaio clínico controlado
aleatorizado, com grupos paralelos, onde metade dos
pacientes elegíveis será aleatoriamente alocada a um
23
Martinez EZ. Contribuições do estatístico para
o atendimento ao CONSORT Checklist.
grupo que receberá o tratamento com aspirina e a ou-
tra metade irá compor um grupo de controle, onde será
administrado um placebo. Se a principal medida de
desfecho é a ocorrência de infartos do miocárdio, ou
seja, um evento binário, podemos utilizar a equação:
p1 (100% − p1 ) + p2 (100% − p2 )
n= f (α , β )
( p2 − p1 ) 2
para determinar o número n de indivíduos a
serem alocados em cada grupo 4. Esta equação se
baseia em um teste de hipóteses, que tem por hipóte-
se nula que pacientes tratados e não tratados com
baixas doses de aspirina têm as mesmas chances de
um evento de infarto do miocárdio, e por hipótese al-
ternativa que as chances de um evento de infarto são
diferentes entre tratados e não tratados. Nesta equa-
ção, temos que:
p1 é a frequência relativa esperada de eventos
no grupo que receberá o placebo.
p2 é uma frequência relativa de eventos asso-
ciada ao grupo de pacientes que receberá o tratamen-
to sob investigação, de forma que p2 – p1 é a menor
diferença entre os tratamentos considerada importan-
te em um ponto de vista clínico.
α é o nível de significância adotado para o
estudo, ou seja, a maior probabilidade tolerada pelo
pesquisador para um erro tipo I. No contexto deste
ensaio clínico controlado, o erro tipo I seria cometido
ao concluirmos que o infarto do miocárdio ocorre com
diferentes frequências entre pacientes tratados e não
tratados com baixas doses de aspirina, en-
quanto, na verdade, os dois grupos possuem
a mesma frequência de infartos. Na área
n=
da saúde, o nível de significância é geral-
mente fixado em 5%.
β é a chance tolerada de um erro tipo II, ou
seja, o erro que cometemos ao concluirmos que paci-
entes tratados e não tratados com baixas doses de
aspirina possuem chances iguais de um evento de
infarto do miocárdio, quando na realidade um dos gru-
pos apresenta chances diferentes (maior ou menor)
de apresentar o desfecho em questão. A quantidade 1
– β é chamada de poder do teste de hipóteses para
detectar uma diferença entre os grupos de magnitude
p2 – p1. Geralmente β é fixado em 5%, 10% ou 20%,
dependendo da gravidade das consequências de se
cometer um erro deste tipo.
f (α,β) é uma função de α e β, dada por
f (α,β) = [Φ-1(α/2)+ Φ-1(β)]2,
24
Medicina (Ribeirão Preto) 42 (1): 22-30
http://www.fmrp.usp.br/revista
onde Φ é a função distribuição acumulada de
uma distribuição normal padrão e Φ-1 é a sua função
inversa. Podemos encontrar valores para Φ-1 facil-
mente, com a ajuda da função INV.NORMP do pro-
grama Microsoft Excel. Por exemplo, Φ-1(0,05) é ob-
tido digitando a expressão =INV.NORMP(0,05) em
uma célula vazia da planilha do Excel, onde obtere-
mos que Φ-1(0,05) = -1,645. Se fixarmos α = 0,05 e β
= 0,20, encontramos o valor de f (0,05;0,20) digitando
em uma célula vazia do Excel a expressão
=(INV.NORMP(0,05/2)+INV.NORMP(0,20))^2
que trará o resultado f(0,05;0,20) = 7,85.
Digamos que é conhecido que a porcentagem
esperada de ocorrências de infarto do miocárdio no
grupo que receberá o placebo é de p1 = 13% (a fre-
quência esperada em indivíduos que não recebem o
tratamento). É necessário ainda especificar a menor
diferença entre os tratamentos considerada importan-
te do ponto de vista clínico. Digamos que se o trata-
mento trouxer uma redução absoluta do risco de infarto
do miocárdio menor que 10% ele não será considera-
do importante, mas reduções iguais ou superiores a
10% indicam que o tratamento cumpre com o seu pro-
pósito. Temos assim p2 = 3% (ou seja, p2 – p1 = -
10%). Assim, o número necessário de indivíduos em
cada um dos grupos, necessário para detectar uma
diferença absoluta de riscos de infarto igual a 10%
entre estes grupos, é:
13%(100% − 13%) + 10%(100% − 10%)
× 7,85 = 191
(−10%) 2
considerando que a maior probabilidade tolera-
da de um erro tipo I é α = 5% e a maior probabilidade
tolerada de um erro tipo II é β = 20%.
Este exemplo demonstra que o tamanho amos-
tral necessário a um ensaio clínico só pode ser deter-
minado após o pesquisador definir com clareza o ob-
jetivo do estudo, a população em estudo (item 3 do
CONSORT checklist) através dos critérios de elegi-
bilidade, especificar a hipótese nula e a hipótese alter-
nativa e determinar as probabilidades de erro tipo I e
tipo II. Se o estudo mede o tempo até a ocorrência de
um evento (análise de sobrevida), é preciso especifi-
car o processo de recrutamento e definir o tamanho
do período de seguimento 5 (follow-up period).
Medicina (Ribeirão Preto) 42 (1): 22-30
http://www.fmrp.usp.br/revista
Outras estratégias para a determinação de ta-
manhos amostrais em ensaios clínicos onde a medida
de desfecho é expressa por uma variável quantitativa
ou o desenho prevê medidas pareadas são apresenta-
das por Lachin 6. Importantes discussões sobre tama-
nhos amostrais de ensaios clínicos encontram-se ain-
da nos artigos de Schulz e Grimes 7, Brasher e Brant8
e Sylvester 9.
O item número sete do CONSORT checklist
trata ainda a necessidade de explicações sobre as
análises interinas 10, quando utilizadas. Alguns en-
saios recrutam participantes por um período de tempo
relativamente longo, sendo as informações sobre o
desempenho do tratamento sucessivamente acumula-
das. Nestas situações, as análises interinas são fei-
tas sobre os resultados acumulados, enquanto o en-
saio está em progresso. De acordo com os resultados
destas análises, o ensaio pode ser encerrado antes de
atingir o tamanho amostral previamente especificado.
Em um estudo onde é esperado que uma nova terapia
traga resultados melhores que um placebo, por exem-
plo, o estudo pode ser interrompido tão logo se perce-
bam evidências suficientes de que a nova terapia seja
superiora. Encerrar o estudo antes do prazo previsto
traz vantagens econômicas e éticas, dado que não
haverá mais sentido tratar indivíduos com um placebo,
quando já se sabe que há um tratamento adequado.
Os detalhes de uma análise interina devem ser
necessariamente especificados antes da coleta dos
dados: quais os momentos previstos para a análise in-
terina, os critérios de interrupção, o tamanho amostral
estimado 11, como os dados serão analisados, qual a
precisão especificada para classificar o tratamento
como superior ao placebo e como as análises estatís-
ticas serão corrigidas. A prática de múltiplas análises
estatísticas ao longo do ensaio, com um acúmulo de
informações, exige alguma correção nas inferências,
dado que a probabilidade de erro tipo I (nível de signi-
ficância) também será cumulativa ao longo destas
análises, e, ao longo do tempo, maior que o valor no-
minal fixado antes da coleta dos dados.
Análise dos Dados
Segundo Pocock 4, “The essence of a good
clinical trial is that it provides truthful and precise
information which is relevant to the treatment of
future patients. To this end statistical methods
provide a scientific basis for trial design. Methods
of greatest value must be simple, reliable and
Martinez EZ. Contribuições do estatístico para
o atendimento ao CONSORT Checklist.
readily understood by non-statisticians.” Desta
maneira, a ferramenta estatística escolhida para a
análise dos dados de um ensaio clínico não pode ter
uma complexidade maior que os dados; problemas sim-
ples demandam ferramentas simples, mas problemas
complexos em relação ao desenho ou à distribuição
dos dados exigem ferramentas apropriadas. Alguns
autores apresentam em livros-texto tabelas ou fluxo-
gramas que orientam pesquisadores a escolher uma
ferramenta estatística de acordo apenas com a natu-
reza de suas variáveis. Estes procedimentos, conhe-
cidos por “cookbook approaches”, são criticados por
Murray 12 : “The selection of an appropriate
statistical test requires experience and insight, and
one must be wary of a proscriptive cookbook
approach.” Murray 12 coloca ainda que “the choice
of an appropriate statistical procedure requires
both an understanding of the strengths and
limitations of the different procedures, and also a
deep understanding of the clinical context.” Este
pensamento é compatível com o de Paes 13: “Da mes-
ma forma que a prática da Medicina não é com-
pletamente objetiva, a da Estatística também não.
Não existem ‘receitas prontas’ para tratar doen-
tes, assim como não existem fluxogramas que indi-
quem as técnicas estatísticas que devem ser utili-
zadas em cada caso. O que existem são ‘práticas
comuns’ que podem ser aplicadas ou não, depen-
dendo das condições do estudo.”
Assim, a ferramenta de análise dos dados deve
ser escolhida conforme os objetivos do estudo, a natu-
reza das variáveis que definem as medidas de desfe-
cho, a medida de tamanho de efeito de tratamento
(risco relativo, redução de risco, número necessário
para tratar) e o desenho do ensaio, e esta escolha exi-
ge um profundo entendimento do estatístico sobre as
características do estudo. Os “cookbook aproaches”
devem dar lugar à experiência do estatístico e à sua
capacidade de lidar com diferentes métodos de trata-
mento de dados.
Descrever, antes de analisar
É importante considerar que mesmo as ferra-
mentas simples, como o teste t de Student para com-
paração de médias populacionais, trazem algumas ar-
madilhas. Por exemplo, seja um ensaio clínico
aleatorizado onde são comparados dois tratamentos,
A e B, tal que as respostas aos tratamentos são ex-
pressas por uma variável de natureza contínua. A Fi-
gura 1 descreve a distribuição destas respostas por
25
Martinez EZ. Contribuições do estatístico para
o atendimento ao CONSORT Checklist.
box-plots 14, onde é evidente que um indivíduo sub-
metido ao tratamento B apresentou uma resposta re-
presentada por um valor de magnitude demasiadamente
grande em relação aos demais. Uma seta destaca na
figura este valor atípico. Se aplicarmos aos dados um
teste t de Student para amostras independentes inclu-
indo este valor atípico, temos um p valor de 0,30, que
nos leva à não rejeitarmos a hipótese de igualdade de
médias populacionais a um nível de significância de
5%. Por outro lado, se retirarmos este ponto atípico do
banco de dados, o mesmo teste de hipóteses nos for-
necerá um p valor de 0,04, agora inferior ao nível de
significância de 5%, o que nos leva à rejeitar a hipóte-
se de igualdade de médias. Este exemplo nos mostra
que a inclusão ou a exclusão de um valor atípico em
relação aos demais em um banco de dados pode nos
trazer resultados distintos para o teste de hipóteses.
Se não tomarmos o cuidado de descrevermos
detalhadamente os achados de um ensaio clínico, cor-
remos o risco de escolhermos uma ferramenta analíti-
ca inadequada para o estudo. Esta etapa de descrição
dos achados, que necessariamente antecede a análise
dos dados, é chamada análise exploratória de da-
dos (AED). A AED foi introduzida por John Wilder
Tukey (1915-2000), no seu clássico livro Exploratory
Data Analysis 15 lançado em 1977. Faz uso de um
grande número de técnicas gráficas (como o box-plot)
e quantitativas, buscando descrever a distribuição das
variáveis numéricas, pontos atípicos (outliers) que
podem trazer influências às medidas descritivas e aos
Figura 1: Distribuição das respostas aos tratamentos A e B de um ensaio clínico aleatorizado hipotético ilustradas por box-
plots, onde percebemos que um ponto atípico influencia o resultado de um teste t de Student para amostras independentes.
26
Medicina (Ribeirão Preto) 42 (1): 22-30
http://www.fmrp.usp.br/revista
resultados das análises, e relações e padrões de asso-
ciações entre variáveis, a princípio ocultas no banco
de dados. Embora o pesquisador tenha a possibilidade
de prever a ferramenta estatística de análise de dados
quando o estudo está sendo delineado, somente na
aplicação da AED ele pode definitivamente decidir por
um método estatístico ou outro.
P valor: uma medida a ser evitada em
ensaios clínicos?
No ano de 2002, o conceituado periódico The
Lancet publicou uma série de artigos denominada
Epidemiology Series. No primeiro artigo da série,
Grimes e Schulz 16 escreveram: “Measures of
association, such as relative risk or odds ratio, are
the preferred way of expressing results of
dichotomous outcomes, e.g., sick versus healthy.
Confidence intervals around these measures
indicate the precision of these results. Measures
of association with confidence intervals reveal the
strength, direction, and a plausible range of an
effect as well as the likelihood of chance
occurrence. By contrast, p values address only
chance. Testing null hypotheses at a p value of
0.05 has no basis in medicine and should be
discouraged.” Esta postura dos autores em
desencorajar do uso dos p valores é dirigida às limita-
ções destas medidas, embora elas sejam bastante fre-
quentes nos periódicos da área médica. Segundo
Wagner17, “O rótulo ‘estatisticamente significante’
Medicina (Ribeirão Preto) 42 (1): 22-30
http://www.fmrp.usp.br/revista
é potencialmente enganoso e tem estado sob cons-
tantes críticas por parte de vários estatísticos e
epidemiologistas durante os últimos anos. Para que
se possa avaliar ‘significância’ é igualmente ou
mais importante do que o p valor que se estime o
tamanho da associação envolvida. Isso pode ser
obtido através de medidas de associação como o
risco relativo e seus intervalos de confiança.”
Os p valores são derivados dos testes de hipó-
teses, da teoria clássica estatística. Antes de aplicar-
mos um teste de hipóteses aos nossos dados, deve-
mos definir o nível de significância, que na área médi-
ca é geralmente fixado em 5%. O p valor é interpre-
tado como o menor valor que o nível de significância
deveria ser fixado para que a hipótese nula fosse re-
jeitada. Em um ensaio clínico aleatorizado controlado,
digamos que a hipótese nula estabeleça que o trata-
mento ou intervenção sob investigação e o tratamento
com placebo tragam os mesmos resultados. Um p valor
de 67% (0,67), por exemplo, indica que deveríamos
ter especificado um nível de significância de pelo me-
nos 67% para que a hipótese nula fosse rejeitada.
Sendo o nível de significância especificado em 5%
(menor que 67%), não rejeitamos a hipótese nula. Por
outro lado, se o p valor é menor que o nível de signifi-
cância adotado, rejeitamos a hipótese nula.
Uma limitação do p valor é que esta medida
não informa o tamanho da diferença entre os resulta-
dos da utilização do tratamento sob investigação e do
placebo, o que é de grande utilidade na tomada de
decisões clínicas. Por sua vez, riscos relativos ou me-
didas de reduções absolutas ou relativas de risco in-
formam o tamanho destas diferenças, e traduzem a
importância clínica da intervenção. A “significância
Figura 2: A filosofia dominante na pesquisa: o método frequentista.
Martinez EZ. Contribuições do estatístico para
o atendimento ao CONSORT Checklist.
estatística” não significa “importância clínica”, e a
expressão “estatisticamente significante” pode ser
bastante vaga para descrever os resultados de um
ensaio clínico 18-21.
Uma característica importante de um teste de
hipóteses é que a sua probabilidade de rejeitar a hipó-
tese nula é sempre relacionada ao tamanho amostral.
Tamanhos amostrais pequenos trazem chances peque-
nas de rejeitar a hipótese de igualdade entre os resul-
tados do tratamento sob investigação e do grupo tra-
tado com placebo, e consequentemente, trazem p va-
lores grandes, ainda que sejam observadas grandes
diferenças entre estes grupos. Por outro lado, o uso
de amostras grandes traz p valores pequenos, mesmo
que as diferenças entre os dois grupos de tratamentos
não sejam relevantes em um ponto de vista clínico.
Metodologia bayesiana: o futuro dos
ensaios clínicos?
A metodologia bayesiana teve uma origem bas-
tante incomum 22. Ela nasceu de um processo de ra-
ciocínio idealizado por Thomas Bayes, um pároco da
igreja presbiteriana que viveu em um vilarejo da In-
glaterra do século 18, supostamente entre 1701 e 1761.
Este raciocínio foi registrado na forma de um ensaio
sobre probabilidades condicionais, que Bayes, curio-
samente, nunca submeteu para a sua publicação. Dois
anos após a morte de Bayes, seu amigo Richard Price
(1723-1791) encontrou entre os pertences do pároco
o tal manuscrito, que tinha o título “Na essay towards
solving a problem in the doctrine of chances”. Price
encaminhou o ensaio com a demonstração do futura-
mente famoso Teorema de Bayes à Royal Society
inglesa, que logo o publicou. Nos dias de hoje, este
27
Martinez EZ. Contribuições do estatístico para
o atendimento ao CONSORT Checklist.
ensaio é tido como a base de uma verdadeira revolu-
ção em diferentes campos do conhecimento, da gené-
tica à teologia 22.
A filosofia dominante na pesquisa clínica é ba-
seada na chamada interpretação frequentista, cujo
processo é ilustrado na Figura 2. A partir de um mo-
delo experimental, onde são definidos os objetivos e
as hipóteses do ensaio, retira-se aleatoriamente uma
amostra da população de interesse (definida pelos
critérios de inclusão e exclusão do estudo), sendo os
dados assim obtidos submetidos a um processo de
inferência estatística, onde testes de hipóteses e in-
tervalos de confiança permitem uma extrapolação dos
resultados à população. Os dados, neste processo, tra-
zem uma representação do universo físico, e são des-
critos matematicamente por uma expressão denomi-
nada função de verossimilhança.
Na metodologia Bayesiana, estabelece-se que
o processo de inferência não é baseado somente no
universo físico descrito pelos dados (verossimilhan-
ça), mas também no conhecimento prévio do pesqui-
sador sobre o objeto investigado. Este conhecimento
prévio traz a subjetividade do investigador, cuja razão
é agora integrante do processo. Esta subjetividade,
quando expressa por uma função de probabilidades, é
denominada distribuição a priori do objeto investi-
gado. O teorema de Bayes estabelece que inferências
racionais sejam obtidas da chamada distribuição a
posteriori do objeto (Figura 3), que é proporcional ao
produto entre a distribuição a priori (subjetiva) e a fun-
ção de verossimilhança (universo físico).
Figura 3 – A filosofia bayesiana: o teorema de Bayes (adaptado de Pena 22).
28
Medicina (Ribeirão Preto) 42 (1): 22-30
http://www.fmrp.usp.br/revista
Nota-se que a metodologia bayesiana de pes-
quisa não tem como primeiro passo a observação, mas
a especificação do que já se sabe acerca do objeto
em investigação. No entanto, como este conhecimen-
to a priori é dependente das crenças e da experiência
do observador, os resultados obtidos da distribuição a
posteriori não são dependentes apenas dos dados ob-
servados como ocorre no método frequentista. Segundo
Gill et al 23, os clínicos são naturalmente bayesianos,
ainda que não conheçam formalmente as idéias do
bayesianismo. Ao examinar um paciente (universo fí-
sico) para um diagnóstico (inferência racional acerca
de uma condição), o clínico não se baseia somente em
seus dados (o paciente), mas alia a sua experiência
prévia e conhecimentos adquiridos em sua formação
médica (a razão humana) às condições do paciente
(os dados: exames físicos e laboratoriais, sintomas,
sinais, queixas), como no teorema de Bayes.
Assim, a estatística bayesiana é baseada no
teorema proposto por Bayes (Figura 3). A partir dela,
obtemos os intervalos de credibilidade para os obje-
tos sob investigação (parâmetros), análogos aos inter-
valos de confiança resultantes da aplicação do méto-
do frequentista. Todos os modelos de regressão do
método frequentista (regressão linear e não linear, lo-
gística, de Poisson, de Cox para dados de sobrevivên-
cia) encontram as suas versões em uma ótica bayesi-
ana. Exemplos de aplicações de métodos bayesianos
em ensaios clínicos são encontrados em Greenhouse24.
Berry25 menciona que o uso da metodologia
bayesiana para delinear um ensaio clínico é mais va-
Medicina (Ribeirão Preto) 42 (1): 22-30
http://www.fmrp.usp.br/revista
loroso do que o ato de utilizar ferramentas bayesianas
somente para a análise dos resultados. A metodologia
bayesiana fornece um mecanismo que permite uma
atualização dos resultados acumulados durante o en-
saio26. Os resultados acumulados podem ser avalia-
dos a qualquer momento, inclusive de forma contínua,
com a possibilidade de alterar o desenho do ensaio, por
exemplo, desbalanceando a aleatorização para favore-
cer terapias de melhor desempenho, eliminando ou adi-
cionando braços de tratamentos, e alterando a popula-
ção de estudo para focar subgrupos de doentes que es-
tão respondendo melhor às terapias experimentais 26,27.
Alguns autores mencionam que uma vantagem
da abordagem bayesiana em ensaios clínicos é a pos-
sibilidade de se obter a chamada distribuição
preditiva de probabilidade, que permite a predição
de resultados futuros com base nos resultados atuais
do ensaio 24. Outras vantagens são uma estrutura mais
flexível para o monitoramento de ensaios sequenciais
28-31 , a não dependência de tamanhos amostrais gran-
des (resultados assintóticos) para a validação das
inferências e a habilidade de calcular a probabilidade
de um tratamento ser mais efetivo que outro 32.
A Figura 4 ilustra o crescimento do número de
artigos publicados em revistas da área médica que
fazem algum uso ou menção de ferramentas bayesia-
nas, encontrados em uma busca na base de dados
PubMed 33, utilizando a expressão “bayesian”. A fi-
gura mostra o número de referências encontradas a
cada 10 mil artigos indexados, a cada ano, de 1960 a
2007. Observa-se uma incidência inexpressiva de ar-
tigos até meados da década de 80 do último século,
25
Incidência (artigos/10.000)
20
15
10
5
0
1960 1970 1980 1990
Figura 4: A incidência de artigos encontrados na base de dados.
palavra chave “bayesian”, de 1960 a 2007.
Martinez EZ. Contribuições do estatístico para
o atendimento ao CONSORT Checklist.
quando se inicia um crescimento propiciado pela po-
pularização dos computadores portáteis, que possibili-
taram o uso de algoritmos Monte Carlo em Cadeia de
Markov (MCMC), comuns na estimação das distri-
buições a posteriori. A partir do ano 2000, o uso de
técnicas bayesianas na pesquisa médica encontra um
novo crescimento, agora propiciado pelo programa de
computador WinBugs 34 de domínio público.
Discussão
O presente artigo mostra que o estatístico tem
papel fundamental do delineamento, na análise e na
interpretação de dados de estudos clínicos. Sua con-
tribuição ao atendimento dos itens do CONSORT
checklist está principalmente na adequada descrição
da determinação do tamanho amostral do ensaio, na
estratégia de alocação de indivíduos em grupos, na
escolha das ferramentas de análise de dados e no au-
xílio à interpretação dos resultados. Mas, para a sua
contribuição ser efetiva, é necessário a ele um amplo
conhecimento dos alcances e limitações de cada mé-
todo estatístico, bem como a habilidade de bem com-
preender os propósitos do ensaio clínico. Usar inade-
quadamente uma ferramenta de análise estatística,
ainda que simples, pode trazer prejuízos aos resulta-
dos no ensaio, como exposto na seção 3.1. Por isso, o
estatístico deve ser hábil em descrever os dados do
ensaio, destacando as suas características mais rele-
vantes e sendo capaz de tomar decisões sobre as fer-
ramentas analíticas adequadas aos achados desta aná-
lise exploratória. É importante que ele conheça as li-
mitações dos p valores e as
maneiras alternativas e com-
plementares de exibir os resul-
tados do ensaio, descrevendo
as magnitudes das discrepân-
cias entre os grupos de paci-
entes submetidos ao tratamen-
to investigado e ao placebo por
medidas adequadas.
Sendo crescente o uso
de técnicas bayesianas na pes-
quisa em medicina e saúde, é
desejável que o estatístico pas-
2000 2010
se por um treinamento formal
ano em estatística bayesiana para
tornar-se apto a delinear e ana-
PubMed utilizando a lisar dados de ensaios clínicos
utilizando tal metodologia.
29
Martinez EZ. Contribuições do estatístico para Medicina (Ribeirão Preto) 42 (1): 22-30
o atendimento ao CONSORT Checklist. http://www.fmrp.usp.br/revista

ABSTRACT
This article is based on the lecture with the same title presented by the author at the “Planning and
Conducting Clinical Trials of High Scientific Evidence” meeting organized by the LAPOMH Laboratory
which was held at the Ribeirão Preto Medical School (University of São Paulo) on 5 July 2008. The article
discusses the role of the statistician in the design, data analysis and interpretation of the results from a
clinical trial, and its contribution to improving the accordance with the CONSORT checklist.

Keywords: CONSORT. Biostatistic. Biometry. Bayesian Method. Bayes’ Rule. Clinical Trials.

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30
 SIMPÓSIO: Planejamento e condução de estudos clínicos de alta evidência científica
Capítulo IV

Registr os de ensaios c
gistros línicos
clínicos
e as consequências par a as
para
publicações científicas
Clinical trials registers and their implications for scientific publication
Regina Celia Figueiredo Castro

RESUMO
O presente trabalho apresenta as recomendações do International Committee of Medical Journal Editors
(ICMJE) e da Organização Mundial da Saúde (OMS) para os registros de ensaios clínicos. Discute as
consequências para as publicações científicas e o papel da BIREME para a inclusão da América Latina
e Caribe nessas iniciativas. Descreve o portal de acesso à Plataforma Internacional de Registro de
Ensaios Clínicos (ICTRP), coordenada pela OMS, e as principais iniciativas existentes, destacando as
da América Latina e Caribe.

Palavras-chave: Ensaio Clínico. Publicações Periódicas. Sistema de Registros/Ensaio Clínico. Ensaios

Clínicos como Assunto.

Introdução para divulgar publicamente as pesquisas em andamento

Ao realizar ensaios clínicos os pesquisadores
se responsabilizam pela divulgação dos resultados, tanto
para a comunidade científica como para os partici-
pantes dessas pesquisas. Segundo a ética da publica-
ção científica os resultados de pesquisas devem ser
divulgados, sejam eles positivos ou negativos, princi-
palmente naquelas que envolvem seres humanos. No
entanto, os editores de revistas médicas e pesquisa-
dores perceberam que na literatura da área médica o
número de artigos que relatavam resultados negativos
era baixo, ou quando publicados, esses artigos nem
sempre relatavam todos os resultados.
Sendo assim, verificou-se a necessidade de
manter registro das pesquisas clínicas em andamento
por vários motivos: para aumentar a transparência das
pesquisas científicas tanto para a comunidade cientí-
fica como para o público em geral; pela responsabili-
dade ética com os participantes dos estudos clínicos;
e seus resultados, sejam estes positivos ou negativos;
para dirimir e evitar conflitos de interesses, principal-
mente em relação ao financiamento das pesquisas.
Dada a importância dos registros dos ensaios
clínicos, em 2004, o International Committee of
Medical Journal Editors (ICMJE), (também conhe-
cido como Grupo de Vancouver), que é constituído
por editores das principais revistas médicas e por re-
presentante da Biblioteca Nacional de Medicina, dos
Estados Unidos, lançou uma recomendação a todos
os editores de revistas médicas1,2. O objetivo foi esti-
mular a criação de uma base de dados pública de re-
gistros de ensaios clínicos, em primeiro lugar como
uma forma de reconhecer aos voluntários participan-
tes das pesquisas clínicas e em segundo, para dar co-
nhecimento público aos resultados dessas pesquisas.
Em 2004, a Declaração do México, resultado da
Cúpula Ministerial de Pesquisa em Saúde, recomen-
dou que a OMS facilitasse a criação de uma rede in-

1. Coordenadora da área de Comunicação Científica em Saúde, Correspondência:

BIREME/OPAS/OMS, São Paulo, Brasil. Rua Botucatu 862
04023-901 São Paulo – SP
Email: regina.castro@bireme.org

Artigo recebido em 18/12/2008

Aprovado em 20/05/2009

Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42(1): 31-5

Castro RCF
Registros de ensaios clínicos
ternacional de registros de ensaios clínicos e um portal
integrado de pesquisas. Com base nessa recomenda-
ção e como instituição internacional na área da saúde,
a Organização Mundial da Saúde reforçou a recomen-
dação do ICMJE sobre o registro de ensaios clínicos e
criou a Plataforma de Registro de Ensaios Clínicos3.
Como afirmou o Dr. Timothy Evans, Diretor
Assistente da OMS, na nota de imprensa lançada pela
OMS4, “O registro de todos os ensaios clínicos e a
disponibilidade de todas as principais informações
no momento do registro serão fundamentais para
assegurar a transparência na pesquisa médica e
cumprir com as responsabilidades éticas para com
os pacientes e participantes dos estudos”.
O ICMJE, em conjunto com a OMS, definiu um
conjunto de vinte campos obrigatórios3 para os regis-
tros de ensaios clínicos, dentre eles, data de realização
e registro, instituições financiadoras, título da pesqui-
sa, pesquisador responsável, tipo de estudo e de inter-
venção, objetivos do estudo, etc. Esses campos de
dados constituem os campos mínimos que todos os
Registros de Ensaios Clínicos devem respeitar para
que seja possível intercambiar dados e dar a conhecer
os estudos realizados e em andamento. Embora não
recomendem nenhum Registro de Ensaios Clínicos em
especial, o ICMJE sugere que os pesquisadores esco-
lham aqueles que contenham todos esses campos.
Segundo a definição da Organização Mundial
da Saúde2, “para efeitos de registro, um ensaio clínico
significa qualquer pesquisa que seleciona prospecti-
vamente participantes humanos, indivíduos ou grupos
de pessoas, para participarem de intervenções relaci-
onadas à saúde humana para avaliar efeitos e resulta-
dos na saúde. Essas intervenções incluem, mas não
se restringem a pesquisas com drogas, células e ou-
tros produtos biológicos, procedimentos cirúrgicos ou
radiológicos, aparelhos, tratamentos terapêuticos, mu-
danças no processo de atenção, cuidados preventi-
vos, etc.”.
Implicações para as publicações
científicas
Na recomendação do ICMJE2, o Grupo solicita
que os editores aceitem como condição prévia à publi-
cação, apenas os artigos sobre ensaios clínicos que
tenham sido registrados em uma base de dados de Re-
gistro de Ensaios Clínicos. Os registros devem ser fei-
tos pelos pesquisadores antes de iniciar o ensaio e de
selecionar os participantes da pesquisa. A data esta-
belecida pelo ICMJE para adoção dessa política edi-
32
Medicina (Ribeirão Preto) 42 (1): 31-5
http://www.fmrp.usp.br/revista
torial foi para estudos iniciados em julho de 2005, e
para estudos em andamento registrados antes de se-
tembro de 2005. Editores de revistas médicas de paí-
ses desenvolvidos apoiaram imediatamente a recomen-
dação do ICMJE, começando pelas que integram esse
grupo.
Para dar cumprimento a essa recomendação
da OMS nos países da América Latina e Caribe, o
Centro Latino-Americano de Informação em Ciênci-
as da Saúde (BIREME/OPAS/OMS) também lançou
uma recomendação5 aos editores de revistas indexadas
nas bases de dados LILACS (Literatura Latino-Ame-
ricana e do Caribe em Ciências da Saúde) e SciELO
(Scientific Electronic Library Online), em maio de
2007. Nessa recomendação, a BIREME estabelece
que todos os editores de revistas médicas latino-ame-
ricanas exijam o número de registro de artigos com
resultados de ensaios clínicos, como um critério para
a aceitação dos trabalhos.
Seguindo o modelo proposto pelo ICMJE, a
BIREME sugere um texto para que os editores inclu-
am nas Instruções aos Autores de suas revistas, ori-
entando os autores sobre a necessidade de registrar
suas pesquisas clínicas. A atualização das Instruções
aos Autores nas revistas médicas indexadas na
SciELO tem sido acompanhada pela BIREME, como
um controle sobre a adoção dessa recomendação. Da
mesma forma, a BIREME tem acompanhado a indi-
cação pelos autores e editores do número de registro
nos artigos sobre ensaios clínicos. Até julho de 2008,
nenhum ensaio clínico havia sido publicado em revis-
tas latino-americanas.
Pla taf
Plataf or
tafor ma de R
orma e gistr
Re gistroo de Ensaios
Clínicos
A Plataforma de Registro de Ensaios Clínicos
(International Clinical Trials Registry Platform –
ICTRP), coordenada pela OMS, dispõe de um portal
de pesquisa (Figura 1) aberto ao público em geral que
permite a pesquisa integrada em todas as bases de
dados certificadas pela OMS e incluídas na platafor-
ma6.
Na modalidade de pesquisa avançada, o usuá-
rio pode buscar por qualquer palavra do título, pela
condição clínica, pelo tipo de intervenção, pelo estado
do recrutamento, patrocinadores das pesquisas. É pos-
sível selecionar os países de realização dos estudos,
delimitar datas e definir se a busca será feita em um
registro específico ou aplicá-la a todos os registros
(Figura 2).
Medicina (Ribeirão Preto) 42 (1): 31-5 Castro RCF
http://www.fmrp.usp.br/revista Registros de ensaios clínicos

Figura 1- Portal de pesquisa da Plataforma Internacional de Registros de Ensaios Clínicos, disponível em:
http://www.who.int/trialsearch/

Figura 2- Módulo de pesquisa avançada, Portal de Pesquisas, Plataforma Internacional de Registros de Ensaios Clínicos, OMS
(http://www.who.int/trialsearch/AdvSearch.aspx)

33
Castro RCF
Registros de ensaios clínicos
Iniciativas existentes
Várias iniciativas para a criação de Registros
de Ensaios Clínicos nacionais ou de áreas de inter-
venção específicas foram desenvolvidas em todo o
mundo7,8. A OMS certifica e classifica esses Regis-
tros de acordo com o cumprimento dos campos míni-
mos definidos pelo ICMJE. Os Registros que não cum-
prem todos os critérios devem associar-se aos Regis-
tros Primários, que foram certificados, e devem ga-
rantir a inclusão de toda a informação necessária.
Até julho de 2008, as iniciativas existentes eram:
• Australian New Zealand Clinical Trials Registry
(ANZCTR)
• Chinese Clinical Trial Register (ChiCTR)
• ClinicalTrials.gov (Estados Unidos)
• Clinical Trials Registry – India (CTRI)
• ISRCTN.org (Inglaterra)
• The Netherlands National Trial Register (NTR)
• Sri Lanka Clinical Trials Registry (SLCTR)
Em novembro de 2008, são dez os Registros
atualizados no Portal de Pesquisa. Além dos já menci-
onados, foram incluídos:
• German Clinical Trials Register (DRKS)
• Iranian Registry of Clinical Trials (IRCT)
• Japan Primary Registries Network
Além dos 20 campos básicos e obrigatórios
exigidos pela OMS, vários campos adicionais foram
criados pelos distintos Registros. Alguns são realmen-
te campos adicionais, criados principalmente para aten-
der a exigências nacionais para o registro de pesqui-
sas clínicas. Entretanto, alguns Registros adotam o
mesmo nome de campo, mas com semântica diferen-
te, ou adotam nomes diferentes para o mesmo con-
teúdo semântico recomendado pela OMS ou ainda
subdividem o conteúdo dos campos básicos em dife-
rentes níveis hierárquicos (gerais ou específicos).
Exemplos de campos adicionais: fontes de financia-
mento, aprovação por Comitê de Ética em Pesquisa,
metodologia do estudo, descrição das amostras bioló-
gicas e da população em estudo, palavras-chave, den-
tre outros. Segundo análise realizada pela BIREME
sobre as iniciativas existentes, o Registro que tem mais
campos específicos ou detalhamento de campos obri-
gatórios é o ClinicalTrials.gov, dos Estados Unidos.
Na América Latina, a Organização Pan-Ame-
ricana da Saúde (OPAS) divulgou um diagnóstico da
situação9 e tem apoiado a criação de uma Plataforma
regional para a América Latina e Caribe de Registros
de Ensaios Clínicos, em conjunto com a BIREME. A
proposta de criação dessa plataforma foi apresentada
34
Medicina (Ribeirão Preto) 42 (1): 31-5
http://www.fmrp.usp.br/revista
durante o VIII Congresso Brasileiro de Saúde Coleti-
va no Rio de Janeiro, em 2006 e novamente discutida
com representantes da Argentina, Chile, Cuba, Co-
lômbia e Brasil, durante o XV Colóquio Cochrane,
realizado em São Paulo, em outubro de 2007.
A criação da Plataforma Regional para a Amé-
rica Latina e Caribe permitirá a criação de registros
nacionais e de um portal de busca integrada nos regis-
tros existentes na Região. Os países que não têm sis-
temas próprios poderão adotar o modelo proposto para
a criação de seus registros nacionais. Até julho de
2008, existiam os seguintes registros:
• LatinRec (Latin-American Clinical Trials
Registry), Colombia10
• Registro Público Cubano de Ensayos Clínicos,
Cuba11
No Brasil, a discussão sobre o Registro Na-
cional de Ensaios Clínicos, iniciada em 2006 no VIII
Congresso Brasileiro de Saúde Coletiva, envolve o De-
partamento de Ciência e Tecnologia (Decit) da Se-
cretaria de Ciência e Tecnologia e Insumos Estratégi-
cos, do Ministério da Saúde, a Fundação Oswaldo Cruz,
a Agência Nacional de Vigilânica Sanitária (Anvisa),
e o Conselho Nacional de Ética em Pesquisa. Essas
instituições, em conjunto com a BIREME e a Área
de Pesquisas da OPAS, iniciaram discussões para a
criação de um Registro Nacional para o Brasil.
Carvalheiro e Quental 12 descrevem algumas ques-
tões que têm sido discutidas no Brasil. Em julho de
2008, o Ministério da Saúde publicou Portaria13 que
estabeleceu uma Comissão para Elaboração do
Projeto de Implantação do Registro Brasileiro de
Ensaios Clínicos – REBRAC, sendo sua finalização
prevista para o ano de 2009, sob a coordenação do
Decit/MS.
Iniciativas complementares também foram de-
senvolvidas pela BIREME na Biblioteca Virtual em
Saúde (BVS), como o Portal de Evidências14 e o Por-
tal Cochrane BVS15. O Portal de Evidências reúne,
organiza e oferece acesso integrado a fontes de infor-
mação em saúde de melhor nível de evidência, de acor-
do com a metodologia proposta pela Medicina Basea-
da em Evidências (MBE) e oferece acesso a fontes
de informação sobre a própria metodologia MBE. A
coleção do Portal Cochrane BVS é formada pelo con-
junto das oito bases da Cochrane Library; pelas bases
da Biblioteca Cochrane Plus, reunidas pelo Centro
Cochrane Ibero-Americano, que inclui conteúdos em
espanhol; e pelos resumos de revisões sistemáticas
Cochrane traduzidos ao português, produzidos pelo
Centro Cochrane do Brasil.
Medicina (Ribeirão Preto) 42 (1): 31-5 Castro RCF
http://www.fmrp.usp.br/revista Registros de ensaios clínicos

Considerações Finais tros de ensaios clínicos é promover a sua ampla divul-

A necessidade de assegurar a transparência
dos estudos clínicos através de sua divulgação para a
comunidade científica e para os participantes é evi-
dente e tem sido atendida pelas diversas propostas da
OMS, implementadas e apoiadas pela (BIREME/
OPAS/OMS). No entanto, tão importante quanto o
desenvolvimento da base de dados pública de regis-
gação na comunidade científica, o que foi objeto des-
se trabalho, que expõe de forma breve, facilitada e
simples, o contexto no qual a base de dados foi ideali-
zada e tem sido atualmente implementada. Dessa for-
ma, este texto é de caráter essencialmente informati-
vo, visando estabelecer um contato inicial dos pesqui-
sadores com a nova necessidade de registrar um es-
tudo clínico.

ABSTRACT
This document discusses the recommendations of the International Committee of Medical Journal
Editors (ICMJE) and of the World Health Organization for clinical trials registering. The consequences for
scientific publications and the role of BIREME for joining Latin America and Caribbean countries in these
initiatives are discussed. The International Clinical Trials Registry Platform (ICTRP) coordinated by WHO
as well as the existent initiatives are described, highlighting those from Latin America and the Caribbean.

Keywords: Clinical Trial. Periodicals. Registries/Clinical Trial. Clinical Trials as Topic.

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35
 REVISÃO

Criopr eser
Criopreser
eservvação de células-
pr
proogenitor as hema
enitoras topoéticas
hematopoéticas
Cryopreservation of hematopoietic progenitor cells

Gil Cunha De Santis1, Karen de Lima Prata2

RESUMO
O transplante autólogo de células-progenitoras hematopoéticas (CPH) requer, na maioria das vezes, a
sua criopreservação a fim de manter sua viabilidade até o momento da infusão, que pode se dar meses
ou anos depois da coleta. A criopreservação adequada das CPHs é feita ao submeter a suspensão
celular a velocidades lentas de congelamento (1 a 3ºC/minuto), e com o emprego de substâncias
chamadas crioprotetoras, sendo a mais usada o dimetilsulfóxido (Me2SO4), um agente coligativo que
diminui o conteúdo de água livre tanto no espaço intra como no extracelular. Portanto, este composto
diminui o tamanho e o número dos cristais de gelo. O descongelamento das CPHs é feito rapidamente.
A suspensão celular pode então ser infundida sem posterior manipulação ou ser submetida a lavagem
para remover o Me2SO4, restos celulares e hemoglobina livre, potencialmente tóxicos tanto para o paci-
ente quanto para as células.

Palavras-Chave: Células Progenitoras Hematopoéticas. Criopreservação. Transplante. Dimetil Sulfóxido.

Introdução para a sua viabilidade, como é frequente com o em-

A expansão do papel do transplante de células-
progenitoras hematopoéticas em doenças hematoló-
gicas, neoplásicas e genéticas, e a propagação dos
serviços de transplante têm exigido melhoria na capa-
citação dos serviços quanto à manipulação e à crio-
preservação destas células. São várias as inovações
tecnológicas que podem ser arroladas nos últimos anos,
dentre elas o desenvolvimento de equipamentos como
o BioArchive, que permite armazenamento prolonga-
do de unidades de CPH (principalmente de sangue de
cordão umbilical e placentário - SCUP) sem expô-las
a variações de temperatura potencialmente deletérias
prego de tanques convencionais. Também importante
foi a ampliação do conhecimento sobre o comporta-
mento das CPHs submetidas ao congelamento, desde
sua descrição inicial em 1955.1
As fontes clássicas de CPH são a medula ós-
sea (MO), o sangue de cordão umbilical e placen-
tário e o sangue periférico (SP) após a mobilização
das células-progenitoras hematopoéticas. Aparente-
mente, as CPHs oriundas destas fontes apresentam o
mesmo comportamento à criopreservação. Todavia,
seu cultivo ex vivo tem se tornado cada vez mais fre-
quente, o que pode influir nesse comportamento, de
modo a requerer protocolos específicos para a crio-

1. Médico Hematologista e Hemoterapeuta do Centro Regional Correspondência:

de Hemoterapia do Hospital das Clínicas da Faculdade de
Medicina de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo
(CRH-HCFMRP-USP), Hemocentro de Ribeirão Preto.
Mestrado e Doutorado em Ciências Médicas na área de
Hematologia pela USP.
2. Médica Hematologista e Hemoterapeuta do CRH-HCFMRP-
USP, Hemocentro de Ribeirão Preto. Mestre em Ciências
Médicas na área de Hematologia pela USP.
Fundação Hemocentro de Ribeirao Preto. Rua Tenente Catão
Roxo, 2501. Bairro Monte Alegre.
14051-140 - Ribeirao Preto, SP - Brasil
Artigo recebido em 06/10/2008
Aprovado para publicação em 29/01/2009

Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42(1): 36-47

Medicina (Ribeirão Preto) 2009; 42 (1): 36-47 De Santis GC, Prata KL. Criopreservação de
http://www.fmrp.usp.br/revista células-progenitoras hematopoéticas

preservação de cada um dos diferentes produtos de específicos quanto à sua estabilidade quando suspen-
CPH. 2 sas em meio anisotônico. A exposição das células a
Em geral, a criopreservação de CPH é consi- meio hipertônico que exceder os limites de sua tole-
derada obrigatória para transplantes autólogos e para rância pode provocar alterações da membrana celu-
os bancos de sangue de cordão umbilical e placentá- lar, particularmente no que diz respeito à permeabili-
rio (BSCUP), enquanto os transplantes alogênicos ge- dade, à integridade e à função. Cada tipo celular tam-
ralmente são realizados com a infusão a fresco das bém apresenta um limite distinto de resistência à ex-
CPHs, sem a sua criopreservação. Alguns serviços posição a meio hipotônico. Além das características
fazem transplantes autólogos com CPH não-criopre- do meio, também é importante a temperatura da sus-
servadas (ver abaixo). pensão celular, que pode retardar ou acelerar a movi-
mentação de água e eletrólitos entre a célula e o meio
Princípios da criopr eser
criopreser
eservvação de que a envolve.
A manutenção da viabilidade da célula sub-
células
metida ao processo de criopreservação depende basi-
O resfriamento de células a temperaturas pou- camente de sua capacidade de resistir a dois tipos de
co superiores a 0ºC reduz o seu metabolismo, mas não lesão: a desidratação e o dano mecânico decorrente
o abole, de modo que as células continuam a sofrer da formação de cristais de gelo no seu interior4 (Figu-
um processo de deterioração progressiva, apenas em ra 1). Em geral, estes dois tipos de lesão estão corre-
menor velocidade. Além disso, as vá-
rias vias metabólicas sofrem
heterogeneamente as consequências
das baixas temperaturas, o que, de
seu lado, é fator adicional para a per-
da da viabilidade das células expos-
tas a baixas temperaturas por muito
tempo. Os efeitos mais conhecidos
do resfriamento são a diminuição da
atividade da bomba de sódio, a mu-
dança de fase dos lipídios da mem-
brana (que pode interferir com a fun-
ção de enzimas) e a precipitação de
substâncias (que pode resultar em al-
teração da composição das soluções
e do seu pH). Adicionalmente, quan-
do o resfriamento se dá rapidamen-
te, pode ocorrer lesão e morte celu-
lar por mecanismos ainda mal esta- Figura 1: Tipos de lesão que podem ocorrer durante a criopreservação celular.
belecidos, um fenômeno denomina-
do “choque térmico”. Por isso, para
conservar células e tecidos por período prolongado, se lacionados à velocidade com que a suspensão celular
faz necessário congelá-los a temperaturas que inter- é congelada: o primeiro, em baixas velocidades, en-
rompam as vias metabólicas celulares. Contudo, o pro- quanto o segundo, em altas velocidades.
cesso de congelamento por si já implica riscos para a A formação de cristais de gelo requer pelo me-
manutenção da viabilidade celular. nos um evento inicial de nucleação, que depois aumenta
Os mecanismos precisos das lesões celulares progressivamente de tamanho por incorporação de mo-
pelo congelamento ainda são matéria de debate. Es- léculas de água livre e se expande por toda a solução
peculou-se inicialmente que estes mecanismos pode- ou suspensão celular na dependência da velocidade e
riam estar relacionados com o conteúdo celular de sais intensidade da queda de temperatura e da composição
ou as características de composição da membrana do soluto. O congelamento rápido resulta na formação
celular.3 Todos os tipos celulares apresentam limites de muitos pontos de nucleação, que surgem quase que

37
De Santis GC, Prata KL. Criopreservação de
células-progenitoras hematopoéticas
simultaneamente, o que confere a cada cristal um ta-
manho relativamente menor do que aquele que surge
com velocidades mais baixas de congelamento.
Quando se trata de suspensão celular, em geral
a nucleação de gelo ocorre primeiramente no espaço
extracelular, principalmente em baixas velocidades de
congelamento. Os pontos iniciais de formação dos
cristais de gelo recrutam moléculas de água e, de cer-
ta forma, “expulsam” o soluto para as porções ainda
líquidas da solução, que, por sua vez, têm o seu ponto
de congelamento progressivamente reduzido à medi-
da que a concentração de soluto aumenta. A solução
mais concentrada (e com maior viscosidade) se loca-
liza mais próxima das células, que, expostas ao meio
hipertônico, sofrem processo de desidratação. Em
determinado momento, a concentração de solutos tor-
na-se tão alta que ocorre o fenômeno da vitrificação,
quando então cessa todo movimento de água e, con-
sequentemente cessa o aumento do tamanho dos cris-
tais de gelo. Nos congelamentos realizados em alta
velocidade pode ocorrer a formação de cristais de gelo
concomitantemente nos espaços intracelular e extra-
celular. Dependendo do tamanho dos cristais, pode
ocorrer lesão mecânica das organelas subcelulares e
da membrana celular. Idealmente, o processo de con-
gelamento deve evitar que ocorra a formação de cris-
tais de gelo no interior das células e induzir o processo
de vitrificação.
As maneiras de evitar esses dois tipos de lesão
celular são basicamente duas: aplicar velocidade de
congelamento ideal para o tipo de célula em questão,
e empregar agentes crioprotetores que minimizem a
formação de cristais de gelo e diminuam a intensidade
da desidratação celular (Tabela 1).
Tabela 1
Fatores a considerar durante processo de criopreser-
vação de CPH
Volume do produto (necessidade de redução de volume)
Tipo de solução crioprotetora
Concentração de células nucleadas
Velocidade de congelamento
Previsão de uso clínico (tipo de armazenagem)
Agentes crioprotetores
A primeira vez em que um agente crioprotetor
foi usado tem mais de meio século, quando se empre-
38
Medicina (Ribeirão Preto) 2009; 42 (1): 36-47
http://www.fmrp.usp.br/revista
gou o glicerol para a preservação de espermatozóides
de aves.5 O glicerol se mostrou eficaz também para a
criopreservação de hemácias, plaquetas e vários tipos
de células nucleadas. Esta molécula diminui a desna-
turação das proteínas expostas a baixas temperaturas
e é atóxica para as células, mesmo em altas concen-
trações. Contudo, a sua penetração nas células ocor-
re lentamente, o que constitui uma limitação em seu
emprego para a criopreservação de diversos tipos
celulares.
Dez anos depois do relato das propriedades
crioprotetoras do glicerol, Lovelock e Bishop demons-
traram que a substância dimetilsulfóxido era eficaz na
criopreservação de esperma bovino.6 O Me2SO é um
composto higroscópico polar, incolor e inodoro, usado
pela indústria como solvente. Esta é uma substância
de baixo peso molecular, composta por um grupo
sulfóxido, que é hidrofílico, e dois grupos metila, que
são hidrofóbicos. O Me2SO é metabolizado em dimetil-
sulfona e dimetil-sulfeto, eliminados por via renal e
exalado pelos pulmões, respectivamente. Sua meia-
vida é de aproximadamente 20 horas. A dimetil-sulfona
tem meia-vida de 72 horas e o dimetil-sulfeto é expi-
rado durante aproximadamente 24 horas, o que con-
fere odor característico ao hálito do paciente.
O Me2SO é o crioprotetor mais usado para a
criopreservação das CPHs, em geral nas concentra-
ções entre 5 e 10%. A função deste agente parece ser
essencialmente coligativa, ou seja, de “captura” das
moléculas de água livre, o que leva a redução da quan-
tidade de gelo formada, diminuição da temperatura do
ponto de congelamento e aumento do ponto de vitrifi-
cação. Esta substância penetra em tecidos e células
numa velocidade maior que a do glicerol à temperatu-
ra ambiente, o que constitui vantagem apreciável. No
entanto, nesta temperatura, o Me2SO é mais tóxico
que o glicerol, inclusive para as CPHs, o que motivou
a maioria dos serviços a estabelecer protocolos que
prevêem sua adição lenta à suspensão celular e início
do congelamento tão logo tenha terminada a adição.
Douay e colaboradores mostraram perda significativa
de precursores de granulócitos e macrófagos após in-
cubação da suspensão celular com Me2SO.7 Entre-
tanto, estudos posteriores não confirmaram este acha-
do.8,9 No Centro Regional de Hemoterapia do Hospi-
tal das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão
Preto da Universidade de São Paulo (CRH-HCFMRP-
USP), foram analisadas unidades de sangue de cor-
dão umbilical expostas ao Me2SO e mantidas por tem-
pos progressivos a 4ºC e a 37º C.10 Foi observada pro-
Medicina (Ribeirão Preto) 2009; 42 (1): 36-47 De Santis GC, Prata KL. Criopreservação de
http://www.fmrp.usp.br/revista células-progenitoras hematopoéticas

volveria o favorecimento da vitrificação do espaço ex-

tracelular e, por isso, em associação com um criopro-
tetor penetrante, reduziria a intensidade das lesões pro-
vocadas pela desidratação celular, e formaria uma ca-
mada em torno das células, o que as protegeria da
lesão mecânica pelos cristais de gelo formados no es-
paço extracelular. É possível que a utilização do HEA
permita aplicar à suspensão celular velocidade de con-
gelamento menos estrita. Em razão dessas proprieda-
des, este agente tem sido usado principalmente quan-
do do congelamento a temperatura não-programada,
como aquela feita em congelador mecânico a 80ºC
negativos. Problema potencial do emprego de políme-
ros como o HEA e a polivinil-pirrolidona são os possí-
veis danos à membrana celular, como demonstrado
com hemácias.12
Figura 2: Quantificação de unidades formadoras de colônias
granulócito-monócito (CFU-GM) de sangue de cordão umbilical e
Um protocolo alternativo ao uso de Me2SO a
placentário expostas ao Me 2 SO e incubadas por tempos 10% foi descrito por Stiff e colaboradores, que conse-
progressivos, a 37ºC. guiram bons resultados com a associação de Me2SO
a 5% com HEA a 6%.13 Entretanto, outros autores
gressiva perda da capacidade de formação de colôni- concluíram que associar o HEA ao Me2SO a 5% não
as de GM-CSF, principalmente à temperatura de 37º era imprescindível para uma boa recuperação de
C (Figura 2). Por isso, recomendamos iniciar
congelamento logo após a adição da solução Tabela 2
crioprotetora. Relação de alguns agentes crioprotetores
Como as células são relativamente sen-
síveis ao chamado estresse osmótico, a adi- Composto Representantes Peso molecular
ção e a remoção das soluções hipertônicas Sulfóxidos Dimetil-sulfóxido 78,13
que contêm os agentes crioprotetores deve
ser feita cuidadosamente, de modo a não ul- Alcoóis hidratados Metanol 32,04
trapassar sua tolerância osmótica. A exposi- Etanol 46,07
ção súbita das células a meios hipertônicos e,
posteriormente, isotônicos pode levá-las à rup- Dióis Etileno glicol 62,07
tura e à perda da viabilidade. Propileno glicol 76,09
Além do glicerol e do Me2SO, há ou-
Trióis Glicerol 92,09
tros agentes crioprotetores, como: propileno
glicol, acetato de trimetilamina, trehalose, Poliálcoois Manitol 182,17
hidroxetilamido (HEA) e outros (Tabela 2). Sorbitol
Particularmente importante dentre eles é o
HEA, usado também como expansor da vo- Monossacarídeos Glicose 180,16
lemia e como agente sedimentante de eritró- Xilose 150,13
citos, empregado para a separação de leucó-
citos, principalmente para a coleta de granu- Dissacarídeos Sacarose 342,30
lócitos.11 O HEA é uma macromolécula (há Lactose 360,31
apresentações comerciais com diferentes pe- Trealose 378,33
sos moleculares) que tem reduzido efeito os-
Polissacarídeos Dextrana 1-200 x 104
mótico para o seu peso molecular e que não
se difunde para o interior das células, sendo Hidroxietilamido
por isso denominado de crioprotetor não-pe- Heterocíclicos Polivinil-pirrolidona 3-36 x 104
netrante. Os mecanismos crioprotetores do
HEA não são plenamente conhecidos, mas en- Proteínas/peptídeos Albumina (soro) 66 x 103

39
De Santis GC, Prata KL. Criopreservação de
células-progenitoras hematopoéticas
CPH.14, 15 Também foi demonstrado que a recupera-
ção da hematopoese em pacientes com mieloma múl-
tiplo e linfoma submetidos a transplante autólogo com
células congeladas com Me2SO a 5 ou 10%, sem o
HEA, era idêntico, o que favoreceria a escolha da
menor dose deste crioprotetor.16 Concentrações infe-
riores de Me2SO, como 3,5%, associadas a outros cri-
oprotetores (HEA) talvez possam ser utilizadas com
resultados aceitáveis.17
Velocidade de cong elamento
congelamento
Foram desenvolvidos vários protocolos para o
congelamento de produtos de CPH, que requerem o
emprego de equipamentos que permitem o congela-
mento a temperatura programada ou congeladores
mecânicos a 80ºC negativos. Depois de preparada, a
bolsa com a suspensão celular é colocada entre duas
placas metálicas a fim de que a velocidade de conge-
lamento seja igualmente distribuída em todo o seu vo-
lume. O conjunto bolsa/placas metálicas é então in-
troduzido preferencialmente em equipamento para
congelamento a velocidade programada. Alternativa-
mente, como mencionado acima, ele pode ser coloca-
do em congelador mecânico a 80ºC negativos e pos-
teriormente transferido a tanque de nitrogênio líquido
(L2N), ou então armazenado no próprio congelador a
80ºC negativos, até o momento do uso. A velocidade
ideal de congelamento das CPHs é de 1 a 3ºC por
minuto, velocidade atingida em unidades de CPH com
volumes de 100-150mL quando se usa congelador
mecânico a 80ºC negativos.
A B
Figura 3: Curvas de temperatura durante a criopreservação da suspensão celular. A) Diagrama que exemplifica as diversas fases do
processo. B) Exemplo prático de uma curva de congelamento obtida em nosso serviço.
40
Medicina (Ribeirão Preto) 2009; 42 (1): 36-47
http://www.fmrp.usp.br/revista
Quando a suspensão celular é exposta a tem-
peraturas progressivamente mais baixas (velocidade
de 1-3ºC por minuto), notam-se as várias fases do con-
gelamento, que podem ser expressas na forma de uma
curva de temperatura da amostra (Figura 3). A pri-
meira fase corresponde ao início do processo de con-
gelamento, enquanto as células ainda se encontram
em suspensão. Esta fase dura até que a suspensão
atinja temperatura inferior ao ponto de congelamento
(em geral, inferior a 10ºC negativos). Inicia-se então a
segunda fase, denominada de transição, na qual ocor-
re aumento súbito da temperatura da amostra até que
se atinja o ponto de congelamento, quando então ela
se mantém por alguns minutos. Esta é uma fase consi-
derada crítica para a viabilidade das células e parece
estar diretamente correlacionada com a morte celu-
lar.18 É neste momento que ocorre a liberação do ca-
lor de fusão, durante a transformação de fase líquida
em sólida. No diagrama ilustrativo do processo de con-
gelamento, esta fase aparece com um platô. A partir
de então, inicia-se a terceira fase do processo, quando
a amostra já se encontra em estado sólido. Também
nesta fase, parece ser importante que a velocidade de
congelamento seja relativamente lenta. Velocidades de
congelamento inferiores a 5ºC/minuto permitem uma
maior recuperação de colônias CFU-GM quando com-
parada com velocidade superior a 10ºC.19
Concentração celular
Os produtos de CPH em geral não são subme-
tidos a purificação antes de seu congelamento, de modo
Medicina (Ribeirão Preto) 2009; 42 (1): 36-47
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que as CPHs se encontram misturadas com outras
células obtidas por ocasião de sua coleta, e que po-
dem exercer influência sobre o processo de criopre-
servação. No entanto, unidades de SCUP e MO têm
costumeiramente o seu volume reduzido antes de sua
criopreservação, principalmente à custa da remoção
de hemácias e plasma, o que provoca aumento signi-
ficativo da concentração das células nucleadas. Em
contrapartida, o SP geralmente não é submetido a re-
dução de volume e a sua concentração de células
nucleadas é superior àquela observada nos dois pro-
dutos mencionados anteriormente. É interessante para
os serviços de criopreservação e para os pacientes
que as unidades de CPH tenham volume reduzido a
fim de economizar espaço nos tanques de armazena-
gem e de diminuir o volume de Me2SO infundido.
Contudo, elevadas concentrações de células nucleadas
poderiam comprometer a viabilidade das CPHs pre-
sentes na unidade. Rowley e colaboradores observa-
ram que produtos de CPH poderiam ser congelados
com concentração celular tão elevadas quanto 3,7 x
108/mL sem comprometimento de sua viabilidade,
verificada após o descongelamento.20 Entretanto, é
possível que concentrações celulares mais elevadas
possam comprometer a recuperação das CPHs após
o descongelamento. Ainda não está definido o limite
superior de concentração celular que seja aceitável.
Ar maz
Armaz ena
mazena
enaggem
A armazenagem das CPHs visa manter a sua
viabilidade até o momento de sua administração, que
pode se dar meses ou mesmo anos após a coleta. A
temperatura de armazenagem deve, portanto, propor-
cionar bloqueio completo de todas as vias enzimáticas
das células, o que equivale dizer que deve ser tão bai-
xa quanto possível e certamente não superior a 80ºC
negativos. A medula óssea mantida a 196ºC negativos
apresenta melhor recuperação quando comparada a
sua armazenagem a 79ºC negativos.21 Por isso, a mai-
oria dos serviços tem armazenado unidades de CPH
em tanques de nitrogênio líquido, tanto na fase líquida
quanto na fase de vapor, o que permite adequada re-
cuperação das células mesmo uma década depois da
sua criopreservação.22, 23
É importante salientar que unidades armazena-
das em congeladores mecânicos ou na fase de vapor
do LN2 podem ser expostas a temperaturas mais ele-
vadas quando da abertura de sua tampa, que, se for
frequente, pode ocasionar dano às células. Por esta
De Santis GC, Prata KL. Criopreservação de
células-progenitoras hematopoéticas
razão, sistemas fechados como aquele proporcionado
pelo emprego do equipamento BioArchive, com seu
processo semi-automatizado de manuseio, podem tra-
zer vantagens significativas quanto à manutenção da
viabilidade das CPHs. Contudo, sistema como este
requer disponibilidade financeira muitas vezes acima
das possibilidades da maioria dos serviços.
Descongelamento e infusão
O descongelamento de um produto de CPH é
feito rapidamente, em geral em banho-maria durante
alguns poucos minutos, até o desaparecimento visual
dos cristais de gelo. A bolsa com as células deve ser
envolta em protetor plástico e imersa em água aquecida
a 37-40ºC. Para evitar maior risco de contaminação
por microrganismos eventualmente presentes na água
do banho-maria, pode-se tratá-la com antisséptico
iodado, ou então proceder ao descongelamento a seco,
que oferece recuperação semelhante ao método men-
cionado acima.24
A infusão de CPHs criopreservadas tem sido
associada a reações adversas, em sua maioria leves e
de curta duração. Entretanto, reações mais graves
foram relatadas. Essas reações são atribuídas à infu-
são de Me2SO, de restos celulares e ao conteúdo de
células não-mononucleares presente no produto.25 As
reações podem ser do tipo cardiovascular e não-car-
diovascular. A maioria dos pacientes apresenta náu-
sea, calafrios, sensação desagradável em orofaringe
e, mais raramente, hipotensão, dispnéia e arritmias
cardíacas26; 27. O Me2SO pode induzir a liberação de
Figura 4: Exemplo de uma unidade de células hematopoéticas de
sangue periférico criopreservada e acondicionada em estojo
metálico.
41
De Santis GC, Prata KL. Criopreservação de Medicina (Ribeirão Preto) 2009; 42 (1): 36-47
células-progenitoras hematopoéticas http://www.fmrp.usp.br/revista

histamina, o que explicaria a hipotensão e as reações Por causa das reações adversas acima menci-
anafiláticas que já foram associadas à sua infusão. onadas, a maioria dos serviços preconiza a adminis-
Há pelo menos dois relatos de casos de parada cardí- tração profilática de medicamentos, dentre os quais
aca atribuídas à infusão de produtos de CPH criopre- anti-histamínicos e corticosteróides, antieméticos e
servadas28;29. Também foram relatados hiperosmola- antipiréticos. Além disso, e para diminuir a toxicidade
lidade, elevação das aminotransferases, hemólise e potencial da hemoglobina livre, é recomendada hidra-
complicações neurológicas30,31. tação vigorosa no dia da infusão das células. Eventu-
A dose letal de Me2SO para 50% dos indivídu- almente, em casos especiais, quando houver alta pro-
os (DL50) é de 2,5 g/Kg para cães e de 11g/Kg para babilidade de ocorrência de sobrecarga volêmica (in-
macacos.32 A DL50 para humanos não é conhecida, fusão de medula óssea), pode ser necessário o uso de
mas recomenda-se que não ultrapasse 1 g/Kg/dia. diuréticos.
Eventualmente, pode-se fracionar as infusões em mais Um possível problema durante a infusão das
de um dia caso a dose de Me2SO seja considerada células é a formação de grumos, que podem obstruir o
elevada.33 As reações adversas associadas à infusão filtro e provocar a retenção e perda de parte das CPHs.
de sangue de cordão umbilical parecem ser menos Este fenômeno tem sido explicado como decorrente
frequentes, pois em geral o seu volume é reduzido, de da ruptura dos granulócitos durante o processo de
modo que a quantidade de Me2SO e de hemoglobina congelamento e descongelamento com a liberação de
livre seriam insuficientes para causar reações graves, DNA. Para evitar ou minimizar este risco, recomen-
mesmo levando-se em consideração o baixo peso do da-se a adição de solução de citrato de sódio à sus-
receptor, na maioria das vezes, crianças. pensão celular e a sua infusão relativamente rápida
Uma alternativa para a profilaxia das reações tão logo tenha ocorrido o descongelamento. A absten-
adversas pode ser a lavagem da suspensão celular, ção do uso de filtro (em geral de 170 µm) poderia
que visa remover a maior parte do Me2SO, da hemo- evitar a retenção de parte das células, entretanto, é
globina livre e dos restos celulares. Este procedimen- razoável supor que os grumos infundidos seriam dire-
to pode ser feito pelo emprego de técnicas semi-auto- cionados à circulação pulmonar e poderiam provocar
matizadas ou automatizadas com o auxílio de lavado- quadro de insuficiência respiratória ou contribuir para
ras de células34; 35; 36. No CRH-HCFMRP-USP, rea- o seu agravamento.
lizamos a lavagem (semi-automatizada) na minoria das
vezes, pois se trata de procedimento trabalhoso e re- Tabela 3
lativamente demorado (2-4 horas). O uso de lavado- Reações adversas à infusão de CPHs lavadas e não-
ras automáticas de células proporciona uma diminui- lavadas, dose de células CD34+/Kg infundidas e dia
ção significativa do tempo de processamento e do ma- da enxertia de neutrófilos, observados no CRH-
nuseio do produto, entretanto, resulta em maior dis- HCFMRP-USP.
pêndio de recursos financeiros, pois, além do equipa- Não-lavadas Lavadas
mento, requer o uso de kits descartáveis. De fato, (91) (19) p
temos observado no CRH-HCFMRP-USP uma re-
dução significativa da incidência das reações adver- Rubor facial 56 1 0,0022
sas imediatas, como por exemplo, náusea/vômitos, Náusea/ vômito 49 2 0,0222
eventuais naqueles que recebem unidades de CPH
Cólica 21 1 ns
lavadas e frequentes naqueles que recebem produtos
não-lavados. Também observamos redução da inci- Diarréia 6 0 ns
dência de complicações graves. No CRH-HCFMRP-
Dispnéia 5 1 ns
USP, dois pacientes desenvolveram insuficiência re-
nal aguda e um outro, encefalopatia transitória após a Cefaléia 10 0 ns
infusão de bolsas não-lavadas, enquanto nenhuma I.R.A. 2 0 ns
dessas complicações foi observada no grupo de paci-
entes que recebeu CPHs lavadas. Não foi observada Encefalopatia 1 0 ns
diferença entre a dose de células CD34+/Kg infundi- CD34 x 106/kg 4,63 3,63 ns
das ou dia da enxertia de neutrófilos entre os dois gru-
pos (Tabela 3). N500 10 11 ns

42
Medicina (Ribeirão Preto) 2009; 42 (1): 36-47
http://www.fmrp.usp.br/revista
A infusão de CPH deve ser feita através de
cateter implantado em veia central por duas razões
básicas: garantir que as células de fato foram infundi-
das no sistema circulatório (em veia periférica nem
sempre é possível ter certeza de que isso tenha ocor-
rido) e evitar a dor e a flebite quando a infusão é feita
em veia periférica, pois a suspensão celular com
Me2SO a 10% tem alta osmolaridade. As inconveni-
ências de usar cateter central são: infecção e trombo-
se no lúmen do cateter, que podem ocorrer em até
50% dos casos37 e acidentes decorrentes de sua im-
plantação. Uma alternativa seria o uso de cateter cen-
tral introduzido por veia periférica, o que poderia re-
duzir as complicações relacionadas à sua implanta-
ção, como a hemorragia.38
Contaminação dos produtos de CPH
A contaminação da medula óssea, do sangue
de cordão umbilical ou do sangue periférico por mi-
crorganismos pode ocorrer durante a coleta, a mani-
pulação, a armazenagem, o descongelamento ou a in-
fusão do produto. Em geral, o SP oferece menor risco
que a MO e o SCUP, até por ser em geral menos
sujeito a manipulação.
Os agentes infecciosos mais frequentemente
isolados das culturas são da flora cutânea normal, como
Staphylococcus coagulase-negativos e Propionibac-
terium acnes.39 Microrganismos potencialmente pa-
togênicos, como o Staphylococcus aureus, e outros
menos frequentes (ex. actinomiceto) também podem
ser encontrados.40
Na maioria das vezes, o produto pode ser in-
fundido sem cuidados especiais, na dependência do
tipo de microrganismo contaminante, das condições
do paciente e da falta de opções alternativas de trata-
mento para a doença de base. Caso o risco de sepse
seja considerado elevado, pode ser útil a administra-
ção profilática de antibióticos aos quais o microrga-
nismo seja sensível. Kelly e colaboradores observa-
ram apenas 1,0% (15) de contaminação em 1.502 pro-
dutos de CPH (MO e SP), dos quais 11 eram cocos
Gram-positivos, 2 bacilos Gram-positivos e 2 bacilos
Gram-negativos. Treze pacientes foram transplanta-
dos com produtos contaminados, mas em apenas um
caso atribuiu-se a bacteremia por Staphylococcus
epidermidis à inoculação pelo produto de CPH.41
Outros autores encontraram resultados semelhantes:
37 de 3.078 (1,2%) produtos de CPH contaminados
por bactéria (86,5% com Staphylococcus coagulase-
negativos) foram infundidos, mas nenhum dos recep-
De Santis GC, Prata KL. Criopreservação de
células-progenitoras hematopoéticas
tores desenvolveu infecção que pudesse ser atribuída
ao inóculo.42 Por fim, artigo recente revelou contami-
nação de 1,6% (119) de produtos de CPH, mas ape-
nas um dos receptores apresentou hemocultura posi-
tiva para o mesmo microrganismo isolado no inóculo.
A sobrevida dos receptores que receberam produtos
contaminados não foi diferente daquela observada nos
pacientes em geral.43
Criopr eser
Criopreser
eservvação de CPH em tr ans-
trans-
plante alogênico
No caso de transplante alogênico, os serviços
de transplante usam mais frequentemente CPHs não-
criopreservadas que, na maioria das vezes, são infun-
didas no mesmo dia da coleta. Esta conduta se deve à
crença de que células não submetidas às potenciais
lesões decorrentes do processo de congelamento e
descongelamento, ofereceriam melhor e mais rápida.
O uso de CPHs criopreservadas permite maior flexi-
bilidade de programação da coleta e de sua infusão. A
infusão de CPHs congeladas tem sido mais frequente
em dois tipos de situação: quando se considera o doa-
dor não confiável, e se teme uma eventual recusa à
doação após início do condicionamento do receptor,
ou por razões logísticas, relacionadas tanto ao doador
quanto ao receptor, como a disponibilidade de compa-
recimento do doador, o local de moradia, os meios de
transporte disponíveis e dentre outros.
Além destas considerações, devem-se levar em
conta as possíveis diferenças biológicas entre os trans-
plantes com CPH criopreservadas e “frescas”. Por
exemplo, não se sabe ainda se há diferença quanto à
composição celular entre produto criopreservado e
não-criopreservado. Também não foram identificadas
diferenças significativas quanto à qualidade da enxer-
tia e à incidência e gravidade da doença do enxerto-
contra-hospedeiro (DECH). São poucos os trabalhos
que comparam os resultados clínicos entre grupos de
pacientes transplantados com CPHs criopreservadas
e não-criopreservadas. Shinkoda e colaboradores des-
creveram o caso de dois irmãos, gêmeos univitelinos,
que tiveram leucemia mielóide aguda com a diferença
de 1 mês e ambos foram submetidos a transplante de
CPHs provenientes de outro irmão HLA-idêntico,
entretanto, um deles recebeu células frescas, e o ou-
tro, células criopreservadas. Não foi observada dife-
rença quanto ao tempo de recuperação hematológica
ou quanto à gravidade da DECH.44 Como sugere o
relato de casos mencionado acima, parece não haver
diferença quanto à recuperação hematológica e à
43
De Santis GC, Prata KL. Criopreservação de
células-progenitoras hematopoéticas
sobrevida. Contudo, Eckardt e colaboradores mostra-
ram que o grupo submetido a transplante com CPHs
criopreservadas apresentou menor incidência de
DECH .45 Outros autores não confirmaram este acha-
do. Stockschlader e colaboradores compararam os re-
sultados obtidos com o transplante de medula óssea
realizado em 80 pacientes subdivididos em dois gru-
pos de igual tamanho amostral, sendo que um deles
recebeu MO criopreservada e ou outro MO não-
criopreservada. O agente crioprotetor foi o Me2SO
(concentração a 10%) e o congelamento foi feito a
temperatura programada. O tempo de armazenagem
teve a mediana de 17,5 dias (3-455). Os autores não
observaram diferença quanto à recuperação hemato-
lógica, à sobrevida no dia +100 ou quanto à incidência
e gravidade da DECH.46
Pacientes transplantados com medula óssea
criopreservada apresentam maior incidência de rea-
ções adversas imediatas à infusão, como: náusea e
vômitos, febre e calafrios, quando comparados com
pacientes transplantados com medula óssea fresca.
Estes sintomas foram em geral de curta duração e
não relacionados a sequelas.47 Outra complicação mais
comum com o uso de medula óssea criopreservada é
o maior risco de contaminação bacteriana, provavel-
mente pela maior manipulação do produto.48 Entre-
tanto, como afirmado anteriormente, acredita-se que,
na maioria dos casos, a contaminação não tenha re-
percussão clínica.49
Outro fator que deve ser levado em considera-
ção no contexto do transplante alogênico é a compati-
bilidade ABO entre doador e receptor. É razoável su-
por que a incompatibilidade ABO maior possa acres-
cer risco para o paciente, particularmente quanto ao
comprometimento da função renal, mesmo levando-
se em consideração o pequeno volume de hemácias
no produto de CPH obtido por aférese. Evidentemen-
te, quando se tratar de grandes volumes, como ocorre
em transplante de células coletadas da MO, é conve-
niente reduzir volume de hemácias e, eventualmente,
lavar a suspensão celular para remover o Me2SO.
Criopr eser
Criopreser
eservvação de células mesen-
quimais estromais multipotentes
(CTM) e células-tronco embrioná-
rias (CE)
As células mesenquimais estromais multipoten-
tes50 têm sido usadas clinicamente para reparar teci-
dos e órgãos ou como agente imunossupressor em
44
Medicina (Ribeirão Preto) 2009; 42 (1): 36-47
http://www.fmrp.usp.br/revista
transplantados de CPH com DECH grave51. São pou-
cos os estudos sobre a criopreservação desse tipo de
célula, mas, aparentemente, seu comportamento não
difere daquele das CPHs, de modo que as CTMs po-
dem ser adequadamente congeladas com o emprego
do Me2SO, em geral a 10%, e manter sua capacidade
de profileração e diferenciação.52
As CEs têm o potencial de proliferar indefi-
nidamente em cultura e podem se diferenciar em qual-
quer tipo celular. Estas características tornam estas
células particularmente atraentes para uso em medi-
cina regenerativa, o que pode se tornar uma realidade
nos próximos anos. Diferentemente das CTMs, as
CEs são muito mais frágeis e sofrem danos durante o
processo de congelamento e descongelamento quan-
do empregados os protocolos em vigor para outros
tipos de células nucleadas, o que torna sua recupera-
ção inferior àquela observada com as CTMs e CPHs.53
Além disso, as CEs também parecem sofrer certo grau
de diferenciação induzido pelo processo de criopre-
servação. Acredita-se que a principal causa da morte
das CEs seja a formação de cristais de gelo no
citoplasma durante o processo de congelamento, o que
poderia ser evitado pelo emprego do método da vitrifi-
cação.54 Em conclusão, os protocolos de criopreser-
vação desse tipo celular ainda não estão bem estabe-
lecidos.
Transplante de CPHs não-criopreser
eser--
não-criopreser
vadas
Como a maioria dos regimes de condicionamen-
to requer vários dias para se completar (ex. 6 dias
para o BEAM), a criopreservação das CPHs é consi-
derada necessária para manter a sua viabilidade celu-
lar até o momento de sua infusão. Entretanto, as CPHs
podem aparentemente ser armazenadas de maneira
adequada, em suspensão, por até 9 dias à temperatu-
ra de 4ºC,55 principalmente se conservadas em meio
de cultura.56 Em geral, a maioria dos serviços inicia o
processo de criopreservação das CPHs em até 48-72
horas de sua coleta. Contudo, alguns serviços optam
por realizar transplante autólogo sem submeter as cé-
lulas ao processo de criopreservação, uma vez que as
CPHs conservam a sua viabilidade à temperatura de
geladeira por alguns dias. Esta opção tem como obje-
tivo reduzir os custos do transplante e, desta forma,
viabilizar a sua implementação. As vantagens do uso
de CPHs não-criopreservadas encontram-se enume-
radas na Tabela 4.
Medicina (Ribeirão Preto) 2009; 42 (1): 36-47
http://www.fmrp.usp.br/revista
Tabela 4
Vantagens do uso de CPHs não-criopreservadas
Redução de custos
Logística simplificada
Menor manipulação do produto celular
Menor necessidade de treinamento de recursos humanos
Menor incidência e gravidade das reações à infusão
Maior facilidade de transporte e conservação
Ausência de exposição das células ao Me2SO
O transplante de CPHs não-criopreservadas
tem sido mais frequente em pacientes com mieloma
múltiplo, pois, nesta doença, a droga mais usada para
o condicionamento é o melfalan, cuja meia-vida é cur-
ta e se torna indetectável no plasma 6 horas após a
sua administração. No entanto, pacientes com linfoma,
leucemia aguda e tumores sólidos também já foram
submetidos a transplantes bem-sucedidos com CPHs
não-criopreservadas.57
Identificação do produto
O erro de identificação do produto ou do re-
ceptor pode ter consequências catastróficas para este
último, de maneira que a sua prevenção deve ser ob-
jeto de padronização e treinamento periódicos.
Para todo encaminhamento de CPH para trans-
plante deve haver solicitação escrita, na qual devem
constar informações que garantam a correta identifi-
cação do receptor e do doador (no caso de transplan-
te alogênico), o tipo produto a transplantar (CPH-SP,
CPH-MO, CPH-SCUP etc), a dose de células a in-
fundir, o peso do receptor, a tipificação ABO e Rh do
doador e do receptor e a eventual necessidade de la-
vagem da suspensão celular.
Para ser transportado, o produto de CPH deve
ser acondicionado em recipiente rígido e próprio para
tal finalidade. Este recipiente deve ser externamente
De Santis GC, Prata KL. Criopreservação de
células-progenitoras hematopoéticas
identificado por meio de um rótulo (mas sem os no-
mes do doador ou do receptor), além de aviso eviden-
te que proíba a sua irradiação.
Controle de qualidade
O controle de qualidade dos produtos de CPH
não é padronizado e depende das características do
serviço que os processa, das características e origem
dos produtos, assim como das necessidades do recep-
tor. Em geral, deve-se medir o volume do produto, seu
conteúdo de células nucleadas e de CPH (em geral,
definido pela contagem de células CD34+). Também
é importante realizar testes de esterilidade, mesmo que
a unidade de CPH venha a ser infundida antes da ob-
tenção de seu resultado, como costuma ocorrer com
o transplante de MO, em geral feito no mesmo dia da
coleta. Ensaios clonogênicos também podem ser rea-
lizados com o objetivo de avaliar a capacidade funcio-
nal das CPHs, entretanto, estes testes são demorados
(podem requerer várias semanas de incubação), tra-
balhosos e até certo ponto subjetivos, e por isso, de-
vem idealmente ser feitos sempre no mesmo labora-
tório e de preferência pelas mesmas pessoas.
Pode-se ainda realizar testes para avaliar a
viabilidade das células, tanto pelo emprego de mé-
todo que requer uso de citômetro de fluxo quanto pelo
teste de exclusão de corante como o azul de Tripan.
Este último é um método barato e de rápida aplica-
ção. As células viáveis são capazes de excluir o
corante, enquanto as células não-viáveis aparecem
coradas de azul. Sua principal desvantagem é a im-
possibilidade de diferenciar as células mononucleares
entre si, o que impede a definição exata do número de
CPHs viáveis. Em contrapartida, a avaliação da via-
bilidade celular por citometria de fluxo, oferece a pos-
sibilidade de quantificá-la especificamente na célula
de interesse. As desvantagens do emprego deste mé-
todo são decorrentes de seus custos mais elevados e
da necessidade de dispor de pessoal intensivamente
treinado.
45
De Santis GC, Prata KL. Criopreservação de Medicina (Ribeirão Preto) 2009; 42 (1): 36-47
células-progenitoras hematopoéticas http://www.fmrp.usp.br/revista

ABSTRACT
Autologous transplantation of hematopoietic progenitor cells requires most of the times the cryopreser-
vation of the hematopoietic progenitor cells (HPC) to maintain their viability until the infusion, which can
occur months to years after their collection. Adequate cryopreservation of HPC is realized by submitting
the cells to slow freezing velocity (1-3°C/minute) and by employing cryoprotectant agents like the dimeth-
ylsulphoxide (Me2SO4), the most used, a colligative agent that reduces the free water content into the
cellules and in the extracellular medium. As a consequence, this compound reduces the size and number
of ice. The thawing of HPC is done rapidly. The cell suspension can then be infused unmanipulated or
washed to remove Me2SO4, cellular debris and free hemoglobin, potentially toxic both to patients and to
cells.

keywords: Progenitor Cells, Hematopoietic. Cryopreservation. Transplantation. Dimethyl Sulfoxide.

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47
 ARTIGO ORIGINAL

Car acterização da estea

Caracterização tose
esteatose
hepática não alcoólica induzida
por dieta hipopr otéica em rra
hipoprotéica atos
Characterization of nonalcoholic fatty liver disease
in rats for low protein diet induced

Gabriela S. F. Castro, Mirele S. Mialich, Eloisa M. Anjos, Lillian P. Almeida , Paula F. Arroyo ,
Guilherme V. Portari , Alceu A. Jordao Jr

RESUMO
Modelo de estudo: Estudo experimental. Objetivos: este estudo teve como objetivo avaliar e caracterizar
a dieta hipoprotéica como um modelo experimental para estudo de EHNA. Métodos: foram utilizados
ratos da linhagem Wistar divididos em dois grupos com dietas isocalóricas: controle (GC) no qual a
dieta utilizada seguiu o preconizado pela AIN-93 e hipoprotéico (GH) com quantidade de proteína redu-
zida de 20% para 10%. As dietas e água foram ofertadas ad libitum por quatro semanas. Após esse
período, os animais foram sacrificados e analisados: glicemia; nitrogênio urinário; proteína sérica;
gordura hepática; colesterol; variação de peso e quantidade de ração consumida. Resultados: glicemia
e nitrogênio urinário não apresentaram diferenças significativas entre GC e GH (p>0,05), a variação de
peso no último dia do experimento foi significativa (p<0,02). A porcentagem de gordura hepática foi
estatisticamente maior no GH, quando comparado ao GC (p<0,04). Foram menores o nível de colesterol
(p<0,01) e proteína sérica (p<0,005) no GH. A quantidade de dieta consumida não foi diferente entre os
grupos, considerando-se as médias de ingestão semanal. Conclusões: neste trabalho a dieta
hipoprotéica constitui um modelo de indução de EHNA que pode ser caracterizada pela diminuição da
proteína sérica e do colesterol plasmático e aumento da gordura hepática, entretanto não ocorreram
alterações na glicemia sugerindo que não existiu mudança na sensibilidade à insulina, constituindo
assim um modelo falho para estudar um dos principais fatores de risco para o estabelecimento da
EHNA, a resistência à insulina.

Palavras-chave: Esteatose Hepática. Dieta com Restrição de Proteínas. Ratos.

Introdução tes e crianças. Quando esta ocorre na infância pode

haver comprometimento da taxa de crescimento e
A subnutrição protéica é reconhecidamente um gerar alterações comportamentais e de aprendizado1.
problema mundial que afeta, principalmente, gestan- Filiputti et al. (2008)2 demonstraram que ratos alimen-

Curso de Nutrição e Metabolismo, Departamento de Clínica Médi- Correspondência:

ca da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto da USP. Prof. Dr. Alceu Afonso Jordão Jr.
Curso de Nutrição e Metabolismo.
Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto da USP.
Av. Bandeirantes, 3900,
14049-900, Ribeirão Preto/SP.

Artigo recebido em 24/03/2008

Aprovado para publicação em 26/01/2009

Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42(1): 48-53

Medicina (Ribeirão Preto) 2009; 42 (1): 48-53.
http://www.fmrp.usp.br/revista
tados com baixa quantidade protéica (6%) apresenta-
ram baixo peso, baixa quantidade de albumina e insu-
lina plasmática, alta gordura e glicogênio hepáticos.
Um efeito da dieta hipoprotéica já estabelecido
é o aumento da gordura corporal. Ratos em cresci-
mento tendem a aumentar o seu consumo para ade-
quar a sua ingestão ao seu requerimento protéico, exi-
gido para a formação de tecidos magros3.
Na ausência de doença ou trauma, a deficiên-
cia protéica aumenta os níveis de glicocorticóides por
ativar o eixo hipotálamo-hipófise-adrenal, as altera-
ções hormonais levam a uma diminuição do apetite 4.
Também a menor ingestão protéica parece cau-
sar o aumento de homocisteína sérica no plasma de
ratos, como demonstrado em um estudo de Okawa et
al. (2006)5, o qual discorda de outros dados reportados
por Stead et al. (2000)6, que verificaram que o aumen-
to de homocisteína está ligado a uma maior ingestão
protéica, já Smolin et al. (1984)7 reportaram que a con-
centração de homocisteína não apresentou diferenças
entre animais alimentados com 10% ou 60% de caseína.
A suplementação de creatina isoladamente demons-
trou ser outro fator que pode elevar a homocisteína
sérica 8. Estes dados conflitantes evidenciam que ain-
da não há na literatura concordância sobre a influên-
cia protéica nos níveis de homocisteína, um reconhe-
cido fator de risco para doenças cardiovasculares.
A deficiência protéica pode constituir um mo-
delo indutor de esteatose hepática não alcoólica
(EHNA) por meio de dieta, que atualmente apresenta
diversas outras formas de indução em modelos expe-
rimentais, tais como a deficiência de colina e metioni-
na9, dieta rica em gordura10, 11 e rica em carboidratos
simples, dentre outros. Sabe-se que a deficiência pro-
téica é um causador de esteatose hepática 12. A EHNA
apresenta relevância em saúde pública devido a sua
alta prevalência 13.
A EHNA caracteriza-se por um acúmulo de
lipídios no fígado, primeiramente na forma de triacil-
gliceróis, sem a ingestão de quantidades significativas
de álcool e com a exclusão de outras causas conheci-
das de esteatose, como algumas drogas e toxinas 12.
Pode ser definida como um excesso de gordura hepá-
tica, na qual o fígado possui ao menos 5% dos hepató-
citos com gotas lipídicas que excedem de 5 a 10% o
peso do órgão em pacientes que não consomem quan-
tidades significantes de álcool 14.
Sua patogênese está fortemente associada à
resistência a insulina, tanto hepática quanto de adipó-
citos. A alta insulinemia é um denominador comum
Castro GSF et al. Esteatose hepática
induzida por dieta hipoprotéica em ratos
para os componentes da Síndrome Metabólica e a
EHNA pode ser uma manifestação hepática dessa
síndrome que é definida com a presença de 3 ou mais
das seguintes manifestações: hipertrigliceridemia, hi-
pertensão, alta glicemia de jejum, baixos níveis de li-
poproteínas de alta densidade (HDL) e aumento da
circunferência da cintura.15
Este trabalho tem como objetivo principal pro-
vocar a desnutrição protéica em ratos e caracterizar
algumas de suas consequências ao metabolismo, prin-
cipalmente hepático, descrevendo assim um modelo
de estudo para esteatose hepática.
Métodos
Foram utilizados ratos da linhagem Wistar, re-
cém-desmamados, com peso médio de 58 gramas e
provenientes do Biotério Central da Faculdade de
Medicina de Ribeirão Preto – Universidade de São
Paulo (FMRP-USP). Os animais foram transferidos
ao Biotério do Departamento de Clínica Médica da
FMRP, onde permaneceram durante todo o estudo.
Os grupo experimentais foram divididos em:
• Grupo Controle (n=6): ratos que receberam água
ad libitum e dieta padrão segundo AIN-93
(American Institute of Nutrition, 1993) 16.
• Grupo hipoprotéico (n=7): ratos que receberam água
ad libitum e dieta baseada na AIN-93 e com restri-
ção protéica.
As dietas foram ofertadas durante quatro se-
manas e após esse período os animais foram sacrifi-
cados. A dieta do grupo controle seguiu a recomenda-
ção da AIN-93 com caseína 20% e carboidrato 63.5%,
já a dieta pobre em proteína continha caseína 10% e
carboidrato 73,5%. As quantidades dos componentes
das dietas estão especificadas na Tabela 1. Os ratos
foram acomodados em gaiolas individuais com ciclo
claro-escuro de 12 horas, com iluminação artificial, e
temperatura média de 25o C.
A ingestão foi controlada por meio de pesagem
regular de comedouros a cada dois dias e o mesmo
realizado com os animais. Ao final de 28 dias os ani-
mais foram sacrificados por decapitação após je-
jum de 12 horas. Em seguida, foi coletada uma
amostra de sangue, que foi submetida à centrifugação
(3500 rpm por 10 min) para separação do soro que foi
congelado. Foram retirados também os fígados que,
após pesagem, foram congelados em nitrogênio líqui-
do (-196o C).
49
Castro GSF et al. Esteatose hepática Medicina (Ribeirão Preto) 2009; 42 (1): 48-53.
induzida por dieta hipoprotéica em ratos http://www.fmrp.usp.br/revista

Tabela 1 significativamente menor que a do grupo controle (Ta-

Composição das dietas por kg bela 2), enquanto o consumo de dieta mostrou dife-
Ingredientes Controle Hipoprotéico rença estatisticamente significante na última semana
do experimento com o grupo hipoprotéico consumin-
Caseína (g) 200,00 100,00
do menor quantidade (Figura 1).
Amido (g) 530,50 630,50
Sacarose (g) 100,00 100,00
Óleo de Soja (g) 70,00 70,00
Tabela 2
Fibra (g) 50,00 50,00 Médias de pesos inicial e final dos grupos em gramas
Minerais (g) 35,00 35,00 do primeiro e último dia de experimento
Vitaminas (g) 10,00 10,00 Grupos
L-cistina (g) 3,00 3,00 Controle Hipoprotéico
Colina (g) 2,50 2,50
Peso inicial(g) 57,50 + 3,08 59,00 + 3,32
Butil hidróxitolueno (g) 0,02 0,02
Energia (kcal) 3952 3952 Peso Final(g) 146,33 + 13,32* 97,43 + 18,17*

* significa p < 0,02 entre os grupos Controle e Hipoprotéico

quanto ao peso final.
Este estudo teve como finalidade a
dosagem de parâmetros bioquímicos em
ratos alimentados com dietas hipoprotéicas Grupo Controle Grupo Hipoprotéico
para verificar suas consequências meta-
Consumo semanal de dieta (g)

bólicas e causadoras de esteatose hepáti-

ca. Para tanto, ele foi delineado através da
comparação entre um grupo de ratos com
dieta controle e um grupo com carência de
50% do recomendado de proteína.
Dosagens bioquímicas
As dosagens de proteína, glicemia e
colesterol séricos foram realizadas por meio
de kits comerciais (Labtest Diagnóstica
S.A., Brazil). O nitrogênio urinário foi do- Semanas de experimento
sado através do método micro-Kjeldahl, e
Figura 1: Média de consumo semanal de dieta.
a gordura hepática foi determinada por ex- * significa p<0,05 entre os grupos na 4ª semana.
tração contínua em aparelho Soxhlet, am-
bos segundo AOAC (Association of
Analytical Communities).17
As variáveis são apresentadas como média O conteúdo lipídico hepático, expresso em mg
mais ou menos o desvio padrão. As comparações en- de lipídios/100 mg de fígado, está representado na Fi-
tre os grupos foram feitas com base nas análises es- gura 2. Observa-se que no grupo hipoprotéico foi mais
tatísticas obtidas pelo teste T não pareado com corre- elevado quando comparado com o grupo controle
ção de Welch e foram consideradas as diferenças com (41,08 + 11,54 mg/100 mg e 28,92 + 11,21 mg/100 mg,
p < 0,05. respectivamente).
A Tabela 3 traz os valores das variáveis bioquí-
Resultados micas. Em relação a concentração do colesterol sérico,
nota-se que as concentrações são menores nos ani-
Quanto à evolução ponderal dos animais, a mais que receberam dieta hipoprotéica quando com-
média de peso ao final do período experimental de paradas à do grupo controle (91,29 + 12,18 mg/dL e
28 dias do grupo que recebeu dieta hipoprotéica foi 116,12 + 19,96 mg/dL, respectivamente).

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Medicina (Ribeirão Preto) 2009; 42 (1): 48-53. Castro GSF et al. Esteatose hepática
http://www.fmrp.usp.br/revista induzida por dieta hipoprotéica em ratos

essencial para a formação dos tecidos e

manutenção das funções normais. Em um
clássico estudo publicado em 1977, Heard
et al. (1977)18 avaliaram em ratos jovens
os efeitos de dieta pobre em proteínas. O
trabalho encontrou baixa concentração de
hemoglobina e proteínas séricas, acúmulo
de gordura no fígado, além de valores di-
minuídos de glicose-6-fosfatase e alanina
aminotransferase no músculo e fígado; a
quantidade de insulina plasmática estava
Figura 2: Porcentagem de gordura hepática. diminuída nesses animais, entretanto não
* significa p<0,05. houve alteração da glicemia. No presente
estudo, a glicemia também não foi diferen-
te entre os grupos.
Tabela 3 A gordura hepática foi significativamente mai-
Variáveis bioquímicas avaliadas or no grupo que recebeu dieta hipoprotéica. Esse acú-
Grupos mulo de gordura pode ser explicado pela lipólise pre-
Controle Hipoprotéico judicada e produção reduzida de lipoproteína
carreadora. Em um estudo com dieta hipoprotéica
Colesterol sérico comparada a dietas suplementadas em metionina e
(mg/dL) 116,10 ± 20,00* 91,30 ± 12,20 *
cisteína o acúmulo de gordura hepática não demons-
Glicemia (mg/dL) 95,50 ± 20,00 84,60 ± 31,20 trou estar ligado a esses aminoácidos e sim a um con-
Proteína sérica trole endócrino, gerando maior produção hepática de
(g/dL) 4,97 ± 0,38 * 4,27 ± 0,04 * gorduras e menor utilização destas com consequente
acúmulo hepático15.
Nitrogênio urinário
(mg/dL) 889,40 ±489,90 548,70 ±345,40
A dosagem de proteína sérica (PS) esteve
diminuida no grupo hipoprotéico. Ferreira et al. (2007)19
*p< 0,05 encontraram menores quantidades de albumina e pro-
teínas totais no plasma de ratos com dieta hipoprotéica.
A menor concentração de PS reflete a adaptação or-
Em relação à proteína sérica (Tabela 3) o gru- gânica dos animais a restrição dietética.
po controle obteve valor significativamente maior A dieta hipoprotéica administrada apresentou
(p<0.0064) do que os ratos do grupo hipoprotéico como resultados diferenças na porcentagem de gor-
(4,97+0,38 g/dL e 4,27+0,04 g/dL, respectivamente). dura hepática, proteínas séricas e colesterol quando
Não houve diferença significativa entre o gru- comparadas com o grupo controle.
po controle e o grupo hipoprotéico quanto aos valores Isso ocorre, pois as proteínas constituem lipo-
de glicemia (95,47 + 20,03 mg/dl e 84,63 + 31,17 mg/ proteínas, responsáveis pelo transporte de ácidos
dl, respectivamente) e nitrogênio urinário (889,35 + graxos no sangue e a retirada destes do fígado. Dessa
489,89 mg/dl e 548,86 + 345,43 mg/dl, respectivamen- forma, o principal indício causador de EHNA nos ani-
te), como pode ser visualizado na Tabela 3. mais estudados foi à diminuição de proteínas carrea-
doras e consequente acúmulo de triglicérides e coles-
Discussão terol em hepatócitos.
As proteínas séricas podem refletir o nível de
Todos os animais encontravam-se em fase de adequação de ingestão protéica. Assim, a baixa con-
crescimento, dessa forma era esperado um ganho de centração dessas proteínas no grupo experimental
peso o qual ficou evidenciado neste estudo. No entan- confirma os resultados já esperados.
to, os animais do grupo que recebeu dieta hipoprotéica A diminuição da ingestão protéica foi acompa-
tiveram um ganho de peso menor do que os que rece- nhada por uma menor excreção de nitrogênio uriná-
beram dieta controle, devido ao baixo aporte protéico rio, mas sem diferenças estatísticas entre os grupos.

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Castro GSF et al. Esteatose hepática Medicina (Ribeirão Preto) 2009; 42 (1): 48-53.
induzida por dieta hipoprotéica em ratos http://www.fmrp.usp.br/revista

Em seu estudo com dietas baixas em proteína e suple-
mentação de ácidos graxos poliinsaturados, Andreoli
et al. (2007)1 verificaram que o nitrogênio urinário não
se modificou. Os animais apresentaram mudanças
adaptativas gerando um aumento na proporção do
aproveitamento de nitrogênio para ressíntese de pro-
teínas e também diminuição do catabolismo de amino-
ácidos, diminuindo assim a excreção urinária de nitro-
gênio.
Conclusão
Este trabalho caracterizou um modelo experi-
mental de esteatose hepática utilizado em diversos
estudos. As diferenças na PS, colesterol e gordura
hepática permitiram constatar a presença de EHNA.
Contudo, a indução de esteatose hepática não
alcoólica por dieta deficiente em proteína acarreta com-
plicações indesejadas como menor consumo de dieta,
menor crescimento dos animais e diminuição das pro-
teínas séricas, fatores não concordantes com os mo-
delos clássicos para o estudo dessa doença. Também
outro fator limitante é a não alteração da glicemia e
aparente manutenção da sensibilidade a insulina, im-
possibilitando o estudo de um dos maiores fatores de
risco para o desenvolvimento da EHNA, que é a ele-
vada insulinemia.
A dieta hipoprotéica constitui um modelo clássi-
co de desnutrição e a indução de EHNA através dela
não deve ser comparada a outros modelos que apresen-
tam quantidades excessivas de macronutrientes, como
as hiperlipídicas e ricas em carboidratos simples.

ABSTRACT
Model of study: Experimental study. Objectives: this study had as objective evaluate and characterize a
low protein diet as an experimental model for nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD). Methods: male
Wistar rats were divided in two groups with isocaloric diets: control (GC) in which the used diet followed
praised for the AIN-93 and the low protein (GH), with reduced amount of protein of 20% for 10%. The diets
and water had been offered ad libitum over four weeks. After this period the animals were sacrificed and
analyzed: glycemia; urinary nitrogen; serum protein; liver total lipids; cholesterol; weight variation and
food consumed. Results: the glycemia and the urinary nitrogen had not presented significant differences
between GC and GH (p>0,05), The change of weight in the last day of the experiment was significant
(p<0,02). The percentage of total liver lipids was higher in the GH, when compared with the GC (p<0,04).
There was lower levels of cholesterol (p<0,01) and serum protein (0,005) in GH. The food consumed
was not different between the groups. Conclusions: in this paper the low protein diet constitutes a model
of NAFLD induction that can be characterized for serum protein and plasmatic cholesterol and increased
fat in the liver, however not alterations in the glycemia suggest no changes in insulin sensitivity, thus
constituting a defective model to study one of the main factors of risk for the establishment of the NAFLD,
the resistance to insulin.

Keywords: Fatty Liver, Disease. Diet, Protein-Restricted. Rats.

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53
 ARTIGO ORIGINAL

Atividades físicas e de lazer e

seu impacto sobr
sobree a co gnição
cognição
no en
envvelhecimento
Physical and leisure activities and it’s impact on cognition in aging

Patricia L. dos Santos¹, Priscila M. Foroni², Maria Cláudia F. Chaves³

RESUMO
Modelo do estudo: estudo de prevalência. Objetivos do estudo: Este estudo teve como objetivo investi-
gar a prevalência de atividades físicas e de lazer entre um grupo de idosos com idade entre 70 e 75
anos. Além disso, foi investigado se a inserção nessas atividades pode exercer influência sobre a
cognição. Metodologia: Participaram do estudo 45 idosos de ambos os sexos, com idade entre 70 e 75
anos, cadastrados em um Núcleo de Saúde da Família (NSF) na cidade de Ribeirão Preto (SP), sem
doenças neurológicas (previamente diagnosticadas), não acamados e não asilados. Foram utilizados
um questionário para levantamento de dados sociodemográficos e de saúde, hábitos de vida e rotina
do idoso, formulado com questões de caracterização dos sujeitos, incluindo informações sobre a
realização e características das atividades de lazer e físicas, e o Mini-Exame do Estado Mental – MEEM.
Resultados: No grupo estudado, 52,3% referiram praticar atividade física, principalmente caminhada,
sendo maior a participação entre os homens (69,2%) do que entre as mulheres (43,7%). Quanto às
atividades de lazer, 80% relatou participar de alguma atividade (81,2% das mulheres e 76,9% dos
homens), sendo que a maioria (66,6%) apontou como lazer o hábito de freqüentar igreja. Os idosos que
praticavam atividades de lazer obtiveram escores no MEEM significativamente superiores àqueles que
não praticavam, verificado pelo teste t (p<0,05). Não houve diferença significativa (p>0,05) de desempe-
nho no MEEM quando comparados os indivíduos que praticavam atividade física e aqueles que não
praticavam. Conclusões: O estímulo às atividades de lazer deve também ser considerado quando se
pensam em atividades de promoção à saúde, especialmente no que tange a aumentar as possibilida-
des de um envelhecimento físico e cognitivo saudável.

Palavras-chave: Envelhecimento. Atividades de Lazer. Atividade Física. Cognição.

Introdução dades e restrições desta população tendem a se ca-

O Brasil tem evidenciado, nas últimas décadas,
um aumento significativo no número de pessoas ido-
sas, o que acarreta, no âmbito dos serviços de saúde,
problemas de longa duração, uma vez que as enfermi-
racterizar por condições crônicas e degenerativas,
exigindo tratamento constante, longos períodos de hos-
pitalização e de reabilitação¹.
O envelhecimento biológico tende a diminuir a
resistência orgânica das pessoas, expondo-lhes mais

1. Docente, Departamento de Neurologia, Psiquiatria e Psicologia Correspondência:

Médica. Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto - USP Profa. Dra. Patricia Leila dos Santos
2. Fonoaudióloga, Aluna do Curso de Aperfeiçoamento em Disfa- Rua Tenente Catão Roxo, 2650. Vila Monte Alegre
gia Infantil do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina 14051-140, Ribeirão Preto – SP
de Ribeirão Preto - USP.
3. Aluna de Graduação. Departamento de Biomecânica, Medicina Artigo recebido em 16/08/2008
e Reabilitação do Aparelho Locomotor. Faculdade de Medicina Aprovado para publicação em 28/01/2009
de Ribeirão Preto - USP

Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42(1): 54-60

Medicina (Ribeirão Preto) 2009; 42 (1): 54-60
http://www.fmrp.usp.br/revista
às doenças, aumenta suas limitações físicas e restrin-
ge sua capacidade motora, podendo contribuir para
um declínio da capacidade funcional2,3.
Além do declínio físico, o processo de envelhe-
cimento pode ser acompanhado pelo declínio das ca-
pacidades cognitivas dos idosos, dependendo de seus
hábitos de vida4,5,6,7.
O envelhecimento mental não parece ligado
apenas à idade, mas antes a uma redução da percep-
ção de si. Ao avançar dos anos, o indivíduo pode man-
ter a saúde mental, se conservar a auto-estima8.
O ser humano adota comportamentos que lhe
permitem manter-se como membro ativo na socie-
dade. No caso dos idosos, o isolamento, a miséria, a
inatividade e a desvalorização podem ser fatores de
estresse importantes que comprometem o equilíbrio
físico e psíquico, por vezes frágil, destes indivíduos. O
envelhecimento não é conseqüência apenas da de-
generescência biológica, mas resulta, em parte, de
condições políticas, econômicas, históricas e cultu-
rais da sociedade. E as pessoas idosas bem integra-
das são capazes de adotar uma atitude psicossocial
positiva8.
A fase tardia da vida adulta constitui um perío-
do em que desaparecem muitos papéis grandes ou pe-
quenos. Os que permanecem possuem menos con-
teúdo e deveres. Alguns estudiosos encaram tal perda
como um risco de isolamento ou alienação, outros acre-
ditam que isso pode proporcionar maior licença para a
individualidade e a escolha9. Assim, observa-se que
está sendo abandonada a conotação negativa do con-
ceito de velhice e passa-se a conceber essa fase da
vida como possibilidade de realização pessoal, maturi-
dade e sabedoria10.
Na terceira idade o indivíduo, na maioria das
vezes, deixa seu trabalho remunerado, mas não deixa
de “fazer”. Essa necessidade continua, pois é cons-
tante, dinâmica e evolutiva. Para alguns, o envelheci-
mento pode ser um período vazio, sem valor, inútil; já
para outros, pode ser um tempo de liberdade, de des-
ligamento de compromissos profissionais, de fazer
aquilo que não se teve tempo de fazer, de aproveitar a
vida11. A aposentadoria está deixando de ser um mo-
mento de descanso e recolhimento para tornar-se um
período de realização de atividades de lazer. Neste
contexto, o lazer aparece como possibilidade de evitar
o envelhecimento e manter uma vida ativa12.
O lazer e o envelhecimento são assuntos de in-
teresse, que vem ganhando espaço no campo da in-
vestigação científica. Mas há a necessidade de mais
Santos PL, Foroni PM, Chaves MCF. Atividades físicas e
de lazer e seu impacto sobre a cognição no envelhecimento
estudos que abordem a relação entre estas duas áre-
as, uma vez que a produção científica a respeito do
assunto ainda é escassa12.
É importante destacar que incentivar e propor-
cionar atividades de recreação e lazer constitui-se em
estratégia efetiva para a redução do isolamento, da
melhoria da inserção do idoso no meio social e do de-
senvolvimento de novas habilidades, o que pode refle-
tir diretamente na melhoria da auto-estima e da condi-
ção de saúde7.
Os exercícios físicos de moderada intensidade
trazem benefícios, tais como, redução da morbidade e
mortalidade por doença coronariana, controle da pres-
são arterial, da glicemia e do colesterol e melhora do
peso. A ausência de atividades físicas está também
associada com diversos problemas músculo-esquelé-
ticos, que podem afetar negativamente as atividades
funcionais do idoso6.
O exercício físico também pode auxiliar na
manutenção de níveis mais elevados de desempe-
nho cognitivo entre os idosos. Aqueles que possuem
incapacitações que os impossibilitam ao exercício re-
gular, apresentam maior propensão a evidenciar
declínio mais precoce ou mais rápido, em várias fun-
ções mentais9.
Para um envelhecimento bem sucedido é fun-
damental ter qualidade de vida e bem-estar. Santos et
al. 13 em um estudo sobre satisfação dos idosos em
relação à sua qualidade de vida, observaram que a
variável socialização (“fazer amigos”) apresentou
maior índice de satisfação. Essa variável refletia as
atividades comunitárias (tarefas sociais e religiosas),
que facilitavam a interação com novos amigos.
De acordo com Jordão Netto2, é fácil constatar
que idosos sociáveis, participantes, ativos ou que não
enfrentam barreiras de preconceitos ou estereótipos,
tendem a ser mais saudáveis que aqueles que, por von-
tade própria ou circunstâncias familiares e/ou cultu-
rais são arredios, solitários, discriminados ou desinte-
ressados.
Estudos também revelam o papel protetor da
participação em atividades de lazer, incluindo o exer-
cício físico, o exercício mental e a manutenção das
relações sociais, sobre as funções cognitivas no enve-
lhecimento5,10,14-20 .
Deve-se considerar que a adequação do apoio
social afeta as funções físicas e cognitivas na velhice,
da mesma forma que o faz em momentos anteriores
do ciclo de vida9.
Apesar dos benefícios das atividades físicas e
55
Santos PL, Foroni PM, Chaves MCF. Atividades físicas e
de lazer e seu impacto sobre a cognição no envelhecimento
de lazer, a inserção dos idosos nessas atividades é re-
duzida. Feliciano, Moraes e Freitas7 encontraram que
somente 17% dos idosos acima de 60 anos, pratica-
vam alguma atividade física. Germano Netto21 evi-
denciou a baixa freqüência de participação em clubes
e entidades de recreação e lazer, tanto entre os ho-
mens como entre as mulheres.
Dentre as barreiras que impossibilitam a con-
cretização do ideal de lazer, pode-se citar: saúde defi-
citária, fator econômico, estereótipos, tempo disponí-
vel, instalações inadequadas e falta de transporte12.
Apesar dos esforços dos estudiosos em demons-
trar as possibilidades de desenvolvimento e as poten-
cialidades das pessoas idosas, alguns estereótipos per-
sistem e outros surgem no cenário contemporâneo.
As condições econômicas constituem outro entrave
para o lazer, devido à queda na renda a partir do mo-
mento em que se aposentam. Alguns idosos também
têm o tempo livre limitado para o lazer, pois se encon-
tram envolvidos com uma série de obrigações familia-
res e com trabalhos informais para complementação
da renda12.
Há a necessidade de uma educação para o lazer
contínua, que vise à participação social, a diminuição
dos obstáculos, a inclusão de todos os grupos de ido-
sos, desenvolvendo um sentido de cidadania na socie-
dade. Assim, o acesso a serviços de apoio ao idoso,
transporte, grupos de convivência e grupos de orien-
tação aos familiares são algumas alternativas para
minimizar as dificuldades10,12.
Tendo em vista a importância do tema, este
estudo teve como objetivo investigar a prevalência de
atividades físicas e de lazer entre um grupo de idosos
com idade entre 70 e 75 anos. Além disso, foi investi-
gado se a inserção nessas atividades pode exercer
influência sobre a cognição.
Metodologia
Participantes
Participaram do estudo 45 idosos de ambos os
sexos, com idades entre 70 e 75 anos, cadastrados
em um Núcleo de Saúde da Família (NSF) na cidade
de Ribeirão Preto (SP), sem doenças neurológicas
(previamente diagnosticadas), não acamados e não asi-
lados.
A amostra representa 37,8% dos usuários
cadastrados da faixa etária estudada, e ficou com-
posta por idosos com idade média de 72,2 anos
56
Medicina (Ribeirão Preto) 2009; 42 (1): 54-60
http://www.fmrp.usp.br/revista
(DP=1,79), sendo 32 (71,2%) do sexo feminino e 13
(28,8%) do sexo masculino.
Instrumentos
Foram utilizados um questionário para levanta-
mento de dados sociodemográficos e de saúde, hábi-
tos de vida e rotina do idoso, formulado com questões
de caracterização dos sujeitos, incluindo informações
sobre a realização e características das atividades de
lazer e físicas, e o Mini-Exame do Estado Mental –
MEEM, versão em português validada para a popula-
ção brasileira22.
Procedimento
O presente estudo foi aprovado pelo Comitê de
Ética em Pesquisa do Centro de Saúde Escola da Fa-
culdade de Medicina de Ribeirão Preto da Universi-
dade de São Paulo. Os participantes consentiram com
a realização da pesquisa e a divulgação dos resulta-
dos, assinando o Termo de Consentimento Livre e
Esclarecido, conforme a Resolução 196/96 do Conse-
lho Nacional de Saúde.
O preenchimento do questionário e a aplicação
do MEEM foram realizados no NSF ou na casa do
idoso, conforme a preferência do mesmo, sendo que o
encontro teve uma duração média de 30 minutos.
Análise dos dados
Os dados coletados foram organizados em
planilhas e submetidos à análise estatística descritiva
e análise de correlação entre variáveis, realizadas a
partir do Excel e do SPSS 10.0.
Resultados
Os idosos participantes eram em sua maioria
(54,5%) idosos viúvos; 82,2% residiam com familia-
res e eram predominantemente católicos (75%). Me-
tade da amostra recebia entre 200 e 600 reais por
mês, sendo que a maioria do grupo de idosos era apo-
sentada (59%).
Quanto à distribuição dos participantes em fun-
ção da escolaridade, a maior parte dos idosos (63,6%)
tinha ensino fundamental incompleto e, nenhum deles
tinha ensino superior.
No que se refere à saúde física, 86,6% dos ido-
sos relataram apresentar alguma dificuldade, sendo
que 88,8% afirmaram fazer uso regular de medica-
ção. Na Tabela 1 pode ser observada a distribuição
dos problemas de saúde apontados.
Medicina (Ribeirão Preto) 2009; 42 (1): 54-60 Santos PL, Foroni PM, Chaves MCF. Atividades físicas e
http://www.fmrp.usp.br/revista de lazer e seu impacto sobre a cognição no envelhecimento

Tabela 1 mais freqüente entre as mulheres (43,7%) do que en-

Distribuição da freqüência e porcentagem de proble- tre os homens (38,4%). As mulheres também relata-
mas de saúde relatados pela amostra (n=45). ram maior participação em grupos (20%), sendo que
nenhum participante do sexo masculino referiu per-
Problemas de saúde n % tencer a grupos. Em contrapartida, a participação em
Hipertensão arterial 28 62,2 jogos (38,4%) e festas (38,4%) foi maior entre os ho-
mens do que entre as mulheres (6,2 % em jogos e
Dificuldade para andar 15 33,3 28,1% em festas).
Doenças osteoarticulares 15 33,3
O hábito de atividades que envolvem leitura e
escrita foi praticamente equivalente entre os sexos,
Problemas genito-urinários* 12 26,6 com discreta predominância entre os homens (38,4%
contra 34,3% entre as mulheres).
Diabetes Mellitus 8 17,7
A participação em atividades de lazer foi mais
Problemas vasculares 7 15,5 elevada entre os viúvos (87,5%) do que entre os ca-
sados (65%). Entretanto, os viúvos foram aqueles
Problemas intestinais 6 13,3
com menor percentual de atividades físicas (41,6%),
Problemas cardíacos 6 13,3 enquanto os casados apresentaram um percentual
de 60%.
Enfisema pulmonar 1 2,2 Foi praticamente equivalente o percentual de
*Incluindo incontinência urinária (8,8%) idosos que relataram presença e ausência de proble-
mas de saúde entre aqueles que participavam de ati-
vidades físicas (51,2% e 50%, respectivamente). En-
Quanto aos hábitos de vida, 64,4% dos idosos tretanto, observou-se que a participação de idosos hi-
nunca fumaram, 26,8% já haviam fumado e não o fa- pertensos em atividades físicas foi maior que de não
ziam mais e, 8,8% ainda fumavam; 51,1% nunca be- hipertensos (53,5% contra 46,5%).
beram, 11,1% beberam no passado e 37,8% ainda be- Observou-se, ainda, menor participação em ati-
biam regularmente. vidades físicas por idosos que moram sozinhos com-
Vale destacar que 31,1% da amostra informou parado àqueles que moram com outras pessoas (37,5%
ter dificuldade para dormir, especialmente as mulhe- contra 54%).
res (a diferença entre homens e mulheres quanto à A referência a problemas com a memória foi
dificuldade de dormir foi significativa, p=0,004). elevada (71,1%), sendo que os percentuais foram mais
No grupo estudado, 52,3% referiram praticar altos entre as mulheres (81,2%) do que entre os ho-
atividade física, principalmente caminhada, sendo mens (53,8%).
maior a participação entre os ho-
mens (69,2%) do que entre as mu- Tabela 2
lheres (43,7%). Importante mencio- Distribuição de freqüência e porcentagem das atividades de lazer rea-
nar que muitos indicaram que a ca- lizadas pela amostra (n=45).
minhada faz parte de sua rotina diá- Atividades de lazer n %
ria.
Quanto às atividades de lazer, Freqüentar a igreja 30 66,6
80% relatou participar de alguma ati- Passear (visitar amigos, familiares) 19 42,2
vidade (81,2% das mulheres e 76,9%
dos homens), sendo que a maioria Realizar trabalhos manuais (costura, tricô, pintura) 18 40,0
(66,6%) apontou como lazer o hábi- Atividades de leitura e escrita (livros, palavras-cruzadas) 16 35,5
to de freqüentar igreja. Pode-se ob-
servar na Tabela 2, a distribuição das Freqüentar festas 14 31,1
atividades de lazer apontadas. Participar de grupos 9 20,0
Verificou-se que o hábito de
passear (como visita a familiares e Participar de jogos (cartas, damas, xadrez) 8 17,7
amigos) apresentou distribuição di- Freqüentar clubes 4 8,8
ferenciada segundo o sexo, sendo

57
Santos PL, Foroni PM, Chaves MCF. Atividades físicas e
de lazer e seu impacto sobre a cognição no envelhecimento
O escore médio obtido pela amostra no MEEM
foi de 24,09 pontos (DP=3,67). Os idosos que pratica-
vam atividades de lazer obtiveram escores no MEEM
significativamente superiores àqueles que não prati-
cavam, verificado pelo teste t (p<0,05). Não houve
diferença significativa (p>0,05) de desempenho no
MEEM quando comparados os indivíduos que prati-
cavam atividade física e aqueles que não praticavam.
Discussão
A prática de atividades físicas consiste em um
hábito de vida saudável em qualquer faixa etária. Na
terceira idade, esse hábito promove a manutenção de
uma boa saúde física e mental. Nesse estudo, mais da
metade dos idosos informaram realizar atividades de
lazer regularmente, em concordância com outros es-
tudos, em que a prevalência de idosos inseridos em
tais atividades ultrapassou os 50%4,10,23,24. Em con-
trapartida, no estudo de Almeida et al.25 apenas 43,3%
dos idosos referiram praticar atividades de lazer. Com-
plementarmente, o estudo de Zaitune et al.26 revelou
uma prevalência de 70% de idosos sedentários.
O envelhecimento, quando vivenciado de for-
ma positiva, envolve a prática de atividades físicas e
de lazer, o que melhora a qualidade de vida. Assim,
sugere-se que a população estudada, de uma forma
geral, pode estar apresentando uma vivência positiva
em relação a sua velhice, com hábitos saudáveis que
colaboram para uma boa saúde.
De acordo com o estudo de Júnior e Guerra27,
a ausência de práticas de atividades físicas de lazer é
um fator determinante para as limitações funcionais
das mulheres idosas de baixa renda. Desta forma, a
prática de atividade física poderia atuar como um im-
portante fator preditor da condição funcional dessas
mulheres.
As caminhadas são as atividades físicas que
melhor se adaptam aos idosos. A preferência pela
prática da caminhada evidenciada nesse estudo, pode
ser explicada por representar uma atividade física
natural e de baixo impacto, sem custo, realizada em
qualquer local e freqüentemente recomendada por
médicos, além de contribuir para aumentar o contato
social25,28,29. Um estudo26 investigando a prática de
atividades de lazer entre um grupo de idosos, revelou
que a prevalência de caminhada foi de 23,5%, segui-
da por ginástica ou musculação (3,8%) e por natação
ou hidroginástica (3,6%).
Outra atividade muito comum entre os idosos
58
Medicina (Ribeirão Preto) 2009; 42 (1): 54-60
http://www.fmrp.usp.br/revista
estudados foi o hábito de freqüentar a igreja, como
também verificado no estudo de Anderson et al.4 e
Germano Netto21. Neste último, destacou-se a parti-
cipação das mulheres idosas mais jovens.
Ainda com relação às reuniões sociais, um bai-
xo número de idosos relatou participar de grupos, clu-
bes e jogos. As atividades sistemáticas que incluem
reuniões de grupos são importantes para os idosos,
por trazer benefícios, como a socialização, o estímulo
à criatividade e a melhora da auto-estima29.
Notou-se uma menor participação do sexo fe-
minino nas atividades físicas, o que de acordo com
Almeida et al.25 pode ser conseqüência de uma cultu-
ra que restringe a liberdade da mulher ao trabalho e ao
lazer e a ausência de políticas sociais direcionadas a
elas, cabendo-lhes, quase sempre, as atividades do-
mésticas. O estudo de Gomes, Siqueira e Sichieri30
revelou que a realização de atividade física regular ou
esporte foi referida por apenas 9,1 % das mulheres,
contra 18,4% dos homens. De acordo com Matsudo,
Matsudo e Neto28, as mulheres reportam mais barrei-
ras para a prática do que os homens, tais como falta
de companhia, falta de interesse, fadiga, problemas de
saúde, artrite e medo de quedas. Desta forma, a pro-
moção da atividade física na terceira idade deve levar
em consideração as principais barreiras citadas, no
momento de estabelecer políticas de saúde pública.
Além da atividade física, os homens também
costumam participar de festas e jogos com maior fre-
qüência, quando comparados às mulheres, enquanto
estas costumam passear (visitar familiares, amigos) e
participar de grupos com maior freqüência. As idosas
ainda, possuem maior interesse por atividades manu-
ais (artesanato, costura, pintura). Esses achados con-
cordam com outros estudos10,21,25.
Quanto à situação conjugal, os casados apre-
sentaram maior acesso as atividades físicas, o que pode
ocorrer devido a uma maior motivação, apoio e segu-
rança de quem tem um companheiro(a), levando o ido-
so a se sentir mais disposto para tais atividades25.
Verificou-se no estudo, a maior participação
dos hipertensos em atividades físicas, do que os ido-
sos não hipertensos. Acredita-se que o conhecimento
da condição de hipertenso possa estar refletindo na
tentativa de melhorar a condição de saúde, através da
adesão a exercícios físicos, bem como ao tratamento
e à dieta31.
Os resultados revelaram que os idosos avalia-
dos apresentaram capacidade cognitiva preservada –
média no MEEM de 24 pontos - , quando comparados
Medicina (Ribeirão Preto) 2009; 42 (1): 54-60 Santos PL, Foroni PM, Chaves MCF. Atividades físicas e
http://www.fmrp.usp.br/revista de lazer e seu impacto sobre a cognição no envelhecimento

com outros estudos que evidenciaram resultados no
MEEM entre 19 e 21 pontos32,33.
Observou-se no estudo, que os idosos que
praticavam atividades de lazer apresentaram escores
superiores àqueles que não praticavam, o que corro-
bora achados da literatura. O estudo de Argimon e
Stein10, com idosos entre 80 e 95 anos, mostrou uma
correlação positiva entre o número de atividades de
lazer e o desempenho cognitivo, sugerindo que as di-
ferentes atividades de lazer e as atividades físicas pa-
recem atuar como fatores de proteção ao declínio
cognitivo. Verghese et al.20 apontaram que a partici-
pação em atividade cognitiva é associada a um risco
mais baixo de desenvolver declínio cognitivo leve. Em
direção semelhante, Wang et al.15 verificaram que a
participação diária ou semanal dos idosos em ativida-
des mentais e atividades produtivas esteve associada
a um risco mais baixo de desenvolver demência.
O estudo de Benedetti et al.34 verificou uma
associação estatisticamente significativa e inversa de
demência e depressão com atividade física total e ati-
vidade física no lazer. Os autores reforçam a impor-
tância de estilo de vida ativo para prevenção de pro-
blemas de saúde mental de idosos, inferindo que a ati-
vidade física tem conseguido reduzir e/ou atrasar os
riscos de demência, embora não se possa afirmar que
a atividade física evita a demência.
Percebe-se um desconhecimento por parte
da população idosa sobre a prática de atividades de
lazer e seus benefícios. No estudo de Pacheco e San-
tos29, os idosos pesquisados não consideravam que
assistir à televisão e ouvir música eram atividades de
lazer, de forma que a noção de lazer estava relaciona-
da a atividades que requerem dispêndio de dinheiro
para sua realização e não, em ser uma atividade pra-
zerosa, que não necessariamente exige o gasto finan-
ceiro. Muitas vezes, também interiorizam a concep-
ção de que as atividades socioculturais e físicas não
lhes pertencem, bem como se sentem rejeitados pela
sociedade, que reforça esta situação25.
Doimo, Derntl e Lago35 sugeriram que o fato
do lazer ativo não ocupar maior proporção do tempo
livre dos idosos pode ser atribuído a aspectos indi-
viduais, culturais e falta de oportunidades adequadas
de interação e aprimoramento pessoal oferecidas pela
própria comunidade. Porém, para algumas pessoas,
muitas vezes o que se considera trabalho pode ser
interpretado como lazer ativo, pois estas encontram
em tais atividades um desafio significativo que exige
empenho e habilidade e, portanto, encontram prazer
em executá-las.
Conclusão
Nos dias atuais, muito se tem falado sobre a
importância do incentivo e prática de atividades físi-
cas para a manutenção da saúde, mas nem sempre a
ênfase dada às atividades de lazer é a mesma.
Os resultados deste trabalho sugerem que esta
questão precisa ser revista e que o estímulo às ativi-
dades de lazer deve também ser considerado quando
se pensam em atividades de promoção à saúde, espe-
cialmente no que tange a aumentar as possibilidades
de um envelhecimento físico e cognitivo saudável.

ABSTRACT
Paper design: prevalence study. Objective: The goal of this study was to investigate the prevalence of
physical and leisure activities among a gruop of elderly with age of 70 to 75. Furthermore, it was
investigated if those activities would have an influence in cognition. Methods: Participated in this study 45
elderly of both gender in the age of 70 to 75. They were non bedridden, non living in an asylum, had no
neurolical diseases ( pre diagnosticated) and were cadastrated in a Núcleo de Saúde da Família (NSF)
in the city of Ribeirão Preto, São Paulo, Brazil. Two questionnaire were used: one to gatter data of social
and economic state, health, life habits and the elderly routine, formulated with questions to qualify the
subjects including informations about leisure and physical activities ; and the other one was the Mini
Exame of Mental Health. Results: In this studied group 52,3% reported the habit to praticate physical
activities, especialy walk, and men refered doing it more (69,2%) then women (43,7%). About the leisure
activities 80% reported doing it (81,2% of the women and 76,9% of the men). The most refered tipe was
going to church (66,6%). The elderly who practiced leisure activities had a significative higher score,
verified by the t test, on the Mini Exame then those who didn’t. Conclusions: The incentive to leisure
activities should be considered when one thinks about health promotion, specialy when there is a
possibility to upgrade the chances of a healthy physical and cognition aging.

Keywords: Aging. Leisure Activities. Physical Activity. Cognition.

59
Santos PL, Foroni PM, Chaves MCF. Atividades físicas e
de lazer e seu impacto sobre a cognição no envelhecimento
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 RELATO DE CASO

Acidente botrópico ffa

atal
Death caused by bothrops poisoning

Paula M. Luciano1, Gyl Eanes Barros Silva2, Marisa M. de Azevedo-Marques3

RESUMO
Os acidentes ofídicos causados pelo gênero Bothrops ocasionam manifestações locais secundárias à
ação inflamatória aguda do veneno. A ocorrência de óbito (em torno de 0,6% do total de casos atendidos
anualmente no Brasil) é rara, mas certamente, traumática. O relato deste caso visa chamar a atenção
para possíveis complicações locais e sistêmicas (insuficiência renal e sepsis) neste tipo de envenena-
mento e enfatizar as medidas terapêuticas e de suporte que devem ser realizadas em tempo hábil.

Palavras-Chave: Mordeduras de Cobra. Bothrops. Envenenamento. Síndromes de Compartimento.

Fasciotomia.

Introdução Atividade Inflamatória Aguda

No Brasil, os acidentes ofídicos são causados
por serpentes dos gêneros: Bothrops (jararaca),
Lachesis (surucucu), Crotalus (cascavél) e Micrurus
(coral)1. Há predomínio dos acidentes causados pelo
gênero Bothrops (correspondem a 85% das notifica-
ções encaminhadas ao Ministério da Saúde). Ocor-
rem mais no sexo masculino, em trabalhadores rurais,
na faixa etária de 15 a 49 anos e nos membros infe-
riores 1. Os envenenamentos acontecem periodica-
mente, com picos de incidência no começo e no final
do ano. São notificados em torno de 20.000 acidentes
e mais de 100 mortes por ano em todo país2. A morta-
lidade relaciona-se com o gênero de serpente respon-
sável pelo acidente e ocorre principalmente nos aci-
dentes causados pelo gênero crotalus (60,5%), geral-
mente quando há demora no atendimento inicial (mais
que 6 horas).
O quadro clínico e os dados de exames com-
plementares dos acidentados devem-se às três princi-
pais atividades do veneno botrópico3:
Tem importância fundamental na caracteriza-
ção clínica do acidente, sendo causada por frações
bioquimicamente heterogêneas. Determina atividade
inflamatória aguda e causa alterações no local e nas
proximidades da picada. É importante destacar a dor
e o edema local ou regional e a possível evolução com
a formação de bolhas e necrose de partes moles.
Atividade Coagulante
É a fração do veneno tipo trombina, capaz de
ativar os fatores da coagulação sanguínea. Leva ao
consumo de fibrinogênio e formação de fibrina
intravascular. Além dessa ação, também existem ou-
tras substâncias capazes de ativar a protrombina e o
fator X, atuando também sobre a agregação e
aglutinação plaquetárias. Pode tornar o sangue incoa-
gulável.
Atividade Hemorrágica
Deve-se principalmente às hemorraginas do
veneno. Rompendo a integridade do endotélio vascu-
lar podem levar a sangramentos em diversos locais.

1. Pós-graduanda do Departamento de Clínica Médica. Correspondência:

Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto - USP. Unidade de Emergência - HCRP-USP
2. Pós-graduando do Departamento de Patologia. Faculdade de Rua Bernardino de Campos, 1000.
Medicina de Ribeirão Preto - USP. 14015-030, Ribeirão Preto - São Paulo - Brasil
3. Docente. Divisão de Emergência, Departamento de Clínica
Médica. Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto - USP. Artigo recebido em 22/10/2008
Aprovado para publicação em 06/03/2009

Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42(1): 61-5

Luciano PM, Silva GEB, Azevedo-Marques MM
Acidente botrópico fatal
O quadro clínico varia de acordo com a quanti-
dade de veneno inoculada. Ocorrem desde sangra-
mentos clinicamente evidentes, até alterações na co-
agulação, detectáveis apenas com a realização de
exames complementares. As complicações locais mais
graves e temíveis são necroses extensas, síndrome
de compartimento e gangrena. São raras as compli-
cações sistêmicas como hipotensão arterial e choque
devido à liberação de bradicinina e/ou serotonina pe-
las enzimas do veneno.
A insuficiência renal não é comum nos atendi-
mentos realizados nas primeiras 6 horas. Quando exis-
te, é de origem multifatorial: vômitos frequentes e per-
das para o terceiro espaço podem levar à desidra-
tação e a estado de choque. Há também a possibilida-
de de formação de microtrombos nos capilares renais
e de ação nefrotóxica do veneno3.
Relato do Caso
Paciente do sexo masculino, 59 anos, branco,
lavrador, encaminhado a Unidade de Emergência do
HCFMRP-USP devido a "picada de cobra" na face
anterior da perna direita há 2 horas e meia. Apresen-
tava dor local intensa, náuseas e vômitos. Negava
exteriorização de sangramentos. Negava afecções
prévias e/ou uso de medicamentos.
Ao exame físico, encontrava-se em bom esta-
do geral, eupnêico, corado, hidratado, afebril, anictérico
e acianótico. Apresentava pressão arterial (PA) de
140 x 70mmHg, frequência cardíaca (FC) de 108 ba-
timentos por minuto (bpm), frequência respiratória
(FR) de 28 incursões respiratórias por minuto (irpm) e
temperatura axilar (Tax) de 36º Celsius (C).
Destacavam-se no exame físico, os achados
locais da picada, com a presença de edema, calor e
Quadro 1
Acidentes Botrópicos: classificação quanto à gravidade e soroterapia recomendada4:
Manifestações Leve
Locais
(dor, edema, equimose) Ausentes ou discretas
Sistêmicas
(hemorragia grave, choque e anúria) Ausentes
Tempo de Coagulação (TC) Normal ou alterado
Soroterapia 2a4
(nº de ampolas) (endovenoso)
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Medicina (Ribeirão Preto) 2009; 42 (1): 61-5
http://www.fmrp.usp.br/revista
petéquias no 1/3 inferior da perna direita. A hipótese
diagnóstica de acidente botrópico moderado foi pro-
posta, seguindo a classificação da gravidade dos aci-
dentes botrópicos apresentada no Quadro 1.
O paciente foi previamente medicado por via
endovenosa com ranitidina, maleato de dextroclorfe-
niramina e hidrocortisona com objetivo de diminuir
possíveis reações de hipersensibilidade do tipo imedi-
ato, que podem ser ocasionadas pelos soros heterólo-
gos5. Recebeu 8 ampolas de soro anti-botrópico por
via endovenosa, 30 minutos após. Foi hidratado e uti-
lizados sintomáticos para alívio da dor. Colhidos exa-
mes, cujos resultados foram: hemograma completo,
com hemoglobina (Hb) de 16,4g/dl, hematócrito (Ht)
de 49,0%, contagem de leucócitos de 26.000, com 6%
de bastões, 90% de segmentados e 4% de linfócitos,
plaquetas de 283.000; uréia de 36 mg% e creatinina
de 1,4 mg%; sódio de 142 mmol/l e potássio de 3,39
mmol/l; tempos de protrombina (TP) e de tromboplas-
tina parcial ativada incoaguláveis; urina I com cilin-
dros granulosos, proteína +++, heme pigmento +++ e
80 - 100 hemácias por campo.
Cerca de 2 horas após a admissão hospitalar,
houve progressão rápida do edema em membro infe-
rior direito (MID), com acometimento de toda perna,
até a região da patela, acompanhado de cianose. De-
vido aos achados locais muito evidentes, foram apli-
cadas mais 4 ampolas de soro anti-botrópico e reclas-
sificou-se o acidente como grave. Neste momento foi
solicitada avaliação da clínica ortopédica, que contra-
indicou de imediato, a realização de fasciotomia, ba-
seando-se na aferição das pressões intra-comparti-
mentais do MID, que mostravam uma pressão intra-
compartimental 20 mmHg menor que a pressão arte-
rial média que era de 120 mmHg. Após 8 horas da
admissão, apresentou sinais de comprometimento
Moderada Grave
Evidentes Intensas
Ausentes Presentes
Normal ou alterado Normal ou alterado
4a8 12
(endovenoso) (endovenoso)
Medicina (Ribeirão Preto) 2009; 42 (1): 61-5 Luciano PM, Silva GEB, Azevedo-Marques MM
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sistêmico, evoluindo com febre (Tax de 39,6ºC), ta- Nas hemoculturas (2 amostras) e na secreção
quicardia e piora importante das condições locais. da ferida cirúrgica houve crescimento de Morganella
Aproximadamente 18 horas da chegada ao hos- morganii sensível a aminoglicosídeos, sulfametoxazol-
pital, devido à piora importante do estado geral do pa- trimetropim, imipenem e ciprofloxacina, resistente a
ciente, foi realizada fasciotomia em MID, com a do- penicilinas e cefalosporinas.
cumentação de isquemia e necrose em compartimen- Não foi testado o cloranfenicol.
tos anterior e lateral da perna, com tecido subcutâneo
infiltrado e cianótico em região posterior da perna e Discussão
coxa. Apresentava odor compartimental fétido e no
joelho direito havia derrame de ++/4+. A UE do HCFMRP-USP é o hospital de refe-
Após a cirurgia, o paciente encontrava-se agi- rência ao atendimento das vítimas de acidentes ofídicos
tado, com dor intensa em MID, desidratado, descora- da Divisão Regional de Saúde do Estado de São Paulo
do, com má perfusão periférica e extremidades frias. XIII (DRS-XIII). O Centro de Controle de Intoxicações
A PA era de 100 x 50mmHg e a FC de 107 bpm. O (CCI) deste hospital, informa que, no período de janei-
MID apresentava perfusão lentificada (maior que 3 ro de 1995 a dezembro de 2007 foram hospitalizados
segundos). A diurese de 24 h foi de 1000ml
(0,5 ml/kg/hora), apesar da hidratação vi-
gorosa. Evoluiu com sinais de instabilida-
de hemodinâmica. Com hipótese
diagnóstica de sepsis devido a infecção
secundária no local da picada, foi iniciado
antibioticoterapia com cloranfenicol, após
serem colhidas duas amostras de hemo-
cultura.
Dentro de um período de 28 horas
de atendimento, o paciente foi submetido
a intubação orotraqueal e ventilação me-
cânica. Necessitou de suporte pressórico
com noradrenalina endovenosa contínua.
Devido maior comprometimento clínico, foi
realizada amputação suprapatelar do MID.
Havia extensa necrose muscular da per- Figura 1: Face lateral da perna esquerda amputada com evidência de necrose
na, principalmente no compartimento an- extensa (fasceíte necrotizante).
terior, gangrena na região lateral e medial
da coxa e odor fétido da ferida operatória.
Permaneceu com instabilidade he-
modinâmica no período de pós-operatório
imediato e evoluiu rapidamente para pa-
rada cardiorrespiratória em assistolia. Re-
alizadas manobras de ressuscitação car-
diorrespiratória sem sucesso.
A região amputada do MID foi en-
viada para exame anatomo patológico, que
evidenciou: rabdomionecrose e hemorra-
gia da panturrilha principalmente em sóleo,
necrose epidérmica associada a conges-
tão e edema da derme e subcutâneo e con-
gestão dos vasos proximais. Diagnóstico
de fasceíte necrotizante por acidente Figura 2: Achados microscópicos demonstrando hemorragia em musculatura da
panturrilha, principalmente em sóleo.
botrópico (Figuras 1 e 2).

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Luciano PM, Silva GEB, Azevedo-Marques MM
Acidente botrópico fatal
283 pacientes com idade acima de 18 anos, vítimas de
acidente botrópico, com ocorrência de dois óbitos.
Durante o atendimento emergencial ao pacien-
te foi cumprido o protocolo do CCI. Foi avaliada a
gravidade do acidente ofídico e indicada soroterapia
pertinente. A infusão do soro anti-veneno transcorreu
sem intercorrências. O paciente permaneceu sob ob-
servação clínica com rápida evolução dos achados lo-
cais no MID, devido principalmente à ação inflamató-
ria aguda do veneno. Sabe-se que esta ação depende
da quantidade de veneno inoculado. A eficácia da ação
anti-veneno do soro pode ser parcialmente avaliada
pela normalização dos exames de coagulação dentro
das primeiras 12 a 36 horas de atendimento. Como
houve piora importante dos achados locais foram fei-
tas mais 4 ampolas do soro anti-veneno. No entanto,
quanto mais graves forem as lesões locais causadas
pelo veneno, maior será a dificuldade para atuação do
soro nessas áreas e a permanência do sangue incoa-
gulável é que deve determinar a soroterapia adicional.
A síndrome compartimental é uma complica-
ção local temível nos acidentes botrópicos podendo
levar a sofrimento tecidual importante e repercussões
sistêmicas catastróficas. Deve-se à compressão de
feixe vásculo-nervoso consequente ao grande edema
no membro acometido pela picada6. Quando presen-
te, deve ser abordada precocemente levando-se em
consideração principalmente os achados clínicos de
déficit perfusional, como: dor intensa, parestesia, di-
minuição da temperatura do segmento distal, cianose
e déficit motor. A aferição das pressões intra-com-
partimentais têm como regra geral o valor acima de
30 mmHg da pressão diastólica como indicativo do
procedimento de fasciotomia. No entanto, essa aferi-
ção não é rotineira e nem totalmente aceita, por isso,
a indicação do procedimento cirúrgico deve basear-
se principalmente no julgamento clínico7;8. O maior
acometimento da vasculatura ocorre sobre as peque-
nas arteríolas que fornecem fluxo sanguíneo para os
leitos capilares, e, os grandes vasos principais podem
permanecer íntegros até uma fase mais avançada do
processo. Assim, a conservação dos pulsos periféri-
cos não reflete verdadeiramente a necrose isquêmica
em prosseguimento. A dor à distensão é muito carac-
terística e consiste na incapacidade de realizar qual-
quer movimento do pé que distenda o músculo afeta-
do sem provocar dor acentuada. A insuficiência renal
aguda e a infecção secundária causada por bactérias
gram negativas e anaeróbias são previstas. Como
medida preventiva efetiva deve ser realizada fascio-
64
Medicina (Ribeirão Preto) 2009; 42 (1): 61-5
http://www.fmrp.usp.br/revista
tomia precoce, acompanhada de cuidados locais, des-
de que o estado da hemostasia do paciente permita.
Também deve ser realizada hidratação vigorosa e ini-
ciar antibiótico visando atuar sobre germes mais co-
mumente encontrados em abscessos formados após
picadas por cobras do gênero bothrops. Os germes
mais encontrados são: morganella morganii,
escherichia coli, providencia sp, streptococos do
grupo D, enterobacter e bacteróides9.
O paciente evoluiu com quadro de sepsis gra-
ve, choque séptico refratário e óbito.
Os óbitos nos acidentes ofídicos podem estar
relacionados a diversos fatores como: tamanho da
serpente, quantidade de veneno inoculado, qualidade
do atendimento prestado e a fatores desconhecidos
próprios de cada vítima. A gravidade do acidente está
relacionada com maior chance de óbito. Com o intuito
de melhor avaliar a gravidade dos acidentes botrópicos
foi realizado trabalho no Hospital Vital Brazil do Insti-
tuto Butatan - SP10, buscando sua associação com o
grau de venenemia. Neste trabalho, foram estudados
137 pacientes (picados por serpentes do gênero
Bothrops), atendidos com menos de 48 horas da pica-
da, em um período de 2 anos. Foi constatada associa-
ção entre a gravidade, a venenemia pré-soroterapia e
os níveis séricos de fibrinogênio. Através desse traba-
lho pode-se concluir que a determinação da venenemia
no período pré-soroterapia contribui para o aprimora-
mento da avaliação inicial dos pacientes picados por
serpentes do gênero Bothrops, podendo ser um
preditor de gravidade10. No entanto, não é um proce-
dimento realizado de rotina, devido em parte a relação
custo x benefício não vantajosa.
Conclusões
A vítima de acidente botrópico deve receber
tratamento em centro especializado que disponha de
recursos para prover suporte adequado. Existem
complicações previsíveis e possivelmente evitáveis
desde que o tratamento correto seja realizado em tem-
po hábil.
Toda vez que houver indicação para realização
de fasciotomias e amputações, estas não devem ser
adiadas, sendo o julgamento clínico de suma impor-
tância nessa indicação.
O choque séptico pode determinar óbito em
curtos intervalos de tempo se a causa-base, com pos-
sibilidade de tratamento cirúrgico, não for abordada
precocemente.
Medicina (Ribeirão Preto) 2009; 42 (1): 61-5 Luciano PM, Silva GEB, Azevedo-Marques MM
http://www.fmrp.usp.br/revista Acidente botrópico fatal

ABSTRACT
The Snakebite caused by Bothrops gender cause local events secondary to acute inflammatory action of
the poison. The occurrence of death (about 0.6% of all cases occurred each year in Brazil) is rare, but
certainly traumatic. The report of this case aims to draw attention to possible local and systemic compli-
cations (sepsis and renal failure) in this type of poisoning and emphasize the therapeutic and supportive
measures that should be carried out in a timely fashion.

keywords: Snake Bites. Bothrops. Poisoning.Compartment Syndromes. Fasciotomy.

Referências Bibliográficas
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acidentes botrópicos, no momento da admissão no Hospital
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65
Medicina (Ribeirão Preto)
2009; 42 (1): 66-123
RESUMOS DE DISSERTAÇÕES DE MESTRADO E TESES DE DOUTORADO
APRESENTADAS NA FACULDADE DE MEDICINA DE RIBEIRÃO PRETO - USP
DE OUTUBRO A DEZEMBRO DE 2008
BIOLOGIA CELULAR E MOLECULAR
IDENTIFICAÇÃO E ANÁLISE DA EXPRESSÃO DE GENES CODIFICANDO MEMBROS DA FAMÍLIA
NEPH-RST EM GALLUS GALLUS
José Eduardo Baroneza
Orientador: Prof. Dr. Ricardo Guelerman Pinheiro Ramos
Dissertação de Mestrado apresentada em 13/10/2008
Proteínas da família das imunoglobulinas têm sido
relatadas como fundamentais na regulação de eventos rela-
cionados com a formação de órgãos tanto em invertebrados
como em vertebrados. Em Drosophila melanogaster, por
exemplo, um subgrupo desta família, que inclui as proteínas
Roughest (Rst), Kin-of-lrre (Kirre), Sticks-and-stones (Sns)
e Hibris (Hbs), é necessário à formação de olho, cérebro,
túbulo de malpighi e tecido muscular. Proteínas homologas
em vertebrados, Neph1, Neph2, Neph3 e Nefrina participam
do processo de filtração da urina nos podócitos e sua falta
acarreta em proteinúria, síndrome nefrótica congênita e morte
perinatal. Este trabalho teve como objetivos identificar, por
meio de análises in silico, possíveis membros da família
Neph em Gallus gallus, isolar os fragmentos genômicos cor-
respondentes e analisar a dinâmica de seu padrão de ex-
pressão, tanto temporal como espacial durante o desenvol-
vimento embrionário e em adultos, contribuindo assim para
as análises comparativas da evolução e diversificação es-
trutural e funcional desta família gênica ao longo da escala
CARACTERIZAÇÃO DO PAPEL DOS GANGLIOSÍDEOS NA ENDOCITOSE DO FCεεRI EM MASTÓ-
CITOS DEFICIENTES NA EXPRESSÃO DOS GANGLIOSÍDEOS DERIVADOS DO GD1B
Vivian Marino Mazucato
Orientadora: Profª. Drª.Constance Oliver
Dissertação de Mestrado apresentada em 17/10/2008
Lipid rafts são microdomínios especializados da
membrana plasmática. Quando os mastócitos são ativados
via FcεRI, estes receptores se agregam e se deslocam para
dentro dos Lipid rafts onde se associam com outros com-
ponentes dos rafts, tais como: a LAT e os gangliosídeos
derivados do GD1b específicos de mastócitos. Em células
RBL-2H3, após a estimulação, estes gangliosídeos especí-
ficos de mastócitos são internalizados juntamente com
FcεRI, em uma vesícula coberta por clatrina. No presente
NOTAS E INFORMAÇÕES
filogenética. Nossos resultados levaram a concluir a exis-
tência em galinha de apenas dois genes inequivocamente
pertencentes a família Neph que denominamos chkNeph1 e
chkNeph. Ambos são funcionais e transcrevem rnRNAs de
aproximadamente 2 kb Primeiramente observados nos está-
gios HH-22 e HH-24 do desenvolvimento de G.ga//us. Em
adultos, podem ser encontrados transcritos de ambos os
genes em coração, fígado, rim, testículo e retina, com dife-
renças quanto ao perfil de expressão em ovário, pâncreas e
pulmão onde apenas foi observado o mRNA de chkNeph1 e
córtex parietal cerebral onde observamos somente a expres-
são de chkNeph2. A comparação de sequências de proteí-
nas da família Neph de Gallus e de outros vertebrados com
seus homólogos em Drosophila suporta a hipótese de que
os genes Neph são e resultado de divergência evolutiva do
grupo formado por Roughest e Kirre, enquanto as Nefrinas
seriam oriundas do grupo formado por Hibris e Sns. Além
disso, propomos que Neph3, ausente em galinha, seja pro-
vavelmente uma molécula alternativa a Neph2 em pâncreas
de mamíferos. Consideramos que os resultados obtidos até
o momento formam uma base a partir da qual experimentos
específicos visando estabelecer as diferentes funções des-
tes loci em Gallus poderão ser realizados.
trabalho foi investigado o papel dos gangliosídeos especí-
ficos de mastócitos na modulação da via endocítica do
FcεRI em células RBL-2H3 e em duas linhagens celulares
mutantes B6A4A2III-E5 (E5) e B6A4C1III-D1 (D1). As cé-
lulas E5 expressam 35% dos gangliosídeos específicos de
mastócitos encontrados nas células RBL-2H3 e as células
D1 expressam menos de 1%. O mAb BC4 conjugado com
FITC, que se liga na subunidade á do FcεRI, foi conjugado
com FITC e utilizado tanto para ativar as células quanto na
análise da internalização do FcεRI. As células RBL-2H3 e
E5, após incubadas por 30 minutos de incubação com o
mAb BC4-FITC continham vesículas endocíticas dispersas
por todo o citoplasma. Com 1 hora as vesículas endocíticas
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Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
das células RBL-2H3 começaram a se fusionar e formar agre-
gados e, após 3 horas a maioria dos FcεRIs estava presente
em grandes agregados. Nas células E5 a formação de agre-
gados pela fusão de vesículas endocíticas foi mais lenta,
sendo observados somente com 3 horas de incubação. Em
contraste, mesmo com 3 horas de incubação, nas células
D1 as vesículas endocíticas eram menores e a maioria delas
permanecia próxima à membrana plasmática. As diferenças
observadas entre a endocitose das três linhagens celula-
res, despertou o interesse em melhor caracterizar a via en-
docítica destas células. Quando as linhagens celulares fo-
ram incubadas com o mAb BC4-FITC e, posteriormente,
imonumarcadas com LAT (um marcador de Lipid rafts), α-
adaptina (uma proteina adaptadora envovida na formação
das vesículas cobertas por clatrina), clatrina (uma cobertu-
ra protéica para as vesículas endocíticas), Rab5 (um marca-
dor de endossomo primário), CD63 (presente na membrana
lisossomal e de grânulos secretores), ficou claro que havia
um defeito na via endocítica do FcεRI nas células E5 e D1,
que tem início na formação das vesíciculas endocíticas na
membrana plasmática e se reflete por toda avia endocítica.
O impedimento na formação das vesículas e no seu trans-
O PAPEL DA LECTINA ARTIN M NA ATIVAÇÃO DE MASTÓCITOS
Valéria Cintra Barbosa
Orientadora: Profª. Drª. Gabriela Silva Bisson
Dissertação de Mestrado apresentada em 27/10/2008
Estudos anteriores demonstraram que Artin M in-
duz a ativação de mastócitos na presença ou na ausência
de IgE ligada ao FcεRI e que os domínios de reconhecimen-
to de carboidrato (CRDs) da lectina estavam envolvidos
nessa atividade. No presente trabalho estudou-se a intera-
ção da lectina Artin M com glicoconjugados da superfície
de mastócitos. A ligação de Artin M biotinilada à superfície
de células RBL-2H3, avaliada por ensaios de citometria de
fluxo, ocorreu em 97% das células. Tal ligação foi inibida em
98 e 99%, respectivamente, por D-manose (25 e 50 mM) e
metil-?-D-manopiranosídeo (25 e 50 mM). Através de mi-
croscopia de fluorescência, observou-se marcação positi-
va distribuída na superfície de células RBL-2H3. Não hou-
ve marcação quando Artin M foi previamente incubada com
D-manose (25 mM), contrariamente ao observado quando
a lectina foi pré- incubada com D-galactose (25 mM). A
desgranulação de células RBL-2H3 induzida por Artin M
foi verificada através de ensaio de detecção de atividade β-
hexosaminidase, onde se verificou que a liberação da enzi-
ma ocorre na ausência ou presença de IgE, e que, nesse
último caso, há um aumento expressivo da atividade enzi-
mática detectada. A liberação de β-hexosaminidase foi ini-
bida em aproximadamente 97% quando Artin M foi previa-
mente incubada com metil-α-D-manopiranosídeo (50 mM).
porte é mais severo nas células D1, onde quase todas as
vesículas endocíticas foram encontradas próximas à
membrane plasmática. Estas diferenças na endocitose e no
transporte foram confirmadas por microscopia eletrônica.
O nível de expressão do FcεRI e das diferentes proteínas
envolvidas na endocitose foram analisadas por Western
Blotting e por citometria de fluxo. As células D1 apresenta-
ram uma redução significante (79,8%) na expressão do
FcεRI e, ambas as células E5 e D1 apresentaram uma
superexpressão de LAT. Não houve diferença na expres-
são de α-adaptina, clatrina e Rab 5. A quantidade
delisossomos foi encontrado por Lysotracker Red e Green,
também foi o mesmo nas três linhagens celulares. O defeito
visto nas linhagens celulares mutantes não foi limitado para
a endocitose do FcεRI. A endocitose de marcadores da su-
perfície celular, a concanavalina A (ConA), bem como a
pinocitose de fase fluida também foi examinada. As células
D1 motraram defeitos significantes na endocitose dos mar-
cadores da ConA e na pinocitose de fase fluida. Portanto o
defeito endocítico visto, principalmente nas células D1,
parece ser um defeito geral que está relacionado com a au-
sência dos gangliosídeos na membrane plasmática.
Tais resultados são sugestivos de que a desgranulação de
mastócitos induzida por Artin M possa ser decorrente da
interação entre os CRDs da lectina e componente (s)
glicosilado (s) da superfície dessas células, como FcεRI.
Ou ainda, de uma possível interação entre Artin M e a IgE
ligada ao FcεRI. A possível ligação de Artin M a IgE foi
averiguada através de ensaios em microplacas, onde verifi-
cou-se que Artin M se liga à IgE de maneira dose-depen-
dente. Investigou-se ainda se o receptor de alta afinidade
para IgE - FcεRI - seria reconhecido por Artin M. Através
da separação eletroforética de proteínas de lisados de célu-
las RBL-2H3, ativadas ou não, seguida da eletrotransferên-
cia para membrana de nitrocelulose e incubação com Artin
M biotinilada, observou-se o reconhecimento, pela lectina,
de diversos componentes que apresentam massas molecu-
lares aparentes variáveis. Entretanto, dentre estes compo-
nentes, encontra-se uma banda protéica de aproximada-
mente 35 kDa, coincidente com aquela reconhecida por
mAbs BE's, específicos para a subunidade β de FcεRI, fato
que sugere que esta subunidade do receptor seja reconhe-
cida por Artin M. A análise da expressão de FcεRI, através
de citometria de fluxo, mostrou que células RBL-2H3 esti-
muladas por Artin M e sensibilizadas ou não por IgE, man-
tiveram o nível de expressão de FcεRI, contrariamente às
células sensibilizadas pela imunoglobulina e estimuladas
por DNP48-HSA, que apresentaram uma redução de 40%
na expressão de FcεRI. Através de ensaios de microscopia
confocal e Western Blot, observou-se um aumento na in-
67

Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
tensidade da marcação pelo anticorpo anti-fosfotirosina,
após estímulo por Artin M, que pode ser devido a um au-
mento da fosforilação de tirosinas induzido pela lectina, na
presença de IgE, sugerindo que FcεRI esteja de fato envol-
vido no processo de ativação celular induzido por Artin M.
Através de ensaios imunoenzimáticos - ELISA- verificou-
se um aumento de 43% na produção de MCP-1 em células
sensibilizadas por IgE e estimuladas por Artin M, durante 1
hora, comparado às células estimuladas via FcεRI. Foi ob-
servado um aumento de 92% na produção da TGF-β em
células não sensibilizadas por IgE e estimuladas por Artin
PRODUÇÃO DE ANTICORPOS POLICLONAIS E DETERMINAÇÃO DO PADRÃO SUBCELULAR
DE DISTRIBUIÇÃO DE JAZIGO DURANTE A MORTE CELULAR PROGRAMADA EM GLÂNDULAS
SALIVARES DE Drosophila melanogaster
Ana Paula Saita
Orientador: Prof. Dr. Claudio Roberto Simon
Dissertação de Mestrado apresentada em 28/10/2008
Em estudos anteriores em nosso grupo, um screen
genético de uma coleção de inserções únicas de elemento-
P de Drosophila melanogaster, permitiu a identificação de
uma mutação que provoca um severo fenótipo defectivo
de morte celular de glândulas salivares larvais. Animais ho-
mozigotos mutantes para a inserção de elemento P morrem
como pupas tardias e apresentam glândulas salivares per-
sistentes. Em animais selvagens a glândula salivar larval é
destinada a morrer durante o estágio pupal num processo
de morte celular autofágico mediado por esteróide. O locus
mutado pela inserção do elemento-P foi identificado e no-
meado jazigo. Análises bioinformáticas demonstraram gran-
de homologia do gene e de seu produto com componentes
de uma família de proteínas denominada forminas (proteí-
nas FH ou Formin Homology) quê foram conservadas em
eucariotos e cuja função foi relacionada com o remodela-
mento ativo do citoesqueleto de actina e microtúbulos em
distintos processos celulares. Nesse trabalho demos início
à caracterização bioquímica e funcional de JAZIGO utili-
PCR EM TEMPO REAL PARA DETECÇÃO ESPECÍFICA DE RNAS (+) E (-) DE VÍRUS OROPOUCHE
Andrei Furlan da Silva
Orientador: Prof. Dr. Eurico de Arruda Neto
Dissertação de Mestrado apresentada em 03/11/2008
O vírus Oropouche é reconhecido como a segunda
causa mais frequente de arbovirose febril no Brasil, só sen-
do superado em número de casos pelo vírus da dengue. O
vírus Oropouche se destaca pelo elevado número de casos
de infecção aguda febril, que ocorrem em surtos epidêmicos
68
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista
M, durante 8 horas, em relação às células estimuladas via
FcεRI; em adição, houve um aumento de 68% na produção
de TGF-β em células sensibilizadas por IgE e estimuladas
por Artin M durante 8 horas, em relação às células estimu-
ladas via FcεRI.
O conjunto dos resultados obtidos sugere que Artin
M, ao ligar-se apropriadamente a carboidratos da superfí-
cie de mastócitos, possivelmente àqueles presentes no re-
ceptor de alta afinidade para IgE e/ou na própria IgE ligada
ao FcεRI, induza a transdução de sinal intracelular, respon-
sável pela ativação dos mastócitos.
zando análises de bioinformática e produção de anticorpos
policlonais capazes de detectar o padrão de localização
subcelular de JAZIGO na glândula salivar larval durante o
período de morte celular programada. (MCP). Com base nas
análises de bioinformática verificamos que as duas isofor-
mas de JAZIGO são essencialmente hidrofilicas e que es-
sas proteínas possuem um alto grau de similaridade com
forminas da subfamília FHOD, as quais foram envolvidas
na apoptose artificialmente induzida em células HeLa. A
localização de JAZIGO durante a morte celular programada
é inicialmente citoplasmática, mas com o progresso do pro-
cesso de morte celular a proteína é translocada para o nú-
cleo progressivamente. Nossos dados sugerem que JAZ
possui comportamento similar a formina FHODl e que JAZ,
similarmente a FHODl, poderia desempenhar um papel na
regulação de eventos de morte celular. Esses dados suge-
rem que JAZ e FHOD poderiam hipoteticamente compor
um grupo distinto de forminas relacionadas a processos de
morte celular. Também utilizamos o anticorpo para determi-
nar a localização subcelular de JAZ em glândulas salivares
persistentes de animais mutantes. Notamos que a localiza-
ção nuclear de JAZ foi observada apenas nas células cujo
processo de MCP foi interrompido mais tardiamente.
em áreas urbanas da Amazônia, assim como pelo seu poten-
cial de disseminação para outras regiões do Brasil e da Amé-
rica do Sul. Apesar de sua importância nunca foi determina-
da a existência de componentes do vírus Oropouche, estru-
turais ou não, que estejam relacionados a sua patogenicida-
de. Diante da ausência desses marcadores, o presente estu-
do procurou desenvolver uma metodologia que fosse capaz
de analisar acúmulos das espécies de RNAs virais ao longo
da replicação em um único ciclo. No presente estudo foi
determinada a curva biológica do vírus Oropouche em um
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
único ciclo com MOI > 1 em células Hela I e desenvolvido
um ensaio de RT-PCR em tempo real capaz de detectar RNAs
(+) e RNAs (-) durante o ciclo replicativo. Nesse estudo
também observamos a presença de cDNAs formados mes-
mo sem a adição de primers exógenos, aos quais chamamos
de cDNAprimer (-), e que geram falso-positivos. Para solucio-
nar este problema desenvolvemos um ensaio de RT-PCR em
O PAPEL FUNCIONAL DA ENZIMA FOSFOLIPASE D2 (PLD2) NAS CÉLULAS DA LINHAGEM DE
MASTÓCITOS RBL-2H3
Claudia Maria Meirelles Marchini
Orientadora: Profª. Drª. Constance Oliver
Dissertação de Mestrado apresentada em 11/11/2008
Os mastócitos participam do sistema imunológico
liberando mediadores farmacologicamente ativos. A princi-
pal via de ativação dos mastócitos é através do receptor de
alta afinidade para a imunoglobulina E (FcεRI). A ativação
dos mastócitos via FcεRI culmina com a liberação de medi-
adores. A enzima PLD atua sobre fosfolipídios hidrolisando
a fosfatidilcolina em ácido fosfatídico e colina. A PLD é
ativada após o estímulo via FcεRI e possui um papel impor-
tante na transdução do sinal em mastócitos. Existem duas
isoformas da enzima PLD, a PLD1 e a PLD2 que são expres-
sas, diferentemente, de acordo com o tipo celular. Ambas
as isoformas podem estar expressas numa mesma célula,
apenas uma ou nenhuma. Neste estudo foram utilizadas
células RBL-2H3 transfectadas para a super expressão PLD2
nas formas catalítica ativa (CA) e inativa (CI). O papel da
PLD2 foi examinado nestas células com o objetivo de elucidar
sua atuação no processo de secreção incluindo o aparelho
de Golgi e os grânulos secretores. As células CA e CI pos-
suem maior atividavidade de β-hexosaminidase total, po-
rém quando estimuladas mostram uma deficiência na libe-
ração desta enzima, quando comparadas com as células
selvagens. A PLD2 nas células CA, CI, VET e RBL-2H3 está
localizada no citosol, sendo abundante na região justanu-
clear, principalmente nas células CI, sugerindo uma associ-
ação com o aparelho de Golgi. A dupla marcação com o
CARACTERIZAÇÃO DE MECANISMOS DE RESISTÊNCIA À TERBINAFINA EM DIFERENTES ES-
PÉCIES DE Leishmania
Fabrício César Dias
Orientador: Prof. Dr. Luiz Ricardo Orsini Tosi
Tese de Doutorado apresentada em 24/11/2008
O fenômeno de amplificação gênica é um mecanismo
de auto-preservação celular observado com frequência no
tempo real específico, utilizando na etapa da RT primers
biotinilados que permitem purificar o cDNA no qual se in-
corporam por meio de separação magnética. Com isso con-
seguimos desenvolver um método de detecção específico
diferencial para RNAs positivos e negativos produzidos
durante ciclo e replicativo e pode vir a ser uma importante
ferramenta nos estudos de atogêneses.
mAb AA4, que imunomarca gangliosídeos derivados do
GD1b da membrana plasmática e com anti-PLD2, mostrou
que esta enzima não se localiza na membrana plasmática. A
dupla marcação com anti-PLD2 e anti-GM130 mostrou que
as áreas de maior concentração da PLD2 se co-localizam
com o aparelho de Golgi, especialmente nas células CI. A
marcação com anti-GM130 e os experimentos com micros-
copia eletrônica de transmissão mostraram que o aparelho
de Golgi está organizado nas células CA e desorganizado
nas células CI, onde se encontra disperso no citoplasma.
Ainda, as células CI expressam menos GM130 em compara-
ção com as demais linhagens celulares. Quando a produ-
ção de PA pela PLD está inibida pelo 1-Butanol, as células
CA apresentam as mesmas características fenotípicas das
células CI. A incubação das CI com PA resulta na reestrutu-
ração do aparelho de Golgi. A manutenção estrutural do
aparelho de Golgi, também está relacionada com os micro-
túbulos. Nas células CI o centro organizador de microtúbu-
los é dificilmente identificado. Os microtúbulos nas células
CI são desordenados em comparação com as demais linha-
gens celulares. Estes resultados mostram que a produção
de PA pela PLD2 é importante na organização de microtú-
bulos e na manutenção da estrutura do aparelho de Golgi.
As alterações celulares relacionadas com os microtúbulos
e o aparelho de Golgi afetam o processo secretor nestas
células e, provavelmente, em outros tipos de células secre-
toras. Estes achados poderão levar a novas estratégias te-
rapêuticas para controlar a liberação de mediadores duran-
te processos alérgicos e inflamatórios.
protozoário parasita Leishmania quando submetido a estí-
mulos negativos como, por exemplo, a presença de drogas.
A região H do genoma de Leishmania (Leishmania) major é
um dos loci mais estudados que leva à amplificação em res-
posta a drogas não relacionadas, como a terbinafina. Foram
isoladas linhagens de L. (L.) major e Leishmania (Viannia)
69

Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
braziliensis resistentes à terbinafina. Análises por corridas
curtas de eletroforese em campo pulsado (PFGE) e Southern
blotting revelaram que a resistência observada nestas li-
nhagens não foi gerada pela amplificação do locus H. Sen-
do assim, a resistência ao inibidor da esqualeno epoxidase
está sendo gerada por um outro mecanismo uma vez que
outros loci podem estar envolvidos na resistência à
terbinafina e através da análise diferencial do perfil de pro-
teínas, os mutantes resistentes apresentaram diferenças na
expressão de proteínas. O alvo inicial para a elucidação da
resistência à terbinafina nas linhagens selecionadas foi a
via de biossíntese de ergosterol. Foram escolhidos os genes
da 3-cetoacil-CoA tiolase (ERG10), esqualeno sintase (ERG9
ou SQS1), esqualeno epoxidase (ERG1), oxidoesqualeno-
lanosterol ciclase (ERG7) e lanosterol 14 -demetilase (ERG11),
de L. major e L. braziliensis, além do gene YIP1 de L.
braziliensis. Para isso foram sintetizados oligonucleotídeos
a partir das sequências geradas pelo projeto genoma destas
espécies depositadas em bancos de dados.
Os genes ERG10, SQS1, ERG1, ERG7 e ERG11 de
L. major e de L. braziliensis além do YIP1 de L. braziliensis
amplificados por PCR foram clonados no vetor pGEM-T
Easy, que possibilitou a construção de reagentes para rup-
tura de todos genes pela inserção da marca HYG e, com
exceção do gene ERG7 de L. braziliensis, os genes foram
subclonados no vetor pXG1. Fragmentos de restrição dos
IDENTIFICAÇÃO DE FOSFOPROTEÍNAS EM CÉLULAS DE UMA LINHAGEM DE LINFOMA DO
MANTO
Germano Aguiar Ferreira
Orientador: Prof. Dr. Lewis Joel Greene
Dissertação de Mestrado apresentada em 27/11/2008
O estudo fosfoproteômico de células linfóides pode
contribuir para a compreensão de sua origem através da
elucidação das vias responsáveis pelo escape dessas do
controle celular. A abordagem proteômica foi utilizada no
estudo inicial da linhagem GRANTA-519, uma linhagem ce-
lular estabelecida de linfoma de células do manto, através
da criação de um inventário inicial de identificação de pro-
teínas com possíveis modificações pós-traducionais, es-
pecialmente fosforilações. Inicialmente as células de
GRANTA-519 foram cultivadas em condições adequadas.
Proteínas foram extraídas com tampão de lise contendo 7,7
M de uréia, 2,2 M de tiouréia, 4,4 % de CHAPS e uma mistu-
ra de cocktail inibidor de proteases. Após extração das
proteínas do extrato celular, alíquotas de proteínas foram
tratadas com lPPase e submetidas a focalização isoelétrica
em faixa de pH de 4,0 – 7,0 e eletroforese em gel de
poliacrilamida e SDS preparados em nosso laboratório. Pro-
teínas foram detectadas através de coloração com coomas-
70
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista
genes clonados no vetor pGEM-T Easy foram utilizados
para analisar o nível de seus transcritos por northern blot.
Também verificamos através de corridas curtas de PFGE e
análises de Southern, que as linhagens em estudo não apre-
sentam amplificação dos loci em estudo. A participação de
genes da via de biossíntese de ergosterol de L. major e L.
braziliensis e do gene YIP1 de L. braziliensis na resistên-
cia ou susceptibilidade à terbinafina e/ou anfotericina B foi
verificada através de experimentos funcionais. Com esse
objetivo, os genes YIP1, ERG10 e ERG1 de L. braziliensis
foram transfectados na linhagem LB2904 de L. braziliensis,
e os genes ERG10, SQS1, ERG1, ERG7 e ERG11 e a ruptu-
ra do gene ERG1 pelo cassete HYG de L. major foram trans-
fectados na linhagem LT252 de L. major.
Foram realizados experimentos para analisar a sus-
ceptibilidade à anfotericina B associada ou não à terbinafina,
das linhagens selvagens de L. major e L. braziliensis, e a
partir destes experimentos iniciais, foram selecionadas li-
nhagens destas duas espécies resistentes à anfotericina B.
Para analisar a possível função regulatória dos ele-
mentos RIME 5/2/6 de L. braziliensis, foi feita a amplifica-
ção por PCR da repetição invertida LbRIME 5/2/6b que
permitiu a clonagem deste fragmento no vetor pGEM-T Easy
e a sua ruptura pela marca SAT. A clonagem no vetor pGEM
possibilitou a análise da interação de proteínas nucleares à
repetição LbRIME 5/2/6b através do gel shift.
sie coloidal G-250, coloração específica para fosfoproteínas
e anticorpos específicos contra resíduos fosforilados de
serina e tirosina. Mapas bidimensionais foram analisados
utilizando o software ImageMaster Platinum. Vinte oito spots
de um total de duzentos, cerca de ±14%, desapareceram
após o tratamento com fosfatase alcalina. Proteínas modifi-
cadas pelo tratamento passaram por digestão in situ com
tripsina e os peptídeos tripsínicos submetidos a espectro-
metria de massas em equipamentos do tipo MALDI-ToF e
ESI triplo quádruplo. Doze proteínas dos spots digeridos,
selecionados após o tratamento com ëPPase, foram identi-
ficados. As seguintes proteínas foram identificadas em mais
de um spot alinhado horizontalmente: Nucleofosmina, uma
proteína fosforilada envolvida com acetilação nucleolar e
Anexina A6, uma proteína reguladora de cálcio extrema-
mente conservada. Outras proteínas escolhidas após o tra-
tamento com lPPase foram identificadas como Heat shock
70 kDa protein 1, Stress-70 protein, mitochondrial,
Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein H, Tumor protein
D52, Actin-related protein 2/3 complex subunit 5, Eukaryotic
translation initiation factor 5A-1 e Rho GDP-dissociation
inhibitor 1.
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP

CARACTERIZAÇÃO FUNCIONAL DOS GENES PGA13 E PGA58 DE Candida albicans

Fabrício Freitas Fernandes nulos TUP1 e EFG1, e a obtenção e caracterização

Orientador: Prof. Dr. Paulo Sérgio Rodrigues Coelho
Dissertação de Mestrado apresentada em 15/12/2008
A incidência de infecções por fungos oportunistas
na população de pacientes imunocomprometidos tem au-
mentado nos últimos anos, e estas são, principalmente, cau-
sadas por Candida albicans. Este patógeno oportunista
pode crescer em diferentes formas, variando de levedura,
pseudohifa e hifa e essa transição morfológica está associ-
ada com a virulência. Na transição de levedura para hifa,
genes hifa-específicos são expressos e muitos deles codifi-
cam proteínas que possuem uma molécula de GPI
(glicosilfosfatilinositol), mas a maioria (66%) das proteínas
preditas ancoradas por GPI (PGAs), ainda possuem função
desconhecida. Portanto, o objetivo deste trabalho, foi ini-
ciar a caracterização funcional dos genes PGA13 e PGA58
através de análises in silico, da expressão diferencial dos
RNAm sob condições ambientais diversas, e nos mutantes
fenotípica dos mutantes de PGA13: homozigoto nulo e de
superexpressão.
Os estudos realizados in silico indicam que PGA13
e PGA58 são reguladas pelos fatores transcricionais Efg1,
Tec1 e Nrg1 e que possuem sítios potenciais de glicosilação.
A análise transcricional desses genes mostra que ambos
são regulados por Tup1 e que respondem aos estímulos
NaCl (Cloreto de sódio), H2O2 (Peróxido de hidrogênio),
etanol, cafeína, HCl (Ácido Clorídrico) e às condições hipo
e hiperosmótica. Os mutantes nulos e de superexpressão
de PGA13 e PGA58 foram obtidos e as linhagens que per-
deram o gene PGA13 tiveram um padrão de crescimento da
colônia diferente da linhagem CAI-4 e foram mais sensíveis
aos compostos SDS, Higromicina B e pH ácido, enquanto o
mutante que superexpressava foi mais resistente. Estes re-
sultados sugerem que PGA13 deve ter papel importante na
parede celular, visto que a falta dela ocasionou maior sensi-
bilidade a compostos que agridem a parede celular.

COMPARAÇÃO DE UM TESTE RÁPIDO IMUNOCROMATOGRÁFICO (DIRECTIGEN EZ RSV)

COM IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA, ISOLAMENTO EM CULTURA E SEMI-NESTED-RT-
PCR PARA A DETECÇÃO DE VÍRUS SINCICIAL RESPIRATÓRIO HUMANO

Flávia Escremim de Paula doença respiratória na unidade de emergência. Os critérios

Orientador: Prof. Dr. Eurico de Arruda Neto
Dissertação de Mestrado apresentada em 17/12/2008
O diagnóstico rápido de infecção do trato respirató-
rio por HRSV é importante para definição de conduta bem
como para a identificação de surtos. No presente estudo
nós avaliamos o desempenho do teste rápido Directigen
EZ™ RSV (BD Diagnostic Systems, Sparks, USA.), em com-
paração com a imunofluorescência indireta (IF), isolamento
em cultura e semi-nested-RT-PCR, para a detecção do vírus
sincicial respiratório humano (HRSV) em amostras de secre-
ção respiratória de crianças atendidas no Hospital das Clíni-
cas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universi-
dade de São Paulo, Brasil. De fevereiro a dezembro de 2005
foram coletadas 191 amostras de aspirados nasais de crian-
ças com idade entre oito dias e 50 meses, atendidas por
de inclusão foram sintomas e sinais de infecção respiratória,
incluindo coriza, obstrução nasal, febre, tosse, dispnéia,
taquipnéia, sibilos e sinais de bronquiolite ou pneumonia.
Ao todo 191 amostras foram testadas por todos os
métodos. O Directigen EZ RSV detectou HRSV em 73/191
(38%) amostras, enquanto imunofluorescência indireta, iso-
lamento em cultura e o semi-nested-RT-PCR identificaram
respectivamente 63/191 (33%), 62/191 (32%) e 82/191 (43%).
Em comparação com todos os outros testes tomados em
conjunto, o Directigen EZ RSV obteve 80% de sensibilida-
de, 99% especificidade, 99% valor preditivo positivo (PPV),
85% valor preditivo negativo (NPV) e 90% acurácia.
Os resultados mostraram que o teste Directigen EZ
RSV é uma boa alternativa para o diagnóstico de HRSV,
pela sua facilidade e rapidez de execução, sendo especial-
mente útil em serviços de atenção primária de saúde.

CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR DO GENE NCSA DE Aspergillus fumigatus

André Oliveira Mota Júnior lização importantes para o desenvolvimento do fungo. A

Orientador: Prof. Dr. Gustavo H. Goldman
Tese de Doutorado apresentada em 18/12/2008
O foco do trabalho está direcionado para a constru-
ção da linhagem "knock-out" do gene ncsA de A. fumigatus,
bem como a caracterização do fenótipo da linhagem ∆ncsA
e a investigação de interações deste gene com vias de sina-
linhagem mutante ∆ncsA foi construída através da transfor-
mação do WT ( ku80) com o gene marcador pyrG de A.
fumigatus. Foi confirmada a deleção por Southern blot e as
alterações fenotípicas da linhagem foram analisadas. O gene
ncsA em A. fumigatus não é essencial e a linhagem ∆ncsA
apresentou-se sensível EGTA e SDS, alé, de tolerante a al-
tas concentrações de íons cálcio. Na linhagem NcsA:mRFP

71
 Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP http://www.fmrp.usp.br/revista

foi localizado a proteína NcsA no citoplasma das células e
sua localização não é alterada pela em resposta ao aumento
da concentração de cálcio. A linhagem ∆ncsA foi sensível a
drogas que afetam a biossíntese e a manutenção da mem-
brana plasmática, tais como voriconazole, anfotericina e
itraconazole. O crescimento polarizado em presença de
lovastatina nessa linhagem foi consideravelmente mais afe-
tado que no tipo selvagem. O Spitzenkörper não foi
visualizado no mutante ∆ncsA, e existe uma significante
diminuição de estruturas vacuolares e endossomos. Os re-
sultados obtidos em ensaios de TRPCR em tempo real su-
gerem que NcsA modula a expressão dos genes pmcA e
pmcB, que codificam proteínas ATPases transportadoras
de íons cálcio. Os ensaios de virulência no modelo animal
revelaram que a mutação do gene ncsA não causa perda de
virulência no A. fumigatus.

BIOQUÍMICA

IDENTIFICAÇÃO DE GENES NO FUNGO FILAMENTOSO Aspergillus nidulans MODULADOS POR

PaIA, UM COMPONENTE DE UMA CASCATA SINALIZADORA EM RESPOSTA AO pH AMBIENTE

Janaína Silva de Freitas demonstrado que o crescimento pobre e a conidiação da

Orientador: Prof. Dr. Antonio Rossi Filho
Tese de Doutorado apresentada em 30/10/2008
A via transdutora de sinal mediada pelo fator de
transcrição PacC atua em muitos eventos metabólicos en-
volvidos na resposta adaptativa ao pH alcalino em Asper-
gillus nidulans. O gene pacC codifica um fator de transcri-
ção zinc-finger, e os seis genes paI (A, B, C, F, H e l) são
membros putativos de uma cascata sinalizadora que pro-
movem a ativação proteolítica de PacC em ambiente alcali-
no. A proteína PalA interage com os motivos YPXL/I em
PacC, o que é necessário para a ação de PaIB, uma protease
da família das calpaínas. Este modelo implica que mutações
acarretando perda de função em qualquer dos genes paI
levariam a mimetização do fenótipo ácido (selvagem) inde-
pendentemente do pH ambiente. Assim, qualquer que seja
o pH de cultivo, a mutação pa/A1 deveria mimetizar o
fenótipo selvagem, o que não foi observado na linhagem
mutante biA1 palA1. Experimentos simples foram designa-
dos para identificar a influência dos nutrientes no pH final
das culturas e na secreção da fosfatase ácida em Aspergi-
llus nidulans. A linhagem mutante pa/C4 foi selecionada
pelo seu aumento substancial da atividade da fosfatase
ácida e diminuição da atividade da fosfatase alcalina, quan-
do cultivada em meio mínimo sólido, Pi limitante, pH 6.5. Foi
linhagem mutante pa/C4 em meio sólido, pH alcalino, foram
hiper sensíveis ao tampão Tris (hydroxymethyl). A secre-
ção da fosfatase ácida foi reprimida em ambas as linhagens
parental biA 1 e mutante palC4 biA 1 quando cultivadas em
meio líquido de extrato de levedura, Pi limitante, pH 5.0.
Essa condição indica que a secreção da fosfatase ácida
não é necessária para regenerar fosfato inorgânico a partir
do fosfato orgânico presente no extrato de levedura. Os
resultados apresentados não invalidam a hipótese da cas-
cata de sinalização governada por PacC em resposta fisio-
lógicas ao pH alcalino. Entretanto, está claro que a percep-
ção do pH alcalino pode não ser sua única função. Com a
finalidade de identificar genes envolvidos na resposta
adaptativa ao pH ambiente e avançar no entendimento da
funcionalidade do gene palA em pH ácido, a hibridação
subtrativa por supressão foi realizada a partir dos mRNAs
isolados das linhagens biA 1 e biA 1 palA 1 de A. nidulans
cultivadas em condições de fosfato limitante, pH 5,0. Este
estudo revelou genes com expressão diminuída na linha-
gem mutante biA1 palA1 envolvidos na defesa celular, res-
posta ao estresse, transcrição, síntese de proteínas, comu-
nicação celular e etc. A expressão diferencial de nove des-
ses genes, confirmada por Norlhern blot, indica que o gene
palA tem função metabólica específica em pH ácido em A.
nidulans.

PROGRAMA DE TRIAGEM DE COMPOSTOS E ESTRATÉGIA PARA PROSPECÇÃO E DESENVOLVI-

MENTO EM LARGA ESCALA DE NOVOS BIOATIVOS COM POTENCIAL ANTIMICOBACTERIANO

Fabio Cícero de Sá Galetti
Orientador: Prof. Dr. Celio Lopes Silva
Tese de Doutorado apresentada em 03/11/2008
O atual tratamento da tuberculose (TB) implica na
terapia combinada de quatro diferentes drogas por pelo
menos seis meses o que pode levar a não adesão do paci-
ente ao regime terapêutico. O abandono da terapia é um
dos principais fatores que favorecem o aumento dos casos
de tuberculose multidroga resistente(MDR- TB) e tubercu-
lose extremamente resistente (XDR- TB), que somados aos
problemas de co-infecção com HIV/AIDS, diminuem dras-

72
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
ticamente a eficácia anti- TB das drogas de primeira esco-
lha. Estes fatores indicam a necessidade urgente para des-
coberta de uma nova droga para ser-aplicada no tratamento
da TB. Desta forma o Núcleo de Pesquisas em Tuberculose
(NPT), estabeleceu o programa de triagem de compostos,
utilizando a estratégia de triagem aleatória de compostos em
larga escala, para prospecção de potenciais novos bioativos
anti- TB, tanto de produtos naturais (biodiversidade brasi-
leira) como de produtos de origem sintética. Basicamente a
plataforma é constituída de três etapas principais: (i) deter-
minação da concentração inibitória mínima (CIM) das amos-
tras contra o bacilo da TB; (ii) realização de estudos de
citotoxicidade (IC50) e atividade biológica em macrófagos
infectados; e (iii) determinação da atividade biológica em
modelos de TB experimental. Foram realizados bioensaios
in vitro de concentração inibitória mínima frente à cepa de
Mtb (H37Rv A TCC 27294) com um total de 2076 amostras:
81,41 % de extratos brutos de produtos naturais, 13,34% de
amostras fracionadas ou isoladas dos produtos naturais e
5,25% de compostos sintéticos. Os resultados seleciona-
ram 60 extratos com CIM inferior a 125 µg/mL que levaram
ao isolamento de dois bioativos do extrato bruto da esponja
ATIVIDADE DA FOSTOLIPASE A2 SECRETADA HUMANA DO GRUPO IID (HSPLA2-IID) CONTRA
MEMBRANAS ARTIFICIAIS E BIOLÓGICAS
Raquel Gomes Fonseca
Orientador: Prof. Dr. Richard John Ward
Dissertação de Mestrado apresentada em 19/11/2008
As fosfolipases A2 (PLA2s, EC 3.1.1.4) são enzimas
envolvidas em uma ampla variedade de processos fisioló-
gicos que compreendem digestão fosfolipídica, remodela-
gem de membranas, regulação do sistema imunológico e
processos patofisiológicos. As PLA2s secretadas do gru-
po II (PLA2-II) são proteínas do sistema imune presentes
na resposta de fase aguda e na atividade bactericida, parti-
cipando na ativação e liberação de citocinas e de outros
mediadores pré-inflamatórios. Apesar dos estudos recen-
tes sobre os efeitos farmacológicos e mecanismo catalítico
da PLA2 do grupo lIA humana (PLA2-IIA), pouca atenção
tem sido dada à PLA2 do grupo IID humana (hsPLA2-IID),
uma proteína associada ao progresso do processo inflama-
tório. O presente trabalho representa um estudo para avali-
ar uma eventual correlação entre o mecanismo de permea-
bilização de membranas modelos e a atividade bactericida
de hsPLA2-IID. A sequência codificadora da hsPLA2-IID
foi inserida no vetor de expressão pET3a, e a proteína
heteróloga foi produzida na forma de corpos de inclusão
em EscherIchia coli BL21 (DE3). Um protocolo de enovela-
mento da proteína recombinante foi desenvolvido que per-
mitiu a produção de hsPLA2-IID na conformação nativa.
Para avaliar o papel de atividade catalítica no efeito de per-
meabilização de membranas modelos e na atividade
marinha Aplysina cauliformis. Estes extratos apresentaram
inédita atividade anti- TB in vitro, ausência de citotoxicidade
em células de mamíferos e capacidade de reduzir em 3,53 log
de UFCs a carga bacilar intracelularmente semelhante à dro-
ga padrão RFP. Resultados semelhantes também foram en-
contrados para três compostos sintéticos, dois análogos
heterocíclicos da nitrofurazona com CIM=16 µMol e um
derivado análogo da INH (composto 227) com CIM=2 µMol.
Todas os três compostos apresentaram excelentes índices
de seletividade sendo o melhor deles caracterizado para o
composto 227 (IS > 250). O mesmo composto também apre-
sentou resultado promissor em teste pré-clínico em modelo
murino de TB experimental ao reduzir significativamente a
carga bacilar de tecido pulmonar em 3,27 log de UFC quan-
do comparado ao controle negativo (animais não tratados).
Por fim, testes preliminares detectaram uma atividade
imunomoduladora em potencial para o composto na respos-
ta contra a TB. As análises dos resultados indicaram o su-
cesso do Programa de Triagem de compostos e a eficácia da
estratégia de triagem aleatória em larga escala em identificar
potenciais novos bioativos anti- TB em curto período de
tempo e baixo investimento de capital.
bactericida, as mutantes H48Q, D49K e G30S na região de
sitio ativo foram produzidos com o intuito de reduz ou eli-
minar a atividade catalítica da enzima. A proteína hsPLA2-
IID tipo selvagem e a mutante H48Q apresentaram ativida-
de hidrolítica de 58,45 e 7,7 µM.min-1.mg-1 respectivamente,
e demonstraram uma atividade de danificação de membra-
nas artificiais. Em contraste, as mutantes G30S e D49K per-
deram completamente a atividade catalítica, mas mantive-
ram a capacidade de danificar membranas artificiais, de-
monstrando que a atividade hidrolítica e a danificação de
membranas modelos não estão correlacionadas. A proteína
hsPLA2-IID tipo selvagem demonstrou um efeito bactericida
contra bactérias Gram-negativa (E. coli K12) e Gram-positi-
va (Micrococcus luteus). As mutantes H48Q e D49K redu-
ziram, mas não aboliram a atividade bactericida contra a E.
coli, demonstrando que a atividade independente da ativi-
dade catalítica contribui para o efeito contra este linhagem.
As mesmas mutantes causam uma redução maior na ativi-
dade contra M. luteus, mostrando que os mecanismos do
efeito bactericida são diferentes entre bactérias Gram nega-
tivas e positivas. Os efeitos das mutações da hsPLA2-IID
foram comparados com os efeitos das mesmas mutações na
hsPLA2-IIA e com botropstoxina-l, uma Lys49- PLA2 isola-
do do veneno da serpente Bothrops jararacussu, indican-
do que além da atividade catalítica e a atividade indepen-
dente de catalise, acesso a membrana interna da bactéria
pode ser um fator na determinação da atividade bactericida
das fosfolipases A2 de classe II.
73

Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
CLÍNICA CIRÚRGICA
ESTUDO COMPARATIVO ENTRE ECOENDOSCOPIA E ENDOSCOPIA DIGESTIVA ALTA NO DIAG-
NÓSTICO DOS TUMORES SUBEPITELIAIS DO ESÔFAGO ESTÔMAGO E DUODENO
Spencer Vaiciunas
Orientador: Prof. Dr. Reginaldo Ceneviva
Dissertação de Mestrado apresentada em 30/10/2008
A descoberta endoscópica de um tumor subepitelial
(TSE) é frequente. Geralmente o aspecto corresponde à de
uma compressão extrínseca (CE) ou ao de um tumor intra-
mural (TI). O diagnóstico dessas lesões, por vezes, é difícil,
mesmo após a obtenção de biópsias pela endoscopia di-
gestiva alta (EDA). A ecoendoscopia (EE) tem apresentado
importante papel na elucidação diagnóstica. A proposta
nesse estudo foi comparar os resultados da EDA com os da
EE no diagnóstico diferencial entre TI e CE do esôfago,
estômago e duodeno e avaliar o desempenho da ecoendos-
copia no diagnóstico diferencial dos TSE. Foi feita análise
retrospectiva dos exames de 176 pacientes (93 mulheres),
com média de idade de 62,5 (10- 89) anos, de janeiro de 2000
a maio de 2006, que foram estudados por EDA e EE por
apresentar abaulamento subepitelial ao exame endoscópico
do trato gastrointestinal alto. O tamanho, mobilidade, loca-
lização e o diagnóstico de presunção foram registrados no
momento da EDA. Durante a EE foram analisados o tama-
AVALIAÇÃO DA ISQUEMIA RENAL EM RATOS WISTAR PELA ESPECTROSCOPIA DE FLUORES-
CÊNCIA INDUZIDA POR LASER, PELA ANÁLISE HISTOPATOLÓGICA E PELA FUNÇÃO RENAL
E MITOCONDRIAL
Beatriz Flávia Moraes Trazzi
Orientador: Prof. Dr. Luís Fernando Tirapelli
Tese de Doutorado apresentada em 31/10/2008
Objetivos: Avaliar a associação da gravidade da le-
são renal isquêmica determinada pela histopatologia, es-
pectroscopia de fluorescência induzida por laser (FIL -
442nm e 532nm), função renal, respiração mitocondrial e
intumescimento osmótico da membrana mitocondrial e fun-
ção renal.
Material e Métodos: Cinquenta ratos Wistar foram
submetidos à isquemia renal esquerda quente durante 20,
40, 60 e 80 minutos. A FIL foi realizada antes da isquemia
(controle) e repetida aos 20, 40, 60 e 80 minutos de isquemia.
Amostras de tecido para histologia e análise mitocondrial
(estado 3 e 4 da respiração, razão de controle respiratório e
intumescimento osmótico da membrana mitocondrial) fo-
74
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista
nho, a ecogenicidade do tumor, as camadas da parede da
víscera e o diagnóstico presuntivo. Todos os pacientes fo-
ram avaliados consecutivamente pela EDA e EE. Os tumo-
res intramurais representaram 87% dos casos e dentre eles,
o tumor estromal gastrointestinal foi a maioria (62%), en-
quanto as compressões extrínsecas representaram 13%, das
quais a compressão pelo figado foi a mais frequente (31 %).
Para a avaliação dos TI a sensibilidade, especificidade a
acurácia da EDA foram menores de 50 % com p=0,25 e para
a EE de 95%, 100% e 95% respectivamente, com p=0,0003
(teste de Fisher). Na avaliação das CE, a sensibilidade, es-
pecificidade e acurácia da EDA foram de 87%, 50% e 86%
com p=0,43 e a EE de 95%, 100% e 95% respectivamente,
com p=0,08 (teste de Fisher). Conclui-se que a endoscopia
digestiva é um bom exame para diagnosticar a presença de
tumores intramurais do trato digestivo, mas tem fraco de-
sempenho em identificar o tipo específico do tumor, e é um
mau exame para o diagnóstico das compressões extrínse-
cas. Por outro lado, a ecoendoscopia é um bom exame para
o diagnóstico diferencial dos tumores subepiteliais, poden-
do fornecer com precisão a localização do tumor além de
permitir biópsias dirigidas.
ram colhidas do rim esquerdo após determinação da FIL.
Resultados: A associação da espectroscopia óptica
com o dano histológico foi: FIL -442nm - r2 = 0,39, p ≤ 0,001
e 532nm -r2 = 0,18, P = 0,003; FFI (fator de fluorescência da
isquemia -laser refletido / fluorescência induzida) -442nm -r2
= 0,20, P = 0,002 e 532nm -r2 = 0,004, P = 0,67. As associações
entre a função mitocondrial e o dano tecidual foram: estado
3 da respiração -r2 = 0,43, P = 0,0004, estado 4 da respiração
-r2 = 0,03, P = 0,38, RCR -r2 = 0,28, P = 0,007, e intumescimento
da membrana mitocondrial -r2 = 0,02, p = 0,43.
Conclusões: A intensidade de fluorescência emitida
pelo tecido excitado por laser, especialmente no compri-
mento de onda 442nm, foi capaz de determinar, em tempo
real, a gravidade das lesões teciduais provocadas pela
isquemia renal. O estado 3 da respiração mitocondrial e a
RCR (razão do controle respiratório) também mostraram uma
boa correlação com o grau de lesão do tecido isquêmico.
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
AVALIAÇÃO EXPERIMENTAL DA VIABILIDADE HEPÁTICA, APÓS ISQUEMIA NORMOTÉRMICA,
PELA ESPECTROSCOPIA DE FLUORESCÊNCIA INDUZIDA POR LASER (efil)
Jorge Luiz Fernandes
Orientador: Prof. Dr. Ajith Kumar Sankarankutty
Dissertação de Mestrado apresentada em 31/10/2008
Novos métodos para a caracterização de tecidos ou
para investigar e analisar diversos, parâmetros teciduais
têm sido buscados ultimamente. A avaliação da viabilidade
do figado de ratos pela "espectroscopia de fluorescência
induzi da por laser" após isquemia normotérmica visa mos-
trar a eficácia do método e delinear critérios objetivos na
sua utilização. A função mitocondrial, provas bioquímicas
e a morfometria foram utilizadas como indicadores da viabi-
lidade hepática. Estudos recentes mostram a eficácia do
método em condições de hipotermia. Outros estudos foram
realizados com outros parâmetros. Os animais foram dividi-
dos em dois grupos: G1(isquemia parcial de 1 hora), com 12
animais, G2(isquemia parcial de 2 horas), também com 12
animais. A isquemia parcial foi realizada com oclusão
vascular do lobo mediano e do lobo lateral esquerdo, per-
mitindo fluxo sanguíneo para o lobo caudado e para o lobo
lateral direito. Após o período de isquemia a pinça vascular
AVALIAÇÃO DA IMPLANTAÇÃO DE UM PROTOCOLO DE PREVENÇÃO EM EQUIPES DA ATEN-
ÇÃO BÁSICA EM RIBEIRÃO PRETO, SÃO PAULO
Anderson Soares da Silva
Orientador: Prof. Dr. Orlando de Castro e Silva Júnior
Tese de Doutorado apresentada em 10/11/2008
Introdução: Ainda que a prevenção represente o
cerne do trabalho dos médicos da Atenção Básica, as taxas
de emprego de medidas de prevenção, por mais simples
que sejam, ainda sem encontram em níveis inadequados. O
desafio que é posto aos profissionais de saúde é o empre-
go de um rol mínimo de medidas de prevenção a pacientes
elegíveis, baseados em uma avaliação rigorosa de fatores
de risco individuais e familiares, associado à aplicação de
medidas baseadas em sólidas evidências científicas. De
forma a atingir esse objetivo, a literatura científica tem for-
necido uma série de ferramentas (intervenções não eletrô-
nicas, tais como tabelas de prevenção, cartas-lembrete e
cartões de saúde para os pacientes), que tem se mostrados
eficientes no curto prazo para o aumento do emprego de
medidas de prevenção.
Objetivos: Dado a escassa disponibilidade de pes-
quisas sobre estratégias voltadas para a melhoria da provi-
são de serviços preventivos por equipes do Programa Saú-
de da Família, o pesquisador estudou os valores e atitudes
atribuídos à prevenção pelos profissionais de saúde e ava-
liou a implementação de um protocolo de promoção de saú-
de e prevenção de doenças em cinco equipes do Programa
Saúde da Família do município de Ribeirão Preto, São Paulo.
foi removida e as leituras da espectroscopia de fluorescên-
cia foram realizadas antes da isquemia, após o período de
isquemia e 24 horas após a reperfusão. Imediatamente após
as leituras espectroscópicas, foram realizadas coletas de
sangue para dosagem das bilirrubinas, AST, ALT e DHL.
Após a última coleta de sangue o tecido hepático, do lobo
submetido à isquemia, foi retirado e encaminhado parte para
o exame histopatológico (morfometria) e parte para avalia-
ção da função mitocondrial. Foi possível comparar os pa-
drões espectrais com a área de necrose. Os padrões espec-
trais foram distintos nas 3 fases e foi possível avaliar evi-
dências de associação das respostas da espectroscopia de
fluorescência com relação à Morfometria, pelo Teste Exato
de Fisher (p < 0,0l), e também em relação à sua concordân-
cia, pelo Coeficiente Kappa, variando de concordância mo-
derada à concordância quase perfeita. Valores semelhantes
foram obtidos na avaliação do Potencial de Membrana mi-
tocondrial. A "espectroscopia de fluorescência induzida por
laser" após isquemia normotérmica mostrou ser um método
rápido e eficaz na avaliação de lesões isquêmicas e de teci-
dos viáveis.
Material e Métodos: Um protocolo contendo 22 me-
didas de prevenção foi elaborado tendo como base as re-
comendações do US Preventive Services Task Force, do
Canadian Task Force on Preventive Health Care, do Pro-
grama de Actividades Preventivas y de Promocion de Ia
Salud (P APPS) da Sociedade Espanhola de Saúde da Famí-
lia e Comunidade e das recomendações do Ministério da
Saúde, todas adaptadas as condições locais. Os profissio-
nais de saúde foram entrevistados e logo depois treinados,
em dezembro de 2007, para a aplicação do protocolo. Após
cinco meses do treinamento, a aplicação das 22 medidas
foram avaliadas.
Resultados: Apesar de afirmarem conhecer as medi-
das de promoção de saúde e prevenção de doenças e de se
mostrarem motivados a empregá-las, o registro de muitas
medidas de prevenção ficou muito abaixo daquilo preconi-
zado por organismos oficiais e a análise dos índices de
performance de medidas apropriadas e inapropriadas, an-
tes a após o treinamento das equipes, mostrou que a estra-
tégia proposta não conseguiu melhorar o emprego das me-
didas de prevenção analisadas.
Conclusões: Mudar o comportamento dos profissi-
onais de saúde de forma que empreguem mais medidas de
prevenção é uma tarefa bastante complexa. Além de mais
investimentos em pesquisas, é preciso que governos e es-
colas médicas enfatizem a importância do emprego de me-
didas de prevenção por profissionais da Atenção Básica.
75

Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
CLÍNICA MÉDICA
APETITE, EQUILÍBRIO ENERGÉTICO E TRÂNSITO GASTRINTESTINAL EM INDIVÍDUOS GAS-
TRECTOMIZADOS
Mayra Mayumi Kamiji
Orientador: Prof. Dr. Ricardo Brandt de Oliveira
Tese de Doutorado apresentada em 13/10/2008
No presente estudo, foram avaliados, em indivídu-
os submetidos previamente à gastrectomia, os níveis plas-
máticos de grelina total e de PYY3-36, as sensações de ape-
tite e o trânsito gastrintestinal após a ingestão de uma re-
feição líquida, e também o gasto energético de repouso
(GER) e a ingestão energética. Foram estudados sete indi-
víduos com gastrectomia total (GT), 14 com gastrectomia
parcial (GP) e 10 indivíduos sadios. O Índice de Massa Cor-
poral (IMC) não era diferente entre os grupos [grupo con-
trole: 25 (20-34) kg/m2, GP: 22 (18-30) kg/ m2, GT: 23 (18-32)
kg/ m2]. Os pacientes haviam sido operados por câncer ou
por úlcera, há pelo menos 1 ano, e não apresentavam sus-
peita ou diagnóstico de neoplasia. O GER foi medido por
calorimetria indireta e comparado ao calculado pela fórmula
de Harris- Benedict (% GERm/GERt). A ingestão alimentar
habitual foi avaliada por recordatório de 24h e por registro
alimentar de 3 dias. As sensações de apetite (fome, plenitu-
de e consumo prospectivo) foram medidas por um questio-
nário que incluía uma escala analógica visual, aplicado aos
participantes em jejum e durante o estudo cintilográfico do
trânsito gastrintestinal após uma refeição teste (361kcal). A
dosagem dos hormônios foi realizada por radioimunoensaio.
A relação % GERm/GERt foi mais alta no grupo GP (P < 0,05)
comparativamente ao grupo controle. A ingestão energética
MORFOLOGIA, FENÓTIPO, POTENCIAL PROLIFERATIVO E EXPRESSÃO GÊNICA DE CÉLULAS
MESENQUIMAIS ESTROMAIS MULTIPOTENTES OBTIDAS DA MEDULA ÓSSEA DO ADULTO, DA
VEIA DO CORDÃO UMBILICAL E DE DIVERSOS TECIDOS FETAIS
Ana Valéria Gouveia de Andrade
Orientador: Prof. Dr. Dimas Tadeu Covas
Dissertação de Mestrado apresentada em 23/10/2008
As células mesenquimais estromais multipotentes
(CTM) são células derivadas do mesoderma que podem ser
isoladas de diversos tecidos adultos e fetais. Estudos pré-
vios do nosso grupo isolaram CTM de medula óssea, veia
de cordão umbilical, veia safena e, diversos tecidos fetais.
Estas células apresentam perfil imunofenotípico caracterís-
tico e potencial de diferenciação em osteócito, adipócito e
condrócito. As CTM podem ser utilizadas para as mais di-
versas aplicações na terapia celular em função da plastici-
dade, baixo risco de induzir tumores, do status imunológico
76
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista
habitual foi mais alta no grupo GT em comparação ao GP e
ao controle, e semelhante entre esses dois grupos. Os va-
lores basais de grelina total foram mais baixas (P < 0,05) no
grupo GT, e os de PYY não foram diferentes entre os gru-
pos. A grelina basal se correlacionou positivamente (r =
0,74, P < 0,01) com o GER no grupo GP e negativamente (r =
-0,87, P < 0,05) com o GER no grupo GT. Após a refeição
teste, nos grupos GP e GT, não houve variação nas con-
centrações de grelina pós-prandial, diferentemente dos ní-
veis de PYY, que aumentaram aos 15min. A recuperação de
fome e consumo prospectivo, e o pico de plenitude ocorre-
ram mais precocemente nos grupos GP e GT em compara-
ção aos indivíduos sadios. O esvaziamento gástrico foi mais
rápido no grupo GP que no grupo controle, e o trânsito
gastrintestinal foi acelerado nos grupos GP e GT. As con-
centrações de grelina e de PYY3-36 não se correlacionaram
com as pontuações de apetite. Nossos resultados indicam
que indivíduos com GP ou GT, com IMC normal, apresen-
tam um GER aumentado, que, nos indivíduos com GT, pare-
ce ser compensado por maior ingestão energética. As sen-
sações de apetite estão preservadas nesses pacientes, e a
plenitude pós-prandial é mais intensa e precoce, o que pa-
rece estar associado ao trânsito gastrintestinal acelerado, e
não depender da integridade de nervos vagais. Nos indiví-
duos com GP ou GT, a grelina e o PYY3-36 exercem influência
pequena ou nula sobre apetite e ingestão alimentar, e a
grelina parece exercer papel importante na regulação do
GER.
e da capacidade destas células em migrar e regenerar a lon-
go prazo o tecido específico. Partindo da hipótese de que
CTM de diferentes tecidos têm potencial proliferativo e ex-
pressão gênica distintos, comparamos CTM de medula ós-
sea do adulto (CTM-MO), CTM de veia de cordão umbilical
(CTM-VCU) e CTM derivadas de cinco tecidos fetais (caró-
tida, fáscia, fígado, gônada e pele). Observamos que CTM-
MO, CTM-VCU e CTM derivadas de diversos tecidos fetais
(CTM- TF) apresentaram perfil imunofenotípico similar bem
como capacidade de diferenciação in vitro em osteócito e
adipócito. Nossos dados mostraram que as CTM-TF são
menores e possuem maior potencial proliferativo quando
comparadas às CTM-MO e CTM-VCU. A partir de resulta-
dos de expressão gênica global de CTM-MO e CTM-VCU,
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
escolhemos genes hiper ou hipoexpressos para serem ana-
lisados nas CTM. Os genes escolhidos estavam relaciona-
dos ao homing (SDF1, CXCR4, VCAM1, ITGA4), à osteogê-
nese (RUNX2 e BMP2), à angiogênese (VEGFC) e à imuno-
modulação (TGFβ1). A expressão gênica relativa mostrou
que o SDF1 estava significativamente mais expresso nas
CTM-MO do que nas CTM-VCU e nas CTM-TF. Este resul-
tado significativo para o SDF1 nas CTM-MO pode estar
relacionado com o suporte da hematopoese. O CXCR4 foi
detectado em quase todas as CTM-TF, em todas as CTM-
VCU e não foi detectado em algumas CTM-MO. O VCAM1
encontrou-se mais expresso tanto nas CTM-MO quanto nas
CTM-VCU quando comparadas às CTM-TF. O ITGA4 en-
controu-se mais expresso nas CTM-VCU do que nas CTM-
TF. O RUNX2, importante iniciador da osteogênese, assim
como o BMP2, encontraram-se mais expressos nas CTM-
MO do que nas CTM-TF, enfatizando a participação destas
INFLUÊNCIA DO TRANSPLANTE ALOGÊNICO DE CÉLULAS TRONCO HEMATOPOÉTICAS SO-
BRE O COMPORTAMENTO FUNCIONAL DO PULMÃO E A RESPOSTA ATÓPICA
Elisa Cristina Vendramini Nogueira
Orientador: Prof. Dr. João Terra Filho
Tese de Doutorado apresentada em 29/10/2008
Apesar do interesse crescente na investigação da
reconstituição do sistema imune após o transplante de célu-
las tronco hematopoéticas (TCTH) em humanos, há uma
escassez de informação sobre a transferência da imunidade
a um antígeno específico dos doadores aos receptores.
Objetivo: Avaliar a função pulmonar e a responsivi-
dade brônquica após o TCTH alogênico; verificar a influên-
cia da inibição ou transferência da resposta atópica cutânea
entre receptores e doadores do TCTH alogênico.
Material: Foram avaliados 16 voluntários recepto-
res do TCTH alogênico e seus respectivos doadores, dos
quais sete foram posteriormente afastados do estudo por
motivo de óbito e/ou sustação do TCTH.
Métodos: Questionário padrão para história de atopia.
Avaliação da função pulmonar (em espirômetro Collins mo-
delo GS Plus) com obtenção dos seguintes parâmetros: Vo-
lumes (inclusive residual) e capacidades pulmonares: capa-
cidade vital forçada e fluxos expiratórios máximos; capaci-
dade de difusão pulmonar (DLCOSB). No estudo da res-
ponsividade brônquica (teste de broncoprovocação) utili-
zamos o cloreto de metacolina (Sigma) em doses crescentes
diluídas em solução salina tamponada, administrada pelo
Sistema Koko Digi Doses, pds Instrumentation. Assim, ob-
tivemos as curvas dose (concentração de metacolina mg/
ml) x resposta (queda VEF1) e a concentração necessária
para provocar queda de 20% no volume expiratório forçado
no primeiro segundo (PC20 VEF1). Teste Cutâneo (Prick Test)
foi realizado para 19 alérgenos. Indução de escarro com so-
lução hipertônica foi empregada para caracterizar o perfil
células na diferenciação osteogênica. O TGFβ1, potente imu-
nossupressor, estava mais expresso nas CTM-MO do que
nas CTM-TF. O VEGFC, por sua vez, encontrou-se mais
expresso nas CTM-MO e nas CTM-VCU do que nas CTM-
TF. Estes achados indicam que as CTM possuem uma am-
pla distribuição no organismo, que as CTM-TF possuem
um maior potencial proliferativo e sugerem que as CTM-TF
e as CTM-VCU podem possuir uma maior habilidade migra-
tória. Estes dados também sugerem que as CTM-MO po-
dem ser mais eficientes na osteogênese e como fonte imu-
nossupressora do que as CTM-TF na terapia celular. Por
fim, estes resultados mostram que CTM obtidas de fontes
diferentes, embora semelhantes do ponto de vista imunofe-
notípico e funcional, apresentam diferenças morfológicas e
na expressão de vários genes. Estas diferenças podem ser
decorrentes da especialização funcional do estroma que pode
ocorrer nos diversos tecidos em decorrência de sua função.
celular. Dosagem sérica de IgE total medida por Fluoro-
enzimaimunoensaio (Feia) no sistema UniCAP 100 (Pharmacia
& UpJohn Diagnostics AS, Uppsala, Suécia). Doadores e
receptores foram avaliados no período pré transplante. Nos
receptores as avaliações foram repetidas no D+100, D+180 e
um ano após o TCTH.
Resultados: Foram avaliados nove receptores e seus
respectivos doadores. Não houve redução das capacida-
des e volumes pulmonares nas diferentes etapas estuda-
das. A redução da capacidade de difusão pulmonar foi ob-
servada em 44% dos receptores. Houve aumento dos fluxos
expiratórios máximos em 55% dos receptores após o HSCT.
Observamos hiperresponsividade em um receptor na avali-
ação basal e no D+360. Esse mesmo receptor apresentou
distúrbio ventilatório obstrutivo somente na avaliação basal.
Observamos que, em cinco receptores (55%) que exibiam
resposta atópica antes do TCTH, esta resposta se normali-
zou na avaliação realizada um ano após e não houve relação
com a resposta do doador. O percentual de linfócitos no
escarro induzido foi maior após o TCTH em comparação
com a etapa basal.
Conclusão: No grupo de pacientes estudados o
TCTH não induziu o aparecimento de distúrbio ventilatório.
Em metade dos pacientes houve queda da capacidade de
difusão pulmonar após o TCTH, queda esta que persistiu
até a avaliação ao término de um ano. Houve aumento dos
fluxos expiratórios máximos após o TCTH. O TCTH não es-
teve associado ao aumento da responsividade brônquica à
metacolina mesmo nos pacientes que apresentaram OECH.
Nossos resultados indicam sugerem que a normalização da
resposta atópica pode estar relacionada a um melhor con-
trole da produção de IgE pelos linfócitos T. Houve persis-
tência de um maior percentual de linfócitos no escarro indu-
zido após o TCTH.
77

Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
EFEITOS DA PARACENTESE TERAPÊUTICA NOS PARÂMETROS DE FUNÇÃO PULMONAR EM PA-
CIENTES CIRRÓTICOS COM ASCITE TENSA
Lívia Maria Camargo Silva
Orientador: Prof. Dr. Alex Vainey Callado França
Dissertação de Mestrado apresentada em 29/10/2008
É frequente a presença de dispnéia em pacientes
cirróticos com ascite. Além disto, parâmetros de função
respiratória podem estar alterados, bem como disfunção
alvéolo-capilar. Um desequilíbrio na relação ventilação/
perfusão pode ser a principal causa destes achados. No
tratamento da ascite, a paracentese terapêutica é um méto-
do seguro e eficaz para redução do líquido ascítico, sem
que haja necessidade de permanência hospitalar. A utiliza-
ção deste método terapêutico parece interferir positivamen-
te nos parâmetros de função pulmonar e de trocas gasosas.
Os objetivos deste estudo foram avaliar os parâmetros de
função pulmonar e dos gases sanguíneos arteriais de pa-
cientes cirróticos com ascite tensa e avaliar os efeitos da
paracentese terapêutica nos parâmetros de função pulmo-
ESTUDO DA ATIVAÇÃO DA COAGULAÇÃO E SUA RELAÇÃO COM AS CITOCINAS REGULADO-
RAS DA INFLAMAÇÃO NUM MODELO TRANSGÊNICO DE LEUCEMIA PROMIELOCÍTICA AGUDA
Maria Carolina Tostes Pintão
Orientador: Prof. Dr. Eduardo Magalhães Rego
Tese de Doutorado apresentada em 29/10/2008
Introdução: A coagulopatia associada à leucemia
promielocítica aguda (LPA) é caracterizada por ativação
difusa da coagulação, fibrinólise e proteólise. Os blastos
da LPA produzem citocinas inflamatórias como TNF e IL1β,
as quais regulam negativamente as propriedades anticoa-
gulantes do endotélio vascular normal e estimulam suas
propriedades pró-coagulantes. Entretanto, o papel in vivo
das citocinas pró-inflamatórias na coagulopatia associada
à LPA é desconhecido. Camundongos transgênicos hCG-
PML/RARα desenvolvem uma forma de leucemia mielóide
aguda semelhante a LPA humana do ponto de vista morfo-
lógico, molecular e quanto a resposta a diferentes terapias,
entretanto nenhum estudo até hoje determinou se há e quais
são as alterações da hemostasia neste modelo.
Objetivos: a) investigar a existência de alterações
laboratoriais sugestivas de coagulação intravascular dis-
seminada (CIVD) por meio da dosagem do complexo
trombina-antitrombina (TAT) e do inibidor do ativador do
plasminogênio-1 (PAI1); b) pesquisar a presença de trombos
e/ou hemorragia por meio da análise histopatológica e da
histoquímica; c) determinar os níveis séricos de citocinas
pró e antiinflamatórias (IL6, IL10, MCP1, INFγ, TNF e
IL12p70); d) correlacionar estes parâmetros (quando alte-
rados) com o tamanho da massa tumoral. Métodos: Foram
avaliados 12 animais leucêmicos e 22 animais selvagens
como controles. O sangue foi coletado por punção cardía-
78
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista
nar e dos gases sanguíneos arteriais. Seis pacientes do
sexo masculino, com idade média de 62 anos (de 46 a 72
anos) com diagnóstico de cirrose hepática e ascite tensa
foram incluídos neste estudo. Foram realizadas 15 avalia-
ções de prova de função pulmonar e 10 de gasometria arte-
rial antes e após a paracentese, para verificar os valores
dos volumes e capacidades pulmonares e dos gases san-
guíneos arteriais. Houve melhora significativa nos valores
da espirometria de capacidade vital, capacidade residual
funcional, volume de reserva expiratório e volume respira-
tório forçado no primeiro segundo. Não houve mudança
significativa nos valores dos gases sanguíneos arteriais.
Concluímos que, pacientes com cirrose e ascite tensa, apre-
sentam diminuição dos volumes pulmonares e disfunção
alveolo-capilar leve, porem não foram notadas alterações
nos valores dos gases sanguíneos arteriais. Após a
paracentese terapêutica, somente os valores de função pul-
monar melhoraram significantemente.
ca utilizando seringa com citrato 3,2%, e o plasma obtido
por centrifugação e estocado -80ºC até a realização dos
testes. A dosagem do TAT e da atividade do PAI1 foram
feitas por ELISA. As citocinas foram dosadas usando o
teste "BDTM CBA Mouse Inflammation Kit" (do inglês,
Cytometric Bead Array, kit inflamatório de camundon-
gos). A análise histológica foi realizada em cortes de medu-
la óssea, baço, fígado, pulmão, rim, cérebro e coração inclu-
ídos em parafina e corados com HE, enquanto a deposição
de fibrina foi avaliada por histoquímica usando a técnica da
hematoxilina ácida fosfotúngstica de Mallory (PTAH). Os
dados foram expressos pela mediana (25º-75º percentis), as
comparações entre animais leucêmicos e controles foram
feitas pelo método de Mann-Whitney (bicaudal), e as cor-
relações entre as variáveis por meio da correlação de
Pearson.
Resultados: Os níveis plasmáticos do TAT estavam
elevados nos animais leucêmicos em comparação aos sel-
vagens [48,1 ng/ml (37,7 ng/ml - 61,4 ng/ml) versus 17,7 ng/
ml (10,9 ng/ml - 34,3 ng/ml) respectivamente; p=0,010]. Ati-
vidade do PAI1 também estava elevada nos animais leucê-
micos em comparação aos controles [10,4 ng/ml (2,3 ng/ml
- 21,5 ng/ml) versus 0,8 ng/ml (0,6 ng/ml - 1,5 ng/ml), respec-
tivamente; p=0,002]. Análise histológica confirmou o diag-
nóstico de leucemia, mas não houve sinais de trombose ou
sangramento nos cortes analisados. Também não houve
sinais de deposição de fibrina pela coloração PTAH. Den-
tre as citocinas avaliadas apenas os níveis de TNF foram
significativamente diferentes nos animais leucêmicos em
comparação aos controles [18.7 pg/ml (13,8 pg/ml - 26,6 pg/
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
ml) versus 3,9 pg/ml (3,5 pg/ml - 5,8 pg/ml) em leucêmicos e
controles respectivamente; p<0,002]. Os níveis do TAT não
se correlacionaram aos do TNF, ao peso do baço (expresso
como fração do peso corporal) ou ao número de blastos na
medula óssea. Ao contrário observamos correlação direta
entre os níveis de PAI1 e o TNF (p=0,008). Conclusões:
Demonstramos pela primeira vez que os camundongos
transgênicos hCG-PML/RARα leucêmicos apresentam ati-
vação espontânea da coagulação com elevação do TAT e
ESTRESSE ORGÂNICO E ATIVIDADE ANTI E PRÓ-OXIDANTE NA QUEIMADURA AGUDA E NO
PÓS-OPERATÓRIO DE CIRURGIA REPARADORA DE SEqueLAS DO TRAUMA TÉRMICO
Paula Pileggi Vinha
Orientadora: Profª. Drª. Selma Freire de Carvalho da Cunha
Dissertação de Mestrado apresentada em 31/10/2008
Introdução: O estresse orgânico decorrente da quei-
madura é intenso e prolongado. O hipercatabolismo e o
hipermetabolismo secundários alteram o sistema de pró e
antioxidantes. Pela necessidade de reepitelização da área
doadora e receptora, a cirurgia reparadora pode desenca-
dear ou perpetuar o estresse oxidativo.
Objetivos: Em pacientes vítimas de trauma térmico
agudo (Grupo Queimadura) e naqueles em pós-operatório
de sequelas de queimaduras (Grupo Sequela), comparar o
estresse oxidativo e os níveis de anti e pró-oxidantes com
os obtidos no pré-operatório de pacientes com sequelas de
queimaduras (Grupo Controle).
Casuística e métodos: O estudo foi conduzido na
Unidade de Queimados do HCFMRP-USP. O Grupo Quei-
madura (n=11) incluiu pacientes com ≤ 48 horas do trauma
térmico agudo, SCQ ≥ 10%. Os pacientes que necessitaram
de correção cirúrgica das sequelas do trauma térmico, ocor-
rido ≥ 1ano (n=8), foram avaliados no pré-operatório (Gru-
po Controle) e após 48 horas-da cirurgia (Grupo Sequela).
Todos os voluntários foram submetidos à antropometria e
quantificação da ingestão alimentar. Foi realizada a avalia-
ção laboratorial do estado nutricional, dos marcadores da
atividade inflamatória e dos anti e pró-oxidantes.
Resultados: Em pacientes vítimas de trauma térmico
agudo, foi documentado estresse orgânico caracterizado
PROGRAMAS DE HIDROGINÁSTICA PARA PERDA DE PESO E MELHORA DE PERFIL METABÓ-
LICO EM OBESAS
Renata Pereira Calhau
Orientadora: Profª. Drª. Paula Garcia Chiarello
Dissertação de Mestrado apresentada em 31/10/2008
A hidroginástica é uma modalidade de exercício com
mínimo impacto em articulações, frequentemente utilizada
do PAI1, mas sem evidências histológicas de deposição de
fibrina. Níveis aumentados de TNF também foram detecta-
dos, e correlacionaram-se diretamente com os níveis de PAI1.
Estes dados sugerem que o TNF, mas não as demais citoci-
nas testadas, tem papel relevante na patogênese da LPA.
Além disto, nossos resultados demonstraram a utilidade
do modelo transgênico para o estudo da fisiopatologia da
coagulopatia associada à LPA, e sendo de valia no desen-
volvimento de novas intervenções terapêuticas.
pelo aumento das proteínas de fase aguda como a PCR
[8,76 (0,91 -34,54) vs 0,40 (0,01 -0,97)mg/dL, p=0,0004] e
ferritina (254,45 ± 84,25 vs 145,10 ± 88,80ng/mL, p=0,014),
além da diminuição da albumina (3,55 ± 0,65 vs 4, 16 ± 0,26g/
dL, p=0,004), da transferrina (110,67 ± 55,13 vs 238,70 ±
67,99mg/dL, p=0,0003), do colesterol (126,82 ± 32,19 vs
193,75 ± 51,64mg/dL, p=0,002) e triglicérides séricos (95,54
± 36,84 vs 168,75 ± 54,83mg/dL, p=0,003), ferro [30,00 (6,00-
73,00) vs 109,00 (70,00 -252,00)lJg/dL, p=0,0004] e zinco
(63,55 ± 23,34 vs 92,72 ± 16,65mg/dL, p=0,014). O estresse
oxidativo diminuiu os níveis séricos das vitaminas C [0,45
(034-1,30) vs 0,93 (0,48 - 1,30)mg/dL, p=0,016], A (1,55 ± 0,87
vs 3,35 ± O,72lJmol/L, p=0,0002) e da vitamina E (9,49 ± 3,4
vs 4,96 ± 1,60lJmol/g lipídeo, p=0,003). Não houve modifi-
cação nos níveis do GSH [40,37 (30,27 -87,46 ) vs 49,90
(10,09 - 54,95)lJmol/L, p= 0,48] e do MOA [1,75 (1,15 -2,74)
vs 1,77 (1,62 -6,82nmol/g proteína), p=0,043]. O procedi-
mento cirúrgico para correção das sequelas de queimadu-
ras determinou aumento da proteína C reativa [0,40 (0,01 -
0,97) vs 2,53 (0,56 -4,70)mg/dL, p=O,O1], mas não alterou
os níveis de anti e pró-oxidantes, exceto a diminuição dos
níveis séricos de vitamina A (3,35 ± 0,72 vs 2,52 ± 0,90~mol/
L, p=0,006).
Conclusões: O estresse orgânico decorrente do trau-
ma térmico agudo diminuiu as respostas anti-oxidantes. Ex-
ceto pela queda nos níveis séricos de vitamina A, a cirurgia
para correção das cicatrizes das queimaduras acarretou es-
tresse orgânico, sem modificação na resposta anti e pró-
oxidante.
na busca por perda de peso, especialmente por grandes
obesos. Neste trabalho, foram comparados os efeitos de
dois tipos de programas de hidroginástica (contínuo e
intervalado) em tempos inicial e final para as variáveis: peso,
composição corporal, gasto energético de repouso, parâ-
metros bioquímicos, registro alimentar e qualidade de vida.
79

Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
Foram selecionadas 27 mulheres entre 30 e 53 anos, com
IMC entre 30 e 54,2 Kg/mm2, acompanhadas em dois pro-
gramas: Grupo A, hidroginástica com exercícios contínuos
de intensidade moderada, duração de dois meses com 3
sessões por semana; e Grupo B: hidroginástica com exercí-
cios intervalados de intensidade alta, com mesma duração
e quantidade de sessões. Antes e ao final dos programas
foram realizados exames de calorimetria indireta, coletados
dados antropométricos (peso, altura, e circunferências),
sangue em jejum para análise de glicemia e perfil lipídico e
aplicado registro alimentar e questionário de qualidade de
vida SF-36. As voluntárias não foram orientadas a fazer
dieta hipocalórica durante a intervenção da hidroginástica,
porém foram convidadas a assistir quatro aulas de 50 minu-
tos sobre a importância da reeducação alimentar após qua-
tro semanas de intervenção. Foi utilizado um modelo de
Wilcoxon para analisar e comparar os dados, considerando
p < 0,05 para resultados estatisticamente significativos.
Quando comparado o valor das médias nos tempos inicial
(T0) e final (T1) houve diferença significativa no grupo A
TOMOGRAFIA COMPUTADORIZADA DE CRÂNIO NO ATENDIMENTO AO TRAUMATIZADO NUM SER-
VIÇO UNIVERSITÁRIO: CORRELAÇÕES ENTRE NÍVEIS DE GRAVIDADE, INDICAÇÕES E CUSTOS
Marcus Vinicius Nascimento Valentin
Orientadora: Profª. Drª. Ângela Delete Bellucci
Dissertação de Mestrado apresentada em 17/11/2008
O trabalho consiste na caracterização do nível de
gravidade e na investigação radiológica utilizada no aten-
dimento ao paciente traumatizado, por meio da análise sis-
temática de todas as tomografias computadorizadas de crâ-
nio realizadas em pacientes vítimas de trauma, atendidos
ao longo do ano de 2005. Trata-se de estudo retrospectivo,
em que foram analisados todos os pacientes de todas as
faixas etárias atendidos na Sala de Trauma da Unidade de
Emergência do Hospital das Clínicas da Faculdade de Me-
dicina de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo, no
período de 01 de janeiro a 31 de dezembro de 2005. A média
mensal de atendimento foi de 228 traumatizados, tendo sido
analisados um total de 2735 prontuários. Foram excluídos
do estudo os pacientes traumatizados que faleceram antes
da realização de qualquer avaliação radiológica e pacientes
sem registro no sistema de laudos de tomografia de crânio
emitidos eletronicamente. Os objetivos do estudo foram
caracterizar a gravidade dos pacientes em termos de índi-
ces de trauma, avaliar as indicações e o resultado das to-
mografias de crânio por meio dos relatórios eletrônicos emi-
tidos e estimar os custos, em moeda nacional, dispendidos
com o número de exames tomográficos de crânio solicita-
dos para o traumatizado, seguindo os protocolos básicos
recomendados pelo ATLS® e a literatura médica científica
disponível. Do total de 2735 pacientes vítimas de trauma
80
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista
para reduções de peso, IMC, massa gordurosa, circunfe-
rência do braço, circunferência do quadril, circunferência
da coxa, gasto energético de repouso e aumentos nos as-
pectos sociais, dor e vitalidade. No grupo B, quando com-
parados T0 e T1, foi apresentada diferença significativa
para reduções de massa gorda, circunferência do braço,
ingestão de energia total e carboidratos, e aumentos nos
aspectos vitalidade e estado de saúde e na glicemia de je-
jum, embora esta tenha se mantido dentro dos níveis de
normalidade, conforme preconizado. Não foram observa-
das outras alterações significativas em medidas corporais
e parâmetros bioquímicos após ambos os programas. Exer-
cícios contínuos na água, de intensidade moderada, são
mais eficientes para perda de peso e massa de gordura do
que exercícios intervalados na água, de intensidade alta; e
em geral, programas curtos de hidroginástica, sem restri-
ção energética orientada, são ineficientes para se alcançar
perda de peso considerável, mudança em gasto energético
ou alterações em glicemia e lipídios sanguíneos, mas pode
melhorar a vitalidade para os praticantes.
atendidos na Unidade de Emergência, foram realizados 1123
exames de TC de crânio em 763 pacientes no ano de 2005.
Os índices de trauma, que são sistemas de pontuação cria-
dos para avaliar as alterações fisiológicas, a gravidade das
lesões anatômicas e a probabilidade de sobrevida dos pa-
cientes traumatizados, também foram coletados neste estu-
do. Os índices usados foram o RTS (Revised Trauma Score),
o ISS (Injury Severity Score) e o TRISS (Trauma Score and
Injury Severity Score). Os resultados do estudo foram ob-
tidos por meio da coleta de dados dos índices de trauma,
que foram correlacionados com os resultados das tomo-
grafias de crânio, pontuação na escala de coma de Glasgow
e custos dispendidos com estes exames. Assim, foi possí-
vel caracterizar o perfil de gravidade do trauma cranioence-
fálico como leve (Glasgow 14-15), moderado (Glasgow 9-
13) e grave (3-8), inclusive com análise pormenorizada na
população pediátrica (≤ 12 anos) e idosa (≥ 60 anos), que
costumam trazer consequências graves para serviços de
atendimento a trauma. Depois da análise dos dados coleta-
dos, observamos que o número de solicitações de tomografia
de crânio em pacientes com pontuação 15 na escala de coma
de Glasgow foi elevado, quando comparamos com os crité-
rios recomendados pela literatura médica científica, assim
como as solicitações para exames-controle, que também foi
exagerada, pois nem sempre houve constatação de piora
do estado neurológico do paciente que justificasse a soli-
citação de novo exame. O trabalho conclui que o uso da
tomografia de crânio na admissão hospitalar não deve ser
utilizado em pacientes assintomáticos com pontuação 15
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
na escala de coma de Glasgow, optando-se por conduta
observatória/expectante e que exames-controle apenas de-
vem ser solicitados quando houver piora clínica durante a
CONCENTRAÇÕES DE ÁCIDOS GRAXOS E DE AMINOÁCIDOS EM TECIDO TUMORAL E TECI-
DO NORMAL ADJACENTE DE PACIENTES COM CARCINOMA ESPINOCELULAR DE MUCOSA DE
CABEÇA E PESCOÇO
Izabel de Arruda Leme
Orientador: Prof. Dr. Júlio Sérgio Marchini
Dissertação de Mestrado apresentada em 02/12/2008
A alta taxa de replicação celular no tumor, aumenta a
demanda de ácidos graxos para composição de membrana e
de nucleotídeos para síntese de DNA. Visto que a síntese
de ambos depende de intermediários do ciclo de Krebs e
que no tumor a maior parte da glicose disponível é conver-
tida a ácido lático (e não a acetil-coA, como ocorre na célu-
la normal), a glutamina passa a ser a principal fonte de inter-
mediários do ciclo de Krebs para síntese de ácidos graxos e
de nucleotídeos. Além da glutamina, outros aminoácidos
têm seu metabolismo alterado no tumor. Assim, os objeti-
vos do trabalho foram comparar o perfil de ácidos graxos e
de aminoácidos em tecido tumoral e tecido normal adjacen-
te de pacientes com carcinoma espinocelular de mucosa de
cabeça e pescoço, quantificar lipídeos totais nas amostras
e avaliar o estado nutricional dos pacientes. Participaram
da pesquisa pacientes internados junto ao Serviço de Ci-
rurgia de Cabeça e Pescoço do Hospital das Clínicas da
Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto-USP. As amos-
tras de tecido tumoral e de tecido normal foram coletadas
durante procedimento cirúrgico, após excisão do tumor. A
ESTUDO DOS GENES DA PROOPIOMELANOCORTINA E DO RECEPTOR DA MELANOCORTINA
4 EM PACIENTES COM OBESIDADE DESDE A INFÂNCIA
Daniela de Godoy Nery
Orientador: Profª. Drª. Lucila Leico Kagohara Elias
Dissertação de Mestrado apresentada em 04/12/2008
A regulação da homeostase energética envolve o
hipotálamo e a participação de circuito de sinais orexígenos
e anorexígenos. Entre esses últimos, destaca-se a participa-
ção do sistema da melanocortina em que o α-MSH,
neuropeptídeo derivado da proopiomelanocortina (POMC),
tem efeitos anorexígenos que são mediados pelo receptor 4
da melanocortina (MC4-R). Mutações e polimorfismos nes-
tes genes têm sido associados à obesidade grave de início
precoce. Os objetivos do presente estudo foram avaliar a
ocorrência de co-morbidades e realizar a análise molecular
dos genes POMC e MC4R em pacientes com obesidade de
início precoce. Foram incluídos 88 pacientes obesos (41/
observação do paciente com TCE. Desta maneira, os recur-
sos financeiros, humanos e tecnológicos poderão ser mais
bem aproveitados.
extração dos lipídeos e dos aminoácidos livres foi realizada
pelo método de Folch. A determinação de ácidos graxos
livres e totais foi realizada por cromatografia gasosa/es-
pectrometria de massa. A análise de aminoácidos foi reali-
zada por cromatografia gasosa com detector de chama. A
avaliação nutricional incluiu: aferição de peso, estatura,
dobras cutâneas e exame de impedância bioelétrica para
estimativa de composição corporal, além de avaliação da
ingestão alimentar por questionário de frequência alimen-
tar. Não foi verificada diferença na concentração de lipídeos
totais e dos ácidos palmítico, esteárico e oléico. Quanto à
análise de aminoácidos, apenas a alanina, metionina e a
lisina não mostraram diferença entre tecido tumoral e nor-
mal. Os demais aminoácidos apresentaram-se aumentados
no tumor em relação à margem. A extração de aminoácidos
a partir do método de Folch (desenvolvido para extração de
lipídeos) possibilita a determinação de ácidos graxos e de
aminoácidos livres em fragmentos bastante reduzidos de
tecido, como, por exemplo, material obtido a partir de biópsia.
O estado nutricional dos pacientes variou de eutrofia a
sobrepeso, predominando excesso de gordura corporal, ava-
liado por impedância bioelétrica. A ingestão alimentar de
macronutrientes mostrou-se adequada na maior parte da
população avaliada.
45% do sexo feminino) com idade de 11,9 ± 4,2 anos (0,8 -
21,2 anos) com início de obesidade anteriormente aos 10
anos de idade, acompanhados no Hospital das Clínicas da
Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto - USP e 88 indiví-
duos controles com peso normal e sem história familiar de
diabetes mellitus tipo 2 (DM2). Nos pacientes foi realizada
coleta das amostras de sangue para análise bioquímica e
molecular, enquanto que nos indivíduos controles realizou-
se apenas a análise molecular. A resistência à insulina foi
estimada pelo índice de resistência insulínica Homeostasis
Model Assessment (HOMA-IR) e pela relação glicose/insu-
lina. No presente estudo 42% dos pacientes avaliados se
tomaram obesos no primeiro ano de vida. A obesidade gra-
ve (Score Z do IMC > 3) foi encontrada em 16% dos casos.
Doenças relacionadas à obesidade tiveram uma frequência
elevada, com HAS em 38%, dislipidemia (DLP) em 63%, DM2
81

Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
em 5%, GJA em 8%, hiperinsulinemia em 36% e resistência
insulínica (HOMA-IR) em 51% dos casos. A concentração
plasmática de leptina foi maior nos pacientes do sexo femi-
nino, não havendo diferença entre o estádio puberal, tanto
entre as meninas quanto entre os meninos. Foram encon-
trados dois polimorfismos no gene POMC, g.4512C > T
(p.=Cys6Cys; rs8192605; frequência alélica de 0,0056) e
g.8246C > T (rs1042571; frequência alélica de 0,0056), em
pacientes obesos e duas alterações no gene MC4R, g.497A
> G (p. Tyr35Cys; frequência alélica de 0,0056) e g.987C > T
(p.=lle198lIe; frequência alélica de 0,012), em pacientes obe-
DISTRIBUIÇÃO DE GORDURA CORPORAL E PERFIL METABÓLICO EM OBESAS COM
SÍNDROME DO OVÁRIO POLICÍSTICO
Fernanda Rodrigues de Oliveira Penaforte
Orientadora: Profª. Drª. Paula Garcia Chiarello
Dissertação de Mestrado apresentada em 04/12/2008
A Síndrome do Ovário Policístico (SOP) é uma das
desordens endócrinas mais comuns no gênero feminino,
afetando entre 5-10% das mulheres em idade reprodutiva.
Grande parte das mulheres com diagnóstico de SOP, entre
50-90% (dependendo do critério diagnóstico utilizado), apre-
senta resistência a insulina (RI), e tal quadro torna-se mais
grave na presença de obesidade. Diante disto, o objetivo do
trabalho foi avaliar a composição corporal total e segmenta-
da, especialmente em região abdominal, e suas relações com
o perfil metabólico de mulheres obesas com Síndrome do
Ovário Policístico. A amostra foi composta por 31 indivídu-
os com SOP, obesas e com RI. Foram também avaliadas 15
mulheres obesas sem SOP (grupo controle), controladas em
relação à idade, peso e lMC, para comparação das variáveis
relacionadas à composição corporal perfil metabólico. Rea-
lizaram-se medidas antropométricas de peso, estatura, cál-
culo do IMC, circunferências da cintura, abdômen, quadril,
tronco e pescoço e a avaliação da composição corporal,
feita pelo método da impedância bioelétrica (BlA) total e
ETIOPATOGENIA DA OSTEODISTROFIA HEPÁTICA: ANÁLISE BIOMECÂNICA, HISTOMORFO-
MÉTRICA E IMUNOISTOQUÍMICA DE FATOR I DE CRESCIMENTO SEMELHANTE À INSULINA
(IGF-I) E DE RECEPTOR DE HORMÔNIO DE CRESCIMENTO (R-GH), EM MODELO EXPERI-
MENTAL DE COLESTASE
Francisco de Assis Pereira
Orientador: Prof. Dr. Francisco José Albuquerque de Paula
Tese de Doutorado apresentada em 08/12/2008
A fisiopatologia da osteodistrofia hepática (OH) per-
manece pouco compreendida. Nosso objetivo foi avaliar por
82
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista
sos e um polimorfismo, g.700G > A (p. Val103lle; rs2229626;
frequência alélica de 0,0056), em um indivíduo controle. As-
sim, o presente estudo indica que a obesidade de início
precoce está associada à resistência insulínica, dislipidemia
e hipertensão arterial sistêmica. Portanto, medidas de inter-
venção nutricional e mudança de estilo de vida devem ser
introduzidas precocemente, visando a redução de co-
morbidades associadas à síndrome metabólica na vida adul-
ta. Neste grupo de pacientes com obesidade desde a infân-
cia mutações ou polimorfismos nos genes POMC e MC4R
não foram encontrados em frequência significativa.
dos segmentos do braço, perna e tronco. A tomografia com-
putadorizada foi realizada para avaliar a gordura abdomi-
nal, visceral, do tronco e da perna. Não foram observadas
diferenças em nenhum dos parâmetros antropométricos e
de composição corporal avaliados entre os grupos SOP e
grupo controle. Mesmo estando em uso de medicamento
para melhora da sensibilidade à insulina, 64,5% das mulhe-
res com SOP apresentaram exames compatíveis com RI. Mu-
lheres obesas com SOP e RI apresentaram maiores quanti-
dades de gordura visceral (78,4 ± 23,5g x 60,2 ± 20,3g) e
gordura no tronco (374,0 ± 78,1g x 282,4 ± 83,4g), ambas
avaliadas pela TC, do que as sem RI, além de apresentarem
menores quantidades de gordura na região do braço (16,0 ±
2,6kg x 18,1 ± 2,1kg). O consumo alimentar das mulheres
com SOP mostrou inadequado principalmente em relação ao
consumo abaixo do recomendado de fibras, cálcio e folato e
distribuição dos tipos de lipídios na dieta (alto consumo de
gorduras saturadas e baixo de gorduras mono e poli-
insaturadas). Os resultados do trabalho indicam que o acú-
mulo de gordura no gênero feminino parece estar sendo
preferencialmente localizado na região central do corpo, in-
dependente da presença da SOP. Já a presença de RI asso-
ciada à SOP foi acompanhada de aumentos da adiposidade
tanto na região visceral quanto do tronco.
meio de ensaio biomecânico, de histomorfometria óssea e
de imunoistoquímica de IGF-I e de R-GH em tecido hepático
e em cartilagem de crescimento a etiopatogenia da OH. Qua-
renta e seis ratos machos da linhagem Wistar foram dividi-
dos em dois grupos: grupo controle operado (GCO: n = 23)
e grupo colestase (GCol: n = 23). Os animais foram sacrifi-
cados no 30º dia pós-operatório. A imuno-istoquímica de
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
IGF-I e de R-GH foi realizada em tecido hepático e em carti-
lagem de crescimento da tíbia esquerda; a análise histo-
morfométrica foi realizada na tíbia direita e o ensaio biome-
cânico foi realizado no fêmur direito. Todos os animais do
grupo colestase apresentaram alterações histopatológicas
compatíveis com cirrose biliar secundária. A rigidez e a for-
ça máxima para ocasionar a fratura na diáfise do fêmur fo-
ram respectivamente, 24% (p < 0,01) e 53% (p < 0,003) me-
nor no GCol comparado ao GCO. A avaliação histomorfo-
métrica mostrou menor volume ósseo trabecular e menor
conectividade no GCol, compatível com osteoporose. Este
grupo também mostrou aumento no tempo de mineraliza-
ESTUDO DO POLIMORFISMO GENÉTICO Val/Leu247 DA β2-GLICOPROTEÍNA I EM PACIENTES
COM SÍNDROME DO ANTICORPO ANTIFOSFOLÍPIDE
Juliana Maria Pernambuco Clímaco
Orientador: Prof. Dr. Paulo Louzada Júnior
Dissertação de Mestrado apresentada em 10/12/2008
A Síndrome do Anticorpo Antifosfolípide (SAF) é
caracterizada por eventos trombóticos arteriais e/ou veno-
sos e/ou complicações obstétricas associados à persisten-
te presença de anticorpos antifosfolípides. A β2-glicopro-
teína I (β2GPI) é o principal auto-antígeno para a produção
de anticorpos antifosfolípides envolvidos na doença. Es-
tudos prévios sugerem que o polimorfismo genético da
β2GPI pode influenciar a produção de auto-anticorpos na
SAF. O presente trabalho tem por objetivo estudar o poli-
morfismo do códon 247 do gene que expressa a β2GPI em
61 pacientes com SAF primária e 33 pacientes com SAF
secundária e em 100 controles, e sua associação com as
manifestações clínicas e laboratoriais da SAF, incluindo os
anticorpos anti-β2GPI. O polimorfismo genético Val/Leu247
EXPRESSÃO GÊNICA DIFERENCIAL EM TUMORES HIPOFISÁRIOS SECRETORES DE ACTH
Fernando Colbari do Amaral
Orientadora: Profª. Drª. Margaret de Castro
Tese de Doutorado apresentada em 15/12/2008
Introdução: A patogênese dos tumores hipofisários
tem sido extensivamente estudada, porém ainda é pouca
esclarecida. São descritas alterações em genes que contro-
lam o ciclo celular, em genes envolvidos na diferenciação e
no desenvolvimento hipofisário, na apoptose, além de fa-
tores hipotalâmicos e de crescimento. Recentemente, a ex-
pressão diferencial de microRNAs (miRNAs) também tem
sido associada à tumorigênese hipofisária.
Objetivos: avaliar a expressão gênica diferencial em
corticotrofinomas em relação ao tecido hipofisário normal,
ção, caracterizando distúrbio de mineralização. As concen-
trações séricas de IGF-I foram menores no sacrifício quan-
do comparado ao basal no GCol (Início do experimento: GCol
= 1816 ± 336 vs Final do experimento: GCol = 1062 ± 191 ng/
ml; p < 0,0001). Este grupo apresentou maior expressão de
IGF-I (p < 0,0002) e menor expressão de R-GH (p < 0,0001) no
tecido hepático do que o grupo GCO. Na cartilagem de cres-
cimento, a expressão de IGF-I (p < 0,0001) e R-GH (p < 0,04)
foram significativamente maiores no GCO. Nossos dados
reforçam que a osteoporose é o principal componente da
OH e que alterações no sistema IGF-I endócrino e parácrino
têm papel chave neste processo.
foi determinado pela reação da polimerase em cadeia e di-
gestão de seu produto por enzima específica. A presença
de anticorpos anti-β2GPI foi detectada por teste imunoen-
zimático (ELISA). Foi utilizado o teste exato de Fischer para
análise dos resultados. Observou-se aumento na frequên-
cia do alelo V e do genótipo VV no grupo total de pacientes
com SAF em comparação com o grupo controle (P = 0,0068;
OR = 1,781 e P < 0,0001; OR = 6,413, respectivamente). Os
pacientes com trombose arterial e venosa apresentaram o
genótipo VV significativamente mais frequente que o gru-
po controle saudável (52% e 44%, respectivamente, vs.
13%). Os pacientes com SAF com anticorpos anti-β2GPI
presentes apresentaram o genótipo VV mais frequentemente
que o controle saudável (P < 0,0001; OR = 8,179). Os resul-
tados deste estudo sugerem que o genótipo VV do códon
247 do gene da β2GPI pode desempenhar papel na produ-
ção de anticorpos anti-β2GPI e, talvez, na expressão de trom-
bose arterial e venosa nos pacientes com SAF.
para selecionar genes candidatos envolvidos no processo
de tumorigênese; validar alguns dos genes candidatos di-
ferencialmente expressos; analisar a expressão relativa de
um painel de miRNAs nas amostras de corticotrofinomas
em comparação ao tecido normal; analisar a associação de
genes e miRNAs diferencialmente expressos com diâmetro
tumoral e remissão após-cirurgia transesfenoidal.
Material e Métodos: utilizamos a técnica de análise
seriada da expressão gênica (SAGE). Para confecção das
bibliotecas de cDNA três amostras de hipófises normais e
duas de corticotrofinomas foram utilizadas. Por análise de
bioinformática, selecionamos os genes diferencialmente ex-
pressos T-PIT, RASD1, GLUL, PCDH21, GJA1, F11R e DLK1
para validação por PCR em tempo real (qPCR). A expessão
83

Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
dos miRNAs let-7a, miR-15a, miR-16, miR-21, miR-141, miR-
143, miR-145 e miR-150 também foi analisada por qPCR. Para
validação desses genes e miRNAs foram utilizadas 14 amos-
tras tumorais e 7 hipófises normais.
Resultados: Não houve validação dos genes T-PIT,
RASD1, GLUL, PCDH21, GJA1, F11R nas amostras de
corticotrofinomas pela qPCR; o gene DLK1 apresentou uma
hipo expressão em relação ao tecido normal. Não houve
associação entre a expressão de nenhum desses genes com
tamanho tumoral ou remissão pós-cirurgia. Nosso trabalho
demonstrou uma redução significativa da expressão dos
miR-145 (1,8x), miR-21 (2,2x), miR-141 (2,8x), miR-150 (3,2x),
let-7a (3,4x), miR-16 (4,6x), miR-15a (5,0x) e miR-143 (8,0x)
nas amostras de corticotrofinomas em relação ao tecido
normal. Houve uma associação entre a expressão do miR-
141 e remissão pós-cirurgia, assim como a expressão do
miR-143 e tamanho tumoral. Observamos, ainda, uma corre-
lação negativa da expressão de let-7a com a de GLUL e uma
correlação positiva com a expressão de DLK1; a expressão
de miR-16 apresentou correlação negativa apenas com a de
AVALIAÇÃO DO EFEITO DA TIAMINA OU BENFOTIAMINA SOBRE SISTEMA ANTIOXIDANTE
HEPÁTICO EM MODELO EXPERIMENTAL AGUDO DE ALCOOLISMO
Guilherme Vannucchi Portari
Orientador: Prof. Dr. Alceu Afonso Jordão Júnior
Tese de Doutorado apresentada em 15/12/2008
Os mecanismos propostos para a gama de ações
deletérias provocadas pelo etanol são decorrentes de alte-
rações bioquímicas ocorridas nos hepatócitos tais como:
1) aumento da geração de radicais livres; 2) produção exa-
cerbada de intermediários de alta reatividade vindos de
peroxidação de macromoléculas, e 3) depleção de substân-
cias da defesa antioxidante. A utilização de antioxidantes
visando restaurar o sistema antioxidante é uma das linhas
de tratamento para os danos provocados pelo etanol. Re-
centemente, estudos têm apontado para um possível papel
antioxidante da tiamina e benfotiamina com efeitos benéfi-
cos principalmente em doenças crônicas-degenerativas.
ESTUDO VIDEOFLUOROSCÓPICO DA DEGLUTIÇÃO NA DOENÇA DE CHAGAS
Carla Manfredi dos Santos
Orientador: Prof. Dr. Roberto Oliveira Dantas
Dissertação de Mestrado apresentada em 17/12/2008
Introdução: As alterações motoras do esôfago pre-
sentes na doença de Chagas podem ocasionar sintomas de
alteração da deglutição como a disfagia. A disfagia na do-
ença de Chagas está relacionada ao envolvimento esofágico,
84
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista
TPIT; a expressão de miR-21 apresentou uma correlação
negativa com as de TPIT, RASD1 e GLUL; a expressão de
miR-141 apresentou uma correlação negativa com a de GLUL
e de GJA1, além de uma correlação positiva com a de DLK1.
As expressões de miR-15a, miR-143, miR-145 e miR-150 não
apresentaram correlação com as de nenhum dos genes es-
tudados.
Conclusões: Nossos resultados demonstram que o
critério de escolha dos genes diferencialmente expressos
não foi útil para validação dos possíveis genes envolvidos
na gênese dos corticotrofinomas. A expressão reduzida dos
miRNAs e a associação da expressão de alguns deles com
genes envolvidos na proliferação e diferenciação celular,
assim como com remissão e tamanho tumoral sugerem um
possível papel dos mesmos na tumorigênese corticotrófica.
Entretanto, a necessidade de aprimoramento na seleção de
genes candidatos diferencialmente expressos e o desco-
nhecimento de genes alvo para cada miRNA dificultam o
entendimento das funções biológicas desses genes e dos
miRNAs na tumorigênese corticotrófica.
Assim este estudo verificou o papel da tiamina ou benfo-
tiamina no sistema antioxidante hepático em ratos com in-
toxicação aguda por etanol. Verificou-se que o tratamento
com tiamina e benfotiamina teve influencia no metabolismo
do etanol ficando este mais circulante sem metabolização.
Os tratamentos foram eficazes em aumentar os valores he-
páticos de tiamina, o que resultou em diminuição dos da-
nos hepáticos e diminuição de vitaminas antioxidantes do
fígado. Além disso, a benfotiamina foi capaz de aumentar
em 25 vezes os níveis eritrocitários de tiamina não fosfatada
em relação à administração de tiamina hidrocloreto. Desta
maneira ficou constatada a atividade antioxidante da tiamina
frente ao estresse oxidativo provocado pela intoxicação
aguda por etanol e a alta biodisponibilidade da benfotiami-
na. Assim sendo seria recomendada a utilização da benfo-
tiamina como antioxidante mais biodisponível que a tiamina.
entretanto, alterações orofaringenas têm sido demonstra-
das nestes pacientes.
Objetivo: Estudar as fases oral e faringeana da de-
glutição em pacientes com sorologia positiva para doença
de Chagas e comparar com indivíduos voluntários assinto-
máticos.
Metodologia: Foram estudados 17 pacientes com
doença de Chagas (idades entre 31-67 anos, média 53,3
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
anos) e 15 sujeitos saudáveis (idades entre 35-69 anos,
média 55,2). Todos os doentes apresentavam queixa de
disfagia e possuíam o diagnóstico de megaesôfago a partir
da radiografia contrastada. Os dois grupos responderam a
um questionário sobre a história pregressa da queixa de
deglutição e posteriormente foram submetidos a uma avali-
ação clínica fonoaudiológica. Após este procedimento, foi
realizado o exame videofluoroscópico da deglutição a fim
de observar sua conformação anatômica e funcional, com
registro na velocidade de 60 quadros por segundo. Foram
realizadas deglutições em duplicata nos volumes de 5 e 10
ml de sulfato de bário na consistência líquida e pastosa,
nos dois grupos. Este exame permitiu analisar a deglutição
de forma qualitativa e quantitativa, sendo possível a obser-
vação dos seguintes parâmetros: movimento da base da
língua, trânsito oral, trânsito faríngeo, duração do movi-
mento do osso hióide, trânsito pelo esfincter superior do
esôfago, depuração faringeana e trânsito orofaringeano.
Além disso, pôde-se observar ocorrência de escape poste-
rior do alimento, resíduo oral, resíduo faríngeo, penetração
e aspiração laringotraqueal.
Resultados: Quanto aos resultados da avaliação clí-
nica fonoaudiológia, a elevação laríngea foi reduzida na
deglutição do alimento líquido e pastoso no grupo chagá-
sico em relação ao grupo controle (p < 0,01). O grupo cha-
AVALIAÇÃO CLÍNICA, LABORATORIAL E MOLECULAR DE PACIENTES COM DOENÇA ADRE-
NOCORTICAL NODULAR PIGMENTADA PRIMÁRIA OU COMPLEXO DE CARNEY
Marcelo Pinho Bittar
Orientador: Prof. Dr. Ayrton Custódio Moreira
Dissertação de Mestrado apresentada em 17/12/2008
O Complexo de Carney (CNC) é uma neoplasia en-
dócrina múltipla que cursa com tumores endócrinos, cardí-
acos e neurais, além de lesões mucocutâneas pigmentadas.
Entre os tumores endócrinos, a doença adrenocortical no-
dular pigmentada primária (PPNAD) é o mais frequente. A
transmissão é autossômica dominante, enquanto que al-
guns casos são esporádicos. O gene PRKAR1A foi identi-
ficado no lócus 17q22-24 e mutações nesse gene são ob-
servadas em 60% dos pacientes com CNC. O objetivo des-
te trabalho foi a avaliação clínica, laboratorial e molecular
de 1 paciente com PPNAD isolado e 4 com CNC, pertencen-
tes a 4 famílias seguidas no ambulatório de Endocrinologia
do HCFMRP-USP. Os dados clínicos e os achados anáto-
mo-patológicos das adrenais foram avaliados, retrospecti-
vamente, por meio de consulta aos prontuários; a presença
de doenças endócrinas pela realização de exames laborato-
riais específicos. A presença de doenças associadas foi
avaliada por meio de ecocardiograma, ultra-som de tireóide
e imagem da sela túrcica. Para avaliação molecular, DNA
genômico foi extraído dos pacientes com PPNAD, os éxons
gásico realizou manobras de deglutição múltipla nas con-
sistências líquida e pastosa em comparação ao grupo sau-
dável (p < 0,01). Os pacientes com megaesôfago grau II
apresentaram mais queixa de alteração respiratória durante
a deglutição (p < 0,05) e de perda de peso (p < 0,0 1) quando
comparados aos pacientes com megaesôfago grau I. O exa-
me videofluoroscópico mostrou diferenças estatísticas sig-
nificativas para os seguintes tempos das variáveis estuda-
das: trânsito oral, trânsito faríngeo, trânsito pelo esfincter
superior do esôfago, depuração faringeana e trânsito oro-
faringeano (p < 0,05), sendo o tempo mais prolongado para
o grupo de doentes. Essas diferenças foram encontradas
para a consistência pastosa e no volume de 10ml, exceto
para o TOF cuja diferença também ocorreu para a consis-
tência líquida, no volume de 5ml e no TO, na consistência
líquida e no volume de 10ml. Qualitativamente, houve so-
bra de resíduo oral na deglutição de pastoso e no volume
de 10ml para o grupo chagásico (p < 0,02).
Conclusão: Conclui-se nesse trabalho que o tempo
de trânsito do alimento foi mais prolongado no grupo de
doentes em relação ao grupo controle, principalmente na
consistência pastosa e em volume maior (10ml). Esses resul-
tados sugerem a existência de mecanismos compensatórios
nos pacientes com doença de Chagas a fim de amenizar os
sintomas de disfagia decorrentes da doença do esôfago.
codificadores do gene PRKAR1A e suas regiões de tran-
sição éxon/íntron foram amplificados por PCR (reação em
cadeia de polimerase) e os fragmentos submetidos ao se-
quenciamento automatizado. Para comparação, este gene
também foi sequenciado em 50 indivíduos normais. A
idade ao diagnóstico variou de 4 a 25 anos (16,4 ± 7,8 anos).
Três pacientes apresentaram manchas pigmentadas; dois
pacientes apresentaram mixomas cutâneo-mucosos e 1 pa-
ciente desenvolveu mixoma cardíaco; 1 paciente apresen-
tou tumor testicular de células de Leydig. A avaliação por
imagem das adrenais identificou a presença de micronódulos
em 4 pacientes e volume aumentado em três deles. Encon-
tramos 2 novas mutações no gene PRKAR1A, IVS4+5G > A
e g.149A > G, em 2 de 4 famílias estudadas. Observamos
uma distribuição etária bimodal da PPNAD, com grande
variabilidade nas manifestações clínicas e laboratoriais.
Em 75% das famílias, a PPNAD esteve associada ao Com-
plexo de Carney. O estudo genético, com o achado da mu-
tação g.149A > G, permitiu o diagnóstico de Complexo de
Carney em uma paciente previamente diagnosticada como
PPNAD isolada. Possibilitou, ainda, a detecção de muta-
ção IVS4+5G > A no gene PRKAR1A em 2 filhas assintomá-
ticas de outra paciente, permitindo aconselhamento gené-
tico apropriado.
85

Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
ESTUDO DO POTENCIAL TERAPÊUTICO DO TRANSPLANTE AUTÓLOGO DE CÉLULAS TRONCO
HEMATOPOÉTICAS EM UM MODELO EXPERIMENTAL DE DOENÇA INFLAMATÓRIA INTESTINAL
Dannielle Fernandes Godoi
Orientador: Prof. Dr. Júlio César Voltarelli
Tese de Doutorado apresentada em 18/12/2008
Introdução e Objetivos: O transplante de células tron-
co hematopoéticas (TCTH) assim como quimioterapia em
altas doses tem sido explorado como terapia para várias
condições refratárias imuno-mediadas humanas, incluindo
as doenças inflamatórias intestinais (DII). Apesar disso, o
exato mecanismo imunológico pelo qual as células de me-
dula óssea ou a imunossupressão levam à remissão destas
doenças ainda não está claro. Neste trabalho, nós investi-
gamos o papel destas terapias na modulação da inflamação
da mucosa do intestino em um modelo experimental de DII.
Métodos: A colite experimental foi induzida em ca-
mundongos pela infusão intra-retal de 2,4,6-ácido
trinitrobenzenesolfonico (TNBS). Após 24 horas os animais
foram submetidos a imunossupressão com ciclofosfamida
(Cy -200mg/Kg) ou por irradiação corporal total (ICT -7Gy).
Após 24 e 12 horas da imunossupressão com Cy e ICT
INFLUÊNCIA DA DOENÇA PERIODONTAL E SEU TRATAMENTO NA ATIVIDADE DA ARTRITE
REUMATÓIDE
Márcia de Noronha Pinho
Orientador: Prof. Dr. Júlio César Voltarelli
Tese de Doutorado apresentada em 18/12/2008
Objetivo: Este estudo avaliou a influência da doen-
ça periodontal (DP) na artrite reumatóide (AR), através de
exames clínicos e laboratoriais, antes e depois do tratamen-
to periodontal não cirúrgico.
Materiais e Métodos: 75 pacientes, entre 35-60 anos,
divididos em 5 grupos, foram analisados de acordo com a
situação sistêmica e periodontal. Os parâmetros clínicos e
laboratoriais coletados nos exames: inicial, 3 e 6 meses re-
ceberam tratamento estatístico. As correlações para averi-
guar a associação das reduções da profundidade de son-
dagem (PS), placa microbiana (PM) e sangramento à son-
dagem (SS) com as reduções de α-1-glicoproteína ácida
(alfa1), proteína C-reativa (PCR), velocidade de hemossedi-
mentação (VHS), questionário de saúde para avaliação de
doenças reumáticas (HAQ), avaliação da atividade da do-
ença (DAS28) e SF-36 foram também analisadas.
Resultados: Comparando os grupos com AR e DP,
Grupo 1 (AR+DP+TR+) e Grupo 2 (AR+DP+TR-), aqueles
que receberam tratamento periodontal tiveram reduções es-
tatisticamente significativas em relação a PS aos 3 meses
86
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista
respectivamente, 1,6 x 107 células de medula óssea foram
infundidas nos grupos TCTH. Os animais dos diferentes
grupos foram estudados por 60 dias.
Resultados: Tanto os grupos que receberam TCTH
como os que receberam imunossupressão por Cy e ICT
isoladamente tiveram redução significativa do quadro clí-
nico e histológico da colite experimental mas somente o
TCTH resultou em aumento da sobrevida comparado com
o grupo não tratado. Um decréscimo acentuado nas células
CD4+ no infiltrado inflamatório nos dias + 7 e +14 e nas
células CD8+ no dia 7 foi encontrado em ambos os trata-
mentos aliado a marcante redução nas citocinas pro-infla-
matórias como TNF-α, IFN-γ, IL-1β, IL 12p70 e IL-17, sobre-
tudo nos grupos Cy e Cy + TCTH.
Conclusões: Nossos achados indicam que a Cy em
alta dose assim como a ICT associadas ou não com TCTH
são efetivas em reduzir os quadros clínico e patológico
associados à DII por uma proeminente contra- regulação
do perfil de citocinas inflamatórias Th1 porém apenas o
TCTH resultou em diminuição da taxa de mortalidade asso-
ciada à colite.
(p=0,0055) e aos 6 meses (p=0,0066). Em relação a % de
sangramento à sondagem as reduções foram estatistica-
mente significantes aos 6 meses (p=0,0128) e para % de
placa microbiana aos 3 meses (p=0,0128) e aos 6 meses
(p=0,0002) em favor do grupo raspado. A melhora no Grupo
1 após o tratamento periodontal não-cirúrgico (TPNC) foi
estatisticamente significante no controle periodontal, mas
os exames sistêmicos, embora reduzidos, não foram signifi-
cativos. O tratamento periodontal não apresentou correla-
ção com a melhora dos exames laboratoriais, nem com os
exames de qualidade de vida (HAQ, DAS 28, SF 36), mas
uma melhora nos exames foi evidente nas comparações
intra-grupos. A melhora periodontal influenciando os exa-
mes laboratoriais foi mais fácil de ser observada no Grupo 4
(AR-DP+TR+). Comparando o Grupo 1 com Grupo 3
(AR+PT) houve diferença estatisticamente significante so-
mente no DAS28 no tempo inicial e aos 3 meses. Aos 6
meses essa diferença não foi estatisticamente significante.
Conclusões: Não foi possível verificar uma correla-
ção direta do tratamento periodontal na atividade da doen-
ça sistêmica, mas pode-se constatar a sua importância, evi-
tando a extração múltipla dos dentes nos pacientes com
AR, o que, obviamente, ocasionará maior conforto para os
mesmos, evitando uma possível situação de estresse.
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
INADEQUAÇÃO TERAPÊUTICA DA ANTICOAGULAÇÃO COM ENOXAPARINA EM DECORRÊNCIA
DE ERRO NA ESTIMATIVA INICIAL DE PESO CORPORAL
Leon Gustavo dos Reis Macedo
Orientador: Prof. Dr. Antonio Pazin Filho
Dissertação de Mestrado apresentada em 19/12/2008
A enoxaparina vem ganhando espaço como anti-
coagulante de eleição em situações para as quais se utiliza-
va heparina não fracionada previamente. Além das evidên-
cias que sugerem igualdade ou até superioridade em ter-
mos de desfechos clínicos, a grande vantagem da enoxapa-
rina reside na facilidade de sua posologia. Para a anticoa-
gulação plena ela deve ser prescrita de acordo com o peso
corporal. Porém, na maioria das vezes utiliza-se o peso esti-
mado pelo médico ao invés do peso real. Já existem evidên-
cias de que em síndromes coronarianas agudas de alto ris-
co os pacientes que não estão anticoagulados adequada-
mente com enoxaparina (atividade anti-Xa ≤ 0,5 UI/ml) apre-
sentam risco aumentado de evolução desfavorável seme-
lhante a idade avançada ou a disfunção ventricular esquer-
da. Este estudo tem como objetivo primário avaliar a ade-
quação da anticoagulação com a enoxaparina quando se
utiliza o peso estimado para sua prescrição (fase I) (ativida-
de anti-Xa colhido após a segunda dose) e como secundá-
rio avaliar outros métodos de estimativa de peso, como
peso relatado e peso obtido por fórmulas antropométricas
em comparação ao peso real e evolução do nível de antico-
agulação após reajuste de dose em três grupos (A: dose
mantida; B: ajuste pelo peso real; C: ajuste pelo peso obti-
do pela fórmula) (fase II) (anti-Xa colhido após duas doses
já corrigidas). Vinte e oito pacientes foram analisados na
fase I, e divididos em dois grupos: grupo 1 (ausência de
subdose de enoxaparina com erro >10% em relação ao peso
FARMACOLOGIA
ENVOLVIMENTO DAS NEUROTRANSMISSÕES GLUTAMATÉRGICA E NITRÉRGICA DA SUBS-
TÂNCIA CINZENTA PERIAQUEDUTAL DORSOLATERAL E DO NÚCLEO PRÉ-MAMILAR DORSAL
NA ELABORAÇÃO DE RESPOSTAS DEFENSIVAS
Daniela Cristina de Aguiar
Orientador: Prof. Dr. Francisco Silveira Guimarães
Tese de Doutorado apresentada em 03/10/2008
O óxido nítrico (NO), sintetizado pela sintase do óxi-
do nítrico neuronial (NOSn), possui um papel modulador
em reações defensivas, possivelmente facilitando a ansie-
dade. A NOSn está localizada em estruturas envolvidas com
real, ou seja, dose recebida ≥ 0,9 mg/Kg/dose) e grupo 2
(presença de subdose de enoxaparina com erro >10% em
relação ao peso real, ou seja, dose recebida < 0,9 mg/Kg/
dose) uma vez que a dose adequada seria de 1 mg/Kg/dose
de 12/12 horas. Das características basais dos dois grupos,
não houve diferença em relação a idade, sexo e creatinina e
houve diferença em relação à média de peso (grupo 1: 67,1±
14,0 Kg e grupo 2: 86,1± 18,8 Kg) (p=0,04). Vinte e um pa-
cientes foram do grupo 1 (75%) e todos eles estavam ade-
quadamente anticoagulados (atividade anti-Xa ≥ 0,5 UI/
mL). Sete pacientes foram do grupo 2 (25%) e destes, qua-
tro (57%) estavam inadequadamente anticoagulados (ati-
vidade anti-Xa < 0,5 UI/mL) (p< 0,05). Dos Vinte e oito pa-
cientes, apenas 24 (85,7%) souberam relatar seu peso, e
destes, dois (8,3%) o subestimaram com erro >10%. Dos
vinte e oito pacientes analisados, quatro (14,3%) tiveram
seu peso subestimado pela fórmula, com erro >10% em re-
lação ao peso real. Na fase II do estudo(após duas doses
iniciais mais duas doses corrigidas), todos os 24 pacientes
atingiram nível adequado de atividade anti-Xa (≥ 0,5 e < 1,2
UI/mL) independente da forma utilizada para ajuste da dose
(grupos A,B e C). Como conclusão, o presente trabalho
salienta a necessidade da avaliação objetiva do peso cor-
poral (pesagem dos pacientes) para prescrição de enoxapa-
rina com o objetivo de heparinização plena (atividade anti-
Xa ≥ 0,5 e < 1,2 UI/ml), uma vez que a estimativa subjetiva
deste peso determinou uma inadequação da anticoagula-
ção em cerca de 14% do total dos pacientes analisados. Na
impossibilidade de pesar o paciente, o peso relatado seria a
segunda opção e para os que não souberam relatar seu
peso a terceira opção seria a fórmula que utilizamos.
reações defensivas, como por exemplo, a substância cin-
zenta periaquedutal dorsolateral (SCPdl) e o núcleo pré-
mamilar dorsal (PMd). Antagonistas de receptores NMDA
(rNMDA) de glutamato e inibidores da NOS injetados intra-
SCPdl produzem efeitos ansiolíticos. A exposição a estímu-
los ameaçadores induz a ativação de células produtoras de
NO nesta região. A SCPdl recebe uma densa projeção do
PMd, também envolvido com reações de defesa. Lesões
87

Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
bilaterais desse núcleo abolem a expressão de respostas
defensivas durante a exposição ao predador. Pouco se sabe
a respeito dos neurotransmissores envolvidos na media-
ção desses comportamentos pelo PMd, o qual também ex-
pressa receptores ionotrópicos de glutamato. Assim, o ob-
jetivo geral do presente trabalho foi de investigar a partici-
pação do NO e do glutamato na SCPdl e no PMd nas res-
postas defensivas. Para tanto, testou-se a hipótese de que a
administração de inibidores da NOSn (7-nitroindazole, 7-NI,
ou N-propil-L-arginina, NP) intra-SCPdl atenuaria as res-
postas defensivas promovidas pela exposição a um evento
ameaçador inato, um gato. Verificou-se também, a hipótese
de que o tratamento com AP- 7 (antagonista de rNMDA)
ou NP intra-SCPdl poderiam diminuir as reações comporta-
mentais defensivas, além do número de células ativadas,
bem como a ativação de neurônios NOSn postivos em regi-
ões relacionadas com o comportamento defensivo após a
exposição ao gato. A ativação neuronial foi verificada pela
detecção da imunorreatividade à proteína c-FOS (IR-Fos) e
a presença da NOS através da imunorreatividade à proteína
NOS. Por último, testou-se a hipótese de que o tratamento
com AP- 7 ou NP intra-PMd atenuaria as reações comporta-
ESTUDO DO ENVOLVIMENTO DA PGE2 NA RESPOSTA FEBRIL INDUZIDA POR LPS, ENDOTELI-
NA-1 E VENENO DE Tityus Serrulatus
David do Carmo Malvar
Orientadora: Profª. Drª. Glória Emília Petto de Souza
Dissertação de Mestrado apresentada em 07/10/2008
Vários trabalhos demonstram que a febre induzida
pelo LPS requer a produção periférica de citocinas e central
de prostaglandina (PG)E2 e PGF2α por uma via sensível à
indometacina. Entretanto, vários estudos de nosso grupo
sugerem a existência de uma via insensível à indometacina
e independente de PGE2, devido ao fato de que não existe
relação entre a febre induzida pela endotelina (ET)-1 e o
aumento das concentrações de PGE2 no fluido cerebroespi-
nhal (CSF). Além disso, também mostramos que o veneno
de Tityus Iserrulatus (vTs) causa uma resposta febril que
não é alterada pelos inibi dores de ciclooxigenase (COX)
ibuprofeno e celecoxib. Adicionalmente, a febre induzida
pela ET -1 ou vTs foi abolida pela dipirona, uma droga anti-
pirética que parece produzir seu efeito por mecanismo in-
dependente da inibição de COX. Dessa forma, o objetivo
desse estudo foi avaliar a relação entre a quantidade de
PGE2 no CSF e no hipotálamo durante a febre induzida pelo
LPS, ET-1 e vTs em ratos, bem como o efeito da indometaci-
na e da dipirona nesses parâmetros. Além disso, a partici-
pação do receptor EP3 para PGE2 na febre induzida pelo LPS,
ET-1 e vTs também foi avaliado. O CSF e o hipotálamo foram
coletados de acordo com a curva-temporal da resposta fe-
bril induzida por cada um desses estímulos. O presente es-
88
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista
mentais promovidas pela presença do gato. A exposição ao
gato promoveu respostas defensivas que foram atenuadas
pelo tratamento intra-SCPdl com inibi dores da NOSn e com
o AP7. Adicionalmente, houve aumento das células IR-Fos
da SCPdl, no PMd e no núcleo paraventricular do hipotála-
mo (PVN), e aumento na porcentagem de células duplas (%
duplas) marcadas na SCP e no PMd. O tratamento com AP-
7 e com o NP intra-SCPdl atenuou a ativação celular na SCP
e no PVN observada pela exposição ao gato, enquanto que
houve aumento nas células IR-Fos e na % duplas no PMd.
Além disso, observamos que o tratamento de AP- 7 ou NP
intra-PMd também atenuou as reações defensivas obser-
vadas pela exposição ao predador. Em conclusão, os resul-
tados do presente trabalho sugerem que o antagonismo da
neurotransmissão glutamatérgica e nitrérgica na SCPdl e
no PMd pode atenuar as respostas comportamentais
induzidas pela exposição ao predador. Além disso, a admi-
nistração intra-SCPdl de AP- 7 ou NP é capaz de reduzir a
ativação celular promovida pela exposição ao gato nesta
estrutura, sem alterar, ou mesmo aumentando, essa ativa-
ção em outras regiões relacionadas com o comportamento
defensivo como o PMd.
tudo demonstrou que a injeção de LPS (5µg/kg, i.v.) e ET-1
(1 pmol/rat, i.c.v.) induziu uma resposta febril acompanha-
da de um aumento das concentrações de PGE2 no CSF e no
hipotálamo, enquanto que a injeção de vTs (150 µg/kg, i.p.)
induziu febre sem alterar as concentrações de PGE2 no CFS
e no hipotálamo. A indometacina (2 mg/kg, i.p.) somente
reduziu a resposta febril induzida pelo LPS na terceira hora,
entretanto preveniu o aumento de a PGE2. no hipotálamo e
no CSF na segunda e terceira horas após a injeção de LPS.
Como esperado, a indometacina não modificou a febre indu-
zi da pela ET-1 e vTs, porém diminuiu a concentração de
PGE2 no CFS e no hipotálamo induzido pela ET-1. Por outro
lado, a dipirona (120 mg/kg, i.p.) inibiu a resposta febril
induzida pelo LPS, ET-1 e vTs e reduziu a concentração de a
PGE2. no CSF durante a febre induzida pelo LPS e ET-1, sem
modificar a quantidade de PGE2 no hipotálamo após a inje-
ção de LPS e ET-1. Adicionalmente, observamos que a inje-
ção intracerebroventricular do antagonista seletivo de re-
ceptores EP3 L-826266 inibiu a febre induzida pela PGE2
(35%), mas não alterou a febre induzida pelo LPS, ET-1 ou
vTs. Em síntese, esses resultados indicam que nem todas as
febres dependem de PGE2 para o seu desenvolvimento (ex.,
febre induzida pela ET-1 e vTs) e que a dipirona exerce seu
efeito antipirético sem reduzir a quantidade de PGE2 no hi-
potálamo. Uma vez que a dipirona aboliu a febre insensível
à indometacina induzida pela ET-1 e a febre induzida pelo
vTs, que não aumenta a concentração de PGE2 no CSF ou
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
tecido hipotalâmico, é possível enfatizar que o efeito antipi-
rético da dipirona pode depender do bloqueio da síntese/
liberação de outros mediadores que não a PGE2. Além disso,
ENVOLVIMENTO DE CANABINÓIDES ENDÓGENOS NA RESPOSTA FEBRIL
Daniel Fraga
Orientadora: Profª. Drª. Glória Emília Petto de Souza
Tese de Doutorado apresentada em 08/10/2008
O envolvimento dos endocanabinóides no controle
da temperatura corporal e na resposta febril ainda não esta-
vam bem claros. Por esta razão, o presente estudo teve
como objetivo investigar o envolvimento dos canabinóides
endógenos no controle da temperatura corporal e na res-
posta febril. As alterações na temperatura corporal foram
medidas em intervalos de 30 minutos até a sexta hora após
a administração do tratamento, através de uma sonda retal
em ratos Wistar machos. Todos os pré-tratamentos foram
administrados 30 minutos antes do tratamento. Tanto a ad-
ministração intracerebroventricular (0,01, 0,1, 1 e 10 µg/2 µI,
i.c.v.) como intrahipotalâmica (0,1, 1, 10 e 100 ng/0,2 µI, i.h.)
de nandamida (AEA) induziram aumentos dose-dependen-
tes na temperatura corporal. O aumento na temperatura
corporal induzido pela AEA (1 µg, i.c.v.) foi precedido e
acompanhado por uma redução da temperatura da pele da
cauda dos animais o que foi causado por uma significativa
vasoconstrição representada pelo índice de perda de calor,
(IPC). A dose de 1 µg, i.c.v. de AEA foi selecionada para os
demais experimentos. O URB597 (0,001, 0,01, 0,1, 1, 10, 100
e 1000 ng/2 µI, i.c.v.), inibidor da enzima amido hidrolase
dos ácidos graxos (FAAH, do inglês fatty acid amide
hydrolase), promoveu uma curva em forma de sino. O
agonista CB1 seletivo ACEA (0,001, 0,01, 0,1 e 1 µg/2 µI,
i.c.v.) também induziu um aumento na temperatura corporal
em forma de sino. O pré- tratamento dos animais com o
antagonista CB1 seletivo, AM251 (1,0, 5,0 e 10,0µg/2µI, i.c.v.)
reduziu de forma dose-dependente a resposta febril induzida
pela ABA e ACEA 0,01µg, i,c.v. A dose 5 µg de AM251 foi
MECANISMOS MOLECULARES ENVOLVIDOS NO EFEITO ANTINOCICEPTIVO PRODUZIDO
PELA AÇÃO PERIFÉRICA DOS OPIÓIDES : ATIVAÇÃO DA VIA DE SINALIZAÇÃO INTRACELULAR
PI3KγγAKT/ÓXIDO NÍTRICO
Thiago Mattar Cunha
Orientador: Prof. Dr. Fernando de Queiroz Cunha
Tese de Doutorado apresentada em 09/10/2008
O aumento da intensidade dolorosa durante o pro-
cesso inflamatório (hiperalgesia/hipernocicepção) é cau-
sado, principalmente, pela sensibilização de uma classe es-
pecífica de neurônios nociceptivos primários (nociceptores),
devido à ação direta de um conjunto de mediadores infla-
nossos resultados demonstram que o receptor EP3 está en-
volvido na febre induzida pela PGE2, mas não apresenta re-
levância crucial na febre induzida pelo LPS, ET-1 ou vTs.
selecionada para os demais experimentos. A injeção i.c.v.
do agonista CB2 seletivo AM1241 (0,01, 0,1 e.1 µg/2 µI,
i.c.v.) não promoveu nenhuma alteração significativa da
temperatura corporal. O pré-tratamento com o antagonista
CB2 seletivo AM630 (10 µg/2 µI, i.c.v.), assim como com o
antagonista dos receptores vanilóides capsazepina (1, 3 e
10 µg/2 µI, i.c. v.), não alteraram a resposta febril induzida
pela AEA. O inibidor não seletivo das enzimas ciclooxige-
nase (COX) indometacina (2 mg/kg, i.p.), e o inibidor seleti-
vo da COX-2 celecoxib (5 mg/kg, p.o.), reduziram a febre
induzida pela AEA. A AEA induziu um aumento significati-
vo na concentração de PGE2 no fluído cerebroespinal (CSF)
que foi abolido pelo pré-tratamento com o AM251. O anta-
gonista não seletivo dos receptores opióides, naloxona (1
mgkg, s.c.), aboliu a febre induzida pela AEA. Por sua vez,
a AEA aumentou a concentração no CSF de β-endorfina. O
pré-tratamento com AM251 foi capaz de reduzir este au-
mento induzido pela AEA. O AM251 também reduziu a fe-
bre induzida pelo lipopolissacarídeo (LPS 50 µg/kg, i.p.),
interleucina (1L)-1β(3 ng, i.c.v.), fator de necrose tumoral
(TNF)-α (250 ng, i.c.v.), 1L-6 (300 ng, i.c.v.), fator liberador
de corticotrofina (CRF 2,5 µ-lg, i.c.v.) e da endotelina (ET-1
1 pmol, i.c.v.). Porém, o AM251 não foi capaz de reduzir a
resposta febril induzida pelas prostaglandinas PGE2 250 ng,
i.c. v .) e PGF2 α (250 ng, i.c. v.) Em conjunto, estes dados
sugerem que a AEA, pela ativação dos receptores CB1, é
capaz de induzir febre. Esta resposta é dependente da sín-
tese/liberação de prostaglandinas e opióides endógenos.
Além disso, os endocanabinóides estão envolvidos no de-
senvolvimento da resposta febril induzida pelo LPS e por
diversos mediadores que orquestram esta resposta inclu-
indo 1L-1β, TNF-α, 1L-6, CRF e ET-1, mas não PGE2 PGE2 ou
a PGF2 α.
matórios, descritos como mediadores hipernociceptivos fi-
nais (prostaglandinas e aminas simpáticas). Neste sentido,
o controle farmacológico periférico da dor inflamatória ba-
seia-se em duas estratégias principais: a) uso de fármacos
que previnem a sensibilização dos nociceptores (ex: inibi-
dores de COX), ou seja, inibem a liberação e/ou ação de
substâncias que os sensibilizam; b) fármacos que revertem
diretamente à sensibilização dos nociceptores já instalada,
como a dipirona e principalmente os opióides. Em relação
89

Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
aos efeitos analgésicos produzidos pela ação periférica dos
opióides, demonstrou-se que este é dependente da ativa-
ção da via óxido nítrico/GMPc, a qual culmina na abertura
de canais de potássio sensíveis ao ATP, restaurando o po-
tencial de membrana dos neurônios nociceptivos. No en-
tanto, os mecanismos intracelulares envolvidos na ativa-
ção desta via, ainda não estão estabelecidos. No presente
estudo, foram descritas tanto evidências in vivo quanto in
CONSEQUÊNCIAS DA RESPOSTA NEUROCOMPENSATÓRIA À LESÃO POR CATETER BALÃO
SOBRE A REATIVIDADE À ENDOTELINA EM ARTÉRIA CARÓTIDA DE RATO
Lilian Rialto Gimenes
Orientadora: Profª. Drª. Ana Maria de Oliveira
Dissertação de Mestrado apresentada em 10/10/2008
A angioplastia por cateter balão é um procedimento
amplamente utilizado para desobstrução de artérias coro-
nárias e periféricas a partir da remoção de placas ateroma-
tosas e restauração do fluxo sanguíneo nestes locais. A
passagem do cateter balão pelo lúmen do vaso gera um
estresse mecânico na parede vascular, como a remoção de
células endoteliais, que resulta em resposta neurocompen-
satória que tem reflexos sobre a reatividade não só do pró-
prio vaso, mas também da artéria carótida contra-lateral à
lesão (CCA). A endotelina-1 (ET-1) participa da regulação
do tônus vascular e também da formação da camada
neoíntima. A lesão por cateter balão em artérias carótidas
promove um aumento na expressão de ET-1, bem como de
seu receptor ETA na artéria lesada, e resulta em alterações
na reatividade da CCA à fenilefrina e angiotensina II, 4 e 15
dias após a lesão, Tespectivarnente. Os objetivos do pre-
sente estudo foram avaliar: (a) a relação concentração-efei-
to da ET-1 em CCA isoladas, obtidas de ratos Wistar ma-
cho, com o intuito de obter os parâmentos de Emax (efeito
máximo) e pD2 da ET-1; (b) as consequências da lesão por
cateter balão sobre esses parâmetros na CCA, após 2, 8, 16,
30 e 45 dias da lesão, na presença e na ausência do endotélio.
Os resultados mostraram um aumento do Emax da ET-1 a
partir do 16º dia na CCA com endotélio. Alterações morfo-
lógicas não estão relacionadas ao aumento da resposta
contrátil induzida pela ET-1, uma vez que a integridade es-
trutural da CCA foi mantida. A participação da população
ALTERAÇÕES DAS CONCENTRAÇÕES PLASMÁTICAS DE METALOPROTEINASES-2 E 9 DA MA-
TRIZ EXTRACELULAR E DE SEUS INIBIDORES ENDÓGENOS EM PACIENTES COM MIGRÂNEA
Alisson Martins de Oliveira
Orientador: Prof. Dr. José Eduardo Tanus dos Santos
Dissertação de Mestrado apresentada em 23/10/2008
A migrânea é uma desordem neurológica comum,
tendo maior prevalência em mulheres do que em homens.
90
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista
vitro de que a ativação desta via de sinalização depende da
estimulação da via intracelular PI3Κγ/AKT. Estes resulta-
dos revelam um até então desconhecido papel da via
PI3KγAKT para o efeito periférico dos opióides. Além dis-
so, os resultados obtidos abrem uma nova perspectiva no
mecanismo molecular de ação de velhas drogas analgési-
cas com efeito periférico e também no desenvolvimento de
novas drogas.
de receptores ETB da CCA na resposta à lesão parece estar
comprometida pelos mecanismos neurocompensatórios que
se seguem à lesão por cateter balão. Por outro lado, a parti-
cipação de receptores ETA da CCA na contração desenca-
deada pela ET-1 foi semelhante à da artéria controle. O in-
fluxo de cálcio, bem como a mobilização de cálcio dos esto-
ques intracelulares, participaram do aumento do Emax in-
duzido por ET-1 na CCA. A reatividade à ET-1 na CCA com
endotélio não foi alterada na presença de L-NAME (NG-
nitro-L- arginina metil ester), um inibidor não-seletivo de
óxido nítrico sintases, sugerindo uma redução na biodis-
ponibilidade de NO. Os resultados também sugerem o com-
prometimento do efeito modulatório da NNOS (óxido nítrico
sintase neuronal) e INOS (óxido nítrico sintase induzida)
sobre a ação vasoconstritora da ET-1 na CCA com endotélio.
Por outro lado, a ‘ENOS’ (óxido nítrico sintase endotelial)
modulou negativamente a ação desencadeada pelo peptí-
deo na CCA, todavia, a magnitude dessa modulação foi
menor quando comparada com a do grupo controle. Os
prostanóides parecem não participar da contração induzida
pela ET-1 em artérias controle e CCA com endotélio, uma
vez que o Emax do peptídeo não foi alterado na presença de
indometacina. As espécies reativas de oxigênio parecem
contribuir para o aumento do Emax desencadeado pela ET-1
na CCA em resposta à lesão por cateter balão. Assim, alte-
rações na biodisponibilidade de NO, na formação de espé-
cies reativas de oxigênio e nas vias de sinalização de cálcio
fazem parte do conjunto de fatores intracelulares que leva-
ram ao aumento do Emax da ET-1 na CCA com endotélio a
partir do décimo sexto dia após a lesão vascular por cateter
balão.
Acomete a população durante os anos mais produtivos
das suas vidas, sendo uma causa importante de faltas ao
trabalho e de aumentos dos custos com “cuidados médi-
cos. A crise de migrânea é composta de ataques severos de
cefaléia associados à fotofobia, náusea, vômitos e sinto-
mas autonômicos. Embora a fisiopatologia da migrânea ain-
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
da não esteja totalmente elucidada, disfunções vasculares,
neurológicas e mecanismos neuro-inflamatórios têm sido
propostos. Alguns estudos mostram a presença de altera-
ções vasculares na migrânea. Algumas evidências apon-
tam uma possível associação de alterações na integridade
da barreira hematoencefálica em pacientes com migrânea.
Contudo, estudos mostram uma provável associação da
migrânea a um risco aumentado destes pacientes desenvol-
verem eventos cardiovasculares. As metaloproteinases de
matriz extracelular modificam a estrutura dos vasos sanguí-
neos e são associadas a várias patologias do sistema cardi-
ovascular. A metaloproteinase-2 (MMP-2) é constitutiva-
mente expressa nos vasos sanguíneos, já a metaloproteina-
se-9 (MMP-9) é uma protease liberada durante processos
inflamatórios em resposta a estimulação de citocinas. A
MMP-2 e a MMP-9 promovem aumento de permeabilidade
da barreira hematoencefálica por degradarem as proteínas
da lâmina basal (Iaminina, fibronectina, colágeno do tipo IV
e gelatina) presentes nos vasos sanguíneos cerebrais. Al-
guns estudos recentes mostram que os pacientes com mi-
EFEITOS DO CANABIDIOL SOBRE ESTRUTURAS ENCEFÁLICAS ENVOLVIDAS COM A RESPOS-
TA EMOCIONAL CONDICIONADA CONTEXTUAL
José Inácio Lemos Monteiro Carvalho
Orientador: Prof. Dr. Francisco Silveira Guimarães
Tese de Doutorado apresentada em 31/10/2008
Estudos prévios do laboratório mostraram que o tra-
tamento sistêmico com canabidiol (CBD) atenuou as altera-
ções cardiovasculares (pressão arterial e frequência cardía-
ca) bem como os efeitos comportamentais (congelamento)
provocados pela reexposição ao contexto previamente
pareado com choques nas patas (Resstel et al. 2006). Entre-
tanto, pouco se sabe sobre quais áreas cerebrais podem
estar envolvidas no efeito ansiolítico do CBD no modelo
experimental presentemente estudado. Assim, o objetivo do
presente estudo foi identificar, através da técnica de imu-
norreatividade à proteína c-Fos, quais áreas encefálicas ati-
vadas pelo protocolo experimental poderiam ser alteradas
pelo tratamento sistêrnico com CBD antes da re-exposição
ao contexto aversivo. Observou-se que os animais condici-
MEDIADORES ENVOLVIDOS NA RESPOSTA FEBRIL INDUZIDA PELA SEPSE (CLP) EM RATOS
Maria José Figueiredo
Orientadora: Profª. Drª. Glória Emília Petto de Souza
Tese de Doutorado apresentada em 31/10/2008
Embora a injeção de LPS seja um modelo razoável de
infecção real, a febre induzida pelo LPS não é uma febre
grânea possuem aumentos nas concentrações plasmáticas
de MMP-9. Baseado nestas informações, o objetivo do
nosso estudo foi avaliar possíveis alterações nas concen-
trações plasmáticas de MMP-2 e MMP-9, bem como de
seus inibidores endógenos (TIMP-1 e TIMP-2) em pacien-
tes com migrânea, com e sem aura, e em indivíduos saudá-
veis. Os resultados deste estudo mostraram que os indiví-
duos com migrânea sem aura apresentam aumento das con-
centrações plasmáticas das metaloproteinases-2 e 9, enquan-
to que pacientes com migrânea com aura tem maiores con-
centrações plasmáticas de MMP-2 quando comparados aos
controles saudáveis. O estudo dos inibidores das MMPs
mostraram maiores concentrações plasmáticas de TIMP-1
em pacientes com aura quando comparados aos pacientes
sem aura ou controles sadios. As concentrações de TIMP-
2 foram similares nos três grupos experimentais. Esses acha-
dos sugerem haver aumentos da MMP-2 no plasma de pa-
cientes com migrânea com aura, o que poderia ser um
indicativo fisiopatológico que associa migrânea com risco
aumentado de desenvolvimento doenças cardiovasculares.
onados tratados com CBD apresentaram menor imunorrea-
tividade à proteína c-Fos nas regiões pré- límbica (PL) e
infralímbica (IL) do córtex pré-frontal medial (CPFm), bem
como nas regiões medial anterior, lateral dorsal e ventral do
leito do núcleo da estria terminal, sendo que houve correla-
ção positiva entre o tempo de congelamento e a densidade
de células marcadas para c- Fos apenas nas regiões medial
anterior e ventral dessa estrutura. Em experimentos posteri-
ores, observou-se que rnicroinjeções de CBD diretamente
no PL atenuaram o congelamento, enquanto que microinje-
ções no IL apresentaram efeito oposto. Portanto, os resulta-
dos do presente estudo sugerem que as regiões medial an-
terior e ventral do núcleo do leito da estria terminal e tam-
bém a região pré-límbica do CPFm podem estar envolvidas
no efeito do tratamento sistêmico do CBD sobre a resposta
emocional condicionada (REC) contextual. Palavras chaves:
canabidiol, medo condicionado contextual, c-Fos, córtex pré-
frontal, núcleo do leito da estria terminal.
típica. Este é usualmente removido. da circulação 1 h após a
injeção intravenosa e Induz uma febre de duração curta. Na
maioria dos casos de f sepse a febre é induzida e mantida
por um longo período pela estimulação pirogênica contínua
(Gourlne et al., 1998). O CLP (modelo de ligação e perfuração
cecal) primeiramente descrito por Chaudry et al. (1979, 1980),
91

Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
é amplamente aceito por muitos investigadores como um
modelo de sepse, infecção aguda e peritonite bacteriana
(Fink et al., 1990; Villa et al., 1995), que melhor reflete a com-
plexa resposta desta síndrome em humanos (De Maio et al.,
2005). O CLP envolve uma estimulação pirogênica contínua
e simula uma infecção real muito melhor que a infusão de
quantidades constantes de LPS (infecção simulada). Desta
forma este trabalho objetivou: -padronizar o modelo de CLP
capaz de induzir resposta febril, -investigar como a terapia
antipirética influencia a mortalidade de animais no modelo
de sepse: -investigar quais mediadores estão envolvidos na
estimulação pirogênica continua, induzida pelo CLP, bem
como relacionar os níveis de mediadores pirogênicos no
fluído cerebroespinal (CSF) com a febre e com a sobrevida.
Para indução do modelo, utilizamos vários calibres de agu-
lha e diferentes números de perfurações. Os animais que
receberam 4 furos com a agulha 16G no ceco, apresentaram
aumento significativo da temperatura e índice de sobrevida
de aproximadamente 50%. Então este estímulo foi escolhido
para avaliar o efeito dos antipiréticos na resposta febril O
tratamento com os antipiréticos promoveu diferentes efei-
tos sobre o aumento da temperatura e taxa de sobrevida dos
animais sépticos. Sendo que a antipirese foi mais, evidente
nos animais tratados com o celecoxibe e dipirona e a melho-
PARTICIPAÇÃO DAS METALOPROTEINASES DA MATRIZ EXTRACELULAR NAS ALTERAÇÕES
VASCULARES ASSOCIADAS À HIPERTENSÃO RENOVASCULAR: EFEITOS DE ANTIOXIDANTES
Michele Mazzaron de Castro
Orientador: Prof. Dr. José Eduardo Tanus dos Santos
Tese de Doutorado apresentada em 07/11/2008
A hipertensão arterial sistêmica (HAS) é considera-
da um grande problema de saúde pública no mundo, e está
amplamente relacionada a significativas alterações morfoló-
gicas e funcionais no aparelho cardiovascular. Metalopro-
teinases (MMPs) são endopeptidases cálcio-dependente,
contendo zinco, que apresentam um papel importante na
disfunção endotelial e no remodelamento tecidual de várias
doenças cardiovasculares, inclusive a hipertensão. Aumen-
tos na atividade destas enzimas podem levar à degradação
excessiva das proteínas da matriz extracelular (MEC), além
de acentuar a migração de células musculares lisas e
monócitos. Isto pode contribuir para as alterações estrutu-
rais observadas nos vasos sanguíneos durante a hiperten-
são. Neste contexto, estudos clínicos e em modelos ani-
mais de hipertensão mostraram um aumento significativo
da expressão e atividade da MMP-2 (72-kDa gelatinase A)
e MMP-9 (92-kDa gelatinase B), tanto no plasma quanto
em tecidos cardíacos e vasculares. Interessantemente, es-
tudos in vitro mostraram que o aumento da atividade des-
tas MMPs pode estar relacionado diretamente ao estresse
92
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista
ra significativa da sobrevida nos animais tratados com
paracetamol. O CLP induziu aumento na concentração de
PGE2 no CSF 6; 12; 24 e 48 horas após o estímulo, sendo que
o pico deste aumento coincidiu com o pico da resposta fe-
bril (6h). Este estímulo também promoveu aumento signifi-
cativo dos níveis de TNF-α, IL- 1β e IL-6 no foco infeccioso
e soro, mas não no CSF dos animais sépticos. Estas citoci-
nas parecem não participar centralmente na resposta febril
induzi da por CLP, uma vez que o tratamento com o antago-
nista de receptores de IL-1 (IL-1ra), com o receptor solúvel
de TNF (sTNFr) e com o anticorpo anti IL-6 não alteraram a
febre induzida por CLP. O tratamento com os antipiréticos
aumentou os níveis de IL-lβ e IL-6 no foco infeccioso e
diminuiu no soro. Entretanto a maior diminuição foi vista no
soro dos animais tratados com celecoxibe e paracetamol.
Com base nos achados descritos acima, é possível concluir
que o modelo de febre induzido por CLP reproduz bem um
quadro infeccioso, os mediadores diferem daqueles envol-
vidos na febre do LPS. A melhora na sobrevida nos animais
tratados com paracetomol deve envolver outro mecanismo
que a inibição sérica de IL-6. Entretanto, mais estudos são
necessários para entendermos melhor os mecanismos en-
volvidos na indução desta resposta, bem como o mecanis-
mo de ação evocado pelos antipiréticos.
oxidativo gerado pela ativação de enzimas pro-oxidantes,
tais como a NADPH oxidase vascular e a xantina oxidase.
Neste contexto, o modelo experimental 2R-1C foi proposto
para este estudo por apresentar concentrações elevadas de
EROs associadas ao aumento da renina plasmática e
angiotensina II. Estas ações, associadas a um aumento da
pressão intra-luminal, podem ser muito importantes para ati-
vação das MMPs, o que pode contribuir para as alterações
vasculares observadas neste modelo de hipertensão. Desta
maneira, os objetivos deste trabalho foram: 1) verificar se
aumentos na expressão e atividade destas MMPs podem
contribuir para o aumento da pressão arterial e para as alte-
rações vasculares observadas neste modelo; 2) verificar se
aumentos nas concentrações das EROs podem contribuir
para esta maior ativação enzimática. Para isto, foi utilizada a
doxiciclina, um inibidor inespecífico de MMPs, e diferentes
tipos de antioxidantes. A atividade e expressão das MMPs
foram avaliadas por zimografia em gel e in situ, pelo método
de captura de anticorpo e imuno-histoquímica. Já a expres-
são do RNAm da MMP-2 e do TIMP-2 foi analisada por
Real Time RT -PCR. Os parâmetros funcionais e estruturais
da aorta foram determinados por reatividade vascular e
morfologia, respectivamente. Por fim, as concentrações
vasculares de EROs foram analisadas usando o dihidroetídeo
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
(DHE) in situ e por citmometria de fluxo. O í tratamento com
a doxiciclina atenuou o aumento da pressão arterial nos
animais 2R- 1C (p < 0,01) e preveniu a redução do relaxa-
mento dependente do endotélio nestes animais. Além dis-
so, a doxiciclina preveniu aumentos na espessura da cama-
da media da aorta (p < 0,01) e a deposição elevada de colá-
geno e elastina. Houve um aumento significativo da ex-
pressão e atividade da MMP-2 nas aortas destes animais
hipertensos (todos, p < 0,05) em paralelo a um aumento da
razão da expressão do RNAm da MMP-2/TIMP-2 (p < 0,01).
Da mesma maneira, o tratamento com ambos os antioxidantes
atenuou o aumento da pressão arterial nos animais 2R-1C
PARTICIPAÇÃO DE RECEPTORES TOLL-LIKE 2 E 4, CITOCINAS E QUIMIOCINAS NA HIPERNO-
CICEPÇÃO MECÂNICA EM UM MODELO DE INFLAMAÇÃO ARTICULAR
Ana Tereza Gomes Guerrero
Orientador: Prof. Dr. Sergio Henrique Ferreira
Tese de Doutorado apresentada em 04/12/2008
Existem evidências experimentais e clínicas da parti-
cipação de diferentes receptores e mediadores no desen-
volvimento e manutenção da artrite reumatóide Corrobo-
rando o caráter multifatorial dessa patologia, cerca de 30%
dos pacientes não respondem a terapia anti-TNF-α. Dessa
forma, a investigação dos mediadores envolvidos na pato-
gênese da artrite pode contribuir para abordagens terapêu-
ticas mais eficientes. Além disso, apesar da dor articular ser
um dos sintomas clínicos mais importantes dessa doença
devido à incapacitação motora ainda existe um longo cami-
nho para sua compreensão. Dados da literatura demons-
tram a participação das citocinas TNF-α, IL-β, IL-18, quimi-
ocinas KC e MIP-1α, e receptores TRL-2 e TRL-4 em qua-
dros de artrite tanto em animais quanto em humanos. Assim,
como a artrite reumatóide é caracterizada pela intensa dor
articular e infiltrado inflamatório crônico no tecido sinovial,
este estudo teve por objetivo investigar o efeito nociceptivo
articular e a migração leucocitária articular, bem como a inter-
relação entre esses efeitos e a hierarquia entre os mediado-
res envolvidos neste modelo de inflamação articular. Primei-
ramente, detectou-se que a injeção intra-articular de zimosan
ou LPS induziu resposta hipernociceptiva mecânica articu-
lar. A hipernocicepção mecânica articular induzida por
zimosan ou LPS foi inibida pelo pré-tratamento com um an-
tagonista de receptores CXCR1/2- DF2162 e IL1Ra. Ade-
mais, a hipernocicepção articular induzida por zimosan ou
LPS foi reduzida em camundongos deficientes para o recep-
tor p55 do TNF-α, Toll-like 2, deficientes na via de sinaliza-
ção para Toll-like 4 e molécula MyD88. Ao avaliar a migra-
ção leucocitária articular utilizando o método da mielopero-
xidase (MPO) observou-se redução da migração leucocitária
(ambos, p < 0,05) e preveniu a redução do relaxamento de-
pendente do endotélio pela acetilcolina. O tempol, mas não
o apocinin (p > 0,05), também preveniu o remodelamento
vascular hipertrófico observado nestes animais (p < 0,01).
Além disso, o tratamento com o tempol atenuou aumentos
na atividade e expressão da MMP-2 (ambos, p < 0,05) em
paralelo à diminuição do estresse oxidativo (p < 0,05). Estes
resultados sugerem que 1) as MMPs podem contribuir para
o aumento da pressão arterial e para as alterações vasculares
observadas neste modelo experimental. 2) Aumentos nas
concentrações de EROs podem estar diretamente relaciona-
dos com esta atividade aumentada da MMP-2.
articular tanto nos tratamentos quanto nos animais defici-
entes acima mencionados. Assim, esses resultados suge-
rem uma correlação entre resposta hipernociceptiva articu-
lar e migração leucocitária articular. Além disso, para confir-
mar a participação de TNF-α, IL-β e KC utilizando a técnica
de ELISA foram detectadas a presença significativa destas
citocinas nos tempos de 3-5 horas após injeção intra-articu-
lar de zimosan ou LPS. Ademais, observou-se que o TNF-α,
IL-β e KC induziram resposta hipernociceptiva articular de
maneira dose-tempo-dependentes. A hipernocicepção arti-
cular induzida pelo TNF-α, IL-β e KC foram parcialmente
inibida pelo pré-tratamento com indometacina, guanetidina,
associação entre indometacina e guanetidina, IL-1Ra e
DF2162. Além disso, detectou-se que animais deficientes
para o receptor TNFRI do TNF-α, apresentaram redução da
resposta hipernociceptiva articular. Dando continuidade ao
estudo, foi detectado que a administração intra-articular de
TNF-α induziu a produção de IL-β e quimiocina KC. De
maneira complementar, as concentrações de TNF-α e IL-β
estavam elevadas nas articulações de animais que recebe-
ram administração intra-articular de KC. Também foi obser-
vado que a administração intra-articular de IL-β induziu au-
mento das concentrações articulares de TNF-α e quimiocina
KC. Avaliando-se os resultados acima descritos podem-se
sugerir a participação de prostanóides, aminas simpáticas,
TNF-α agindo via receptores TNFRI, IL-β e KC. Em conjun-
to, os resultados acima descritos, sugerem o conceito de
que na resposta hipernociceptiva articular induzida pelo
TNF-α, IL-β e quimiocina KC, estas citocinas e quimiocina
estão agindo de maneira retro-alimentativa ou se auto-regu-
lando e também precedem a liberação dos mediadores finais
da hipernocicepção inflamatória (prostanóides e aminas sim-
páticas). O segundo objetivo deste estudo foi investigar a
existência de uma inter-relação entre o fenômeno hipernoci-
ceptivo articular e a migração leucocitária articular induzidas
93

Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
pelas citocinas (TNF-α e IL-β) e quimiocina KC. E obser-
vou-se que estes mediadores. pró-nociceptivos apresenta-
ram aumento da migração leucocitária articular. Foi observa-
do que o pré-tratamento com fucoidina (inibidor da migra-
ção leucocitária) inibiu tanto a resposta hipernociceptiva
articular induzida pelo TNF-α, IL-β e KC quanto a migração
leucocitária articular induzida pelo TNF-α, IL-β e KC. As-
sim, esses resultados sugerem uma correlação entre respos-
FISIOLOGIA
PARTICIPAÇÃO DOS GLICOCORTICÓIDES NA SECREÇÃO DOS NEUROPEPTÍDEOS OCITOCI-
NA E VASOPRESSINA EM RESPOSTA ÀS ALTERAÇÕES DE VOLUME E OSMOLALIDADE DO LI-
QUIDO EXTRACELULAR
Andréia Lopes da Silva
Orientador: Prof. Dr. José Antunes-Rodrigues
Dissertação de Mestrado apresentada em 29/10/2008
A regulação da homeostase hidroeletrolítica é uma
função mantida sob controle restrito no organismo animal.
Mamíferos respondem às alterações na osmolalidade do
líquido extracelular alterando comportamentos e a fisiolo-
gia do organismo. O comportamento requer regulação na
resposta de ingestão de sal e água, através de alterações
no apetite ao sódio e na sede. As respostas fisiológicas
necessitam de modulação da excreção renal de água e sódio,
o que acontece por alterações nas concentrações plasmáti-
cas de hormônios antidiuréticos e natriuréticos. O principal
sistema neuroendócrino pelo qual o cérebro mantém a ho-
meostase dos líquidos corporais é o sistema hipotálamo-
neuro-hipofisário. Este sistema consiste de neurônios
magnocelulares localizados no núcleo supra-óptico do hi-
potálamo (SON) e no núcleo paraventricular do hipotálamo
(PVN), sendo que seus axônios terminam em capilares san-
guíneos na neuro hipófise. O PVN e o SON estão direta-
mente envolvidos com o controle do balanço hidroeletrolí-
tico, pois são extremamente sensíveis às alterações da
osmolalidade e seus neurônios são células especializadas
na síntese e secreção de vasopressina (AVP) e ocitocina
(OT). Com o aumento da osmolalidade plasmática mecanis-
mos são ativados, inibindo a ingestão de sal e induzindo a
excreção de sódio através da OT, e ativando mecanismos
de sede e redução da excreção urinária de água, mediados
pela AVP. Estas respostas são vistas como estressores pelo
sistema nervoso central e são moduladas pelo eixo hipo-
tálamo-hipófise-adrenal (HHA). Um fator conhecido por
94
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista
ta hipernociceptiva articular e migração leucocitária articu-
lar induzidas pelo TNF-α, IL-β e quimiocina KC. Concluin-
do, este trabalho contribuiu para a elucidação, pelo menos
em parte, dos mecanismos envolvidos na resposta hiperno-
ciceptiva articular induzida pelo zimosan (agonista toll-like
2) e LPS (agonista toll-like 4). Além de sugerir que as citoci-
nas TNF-α e IL-β e quimiocina KC estão agindo de maneira
retro-alimentativa neste modelo de inflamação articular.
participar dos efeitos dos glicocorticóides é o NF-kappa B,
podendo, então, participar desta modulação hormonal frente
às alterações osmóticas do líquido extracelular. Assim, este
trabalho teve por objetivo avaliar as alterações promovi-
das pelo estímulo osmótico causado pela sobrecarga sali-
na de quatro dias (SL4) e pela restrição hídrica de três dias
(WD3), procurando avaliar a participação do eixo HHA nes-
tas respostas. Os resultados apresentados mostram que
tanto a SL4 quanto a WD3 aumenta o sódio plasmático, a
osmolalidade plasmática, as concentrações plasmáticas de
OT, AVP e corticosterona e a expressão do RNAm de AVP e
OT no SON, PVN e NH. Após a injeção de dexametasona
(1mg/kg, subcutâneo), as concentrações plasmáticas de OT,
AVP e corticosterona diminuem, assim como a expressão
do RNAm de AVP e OT no SON e no PVN. A dexametasona
não altera o sódio e a osmolalidade plasmáticos no grupo
SL4; diminui o sódio plasmático e não altera a osmolalidade
plasmática no grupo controle; e diminui o sódio plasmático
e aumenta à osmolalidade plasmática no grupo WD3. A
dexametasona também diminui a expressão do RNAm de
AVP, mas não altera a expressão do RNAm da OT na NH no
grupo SL4; e diminui a expressão de RNAm de OT e aumen-
ta a expressão do RNAm da AVP na NH do grupo WD3. No
grupo controle, a dexametasona diminui a expressão do
RNAm da OT e da AVP na NH. Dados imunoistoquímicos
mostram que a subunidade p65 do fator de transcrição NF-
KB está presente no SON e no PVN, sendo que não há
alteração do conteúdo desta subunidade no PVN e no SON
promovidos pela i desidratação. Mas ambos os modelos de
desidratação diminuem a expressão do RNAm de p65 no
SON, e a dexametasona diminui ainda mais a expressão do
RNAm de p65 no SON e PVN nos animais I controles e com
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
WD3. A expressão do inibidor do NF-kappa B, o ‘iota’kappa
B β, está aumentada no SON de animais SL4, e a dexameta-
sona reverte esse efeito. A dexametasona também diminui a
expressão do RNAm do ‘iota’kappa B β no PVN de animais
SL4 e WD3. Nos animais com WD3 a expressão do RNAm
de ‘iota’kappa B β no PVN está diminuída; e a dexametaso-
na aumenta a expressão do RNAm do ‘iota’kappa B β ape-
nas no SON destes animais. No grupo SL4 há um aumento
da concentração plasmática de IL-1 β e TNF-α, e a dexame-
EXPRESSÃO AUMENTADA DE NPY APÓS STATUS EPILEPTICUS INDUZIDO POR ESTIMULAÇÃO
ELÉTRICA DO COMPLEXO AMIGDALÓIDE EM RATOS : PROVÁVEL PARTICIPAÇÃO EM UM SIS-
TEMA ANTICONVULSIVO ENDÓGENO
Artur Fernandes
Orientador: Prof. Dr. Norberto Garcia-Cairasco
Dissertação de Mestrado apresentada em 29/10/2008
As epilepsias são as desordens neurológicas mais
comuns entre humanos e, de longe, as mais estudadas. Den-
tre elas a Epilepsia do Lobo Temporal (EL T) se destaca por
apresentar grande número de pacientes refratários aos tra-
tamentos medicamentosos e apresenta como característi-
cas gerais: l) a ocorrência de um evento gatilho que deflagra,
2) os processos epileptogenéticos responsáveis pelo surgi-
mento das, 3) crises recorrentes espontâneas (CREs). O mo-
delo animal utilizado neste estudo mimetiza as três etapas
descritas acima e consiste na estimulação elétrica do com-
plexo amigdalóide e consequente estabelecimento do qua-
dro de Status Epilepticus Auto Sustentado (SEAS). Neste
modelo foram descritos dois tipos de SEAS com- gravida-
des de crises comportamentais e características morfológi-
cas distintas. O SEAS-Típico é mais grave, apresenta crises
comportamentais mais severas e um quadro de morte celular
bilateral em hipocampo e outros núcleos correlatos. O SEAS-
Deambulatório é menos grave, apresenta crises comporta-
mentais leves e perfil de mortes celulares com lesões exclu-
sivamente unilaterais em hipocampo e núcleos correlatos. O
objetivo do estudo foi diferenciar os dois tipos de SEAS
através de: marcadores eletroencefalográficos (EEGráfico) e
moleculares a fim de estabelecermos alguns dos possíveis
mecanismos responsáveis pela ocorrência dos dois tipos
de SEAS. O traçado EEGráfico das crises foi avaliado atra-
vés da análise de frequências sustentadas ao longo do e
tempo em HIP e AMY. Como a atividade elétrica cerebral
depende da ativação de grupos neuronais específicos, foi
avaliada em paralelo a expressão da proteína c-Fos, como
indicadora da atividade neuronal durante” o evento de SEAS.
Por outro lado, a ocorrência de SEAS e a atividade neuronal
aumentada promove modificações plásticas que envolvem
alterações em neurotransmissores, neuropeptídeos, fatores
de crescimento neuronal, entre outros. Neste sentido foram
tasona reverte este efeito; já no grupo WD3 só há um au-
mento da concentração plasmática de IL-1 β, efeito que é
revertido pela dexametasona. Em conjunto esses dados
sugerem que o eixo HHA exerce um controle sobre os
peptídeos neuro-hipofisários diminuindo sua produção e
secreção ante um estímulo osmótico. Esta inibição pode
estar relacionada à diminuição da sinalização do sistema
nervoso central, dada pelas citocinas periféricas, ou tam-
bém por uma possível ativação da via do NF-kappa B.
avaliadas as expressões do fator neurotrófico derivado do
cérebro (Brain Derived Neurotrophic Factor -BDNF) e
neuropeptídeo- Y (NPY), um neropeptídeo produzido por
intemeurônios inibitórios no hilus do giro denteado (GD) do
hipocampo que apresenta ações anticonvulsivantes em vá-
rios modelos de estudo. A análise do eletroencefalograma
(EEG) deixou claro que durante comportamentos explorató-
rios há a predominância de frequências sustentadas, tanto
em HIP quanto em AMY, na faixa entre 5-9 Hz. Por outro
lado, durante os comportamentos de crise, não importando
sua gravidade, as frequências sustentadas reduzem para
entre 3-5 Hz em ambos os núcleos. A análise da atividade
neuronal através da expressão de c-Fos mostrou-se diferen-
te entre os animais controle e os dos grupos experimentais,
com muito maior expressão nos animais com SEAS. Foi ob-
servada expressão de c-Fos em 17 regiões cerebrais com
diferenças em córtex ipsilateral, com maior número de célu-
las no SEAS- T e em amígdala baso-lateral e amígdala medial
contralaterais com maior número de células em SEAS-D. i O
NPY foi avaliado em três tempos pós-SEAS (3 h, 24 h e 14
dias). Em todos os tempos estudados houve diferença entre
o número de células no hilus do GD entre os grupos de
SEAS e controles com maior número nos animais SEAS.
Entre os dois tipos de Status, de maneira geral, houve dife-
rença no número de células com maior expressão em SEAS-
D. A ativação neuronal durante o período de SEAS parece
não ser o fator determinante que diferencia ambos os tipos
de Status uma vez que a expressão de c-Fos entre os grupos
é semelhante. A ocorrência de frequência su~tentadas nos
diferentes comportamentos de crise foi idêntica, indepen-
dentemente de sua gravidade. Por outro lado, a expressão
de NPY foi diferente entre os grupos e parece ser um fator
importante na determinação da gravidade das crises nos
animais. Futuros estudos poderão auxiliar na compreensão
da relevância da expressão do NPY como sendo resultado
da ativação de um sistema anticonvulsivo endógeno, se
não for observada a ocorrência de CREs em tempos mais
prolongados de anális
95

Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
AVALIAÇÃO DA PARTICIPAÇÃO DE MECANISMOS GABAérgicos, NITRÉRGICOS, GLUTAMATÉR-
GICOS E PURINÉRGICOS NO NÚCLEO PARAVENTRICULAR DO HIPOTÁLAMO (PVN) NA MO-
DULAÇÃO AUTONÔMICA BASAL E NAS RESPOSTAS CARDIOVASCULARES À ATIVAÇÃO DO
QUIMIORREFLEXO EM RATOS NÃO ANESTESIADOS
Josiane de Campos Cruz
Orientador: Prof. Dr. Benedito Honorio Machado
Tese de Doutorado apresentada em 17/12/2008
As células quimiossensíveis do corpúsculo carotídeo
são ativadas em situações de alteração na pO2 do sangue
arterial. A primeira sinapse das aferências dos quimiorrecep-
tores periféricos ocorre no núcleo do trato solitário (NTS). A
partir do NTS duas vias autonômicas e distintas são ativa-
das; a via simpato-excitatória e a via parassimpato-excitatória,
desencadeando assim as respostas cardiovasculares à ati-
vação do quimiorreflexo. Além disso, são também geradas
respostas respiratórias e comportamentais. Estudos farma-
cológicos sugerem a participação do núcleo paraventricular
do hipotálamo (PVN) na via simpato-excitatória do quimior-
reflexo. O PVN é um importante centro de controle autonô-
mico e neuroendócrino. Vários trabalhos sugerem a partici-
pação de mecanismos GABAérgicos, nitrérgicos e glutama-
térgicos na modulação tônica da atividade simpática no PVN,
sugerindo a existência de um balanço entre os receptores
excitatórios e inibitórios no PVN sobre a modulação tônica
da atividade simpática. Recentes estudos sugerem o envol-
vimento dos receptores purinérgicos do PVN na modulação
autonômica simpática. O objetivo do nosso estudo foi ava-
liar a participação de mecanismos GABAérgicos, nitrérgicos,
glutamatérgicos e purinérgicos do PVN na modulação tôni-
ca cardiovascular e nas respostas cardiovasculares à ati-
vação do quimiorreflexo em ratos não anestesiados. Para
tanto, utilizamos ratos Wistar (300-320g); cânulas-guia fo-
ram implantadas em direção ao PVN 4-5 dias antes dos ex-
perimentos. A artéria e a veia femoral esquerda dos animais
foram canuladas, um dia antes dos experimentos. O quimi-
orreflexo foi ativado com KCN (80 µg/0,05 ml, iv) antes e em
diferentes tempos após a microinjeção bilateral de bicucu-
lina (antagonista GABAA), L-NAME (inibidor não seletivo
da enzima oxido nítrico sintase), ácido quinurênico [KYN
(antagonista inespecífico dos receptores ionotrópicos do
L-glutamato)] e PPADS (antagonista dos receptores puri-
EXPRESSÃO DE microRNAS NO SISTEMA NOCICEPTIVO DE CAMUNDONGOS
Ricardo Kusuda
Orientador: Prof. Dr. Guilherme de Araújo Luccas
Dissertação de Mestrado apresentada em 22/12/2008
MicroRNAs (miRs) representam uma nova classe
de RNAs não codificadores (ncRNA) que agem como po-
tentes reguladores da expressão de diversos genes. A iden-
96
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista
nérgicos P2). Realizamos também a microinjeção bilateral
do coquetel PPADS + KYN no PVN de ratos não aneste-
siados. Os resultados mostraram que a microinjeção bilate-
ral de bicuculina no PVN (n=7) promoveu um aumento sig-
nificativo na PAM basal (F5,34= 3; p= 0,04) e na FC basal
(F5,32= 8,2; p < 0,001), contudo não promoveu alterações
significativas nas respostas pressora (F5,36= 0,5; p= 0,8) ou
bradicárdica F5,32= 1; p= 0,7) à ativação do quimiorreflexo. A
microinjeção bilateral de L-NAME (n=8) no PVN promoveu
um aumento significativo na PAM basal (F 6,45= 5, p= 0,0005)
e na FC basal (F6,45= 5, p= 0,0009), contudo não promoveu
alterações significativas nas respostas pressora (F6,45= 0,2,
p= 0,95) ou bradicárdica (F 6,45= 1, p= 0,45) à ativação do
quimiorreflexo. A microinjeção bilateral do ácido quinurênico
(n=6) não promoveu alterações significativas na PAM basal
(F 6,31= 0,9, p= 0,54), FC basal (F6,32= 0,6, p= 0,75) ou nas
respostas pressora (F6,29= 1, p= 0,4) e bradicárdica (F6,32=
0,8, p= 0,4) à ativação do quimiorreflexo. A microinjeção de
PPADS no PVN (n=6) promoveu um aumento significativo
na PAM basal (F 4,22= 5, p= 0,04) e na FC basal (F4, 18 = 3, p=
0,04), contudo não promoveu alterações significativas nas
respostas pressora (F4,18= 0,4, p= 0,8) e bradicárdica (F4,18=
1, p= 0,4) à ativação do quimiorreflexo. A microinjeção do
coquetel PPADS + KYN (n=6) no PVN não promoveu
alterações significativas na PAM (F4,23 = 2, p= 0,2), FC
basal (F 4,24= 1, p= 0,4) ou nas respostas pressora (F4,23 = 1,
p= 0,4) e bradicárdica (F4,24=2, p= 0,2) à ativação do quimior-
reflexo. Concluímos que a) os receptores GABAA, o óxido
nítrico e os receptores purinérgicos no PVN de ratos não
anestesiados estão envolvido com a modulação tônica car-
diovascular, mas aparentemente não estão envolvidos com
as respostas cardiovasculares à ativação do quimiorreflexo
em ratos não anestesiados e b) que os receptores ionotrópi-
cos de L-glutamato no PVN de ratos não anestesiados não
estão envolvidos com a modulação tônica cardiovascular e
também não parecem estar envolvidos com as respostas
cardiovasculares à ativação do quimiorref1exo em ratos não
anestesiados.
tificação e caracterização da ação de miRs têm oferecido
uma visão completamente nova dos mecanismos de regula-
ção pós-transcricional, influenciando diversos mecanismos
celulares como diferenciação, crescimento, apoptose, me-
tabolismo e atividade sináptica. A descoberta dos miRs e
de seus mecanismos de ação têm alterado fundamental-
mente a nossa compreensão da fisiologia de órgãos e siste-
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
mas e da fisiopatologia de diversas doenças. A expressão
de miRs ocorre de maneira específica nos diferentes teci-
dos, sendo que, no sistema nervoso, miRs foram descritos
no córtex, cerebelo e no mesencéfalo. Este estudo investi-
gou a expressão de miRs no gânglio da raiz dorsal e na
coluna dorsal da medula espinal onde a informação noci-
ceptiva é inicialmente processada. Foi analisada a expres-
são de miR-1, miR-16, miR-122a e miR-206 que possuem
complementaridade parcial ao gene bdnf. O BDNF (brain-
derivedneurotrophicfactor) é um fator neurotrófico respon-
sável pela manutenção das características fenotípicas de
diferentes populações neuronais no gânglio da raiz dorsal e
na coluna dorsal da medula espinal, participando tanto da
transmissão da informação nociceptiva, quanto dos meca-
nismos de plasticidade neural induzidos pela lesão de nervo
periférico ou doença inflamatória crônica. Utilizando RT-PCR
em tempo real, foram investigados: 1) a expressão destes
GENÉTICA
ESTUDO DO PROCESSAMENTO ALTERNATIVO E ANÁLISE DO SILENCIAMENTO DAS METIL-
TRANSFERASES ESPECÍFICAS DO PISTILO DE Nicotiana Tabacum L.
Cristiane de Paula Gomes Calixto
Orientadora: Profª.Drª. Maria Helena de Souza Goldman
Dissertação de Mestrado apresentada em 03/10/2008
A biologia da reprodução das plantas é uma área de
crescente interesse. O pistilo é um órgão de importância
central no processo reprodutivo. A espécie Nicotiana
tabacum, linhagem Petit Havana SR-1, foi escolhida como
modelo para o estudo do pistilo, por possuir flores especia-
lizadas e grandes, apresentando todos os principais ór-
gãos facilmente identificáveis. Há diversos genes que são
exclusivamente expressos no pistilo. Entre estes, foi en-
contrado, por nosso grupo de pesquisa, vários transcritos
que codificam proteínas com alta similaridade às metiltrans-
ferases do ácido salicílico, jasmônico e benzóico. Os ésteres
metilados destes ácidos são largamente difundidos no rei-
no vegetal, atuando na regulação do desenvolvimento da
planta, reprodução, defesa e sinalização. Este trabalho vi-
sou estudar a estrutura destes transcritos e o papel da me-
tiltransferase no processo reprodutivo. Os objetivos espe-
cíficos foram: 1) realizar experimentos de 5’RACE para es-
tudar a extremidade 5’ completa, incluindo a região 5’ não
traduzida, dos diferentes transcritos da metiltransferase
expressa no pistilo; 2) realizar experimentos de 3’RACE para
estudar a extremidade 3’ e identificar os sítios alternativos
de poliadenilação nos diferentes transcritos da metiltrans-
ferase; 3) analisar a função das metiltransferases por meio
miRs após estimulação aguda de fibras nociceptivas do tipo
C, 2) o perfil temporal e especificidade tecidual de expressão
de miRs após a lesão parcial, 3) axotomia de nervo periféri-
co, e 4) durante inflamação crônica no gânglio da raiz dorsal
de no corno dorsal da medula espinal de camundongos. As
amostras foram normalizadas com o controle endógeno
snoR-202. Com exceção do miR-122a, todos os demais miRs
encontraram-se robustamente expressos tanto no gânglio
da raiz dorsal como no corno dorsal da medula espinal. To-
dos os modelos foram capazes de induzir alterações na ex-
pressão dos miRs que apresentaram ora redução, ora au-
mento dependendo do tecido, da duração ou da qualidade
da estimulação, caracterizando um alto grau de especificida-
de espacial e temporal no sistema nociceptivo. Nossos re-
sultados sugerem a participação destes miRs nos. diferen-
tes mecanismos de regulação gênica associados, tanto à
dor nociceptiva, quanto à fisiopatologia da dor crônica.
do estudo das alterações acarretadas pelo bloqueio de um
de seus transcritos, utilizando a técnica do RNAi. Os da-
dos de 5’ e 3’ RACE obtidos, juntamente com os diferentes
trabalhos realizados em nosso laboratório, indicam que to-
dos os transcritos da metiltransferase possuem o exon 1
para iniciar a tradução, mas diferem significativamente no
restante de sua composição de exons e nas escolhas dos
sítios de poliadenilação. Análises realizadas com o DNA
genômico, confirmaram a presença de pelo menos 2 genes
e 3 pseudogenes para a metiltransferase específica do
pistilo. Como a linhagem Petit Havana SR-1 em estudo é
homozigota para a maioria dos genes, a presença de 5 se-
quências distintas sugere a existência de duplicações no
genoma, durante a evolução deste gene. Estes genes são
formados por 8 exons hipotéticos, divididos em três ou
quatro blocos de fase aberta de leitura, intercalados por
dois ou três introns, respectivamente. Assim, com os resul-
tados disponíveis até o momento e com todas as análises
realizadas neste trabalho, é proposto que as metiltransfera-
ses do pistilo de N. Tabacum sofrem um complexo mecanis-
mo de processamento alternativo, o que pode representar
uma vantagem adaptativa no processo reprodutivo desta
espécie. Para o estudo da função dos transcritos da metil-
transferase específica do pistilo, parte da região codificadora
do clone de cDNA 046B11 foi inserida no vetor de expres-
são em plantas pK7GWIWG2(I) (RNAi), resultando no
plasmídeo pGC2. Este plasmídeo foi utilizado para transfor-
97

Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
mar discos foliares de N. Tabacum via Agrobacterium
tumefaciens. Um total de 10 plantas transgênicas indepen-
dentes foram obtidas. A quantificação por RT-PCR em tem-
po real demonstrou que todos os transgênicos pGC2 apre-
sentaram níveis variáveis na redução da expressão da me-
tiltransferase no pistilo. Todas as plantas presentes na casa
de vegetação apresentaram formação e disposição de todas
as estruturas reprodutivas corretas, quando comparadas a
plantas do grupo controle (linhagem Petit Havana SR-1).
Com relação às análises do processo reprodutivo das plan-
tas transgênicas, foram observados baixa taxa de fertilida-
de em 2 plantas e baixo peso de sementes/flor em 5 plantas
(p-valor < 0,01). No entanto, estas observações não foram
correlacionadas de maneira convincente ao silenciamento
da metiltransferase, pois há a possibilidade disto ter sido
causado pelas infecções adquiridas pelas plantas durante
as análises. Paralelamente a estes experimentos, a região 5’
regulatória de uma das sequências genômicas da metiltrans-
ferase (cerca de 2,7 kb) foi clonada no vetor pPR97, para
regular a expressão do gene gus, resultando no plasmídeo
pCC2. Este plasmídeo foi utilizado para transformar discos
foliares de N. Tabacum via A. tumefaciens. Órgãos florais e
EXPRESSÃO DIFERENCIAL DE GENES EM RESPOSTA A LIMITAÇÃO DE FOSFATO INORGÂNICO
NO FUNGO FILAMENTOSO Neurospora Crassa: ANÁLISE FUNCIONAL DOS GENES preg E nuc-1
Juliana Leal
Orientador: Prof.Dr. Antonio Rossi Filho
Tese de Doutorado apresentada em 09/10/2008
O sistema de aquisição de fosfato inorgânico (Pi)
em N. Crassa é mediado por quatro genes regulatórios:
nuc-2, preg, pgov e nuc-1. Quando o Pi é limitante, NUC-2
inibe a ação do complexo PREG-PGOV, permitindo o trans-
porte do fator de transcrição NUC-1 para o núcleo e a ex-
pressão de fosfatases Pi-repressíveis. No presente estudo,
foi investigado o perfil de expressão gênica das linhagens
mutantes pregC e nuc-1RIP cultivadas em pH alcalino e
ácido, sob condições de limitação de Pi. O objetivo desse
trabalho foi contribuir para o entendimento da resposta
adaptativa à limitação de Pi e identificar genes regulados
pela ciclina PREG e pelo fator de transcrição NUC-1. Utili-
zando as técnicas de Differential Display (DDRT-PCR) e
Hibridação Subtrativa Supressiva (SSH) foram isolados
transcritos diferencialmente expressos nas linhagens
mutantes pregC e nuc-1RIP cultivadas em Pi-limitante, pH
7.8 e 5.4. Dentre os genes diferencialmente expressos na
linhagem mutante pregC que tiveram sua expressão valida-
da por Northern Blot, estão transcritos similares a genes
que codificam para ubiquinona C-metiltransferase, envol-
vida na biossíntese de coenzima Q; iso-orotato decarboxi-
lase, implicada na via de reciclagem de pirimidinas
(thymidine salvage pathway), uma via alternativa a via de
98
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista
vegetativos de 13 plantas transformadas com esta constru-
ção foram coletados e usados para extração de proteína
total e realização de cortes histológicos. Os extratos foram
analisados em ensaio fluorimétrico para detecção da ativi-
dade da proteína GUS. Os resultados mostraram que a se-
quência 5’ regulatória da metiltransferase, utilizada por esse
projeto, dirigiu a expressão do gus na antera de 12 das 13
plantas transgênicas analisadas. Em 9 dessas mesmas 12
plantas também foi detectada expressão de gus no pistilo,
como era esperado. O ensaio histoquímico de duas plantas
pCC2 mostram que a expressão no pistilo ocorre nos teci-
dos vascular e transmissor, e que na antera ocorre no
estômio, tecido vascular e grãos-de-pólen. A expressão do
gene gus na antera das plantas transgênicas foi inespera-
da. Este trabalho sugere que os diferentes transcritos das
metiltransferases específicas do pistilo de N. Tabacum pos-
suem uma importante função biológica nesta espécie. No
entanto, experimentos de silenciamento gênico ainda não
foram conclusivos para se desvendar suas funções na re-
produção. Assim, experimentos adicionais são necessários
para elucidar o papel do gene da metiltransferase na biolo-
gia da reprodução de N. Tabacum.
biossíntese de novo de pirimidinas; galactose-1-fosfato
uridililtransferase, a qual atua convertendo galactose-1-
fosfato e UDP-glicose em glicose-1-fosfato e UDP-
galactose. Por outro lado, dentre os genes com expressão
diferencial na linhagem mutante nuc-1RIP, os quais tive-
ram a expressão confirmada, estão aqueles que codificam
para as seguintes proteínas: hexagonal-1, principal compo-
nente dos corpos de Woronin; proteína de choque térmico
HSP70, a qual atua como chaperona numa variedade de
processos celulares; proteína carreadora de ADP/ATP, res-
ponsável pela importação de ADP presente no citosol e
exportação de ATP para fora da matriz mitocondrial; prote-
ínas ribossomais L16 e L30, envolvidas na biossíntese de
ribossomos; proteína da via biosintética de tiamina NMT-
1, implicada na biossíntese de tiamina; proteína bifuncional
ARGJ, a qual participa da biossíntese de arginina; guanilato
quinase, envolvida na via de reciclagem de purinas (guanine
salvage pathway), uma via alternativa a via de biossíntese
de novo de purinas. Além disso, genes como hsp-70 apre-
sentaram expressão alterada na linhagem mutante pacCKO
cultivada em pH ácido. Estes resultados revelam novas vias
metabólicas envolvidas na resposta adaptativa à limitação
de Pi e reforçam a existência de uma convergência entre o
sistema de aquisição de Pi, o circuito regulador do pH e o
metabolismo de nucleotídeos. Além disso, esses resulta-
dos indicam que o fator de transcrição PACC também tem
funções metabólicas em pH ácido.
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
IDENTIFICAÇÃO DE GENES REGULADOS PELO MECANISMO DE METILAÇÃO DURANTE A
EXPANSÃO DE CÉLULAS-TRONCO MESENQUIMAIS E NA FASE INICIAL DA OSTEOGÊNESE
Patrícia Santos Pereira Lima
Orientador: Prof.Dr. Wilson Araújo da Silva Junior
Tese de Doutorado apresentada em 13/10/2008
A medula óssea de adultos contém células-tronco
mesenquimais (CTMs) que atuam na regeneração dos teci-
dos mesenquimais tais como ósseo, cartilaginoso, adiposo
e muscular, além de ligamentos e tendões. Essas caracterís-
ticas elegem as CTMs como excelentes candidatas para o
uso nos protocolos de medicina regenerativa. Os aspectos
moleculares que governam a regulação para cada via de
diferenciação são uma área de investigação ainda em estu-
do e a identificação de genes cuja expressão promova, por
exemplo, a diferenciação osteoblástica ou iniba a diferenci-
ação em outros tipos celulares é uma estratégia amplamen-
te utilizada no esforço para a compreensão dos processos
moleculares envolvidos na diferenciação tecidual. O obje-
tivo deste estudo é identificar genes regulados pelo meca-
nismo de metilação durante a expansão e a diferenciação
inicial em osteoblastos das CTMs. As CTMs foram obtidas
da medula óssea de dois diferentes doadores, expandidas e
tratadas por quatro dias com o agente demetilante 5-aza-2´-
deoxicitidina. A diferenciação osteogênica foi estimulada
por sete dias, sendo os quatro últimos dias de tratamento.
Todos os experimentos foram realizados com seus respec-
tivos controles. Ao final dos quatro dias de tratamento, as
células foram coletadas para extração de RNA e DNA. Para
a identificação de genes com expressão aumentada após o
POLIMORFISMOS DOS GENES XRCC1 E XRCC3 E A RESPOSTA AOS DANOS INDUZIDOS NO
DNA PELO ETOPOSIDO EM PACIENTES COM CÂNCER DE MAMA
Ana Claudia Teixeira
Orientador: Profª.Draª. Catarina Satie Takahashi
Dissertação de Mestrado apresentada em 17/10/2008
Apesar de intensivos estudos e substanciais pro-
gressos no entendimento dos fatores de risco e suscetibi-
lidade ao câncer de mama (CM), esta neoplasia permanece
como importante causa de morte entre mulheres. Idade, his-
tória familiar, menarca precoce, menopausa tardia, ocorrên-
cia da primeira gravidez após os 30 anos e da nuliparidade
constituem fatores de risco. Além disso, polimorfismos nos
genes envolvidos no reparo de danos no DNA, como os
genes XRCC1 e XRCC3, podem contribuir para o aumento
da suscetibilidade ao CM. Os objetivos do presente traba-
lho foram avaliar pelo Teste do MN e Ensaio Cometa os
danos basais e a resposta celular aos danos induzidos, in
vitro, no DNA pelo quimioterápico Etoposido em pacientes
tratamento foi utilizada a plataforma de microarrays
CodeLink. A validação da expressão dos genes seleciona-
dos foi realizada por RT-PCR em tempo real e o padrão de
metilação da região promotora dos genes foi analisado por
sequenciamento após a modificação do DNA pelo bissulfito
de sódio. Três genes de cada etapa foram selecionados
para a análise: os genes FBLN2, LAMB2 e ADFP na expan-
são e na diferenciação foram selecionados TBKBP1,
ARHGEF17 e ALPL. Os genes SAA2 e MMP7, cuja expres-
são aumentou durante a diferenciação (amostras controle),
também foram selecionados. A expressão de todos os genes
foi validada por qRT-PCR embora, em muitos casos, a dife-
rença de expressão entre as amostras tratada e controle
tenha sido maior pela metodologia do microarray. No en-
tanto, a expressão destes genes nas amostras de diferentes
indivíduos foi semelhante, com exceção para os genes ADFP
e ALPL. A análise de metilação na ilha CpG dos genes
FBLN2, LAMB2, ADFP e ALPL revelou a presença de
metilação apenas na ilha CpG do gene FBLN2. A diminui-
ção na densidade de metilação do gene FBLN2 favoreceu o
aumento da sua expressão, embora a metilação não pareça
ser o único mecanismo responsável pela expressão deste
gene. O aumento da expressão de genes que codificam para
componentes da matriz extracelular (FBLN2, LAMB2, SAA2
e MMP7) e de genes relacionados à diferenciação celular
(ADFP e ALPL) assim como o perfil destas expressões após
os sete dias de diferenciação em osteoblastos, indicam que
a hipometilação favorece a diferenciação das CTMs.
com CM, virgens de qualquer tipo tratamento e em mulhe-
res saudáveis utilizadas como controles e além disso, esta-
belecer as frequências dos polimorfismos nos genes XRCC1
e XRCC3 na amostra de pacientes com CM e em mulheres
saudáveis e associação destes dois polimorfismos com a
suscetibilidade ao CM. No Teste do MN, foi observada
uma sensibilidade maior do grupo de pacientes aos danos
induzidos pelo Etoposido. O Ensaio Cometa mostrou que
pacientes e mulheres saudáveis respondem de modo seme-
lhante ao tratamento com o Etoposido. Também foi obser-
vado que pacientes acima de 45 anos apresentaram um grau
maior de sensibilidade aos danos induzidos pelo Etoposido
na concentração de 25 µM quando comparadas com pa-
cientes abaixo de 45 anos avaliadas no Ensaio Cometa.
Quanto ao hábito tabagista, este se mostrou um fator de
contribuição ao aumento de sensibilidade a indução de
danos pelo Etoposido no Ensaio Cometa no grupo de mu-
99

Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
lheres saudáveis, para os tratamentos com esta droga nas
concentrações de 10 e 25 µM. Na análise molecular, o alelo
variante 241Met do gene XRCC3 mostrou-se mais frequen-
te no grupo de pacientes tanto na amostra estudada na
análise citogenética quanto na amostra estudada na análi-
se molecular, sugerindo uma diminuição da capacidade de
reparo destas pacientes, o que poderia conferir um risco
INFLUÊNCIA DA HIPERGLICEMIA NOS NÍVEIS DE DANO NO DNA E NA EXPRESSÃO DE GENES
DE DEFESA AO DANO OXIDATIVO EM PACIENTES COM DIABETES MELLITUS TIPO 2
Danilo Jordão Xavier
Orientadora:Profª.Drª. Elza Tiemi Sakamoto Hojo
Dissertação de Mestrado apresentada em 24/10/2008
O Diabetes é uma das maiores causas de mortalida-
de no mundo, chegando a afetar cerca de 150 milhões de
pessoas atualmente, sendo que esse número tende a au-
mentar, principalmente devido à obesidade, fator intima-
mente relacionado ao Diabetes Mellitus tipo 2 (DM2). En-
tretanto, o desenvolvimento da doença depende de diver-
sos fatores de risco, tanto genéticos quanto ambientais,
que ainda necessitam ser elucidados. Uma característica
marcante dos pacientes diabéticos é um alto nível de es-
tresse oxidativo, resultante principalmente da hiperglicemia
e diminuição da defesa anti-oxidante. No presente traba-
lho, foi proposta a detecção dos níveis de dano no DNA
pelo ensaio do cometa, assim como comparar os níveis de
expressão de genes relacionados com a defesa, sinalização
e reparo do DNA em resposta ao estresse oxidativo (ATM,
ATR, SOD1, OGG1, XRCC1, APEX1 e FEN1) em pacientes
DM2 hiperglicêmicos (PAH) e não hiperglicêmicos (PANH).
Adicionalmente, o mesmo estudo foi realizado em pacien-
tes DM2, cujas amostras foram coletadas em dois momen-
tos: antes (PI) e após (PPI) um período de internação (sete
dias) para compensação da doença e normalização dos ní-
veis glicêmicos, comparativamente ao grupo controle. Na
análise pelo ensaio do Cometa, o grupo PAH apresentou
níveis significativamente (p<0,05) maiores de danos no DNA
em relação ao grupo PANH, sendo que o último apresentou
DESEQUILÍBRIOS CROMOSSÔMICOS EM NOVE CASOS DE OSTEOSSARCOMA DETECTADOS
ATRAVÉS DE HIBRIDAÇÃO GENÔMICA COMPARATIVA (CGH)
Angel Mauricio Castro Gamero
Orientador: Prof.Dr. Luiz Gonzaga Tone
Dissertação de Mestrado apresentada em 30/10/2008
O osteossarcoma (OS) é o tumor ósseo maligno mais
frequente da infância e adolescência com uma taxa de so-
brevida livre de eventos de 50 – 70% após 3 anos. O pico de
incidência ocorre na segunda década da vida, característi-
100
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista
aumentado ao CM. Quanto ao hábito tabagista, somente
as pacientes não fumantes, portadoras do alelo 241Met do
gene XRCC3, possuem um risco aumentado para o CM.
Não foi encontrada associação do polimorfismo Arg399Gln
do gene XRCC1 com o risco ao CM mesmo quando associ-
ado à fatores de risco como hábito tabagista e a presença
de familiares com câncer.
níveis de dano semelhantes ao grupo controle, demons-
trando que a hiperglicemia é o principal fator na indução do
estresse oxidativo em pacientes DM2. Com relação aos
pacientes submetidos à internação por 7 dias, o grupo PPI
apresentou níveis significativamente (p<0,05) menores de
dano em relação ao grupo PI, embora estes tenham se apre-
sentado acima dos observados para o grupo controle. A
análise por qRT-PCR revelou perfis de expressão gênica
diferenciados entre os grupos de pacientes estudados,
embora as diferenças não tenham sido estatisticamente sig-
nificativas. Observou-se uma repressão de genes de repa-
ro e de sinalização (ATM, ATR, OGG1, XRCC1, FEN1 e
APEX1) nos grupos PAH e PI, que apresentaram altos ní-
veis de danos no DNA. Esse resultado pode apresentar um
significado biológico relevante, sendo que na literatura,
foram relatados resultados compatíveis com o estado de
repressão transcricional de alguns desses genes, como os
genes ATM e ATR. Os resultados obtidos demonstram a
influência da hiperglicemia na indução de dano oxidativo
no DNA. Além disso, os dados acerca da expressão gênica
sugerem que pacientes DM2 regulam diferencialmente
genes envolvidos com os processos de defesa, sinalização
e reparo do DNA em resposta ao estresse oxidativo, o que
pode estar relacionado com os níveis de dano observados
em cada grupo analisado. Os mecanismos envolvidos na
regulação desses processos são complexos e ainda neces-
sitam ser elucidados, mas os dados do presente trabalho
mostram informações relevantes que podem contribuir na
compreensão desses mecanismos.
ca que sugere uma relação entre o rápido crescimento ós-
seo da adolescência e o desenvolvimento da neoplasia.
Ainda, o conhecimento das bases genéticas é insuficiente.
Estudos de citogenética clássica têm demonstrado que o
OS caracteriza-se por exibir alta heterogeneidade cariotípica,
incluindo altos graus de aneuploidia e rearranjos estrutu-
rais complexos. A técnica de CGH constitui uma ferramenta
valiosa na analise do perfil genômico de tumores sólidos, e
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
tem confirmado a complexidade das alterações cariotípicas
em OS, descrita pela citogenética convencional. Não
obstante, os estudos existentes são divergentes, e poucos
têm estudado as informações obtidas por CGH em relação
com a progressão tumoral. O objetivo do presente estudo
foi identificar a presença de desequilíbrios cromossômicos
em amostras de OS por meio da técnica de CGH. Os experi-
mentos de CGH foram realizados de acordo com o descrito
por Kallioniemi et al (1994). Foram analisadas nove amos-
tras (3 biópsias, 5 ressecções após quimioterapia e 1 metás-
tase). O CGH detectou desequilíbrios cromossômicos em
todas as amostras. Os ganhos foram mais frequentes que
as perdas. Muitas alterações cromossômicas foram obser-
vadas, especialmente ganhos nos cromossomos 1q, 2, 3p,
BUSCA DE INIBIDORES NATURAIS CONTRA O VENENO DE Apis mellifera
Daniel Macedo de Melo Jorge
Orientadora: Profª.Drª. Silvana Giuliatti
Dissertação de Mestrado apresentada em 31/10/2008
Os insetos são os mais numerosos animais encon-
trados no mundo, com mais de 675 mil espécies conheci-
das. Pertencentes à ordem Hymenoptera, da superfamília
Apoidea, as abelhas são encontradas distribuídas em apro-
ximadamente 20 mil espécies. No Brasil estima-se que exis-
tam 1.700 espécies. Uma das principais espécies é a Apis
mellifera, com ocorrência cosmopolita. A Apis mellifera,
popularmente conhecida como abelha africanizada, é agres-
siva, enxameia várias vezes ao ano e utiliza uma grande
variedade de locais para nidificar. Esse comportamento au-
menta o contato direto entre o inseto e a população, au-
mentando o número de acidentes. Os acidentes com abe-
lhas representam um problema de saúde pública em diver-
sos países do mundo pela frequência com que ocorrem e
pela mortalidade que ocasionam. O presente estudo pro-
põe a busca por inibidores naturais contra o veneno de
abelhas. Um sistema e uma base de dados foram desenvol-
vidos para a integração entre dados de plantas medicinais
antivenenos e os venenos de abelhas. As atividades anti-
hemorrágica, anti-proteolítica, anti-miotóxica, anti-fosfoli-
ASPECTOS MOLECULARES DA EVOLUÇÃO DO GENE DARC EM PRIMATAS
Thiago Yukio Kikuchi Oliveira
Orientador: Wilson Araújo da Silva Junior
Dissertação de Mestrado apresentada em 10/12/2008
Genes envolvidos com a interação hospedeiro-pa-
tógeno são fortemente afetados pela seleção natural posi-
tiva. O gene codificante do antígeno sanguíneo Duffy, tam-
4, 5p, 6, 7, 8, 11p, 14q, 16, 21q e X; e perdas nos cromosso-
mos 1p, 2q, 3q, 5q, 9q, 11q e 17q. As regiões mínimas de
sobreposição mais frequentes foram ganhos de 2p13-p14,
2q36-q37, 4q21 e 8p22, e perdas de 1p34.2, 3q22-q23 e 3q24.
Três pacientes apresentaram amostras pareadas, e as alte-
rações cromossômicas detectadas foram muito variadas,
refletindo a heterogeneidade cromossômica intratumoral em
cada caso. A mais alta divergência clonal entre as amostras
pareadas foi observada entre a amostra de ressecção e a
amostra metastática correspondente, mostrando a comple-
xidade cromossômica adquirida durante a progressão e
metastatização no caso descrito. Ainda são necessárias
investigações adicionais, que contribuíam para a caracteri-
zação completa dos genes localizados nessas regiões.
pase e anti-edema de plantas medicinais antiveneno foram
analisadas por meio de ensaios farmacológicos. As possí-
veis interações entre as toxinas Melitina e Fosfolipase A2
com inibidores foram avaliadas, através do docking virtu-
al. O banco de dados, denominado Bee Venom, foi imple-
mentado e os dados de bancos de dados públicos foram
inseridos no sistema. O sistema foi liberado para acesso
público no endereço eletrônico http://gbi.fmrp.usp.br/
beevenom/. Durante a análise da proteína Melitina foram
encontradas as regiões da proteína em que os possíveis
inibidores devem interagir e identificadas as propriedades
químicas que os inibidores devem possuir para interagir
corretamente com a Melitina. Nas análises in silico foi pos-
sível identificar 10 possíveis inibidores que interagiram
corretamente com o sítio ativo da Fosfolipase A2. Algumas
espécies do Banco de Germoplasma da FMRP/USP foram
obtidas e utilizadas nos experimentos de atividade fosfoli-
pásica indireta e de Edema, sendo possível observar inibi-
ção do veneno total e da proteína Fosfolipase A2. Os com-
postos sintéticos e inibidores avaliados não causaram ini-
bição em todos os experimentos avaliados. Já as plantas
obtidas no laboratório de Toxinas Animais e Inibidores
Naturais e Sintéticos causaram inibição do veneno total e
da proteína Fosfolipase A2.
bém conhecido como DARC (Duffy Antigen Receptor for
Chemokines), tem um importante papel na invasão dos eri-
trócitos pelos parasitas causadores da malária, Plasmodium
vivax em humanos e Plasmodium knowlesi em outros
primatas. A estrutura do gene DARC já é conhecida, estan-
do este presente na região 1q22–q23 do cromossomo 1, e
sendo composto por dois éxons separados por um grande
101

Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
íntron. Em uma população africana a deleção de um
nucleotídeo no domínio GATA-1 da região promotora do
gene é responsável pela não expressão de DARC nos eri-
trócitos e pela resistência à invasão pelo P. vivax. Além
disso, o antígeno DARC age como um receptor promíscuo
de quimiocinas, sendo expresso nos eritrócitos, células
endoteliais de vênulas e outros tecidos. Devido a esse pa-
pel dual, no presente estudo sequenciou-se regiões
homólogas do gene DARC em macacos do Novo e Velho
Mundo e utilizando métodos estatísticos procurou-se indí-
cios da seleção natural positiva na sua história evolutiva.
Nenhuma nova mutação foi encontrada no promotor ou na
região codificante. As árvores filogenéticas pelos métodos
de máxima parcimônia, máxima verossimilhança e neighbor-
join apresentaram topologias semelhantes com três grande
clados monofiléticos reconhecíveis e com a espécie Macaca
fascicularis apresentando um perfil polifilético. O teste de
ANÁLISE DA EXPRESSÃO GÊNICA NO DERMATÓFITO Trichophyton rubrum MIMETIZANDO A
INFECÇÃO in vitro: PH E DIFERENTES FONTES DE CARBONO REGULANDO GENES
Fernanda Cristina de Albuquerque Maranhão
Orientador: Nilce Maria Martinez Rossi
Tese de Doutorado apresentada em 12/12/2008
Dermatófitos são fungos filamentosos com a habili-
dade de invadir substratos queratinizados e causar derma-
tofitoses em humanos e animais, penetrando profundamen-
te apenas em hospedeiros imunocomprometidos. Tricho-
phyton rubrum é um fungo antropofílico e cosmopolita, o
mais comum agente de micoses superficiais, que usa com-
ponentes celulares como proteínas e lipídeos após uma es-
pecífica regulação de sua expressão gênica governada pelo
pH ambiente e sensoriamento celular. A virulência de T.
rubrum é relacionada com a secreção de enzimas proteolíti-
cas, um importante fator determinante na invasão, utilização
e subsequente disseminação através do estrato córneo. O
objetivo desse estudo foi identificar através de Hibridiza-
ção Subtrativa Supressiva (SSH) genes de T. rubrum prefe-
rencialmente expressos durante o crescimento na presença
de queratina e lipídeos, quando T. rubrum degrada fontes
de carbono tipicamente encontradas em células epidérmi-
cas. Inicialmente, nós avaliamos as mudanças no pH extra-
celular durante seu crescimento em queratina e lipídeo (de-
pois de 6, 12, 24, 48, 72 h e 7 dias) em pH inicial 5,0, onde foi
observado um gradual aumento do pH basal sob ambas as
condições de teste, comparado com a condição glicose (con-
trole). Também identificamos 576 transcritos de T. rubrum
diferencialmente expressos por SSH usando conídios culti-
vados por 72 h em queratina como teste e em glicose como
controle. Os genes de T. rubrum ativados codificam proteí-
102
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista
seleção positiva pelos métodos de Nei-Gojobori, máxima
verossimilhança por ramos e máxima verossimilhança por
sítios não demonstraram, estatisticamente, à ação da sele-
ção positiva sobre o gene DARC. Porém, o teste de máxima
verossimilhança por sítio em domínios demonstrou que
existem regiões do gene DARC sujeitas à diferentes pres-
sões seletivas, mas também falhou em detectar a assinatura
da seleção positiva. Os resultados indicam a presença da
seleção darwiniana sobre a região de ligação do P. vivax,
porém os testes de máxima verossimilhança utilizados, apa-
rentemente, não possuem poder suficiente para detectar a
sua assinatura. Além disso, os resultados sugerem que a
região de ligação do P. vivax está sob influência de duas
pressões seletivas antagônicas (seleção positiva exercida
pelo parasita e seleção purificadora exercida pelas quimio-
cinas) o que pode, também, explicar a não detecção da sele-
ção positiva.
nas putativas que foram validadas por cDNA dot-blot e
northern blot, mostrando similaridade com proteínas
fúngicas envolvidas no metabolismo básico, crescimento e
virulência, p. ex., transportadores ABC-MDR, MFS e ATPase
de cobre, permease, NIMA interactive protein, poliproteína
Gag-Pol, fatores de virulência subtilisinas serino-proteases
(Sub 3 e 5) e metaloproteases (Mep 3 e 4) e Hsp30. Adicio-
nalmente, entre os 762 clones obtidos na biblioteca da con-
dição lipídeo (72 h), 80 transcritos superexpressos foram
confirmados por cDNA dot-blot, revelando 14 unigenes si-
milares à proteínas de vários organismos patogênicos, como
glicoproteína 43 kD, transportador MDR, proteína G, quitina
sintase e serino/treonina fosfatase. Transcritos do gene
TruMDR2, codificador de um transportador ABC, foi isola-
do tanto na presença de queratina quanto em lipídeo, e a
análise da linhagem mutante ∆TruMDR2 de T. rubrum mos-
trou uma redução na atividade infectante, caracterizada pelo
baixo crescimento em unhas humanas comparada com o tipo
selvagem. A alta expressão de transportadores por T. rubrum
em condições que mimetizam a infecção e a redução na viru-
lência de ∆TruMDR2 durante o modelo in vitro sugerem
que transportadores estão envolvidos na patogenicidade
de T. rubrum. Outro linhagem mutante (∆pacC-1) com um
nocaute no gene pacC que codifica um fator de transcrição
regulado pelo pH local, mostrou a expressão de proteases
(Sub 3 e 5 e Mep 4) diminuída após o crescimento em
queratina em comparação com o tipo selvagem em análises
de northern blots. Essas proteases tem uma atividade ótima
em pH alcalino, e nossos resultados indicam uma regulação
defectiva do gene pacC de T. rubrum na ativação de
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP

proteases. Em conclusão, através do uso de SSH foi possí-
vel identificar genes de T. rubrum ativados após tratamen-
tos específicos, o que sugere a importância dos mesmos na
interação dermatófito-hospedeiro, instalação e manuten-
ção da doença. Esses resultados disponibilizam novos da-
dos sobre T. rubrum que levarão a um melhor entendimen-
to dos mecanismos moleculares envolvidos no crescimen-
to, metabolismo geral e patogenicidade, e também auxiliar
na identificação de novos e efetivos alvos de drogas para
dermatófitos.

GINECOLOGIA E OBSTETRÍCIA

DIAGNÓSTICO DO FATOR RHD UTILIZANDO A REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE CON-

VENCIONAL

Conrado Milani Coutinho tras de DNA extraídas de sangue periférico de 23 indivíduos

Orientador: Prof. Dr. Geraldo Duarte
Dissertação de Mestrado apresentada em 10/10/2008
A aplicação dos métodos de biologia molecular tem
acrescentado benefícios aos métodos convencionais de diag-
nóstico do grupo sanguíneo Rhesus (Rh). Alguns estudos
evidenciaram a superioridade prática da genotipagem RhD
por reação em cadeia da polimerase (PCR) em relação às técni-
cas de identificação do fenótipo dos antígenos do grupo Rh
obtidas pela hemaglutinação. Esta análise molecular tem sido
realizada utilizando-se várias sequências cromossômicas e
diferentes tipos de técnicas. O grupo Rh contém dois genes
homólogos, um codificando o antígeno D e o outro os
antígenos C/c e E/e. Os objetivos deste projeto foram: 1)
Detectar a presença de sequência RhD específica dos indi-
víduos Rh positivo; 2) Comparar a presença/ausência des-
tas sequências com o grupo sanguíneo detectado pela he-
maglutinação e calcular a sensibilidade e a especificidade
da PCR. Para cumprir estes objetivos, foram analisadas amos-
(4 homens e 19 mulheres) Rh positivo (11) e negativo (12)
para amplificação de sequências dos genes RhD e RhCE
utilizando a técnica de PCR convencional. Nestas amostras,
a comparação dos resultados da PCR com os da hemagluti-
nação demonstrou total concordância entre os testes. A
sensibilidade do método foi avaliada pela realização da PCR
em amostras de sangue Rh positivo diluídas em água e em
sangue Rh negativo, amplificando o DNA na concentração
de até 4 pg/µl. Estes resultados indicaram que a técnica de
PCR mostrou-se efetiva no diagnóstico da genotipagem do
fator Rh, vislumbrando-se a possibilidade de sua utilização
em outros tecidos de origem êmbrio-fetal para orientação de
diagnóstico fetal invasivo e do uso profilático da imunoglo-
bulina anti-D apenas nos casos de incompatibilidade Rh
materno-fetal. Adicionalmente, indicaram que havendo me-
lhora da sensibilidade desta técnica será possível detectar
quantidades objetivamente menores de DNA fetal na circu-
lação materna, fundamentando um importante passo rumo
ao diagnóstico do fator Rh fetal por técnica não invasiva.

INFLUÊNCIA DA ENDOMETRIOSE SOBRE A RESPOSTA OVARIANA EM CICLOS DE REPRODU-

ÇÃO ASSISTIDA: PROVÁVEL ASSOCIAÇÃO COM PREJUÍZO DO DESENVOLVIMENTO FOLICU-
LAR, MAS NÃO DO pool DE RESERVA

Bruno Ramalho de Carvalho Métodos: Foram analisados 87 ciclos de RA em mu-

Orientadora: Profª. Drª. Ana Carolina J. de Sá Rosa e Silva
Dissertação de Mestrado apresentada em 13/10/2008
Introdução: A avaliação da reserva ovariana em re-
produção assistida (RA) busca identificar mulheres em que
a exaustão folicular determine as dificuldades reprodutivas.
Além da idade, a presença de causas outras de subfertilida-
de, como a endometriose (EDT), implica interferências ne-
gativas potenciais sobre a resposta ovariana.
Objetivo: Avaliar a reserva folicular ovariana de
mulheres subférteis portadoras de endometriose e determi-
nar o melhor preditor de má resposta em RA.
lheres com idade inferior a 40 anos, ciclos menstruais regu-
lares, sem patologias endócrinas e com ambos os ovários,
sendo 30 ciclos em portadoras de EDT (casos) e 57 ciclos
em mulheres subférteis por fator masculino exclusivo (con-
troles). A reserva ovariana foi inferida pelas dosagens basais
dos hormônios anti-mülleriano (AMH) e folículo estimu-
lante (FSH), a contagem de folículos antrais pequenos (CFA)
e a medida do volume ovariano médio (VOM). Curvas
Receiver Operating Characteristic (ROC - AUC) foram
traçadas para avaliação da capacidade discriminatória de
cada teste em identificar má resposta.
Resultados: Pacientes com EDT apresentaram

103

Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
FSH basal significativamente maior em relação aos contro-
les (9,13 ± 5,09 mUI/mL vs. 6,28 ± 2,45 mUI/mL; p < 0,05),
sem diferenças para AMH, CFA e VOM. O número total de
oócitos aspirados foi menor na EDT em relação aos contro-
les (5,33 ± 3,43 vs. 8,28 ± 5,8; p < 0,05) e correlacionou-se
significativamente com o AMH em ambos os grupos (EDT:
r = 0,61; Controles: r = 0,58; p<0,0001). O FSH basal apre-
sentou correlação significativa com o total de oócitos aspi-
rados apenas na EDT (r = -0,48; p<0,01); também na EDT, o
AMH basal foi o marcador individual com melhor potencial
discriminatório para má resposta (AUC = 0,875), seguido
de FSH basal (AUC = 0,682) e VOM (AUC = 0,665), en-
quanto no grupo controle, o AMH foi o melhor marcador
PERFIL DA SECREÇÃO DE PROGESTERONA EM RATAS NO PROESTRO: UMA NOVA PROPOS-
TA PARA O CONTROLE DO PICO PRÉ-OVULATÓRIO DE LH
Fernanda Vieira Rodovalho Callegari
Orientadora: Profª. Drª. Janete A. Anselmo Franci
Tese de Doutorado apresentada em 04/12/2008
A ocorrência do pico pré-ovulatório de LH no
proestro depende da pré-exposição aos estrógenos segui-
da da ação aguda da progesterona, hormônio responsável
pela deflagração e amplitude desse pico. No entanto, a ori-
gem da progesterona durante essa fase do ciclo ainda é
incerta. Enquanto alguns estudos sugerem que a adrenal
contribui significativamente para secreção de progestero-
na nesse período, outros apontam a ovário como a fonte
principal. Sendo assim, o objetivo desse trabalho foi estu-
dar o perfil e a origem da secreção de progesterona durante
o proestro e a sua relação com o pico pré-ovulatório de LH.
Para tanto, às 7h da manhã do proestro ratas Wistar adultas
foram submetidas apenas à canulação da veia jugular (con-
trole) ou a esse procedimento seguido pela cirurgia fictícia
de retirada do ovário e adrenal (Sham), ou pela ovariecto-
mia (OVX) ou pela adrenalectomia (ADX). Amostras san-
guíneas foram coletadas a cada 15 minutos das 11h00 às
13h45 para dosagem de progesterona, estradiol e corticos-
terona e a cada hora das 14h às 19h para dosagem desses
três hormônios e do LH. Adicionalmente, 7 dias depois da
ovariectomia, ratas foram tratadas com óleo milho (OVO)
ou 17-β-estradiol (OVE) por 3 dias consecutivos, para com-
preender melhor o padrão de secreção de progesterona pela
adrenal e verficar essa secreção se essa secreção poderia
ser modulada pelos estrógenos. Um, dois ou três dias de-
pois da última injeção amostras de sangue foram coletadas
conforme descrito acima. No proestro, nenhuma diferença
significativa foi detectada entre os grupos controle e Sham
em relação ao número de animais que apresentaram o pico
pré-ovulatório de LH, ao número de oócitos presentes nos
ovidutos na manhã do estro, bem como às concentrações
plasmáticas de LH, progesterona, estradiol e corticostero-
104
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista
(AUC = 0,8372), seguido do VOM (AUC = 0,709) e da CFA
(AUC = 0,686).
Conclusões: O FSH basal foi significativamente
maior nas pacientes subférteis com EDT e correlacionou-
se com a resposta em RA apenas nas portadoras da doen-
ça. O AMH basal foi o marcador com o melhor potencial
discriminatório de má resposta, independentemente da pre-
sença da endometriose. CFA e VOM não se apresentaram
como bons preditores de má resposta. Sendo assim, a as-
sociação entre endometriose e subfertilidade deve estar
vinculada a alterações do crescimento/desenvolvimento
adequado do folículo ovariano e não a prejuízos sobre a
reserva folicular gonadal propriamente dita.
na, sendo os dados referentes a esses dois grupos apre-
sentados em um único grupo denominado Controle. A se-
creção de estradiol foi similar nos grupos Controle e ADX e
significativamente reduzida no grupo OVX. Como espera-
do, a secreção de corticosterona foi completamente abolida
no grupo ADX, enquanto foi similiar nos grupos Controle e
OVX. Em todos os grupos experimentais as concentrações
basais de progesterona foram em média de 2 pg/mL. Entre
às 12h e 14h o grupo Controle apresentou um aumento
discreto, mas significativo, da secreção de progesterona
(pico 1: de 3,5 ± 1,1 para 22,3 ± 2,7 ng/mL), e após às 15h um
segundo pico de progesterona (pico 2: de 10,5 ± 2,2 para
43,0 ± 2,5 ng/mL), como também o pico de LH (25,4 ± 2,4 ng/
mL). Embora o grupo OVX não tenha apresentado o pico 2
de progesterona (de 5,7 ± 2,2 para 6,5 ± 1,2 ng/mL), o pico
de LH (26,5 ± 3,9 ng/mL) foi similar ao do grupo Controle.
Nessas ratas o pico 1 de progesterona foi atenuado para
12,3 ± 1,9 ng/mL. Ambos picos de progesterona 1 e 2 como
o pico de LH, foram praticamente abolidos nas ratas ADX
(pico 1: de 2,0 ± 0,3 para 4,5 ± 0,7 ng/mL; pico 2: de 2,2 ± 0,4
para 8,9 ± 3,6 ng/mL). Nas ratas OVX, tratadas ou não com
estradiol, um pico de progesterona (provavelmente de ori-
gem adrenal) foi observado diariamente por volta das 12h00,
sendo que a amplitude desse pico não foi influenciada pelo
estradiol (OVO: 19,0 ± 5,7 ng/mL; OVE: 22,9 ± 5,3 ng/mL).
Esses dados, em conjunto, sugerem que: 1) o pico 1 de
progesterona é de origem adrenal e está envolvido na gê-
nese do pico de LH ; 2) esse pico parece ser circadiano uma
vez que ratas OVX apresentam um ritmo diário de secreção
de progesterona, com um pico por volta das 12h00; 3) o
pico 2 de progesterona é de origem ovariana e não é neces-
sário para ocorrência do pico de LH; 4) existe uma comuni-
cação endócrina entre ovário e a adrenal de forma que o
ovário participa da regulação da secreção de progesterona
pela adrenal e 5) o estradiol não está envolvido na regula-
ção da secreção de progesterona pela adrenal.
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
INFLUÊNCIA DO ESTROGÊNIO NA HISTOMORFOMETRIA DA PAREDE VAGINAL: REPERCUS-
SÕES NA FUNÇÃO SEXUAL
Lúcia Alves da Silva Lara
Orientadora: Profª. Drª. Ana Carolina J. de Sá Rosa e Silva
Dissertação de Mestrado apresentada em 11/12/2008
Introdução: O hipoestrogenismo causa alteração es-
trutural na vaginal que pode levar a alterações na resposta
sexual. Tem sido reportado o afinamento da parede vaginal
após a menopausa, porém, sem comprovação morfométrica.
Objetivos: Verificar a espessura da parede vaginal
em condições normo e hipoestrogenicas, correlacionar dis-
função sexual com espessura da parede, expressão do re-
ceptor estrogênico e estradiol sérico.
Métodos: Espécimes cirúrgicos da vagina de 31 mu-
lheres, sendo 18 normoestrogênicas e 13 na pós-menopau-
sa, submetidas a colpoperineoplastia por prolapso genital I
e II. Aferidos: FSH e estradiol, prolactina e TSH. Realizou-
se: tricrômico de Masson e HE, histomorfometria, imuno-
histoquímica para receptores estrogênicos α, semiquantifi-
IMUNOLOGIA BÁSICA E APLICADA
ESTUDO DA DETECÇÃO DA INTERFERÊNCIA VIRAL ENTRE OS VÍRUS DENGUE-2 E FEBRE
AMARELA
Emiliana Pereira Abrão
Orientador: Prof. Dr. Benedito Antônio Lopes da Fonseca
Tese de Doutorado apresentada em 27/10/2008
A dengue é a mais importante doença causada por
um arbovírus. Anualmente as infecções com o vírus den-
gue ocasionam aproximadamente 100 milhões de casos de
dengue clássico e mais de 500 mil de dengue hemorrágico
em todo o mundo (Halstead, 2007)). O principal vetor urba-
no dos vírus dengue é o mosquito Aedes aegypti (Ae
aegypti), que se caracteriza por seu perfil altamente domés-
tico. Da mesma forma que a dengue, outra arbovirose de
semelhante importância é a febre amarela. Esta se caracteri-
za por ser uma doença infecciosa aguda, prevalente nas
Américas e África. Manifesta-se nas modalidades urbana e
silvestre e é causada pelo vírus da febre amarela, um
arbovírus transmitido pelos mosquitos Aedes aegypti (no
caso da modalidade urbana) e Ae. africanus, Haemagogus
-e outros (no caso da modalidade silvestre ). Com relação à
febre amarela, embora uma vacina segura esteja disponível
há 60 anos, houve um aumento no número de pessoas in-
fectadas desde o início da década de 1980 em países da
América do Sul, incluindo o Brasil. No entanto, o ciclo urba-
cados pelo H-score, função sexual aferida pelo GRISS. Re-
sultados: A parede vaginal é mais espessa no grupo meno-
pausa em relação ao grupo menacme (parede anterior
2,72±0,72mm e 2,16±0,43, p=0,01 e parede posterior
2,63±0,71mm e 2,07±0,49mm, p=0,01, respectivamente). A
espessura e a fração de área da camada muscular são maio-
res no grupo menopausa (parede anterior:1,54±0,44 e
1,09±0,3mm, p=0,02 e posterior 1,45±0,47 e 1,07±0,44mm,
p=0,03 e 0,51±0,10 e 0,42±0,11mm2, p=0,03 e 0,40±0,10 e
0,49±0,08 mm2, p=0,02). O epitélio vaginal do segmento
proximal é mais espesso do que o segmento médio na pare-
de posterior (0,17±0,07mm, 0,15±0,05mm, 0,24±0,09mm,
p=0,02). Não houve correlação entre dor coital, espessura
da parede e concentrações do estradiol nos dois grupos.
Conclusão: A parede vaginal é mais espessa após a meno-
pausa. Neste estudo, não ocorreu associação entre disfun-
ção sexual genital concentrações estrogênicas e espessura
da parede vaginal.
no da doença não tem sido detectado por mais de meio
século no país. Algumas hipóteses têm sido investigadas
para se tentar explicar essa ausência de epidemias no Brasil,
embora nenhuma delas tenha sido efetivamente comprova-
da. Este trabalho teve como objetivo estudar este achado
epidemiológico através da análise in vitro de um fenômeno
conhecido como interferência viral, uma situação em que a
infecção por um determinado tipo viral impede a infecção
das mesmas células por um vírus diferente. Desta forma, foi
estudada a influência dos vírus dengue sorotipo 2 (DENV-
2) e febre-amarela-cepa vacinaI17U (VFA 170) e selvagem
(BeH111) em uma mesma cultura de células C6/36 (células
provenientes de Aedes albopictus) e células U937, anali-
sando-se as dinâmicas de replicações virais. Observamos
que células derivadas de Ae albopictus cronicamente in-
fectadas com DENV-2 não se apresentam permissivas à
replicação do VFA, cepas17D e BeH111. Porém, em ensaios
de competição entre os dois vírus observamos uma maior
eficiência de replicação de VFA 17D e VFABeH111 em rela-
ção ao DENV-2. Finalmente, os ensaios de interferência viral
envolvendo linhagens de células de mamífero U937 demons-
traram uma ligeira diminuição da replicação de VF A 17D em
células cronicamente infectadas com DENV2.
105

Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
EFEITO TERAPÊUTICO DA VACINA DNA-Hsp65 EM MELANOMA B16F10
Giovanna Ribeiro-Santos
Orientador: Prof. Dr. Celio Lopes Silva
Tese de Doutorado apresentada em 05/11/2008
O câncer é um importante problema de saúde pública
mundial e uma das causas mais relevantes de morbidade e
mortalidade em crianças e adultos. Apesar dos inúmeros
progressos no tratamento, incluindo aprimoramentos cirúr-
gicos, quimioterápicos e radioterápicos, a cura da maior par-
te das neoplasias ainda depende da identificação precoce
da afecção, não sendo, muito frequentemente, possível após
a disseminação metastática da doença. Assim, novas abor-
dagens terapêuticas são continuamente investigadas e den-
tre elas, a imunoterapia representa uma forma de crescente
relevância. Dentre as novas estratégias imunológicas para
imunoterapia de tumores, vale a pena ressaltar o uso de
imunomoduladores como as proteínas de choque térmico
(Hsp). As características das Hsps em facilitar a apresenta-
ção de peptídeos tumorais, estimular a secreção de citoci-
nas inflamatórias por células apresentadoras de antígenos e
mediar a maturação de células dendríticas, fazem delas exce-
lentes candidatas para o desenvolvimento de vacinas con-
tra o câncer e doenças infecciosas. Nosso grupo vem de-
senvolvendo uma vacina de DNA (DNA-Hsp65) que se
mostrou eficiente na profilaxia e terapia de doenças infecci-
MORTE DE LINHAGEM CELULAR DE LEUCEMIA MIELÓIDE HUMANA INDUZIDA PELA LECTINA
ARTIN M DE Artocarpus integrifolia
Fernanda Caroline de Carvalho
Orientadora: Profª. Drª. Maria Cristina R. Antunes Barreira
Tese de Doutorado apresentada em 18/12/2008
Artin M, uma lectina ligante de manose presente
nas sementes de Artocarpus integrifolia Gaca), induz
hapotaxia de neutrofilos, produção de IL-12 por macrófa-
gos e células dendríticas, e induz degranulação de mastóci-
tos. Todos estes eventos são mediados pelo reconheci-
mento de glicanas, contendo manose, presentes na super-
fície celular. Devido alterações nos oligossacarídeos da
superfície celular serem associadas a transformações ma-
lignas, objetivamos testar o efeito de Artin M de jaca
(jArtinM) e recombinante (rArtinM), quando a atividade
citotóxica em células transformadas. A capacidade anti-
proliferativa foi testada, pelo método MTT, nas linhagens
leucêmicas (NB4, K562 e U937), linfoma (Granta 519) e car-
cinomas (HT29, MKN45 e AGS). Somente a lectina de jaca
apresentou capacidade citotóxica após 48 horas de trata-
mento. A linhagem celular NB4 foi a mais sensível ao trata-
mento com jArtinM e apresentou exposição de fosfatidil
serina e a quebra do potencial de membrane de mitocôndria,
106
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista
osas, doenças autoimunes, alergia e câncer. No presente
trabalho, decidimos analisar mais detalhadamente, do pon-
to de vista imunológico, a ação da vacina DNA-Hsp65 em
modelo experimental em camundongos inoculados com
melanoma B16F10. Num grupo de animais o DNA-Hsp65 foi
inoculado por via intratumoral e no outro foi feita transfe-
rência de células B16F10 previamente transfectadas com a
vacina DNA-Hsp65. A vacina DNA-Hsp65 mostrou capaci-
dade de retardar o desenvolvimento do tumor e aumentar a
sobrevida dos animais. Essa atenuação do crescimento
tumoral e o aumento da taxa de sobrevivência foram correla-
cionados com o aumento da porcentagem de linfócitos T
CD4 e T CD8 ativados, considerados importante indicador
de resposta contra tumores. A vacina também induziu au-
mento da expressão de moléculas co-estimulatórias na su-
perfície de células dendríticas no sítio tumoral, favorecendo
uma apresentação antigênica eficiente num ambiente ativa-
dor da resposta imune. Além disso, foi observado aumento
significativo da porcentagem de lise específica das células
de melanoma B16F10 mediada por linfócitos T CD8
citotóxicos. Assim sendo, os dados aqui apresentados mos-
tram o potencial antitumoral da vacina DNA-Hsp65 por meio
da estimulação da resposta imunológica e ao mesmo tempo
abrem perspectivas para estudos futuros que possam au-
mentar a efetividade dessa vacina no combate a tumores.
características de apoptose. Contudo, não foi observado
ativação de caspas e 9, 8 e 3 e fragmentação do DNA genô-
mico, sugerindo um evento de morte celular programado
independente da ativação de caspases. Adicionalmente, as
células NB4 tratadas com jArtinM expressaram marcador
granulocítico CD11b, embora não fossem capazes de reali-
zar “burst” oxidativo, característico de granulócitos madu-
ros. Considerando, então, a diferenciação promovida por
jArtinM insuficiente para promover a morte celular por
maturação, investigamos a produção de peróxido de hidro-
gênio pelas células tratadas e observamos um aumento
considerável deste reativo intermediário deo oxigênio. Tal
evento, foi abolido com o tratamento com anti-oxidante,
bem como restaurou parte da viabilidade celular. O evento
de morte celular e indução da produção de peróxido de
hidrogênio são eventos desencadeados por jArtinM nas
células NB4 de modo dependente da interação de jArtinM
com as N-glycanas da célula leucêmica. De modo distindo,
verificamos que a mesma dose capaz de induzir apoptose
em células leucêmicas NB4 é a mesma capaz de promover a
imunoestimulação de células normais maduras como os
monócitos humanos a produzirem IL-12.
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
NEUROLOGIA
A LECTINA artinM É ATIVA NA REGENERAÇÃO DO NERVO PERIFÉRICO
Ana Paula Santos
Orientador: Prof. Dr. Amilton Antunes Barreira
Tese de Doutorado apresentada em 02/12/2008
A capacidade regenerativa do sistema nervoso peri-
férico é conhecida, todavia em lesões onde há grande per-
da de tecido nervoso, há limitações ou impossibilidade em
relação à regeneração. A lectina artinM é capaz de acelerar
o processo de regeneração do tecido epitelial. O objetivo
do presente estudo foi verificar se a lectina artinM é tam-
bém ativa na regeneração do tecido nervoso, tendo em vis-
ta que se trata de tecido originário do mesmo folheto embri-
onário (ectoderma) que o tecido epitelial. No presente estu-
do 10 mm do nervo isquiático de ratas Wistar adultas foram
retirados e os cotos proximal e distal suturados em um tubo
de silicone. Houve melhor resposta a doses menores de
artinM (1 a 5 µg). Não foi observada regeneração com do-
ses de 10, 12 e 24 µg e essa foi precária com doses interme-
diárias (6 e 8 µg). Os animais foram alocados em 4 grupos,
tratados com tubos contendo artinM (1 a 5 µg) em gel de
agarose, gel de agarose, Matrigel® ou artinM + Matrigel®.
Análises macroscópica, histológica e morfométrica foram
realizadas 10 semanas - tempo de observação associado à
regeneração de um número significativo de fibras mielínicas
AVALIAÇÃO QUANTITATIVA DA FADIGA MUSCULAR EM PACIENTES COM DIFERENTES FOR-
MAS CLÍNICAS DE MIOPATIA MITOCONDRIAL
Patrícia de Sá Barros
Orientadora: Profª. Drª. Claudia Ferreira da Rosa Sobreira
Tese de Doutorado apresentada em 03/12/2008
A fadiga muscular é definida como qualquer perda
da capacidade de produzir força induzida por exercício, que
reduz o desempenho muscular. Estudos de quantificação da
fadiga muscular nas diversas formas clínicas de miopatia
mitocondrial (MM) são escassos. O objetivo deste trabalho
é obter um método confiável, reprodutível, de baixo custo e
fácil aplicação para avaliação objetiva e comparativa da fa-
diga muscular em grupos de pacientes com diferentes for-
mas clínicas de MM. Neste estudo, foram selecionados 71
pacientes adultos com miopatia, apresentando fraqueza
muscular ou intolerância ao exercício (IE). A amostra con-
trole foi composta por 123 voluntários saudáveis. Os pa-
cientes selecionados para o estudo foram divididos em 4
grupos: MM com oftalmoplegia externa progressiva (PEO);
no segmento distal - após a cirurgia. A formação do cabo de
tecido entre os cotos foi estatisticamente semelhante entre
os grupos artinM e matrigel e entre artinM e artinM +
matrigel, assemelhando-se a uma estrutura de nervo nor-
mal. Nesses grupos, a análise histológica dos segmentos
centrais do tubo revelou uma camada epi-perineural espes-
sa envolvendo a área endoneural, minifascículos, vários
capilares endoneurais em maior número na periferia, fibras
mielínicas de vários diâmetros e mastócitos. Os segmentos
distais ao tubo foram semelhantes aos nervos normais,
porém com bainha de mielina mais fina. Nos segmentos
distais, os resultados morfométricos revelaram diferenças
significativas (p<0,05) nos diâmetros de axônios e fibras
mielínicas, área da bainha de mielina e número de capilares
entre os grupos artinM e matrigel, com o grupo artinM
mostrando valores mais altos. O número de fibras mielínicas
e capilares no segmento distal foi significativamente maior
no grupo artinM do que no grupo artinM + matrigel. Não
houve regeneração axonal significativa no grupo agarose,
tendo havido apenas filamentos ligando os cotos. Os re-
sultados indicam que a lectina artinM é capaz de induzir o
crescimento dos componentes do nervo periférico, poten-
cialmente podendo ser usada para a indução de regenera-
ção de nervos no homem.
MM com IE sem PEO; outras miopatias com IE e endocri-
nopatias com IE. O grupo controle foi subdividido, uma vez
que cada subgrupo participou como controle em diferentes
experimentos do estudo. As avaliações realizadas consisti-
ram de quantificação da fadiga pelos testes dinamométricos,
avaliação da gravidade da fadiga (FSS), escala numérica da
fadiga, mensuração da dor pelo inventário breve da dor
(IBD), avaliação da capacidade funcional (Brooke e Vignos)
e das atividades da vida diária (Barthel), bem como a quali-
dade de vida relacionada à saúde (SF-36). A presença da
fadiga muscular foi avaliada através da realização da con-
tratação voluntária da máxima (CVM) de preensão palmar,
no lado dominante do paciente. Neste estudo foi realizado
3 testes dinamométricos: teste da CVM durante 5 minutos,
teste de 10 minutos utilizando 45% da CVM sustentada
durante 60 segundos. Nossos resultados demonstraram que
a proporção de mulheres foi superior à de homens tanto no
grupo de pacientes como no grupo controle. Não houve
107

Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
diferença significativa entre as idades dos pacientes e con-
troles. A maioria dos pacientes e controles apresentava
como lado dominante o lado direito. A força muscular de
preensão palmar no início do teste foi maior nos controles
que nos pacientes. A CVM inicial dos pacientes com MM
com PEO diferiram significativamente dos controles, en-
quanto que os pacientes com MM sem PEO, outras
miopatias com IE e endocrinopatias permaneceram iguais
aos controles. O teste de CVM durante 5 minutos demons-
trou coeficientes de correlação bastante significativos, o
que indica que as medidas obtidas no teste são estáveis e
reprodutíveis. Quanto ao teste de 10 minutos utilizando
45% da CVM, os resultados demonstraram que as medidas
que ser referem às CVM na metade e no final do teste apre-
sentam coeficientes de correlação consistentes e significa-
tivos. No teste da CVM sustentada durante 60 segundos,
os índices de correlação apresentaram magnitude modera-
da. A comparação do teste da CVM durante 5 minutos entre
os grupos demonstrou a ocorrência de fadiga precoce no
grupo de pacientes. A comparação entre o grupo de pa-
cientes separadamente e controles no teste da CVM duran-
te 5 minutos não demonstrou diferença significativa. No
COMORBIDADES PSIQUIÁTRICAS NOS PACIENTES COM EPILEPSIA FARMACORESISTENTES
DE ACORDO COM A ZONA EPILEPTOGÊNICA: ESTUDO COM 490 PACIENTES
Charles Luis Dalmagro
Orientador: Prof. Dr. Américo Ceiki Sakamoto
Tese de Doutorado apresentada em 16/12/2008
Introdução: Epilepsia é definida pela presença de
crises epilépticas recorrentes, podendo apresentar durante
seu estudo, um espectro bem variado de associações, den-
tre elas as anormalidades cognitivas e do comportamento.
A associação das comorbidades psiquiátricas (CPs) com
as epilepsias tem sido investigada, tipicamente nos pacien-
tes com crises epilépticas refratárias os quais foram avalia-
dos em um centro terciário especializado no tratamento
desta forma de epilepsia. Objetivos: Este estudo relatará os
resultados da prevalência e os fatores de risco associados
à presença das CPs em quatrocentos e noventa pacientes
com crises epilépticas farmacorresistentes e sua correlação
com as diferentes zonas epileptogênicas (ZEs). Resultados
e conclusões: De acordo com os critérios do DSM-IV, 198
INFLUÊNCIA DO GÊNERO E DA EXPRESSÃO DA PROTEÍNA PRION CELULAR SOBRE ASPECTOS
COMPORTAMENTAIS E HISTOPATOLÓGICOS EM UM MODELO DE ANORMALIDADES DO DE-
SENVOLVIMENTO CORTICAL EM CAMUNDONGOS
João Carlos Xikota
Orientador: Prof. Dr. Roger Walz
Tese de Doutorado apresentada em 17/12/2008
108
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista
teste de 10 minutos utilizando 45% da CVM a comparação
entre pacientes e controles demonstrou haver diferença sig-
nificativa, indicando haver maior fadigabilidade no grupo
dos pacientes. Em adição, o grupo denominado outras
miopatias com IE diferenciaram do grupo controle, não sen-
do visível esta diferença nos demais grupos. A comparação
entre o grupo com MM com PEO, pacientes com IE e gru-
pos controles demonstraram diferença significativa. No tes-
te da CVM sustentada durante 60 segundos não houve
diferença significativa entre os grupos analisados. A média
da FSS em todos os grupos foi similar. Os grupos demons-
traram resultados similares com relação à escala numérica
de fadiga. Nossos achados não demonstraram diferença
significativa entre os grupos com relação à IBD. A maioria
dos pacientes avaliados apresenta mínima ou nenhuma in-
capacidade funcional. A qualidade de vida dos pacientes
demonstrou estar muito comprometida. Concluímos que en-
tre os 3 testes dinamométricos de medida da fadiga muscu-
lar realizados, apenas o teste de CVM sustentada durante 5
minutos apresentou elevada confiabilidade. O teste da CVM
sustentada durante 60 segundos não foi capaz de induzir
fadiga precoce nos grupos de pacientes.
(40,4%) dos pacientes apresentaram CPs. As CPs do Eixo I
foram evidenciadas em 154 (31,4%) pacientes e as CPs do
Eixo II em 44 (8,9%) pacientes. As mais comuns CPs do Eixo
I foram representadas pelos transtornos do humor, diag-
nosticados em 94 pacientes (19,2%). Os transtornos de
ansiedade em 21 (4,3%) pacientes e a psicose interictal em
39 (7,9%) pacientes. Nesta série de pacientes, foi observa-
do que a epilepsia do lobo temporal mesial, associada à
esclerose hipocampal, a história familiar de transtorno psi-
quiátrico, a presença de transtornos psiquiátricos do Eixo
II, foram fatores de risco independentes para associação
com CPs do Eixo I. Por outro lado, a idade de início da
epilepsia, a duração da epilepsia, o sexo, a frequência de
crises secundariamente generalizadas, a média do QI, a eti-
ologia (quando excluída a epilepsia do lobo temporal mesial,
associada à esclerose hipocampal) e o lado da lesão foram
variáveis que não associaram estatisticamente com as CPs
neste estudo.
Malformações do desenvolvimento cortical frequen-
temente estão associadas com condições neurológicas in-
cluindo déficits neuropsicológicos, atraso do desenvolvi-
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
mento intelectual, retardo mental, dislexia, autismo e epi-
lepsia. Malformações semelhantes à microgiria de 4 cama-
das observadas em humanos podem ser induzidas por dano
hipóxico-isquêmico da placa cortical em roedores recém nas-
cidos através da criolesão, a qual destrói a maioria dos
neurônios presentes no momento da lesão, induzindo mo-
dificações permanentes na estrutura e função da circuitaria
cortical. Há estudos indicando que o sexo do indivíduo
possa estar associado à extensão, padrão estrutural e com-
prometimento funcional de lesões cerebrais ocorridas pre-
cocemente no desenvolvimento. A proteína prion celular
(PrPC) tem sido implicada com processos envolvidos no
desenvolvimento cortical incluindo a modulação da apop-
tose neuronal, adesão, crescimento e manutenção dos
neuritos, além da proteção contra estresse oxidativo. No
presente estudo investigamos a gravidade da lesão e sus-
ceptibilidade a prejuízos na aprendizagem, memória, e loco-
moção em camundongos machos e fêmeas das linhagens
selvagem (Prnp+/+) e portadores da deleção do gene Prnp
que codifica a PrPC (Prnp0/0). Os animais foram submeti-
dos à criolesão unilateral no primeiro dia pós-natal (P0).
Grupos controle receberam manipulações experimentais se-
melhantes, com exceção da indução da criolesão. Entre 12-
14 semanas após o procedimento os animais foram subme-
tidos a testes comportamentais (atividade locomotora es-
pontânea, labirinto em cruz elevado, memória social e es-
quiva inibitória do tipo step-down) e sacrificados para aná-
lise morfológica dos cérebros. A análise macroscópica re-
ANÁLISE COMPARATIVA, QUALITATIVA E QUANTITATIVA DAS FIBRAS MIELÍNICAS DO NER-
VO SURAL DE RATOS ESPONTANEAMENTE HIPERTENSOS E NORMOTENSOS, MACHOS E FÊ-
MEAS
Luciana Sayuri Sanada
Orientadora: Profª. Drª. Valéria Paula Sassoli Fazan
Dissertação de Mestrado apresentada em 22/12/2008
As alterações vasculares importantes ocorrem em
decorrência da hipertensão, afetando inclusive os nervos
periféricos. Estudos relatam que as diferenças entre gêne-
ros influenciam na remielinização, na sensibilidade doloro-
sa, na regulação neural da função vascular, no crescimento
axonal in vitro, na condução nervosa, entre outros. Entre-
tanto, são escassos os relatos de literatura a respeito de
diferenças morfológicas e/ou morfométricas nas estruturas
dos nervos periféricos de mamíferos de diferentes gêneros
e das alterações consequentes a hipertensão. O objetivo do
presente estudo foi comparar os aspectos morfológicos e
morfométricos dos diferentes segmentos e lados do nervo
sural de ratos das linhagens ratos espontaneamente hiper-
tensos (SHR) e Wistar-Kyoto (WKY), machos e fêmeas. Os
animais (n=6 em cada grupo) foram pesados, anestesiados e
velou que a criolesão, independente do sexo ou linhagem
dos animais, resultou na formação de uma área microgírica
focal com uma destacada invaginação da superfície cortical
determinando uma pequena lesão intracortical ou uma le-
são profunda alcançando a substância branca. Não houve
evidência de lesão cortical em nenhum animal do grupo
sham (falso operado). Esta lesão não afetou a função motora
dos animais. Entretanto, nos animais selvagens, observa-
mos uma desordem seletiva na memória de curto prazo no
teste de reconhecimento social em camundongos machos
criolesados, enquanto a memória de longo prazo da esqui-
va inibitória não foi afetada pelo procedimento ou sexo dos
animais. Estes resultados indicam uma menor susceptibili-
dade das fêmeas aos prejuízos de memória de curto prazo
induzidos pelo modelo de microgiria por criolesão neona-
tal, sugerindo que os déficits cognitivos induzidos pela
criolesão em roedores podem não ser inteiramente relacio-
nados à gravidade da lesão cerebral. Além disso, camun-
dongos fêmeas de ambos os genótipos apresentaram ativi-
dade locomotora similares, porém as fêmeas Prnp0/0 de-
monstraram uma tendência aumentada de respostas relaci-
onadas à ansiedade comparadas aos animais Prnp+/+. Fi-
nalmente, fêmeas Prnp0/0 tiveram um baixo rendimento na
tarefa de reconhecimento social comparadas aos animais
sham e aqueles Prnp+/+. Esses dados sugerem que a
deleção gênica da PrPC confere um aumento da susceptibi-
lidade ao déficit de memória social de curto prazo induzido
pelo modelo de microgiria por criolesão
a sua pressão arterial aferida. Após o preparo do nervo sural
com técnicas histológicas convencionais, secções trans-
versais dos segmentos proximais e distais, dos lados direito
e esquerdo, foram obtidas para análise em microscopia de
luz. A morfometria dos fascículos, das fibras mielínicas e
seus respectivos axônios foi realizada com o auxílio de um
sistema analisador de imagens computacional. Os resulta-
dos mostraram que os SHR e WKY machos apresentam peso
(325 ± 16 g e 388 ± 20 g) e pressão arterial média (201 ± 18
mmHg e 136 ± 6 mmHg) maiores, quando comparados às
fêmeas (194 ± 13 g e 218 ± 14 g; 180 ± 18 mmHg e 143 ± 14
mmHg, respectivamente). Foi observado também que, para
os dados ponderais, os animais SHR apresentaram-se signi-
ficativamente menores em relação aos ratos WKY de mes-
mo gênero. Entretanto, quando se compara os dados pres-
sóricos, verifica-se que os ratos SHR se apresentaram signi-
ficativamente maiores em relação aos ratos WKY de mesmo
gênero. Não foram observadas diferenças estatísticas sig-
nificativas na morfologia e na morfometria entre os lados e
segmentos tanto em fêmeas como em machos, nos grupos
109

Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
WKY e SHR. Não foram observadas diferenças significati-
vas na maioria dos parâmetros morfológicos e morfométri-
cos quer dos fascículos ou das fibras mielínicas analisadas
nos diferentes gêneros de WKY e SHR. Quando se compara
os animais das linhagens WKY e SHR de mesmo gênero
observa-se diferença significativa quanto aos parâmetros
morfológicos (vasos mais espessos e colabados em ratos
SHR), diâmetro mínimo da fibra mielínica e da razão G, indi-
cando que a hipertensão foi capaz de gerar alterações nos
OFTALMOLOGIA, OTORRINOLARINGOLOGIA
E CIRURGIA DE CABEÇA E PESCOÇO
ESTIMULADOR PIEZELÉTRICO PARA AVALIAÇÃO DE POTENCIAIS EVOCADOS CÓCLEO-VES-
TIBULARES E REGISTRO DE IMAGENS DE RESSONÂNCIA MAGNÉTICA FUNCIONAL
Ricardo David
Orientador: Prof. Dr. José Fernando Colafêmina
Tese de Doutorado apresentada em 17/10/2008
O objetivo deste trabalho é apresentar os resultados
da construção de um protótipo de estimulador auditivo para
uso em câmaras de ressonância magnética, mostrando sua
viabilidade técnica e funcional de forma a melhorar a acurácia
e eficiência dos registros de ressonância magnética funcio-
nal a partir de estímulos auditivos. Foram projetados e
construídos um transdutor especial, compondo caixa de res-
sonância e cristal piezelétrico, além de todos os circuitos de
geração de sinais, amplificação e controle, capazes de gerar
estímulos auditivos em dois canais, cobrindo toda a faixa do
espectro auditivo, com intensidade máxima de 122 dB Na.
EXPRESSÃO DE ANTÍGENOS CÂNCER-TESTICULARES EM CARCINOMA ESPINOCELULAR DE
LARINGE: ANÁLISE POR IMUNO-HISTOQUÍMICA
David Livingstone Alves Figueiredo
Orientador: Prof. Dr. Rui C. Martins Mamede
Tese de Doutorado apresentada em 03/11/2008
Introdução: O câncer de laringe ocasiona cerca de
90.000 mortes por ano em todo o mundo, sendo que o car-
cinoma espinocelular de larinbe (CECL), responsável por
95% dos casos, se caracteriza por apresentar evoluções
indefinidas, e que, apesar de todo o avanço na laringologia,
a sobrevida não se alterou nos últimos 30 anos. Com base
nisso, os pesquisadores procuram marcadores que possam
servir como fatores prognósticos ou imunoterápicos.
110
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista
parâmetros morfométricos relevantes para estudos funcio-
nais. A comparação entre machos e fêmeas das linhagens
SHR e WKY permite-nos concluir que os parâmetros morfo-
lógicos e morfométricos do nervo sural não se alteram sob
influência dos gêneros. Alguns parâmetros morfológicos e
morfométricos do nervo sural de ratos SHR, machos e fême-
as, em relação aos animais WKY de mesmo gênero permi-
tem-nos concluir que a hipertensão foi capaz de gerar altera-
ções neste nervo
São apresentados os detalhes construtivos, bem como os
cuidados necessários para contornar as dificuldades ine-
rentes ao ambiente interno das câmaras de ressonância mag-
nética. Os testes de instrumentação confirmaram excelente
resposta acústica de todo o sistema. O protótipo foi testado
com um phanton no interior da câmara de ressonância, mos-
trando índice de interferência dentro dos parâmetros de nor-
malidade. Este trabalho abre caminhos para o desenvolvi-
mento de outros instrumentos e acessórios para uso em
registros de imagens de ressonância magnética funcional.
Abrem-se promissoras oportunidades de trabalho nas apli-
cações de uso do próprio instrumento, quando será possí-
vel melhor investigar inúmeras vias neurais relacionadas
com o trato auditivo e vestibular, não somente nos aspectos
sensório-motores, mas também cognitivos.
Objetivos: Analisar a expressão de antígenos cân-
cer-testiculares (ACT) em CECL e correlacioná-los com ca-
racterísticas clínico-patológicas e de sobrevida.
Casuística e Métodos: Foram avaliados 63 pacien-
tes com diagnóstico histopatológico de CECL, tratados ci-
rurgicamente no período de 2001 a 2005. Seus respectivos
espécimes foram submetidos a reações de imuno-
histoquímica com os anticorpos MA454 (anti MAGE-A1),
M3H67 (anti MAGE-A3), 57B (anti MAGE-A4), CT 7-33
(anti MAGE-C1), CT10.5 (anti MAGE-C2), anti GAGE, E978
(anti NY-ESO-1).
Resultados: A expressão de, pelo menos, um antíge-
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
no foi observada em 66,6% dos casos. Eles foram expres-
sos com frequências variáveis: MAGE-A1 (47,62%), MAGE-
A3 (36,5%), MAGE-A4 (60,32%), MAGE-C1 (22,2%),
MAGE-C2 (7,93%), GAGE (20,64%) e NY-ESO-1 (9,52%). A
expressão de um antígeno ou de múltiplos (2 ou mais) e a
expressão de MAGE-A4 são significantemente maiores em
tumores avançados. Há expressão significantemente maior
de MAGE-A1 e de MAGE-A3 em tumores com recidivas
cervicais e não houve relação da expressão com o tempo de
sobrevida.
Discussão: Nossos resultados mostram que os CECL
estão entre os tumores que mais expressam ACT, o que tor-
na esse câncer um potencial alvo para tratamento imunote-
rápico. Observamos, conforme a literatura, que a expressão
O PAPEL DA ASPIRINA NA PREVENÇÃO DAS ALTERAÇÕES DA GLÂNDULA LACRIMAL E SU-
PERFÍCIE OCULAR DE RATOS DIABÉTICOS
Angélica Gobbi Jorge
Orientador: Prof. Dr. Eduardo Melani Rocha
Tese de Doutorado apresentada em 03/11/2008
As alterações na glândula lacrimal e superfície ocu-
lar após Diabetes mellitus (DM) crônico foram correlacio-
nadas com ativação da sinalização inflamatória. O objetivo
deste estudo foi determinar se o tratamento com AAS inibe
alterações na glândula lacrimal e superfície ocular provoca-
das pelo DM. O DM foi induzido em ratos Wistar machos
com streptozotocina e um subgrupo foi tratado com AAS.
Após 10 semanas, a glândula lacrimal e superfície ocular
destes três grupos (n=5/grupo) foram comparadas em ter-
mos da morfologia e expressão de peroxidase. A impressão
citológica foi utilizada para comparar o epitélio da córnea e
o teste de Schimer para avaliar a secreção lacrimal. A análi-
se por Western blot foi utilizada para avaliar a expressão
das proteínas desacopladoras (UCPs) e IKKs (IKK-α/β). A
AVALIAÇÃO CÓCLEO-VESTIBULAR POR MEIO DE RESSONÂNCIA MAGNÉTICA SEQUÊNCIA
3DFT-CISS NA SÍNDROME DO AQUEDUTO VESTIBULAR ALARGADO
Carolina Ferreira Marques
Orientador: Prof. Dr. José Fernando Colafêmina
Dissertação de Mestrado apresentada em 17/11/2008
Objetivos: Analisar variáveis estruturais cócleo-ves-
tibulares nos pacientes com Síndrome do Aqueduto Vesti-
bular Alargado (SAVA) através da sequência "Three
Dimensional Fourier Transformation- Constructive Inter-
ference in Steady State Sequence" (3DFT-CISS) de Resso-
nância Magnética (RM), e compará-las com um grupo con-
trole. As mesmas variáveis foram, ainda, comparadas entre
as orelhas direitas e esquerdas, de ambos os grupos.
está frequentemente associada aos tumores avançados, que
apresentam prognóstico ruim com os tratamentos hoje esta-
belecidos.
Conclusão: Com base nos dados obtidos neste es-
tudo, conclui-se que nos CECL, os ACT - MAGE-A1, MAGE-
A3, MAGE-A4, MAGE-C1, MAGE-C2, GAGE e NY-ESO-1
são expressos em proporções variáveis (7,93% a 60,32%), e
que em 66,6% dos casos ocorre a expressão de, pelo me-
nos, um desses antígenos. Encontrou-se correlação da ex-
pressão e co-expressão dos antígenos estudados com a
presença de tumores avançados. Houve correlação dos
antígenos MAGE-A1 e MAGE-A3 com a presença de reci-
divas cervicais e o MAGE-A4 se correlaciona com tumores
avançados.
impressão citológica não revelou diferenças na morfologia
do epitélio da córnea embora o DM reduza a secreção lacri-
mal, um efeito que foi prevenido pelo tratamento com AAS
(P<0.01). Alterações na morfologia da glândula lacrimal e
aumento no número de grânulos de lipofucsina foram ob-
servados nos animais diabéticos na décima semana de ma-
nisfestação do DM considerando que estas características
foram similares no controle e diabéticos tratados com AAS.
Os níveis de peroxidase foram maiores nos ratos diabéti-
cos, mas semelhante no controle e diabético tratados com
AAS (P=0.002). Há expressão de UCPs e IKK-α/β na glân-
dula lacrimal, mas somente UCP-2 e 3 foram reduzidas pelo
DM (P<0.05). Estes dados sugerem que o estresse oxidativo
relacionado com hiperglicemia possa participar da síndrome
do olho seco em diabéticos. Estes eventos podem ser par-
cialmente prevenidos pela AAS, pela a qual talvez tenha
um efeito inibitório direto sobre as vias oxidativas na glân-
dula lacrimal ou em suas consequências inflamatórias.
Casuística e Métodos: Foram selecionados, para re-
alização de RM dos ouvidos, dez pacientes (20 orelhas)
com diagnóstico clínico e tomográfico de SAVA unilateral
ou bilateral, que formaram o grupo SAVA. Foram seleciona-
dos, também, dez indivíduos (20 orelhas) para o grupo con-
trole, que foram encaminhados ao serviço de RM para rea-
lização de exame do encéfalo, onde após exclusão de sinto-
mas auditivos e/ou vestibulares e história prévia de doen-
ça do aparelho auditivo ou vestibular e com o consenti-
mento do mesmo, foi incluída a sequência 3DFT-CISS para
avaliação dos ouvidos. Assim, a avaliação foi realizada por
dois observadores independentes de modo randomizado e
111

Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
cego. Foram analisadas as variáveis: Área do modíolo, Di-
âmetro Transverso do Vestíbulo (A), Diâmetro Interno ao
Canal Semicircular Lateral (B) e relação A/B; posteriormen-
te foi realizada comparação entre os grupos e entre orelhas
direitas e esquerdas.
Resultados: Ao comparar os grupos SAVA e contro-
le, todas as variáveis analisadas apresentaram uma diferen-
ça estatisticamente significante (p<0,01). Foi constatado,
ainda, que aproximadamente 35% das orelhas do grupo
SAVA obtiveram uma área modiolar inferior à mínima área
modiolar descrita na literatura, sugerindo uma possível de-
ficiência modiolar. Observado também que 85% das ore-
lhas do grupo SAVA apresentaram uma relação A/B maior
que 1,2 (limite da normalidade estabelecido por diversos
autores), sugerindo, talvez, um alargamento do vestíbulo.
Ao comparar as variáveis entre orelhas direitas e esquer-
das, de ambos os grupos, não foi verificada diferença esta-
tisticamente significante.
EFEITO DA OBSTRUÇÃO NASAL NA FASE ORAL DA DEGLUTIÇÃO EM CRIANÇAS
Tais Helena Grechi
Orientadora: Profª. Drª. Luciana Vitaliano Voi Trawitzki
Dissertação de Mestrado apresentada em 26/11/2008
A obstrução nasal crônica pode causar efeitos nega-
tivos no crescimento e desenvolvimento craniofacial, além
de modificações na musculatura orofacial, com impacto so-
bre a deglutição. O objetivo do presente estudo foi verificar
os efeitos da obstrução nasal na fase oral da deglutição em
crianças na fase de dentição decídua. Participaram deste
estudo 31crianças do Ambulatório de Otorrinolaringologia
do Hospital das Clínicas de Ribeirão Preto - USP. Estas cri-
anças foram divididas em dois grupos: 21 crianças respira-
doras bucais, sendo 8 do gênero feminino e 13 do gênero
masculino, com idade média de 4,5 anos (grupo bucal) e 10
crianças respiradoras nasais, 4 do gênero feminino e 6 do
gênero masculino, com idade média de 4,6 anos (grupo con-
trole). Ambos os grupos foram submetidos à avaliação otor-
AVALIAÇÃO PROSPECTIVA DE AUDIÇÃO E LINGUAGEM DE CRIANÇAS TRIADAS AO NASCI-
MENTO
Cristiane Fregonesi Dutra Garcia
Orientadora: Profa.Dra. Myrian de Lima Isaac
Tese de Doutorado apresentada em 17/12/2008
Introdução: O Potencial Evocado Auditivo de Lon-
ga Latência denominado de Mismatch Negativity (MMN) é
um potencial endógeno que reflete o processamento de
diferenças ocorridas no estímulo acústico.
Objetivos: estimar a prevalência de alteração da fun-
112
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista
Conclusões: 1) A análise das variáveis estruturais
cócleo-vestibulares, sendo elas: área modiolar, diâmetro
transverso do vestíbulo (A), diâmetro interno ao canal late-
ral (B) e relação A/B mostrou uma diferença estatisticamen-
te significante entre os grupos SAVA e controle. Os resulta-
dos conferem indícios, porém não afirmam o encontro de
deficiência modiolar em pelo menos 35% das orelhas do
grupo SAVA e aumento da relação entre diâmetro transver-
so do vestíbulo e diâmetro interno ao canal lateral em 85%
das orelhas, sugerindo alargamento do vestíbulo. Esses
resultados corroboram com a teoria da presença de defei-
tos estruturais mínimos na orelha interna com capacidade
de contribuir para o quadro clínico na SAVA; 2) Ao compa-
rarmos as variáveis estruturais entre as orelhas direitas e
esquerdas de ambos os grupos não encontramos diferença
significante, sugerindo, provavelmente, não haver diferen-
ça de comportamento entre orelhas, mesmo considerando
casos de SAVA unilateral e bilateral.
rinolaringológica para diagnóstico respiratório, avaliação
odontológica para diagnóstico do padrão oclusal e dentário,
avaliação clínica fonoaudiológica e avaliação videofluoros-
cópica da deglutição. Para avaliação ideofluoroscópica foi
utilizada a consistência líquida em volume livre e 3 ml de
consistência pastosa modificadas com sulfato de bário.
Avaliou-se na fase oral da deglutição o volume, a consis-
tência e a organização do bolo, o tempo de trânsito oral, a
ejeção, a postura dos lábios, o número de deglutições e a
presença de movimentos associados durante a deglutição.
Observou-se que a consistência pastosa e o padrão de or-
ganização do bolo influenciaram no tempo de trânsito oral,
embora não ocorrera diferença entre os grupos. Em relação
aos outros aspectos avaliados durante a fase oral da deglu-
tição não foi constatada diferença significativa entre os gru-
pos bucal e controle. Os resultados indicaram que a obstru-
ção nasal não influenciou significativamente a fase oral da
deglutição em crianças na fase de dentição decídua.
ção auditiva periférica e central de crianças nascidas a ter-
mo e prétermo, adequadas e pequenas à idade gestacional;
discutir o estado de desenvolvimento de fala, linguagem e
aprendizagem destas crianças.
Casuística e Métodos: estudo de prevalência, des-
critivo, observacional, transversal, comparativo, prospecti-
vo, com enfoque em diagnóstico. Amostra constituída por
19 sujeitos nascidos a termo; 32 sujeitos nascidos prematu-
ros e adequados à idade gestacional; 18 sujeitos nascidos
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
prematuros e pequenos à idade gestacional. Foram realiza-
dos os seguintes procedimentos: análise do prontuário e
entrevista com a mãe ou responsável; exame otorrinolarin-
gológico, avaliação auditiva por meio de Audiometria Tonal
Liminar, Limiar de Recepção de Fala, Imitanciometria, Poten-
cial Evocado Auditivo do Tronco Encefálico, Potencial Evo-
cado Auditivo de Longa Latência, MMN. Na análise esta-
tística foram usados os testes Kruskal-Wallis, Qui- Quadra-
do, de Dunn.
Resultados: a audição periférica apresentou-se den-
tro da normalidade na maioria das crianças dos três grupos
do estudo. A função auditiva central apresentou indicação
de alteração no registro do Reflexo Estapediano e Potencial
Evocado Auditivo do Tronco Encefálico na maioria das cri-
anças dos três grupos estudados. No exame MMN, a latência
média para a orelha direita, em crianças nascidas a termo, foi
de 207,6 milissegundos; para as crianças nascidas pré-ter-
mo e adequadas à idade gestacional foi de 158,51 milisse-
gundos; para as crianças nascidas pré-termo e pequenas à
idade gestacional foi de 181,80 milissegundos; a latência
média para a orelha esquerda, para as crianças nascidas a
ORTOPEDIA, TRAUMATOLOGIA E REAB ILITAÇÃO
AÇÃO DO TREINAMENTO FÍSICO ANTES E APÓS A INSTALAÇÃO DA OSTEOPENIA EM RATAS
OVARIECTOMIZADAS
Priscila Angelotti Simões
Antônio Carlos Shimano
Dissertação (Mestrado) 03/10/2008
A contra medida mais estudada para previnir e/ou
minimizar a reabsorção óssea e aumentar a tolerância à soli-
citação mecânica é a prática de exercício físico. O objetivo
deste estudo foi (1) analisar o efeito do exercício físico em
fêmures de ratas submetidas à ovariectomia através de en-
saios mecânicos e análise densitométrica e, (2) verificar as
alterações nos níveis de calcemia. Foram utilizadas 60 ratas
adultas da raça Wistar que foram separadas em 6 grupos
(n=10): Cont I: controle; OVX I: ovariectomizados; OVXT I:
ovariectomizados e treinados após 72 horas de ovariecto-
mia; Cont II: controle; OVX: ovariectomizados e OVXT II:
ovariectomizados e treinados após oito semanas de ovari-
ectomia. Os animais do subgrupo I foram submetidos à eu-
tanásia após 13 semanas a partir do início do experimento e
os do subgrupo II com 21 semanas. O protocolo de treina-
mento consistia em 15m/min da 1ª a 6ª semana e 18 m/min da
7ª a 12ª com 4 sessões por semana. Foi coletado sangue no
início e final do experimento para a dosagem de calcemia.
termo foi de 200 milissegundos; para as crianças nascidas
pré-termo e adequadas à idade gestacional foi de 167,76
milissegundos; para as crianças nascidas pré-termo e pe-
quenas à idade gestacional foi de 174,1milissegundos. A
amplitude para a orelha direita, em crianças nascidas a ter-
mo, apresentou média de -3,044 microVolts; de -3,584
microVolts para as crianças nascidas pré-termo e adequadas
à idade gestacional; de -3,165 microVolts para as crianças
nascidas pré-termo e pequenas à idade gestacional. Na ore-
lha esquerda, a média da amplitude foi de -3,407 microVolts
para as crianças nascidas a termo; de -5,22 microVolts para
as crianças nascidas pré-termo e adequadas à idade gesta-
cional; de -3,863 microVolts para as crianças nascidas pré-
termo e pequenas à idade gestacional. O desenvolvimento
de fala, linguagem, audição e aprendizagem apresentaram-
se dentro da normalidade para a maioria das crianças avali-
adas nos três grupos.
Conclusão: o exame MMN deve ser instrumento com-
plementar na avaliação e monitoramento de crianças de ris-
co para alterações no desenvolvimento de fala, linguagem e
audição.
Foram analisadas a força máxima e a rigidez do terço proximal
do fêmur direito. O fêmur esquerdo foi submetido à análise
densitométrica. Os resultados mostraram uma redução da
resistência mecânica, densidade óssea e calcemia no grupo
OVX I em relação aos grupos Cont I e OVXT I, porém não foi
observada diferença estatística entre esses dois últimos gru-
pos. O grupo OVX II demonstrou diminuição significativa
de calcemia em relação aos grupos Cont II e OVXT II, nas
demais comparações não houve diferença significativa. A
densidade óssea foi menor no grupo OVX II foi menor que
no grupo Cont II e, entre os grupos OVXT II e Cont II não
foi observada diferença estatística. A força máxima entre os
grupos Cont I, OVX I e OVXT I, não foi significativamente
diferente, porém foi menor nos grupos OVX II e OVXT II
que no grupo Cont II. A rigidez dos grupos OVX I e OVX II
foi menor que dos grupos Cont I e Cont II, respectivamente.
O grupo OVXT I apresentou maior rigidez que o grupo OVX
I e semelhante ao grupo Cont I. Já o grupo OVXT II não
apresentou diferença estatística em relação aos grupos OVX
II e Cont II. Estes resultados sugerem que o treinamento
físico foi eficaz na profilaxia da perda de massa óssea. No
entanto, não foi eficaz no controle da osteopenia.
113

Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
ANÁLISE HISTOMORFOMÉTRICA DA PLACA VERTEBRAL TERMINAL E DO DISCO INTERVER-
TEBRAL EM DIFERENTES NÍVEIS VERTEBRAIS DA COLUNA VERTEBRAL E DIFERENTES FAIXAS
ETÁRIAS EM HUMANOS
Juliano Silveira Luiz Vieira
Orientador: Prof. Dr. Helton Luis Aparecido Defino
Tese de Doutorado apresentada em 08/10/2008
A placa vertebral terminal (PVT) é uma estrutura ana-
tômica que mantém relação funcional com a nutrição do dis-
co intervertebral (DI). O objetivo do estudo foi avaliar por
meio de histomorfometria, a espessura da placa vertebral ter-
minal, a espessura do disco intervertebral e a sua correlação
nas diferentes faixas etárias e em diferentes níveis vertebrais.
Foram avaliados os segmentos vertebrais C4-C5, C5- C6,
T7- T8, T12-L 1, L4-L5 e L5-S1 de 50 cadáveres humanos, de
ambos os sexos, divididos em 5 grupos com intervalo de
faixa etária de 10 anos, a partir dos 21 anos de idade. A
avaliação da espessura da PVT e do disco intervertebral foi
EFEITOS DOSE DEPENDENTES DO ULTRA-SOM TERAPÊUTICO NO PROCESSO DE CICATRIZA-
ÇÃO DO TENDÃO FLEXOR. ANÁLISE BIOMECÂNICA EM TENDÕES DE COELHOS
Cristiane Vitaliano Graminha Romano
Orientador: Prof. Dr. Claúdio Henrique Barbieri
Tese de Doutorado apresentada em 09/10/2008
A literatura revela indícios de que o ultra-som tera-
pêutico favorece a cicatrização tendinosa, embora os resul-
tados dos estudos sejam ainda contraditórios. O objetivo
deste trabalho foi investigar as propriedades mecânicas
nos reparos de tendões flexores profundos de coelhos sub-
metidos a tenotomia seguida de tenorrafia e aplicação do
ultra-som terapêutico com diferentes intensidades. Para
tanto, foram utilizados 44 coelhos fêmea, da raça Nova
Zelândia, adultos jovens com peso corpóreo médio de 2,5
Kg. Todos os animais foram operados sob anestesia geral e
submetidos à tenotomia do tendão flexor profundo do ter-
ceiro dedo da pata direita dianteira e imediatamente repara-
do com a técnica de Kessler modificada. As patas operadas
foram imobilizadas com uma órtese de material termoplástico
durante todo o período do experimento (31 dias) e os ani-
mais foram distribuídos em quatro grupos (A, B, C e D) de
acordo com o tratamento pós-operatório. Os animais do
grupo A receberam aplicação do ultra-som com uma inten-
sidade de 1,4 W/cm2, os do grupos B de 0,6 W/cm2, ambos
no modo contínuo, os do C de 0,6 W/cm2 SATA (spatial
average and temporal average) no modo pulsado a 50% e
os animais do grupo D, não receberam tratamento ultra-
sônico algum. A frequência ultra-sônica empregada foi de 1
MHz, a aplicação foi diária, com duração de 6 minutos cada,
iniciando no quarto dia pós-operatório, por 10 dias conse-
114
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista
realizada por meio de avaliação histomorfométrica dos cor-
tes histológicos corados pela Hematoxilina e Eosina. As
espessuras das PVT foram comparadas entre si e também
com a espessura do disco intervertebral interposto entre as
respectivas PVT. A espessura das placas vertebrais termi-
nais adjacentes ao mesmo DI não apresentou diferença es-
tatística. No entanto, a comparação da espessura das pla-
cas vertebrais superior e inferior da mesma vértebra cervical
(C5) e lombar (L5), apresentou diferença estatística em todos
os grupos e em todas as faixas etárias avaliadas. Foi obser-
vado coeficiente de correlação estatística, maior que 75%,
entre a espessura da placa vertebral terminal e o disco inter-
vertebral adjacente, com proporcional redução de espessu-
ra de ambas estruturas, nos diferentes níveis vertebrais ava-
liados, e também nas diferentes faixas etárias avaliadas.
cutivos. No trigésimo primeiro dia pós-operatório, os ani-
mais foram sacrificados e o tendão operado foi dissecado
ressecado, sendo que 40 tendões (10 de cada grupo) foram
submetidos aos testes de resistência à tração na máquina
universal de ensaio e um tendão de cada grupo foi subme-
tido à análise histológica qualitativa. A partir dos gráficos
força versus deformação foram calculadas as seguintes pro-
priedades mecânicas: força máxima, deformação na força
máxima e rigidez. Ainda para a propriedade mecânica força
máxima, foram estabelecidos quatro valores de referência
(8, 16, 20 e 24 N), e verificou-se a porcentagem de tendões
de cada grupo experimental que suportava uma carga maior
ou igual a cada um desses valores. Os resultados mostra-
ram que, embora não houvesse diferenças estatisticamente
significante entre os grupos experimentais, a força máxima
e a deformação na força máxima foram maiores para o grupo
irradiado com ultra-som contínuo a uma intensidade de 0,6
W/cm2, sugerindo que o ultra-som melhorou as proprieda-
des mecânicas desses tendões. Especificamente para a pro-
priedade mecânica força máxima, procurou-se verificar a
porcentagem de tendões de cada grupo experimental que
suportava uma carga maior ou igual 8, 16, 20 e 24 N. Os
resultados mostraram que os tendões do grupo tratado com
ultra-som contínuo a uma intensidade de 0,6 W/cm2, tolera-
ram carga maior que os tendões dos demais grupos. A aná-
lise histológica mostrou que o tendão desse mesmo grupo
apresentou fibras colágenas totalmente densas, diferente-
mente dos demais tendões que apresentaram fibras frouxas
entremeadas às demais fibras.
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE VARREDURA DA ÁREA ÓSSEA ADJACENTE AOS PARAFUSOS
CERVICAIS, EM DIFERENTES TEMPOS DE FIXAÇÃO
João Paulo Chieregato Matheus
Orientador: Prof. Dr. Helton Luis Aparecido Defino
Tese de Doutorado apresentada em 23/12/2008
As técnicas de preparo do orifício piloto durante as
cirurgias de coluna, como a variação do diâmetro e a realiza-
ção do macheamento, têm sido apontadas como determi-
nantes no aumento da interface osso/implante dos parafu-
sos cervicais e, consequentemente, maior estabilidade. As-
sim, o objetivo deste estudo foi avaliar a influência do diâ-
metro e do macheamento do orifício piloto na área óssea
trabecular entre os passos de rosca, na área paralela ao im-
plante e na superfície de contato osso/implante, por meio de
microscopia eletrônica de varredura e em diferentes tempos
de fixação. Para tanto foram utilizados seis carneiros, com
massa corporal média de 28±04 kg e 72 parafusos cervicais
de titânio (Synthes ®) com diâmetro externo de 3,5 mm, diâ-
metro interno de 2,5 mm e 14,0 mm de comprimento. Os para-
fusos foram implantados por acesso anterior no corpo das
vértebras cervicais dos carneiros em dois procedimentos ci-
rúrgicos. Durante os procedimentos foram confeccionados,
com brocas, orifícios piloto de 2,0 e 2,5 mm de diâmetros.
Além disso, em metade dos orifícios de 2,5 mm foi realizado
o macheamento com instrumental específico (Synthes@),
semelhante ao perfil dos parafusos. Na primeira cirurgia os
parafusos foram implantados nas vértebras cervicais C2, C3
e C4, conforme os grupos experimentais, e os animais foram
mantidos vivos por oito semanas (Crônico). Passado esse
período, foi realizada nova cirurgia para implantação dos
parafusos nas vértebras cervicais C5, C6 e C7 e em seguida
o animal foi submetido à eutanásia por meio de overdose
PATOLOGIA
EXPRESSÃO DA CHECKPOINT KINASE 2 NOS CARCINOMAS MAMÁRIOS: ESTUDO CLINICO-
PATOLÓGICO E IMUNOISTOQUÍMICO
Michel Antonio Kiyota Moutinho
Orientador: Prof. Dr. Alfredo Ribeiro-Silva
Dissertação de Mestrado apresentada em 23/10/2008
A Checkpoint quinase 2 (Chk2) é uma proteína de
checagem do ciclo celular que pode atuar como um supres-
sor tumoral devido ao seu importante papel na sinalização
ao dano ao DNA e na regulação do ciclo celular. O papel do
Chk2 na tumorigênese mamária, entretanto, ainda é pouco
anestésica (Agudo). A partir destas cirurgias foram forma-
dos os seguintes grupos experimentais: agudo com orifício
2,0 mm (A 2,0); agudo com orifício 2,5 mm (A 2,5); agudo
com orifício macheado de 2,5 mm (A 2,5 M); crônico com
orifício 2,0 mm (C 2,0); crônico com orifício 2,5 mm (C 2,5) e
crônico com orifício macheado de 2,5 mm (C 2,5 M). Termi-
nados os procedimentos cirúrgicos, o material foi prepara-
do e conduzido para análise por meio de microscopia eletrô-
nica de varredura (MEV). As imagens obtidas foram então
qualificadas e quantificadas segundo as áreas: intra passo
de rosca, projeção em espelho e contato osso/implante. Nos
grupos agudos, o orifício de menor diâmetro (A 2,0) gerou
grande fragmentação e compactação intra passo de rosca e
o macheamento (A 2,5 M) removeu parte do material na re-
gião do parafuso. Nos grupos crônicos, o orifício com maior
área óssea intra passo e contato osso/implante foi aquele
com o mesmo diâmetro interno do parafuso e não macheado
(C 2,5). Portanto, no momento de implantação dos parafu-
sos cervicais, a maior área óssea intra passo de rosca e de
contato foi obtida ao se realizar orifícios piloto com diâme-
tro interno menor que o diâmetro dos implantes sem a reali-
zação da técnica de macheamento. Entretanto, na fase crô-
nica, os resultados obtidos sugerem que a melhor técnica
seja a realização do orifício piloto com mesmo diâmetro do
parafuso, sem a realização do macheamento. Levando-se
em consideração que a fixação de um segmento em uma
abordagem terapêutica permanecerá por um tempo prolon-
gado, muitas vezes acima de oito semanas, é I adequado
sugerir que a confecção de um orifício piloto de mesmo diâ-
metro interno do parafuso, sem o macheamento, seja a me-
lhor técnica de fixação dos implantes em coluna cervical.
compreendido. Este estudo foi realizado para avaliar a rela-
ção entre a expressão do Chk2 e fatores prognósticos bem
estabelecidos, incluindo sobrevida livre de doença e so-
brevida global; e vários reguladores da proliferação celular
e progressão tumoral nos carcinomas mamários, incluindo
oncogenes, genes supressores tumorais, proteínas relacio-
nadas à apoptose e marcadores relacionados a angiogêne-
se. Um painel imuno- histoquímico com 27 anticorpos pri-
mários foi realizado em 100 amostras de carcinomas ductais
115
 Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP http://www.fmrp.usp.br/revista

invasores sem outras especificações (SOE), previamente
fixadas em formalina e emblocados em parafina. Os dados
clínicos foram obtidos dos prontuários médicos. No parên-
quima mamário normal adjacente ao tumor, o Chk2 marcou
o núcleo das células epiteliais. Uma baixa expressão do
Chk2 foi observada em 23 carcinomas e essa expressão
correlacionou-se com doença avançada. Entre os regula-
dores da proliferação celular e progressão tumoral avalia-
dos, a baixa expressão do Chk2 correlacionou-se com baixa
expressão do p27 e da telomerase. Não houve diferença
entre a sobrevida global e sobrevida livre da doença de
acordo com a marcação do Chk2. Em conclusão, A expres-
são diferencial do h-TERT e do p27 pode contribuir na
fisiopatogênese dos carcinomas mamários Chk2- positivos.
A expressão do Chk2 não interferiu com a evolução das
pacientes.

SAÚDE DA CRIANÇA E DO ADOLESCENTE

INFLUÊNCIA DO TAMANHO AO NASCER E DE ALGUMAS VARIÁVEIS SOCIODEMOGRÁFICAS

SOBRE O ESTADO NUTRICIONAL DE CRIANÇAS ENTRE 10 E 11 ANOS DE IDADE, PERTENCEN-
TES À COORTE DE 1994, RIBEIRÃO PRETO-SP

Ieda Regina Lopes Del Ciampo
Orientadora: Profª.Drª. Heloisa Bettiol
Tese de Doutorado apresentada em 30/10/2008
O baixo peso ao nascer (BPN) e a restrição de cresci-
mento intra-uterino (RCIU) são indicadores de comprometi-
mento do estado nutricional durante a vida pré-natal e esta-
riam associados a fatores de risco para doenças cardiovas-
culares na vida adulta. Atualmente, acredita-se que este ris-
co também esteja presente em idades mais precoces. Para
avaliar a influência do peso ao nascer e de outras variáveis
ao nascimento e entre 10 e 11 anos de idade sobre o estado
nutricional de escolares em Ribeirão Preto-SP, foram avalia-
das por meio de questionário e medidas antropométricas,
uma amostra de 874 crianças em idade escolar, provenientes
de um estudo de coorte iniciado em 1994. Foram considera-
dos subnutridos os escolares com índice de massa corporal
(IMC) < percentil (P) 5 e com excesso de peso aqueles com
IMC ≥ P85 por duas referências: Must et al. e NCHS/CDC. A
associação do IMC com o peso ao nascer e demais variá-
veis de controle foi avaliada por modelo de regressão logís-
tica nominal, sendo a faixa entre o P5 e o P85 considerada
como referência. As variáveis de controle foram: sexo, ida-
de, cor da pele, nascimento pré-termo, tabagismo materno
durante a gestação, situação conjugal materna no parto,
idade da mãe ao nascimento da criança, idade da introdução
de leite artificial, tipo de escola que a criança frequenta es-
colaridade materna atual e número atual de moradores por
domicílio. Após o ajuste final do modelo para o BPN e para
a RCIU, ambos não favoreceram o excesso de peso na idade
escolar tanto pela referência de Must et al. como pela do
NCHS/CDC e ainda tiveram associação positiva com a sub-
nutrição nos escolares, com a RCIU pela referência de Must
et al. com Odds Ratio (OR) de 2,33 e intervalo de confiança
de 95%, (IC95%) de 1,34;4,07) e do NCHS/CDC com OR=2,23
(IC95% 1,29;3,84); e o BPN pelos critérios de Must et al.
com OR=1,81 (IC95% 1,02;3,21) e NCHS/CDC com OR=1,78
(IC95% 1,01;312). A associação positiva do sexo masculino
com o excesso de peso (OR=1,47; IC95% 1,02;2,13) e a ten-
dência de associação positiva do maior número de morado-
res no domicílio com o excesso de peso não foram suficien-
tes para retirar a associação positiva do tamanho ao nascer
com a subnutrição na idade escolar. Houve, ainda, associa-
ção negativa da RCIU com o excesso de peso pela referên-
cia do NCHS/CDC (OR=0,57; IC95% 0,34; 0,93). O excesso
de peso como um dos fatores de risco para a síndrome meta-
bólica nos indivíduos com BPN e com RCIU, independente
das referências de IMC utilizadas, parece ainda não estar
presente na idade escolar. Os resultados encontrados são
importantes e demonstram que este município, como outras
regiões de países em desenvolvimento, encontra-se em fase
de transição nutricional. Devido aos altos índices de exces-
so de peso sem a diminuição dos níveis de subnutrição para
aqueles dos países desenvolvidos, o efeito de associação
do BPN e da RCIU com o excesso de peso na faixa etária
entre 10 e 11 anos de idade ainda não ocorreu.

ESTUDO DO PERFIL DE EXPRESSÃO DOS GENES RELACIONADOS A APOPTOSE EM LEUCE-

MIAS LINFÓIDES AGUDAS DA INFÂNCIA POR PCR QUANTITATIVO EM TEMPO REAL (RQ-PCR

Juliana França da Mata Introdução: Anormalidades na regulação da apop-

Orientador: Prof.Dr. Carlos Alberto Scrideli tose, resultando tanto na sua inibição quanto aumento, tem
Tese de Doutorado apresentada em 05/11/2008 sido descritas como tendo um papel central no desenvolvi-

116
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
mento de diversas malignidades onco-hematológicas. A as-
sociação dos níveis de expressão destes genes com variá-
veis biológicas e sobrevida em crianças com LLA não tem
sido bem estabelecida. O objetivo do estudo foi de compa-
rar níveis de expressão dos genes pró-apoptóticos CASP3,
CASP8, CASP9 e FAS e do gene anti-apoptótico BCL2 em
crianças com leucemia linfóide aguda (LLA) e correlacioná-
los com prognóstico e variáveis clínicas e biológicas.
Métodos: Foram analisadas 140 amostras consecu-
tivas de medula óssea de crianças com LLA ao diagnósti-
co, classificadas e tratadas nas instituições participantes
segundo os protocolos propostos pelo GBTLI-99. O perfil
de expressão gênica foi analisado por PCR quantitativa em
tempo-real (RQ-PCR) utilizando-se SYBR Green como mar-
cador de fluorescência e o gene GUS como controle inter-
no. O valor de expressão relativa de cada gene foi avaliado
pela técnica 2-DDCT (com eficiências variando de 1,9-2,1).
Foram comparados os níveis de expressão dos genes estu-
dados com as variáveis: idade, número de glóbulos bran-
cos (GB) ao diagnóstico, citogenética molecular, velocida-
de na resposta ao tratamento de indução (respondedores
rápidos ou lentos), grupo de risco (risco básico-RB ou alto
risco-AR), imunofenotipagem e sobrevida livre de eventos
DA SAÚDE PERINATAL À SAÚDE DO ADULTO JOVEM : ESTUDO DOS FATORES DE RISCO
PARA A SÍNDROME METABÓLICA NA COORTE NASCIDA EM 1978/79 NOS HOSPITAIS DE
RIBEIRÃO PRETO, SP
Viviane Cunha Cardoso
Orientador: Prof. Dr. Marco Antonio Barbieri
Tese de Doutorado apresentada em 19/11/2008
Introdução: Diversos estudos sugerem que baixo
peso ao nascer associado a sobrepeso na infância pode
aumentar o risco de resistência insulínica e Síndrome Meta-
bólica (SM) na vida adulta. SM é um transtorno complexo
representado por um conjunto de fatores de risco para do-
ença cardiovascular, relacionados à deposição central de
gordura e à resistência insulínica. A prevalência da SM é
alta, variando entre 10% e 40%, dependendo da idade e
sexo.
Objetivos: Estimar a prevalência da SM e seus com-
ponentes entre adultos jovens nascidos na coorte de Ri-
beirão Preto/SP em 1978/79, e avaliar em que medida fatores
indicativos de nutrição intra-uterina (PIG e GIG) e excesso
de peso na infância são associados com SM.
Métodos: De 6827 nascidos de parto único hospita-
lar em 1978/79 foram avaliados 2063 participantes aos 23/25
anos para estabelecer a prevalência de SM na coorte adul-
ta. Esta avaliação dos adultos jovens constou de coleta de
sangue, medidas antropométricas, aferição de pressão ar-
terial e aplicação de questionários padronizados. Destes
2063 sujeitos, 1138 tiveram informações coletadas em 3
(SLE). O tempo de seguimento variou de 26 a 66 meses. A
associação entre as variáveis e os valores de expressão de
cada gene foi analisada pelo teste de Mann-Whitney. A
SLE foi analisada através de curvas de Kaplan-Meier e tes-
te log-rank e a correlação entre os valores de expressão
pelo teste de Spearman. Foram considerados como aumen-
tados os valores de expressão acima da mediana.
Resultados: SLE em 4 anos foi de 76% (RB-82% x
AR-66%) no grupo analisado. Foi observada uma correla-
ção significativa entre os genes CASP3, CASP8, CASP9 e
FAS (P<0.001) e associação estatística significante (p≤0,05)
entre hiperexpressão do gene BCL2 e GB <50000/dL ao
diagnóstico e risco básico. Hiperexpressão dos genes
CASP3, CASP8 e FAS esteve associada a contagem de
GB<5000/dL no D7 da terapia de indução. Não foi verificada
associação entre o nível de expressão destes genes e SLE
em 4 anos.
Conclusões: Os resultados sugerem que o nível de
expressão de genes relacionados a apoptose pode estar as-
sociado a variáveis clínicas e biológicas em crianças com
LLA. O nível de expressão destes genes medidos ao diag-
nóstico, no entanto, não parece ter associação significativa
com sobrevida e chance de recaída em crianças com LLA.
momentos de avaliação: ao nascimento (sexo do recém-
nascido, tabagismo, escolaridade e situação conjugal ma-
ternas, paridade e relação de peso ao nascer para idade
gestacional, classificada como adequado - AIG, pequeno -
PIG e grande - GIG), na idade escolar (excesso de peso ou
não) e aos 23/25 anos (ocupação do chefe da família, situa-
ção conjugal, escolaridade, tabagismo e história familiar de
doenças cardiovasculares). SM foi definida pelo consenso
da International Diabetes Federation (IDF). Foi aplicada
análise de regressão logística múltipla, passo a passo, sen-
do SM a variável dependente. O estudo foi aprovado pelo
Comitê de Ética em Pesquisa do Hospital das Clínicas e da
Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto -USP, processo
n° 5587/2007.
Resultados: A prevalência de SM da coorte adulta,
pelos critérios da IDF, foi 11,9% (18,1% nos homens e 6,1%
nas mulheres). Entre os componentes da síndrome encon-
trou-se: circunferência de cintura aumentada em 32%, hi-
pertensão em 22,8%, HDL baixo em 42%, hiperglicemia em
3,1%, e hipertrigliceridemia em 12,8%. Houve diferença en-
tre os sexos em relação a todos os componentes da SM,
sendo que os homens apresentaram maiores prevalências
de alteração nas medidas de cintura, níveis pressóricos,
glicemia de jejum e triglicerídeos (36,1%, 40,6%, 4,5% e 16%;
respectivamente) do que as mulheres (28,1%, 6,3%, 1,8% e
117

Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
9,8%; respectivamente). Em relação ao HDL colesterol bai-
xo, as mulheres apresentaram maior porcentagem (44,4%)
do que os homens (39,4%). O cálculo de tendência linear
mostrou que o risco para SM aumentava conforme o au-
mento da relação de peso para idade gestacional. Na análi-
se não-ajustada recém-nascidos GIG apresentaram risco para
SM, associação esta que não se manteve com o ajuste pe-
PERFIL NUTRICIONAL DE ADOLESCENTES EUTRÓFICOS, COM DIAGNÓSTICO DE SOBREPESO
E OBESIDADE, ATENDIDOS NO CENTRO MÉDICO SOCIAL COMUNITÁRIO VILA LOBATO, RI-
BEIRÃO PRETO (SP), BRASIL
Virgínia Pavesi Miguel
Orientadora: Profª. Drª. Jacqueline Pontes Monteiro
Dissertação de Mestrado apresentada em 25/11/2008
A obesidade pode ser definida como um distúrbio
metabólico caracterizado por aumento da massa adiposa do
organismo que se reflete em aumento do peso corpóreo
(OMS, 2004). Na adolescência, esta se associa ao apareci-
mento precoce de doenças cardiovasculares, diabetes me-
llitus tipo 2, problemas psicológicos, além de comprometer a
postura, causar alterações no aparelho psicomotor entre
outros (Terres et al., 2006). A adolescência traz consigo algu-
mas peculiaridades que podem fazer com que este seja um
grupo de risco para o excesso de peso, uma vez que as
práticas alimentares dessa faixa etária compreendem alta in-
gestão de alimentos energéticos tais como fast foods, sal-
gadinhos, doces e refrigerantes (Del Ciampo; Tomita, 2007)
e baixa ingestão de frutas, vegetais e laticínios (Neumark-
Sztalner et al., 1999). O presente estudo teve como objetivos
descrever e comparar o perfil nutricional de três grupos de
adolescentes de mesma idade e gênero, com diagnóstico de
sobrepeso, obesidade e eutrofia determinado pelo Índice de
Massa Corporal (IMC). Para avaliação do consumo alimen-
tar, foi utilizado questionário semiquantitativo de frequên-
cia alimentar, e as informações relativas aos hábitos associ-
ados à alimentação foram coletadas por meio de um questi-
onário. Foram avaliados 141 adolescentes, com idade entre
10 e 19 anos, atendidos no Centro Médico Social Comunitá-
rio Vila Lobato, cidade de Ribeirão Preto, São Paulo. Em
relação à antropometria, observou-se que houve diferença
estatística significante entre o IMC, peso, circunferência da
IMPACTO DA SUPLEMENTAÇÃO MATERNA DE VITAMINA A DURANTE O PUERPÉRIO NO BINÔ-
MIO MÃE-FILHO: ENSAIO CLÍNICO ALEATORIZADO DUPLO-CEGO PLACEBO-CONTROLADO
Thalia Manfrin Martins
Orientador: Prof. Dr. Ivan Savioli Ferraz
Dissertação de Mestrado apresentada em 28/11/2008
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Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
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las outras variáveis. Indivíduos do sexo masculino (OR 4,24),
com excesso de peso na idade escolar (OR 2,81) e tabagistas
(OR 3,03) tiveram um risco maior de SM.
Conclusões: A prevalência de SM foi elevada, con-
siderando-se que a população é jovem. Ganho de peso na
idade escolar mostrou-se associado a risco de SM, ao con-
trário das condições de nascimento.
cintura e do braço, dobras cutâneas e composição corporal
entre os grupos (p=0,000). A circunferência da cintura apre-
sentou correlação estatisticamente significante com o IMC
(0,947; p = 0,000), porcentagem de gordura corporal (0,757;
p = 0,000 ), dobra cutânea triciptal (0,723; p = 0,000), dobra
cutânea subescapular ( 0,815; p = 0,000) e dobra cutânea
supra-ilíaca ( 0,841; P = 0,000). Entre os grupos não foi ob-
servada diferença estatística significante em relação à in-
gestão energética e à contribuição percentual de macronu-
trientes, porém todos os grupos apresentaram percentual
lipídico da dieta acima do recomendado. Além disso, não
houve diferença estatística significante entre os três gru-
pos para o consumo de micronutrientes. Quanto à análise
qualitativa da dieta, observa-se em geral consumo frequen-
te de arroz e feijão, pães, salgados, refrigerante, suco artifi-
cial, café com açúcar e embutidos. As frutas mais consumidas
foram laranja, maçã e banana, e os vegetais mais consumi-
dos foram alface e tomate. No que se refere ao estilo de vida,
observou-se que o tempo gasto em frente à televisão (p =
0,018) foi maior entre os adolescentes obesos, o hábito de
fazer dieta (p = 0,023) e o menor número de refeições (p =
0,014) foi mais prevalente entre os com sobrepeso e a pre-
sença familiar de obesidade (p = 0,000) foi menos comum
entre os eutróficos. Os nossos resultados mostram que os
três grupos de adolescentes apresentaram semelhança em
relação ao padrão alimentar. Do ponto de vista qualitativo, o
padrão alimentar de todos os adolescentes pesquisados
mostrou-se inadequado para a maioria dos grupos de ali-
mentos. Os resultados referentes ao estilo de vida e presen-
ça de obesidade na família mostram que, além do padrão
alimentar, estes devem ser considerados ao tratar obesida-
de na adolescência.
Introdução: A deficiência de vitamina A (DVA) cons-
titui grave problema de saúde pública em muitas regiões do
mundo, atingindo principalmente o grupo materno-infantil
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e aumentando a morbimortalidade na infância. A suplemen-
tação materna pode ser uma estratégia eficaz no combate
ao problema.
Objetivos: Verificar o impacto da suplementação
materna com vitamina A sobre a concentração de retinol do
leite materno e do soro no binômio mãe-filho, além de esti-
mar a prevalência da DVA neste grupo, verificar a associa-
ção entre mãe e filho e a influência de alguns fatores envol-
vidos na gênese da DVA.
Casuística e métodos: 33 puérperas receberam cáp-
sulas com 200.000 UI de vitamina A entre o 20º e o 30º dias
pós-parto (grupo suplementado) e 33 receberam cápsulas
idênticas com óleo de soja (grupo placebo). Amostras de
sangue e leite maternos foram colhidas antes (T0) e após
(T1) a intervenção (três meses pós-parto). Sangue dos
lactentes foi colhido aos três meses. O retinol foi analisado
pelo método de HPLC. Concentrações inferiores a 0,70 µmol/
l no soro e 1,05 µmol/l no leite foram indicativas de DVA.
Peso e altura foram aferidos e dados sociodemográficos e
clínicos foram obtidos através de entrevista.
Resultados: Concluíram a pesquisa 61 pares mãe-
filho. Nas mães suplementadas, a concentração sérica de
retinol aumentou de 1,05 ± 0,31 µmol/l no T0 para 1,17 ± 0,34
µmol/l no T1 (p=0,026), mostrando diferença estatistica-
mente significante em relação ao grupo placebo, cuja média
foi 1,02 ± 0,28 µmol/l (p=0,032). No leite materno, houve
redução significativa da concentração de retinol somente
SAÚDE MENTAL
TRANSTORNO DE ANSIEDADE SOCIAL : VALIDAÇÃO DE INSTRUMENTOS DE AVALIAÇÃO
Flávia de Lima Osório
Orientadora: Profª. Drª. Sonia Regina Loureiro
Tese de Doutorado apresentada em 07/11/2008
O Transtorno de Ansiedade Social (TAS) é um dis-
túrbio de início precoce, com prevalência e comorbidades
significativas, favorecendo prejuízos importantes no fun-
cionamento laboral, familiar, social e acadêmico, especial-
mente em pessoas jovens. Dada tais características, faz-se
necessária a identificação precoce e o diagnóstico preciso
do TAS, o que requer instrumentos validados. Objetivou-
se a avaliação sistemática do TAS, por meio de um conjun-
to de instrumentos validados quanto às suas qualidades
psicométricas de fidedignidade e validade, em uma popula-
ção de adultos jovens brasileiros, estudantes universitári-
os, sob a perspectiva da auto e hetero-avaliação. Para tal,
no grupo que não recebeu a vitamina (1,98 ± 0,78 µmol/l no
T0 e 1,34 ± 0,89 µmol/l no T1, p=0,003). Nos lactentes, não
houve diferença estatística nas médias de retinol entre os
grupos (0,64 ± 0,30 µmol/l e 0,69 ± 0,26 µmol/l). Quanto à
DVA materna sérica, encontrou-se 6,7% (T0) e 16,7% (T1)
no grupo placebo e 6,5% (T0) e 3,2% (T1) no suplementado.
DVA no leite materno foi observada em 7,4% (T0) e 55,6%
(T1) das amostras do grupo placebo e 22,6% (T0) e 16,1%
(T1) do suplementado. A DVA esteve presente em 66% dos
lactentes (69% no grupo placebo e 63,3% no suplementado).
Apenas uma puérpera apresentou subnutrição e um lactente
apresentou risco nutricional. DVA materna associou-se à
DVA no leite (p=0,015) e houve correlação positiva signifi-
cante entre retinol sérico materno e do leite (r = 0,28;
p=0,032). Não houve influência das variáveis paridade, es-
colaridade, renda, uso de polivitamínico, febre e diarréia no
retinol de puérperas e lactentes. O retinol sérico materno
não se alterou com o IMC, mas a idade das puérperas se
correlacionou positivamente com o retinol (r = 0,29; p=0,024).
Conclusões: A suplementação materna com 200.000
UI de vitamina A mostrou impacto positivo na concentra-
ção de retinol da mãe e do leite materno, porém não atingin-
do o lactente. Apesar de a população estudada ter sido
considerada eutrófica em praticamente sua totalidade, ele-
vada prevalência de DVA foi encontrada, principalmente
nos lactentes de três meses de idade, questionando-se o
ponto de corte empregado para esta faixa etária.
realizou-se a validação transcultural dos instrumentos auto-
avaliativos: Social Phobia Inventory (SPIN) e Self
Statements During Public Speaking Scale (SSPS -versão
traço e estado) e do instrumento hetero-avaliativo Brief
Social Phobia Scale (BSPS), com aprovação prévia dos
autores das versões originais. O delineamento metodológico
envolveu três etapas. Na primeira, a amostra utilizada para
avaliação dos instrumentos SPIN e SSPS foi composta por
2314 estudantes universitários da população geral. Na se-
gunda etapa, para a validação dos instrumentos SPIN, SSPS
e BSPS, utilizou-se de uma amostra de 178 estudantes uni-
versitários identificados como casos (N = 88) e não-casos
(N = 90) de TAS, através da Entrevista Clínica Estruturada
para o DSM-IV (SCID-IV). Na terceira etapa, 45 estudantes
universitários também classificados como casos (N = 24) e
não-casos (N = 21) de TAS compuseram a amostra para
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Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
validação da SSPS-estado no contexto de um modelo expe-
rimental de falar em público. O SPIN apresentou boa con-
sistência interna ( α=0,63- 0,90), validade concorrente com
o Inventário de Ansiedade de Beck (BAI) (r = 0,10-0,63) e
SSPS-traço (r = 0,22-0,65), validade discriminativa (sensibi-
lidade =0,84, especificidade = 0,87) e validade de construto.
A análise fatorial indicou a presença de um número variável
de fatores em função da amostra estudada. Destaca-se a
versão reduzida deste instrumento, o Mini-SPIN, que tam-
bém apresentou ótimos indicadores psicométricos (sensi-
bilidade = 0,77, especificidade = 0,67). A SSPS-traço mos-
trou-se bastante adequada quanto à consistência interna
(α = 0,64-0,94), validade concorrente com o BAI (r = 0,18-
0,53) e SPIN (r = 0,22-0,65) e validade discriminativa entre
casos e não-casos de TAS. A análise fatorial evidenciou a
presença de dois fatores: auto-avaliação positiva e negati-
va. A BSPS aplicada com o suporte de um roteiro de per-
guntas-guia, apresentou excelentes confiabilidade inter-
SAÚDE NA COMUNIDADE
TRABALHO EM EQUIPE E COMPETÊNCIA PROFISSIONAL NA ESTRATÉGIA SAÚDE DA FAMÍLIA:
A PERCEPÇÃO DO CIRURGIÃO DENTISTA
Carolina Menez de Carvalho Pinto
Orientadora: Profª. Drª. Aldaísa Cassanho Forster
Dissertação de Mestrado apresentada em 31/10/2008
A Saúde Bucal deve ser entendida como parte inte-
grante e inseparável da saúde geral do indivíduo e que está
relacionada com as condições de saneamento; alimenta-
ção; moradia; trabalho; educação; renda; transporte; lazer;
liberdade; e acesso à terra, aos serviços de saúde e à infor-
mação (Brasil, 1993). Um ator nesta história se torna primor-
dial, o cirurgião dentista, responsável por proporcionar
padrões adequados de saúde bucal para o conjunto da
população de um país, de uma região, ou de uma localida-
de; procurando formular estratégias e linhas de ação que
permitam a construção de uma saúde de base coletiva. Esta
investigação tem por objetivo analisar a percepção do ci-
rurgião dentista da equipe de saúde Bucal (ESB) sobre a
Estratégia Saúde da Família (ESF) e a Saúde Bucal; com
enfoques no trabalho em equipe e nas suas competências
na ESF.
Constitui-se em um estudo descritivo exploratório
com abordagem qualitativa dos dados.
Para a coleta dos dados foi utilizada a entrevista
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Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista
avaliadores (0,86-1,00) e validade discriminativa (sensibili-
dade = 0,84, especificidade = 0,83); adequadas consistên-
cia interna (α = 0,48-0,88), validade concorrente com o BAI
(r = 0,21-0,62), SPIN (r = 0,24-0,82) e SSPS-traço (r = 0,23-
0,31) e validade de construto. A análise fatorial apontou a
presença de seis fatores que explicam 71,8% da variância
dos dados. A SSPS-estado mostrou-se apropriada para ava-
liação dos aspectos cognitivos associados ao falar em pú-
blico no contexto de um modelo experimental de simulação
de falar em público, apresentando excelente validade
discriminativa entre casos e não-casos de TAS, além de
sensibilidade para discriminar os diferentes níveis de ansi-
edade nas fases do procedimento. Todos os instrumentos
mostraram boas qualidades psicométricas, o que recomen-
da o uso na população de universitários brasileiros, po-
dendo ser aplicados tanto em contextos experimentais como
clínicos, favorecendo a detecção mais precisa do TAS, es-
pecialmente nos contextos de atenção primária à saúde.
semi-estruturada com os 10 cirurgiões dentistas que traba-
lham na equipe de saúde bucal da ESF do município de
Ribeirão Preto.
As entrevistas gravadas e transcritas na íntegra. Para
interpretação dos dados nos baseamos na análise de con-
teúdo preconizada por Bardin (1977). Com relação aos re-
sultados da caracterização do sujeito, constatamos que
todos os CDs entrevistados egressaram da graduação há
mais de 14 anos, com média de 24,4 anos de formação aca-
dêmica. Com relação à idade, os profissionais, possuem
média de 46,2 anos, a maioria é do sexo masculino e também
casado. Eles possuem uma média de tempo de trabalho na
ESF de 29,9 meses, todos os profissionais possuem especi-
alização e somente um entrevistado não possui formação
voltada para a área de Saúde Pública. Da análise das entre-
vistas realizadas com os cirurgiões dentistas da Estratégia
Saúde da Família emergiram dois temas principais: o traba-
lho em equipe e as competências profissionais para o tra-
balho na ESF.
Estes dois temas são de grande importância para o
cirurgião dentista, para que este possa proporcionar uma
elevação dos níveis de saúde da população, principalmen-
te da saúde bucal.
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
PROGRAMA DE SAÚDE VOCAL PARA PROFESSORES: ESTUDO EM UMA ESCOLA PARTICU-
LAR DE RIBEIRÃO PRETO
Silvia Tieko Kasama
Orientador: Prof. Dr. Edson Zangiacomi Martinez
Dissertação de Mestrado apresentada em 07/11/2008
Introdução: os professores são profissionais com
alto risco para disfonia. A intensa demanda vocal e a falta
de conhecimento a respeito de cuidados com a própria voz
são aspectos comuns entre os professores. Experiências
anteriores para orientar este profissional, com relação a sua
própria voz, demonstram sucesso e a opinião dos profes-
sores, assim como a prática de novos hábitos são de gran-
de importância. As Escolas Waldorf têm uma pedagogia
baseada na Antroposofia, sendo frequente o uso da voz
falada e cantada em suas atividades.
Objetivo: Propor uma ação de promoção de saúde
vocal para professores, capaz de fornecer uma percepção
mais ampla, além da conscientização dos fatores que deter-
minam ou interferem no processo saúde-doença da disfonia.
Método: 13 professores (2 do sexo masculino) de uma
Escola Waldorf de Ribeirão Preto, com média de idade de 43
anos (mín=24, máx=56), participaram das 3 etapas da pes-
quisa, que compreendia uma avaliação inicial individual (eta-
pa 1), o Programa de Saúde Vocal com duração de 12 encon-
tros semanais (etapa 2) e uma reavaliação individual após o
GEOEPIDEMIOLOGIA DA CO-MORBIDADE AIDS/ TUBERCULOSE NO ESTADO DE SÃO PAULO,
BRASIL - DE 1996 A 2005
Ana Teresa Mancini Pimenta
Orientador: Prof. Dr. Antonio Luiz Rodrigues-Júnior
Dissertação de Mestrado apresentada em 14/11/2008
Foi desenvolvido um estudo ecológico com o obje-
tivo de descrever a incidência da co-morbidade aids/ tuber-
culose no Estado de São Paulo, no período de 1996 a 2005,
segundo sua distribuição espacial. A base territorial utiliza-
da foram os 645 municípios do Estado, agrupados em 63
microrregiões de acordo com a divisão do IBGE; os coefici-
entes de incidência de aids e da co-morbidade aids/ tuber-
culose foram empregados como medidas das doenças. O
IDH e seus componentes IDH-L, IDH-E e IDH-R foram cal-
culados para cada microrregião como indicadores de de-
senvolvimento humano das populações. No período estu-
dado, foram notificados 81.841 casos de aids; 16.759 casos
de co-morbidade aids/ tuberculose com uma taxa de ataque
de 21,60% e 733 casos suspeitos de tuberculose. Obser-
vou-se que 65,49% dos casos de aids notificados eram do
sexo masculino; a faixa etária em que ocorreu a maior pro-
porção (61,46%) do número de notificações foi entre 25 e
término dos encontros (etapa 3). Houve a participação de 5
professores do ensino infantil, 6 do fundamental e 2 do mé-
dio. O programa abordou anatomia e fisiologia da fonação,
higiene vocal e exercícios de aquecimento e desaquecimento
vocal. Logo após o término dos encontros, os professores
preencheram um questionário de avaliação do programa.
Resultados: a comparação dos dados coletados nas
avaliações individuais pré e pós-intervenção não revela-
ram mudanças significativas, porém tiveram a função de
monitoramento do aspecto vocal dos professores. De acor-
do com os professores, o aspecto negativo do processo foi
a falta de tempo para comparecer aos encontros e para rea-
lizar os exercícios diariamente. As mudanças citadas como
mais importantes foram aspectos gerais de higiene vocal
(destacando-se a hidratação), respiração, efeitos benéfi-
cos dos exercícios, atenção para a própria voz e dos alunos
e o reconhecimento da importância da voz.
Conclusão: a ação de promoção de saúde proposta
obteve grandes êxitos em ampliar a percepção e conscientizar
os professores a respeito dos fatores que atuam de maneira
favorável ou prejudicial à voz. O resultado foi muito favore-
cido pelo espaço criado para reflexão, troca de experiências
e vivências de situações proporcionadas pelo Programa de
Saúde Vocal.
39; houve maior proporção de transmissão heterossexual
(52,81%); quanto à escolaridade, a maioria dos casos
(53,42%) apresentou entre 1 e 7 anos; as microrregiões com
os maiores coeficientes de incidência (casos por 100.000
habitantes acima de 14 anos) foram Ribeirão Preto (490,41),
Barretos (489,42), São José do Rio Preto (464,08), Santos
(459,22) e Caraguatatuba (402,84). Dos casos notificados
com a co-morbidade, 73,92% eram do sexo masculino; pes-
soas com idade entre 25 e 44 anos foram as mais acometi-
das (77,09%); 57,10% apresentavam escolaridade entre 1 e
7 anos; as microrregiões com os maiores coeficientes de
incidência (casos por 100.000 habitantes acima de 14 anos)
foram Santos (136,35) Caraguatatuba (88,67) São Paulo
(87,45), São José dos Campos (72,64) e Ribeirão Preto (70,97).
A microrregião de São Paulo (0,835) apresentou o maior
valor de IDH; Nhandeara (0,843) o maior IDH-L; São José
dos Campos (0,897) o maior IDH-E; São Paulo (0,835) o
maior IDH-R; as microrregiões ao sul/ sudoeste do Estado
apresentaram os menores valores do IDH e de seus compo-
nentes. O padrão de distribuição espacial da aids e da co-
morbidade aids/ tuberculose foram diferentes do padrão
do IDH e seus componentes.
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Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
ALTERAÇÃO DO EQUILÍBRIO E MARCHA EM IDOSOS E OCORRÊNCIA DE QUEDAS
Thaise Lucena Silva
Orientador:a Profª. Drª. Amábile Rodrigues Xavier Manço
Dissertação de Mestrado apresentada em 27/11/2008
O envelhecimento populacional presente na maioria
dos países na atualidade inclusive no Brasil, tem sido asso-
ciado ao aumento das quedas que estão se tornando cada
vez mais frequentes e sendo consideradas como um impor-
tante problema de saúde pública. O presente estudo reali-
zado na Associação dos Aposentados de Catanduva e Re-
gião tiveram como objetivo estudar as alterações de equilí-
brio e marcha em idosos e as associações com quedas.
Foram pesquisados 200 idosos de ambos os sexos, com
idade igual e superior a 60 anos. O método utilizado foi uma
entrevista contendo perguntas abertas e fechadas, e para
avaliação cognitiva foi aplicado o mini-exame do estado
mental (MEEM) e a escala de avaliação de desempenho
físico de membros inferiores (SPPB), com o intuito de ava-
A REPRESENTAÇÃO DE VELHICE ENTRE OS PROFISSIONAIS QUE ATUAM NOS NÚCLEOS
DE SAÚDE DA FAMÍLIA
Angélica Maria Jabur Bimbato
Orientador: Prof. Dr. Antônio Carlos Duarte de Carvalho
Dissertação de Mestrado apresentada em 28/11/2008
Diversas mudanças têm ocorrido no perfil demográ-
fico do Brasil, passando o envelhecimento populacional a
ser uma realidade e não mais uma expectativa. Muitos são
os mitos, conceitos e concepções sobre idoso, velhice e
envelhecimento existentes em nossa sociedade, assim como
meios legais que regem sobre os direitos e deveres da pes-
soa idosa (Programa Nacional de Saúde do Idoso, Estatuto
do Idoso e Pacto pela Vida 2006). Objetivando analisar as
representações de velhice presentes entre os profissionais
que atuam nos Núcleos de Saúde da Família I, III, IV e V do
Centro de Saúde Escola da Faculdade de Medicina de Ri-
beirão Preto - Universidade de São Paulo (CSE – FMRP/
USP) e as possíveis implicações para o serviço de saúde,
realizamos este estudo, utilizando-se da abordagem quali-
tativa por meio de entrevistas semi-estruturadas, com de-
zenove profissionais que atuam nesses Núcleos (agentes
comunitários de saúde, auxiliares de enfermagem, enfer-
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Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista
liar o equilíbrio, marcha e a força destes membros. Para a
análise dos dados foi utilizado o procedimento GENMOD
do programa computacional SAS versão nove, sendo con-
siderado um nível de significância de 5% ao testar hipóte-
ses e um intervalo de confiança de 95%%. Os resultados
mostraram que 51% dos idosos sofreram quedas nos últi-
mos 6 meses, os fatores de risco encontrados como signifi-
cantes foram: idade de 70 a 74anos (p=0,04) e de 75 a 79anos
(p ≤ 0,01), residir sozinho (p ≤ 0,01), não possuir compa-
nheira (p=0,01), uso de medicamentos (p= 0,05), número de
medicamentos de 3 a 4 (p= 0,04) e 5 ou mais (p=0,01), pre-
sença de fraqueza muscular (p ≤ 0,01), largura dos passos
pequenos (p=0,08), assimetria da marcha p=(0,09), presen-
ça de problemas nos pés (p=0,07), uso de aparelho de audi-
ção (p ≤ 0,01). Os resultados indicam a importância de uma
equipe multidisciplinar, como medidas preventivas, visan-
do diminuir as quedas possibilitando uma melhora das ati-
vidades básicas da vida diária (ABVDs), dessa forma tor-
nando o idoso mais independente.
meiras, médicos e dentistas). As concepções de velhice
variaram em função da formação, idade e experiência de
vida dos entrevistados, sendo apresentadas como: fase de
sabedoria e experiência de vida; evolução natural do corpo
humano; estado de espírito; fase que se assemelha ao mun-
do infantil; fase de decadência ou solidão; e melhor idade.
Há a compreensão por parte dos profissionais entrevista-
dos, de que a velhice é um conjunto bio-psico-social-espi-
ritual, sendo manifestadas pelos mesmos as dificuldades
encontradas em prestar uma assistência de qualidade nes-
te cenário tão complexo. Demonstraram também, os seus
sentimentos (medo e ansiedade) frente ao próprio proces-
so de envelhecimento, como consequência da cultura e da
sociedade em que vivem, onde ser idoso é visto de forma
negativa. As concepções sobre idoso, velhice e envelheci-
mento, apresentadas pelos entrevistados, indicam a dimen-
são do quanto esses profissionais encontram-se despre-
parados para enfrentar o grande desafio de melhorar o aten-
dimento oferecido pelo serviço de saúde, principalmente,
em se levando em consideração o aumento acentuado do
número de idosos neste país.
Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00
http://www.fmrp.usp.br/revista Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP
FATORES PREDITORES DO ALCANCE DAS METAS DO PROGRAMA DE INTERVENÇÃO NO ES-
TILO DE VIDA EM NIPO-BRASILEIROS DE BAURU - SP
Marilia Alessi Guena de Camargo
Orientadora: Profª. Drª. Daniela Saes Sartorelli
Dissertação de Mestrado apresentada em 08/12/2008
Objetivos: Identificar fatores associados ao alcan-
ce das metas de um programa de intervenção no estilo de
vida em Nipo-Brasileiros de Bauru, SP.
Metodologia: Os fatores associados ao alcance das
metas (perda de peso de 5%, prática de 150 minutos de
atividades físicas semanal, consumo alimentar com teor de
gordura saturada inferior a 10% das calorias totais, consu-
mo diário de 400g de frutas, verduras e legumes), após 12
meses de intervenção foram investigados em modelos de
regressão logística ajustados. As avaliações do estilo de
vida e perfil de saúde foram conduzidas no início do estudo
e após 12 meses de seguimento.
Resultados: No total, 458 nipo-brasileiros, 56% do
sexo feminino, 84% de 2ª geração, idade média (DP) de 60
(11) anos foram analisados. Foram incluídos nos modelos
múltiplos para cada desfecho investigado os indivíduos
com excesso de peso (n=329), que reportaram não terem o
hábito da prática de 150 minutos de atividades físicas se-
manal (n=278), consumo alimentar com teores de gordura
saturada superior a 10% das calorias totais (n=107) e con-
A INFLUÊNCIA DA FISIOTERAPIA NA PROMOÇÃO DA QUALIDADE DE VIDA EM PACIENTES
COM DISFUNÇÃO TEMPOROMANDIBULAR
Maíra de Oliveira Viana
Orientador: Prof. Dr. Jair Lício Ferreira Santos
Dissertação de Mestrado apresentada em15/12/2008
A disfunção temporomandibular (DTM) é respon-
sável por uma sintomatologia de difícil diagnóstico e trata-
mento, estando cada vez mais presente em um número con-
siderável de indivíduos, trazendo prejuízos nas atividades
diárias, no sono e na alimentação, o que resulta em impacto
negativo na qualidade de vida do paciente. A fisioterapia
utiliza inúmeros recursos com a finalidade normalizar a fun-
ção do sistema estomatognático e proporcionar uma me-
lhora na qualidade de vida desses indivíduos. O objetivo
geral da pesquisa foi avaliar a influência da fisioterapia na
melhoria dos sintomas e na qualidade de vida sob a pers-
pectiva de pacientes portadores de DTM. O estudo foi re-
alizado com 60 pacientes de ambos os sexos, com idade
variando entre 18 a 70 anos com diagnóstico de DTM aten-
didos na clínica da Faculdade de Odontologia de Ribeirão
Preto (FORP-USP). Os pacientes foram divididos em dois
sumo diário inferior a 400g de frutas, verduras e legumes
(n=265). Após 12 meses, 11% dos indivíduos com excesso
de peso alcançaram a meta de perda de peso, 24, 55 e 16%
dos participantes alcançaram as metas de prática de ati-
vidades físicas, teor da dieta de gordura saturada e consu-
mo de frutas, verduras e legumes, respectivamente. Após
ajuste por variáveis de confusão, maior razão de chance
[OR (95%)] para o alcance da meta de perda de peso foi
verificada entre mulheres [2,4 (1,3; 4,5)], e menor razão de
chance entre portadores de diabetes, hipertensão e
dislipidemia [0,4 (0,1; 0,8)] e indivíduos classificados em
estágio de mudança de pré-contemplação / contemplação
para redução do consumo de carnes vermelhas [0,4 (0,2;
0,9)]. Os participantes de 2ª geração apresentam menor ra-
zão de chance para o alcance da meta do consumo de fru-
tas, verduras e legumes [0,3 (0,1; 0,9)]. Nenhuma associa-
ção foi verificada para as metas da prática de atividades
físicas e de gordura saturada.
Conclusões: Entre os Nipo-Brasileiros, as estratégias
do programa de intervenção no estilo de vida foram mais
eficientes no alcance das metas entre as mulheres, indivíduos
de 1ª geração, não portadores de morbidades e participan-
tes classificados nos estágios de mudança de ação/manu-
tenção para a redução do consumo de carnes vermelhas.
grupos de 30 voluntários cada, sendo que um grupo rece-
beu tratamento fisioterápico e odontológico e o outro rece-
beu apenas o tratamento odontológico. A medida da quali-
dade de vida foi obtida pelo questionário genérico SF-36
Medical Outcome Study-Mos Short From Health Survey,
em duas ocasiões: uma no início do tratamento e outra no
final. Os resultados mostram que os pacientes que fizeram
um tratamento interdisciplinar apresentaram escores mais
elevados em todos os domínios do questionário: capacida-
de funcional, limitação por aspectos físicos, dor, estado
geral de saúde, vitalidade, aspectos sociais, aspectos emo-
cionais e saúde mental. No grupo que recebeu tratamento
apenas odontológico, verificou-se melhora apenas no do-
mínio relacionado a dor. O questionário SF-36 foi um instru-
mento adequado, de aplicação relativamente rápida e de
fácil uso para avaliação da qualidade de vida em pacientes
com DTM. Sendo assim os resultados apontam para a im-
portância do trabalho multidisciplinar e as contribuições
que a fisioterapia pode oferecer a fim de proporcionar uma
melhor qualidade de vida em pacientes com DTM.
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