INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS

Departamento de bioquímica

Separación e identificación de aminoácidos de jugo de

frutos para cromatografía

Profesor:

Hernandez Derramadero Fernando

Espinosa González Marco David

Grupo 5QM1 Sección 2 Equipo 4

5 de Septiembre del 2017

Objetivos: pH 7,0 son el aspartato y glutamato,
cada uno de los cuales tiene un segundo
a) Separar los aminoácidos presentes en grupo carboxilo.
jugo de frutos por cromatografía
bidimensional en capa fina Resultados:
b) Identificar los aminoácidos separados
por comparación de Rf con las 1ra fase móvil
soluciones tipo de aminoácidos. Frente
c) Comparar el grado de resolución de la del Frente del
cromatografía bidimensional, con el de la Aminoácido soluto disolvente Rf
unidimensional. Arg 2 7.3 0.2739726
Lys 3 7.3 0.4109589
Introducción Gly 5.4 7.3 0.73972603
Los 20 aminoácidos estándar Glu 6.4 7.3 0.87671233
encontrados en las proteínas son α- His 6.5 7.3 0.89041096
aminoácidos. Tienen todos un grupo Thr 6.4 7.3 0.87671233
carboxilo y un grupo amino unidos al Met 6.8 7.3 0.93150685
mismo átomo de carbono (el carbono α). Pro 6.8 7.3 0.93150685
Difieren unos de otros en sus cadenas Tyr 6.8 7.2 0.94444444
laterales, o grupos R, que varían en
estructura, tamaño y carga eléctrica. Los Phe 6.9 7.3 0.94520548
aminoácidos aparte se pueden clasificar
en base a su polaridad por sus grupos R:
Grupos R apolares alifáticos: Los Tabla 1. Resultados cromatograma
grupos R de esta clase de aminoácidos unidimensional tipo desarrollado en 1ra fase
son apolares e hidrofóbicos. (alanina, móvil (cloroformo-metanol-amoníaco 17%
valina, leucina, isoleucina, glicina,
2:2:1)
metionina y prolina)
Grupos R aromáticos: La fenilalanina ,
la tirosina y e l triptófano , con sus
cadenas laterales aromáticas ,son 2da fase móvil
relativamente apolares (hidrofóbicos). Frente
Frente del
Grupos R polares sin carga: Los del Rf
grupos R (estos aminoácidos son más disolvente
Aminoácido soluto
solubles en agua, o hidrofilicos, que los Arg 1.5 7.6 0.19736842
de los aminoácidos apolares, debido a Lys 1.1 7.6 0.14473684
que contienen grupos funcionales que
Gly 2.5 7.6 0.32894737
forman puentes de hidrógeno con el
agua. En esta clase de Glu 2.8 7.6 0.36842105
aminoácidos se incluyen la serina, His 1.2 7.6 0.15789474
treonina, cisteina, asparagina y Thr 2.8 7.6 0.36842105
glutamina. Met 4.5 7.6 0.59210526
Grupos R cargados positivamente Pro 2.4 7.6 0.31578947
(básicos): Son hidrofílicos y tienen una Tyr 4.8 7.6 0.63157895
carga positiva a pH 7. Estos aminoácidos
Phe 5.1 7.6 0.67105263
son la arginina, lisina e histidina.
Grupos R cargados negativamente
(ácidos) Los dos aminoácidos que tienen
grupos R con una carga neta negativa a
Tabla 2. Resultados del cromatograma
unidimensional tipo desarrollado en 2da fase
móvil (Butanol-ácido acético-agua 3:1:1).

1ra fase móvil 2da fase móvil

Frente Frente
No. De del Frente del del Frente del Aminoácido
Mancha soluto disolvente Rf soluto disolvente Rf correspondiente
1 2.1 7.3 0.28767123 1.5 7.5 0.2 Arginina
2 2.9 7.3 0.39726027 1.3 7.5 0.17333333 Lisina
3 4.5 7.3 0.61643836 2.3 7.5 0.30666667 ¿?
4 5.1 7.3 0.69863014 2.2 7.5 0.29333333 Glicina
5 5.8 7.3 0.79452055 1.2 7.5 0.16 ¿?
6 6 7.3 0.82191781 2.5 7.5 0.33333333 Glutamato
7 6.3 7.3 0.8630137 4.3 7.5 0.57333333 Metionina
8 7 7.3 0.95890411 5 7.5 0.66666667 Fenilananina

Tabla 3. Cromatograma bidimensional tipo desarrollado en 2 fases móviles

1ra fase móvil 2da fase móvil

No. De Frente del Frente del Frente del Frente del
Mancha soluto disolvente Rf soluto disolvente Rf
1 3.6 7.5 0.48 2.9 7.7 0.37662338
2 3.5 7.5 0.46666667 2.4 7.7 0.31168831

Tabla 4. Cromatograma bidimensional problema desarrollado en las 2 fases móviles.

No. De
Mancha Rf creciente en la primera fase móvil Rf creciente en 2da fase móvil
1 0.46 0.2987
2 0.48 0.3766

Tabla 5.Cromatograma bidimenciona problema (IV) desarrollado en las 2 fases móviles.

Discusión: Como se puede observar en identificados en su mayoría en el
la tabla 3, en la mezcla de aminoácidos, cromatograma bidimensional. Los únicos
si se pudieron identificar a la mayoría de aminoácidos que no aparecieron fueron
los aminoácidos, con excepción de la His, Thr, Pro y Tyr, a que se utilizó la
Histidina, Triptófano, Prolina y Tirosina. misma micropipeta y la misma punta,
haciendo que haya manchas que no
En la primera fase móvil, que es
estén separadas haciendo más difícil
cloroformo-metanol-amoníaco (2:2:1),
medir la elución.
tenemos un compuesto no polar que es
el cloroformo, y 2 compuestos polares en Preguntas:
menor concentración. Y en la segunda
1.-Investigar los aminoácidos en la
fase butanol-ácido acético y agua, que
literatura del fruto utilizado
todos son compuestos polares. De los
aminoácidos no encontrados el que R= La manzana tiene en su mayor parte
debío tener un Rf mayor era la Tirosina ácido aspártico y ácido glutamato, que
por su grupo hidroxilo que le confiere son aminoácidos ácidos.
cierta polaridad. Ya que el triptófano no
es polar ni la prolina, y la histidina es un 2.-Escriba la reacción de la Ninhidrina
aminoácido básico que en medio ácido
es retenido con más facilidad.
El aminoácido que mas corrió en la 2da
fase móvil es el glutamato, que es ácido, Aminoácido
y debido al ácido acético, este corrió más
fácil con un Rf de 0.33, y en segundo
lugar, está un aminoácido no identificado,
pero se sospecha que es Tirosina por su
grupo hidroxilo. Con un Rf de 0.30. Ninhidrina
Azul de Ruhemann
Por lo que viendo los Rf´s de la 2da fase
móvil en las 2 manchas del problema
(IV), (que son de 0.29 y 0.37), se
sospecha de la presencia de Glutamato y 3-Indique las fuentes de error de la
Tirosina en la manzana, aunque no se técnica.
puede afirmar esto ya que los Rf´s de la
1ra fase móvil (0.46 y 0.49) no coinciden Concentración inadecuada: Si la
con los mostrados en el cromatograma concentración es muy alta o muy baja, la
tipo de la primera fase móvil (0.87 y 0.93 elución se puede ver desfavorecida o
respectivamente), aunque hay una puede que no se note la elución.
coincidencia en el intervalo que separa al
Aplicar muestra con material
Rf tipo y al Rf del problema 4.
contaminado: Se pueden ver trazas de
Conclusión: contaminación y depndiendo su
concentración pueden aparecer 2
-Se pudieron separar 2 aminoácidos del manchas que se pueden interponer
jugo de frutos, aunque no se pudieron haciendo más difícil medir el Rf.
identificar.
-Los Rf´s unidimensionaes de la 1ra fase
móvil y 2da fase móvil, fueron