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CUADERNO DE INMUNOLOGÍA

PRÁCTICA N°1: FAGOCITOSIS

I. FAGOCITOSIS IN VITRO

Se añadió 2cc de cultivo de Candida Albicans a tubo que


contenía 5ml de sangre fresca con anticoagulante. Se
dejó incubar durante 30 minutos a 37°C. Posteriormente
se centrifugó.
Con una pipeta Pasteur se retiró la capa leucocitaria de la
interfase del plasma. Se observó al microscopio utilizando
dos coloraciones: Rojo Congo y Wright.

ROJO CONGO: Es una sal de sodio, soluble en agua,


conformando una solución roja coloidal; su solubilidad es
mucho mejor en solventes orgánicos como el etanol. En
bioquímica e histología, el rojo congo se usa para teñir
preparaciones microscópicas, especialmente en tinciones
para el citoplasma y los eritrocitos..

COLORACIÓN WRIGHT: La tinción Wright está compuesta por azul de metileno y


eosina. Las estructuras con carácter ácido tales como los ácidos nucleicos o las
proteínas ácidas son afines por compuestos básicos como lo es el azul de metileno
contenido en la tinción. Por el contrario las estructuras de carácter básico tales
como la hemoglobina y otras proteínas básicas son afines a compuestos ácidos
tales como la eosina contenida en la tinción por lo que a la vista estas estructuras
tendrán un color rojo-rosado.

RESULTADOS

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Se observó la fagocitosis, debido a que la sangre posee células fagociticas. Entre


ellas se encuentran los leucocitos polimorfonucleares (granulocitos) y monocitos
fagocíticos(macrófagos). Se observan fagosomas dentro del macrófago que están
fagocitando a Candida Albicans.

II. FAGOCITOSIS IN VIVO

Se inoculo 0.5 cc de Candida Albicans vía intraperitoneal a pericote. A las 24 horas


se autopsió al pericote y se hizó improntas de hígado, corazón y liquido peritoneal.
Se utilizó colorante Wright.

RESULTADOS

Se observó la fagocitosis, debido a que la sangre del roedor posee células


fagociticas. Entre ellas se encuentran los leucocitos polimorfonucleares
(granulocitos) y monocitos fagocíticos(macrófagos). Se observan fagosomas dentro
del macrófago que están fagocitando a Candida Albicans.
Es importante resaltar que la fagocitosis tiene varias etapas diferenciadas:
1. Se incrementa el consumo de O2 y liberación de H2O2
2. Se incrementa la glucolisis
3. Se da la rotura de lisosomas y sus enzimas son vertidas en vacuolas fagocíticas
para formar fagolisosoma
4. Se da la fusión con los gránulos
5. Se da la muerte y digestión de la bacteria
6. Finalmente se liberan los productos de degradación.

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PRÁCTICA N°2: REACCIONES ANTÍGENO-ANTICUERPO


I. EXPERIMENTO N°1- REACCIÓN DE PRECIPITACIÓN

FUNDAMENTO
La reacción de precipitación ocurre cuando un anticuerpo IgG divalente reacciona
con un antígeno polivalente soluble. La precipitación es el resultado de la
formación de grandes complejos insolubles de moléculas interconectadas de
antígeno y anticuerpo.

Al darse la reacción de precipitación


observamos bandas, que son zonas ópticas de
equivalencia entre el antígeno y el anticuerpo.

RESULTADOS

- En el suero problema se observó la


ausencia del precipitado. Esto indica la
ausencia de la proteína C reactiva; esto
quiere decir que el paciente no presenta
ningún tipo de proceso inflamatorio, ya
que la proteína C solo está presente en
este tipo de procesos. El suero negativo se
produce por ausencia de anticuerpos en el
suero del paciente, por lo que el antígeno
no tiene anticuerpo específico para
reaccionar, por lo que no se da la
formación de precipitado.
- En el caso de la muestra brindada por el
laboratorio de microbiología, se
observaron la presencia de bandas, lo que
indica la presencia de proteína C reactiva.
En este caso el paciente se encuentra en el
estadio inicial de un proceso inflamatorio.
Estas bandas se producen debido a la
reacción de los anticuerpos del paciente
con el antígeno específico.

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II. EXPERIMENTO N°2- REACCIÓN DE AGLUTINACIÓN BACTERIANA

La aglutinación es un fenómeno inmunológico producto de una reacción antígeno


anticuerpo en el que uno de los reactantes, el antígeno, es de naturaleza
particulada de tamaño grande, que no le permite formar suspensiones coloidales o
soluciones en medios acuosos (antígeno insoluble). Estas partículas pueden ser
bacterias, eritrocitos, etc.

FUNDAMENTO-PRUEBA DE WIDAL

La reacción de Widal es un test basado en el principio de aglutinación antígeno-


anticuerpo, donde se determina la presencia de anticuerpos contra el antígeno O y
H de la Salmonella typhi para el serodiagnóstico de fiebre tifoidea, sin embargo
debido a su falta de especificidad, debe ser interpretado en el contexto clínico del
paciente. Para considerar el diagnóstico de fiebre tifoidea con un título Anti-O y
Anti-H aislado, se debe conocer su prevalencia en una determinada comunidad, en
términos generales, se acepta títulos anti-O y anti-H ≥1: 160-200 y ≥1: 50-100 en
zonas endémicas y no endémicas, respectivamente. Pero esta lectura se da cuando
se realiza la prueba cuantitativa.

En este caso se realizó la prueba cualitativa, en donde solo se observa la


aglutinación como indicador.

REACTIVOS:
Son antígenos febriles, se utiliza
frecuentemente en el diagnóstico
de la fiebre tifoidea y de otras
fiebres intestinales asociadas al
género Salmonella.
- Tífico O: Antígeno somático
- Tífico H: Antígeno flagelar
- Paratífico A
- Paratífico B

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RESULTADOS

No se observó aglutinación con ninguno de los reactivos. Esto significa que el suero
del paciente no presenta los anticuerpos específicos para estos antígenos. Por lo
que no presenta fiebre tifoidea.

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PRÁCTICA N°3: HEMOAGLUTINACIÓN DETERMINADA-


GRUPO SANGUÍNEO
El sistema ABO está compuesto por los antígenos y sus correspondientes anticuerpos.
Opuesto a lo que sucede en otros sistemas, como por ejemplo el Rh, en este sistema la
presencia de anticuerpos naturales contra los antígenos A y B en personas que nos expresan
estos antígenos cusa reacciones adversas, ocasionalmente fatales, luego de la primera
transfusión de sangre incompatible. Es por esta razón la importancia de realizar las pruebas de
sangre

FUNDAMENTOS Y RESULTADOS

Se basa en la técnica de aglutinación, en la que el antígeno reaccionará con el anticuerpo


específico, y se producirá la aglutinación.

Para esto se utilizan reactivos comerciales que contienen anticuerpos específicos para cada
antígeno, que se mezclan con la sangre. Después de mezclar una gota de reactivo con una
gota de sangre, se observará la presencia de hemoaglutinación, si la prueba es positiva, para
ese tipo de sangre.

- Grupo A: Las personas de sangre Grupo A presentan antígenos A. Si a esta


sangre le añadimos el reactivo Anti-A, se observará la hemoaglutinación; lo que
significa que el resultado fue positivo. Si le añadimos reactivo Anti-B, no se
observará la hemoaglutinación, ya que no se dará la reacción.
- Grupo B: Las personas de sangre Grupo B presentan antígenos B. Si a esta
sangre le añadimos el reactivo Anti-B, se observará la hemoaglutinación; lo que

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significa que el resultado fue positivo. Si le añadimos reactivo Anti-A, no se


observará la hemoaglutinación, ya que no se dará la reacción.
- Grupo AB: Las personas de sangre Grupo AB presentan antígenos A y B. Si a
esta sangre le añadimos el reactivo Anti-A, se observará la hemoaglutinación;
lo que significa que el resultado fue positivo. Si le añadimos reactivo Anti-B, se
observará la hemoaglutinación, ya que se dará la reacción.
- Grupo O: Las personas de sangre Grupo O no presentan antígenos. Si a esta
sangre le añadimos el reactivo Anti-A, no se observará la hemoaglutinación. Si
le añadimos reactivo Anti-B, no se observará la hemoaglutinación, ya que no se
dará la reacción.

En el caso del sistema Rh, las personas Rh positivos tienen una proteína D en su membrana
eritrocitaria; que al usar el reactivo Anti-D, provocará una aglutinación, en este caso la
persona será Rh positivo.

En nuestros resultados encontramos que las tres personas a las que se le tomó la muestra,
son del Grupo O; porque no se observó la aglutinación y son Rh positivos, debido a que se dio
la aglutinación.

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PRÁCTICA N°4: PODER BACTERICIDA DEL SUERO


El suero normal contiene sustancias capaces de destruir microorganismos. Se sabe que esta
capacidad se debe a la presencia de anticuerpos normales y el complemento. Este
complemento es activado por sustancias extrañas, microorganismos o células tumorales.

Es importante recordar los efectos del complemento:

- Lisis de células: bacterias y células tumorales


- Producción de mediadores que participan en inflamación y atracción de fagocitos
- Consolidación de microorganismos y complejos inmunitarios para su eliminación por
fagocitosis.
- Incremento de respuesta inmunitaria por anticuerpos.

FUNDAMENTO Y RESULTADOS

Se realizó la dilución de la siguiente forma, que contiene suero a 56°C, suero a 37°C , solución
y cultivo de caldo Escherichia Coli. Después de llevar a baño a maría; se vertió el contenido en
placas Petri, después se añadió el agar nutritivo y finalmente se dejó incubar por 48 horas.

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Se obtuvo como resultados:

- Concentración A: Se observó un mayor crecimiento de colonias en el tubo donde el


suero fue sometido a 56°C, a comparación del suero a temperatura ambiente. Esto se
debe a que a 56°C el complemento ha sido destruido, por lo que el suero deja de tener
poder bactericida.
- Concentración B: Se observó un mayor crecimiento de colonias en el tubo donde el
suero fue sometido a 56°C, a comparación del suero a temperatura ambiente. Sin
embargo en comparación con la concentración A, se obtuvo un menor crecimiento de
colonias; ya que hay mayor cantidad de suero.
- Concentración C: Se observó un mayor crecimiento de colonias en el tubo donde el
suero fue sometido a 56°C, a comparación del suero a temperatura ambiente. Sin
embargo en comparación con la concentración B, se obtuvo un menor crecimiento de
colonias; ya que hay mayor cantidad de suero.

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PRÁCTICA N°5: PRUEBA DE FIJACIÓN DE COMPLEMENTO


Medida indirecta del Ac que no dan reacciones visibles. Se basan en que la unión Ag-Ac y
formación del inmunocomplejo activa el complemento y produce complejos que lesionan
membranas celulares (eritrocitos y otras células). Exige que todos los reactivos estén bien
cuantificados y usar controles de cada uno.

FUNDAMENTO Y RESULTADOS

Para esta prueba se emplean 2 sistemas:

- Primer sistema: Suero problema (anticuerpos),


Antígeno específico, Complemento
- Segundo sistema o indicador: Eritrocitos y Hemolisina

Si al añadir el segundo sistema, se observa la Hemolisis,


significa que el complemento no se fijó en la primera reacción;
y que el complemento libre fue utilizado para la acción
hemolítica. En términos de importancia para el paciente
significa que este no presenta los anticuerpos específicos para
el antígeno.

Si al añadir el sistema indicador, no se observa la hemolisis,


significa que el complemento se fijó en la primera reacción,
por lo que se observa la formación de un botón en la
profundidad del tubo de ensayo. En términos de importancia
para el paciente significa que este presenta los anticuerpos
específicos para los antígenos, por lo que se infiere que el
paciente puede estar cursando la infección o puede haber sido expuesto con anterioridad al
antígeno.

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PRÁCTICA N°6: TEST DE ANTIESTREPTOLISINA “O” (ASO)


El examen por antiestreptolisinas O se basa en la capacidad de estos anticuerpos en el suero
del paciente, usado en distintas diluciones, para neutralizar una preparación estandarizada de
estreptolisina O, impidiendo su actividad hemolítica. Por la frecuencia de infecciones
estreptocócicas se encuentran títulos bajos de Antiestreptolisina O en casi todos los
individuos. Se considera títulos normales de Antiestreptolisina O de 40 a 160 unidades Todd.

FUNDAMENTO Y RESULTADOS

La bacteria Streptococcus del Grupo A, se caracteriza porque sintetiza 2 factores hemolíticos


“O” y “S”. Cuando ocurre una infección por Estreptococos la estreptolisina “O” estimula el
desarrollo de anticuerpo especifico.

En el caso de un paciente sano, en algún momento de su vida ha estado en contacto con el


Streptococcus del Grupo A, por lo que ha producido anticuerpos específicos; estos quedan en
la memoria. Entonces en una titulación normal, el suero del paciente presentará los
anticuerpos (Antiestreptolisina O) necesarios que neutralizaran al antígeno (citotoxina), por lo
que los eritrocitos que actúan como indicador, sedimentaron y formaron un botón. Esta
neutralización se da en los 3 primeros tubos (1/40, 1/80, 1/160), debido a que el antígeno se
encuentra en menor o igual cantidad que el anticuerpo. En los tubos restantes se observó la
hemolisis, y a que la cantidad de antígeno es mayor a la cantidad de anticuerpo, por lo que la
citotoxina provocó la lisis de eritrocitos.

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En el caso de un paciente que presenta la infección, aumentará la producción de anticuerpos;


por lo que se producirá la neutralización en los tubos a partir de 1/320; dependiendo del
estado del paciente.

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PRÁCTICA N°7
I. EXPERIMENTO N°1- PRUEBA DE MANTOUX .HIPERSENSIBILIDAD
TARDÍA
Esta técnica es la recomendada por la
Organización Mundial de la Salud (OMS) y se
utiliza sistemáticamente en nuestro país desde
hace años.
Consiste en la inyección intradérmica, en la piel
de la cara anterior del antebrazo derecho, de 0.1
ml (5UI).
La reacción se lee a las 48-72 horas de efectuada
la inyección. La lectura se realiza palpando con un
dedo la induración producida. Una vez delimitada por el tacto, la pápula se mide
con una regla transparente en su diámetro transverso, es decir perpendicular al eje
longitudinal del antebrazo. La lectura se expresa en milímetros.

PPD
Derivado purificado de proteína. Es un examen selectivo estándar para la
tuberculina, un antígeno que causa la tuberculosis.

FUNDAMENTO:

Esta prueba puede mostrar si la persona ha sido infectada con las bacterias
causantes de tuberculosis. Si existen linfocitos sensibilizados al PPD , dan lugar a la
aparición de pápula y eritema en la zona inyectada.

Si el resultado es positivo, significa que las bacterias que causan la tuberculosis


están en el cuerpo del paciente; mas no significa que el paciente tenga la
enfermedad.

Si el resultado es negativo, puede significar que la persona no ha sido infectada con


las bacterias que causan la tuberculosis, o que se realizó la prueba antes de los tres
meses, que es el tiempo en el que el cuerpo reacciona tras haberse infectado con
las bacterias.

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II. EXPERIMENTO N°2-SENSIBILIDAD AL POLVO DE CASA

Esta prueba consiste en inyectar por vía intradérmica 0.1ml de solución de polvo
de casa en el antebrazo. Se observará la aparición de mácula y pápula a los 15, 30 y
60 minutos después.

FUNDAMENTO:

Una persona que ha desarrollado anticuerpos IgE para que reconozca uno o más
alérgenos, en este caso el polvo de casa, se dice que esta sensibilizado. Los
anticuerpos IgE específicos para el polvo de casa viajan por la sangre hasta los
tejidos en donde se colocan sobre unas células llamadas mastocitos. Los
mastocitos que se encuentran en forma abundante especialmente en el
revestimiento (ó mucosas) de la nariz, ojos, pulmones y tracto digestivo, se activan

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sólo cuando moléculas de alérgeno específico hacen contacto con anticuerpos IgE
unidos al mastocito.
Esto quiere decir que los mastocitos de un individuo que posee anticuerpos IgE en
su superficie para el antígeno de polvo de casa no serían activadas por exposición a
otro alérgeno.

Uno de los avances más importantes ha sido el reconocimiento que las reacciones
alérgicas producen inflamación de los tejidos en los cuales se llevan a cabo. Una
reacción alérgica desencadena una cascada de eventos, comenzando con la
liberación de mediadores de un mastocito activado. Estos entonces reclutan otras
células proinflamatorias del torrente sanguíneo para invadir áreas donde ellos con
otras células locales vecinas, liberan mediadores químicos adicionales, lo cual
incrementa la inflamación de los tejidos y órganos involucrados apareciendo los
síntomas que todos conocemos; como escurrimiento nasal en la rinitis alérgica,
aparición de ronchas en urticaria aguda, broncoespasmo o cierre de bronquios y
flemas en el asma, etc. Todo esto resulta de la inflamación persistente de los
tejidos debido a la exposición repetida a alérgenos.

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PRÁCTICA 8: SHOCK ANAFILÁCTICO


La Anafilaxia es el término acuñado para agrupar a un conjunto de signos y síntomas que
coinciden con lesiones producidas por la liberación sistémica súbita de mediadores químicos a
partir de mastocitos y basófilos. Es un síndrome clínico grave, súbito y adverso de etiología
variada, que se manifiesta por síntomas y signos aislados o combinados.

FISIOPATOLOGÍA Y MEDIADORES QUÍMICOS

Se origina tras la exposición a una proteína externa que estimula la generación de un


anticuerpo específico de clase Inmunoglobulina IgE. Estos anticuerpos se unen a los
mastocitos y basófilos, estimulando degranulación de estas células para la liberación masiva
de mediadores como la histamina, triptasa, quininas, factor de activación de plaquetas y
metabolismo del ácido araquidónico especialmente leucotrienos.

Estos mediadores químicos permiten instaurar el cuadro anafiláctico en cualquiera de sus


estados. La acción de la histamina sobre los receptores H1 exclusivamente, genera como
reacción clínica prurito, rinorrea, taquicardia y broncoespasmo, mientras que la acción de la
histamina sobre los receptores H1 y H2 en forma simultánea, genera cefalea, enrojecimiento
cutáneo (flushing) e hipotensión. Los niveles séricos de histamina durante el evento pueden
estar relacionados con la duración y severidad del mismo, pero no necesariamente con la
aparición o severidad de las reacciones urticariales.

La presentación biológica de los demás mediadores, incluyendo activadores vaso-endoteliales,


activadores plaquetarios y de la coagulación, metabolitos producidos durante el proceso de
activación de las vías del ácido araquidónico (lipooxigenasa y COX), mediadores pro
inflamatorios y antiinflamatorios inespecíficos, complementos C3 y C4, sistema quinina-
calicreína (activación de la cascada de la coagulación por vía extrínseca) y otros, son los
encargados de prolongar una respuesta de este tipo hasta convertirla en una agresión de las
características de la reacción inmunológica que termina en anafilaxia o en shock anafiláctico.

Para que se produzca la anafilaxis es necesario que el individuo haya estado expuesto al
antígeno antes y que haya sintetizado una gran cantidad de anticuerpos IgE específicos. En
una siguiente exposición puede producirse una reacción de hipersensibilidad inmediata.

AGENTES INVOLUCRADOS

Las causas más comunes que originan anafilaxia son

- Ingestión de alimentos: maní, nueces, pescado, mariscos, leche, huevo de gallina,


semillas y kiwi

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- Medicamentos: ciprofloxacina, citarabina, ranitidina, inhibidores de la bomba de


protones, gammaglobulina intravenosa, quimioterapéuticos, relajantes musculares y
anestésicos.
- Picaduras de insectos
- inmunoterapia subcutánea
- Inducida por ejercicio: ocurre durante o después de realizar la actividad física

MANIFESTACIONES CLÍNICAS

Los signos y síntomas de la anafilaxia se manifiestan de segundos a horas después del


contacto con el alérgeno. La mayor parte de las reacciones ocurren en la primera hora. En
general, mientras más tiempo tarden en aparecer los síntomas, la reacción tiende a ser
menos grave.

RESULTADOS ESPERADOS

Se aplicará al cobayo 1ml de albumina de huevo por vía intraperitoneal ; pasados de 10 a 20


días se aplicará 1ml de albumina de huevo por vía intracardiaca.

Se espera que el cobayo a los pocos minutos de aplicada la dosis de 1ml de albumina de
huevo por vía intracardiaca, que es la dosis desencadenante, empiece a estornudar, toser;
puede incluso presentar convulsiones y en su grado más grave, puede ocasionarle la muerte.

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Esto se debe a que el cobayo fue expuesto con anterioridad a una proteína externa, en este
caso la albumina de huevo, provocando la producción de inmunoglobulinas IgE. Al exponerle
por segunda vez a esta proteína externa, se produce la liberación de mediadores químicos
que provocará el shock anafiláctico.

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