PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

Bucheli Cesar (216165024),Canchala Elized

(216165030),Cuaran Yulien (216165049),Ruano
Jhonatan (216165105)
UNIVERSIDAD DE NARIÑO, Facultad de ingeniería
Agroindustrial, semestre IV
(cesabucheli123@hotmail.com), (lisethalejita98@outlook.es), (yulien9729@gmail.com), ()
________________________________________________________________________________
RESUMEN: se realizó un medio de cultivo el cual es una técnica de laboratorio que nos
permite dar las condiciones óptimas para la identificación y crecimiento de los
microorganismos, a traves del cual podremos observar el desarrollo de estos, el autoclave
fue utilizado para esterilizar las muestras de los cultivos evitando así que queden residuos
que puedan contaminar la muestra, en nuestro caso se utilizó un medio de cultivo como el
SIM el cual se encontraba un estado físico semisólido y su origen es sintético, lo cual nos
permite obtener resultados reproducibles, se empleó como elemento solidificante, el AGAR
ya que cumple con el requerimiento del cultivo, el medio de trabajo en el cual realizamos el
cultivo fue esterilizado con alcohol para evitar la contaminación de la muestra.

PALABRAS CLAVES: Microorganismo, Cultivo, Esterilización, Sintético, Agar

_________________________________________________________________________

INTRODUCCIÓN Cabe destacar que los microorganismos

Para el análisis de los microorganismos
es indispensable contar entre otras cosas
con material y medios de cultivo estériles,
en microbiología la esterilización se
define como el proceso mediante el cual
se eliminan todos los microorganismos
(incluyendo formas de resistencia) de un
objeto, medio o superficie y su uso
garantiza la ausencia de microorganismos
en material de medios de cultivo a ser
empleados.
Existen diversos métodos de
esterilización como son: calor, filtración,
radiación y aplicación de gas de óxido de
etileno. Un medio de cultivo está
compuesto por una mezcla de agua y
sustancias orgánicas e inorgánicas, los
que en conjunto proporcionan los
requerimientos nutricionales para el
desarrollo de microorganismo.
no se pueden estudiar como individuos,
sino que es necesario utilizarlos como
poblaciones; para ello es necesario
cultivarlos, es decir favorecer su
multiplicación en Vitro en ambientes
especiales, en esta práctica se trabajó con
el medio de cultivo SIM el cual es
semisólido destinado a verificar la
movilidad, producción de indol y de
sulfuro de hidrógeno en un mismo tubo.
Es útil para diferenciar miembros de la
familia Enterobacteriaceae.1
El agar es el agente solidificante y esta
contracción le otorga al medio la
propiedad de ser semisólido, condición
necesaria para detectar movilidad, que se
1
www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/Seminari
oMedios.htm
evidencia por el enturbiamiento del medio los tubos se agregó 1mm de la muestra, a
o por crecimiento que difunde más allá de continuación se llevaron los tubos de
la línea de siembra del microorganismo ensayo a la autoclave y se mantuvo en un
en estudio.2 temperatura de 121° en un tiempo
aproximadamente 30 minutos, con el fin
OBJETIVOS de que la muestra quede totalmente
estéril, se dejó en una temperatura
Objetivo General ambiente de 10 minutos, se llevó a su
 Conocer los medios de cultivo y almacenamiento en refrigerador en
técnicas de sembrado, para saber tiempo aproximado observar el resultado.
la estructura de las bacterias, cuál
es su reacción ante un ambiente RESULTADOS
adecuado para su reproducción.
MEDIO DE CULTIVO: SIM
Objetivos Específicos: CANTIDAD PREPARADA: 100mm
 Aprender los métodos de CANTIDAD PESADA: 3gr
preparación para la manipulación 30∗100
CÁLCULOS: 𝑥 = 1000 = 3gr
de medios de cultivo,
reconociendo la importancia del ASPECTO DEL MEDIO DE
trabajo en condiciones de CULTIVO Y COMPOSICIÓN:
esterilidad y almacenamiento.  Color amarillo
 Observar el tipo de  Consistencia semisólida
microorganismos que se van a  Peptone de caseína, Peptone de
desarrollar en el medio de cultivo metano
(tipo de composición )
METODOLOGIA ESTADO FÍSICO: Semisólido

El medio de cultivo el cual utilizamos fue  TIPO DE MEDIO DE

SIM, se realizaron los cálculos CULTIVO
pertinentes (Regla de Tres) para saber
exactamente qué cantidad utilizar, se  Según la naturaleza de los
tomó una cantidad de agua destilada de ingredientes: Sintéticos
10mm, la cantidad pesada fue de 3gr,  Según el propósito de uso:
agregamos el SIM en los 10 mm de agua Enriquecimiento
para disolverlo y posteriormente lo
llevamos a calentar en la estufa con  DISTRIBUCIÓN: Tubos
mucho cuidado para que se logre disolver
completamente, luego se procedió a
distribuir la muestra en los 9 tubos de  CONDICIONES DE
ensayo ya esterilizados de la misma ESTERILIZACIÓN: 121° auto
forma la mesa de trabajo, en cada uno de clave por 15 a 20 minutos
 ALMACENAMIENTO:
2
www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp4.pdf Refrigerador

DISCUSION
1). Informe Práctica de laboratorio
Universidad Nacional Abierta y a
Distancia
Escuela de ciencias agrarias Mayo 2015
Medio de cultivo: SIM (semisólido)
TIPO DE MEDIO DE CULTIVO
 Según la naturaleza de los
ingredientes: Sintéticos
 Según el propósito de uso:
Enriquecimiento
DISTRIBUCIÓN: Tubos
CONDICIONES DE
ESTERILIZACIÓN: 121° auto clave
por 15 a 20 minutos
ALMACENAMIENTO: Refrigerador
SIEMBRA
A partir de un cultivo de 18-24 horas en
medio sólido, sembrar por punción
profundo con aguja de inoculación recta
(no usar ansa con anillo).Se debe
inocular el centro del tubo, y la punción
debe abarcar 2 tercios de profundidad
del medio de cultivo desde la superficie.
Es importante que la siembra se realice
en línea recta.
INCUBACION
Durante 24 horas, a 35-37°C en aerobios.
Luego de incubcion, agregar 3-5 gotas de
reactivo de Kovac´s o de Erlich.
RESULTADOS
Cepas móviles: producen turbidez del
medio, que se extiende más allá de la
línea de siembra
Cepas inmóviles: el crecimiento se
observa solamente en la línea de siembra.
Cepas SH2 POSITIVAS:
Ennegrecimiento a lo largo de la linea de
siembra en todo el medio.
CEPAS SH2 NEGTIVAS: el medio
permanece sin cambio de color.
CEPAS INDOL POSITIVAS:
desarrollo de color rojo luego de agregar
el reactivo de Kovac´s o de Erlich.
CEPAS INDOL NEGATIVAS: sin
cambio de color.
Fig.1 tomada de :
https://es.slideshare.net/marcianita624/informe-
final-prctica-microbiologa-v20
26503067?next_slideshow=1https://es.slideshare.net/toizinh
ocarlos/esterilizacion-26503067?next_slideshow=1
Como se puede observar las condiciones
son muy idénticas a las cuales s e trabajo
en la práctica de laboratorio de la
Universidad de Nariño por ende se podrá
inferir los distintos resultados tenga un
análisis similar, en tanto a los resultados.
2). TECNOLOGIA EDUCATIVA VIRTUAL
MEDIO SIM:
 Este medio se utiliza para
comprobar la motilidad, la
formación de H2S y la producción
de indol por parte de la bacteria.
 Prueba: Aminoácidos, enzimas y
proteínas.
  Determinar si la bacteria a través
de Triptofanasas puede degradar
el Triptófano a indol.
 Determinar si hay producción de
H2S a partir de aminoácidos
azufrados• 3. Determinar si la
bacteria es móvil.
PREPARACIÓN: Medir 100ml de agua
destilada en un matraz Erlenmeyer y
agregar 3g del medio. Tapar el matraz con
algodón envuelto en gasa y dejar reposar
de 10 a 15min.Calentar agitando hasta su
punto de ebullición y dejar enfriar.
Distribuir 4ml del medio en un tubo de
ensayo esterilizar en autoclave a 121°
durante 15minutos.Dejar que el medio se
solidifique en posición vertical.
SIEMBRA: A partir de un cultivo de 18
a 24 horas en medio sólido, sembrar por
punción profunda con aguja de
inoculación recta (no usar ansa con
anillo). Se incuba en un periodo de 24
horas a una temperatura de 37°.Luego de
la incubación, agregar 3-5 gotas de
reactivo de Kovac´s o de Erlich.
Para la demostración del indol se usa el
reactivo de Kovacs. Las cepas indol
positivas: desarrollan un color rojo luego
de agregar el reactivo de Kovac´s o de
Erlich. Las cepas indol negativas no
tienencambio de color.
Microorganismo Movilidad Indol
Producción de ácido sulfhídricoE. Coli.
RESULTADOS
Fig.2 tomada de :
https://es.slideshare.net/ThelmaCorrea/preparacion-de-
medios-de-cultivo-para-bioqumicas
https://es.slideshare.net/ThelmaCorrea/preparacion-de-
medios-de-cultivo-para-bioqumicas
final-prctica-microbiologa-v20
26503067?next_slideshow=1https://es.slideshare.net/toizinh
ocarlos/esterilizacion-26503067?next_slideshow=1
Fig.23tomada de :
https://es.slideshare.net/ThelmaCorrea/preparacion-de-
medios-de-cultivo-para-bioqumicas
CARACTERISTICAS DE
ENTEROBACTERIA
https://es.slideshare.net/ThelmaCorrea/preparacion-de-
medios-de-cultivo-para-bioqumicas
 Son bacterias gram negativas, la
final-prctica-microbiologa-v20
mayoría bacilos, otros cocobacilos y
otros pleomórficos.
26503067?next_slideshow=1https://es.slideshare.net/toizinh
 No son exigentes, son de fácil cultivo.
ocarlos/esterilizacion-26503067?next_slideshow=1
 Son oxidasa negativo
(excepto Plesiomonas, que es oxidasa
positivo), es decir, carecen de la
enzima citocromo oxidasa.3
PREPARACION DE MEDIOS DE
CULTIVO
En la actualidad, la mayoría de los
medios de cultivo se encuentran
comercializados; normalmente bajo la
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Pro
tocolo2_3_19088.pdf
forma de liofilizados a los que es preciso cambio en las concentraciones de sus
rehidratar. En estos casos la preparación componentes es preferible conservarlos
del medio de cultivo se reduce a 4ºC.
sencillamente a pesar la cantidad
deseada del mismo y disolverla en agua
destilada siguiendo las instrucciones del
fabricante. Las sustancias termolábiles,
se esterilizan por filtración y se añaden
al resto de los componentes después de
que estos hayan sido previamente
esterilizados en el autoclave y enfriados
a temperatura ambiente ó a 40-50ºC si
se trata de medios con agar. Antes de su
esterilización los medios líquidos se
reparten en los recipientes adecuados
(tubos, matraces, etc.). Si es un medio
sólido y se ha de distribuir en tubos ó en
matraces será necesario fundir el agar en
baño Maria u horno microondas, una vez
fundido y homogenizado, se distribuye
en caliente a los tubos ó matraces (no en
placas Petri) se tapa y se esteriliza en el
autoclave. Una vez finalizada la
esterilización los medios se dejaran
enfriar a temperatura ambiente y en el
caso de medios sólidos contenidos en
tubos deberán, en su caso, inclinarse
para que al solidificarse adopten la Fig.2 tomada de :
forma de agar inclinado ó pico de http://www.ugr.es/~cjl/medios%20de%20cultivo.pdf
flauta(slant) si tal es su finalidad. 5 Las
placas de Petri se preparan vertiendo el
medio fundido y estéril dentro de ellas y PREGUNTAS
en un ambiente aséptico (por ejemplo https://es.slideshare.net/ThelmaCorrea/preparacion-de-
en la proximidad de la llama de un medios-de-cultivo-para-bioqumicas
mechero Bunsen) es conveniente 1.) Que ventajas ofrecen los medios sólidos
final-prctica-microbiologa-v20
homogenizar el medio en el transcurso para el cultivo de microorganismos?
de la operación para evitar que el agar 26503067?next_slideshow=1https://es.slideshare.net/toizinh
ocarlos/esterilizacion-26503067?next_slideshow=1
En los medios de cultivo sólidos y de
sedimente en el fondo del recipiente y
no se distribuya por igual en todas las cultivos líquidos en ambos medios debe haber
placas. También es posible conservar el una buena cantidad de nutrientes que faciliten
medio destinado a preparar placas Petri el crecimiento bacteriano, la diferencia
solidificado y estéril en tubos que se radica en la presencia de una sustancia
fundirán al baño Maria en el momento llamada agar y que es la sustancia de darle
de la preparación de las mismas. Los solides y consistencia al medio; la ventaja del
caldos y medios sólidos pueden medio solido radica en que permite detectar
conservarse, una vez esterilizados, a los diferentes tipos de bacterias que pueden
temperatura ambiente pero para reducir encontrase en una sola muestra.
su deshidratación y el consiguiente
 ejemplo materiales plásticos, y las
radiaciones no ionizantes, como la
luz ultravioleta, puede ser empleada
en el control de áreas cerradas.
Produce importantes modificaciones
químicas y muy pequeño incremento
de temperatura.
La radiación ionizante destruye todo
tipo de microorganismos en
materiales solidos o líquidos; no
genera calor, motivo por el que es
Fig.3 tomada de : ampliamente usado en la industria de
https://es.slideshare.net/arlethnohelia/medios-de-cultivo- medicamentos sensibles al calor,
29095759
equipos de laboratorio y en la
industria de cosméticos.
2) Explique tres tipos de esterilización
Efecto letal:
utilizados en la preparación de medio de Directo: principalmente por
cultivo.
https://es.slideshare.net/ThelmaCorrea/preparacion-de- alteración del ADN (hasta cierto
medios-de-cultivo-para-bioqumicas punto reversible)
Los métodos de esterilización se clasifican de
final-prctica-microbiologa-v20
acuerdo al tipo de agente
que actúa como son: Indirecto: por generación de
radicales libres y peróxidos por la
26503067?next_slideshow=1https://es.slideshare.net/toizinh
 Agentes Físicos
ocarlos/esterilizacion-26503067?next_slideshow=1
interacción de la radiación
con el agua.
CALOR: húmedo, seco
Microorganismo más resistente:
RADIACIONES Deinococcus radiodurans.
Dosis usuales (2 a 25 kGy) no
 Agentes Mecánicos destruyen endotoxinas
FILTRACION VENTAJAS:
 Agentes químicos  Escaso daño al material
GASEOSOS  Gran efectividad
 Procedimiento fácil de
NO GASEOSOS controlar: dosis de
irradiación (tiempo de
De los cuales se explicarán como ejemplo
exposición)
uno de cada tipo de agente.
 Proceso continuo
 Agentes Físicos
DESVENTAJAS:
RADIACIONES: también llamadas Requiere instalación compleja por lo que es
emisión y propagación de la energía a solo aplicable a gran escala y no está
través de un medio, puede ser disponible en todos lados.
utilizada como agente para la
eliminación de microorganismos. Las La emisión de una fuente de radiación
radiaciones ionizantes se pueden gamma no se puede interrumpir.
utilizar para la esterilización de La esterilización por rayos gamma es un
materiales termolábiles, como por proceso validado para destruir ,inactivar o
reducir microorganismos para mantener la
seguridad.
El proceso de esterilización solo toma un par
de horas para pasar los rayos gamma a través
de los dispositivos médicos (ya empacados)
tales como instrumentos quirúrgicos,
implantes, equipos de diagnóstico, caracteres
y otros sistemas de infusión.
Esterilización con cámaras de irradiación
La fuente de irradiación esta basada en
coblato-6º encapsulado en pequeños cilindros
de acero inoxidable, que a su vez se
introducen en una vaina o lápiz también de
acero inoxidable.
La radiación atraviesa el encapsulado para
incidir en el material que se va irradiar en la
cámara.
Cuanto el irradiador no está en
funcionamiento, la fuente permanece
sumergida en una piscina con agua
desmineralizada, que sirve de blindaje para
evitar exposición a la radiación.
Fig.4 tomada de :
https://es.slideshare.net/toizinhocarlos/esterilizacio
n-
26503067?next_slideshow=1https://es.slideshare.n
et/toizinhocarlos/esterilizacion-
26503067?next_slideshow=1
Esterilización con irradiador gamma en
inmersión
Este también utiliza una fuente basada en
cobalto -60.A diferencia del irradiador con
cámara de irradiación blindada, dicha fuente
permanece en el fondo de la piscina con agua.
El producto a irradiarse se deposita dentro de
contenedores herméticos que se introducen
hasta el fondo de esta piscina, junto a la
fuente.
Los contenedores simplemente descienden, el
producto se irradia y suben de regreso por
medio de un mecanismo elevador.
 Agentes Mecánicos
FILTRACION
La filtración permite la remoción de todos los
microorganismos presentes en un líquido o un
gas reteniéndolos sobre la superficie de un
material.
La esterilización por filtración se emplea para
materiales sensibles al calor, tales como
ciertos medios de cultivo, azúcares,
soluciones de antibióticos y otros
medicamentos, etc.
Hay varios tipos de filtros, entre ellos los que
más se usan son los filtros de profundidad y
los filtros de superficie o filtros de
membrana.
 Filtros De Profundidad
Estos filtros están elaborados por un
material fibroso (papel, asbesto o
fibra de vidrio) dispuesto al azar, de
manera que dentro de la estructura
del filtro se crean vías tortuosas
donde pueden quedar retenidos la
mayoría de los contaminantes
presentes.
Entre sus ventajas se encuentran su
alta capacidad de retención de
partículas sobre su superficie y a
través de toda su estructura y que
permiten filtrar grandes volúmenes.
Sin embargo, tienen como
desventajas que no presentan un
tamaño de poro uniforme y existe la
posibilidad de liberación, hacia el
 material filtrado, de partículas y vacío de la cámara se registran en una
microorganismos que hayan crecido impresora incorporada y pueden controlarse
dentro del filtro. Dadas sus en todo momento. Al inicio de la
características los filtros de esterilización el operador programa el ciclo
profundidad se usan principalmente adecuado.
como pre filtros, ya que permiten
eliminar las partículas grandes pero
no la eliminación total de los
microorganismos.

Fig.6 tomada de :
http://www.scfarmclin.org/docs/higiene/part6/643.pdfn-
Fig.5 tomada de : 26503067?next_slideshow=1https://es.slideshare.net/toiz
https://es.slideshare.net/toizinhocarlos/esterilizacio inhocarlos/esterilizacion-26503067?next_slideshow=1
n-

 Agentes químicos
26503067?next_slideshow=1https://es.slideshare.n
et/toizinhocarlos/esterilizacion-
26503067?next_slideshow=1
GASEOSOS
Esterilización por óxido de etileno (OE)
Restringido a la esterilización de material
termosensible (no resiste temperaturas >60º)
que no puede esterilizarse por otro
procedimiento. Indicado para la esterilización
de materiales de plástico, polietileno,
catéteres y sondas reutilizables, endoscopios
rígidos termosensibles, sistemas ópticos,
cables de luz de endoscopios y motores (TUPREGUNTAA)
neumáticos termosensibles. Su alta capacidad
de difusión facilita la esterilización del
material con lumen largo y estrecho. CONCLUSIONES
• Los ciclos de esterilización son largos.  Al esterilizar un medio de trabajo se
obtendrá un cultivo que nos permita
Ventajas: Útil para material termosensible,
visualizar mejor el desarrollo de las
buena capacidad de difusión y penetrabilidad,
bacterias.
inconvenientes, tóxico, requiere aireación del
 Determinar las condiciones
material una vez esterilizado.
necesarias para que el cultive nos
permita conocer, el comportamiento
de las bacterias mediante las
Esterilizadores/aireadores de gas de Óxido de diferentes tipos de cultivo.
Etileno. El ciclo de aireación se inicia de  (TU CONCLUSION)
forma automática después de la esterilización.
Los parámetros humedad, temperatura y
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L,)https://es.slideshare.net/marcian
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02/10/2017
6. (Sofia
Gutierres)http://www.ucv.ve/filead
min/user_upload/facultad_farmaci
a/catedraMicro/10_Esterilizaci%C
3%B3n_por_filtraci%C3%B3n.pd
f 02/10/2017
7. (Martha
Palres)http://www.scfarmclin.org/d
ocs/higiene/part6/643.pdf
02/10/2017
Fig.1 tomada de :
8.
https://es.slideshare.net/toizinhocarlos/esterilizacio
n-

26503067?next_slideshow=1https://es.slideshare.n
et/toizinhocarlos/esterilizacion-
26503067?next_slideshow=1