Enzact

Biocalculator ©. 2016.

¿QUÉ ES ENZACT BIOCALCULATOR?
Es una herramienta de uso libre que permite calcular los valores de actividad
enzimática. Actualente existe una gran confusión en este cálculo, ya que en la literatura
existen ecuaciones erroneas e interpretaciones equivocadas del concepto.
Para mayor explicación y conocer el fundamento teórico de está calculadora se
recomienda la lectura del siguiente artículo:
Baltierra-Trejo E, Márquez-Benavides L, Sánchez-Yáñez JM, Inconsistencies and ambiguities
in calculating enzyme activity: The case of laccase. Journal of Microbiological Methods,
2015, 119:126-131. http://dx.doi.org/10.1016/j.mimet.2015.10.007
Además el software que permite realizar operaciones para la preparación de
reactivos de experimentos químicos y bioquímicos y el análisis cuantitativo de los
resultados.
¿Quién lo puede usar?
Está dirigido a técnicos, investigadores y estudiantes que realizan investigación
experimental básica en el área biológica.
Este software permite calcular:
• Actividad enzimática y actividad enzimática específica.
• Preparación de soluciones buffer
• Preparación de soluciones molares
• Conversión de masa a mol
• Conversión de mol a masa

¿Quién lo desarrolló?
Este se desarrolló en 2016 en México, con un trabajo conjunto entre investigadores del
Laboratorio de Residuos Sólidos y uso Eficiente de Energía Instituto de Investigaciones
Agropecuarias y Forestales de la Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo e
investigadores del Instituto Tecnológico de Toluca.
Autores:

M.C. Eduardo Baltierra Trejo, Dra. María del Consuelo Mañon Salas, Dra. Liliana Márquez
Benavides, Dra. María del Consuelo Hdz. Berriel.

MANUAL
DE USUARIO
EnzBiocalculator

2






Enzact Biocalculator ©. 2016.
Baltierra-Trejo E.1, , Mañon-Salas M.C.2, Márquez-Benavides L.1, Hdz.-Berriel M.C.2

1. Laboratorio de Residuos Sólidos y uso Eficiente de Energía Instituto de Investigaciones
Agropecuarias y Forestales de la Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo
2. Instituto Tecnológico de Toluca.

CÁLCULO DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

La actividad enzimática es una medida de la capacidad de una enzima para
transformar un sustrato, que se expresa en función de la concentración de sustrato
convertido por unidad de tiempo en un determinado volumen de reacción [1]. La unidad
internacional de actividad enzimática, abreviada como U es la cantidad de enzima que
cataliza la conversión de 1 µmol de sustrato por minuto a 30° C, sin embargo algunos
autores a esta definición la denominan como velocidad de reacción y usan el termino de
actividad enzimática para la cantidad de enzima que cataliza la conversión de 1 µmol de
sustrato por minuto en un volumen de reacción, lo que se expresa en U L-1 o en U mL-1 [2,
3].
La unidad de actividad enzimática fue propuesta 1964 por la Comisión de Enzimas
de la Unión Internacional de Bioquímica, para uniformar los estudios enzimáticos, ya que
para cada método existían unidades arbitrarias distintas, por ejemplo la actividad fosfatasa
se reportaba en unidades King-Armstrong, Bodansky, Kind-King entre otras; o bien la
transaminasa en Karmen-La Due o en Reitman-Frankel, etc. La Comisión emitió como
recomendación que en su reporte se especificaran las condiciones de estudio: tiempo,
temperatura, pH, concentración de sustrato, cofactores y concentración iónica; además que
su reporte fuera en U L-1 o bien en microunidades por mililitro (µU mL-1) [4, 5]. Sin embargo
la U no fue adoptado por el Sistema Internacional de Unidades y en 1978 la Comisión de
Enzimas en la Conferencia General de Pesos y Medidas propuso que la U fuera reemplazada

3






por el katal (kat), lo que fue aprobado en 1999. Un katal es la cantidad de enzima que
cataliza la conversión de 1 mol de sustrato por segundo [3]. Pero la magnitud de esta unidad
en la práctica es demasiado pequeña (1U=0.000,000,016, 666 kat) por lo que se usa U con
mayor frecuencia y con menor frecuencia el nanokatal (nkat) (1U=16.66 nkat).
En estudios enzimáticos se usa la actividad enzimática específica que expresa los
moles de sustrato convertido por unidad de masa de enzima, por unidad de tiempo, y se
utiliza en específico para ensayos de enzimas purificadas. Las unidades para expresarla son
katal kg-1, U mg-1 (μmol mg-1min-1), μmol μg-1min-1 [6, 7]. La actividad enzimática específica
es equivalente al cociente de la actividad enzimática entre la masa de la enzima [1, 8].
El cálculo de la actividad enzimática se hace a partir de la Ley de Lambert-Beer (1760-
1852) que relaciona la absorción de luz con las propiedades del material incidido (Ecuación
1):
A = e * C * d (Ecuación 1)
Donde:
A = Absorbance (dimensionless)
e = Molar extinction coefficient (M-1 cm-1)
C = Enzyme concentration (M)
d = Optical path (cm)
La absorbancia (adimensional) es la cantidad de intensidad de luz que es absorbida
por una muestra (compuesto orgánico o proteína) y es proporcional a su grosor y
concentración. El rango de lectura en la mayoría de los espectrofotómetros es de 0 a 2.0
pero el óptimo de lectura es de 0.097 a 0.699, en caso de valores mayores a este rango la
muestre debe diluirse.
La concentración de la enzima se expresa en molar (M) o bien en mol L-1 (1M=1mol
L-1), pero en el cálculo de U es más común se exprese en µmol L-1.
Comúnmente no se conoce las concentraciones de producto o no se cuenta con
estándares para la construcción de una curva de calibración, por lo que en su lugar se

4






emplean los coeficientes de extinción molar [6]. El coeficiente de extinción molar (e) es una
constante que representa la capacidad que tiene una sustancia de absorber la radiación
electromagnética a determinada longitud de onda. Sus unidades se expresan como
concentración-distancia, en molar-1 metro-1 (M-1 m-1), pero frecuentemente se expresa
como M-1 cm-1, mM-1 cm-1, o bien L mol-1 cm-1.
La distancia que recorre el haz luminoso emitido por el espectrofotómetro es
equivalente al espesor de la celda , comúnmente de 1.0 cm.
Al despejarse C en la ecuación 1, tenemos la ecuación 2:
$
𝐶= (Ecuación 2)
%∗'

El consumo del sustrato en una reacción química depende de la proporción entre el

volumen del ensayo o total (Vt) y del volumen de la muestra que contiene la enzima (Vm).
La enzima al consumir el sustrato provoca un cambio en la absorbancia (ΔA), lo que debe
ajustarse en la Ley de Lambert-Beer de acuerdo a la ecuación 3:
($ )*
𝐶= ∗ (Ecuación 3)
%∗' )+

La reacción enzimática ocurre durante un lapso de tiempo hasta que la enzima

consume el sustrato, para ello entonces se incluye el tiempo en la ecuación 4:
($ )* ,
𝐶= ∗ ∗ (Ecuación 4)
%∗' )+ -

En Unidades Internacionales no existe un consenso en cuanto a expresar la unidad

enzimática en función de un volumen específico como µmol min-1 mL-1 o µmol min-1 L-1, por
lo que la actividad enzimática se define como U mL-1 o en U L-1 de acuerdo a la ecuación 5
[5, ].
($ )*
𝑈 𝑙 0, = (Ecuación 5)
(-)(%)(')()+ )

A la ecuación 5 se puede añadir un factor de dilución (Fd), que se aplica cuando el

sustrato satura a la enzima. Algunos autores también consideran el factor de corrección 106
para convertir los mol L-1 en µmol L-1.

5






Finalmente, para calcular la actividad enzimática en Unidades Internacionales que
representan 1μmol de producto convertido por minuto por litro de disolución se define en
la ecuación 6:
($ )* (34 )(,56 )
𝑈 𝑙 0, = (Ecuación 6)
(-)(%)(')()+ )

Dónde:
U = Actividad enzimática (μmol min-1 L-1)
ΔA = Absorbancia final - absorbancia inicial
Vt = Volumen total de reacción (mL)
t = Tiempo de reacción (min)
ɛ = Coeficiente de extinción molar (M-1 cm-1) o bien (mol L-1 cm-1)
d = Trayectoria óptica (1 cm)
Vm = Volumen de muestra (mL)
Fd = Factor de dilución
106 = Factor de corrección (µmoL mol-1)

REFERENCIAS CITADAS
[1] Devlin T, Stryer L, Berg J, Tymoczko J. Bioquímica. Libro de texto con aplicaciones clínicas. 5 ed.
Barcelona, España: Reverté; 2008. 421 pp.
[2] Rendina G, Fabre R. Técnicas de bioquímica aplicada. 1 ed. México D.F., México: Interamericana;
1974. 81-82 pp.
[3] Lehninger A. Principios en Bioquímica. 2 ed. Barcelona, España: Editorial Omega; 2002. 215 pp.
[4] Kamath S. Clinical biochemistry for medical technologists. 5 ed. London, England: Little Brown
and Company; 1972. 105-107, 240-243 pp.
[5] Lynch M, Raphael S, Mellor L, Spare P, Inwood M. Métodos de laboratorio. 3 ed. México D.F.,
México: Interamericana; 1987. 331-332 pp.
[6] Holme D, Peck H. Resolución de problemas de bioquímica analítica. 1 ed. Zaragoza, España:
Acribia; 1996. 114-126,160 pp.

6






[7] Stewart K, Ebel R. Chemical Measurements in biological system. 1 ed. New York, U.S.A.: Wiley-
Interscience; 2000. 111-115 pp.
[8] Manole A, Herea D, Chiriac H, Melnig V. Laccase activity determination. Scientific annals of
Alexandru Ioan Cuza Din Iaşi University Biomaterials in Biophysics, Medical Physics and Ecology.
2008;1:1-8.

CALCULO DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA EN “ENZACT BIOCALCULATOR”

Abrir el modulo de Acitividad Enzimática en el menú cálculos.

Capturar todos los valores de entrada:
ΔA = Absorbancia final - absorbancia inicial
Vt = Volumen total de reacción (mL)
t = Tiempo de reacción (min)
ɛ = Coeficiente de extinción molar (M-1 cm-1) o bien (mol L-1 cm-1)
d = Trayectoria óptica (1 cm)
Vm = Volumen de muestra (mL)
Luego presionar calcular para obtener el valor de la Actividad enzimática (μmol min-1 L-1),
así como su equivalente en katal y nanokatal.

El valor de masa específica es opcional, capturarlo si se desea conocer la actividad
enzimática específica y presionar nuevamente calcular.

8








ENZACT BIOCALCULATOR ©. 2016.
Baltierra-Trejo E. , Márquez-Benavides L.1, Hdz.-Berriel M.C.2, Mañon-Salas M.C.2
1

1. Laboratorio de Residuos Sólidos y uso Eficiente de Energía Instituto de Investigaciones
Agropecuarias y Forestales de la Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo
2. Instituto Tecnológico de Toluca.

PREPARACIÓN DE SOLUCIÓN BUFFER

Un tampón, buffer, solución amortiguadora o solución reguladora es la mezcla en
concentraciones relativamente elevadas de un ácido débil y su base conjugada, es decir,
sales hidrolíticamente activas. Tienen la propiedad de mantener estable el pH de una
disolución frente a la adición de cantidades relativamente pequeñas de ácidos o bases
fuertes. Cada sistema buffer tiene su propio rango efectivo de pH, el cual dependerá de la
constante de equilibrio del ácido o base empleado.
Una forma conveniente de expresar la relativa fortaleza de un ácido es mediante el
valor de su pKa, que permite ver de una manera sencilla en cambios pequeños de pKa los
cambios asociados a variaciones grandes de Ka. Valores pequeños de pKa equivalen a valores
grandes de Ka (constante de disociación) y, a medida que el pKa decrece, la fortaleza del
ácido aumenta. Un ácido será más fuerte cuanto menor es su pKa y en una base ocurre al
revés, que es más fuerte cuanto mayor es su pKa.
La proporción ácido/sal en la preparación de soluciones buffers se fundamenta en
lo siguiente:
La concentración de H+ está vinculada a la naturaleza del electrolito débil.
Considerando un ácido débil, de modo genérico como HAc, su equilibrio de disociación
sería:
HAc ßà Ac- + H+
Aplicando la ley de acción de masas, la constante de equilibrio K será:

9






Ka=(Ac-) (H+) / (HAc)
Despejando ( H+):
( H+ ) = (Ka) (HAc) / ( Ac-)
Aplicando logaritmos:
log(H+) = logKa + log(HAc) - log(Ac-)

Multiplicando por -1:
-log(H+) = -logKa - log(HAc ) + log ( Ac-)
Si hacemos que
-log (H+) = pH
-logK = pKa
Se obtiene la ecuación de Henderson-Hasselbalch:
pH = pKa + log[sal]/[ácido]
Si en la ecuación la concentración de ácido es igual a la de la base, el cociente es 1,
siendoel log de 1=0, se tiene que:
pH = pKa
Por tanto, se puede definir el pKa como el valor de pH de una solución amortiguadora
en el que el ácido y la base se encuentran a concentraciones equimoleculares o al 50% cada
una.
Despejando en la ecuación de ecuación de Henderson-Hasselbalch, se puede
conocer la porporción de ácido y su sal para la preparación de la solución buffer
log [sal]/[Acido] = pH - pKa
[sal]/[acido] = antilog(pKa - pH)
Se obtiene la ecuación de la concentración de la sal en la solución buffer:
[sal] = antilog(pKa - pH)*[ácido]
Considerando que [M] = [sal]+[ácido], entonces:
[M] = antilog(pKa - pH)

10






[ácido] + [ácido]
Se obtiene la ecuación de la concentración del ácido en la solución buffer:
[ácido] = [M] / (1 + antilog(pKa - pH))

PREPARACIÓN DE SOLUCIONES BUFFER EN “ENZACT BIOCALCULATOR”
Abrir el modulo Soluciones Buffer en el menú calculos

Capturar los valores de entrada de concentración molar del buffer, pH, pka (pueden
consultarse algunos valores en la tabla de referencia), volumen final, peso molecular del
ácido y de la sal. Dar clic en calcular para obtener los resultados en gramos del ácido y de
la sal.

11






ENZACT BIOCALCULATOR ©. 2016.
Baltierra-Trejo E. , Márquez-Benavides L.1, Hdz.-Berriel M.C.2, Mañon-Salas M.C.2
1

1. Laboratorio de Residuos Sólidos y uso Eficiente de Energía Instituto de Investigaciones
Agropecuarias y Forestales de la Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo
2. Instituto Tecnológico de Toluca.

PREPARACIÓN DE SOLUCIONES MOLARES

La concentración molar o molaridad (M), es una medida de la concentración de un
soluto en una disolución, expresado en función del moles de soluto (peso de las moléculas)
por litro del disolvente.
Para calcularla se emplea la siguiente formula:
M = n/V (Ecuación 1)
n=m/PM (Ecuación 2)
Donde, n es la cantidad de soluto en moles,1 m es la masa de soluto expresada en
gramos, PM es el peso de un mol de moléculas en g/mol y V el volumen en litros de la
disolución.
Cuando se tiene una sustancia en estado líquido, será necesario convertir la masa
(gramos) en un volumen (mililitros). Para esto se emplea la fórmula para calcular la densidad
Densidad = Masa / Volumen (Ecuación 3)
Se despeja el volumen:
volumen = masa / densidad

12






PREPARACIÓN DE SOLUCIONES MOLARES CON “ENZACT BIOCALCULATOR”
Abrir el prograa en el menú calculos

Soluciones con soluto en estado líquido
Capturar los datos de entrada de concentración molar, volumen final, peso molecular,
densidad y pureza. Luego Presionar calcular para obtener el peso y volumen, si se conoce
la pureza del reactivo, se obtendrá la corrección en el peso y el volumen. Si no es conocida
la pureza capturar un valor del 99 o 100%.

13






Soluciones con soluto en estado sólido
En caso de un soluto sólido puede capturar en la entrada densidad el valor “1”.

14






Enzact Biocalculator ©. 2016.
Baltierra-Trejo E.1, , Mañon-Salas M.C.2, Márquez-Benavides L.1, Hdz.-Berriel M.C.2

1. Laboratorio de Residuos Sólidos y uso Eficiente de Energía Instituto de Investigaciones
Agropecuarias y Forestales de la Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo
2. Instituto Tecnológico de Toluca.

CALCULADORA DE CONVERSION ENTRE MASA Y MOL
La masa molar (M) puede utilizarse como un factor de conversión que relaciona la
masa (m) con el peso en moles y el número de moléculas de una cantidad de sustancia. Para
el caso de flujo másico a flujo molar solo se requiere de la ecuación.
Por ejemplo si son 100 g/h de CO2, y su PM es 44.01, entonces el flujo molar será de
2.273 g- mol/h
Las unidades en moles (x-moles) dependerán de las unidades (x) de la masa.
Por ejemplo Si la masa del CO2 es 100 kg y su PM es 44.01, entonces en moles serán
en 2.273 kg- mol
Como el Número de Avogadro es 6.02E+23 para un g-mol, entonces el Número de
moléculas serán 1.37E+21
M = m/PM (Ecuación 1)
Donde, m es la cantidad de la masa, x son las unidades en que se expresa la masa y
PM es el peso de un mol de moléculas
Si m fue dada en g, entonces el resultado queda igual y directamente se cálcula el
número de moléculas
Moléculas = M * 6.02E+23 (Ecuación 2)
Si m fue dada en kg, entonces primero se convertirá a g mediante:
g= x kg * 1000 / peso molar (Ecuación 3)
Donde g es la m en gramos y kg es la m en kilogramos.

15






Si m fue dada en lb, entonces se convertirá a g mediante:
g= x lb* 453.592 / peso molar (Ecuación 4)
Donde g es la masa en gramos y lb es la masa en libras Si m fue dada en t, entonces
se convertirá a g mediante:
g= x t * 1000000 / peso molar (Ecuación 5)
Donde g es la masa en gramos y t es la masa en toneladas
El número de moles se calcula diviendo masa entre peso molecular:
Moles (x) = masa (x ) / peso molecular (Ecuación 6)

CONVERSIÓN DE MASA A MOL EN “ENZACT BIOCALCULATOR”
Abrir el modulo Masa a mol en el menu calculadora.

Capturar los datos de entrada y dar clic en calcular para obtener los resultados.

16







Enzact Biocalculator ©. 2016.
Baltierra-Trejo E.1, , Mañon-Salas M.C.2, Márquez-Benavides L.1, Hdz.-Berriel M.C.2
1. Laboratorio de Residuos Sólidos y uso Eficiente de Energía Instituto de Investigaciones
Agropecuarias y Forestales de la Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo
2. Instituto Tecnológico de Toluca.

CALCULADORA DE CONVERSION ENTRE MOL Y MASA
La masa molar (M) puede utilizarse como un factor de conversión que relaciona la
masa (m) con el peso en moles y el número de moléculas de una cantidad de sustancia. Para
el caso de flujo másico a flujo molar solo se requiere de la ecuación 1.
Por ejemplo si son 100 g-mol/h de CO2, y su PM es 44.01, entonces el flujo másico será de
4401 g/h
Las unidades de la masa (x) dependerán de las unidades (x-mol) de los moles.
Por
ejemplo Si los moles del CO2 son 100 kg-mol y su PM es 44.01, entonces en masa erán 4401
kg
M=m/PM m=M*PM (Ecuación1)
Donde, m es la cantidad de la moles, x son las unidades en que se expresa la masa y
PM es el peso de un mol de moléculas
Como el Número de Avogadro es 6.02E+23 para un g-mol, entonces el Número de
moléculas serán 2.65E+23. Si M fue dada en g-mol, entonces directamente se calcula el
número de moléculas con la ecuación 2, el valor debe estar en gramos
Moléculas = Moles* 6.02E+23 (Ecuación 2)
Si M fue dada en kg-mol, entonces primero se convertirá a g mediante:
Masa kg-mol = M * 1000
 (Ecuación 3)
Si M fue dada en lb-mol, entonces se convertirá a g-mol mediante:
Masa lb-mol = M * 453.592
 (Ecuación 4)

17






Si M fue dada en t-mol, entonces se convertirá a g-mol mediante:
Masa t-mol = M * 1000000 (Ecuación 5)
Independiente de la unidad que se haya introducido en moles, se muestra el caculo
de la masa en las cuatros unidades (kg, t, g y lb) para ello se obtienen las siguientes
ecuaciones.
Si se presenta en kg se convierte mediante: Si se presenta en t se convierte
mediante: Si se presenta en lb se convierte mediante:
Masa * 0.001 (Ecuación 6)
Masa * 0.0000001 (Ecuación 7)
Masa * 0.0022046 (Ecuación 8)
CONVERSIÓN DE MOL A MASA EN “ENZACT BIOCALCULATOR”
Abrir el modulo Mol a Masa en el menu calculadora.

Capturar los datos de entrada y dar clic en calcular para obtener los resultados.

18