PROBLEMARIO DE FLUOROMETRIA

1. Mediante un procedimiento específico de fluorescencia se estableció que un

paquete de 25g de sopa de arroz con pollo contenía 0.125% de glutamato disódico
(DSG), empleado para realzar el sabor. ¿Cuántos miligramos de DSG habrá en el
paquete si con el procedimiento se obtuvo una recuperación del 91%?

2, En una muestra mineral se determinó berilio, un elemento muy tóxico, por

fusión de 750 mg de la misma. La muestra fundida se disolvió con HCl y se diluyó
exactamente a 250 mL. Una alícuota de 10.0 mL de esta dilución se transfirió a un
matraz volumétrico de 25 mL; se añadieron los agentes inductores de la
fluorescencia y la solución se diluyó hasta ese volumen. Esta muestra y una serie
de estándares se leyeron a 366 y 570 nm. Calcule la concentración del Be en:

a) El matraz de 25 mL (mg/mL)
b) El matraz de 250 mL (mg/mL)
c) En el mineral (%)

Estándares (mg/mL)
Muestra Blanco 2.0 5.6 7.8 12.0 Problema
Intensidad 0.00 16.7 46.7 65.0 100.0 87.0

3. Una solución de 1.2 mg/L de Cu2+ se combinó con un agente quelante

fluorescente y dio una intensidad de 15 unidades e interceptó en el origen.
Calcular la concentración de cobre en una solución que dio una lectura de 85
unidades.

4. Se quiere hacer el análisis de vitamina B1 en una muestra de 5g de cereal, para

ello se extrajo toda la muestra con HCl, la solución se purificó por intercambio
iónico eluyendo con KCl ácido, posteriormente se oxidó con ferrocianuro de
potasio para dar un pigmento amarillo fluorescente, el tiocromo; a esto siguió una
extracción con 20.0 mL de isobutanol. También se prepararon una serie de
estándares y un blanco. Con los datos que a continuación se proporcionan,
calcule:

a) La concentración de la vitamina en el extracto de isobutanol (mg/mL)

b) Los mg de tiamina por gramo de cereal
 Muestra Concentración en Intensidad de
isobutanol (mg/mL) fluorescencia
Isobutanol 0.00 0.00
Estándar 1 0.05 20.8
Estándar 2 0.12 50.0
Estándar 3 0.24 100.0
Extracto de cereal ----- 42.0

5. El 3,4-benzopireno es un carcinógeno potente encontrado con frecuencia en el

aire contaminado. Un método sensible para su determinación es medir su
fluorescencia en solución de ácido sulfúrico. La longitud de onda de excitación es
de 520 nm y la de emisión es de 548 nm. Se pasaron 10 L de aire através de
10.00 mL de ácido sulfúrico diluido. Un mililitro de esta solución de ácido dio una
lectura de 33.3 en un fluorómetro. Dos soluciones estándares diferentes de 3,4-
benzopireno que contenían 0.750 mg y 1.25 mg por cada 10.00 mL de ácido
sulfúrico, dieron lecturas de 24.5 y 38.6 cuando se colocó 1.0 mL en la misma
celda que se usó para el problema. Una muestra blanco, sin 3,4-benzopireno, dio
una lectura de 3.5. Calcule el peso de 3,4-benzopireno en 1 L de aire.

6. El calcio puede determinarse por su reacción con la fluoresceína, el complejo

formado puede excitarse a 405 nm y fluorescer a una longitud de onda de 520
nm. Considerando los siguientes datos, calcule la concentración de calcio en una
muestra de suero que presenta una intensidad de fluorescencia de 67.8 unidades.

Concentración de Ca2+ (mg/dL) Intensidad de emisión

0.0 0.0
5.0 45.0
7.5 63.5
10.0 79.0
12.5 93.0
15.5 100.0
7. La siguiente figura muestra los resultados preliminares de un método para la
determinación fluorométrica de de glicina. En éste, el aminoácido se hace
reaccionar con la fluorescamina para formar un producto fluorescente. Los
barridos muestran:

a) La intensidad de emisión relativa en función de la longitud de onda de

excitación (espectro de excitación).
b) El espectro de emisión y
c) un gráfico de la intensidad de emisión en función del pH, empleando longitudes
de excitación y emisión fijas.

Suponiendo que la forma del espectro no varía con el pH, conteste lo siguiente:

A) Para optimizar la sensibilidad del análisis de la Gly, ¿a qué longitud de onda

deberán ajustarse los monocromadores de excitación y emisión y qué pH
debe tener la disolución?
B) Para producir el gráfico de pH vs Intensidad de emisión, ¿cuántas especies
deben estar presentes y cuántas son fluorescentes?
8. La quinina es una de las moléculas fluorescentes mejor conocidas y las
sensibilidades de los fluorómetros a menudo se especifican en términos del límite
de detección para esta molécula. A continuación se muestra la estructura de la
quinina; a partir de ésta, prediga qué parte de la molécula tiene la mayor
probabilidad de comportarse como cromóforo y como centro fluorescente.

9. En qué disolvente se esperaría mayor fluorescencia del naftaleno: 1-

cloropropano, -bromopropano ó 1-yodopropano. Explique su respuesta.

10. La forma reducida el dinucléotido de nicotinamida (NADH) es una importante

coenzima con una alta capacidad de fluorescer. Presenta un máximo de absorción
a 340 nm y un máximo de emisión a 465. Unas diluciones patrón de NADH
dieron las siguientes intensidades de fluorescencia.

Concentración de NADH Intensidad relativa, I

(mol/L)

0.100 2.24
0.200 4.74
0.300 6.59
0.400 8.98
0.500 10.93
0.600 14.01
0.700 15.49
0.800 18.02
a) Construir la curva de calibración para el NADH
b) Escribir los parámetros de regresión para la ecuación de la recta para la
representación gráfica anterior.
c) Si al analizar una disolución problema se obtuvo un resultado de 12.16
unidades de intensidad (I),calcular la concentración de NADH
11. Se propone un método para determinar la concentración de quinina en
una bebida comercial por fluorometría. La longitud de onda de excitación
es de 350nm y la de medida es de 450 nm. A partir de una disolución A de
quinina de 0.1 mg.mL-1 se hacen una serie de cinco disoluciones patrón para
establecer una curva de calibrado:

Disolución Volumen de H2SO4 Intensidad de

A (0.05M) fluorescencia (I)
Patrón 1 20 0 182.0
Patrón 2 16 4 138.8
Patrón 3 12 8 109.2
Patrón 4 8 12 75.8
Patrón 5 4 16 39.5
Blanco 0 20 0.0
analítico

A continuación, se toman 0.1 mL de la bebida a determinar y se diluye a 100 mL

con H2SO4 0.05M, la señal obtenida para esta disolución es de 113.0.
a) Establecer mediante regresión lineal, la ecuación de la curva de
calibración.
b) ¿Cuál es la concentración de quinina, expresada en mg.L-1(ppm)?