ANALISIS KADAR ANTOSIANIN DAN PROTEIN DENGAN

SPEKTROFOTOMETRI
FAKULTAS TEKNOLOGI INDUSTRI PERTANIAN
UNIVERSITAS PADJADJARAN

Matilda Christina Tri Tresnawati (240210140041)

Departemen Teknologi Industri Pangan Universitas Padjadjaran, Jatinangor

Jalan Raya Bandung-Sumedang Km. 21, Jatinangor, Sumedang 40600 Telp. (022) 7798844,
779570 Fax. (022) 7795780Email: christina.tri78@gmail.com

ABSTRACT
Protein helpful in formation of biomolekul and can be a source of energy for our body.
Antioxidants are chemical compounds that can donate one or more electrons to free radicals, so
that these free radicals can be muted.The example of antioxidant is anthocyanin. Content of
protein can determine by biuret methods or spectrophotometry methods and antioxidants can
determine by spectrophotometry methods. Average levels of protein in koro benguk peanut is
27,67333%. Average levels of antochyanin in powder telang flower 0% is 6,3815%, in powder
telang flower 10% is 3,4035%, and in powder telang flower 20% is 4,94445%.

Key word :protein, antioxidants, biuret methods, spectrophotometry methods, levels of protein,
levels of powder telng flower .

PENDAHULUAN lain seperti biuret dan malonamida juga

Protein merupakan salah satu
kelompok bahan makronutrien. Tidak
seperti bahan makronutrien lain (lemak dan
karbohidrat), protein ini berperan lebih
penting dalam pembentukan biomolekul
daripada sebagai sumber energi. Namun
demikian apabila organism sedang
kekurangan energi, maka protein ini
terpaksa dapat juga digunakan sebagai
sumber energi. Kandungan energi protein
rata-rata 4 kilokalori/gram atau setara degan
kandungan energi karbohidrat (Sudarmadji,
dkk., 2010).
Kandungan protein pada suatu bahan
pangan dapat diuji dengan menggunakan
metode biuret. Metode biuret atau metode
spektrofotometri visible adalah teknik
analisis yang bertujuan untuk mengetahui
jumlah (konsentrasi) zat dalam suatu bahan
berdasarkan spektroskopi khusus untuk
panjang gelombang UV visible dan
infrared. Secara rinci, metode biuret
bertujuan untuk menunjukkan adanya
senyawa-senyawa yang mengandung gugus
amida asam (-CONH2) yang bersama
gugus-gugus lain. Dengan demikian uji
biuret tidak hanya untuk protein tetapi zat
memberikan reaksi positif yang ditandai
dengan timbulnya warna merah-violet atau
biru-violet (Sudarmadji dkk, 2010).
Prinsip metode biuret adalah dalam
larutan basa, Cu2+ membentuk kompleks
dengan ikatan peptida (-CO-NH-) dari suatu
protein yang membentuk warna ungu
dengan absorbansi 540 nm. Besarnya
absorbansi tersebut berbanding langsung
dengan konsentrasi protein dan tidak
tergantung pada jenis protein, karena semua
protein pada dasarnya mempunyai jumlah
ikatan peptida yang sama per satuan berat
(Nurwantoro dan Legowo, 2004).
Prinsip kerja penentuan kadar protein
dengan metode biuret adalah menganalisis
adanya ikatan peptida dengan cara
menambahkan reagen biuret kedalam
sample yang kemudian di ukur
absorbansinya menggunakan
spektrofotometer. Pada dasarnya suatu
peptida adalah asil-asam amino, karena
gugus –COOH dan –NH2 membentuk
ikatan peptida. Peptida didapatkan dari
hidrolisis protein yang tidak sempurna.
Apabila peptida yang dihasilkan dihidrolisis
lebih lanjut akan dihasilkan asam-asam
amino. Sifat peptida ditentukan oleh gugus
–COOH, –NH2 dan gugus R. Sifat asam
dan basa pada peptida ditentukan oleh
gugus –COOH dan –NH2 , namun pada
rantai panjang gugus –COOH dan –NH2
yang terletak diujung rantai tidak lagi
berpengaruh. Suatu peptida juga
mempunyai titik isolistrik seperti pada asam
amino. Reaksi biuret merupakan reaksi
warna untuk peptida dan protein (Poedjiadi,
1994).
Antioksidan adalah senyawa kimia
yang dapat menyumbangkan satu atau lebih
elektron kepada radikal bebas, sehingga
radikal bebas tersebut dapat diredam.
Antioksidan didefinisikan sebagai senyawa
yang dapat menunda, memperlambat, dan
mencegah proses oksidasi lipid. Dalam arti
khusus, antioksidan adalah zat yang dapat
menunda atau mencegah terbentuknya
reaksi radikal bebas (peroksida) dalam
oksidasi lipid (Dalimartha dan Soedibyo,
1999).
Radikal bebas (free radical) adalah
suatu senyawa atau molekul yang
mengandung satu atau lebih elektron tidak
berpasangan pada orbital luarnya
(Soematmaji, 1998). Adanya elektron yang
tidak berpasangan menyebabkan senyawa
tersebut sangat reaktif mencari pasangan
dengan cara menyerang dan mengikat
elektron molekul yang berada di sekitarnya.
Radikal bebas tersebut dapat mengoksidasi
asam nukleat, protein, lemak, bahkan DNA
sel dan menginisiasi timbulnya penyakit
degeneratif (Leong dan Shui, 2004).
Beberapa bahan pangan memiliki
kandungan antioksidan yang dapat
memerangi radikal bebas. Praktikum ini
bertujuan untuk mengetahui kadar
antioksidan dalam beberapa sampel melalui
uji spektrofotometri. Salah satu contoh
antioksidan adalah antosianin.
Pengujian aktivitas antioksidan ini
menggunakan DPPH. Metode uji aktivitas
antioksidan dengan DPPH (2,2-difenil-1-
pikrilhidrazil) dipilih karena metode ini
adalah metode sederhana, mudah, cepat dan
peka serta hanya memerlukan sedikit
sampel untuk evaluasi aktivitas antioksidan
dari senyawa bahan alam sehingga
digunakan secara luas untuk menguji
kemampuan senyawa yang berperan
sebagai pendonor elektron (Molyneux, P.
2004).
DPPH merupakan radikal yang stabil
dan banyak digunakan untuk mengetahui
aktivitas antioksidan ekstrak tumbuhan
(Wijaya, 2011). Prinsip kerja dari
pengukuran ini adalah adanya radikal bebas
stabil yaitu DPPH yang dicampurkan
dengan senyawa antioksidan yang memiliki
kemampuan mendonorkan hidrogen,
sehingga radikal bebas dapat diredam
(Ridho, 2013).
Adanya aktivitas antioksidan dari
sampel mengakibatkan perubahan
warna pada larutan DPPH yang semula
berwarna ungu menjadi kuning pucat.
Perubahan intensitas warna disebabkan
oleh berkurangnya ikatan rangkap
terkonjugasi pada DPPH, karena
elektron pada radikal DPPH
berpasangan dengan atom hidrogen dari
antioksidan sehingga menjadi DPPH-H
yang merupakan radikal stabil
(Prakash, 2001). Selanjutnya, larutan ini
diujikan melalui spektrofotometer.
Prinsip dari metode uji aktivitas
antioksidan ini adalah pengukuran
aktivitas antioksidan secara kuantitatif
yaitu dengan melakukan pengukuran
penangkapan radikal DPPH oleh suatu
senyawa yang mempunyai aktivitas
antioksidan dengan menggunakan
spektrofotometri UV-Vis sehingga
dengan demikian akan diketahui nilai
aktivitas peredaman radikal bebas yang
dinyatakan dengan nilai IC50 (Inhibitory
Concentration). Nilai IC50 didefinisikan
sebagai besarnya konsentrasi senyawa
uji yang dapat meredam radikal bebas
sebanyak 50%. Semakin kecil nilai IC50
maka aktivitas peredaman radikal bebas
semakin tinggi (Molyneux, P., 2004).
Suatu senyawa dikatakan sebagai
antioksidan sangat kuat jika nilai IC50
kurang dari 50, kuat (50-100), sedang
(100-150), dan lemah (151-200).
Kekuatan itu dianalisis dengan metode
DPPH (2,2-diphenil-1- picrylhydrazil
radical).
 METODOLOGI
Bahan dan alat
Bahan yang digunakan dalam
praktikum ini diantaranya adalah kacang
koro benguk, minuman serbuk bunga telang
konsentrasi 0%, 10%, dan 20%, aquades,
TCA 10%, etil eter, pereaksi biuret, buffer
KCl, dan Na. Asetat.
Alat yang digunakan dalam praktikum
ini diantaranya adalah timbangan analitik,
labu ukur, pipet ukur, tabung sentrifugasi,
pipet tetes, gelas kimia, batang pengaduk,
spatula, botol aquades, kuvet, alat
spektrofotometri, alat sentrifugasi,
inkubator, dan pH meter.
Preparasi Sampel Protein
Sampel kacang koro benguk ditimbang
sebanyak 1-2 gram kemudian tepatkan
dalam labu ukur 25 ml dengan aquades.
Lakukan aliquot 0,5 ml kemudian tepatkan
aliquot menjadi 1 ml dengan aquades dalam
tabung sentrifugasi. Tambahkan 1 ml TCA
10% ke dalam tabung sentrifugasi
kemudian lakukan sentrifugasi selama 10
menit 3000 rpm. Setelah disentrifugasi,
buang supernatan dan tambahkan 2 ml etil
eter ke dalam tabung kemudian lakukan lagi
sentrifugasi dan divortex selama 1 menit.
Biarkan hasil vortex mengering di udara
kemudian tambahkan aquades sebanyak 4
ml dan divortex lagi selama 1 menit.
Tambahkan 6 ml biuret, kemudian inkubasi
dalam suhu ruang selama 30 menit
kemudian baca absorbansi x 520 nm.
Penentuan Kadar Protein Metode Biuret
Pereaksi Biuret
Disiapkan 0,3 gram CuSO4.5 H2O, 0,9
gram Na.K, 0,5 gram KI, dalam 100 ml
NaOH 0,2 N.
Kurva Standar
Disiapkan 5 mg/ml BSA kemudian
dimasukan kedalam tabung reaksi.
Ditambahkan 4 ml akuades dan 6 ml
pereaksi biuret kemudian dihomogenkan.
Diamkan dalam suhu ruang kemudian
lakukan penyaringan. Diukur absorbansi
520 nm dan plotkan dalam grafik.
Penentuan Kadar Protein Sampel
Disiapkan 0,2 ml sampel kedalam
tabung sentrifugasi kemudian ditambahkan
akuades hingga volume bertambah menjadi
1 ml dan 1 ml TCA 10% lalu lakukan
sentrifugasi dengan kecepatan 3000 rpm
selama 30 menit. Pisahkan supernatan dan
ditambahkan 2 ml etil eter lalu dilakukan
senrifugasi kembali selama 30 menit.
Ditambahkan 4 ml akuades dan 6 ml
pereaksi biuret lalu dididamkan dalam suhu
ruang dan dilakukan penyaringan. Diukur
absorbansi dengan panjang gelombang 520
nm.
Pembuatan Buffer KCl 0,0025 M pH 1
Disiapkan 1,86 gram KCl dalam 980
ml akuades. Diatur pH sampai menunjukan
angka 1 dengan larutan HCl pekat
kemudian tepatkan kedalam labu ukur 1000
mL.
Pembuatan Buffer Na Asetat (CH3COO
Na3.H2O
Disiapkan 54,43 gram Na Asetat ke
dalam 960 ml akuades. Diatur pH hingga
menunjukan pH 4,5 dengan menggunakan
HCl pekat lalu ditepatkan dalam labu ukur
1000 mL.
Penetapan Kadar Antosianin
Disiapkan 1 gram sampel untuk
dilarutkan dengan menggunakan HCl pH 1
ke dalam labu ukur 25 ml lalu tepatkan
menggunakan akuades. Suspensi sampel
dimasukan kedalam kuvet untuk diukur
absorbansnya dengan panjang gelombang
510 nm dan 700 nm.
Rumus penentuan kadar antosianin :
A = (A510-A700) pH1- (A510-A700) pH 4,5
Kadar A (M) (%b/b) =
A x BM x FP x 1000
εxb
A = Absorbansi
𝜀 = Absoprivitas molar sianidin 3-
glukosida
b = tebal kuvet (1 cm)
BM = 448,8 gram/mol
FP = faktor pengenceran

HASIL DAN PEMBAHASAN
Analisis Kadar Protein
Praktikum pengujian kadar protein
dapat dilakukan juga dengan menggunakan
metode biuret. Reagen biuret yang
digunakan dalam praktikum ini adalah
CuSO4. 5H2O, Na.K, dan KI dalam NaOH
0,2 N. Prosedur penentuan kadar protein
terbagi menjadi tiga, antara lain pembuatan
kurva standar, preparasi sampel, dan
pengujian sampel. Pengujian kadar protein
sampel dilakukan penambahan Bovine
Serum Albumine (BSA). BSA merupakan
larutan standar yang mengandung protein
(Dennison, 2002). Hasil pengamatan kurva
standar BSA pada sampel kacang koro
benguk dapat dilihat pada tabel berikut.
Tabel 1. Hasil Pengamatan Kurva
Standar BSA
Ppm (x) Absorbansi (y)
0 0
250 0,044
500 0,118
750 0,185
1000 0,234
1250 0,303
1500 0,386
1750 0,439
Regresi dari data pada tabel di atas
adalah 0,9984 yang berarti data tersebut
sudah akurat karena nilai regresinya
mendekati angka 1. Nilai a pada kalkulator
sebesar - 0,0108, sedangkan nilai B pada
kalkulator sebesar 2,5652 x 10-4. Sehingga
persamaan nilai regresi linearnya yaitu y =
0,00026x – 0,0108. Berdasarkan data hasil
pengamatan kurva standar BSA tersebut,
dapat dibentuk kurva standar sebagai
berikut.
Kurva Larutan Standar
0.5
Absorbansi
Gambar 1. Grafik Kurva Larutan
Standar
Pengujian protein pada sampel kacang
koro benguk dilakukan penambahan TCA,
etil eter, dan biuret. Reaksi yang akan
terjadi antara protein dengan biuret
digambarkan pada gambar di bawah ini.
Gambar 3. Reaksi Antara Protein dan
Biuret
Penambahan TCA bertujuan untuk
melarutkan residu selain protein seperti
glukosa dan laktosa. Penambahan etil eter
bertujuan untuk menghilangkan TCA.
Tujuan dari inkubasi pada suhu ruang
adalah untuk mengendapkan senyawa-
senyawa kompleks yang mungkin akan
mengganggu pada saat pengukuran
absorbansi dengan spektrofotometer. Kadar
protein kacang koro benguk dapat dilihat
pada tabel berikut.
Tabel 2. Hasil Pengamatan Kadar
Protein Kacang Koro Benguk
Ppm Absorbnsi % Protein
(x) (y)
0,175 27,83
0,173 27,52
0,174 27,67
Rata-rata 27,67333
Berdasarkan tabel berikut, rata-rata
kadar protein pada sampel kacang koro
benguk adalah sebesar 27,67333%.
Berdasarkan literatur, kadar protein kacang

koro benguk adalah 27%-30% (Bambang

0 Kuswijayanto, 1990). Kadar protein pada
0 500 1000 1500 2000 sampel kacang koro benguk hasil praktikum
ppm ini sudah sesuai dengan literatur.
Kesalahan dalam pengujian kadar
protein kemungkinan dapat saja terjadi.
Dalam prosedur analisis dengan metode Tabel 3. Hasil Analisis Kadar Antosianin
biuret terdapat senyawa pengganggu yang Serbuk Bunga Telang berbagai
perlu diantisipasi yaitu urea karena Konsentrasi
mengandung gugus -CO-NH- dan gula
pereduksi yang akan bereaksi dengan ion Absorbansi Absorbansi Kadar
Kel Sampel pH
Cu2+. Hal inilah yang mungkin menjadi 510 nm 700 nm Antosianin
penyebab kadar protein menurut hasil Serbuk
14 1 0,569 0,003
percobaan lebih tinggi dibandingkan Bunga
4,371%
literatur (Nurwantoro dan Legowo, 2004). 19 Telang 4,5 0,321 0,017
0%
Selain itu, kesalahan prosedur dalam
3 Serbuk 1 1,1220 0,019
praktikum ini juga menyebabkan kadar Bunga
protein pada hasil pengamatan sangat 8,3920%
5,6 Telang 4,5 0,632 0,032
berbeda jauh dengan kadar protein pada 0%
literatur. Kesalahan prosedur ini terletak 15 Serbuk 4,5 0,241 0,021
Bunga
pada tidak dilakukannya penambahan 3,4035%
20 Telang 1 0,45 0,017
akuades hingga 4 ml pada pengujian sampel 10%
sehingga sampel yang diujikan menjadi 4 Serbuk 1 0,850 0,009
larutan yang lebih pekat dari seharusnya Bunga
3,4035%
dan memiliki nilai absorbansi yang lebih 7,8 Telang 4,5 0,459 0,021
10%
tinggi pula sedangkan saat pengujian Serbuk
larutan kurva standar, larutan kurva standar 1 1 0,670 0,007
Bunga
diberi perlakuan pengenceran maka 5,3889%
2 Telang 4,5 0,364 0,024
seharusnya hasil dari kurva standar ini tidak 20%
dapat digunakan untuk perhitungan 9 Serbuk 1 0,668 0,016
Bunga
konsentrasi sampel-sampel tersebut. Telang
4,5%
10 4,5 0,399 0,017
20%
Analisis Kadar Antosianin
Kadar antosianin pada praktikum ini Rata-rata kadar antosianin pada sebuk
dilakukan pada sampel minuman serbuk bunga telang 0% sebesar 6,3815%, pada
bunga telang konsentrasi 0%, 10%, dan sebuk bunga telang 10% sebesar 3,4035%,
20% dengan perbedaan pH 1 dan pH 4,5.
dan pada sebuk bunga telang 20% sebesar
Setelah dimasukkan pH yang berbeda
penentuan kadar antosianin dengan 4,94445%. Kadar antosianin pada serbuk
menggunakan spektrofotometer. Penetapan bunga telang 0% lebih besar dibandingkan
konsentrasi antosianin dengan metode ini dengan kadar antosianin pada serbuk bunga
karena dalam larutan, antosianin berada telang 10%. Hasil ini menunjukkan dengan
dalam lima bentuk kesetimbangan penambahan gula kadar antosianin semakin
tergantung pada kondisi pH. Kelima bentuk menurun sesuai dengan literatur. Kadar
tersebut yaitu kation flavilium, basa antosianin pada serbuk bunga telang 10%
karbinol, kalkon, basaquinonooidal, dan lebih kecil dibandingkan dengan kadar
quinonoidal anionic. Pada pH sangat asam antosianin pada serbuk bunga telang 20%.
(pH 1-2), bentuk dominan antosianin adalah Menurut Amrun dan Umiyah (2005),
kation flavilium. Pada bentuk ini, adanya penurunan absorban menunjukkan
antosianin berada dalam kondisi paling
peningkatan kemampuan peredaman radikal
stabil dan paling berwarna. Ketika pH
bebas DPPH yang artinya bahwa
meningkat di atas 4 terbentuk senyawa
antosianin berwarna kuning (bentuk konsentrasi yang tinggi juga menunjukkan
kalkon), senyawa berwarna biru (bentuk aktivitas antioksidan yang tinggi. Hasil ini
quinouid) atau senyawa yang tidak menunjukkan dengan penambahan gula
berwarna (basa karbinol). (Giusti M.M and kadar antosianin semakin meningkat dan
wrolstad R. E., 2001). Hasil pengamatan berarti belum sesuai dengan literatur.
pengukuran kadar antosianin dapat dilihat Menurut literatur, kadar antosianin pada
pada table berikut. bunga telang tanpa penambahan gula adalah
6,35 mg/ml (Zussiya, 2012). Kadar
antosianin pada serbuk bunga telang 0%
hasil praktikum ini mendekati nilai literatur.
Penurunan kadar antosianin
berbanding terbalik dengan penambahan
kadar gula. Semakin tinggi kadar gula yang
ditambahkan dalam sari buah, semakin
rendah kadar antosianin yang terkandung.
Didukung oleh penelitian kadar antosianin
ekstrak bunga rosella. Efek penurunan
antosianin terjadi sebagai akibat adanya
degradasi gula menjadi furfural dan 5-
hydroxymethyl-furfural yang terbentuk
pada kondisi asam dan gula dipanaskan
secara bersamaan dan bereaksi dengan
antosianin membentuk produk berwarna
coklat (Cao, S., 2009).
Adanya kadar gula yang tinggi akan
menyebabkan degradasi warna merah
sehingga warna merah terlihat makin pudar.
Konsentrasi gula yang lebih tinggi dan
adanya oksigen akan mengakibatkan
kerusakan pigmen yang lebih besar (deMan,
1997). Hal ini didukung juga oleh
Sudarmanto dkk. (1990) bahwa beberapa
faktor yang mempengaruhi laju kerusakan
antosianin selain lama penyimpanan dan
suhu yang tinggi, peningkatan kadar gula
juga akan mengurangi kandungan pigmen.
Hasil kadar protein yang berbeda dapat
dikarenakan perbedaan tanah tempat
tumbuh. Protein merupakan nutrisi yang
terbentuk dari nitrogen dalam unsur hara
tanah. Terbentuknya nitrogen antara lain
dengan jalan pengikatan oleh
mikroorganisme dalam tanah dan nitrogen
di udara, dari bahan organik tanah, pupuk
dan air hujan (Syafiuddin, 2012).
Ketidaksesuaian hasil pengamatan dan
literatur mungkin terjadi karena varietas
yang digunakan belum tentu sama,
pengaruh dari cepat tidaknya pengerjaan
praktikum ini dilakukan karena DPPH tidak
dapat terpapar cahaya dan kondisi suhu
yang tidak dingin (Molyneux, P. 2004).
Hasil dari protein dan kadar antosianin yang
diukur menggunakan spektrofotometer
berbeda dengan literature juga dapat
disebabkan kuvet yang digunakan pada saat
praktikum tidak baik atau terdapat kotoran
dalam suspensi yang ingin diukur. Menurut
Rohman (2007), hal-hal yang harus
diperhatikan dalam analisis
spektrofotometri UV-Vis adalah:
1. Pembentukan molekul yang dapat
menyerap sinar UV-Vis Hal ini perlu
dilakukan jika senyawa yang dianalisis
tidak menyerap pada daerah tersebut.
Cara yang digunakan adalah dengan
merubah menjadi senyawa lain atau
direaksikan dengan pereaksi tertentu.
2. Waktu operasional (operating time)
Cara ini biasa digunakan untuk
pengukuran hasil reaksi atau
pembentukan warna. Tujuannya adalah
untuk mengetahui waktu pengukuran
yang stabil. Waktu operasional
ditentukan dengan mengukur
hubungan antara waktu pengukuran
dengan absorbansi larutan.
3. Pemilihan panjang gelombang Panjang
gelombang yang digunakan untuk
analisis kuantitatif adalah panjang
gelombang yang mempunyai
absorbansi maksimal. Untuk memilih
panjang gelombang yang maksimal,
dilakukan dengan membuat kurva
hubungan antara absorbansi dengan
panjang gelombang dari suatu larutan
baku pada konsentrasi tertentu.
4. Pembuatan kurva baku Kurva baku
merupakan hubungan antara
absorbansi dengan konsentrasi. Bila
hukum Lambert-Beer terpenuhi maka
kurva baku berupa garis lurus. 5.
Pembacaan absorbansi sampel atau
cuplikan Absorban yang terbaca pada
spektrofotometer hendaknya antara 0,2
sampai 0,8 atau 15% sampai 70% jika
dibaca sebagai transmitans. Anjuran
ini berdasarkan anggapan bahwa
kesalahan dalam pembacaan T adalah
0,005 atau 0,5% (kesalahan
fotometrik).
KESIMPULAN
Hasil pengamatan menunjukkan bahwa
rata-rata kadar protein kacang koro benguk
adalah sebesar 27,68% sedangkan kadar
antosianin rata-rata pada sebuk bunga
telang 0% sebesar 6,3815%, pada sebuk
bunga telang 10% sebesar 3,4035%, dan
pada sebuk bunga telang 20% sebesar
4,94445%. Kadar antosianin pada serbuk
bunga telang 0% lebih besar dibandingkan
dengan kadar antosianin pada serbuk bunga
telang 10%. Hasil ini menunjukkan dengan
penambahan gula kadar antosianin semakin
menurun sesuai dengan literatur. Kadar
antosianin pada serbuk bunga telang 10%
lebih kecil dibandingkan dengan kadar
antosianin pada serbuk bunga telang 20%.
Hasil ini menunjukkan dengan penambahan
gula kadar antosianin semakin meningkat
dan berarti belum sesuai dengan literatur.
DAFTAR PUSTAKA
Abdul, Rohman Sumantri. 2007. Analisis
Makanan. Yogyakarta: Gajah Mada
University Prees. IKAPI.
Amrun, M., dan Umiyah. 2005. Pengujian
Antiradikal Bebas Difenilpikril
Hidrazil (DPPH) Ekstrak Buah Kenitu
(Chrysohyllum cainito L.). Jurnal Ilmu
Dasar VI (2) hal 110-112.
Bambang, Kuswijayanto. 1990. Aktivitas
Tripsin Inhibitor Selama Proses
Pembuatan Tempe Kara Benguk, Tolo
Putih dan Gude. Skripsi. Fakultas
Teknologi Pertanian. Yogyakarta:
UGM
Cao, S. Liang, L. Qi Lu, Yuan Xu, Siyi
Pan, Kexin Wang. Integrated Effects
of Ascprbic Acid, Flavonoids and
Sugars on Thermal Degradation of
Anhocyanins in Blood Orange Juice.
Eur Foof Res Technol. 2009. 2(28)
975-8983
Dalimartha, S. dan M. Soedibyo. 1999.
Awet Muda dengan Tumbuhan Obat
dan Diet Suplemen. Trubus Agriwidya,
Jakarta.
Dennison, P. E., and Dennison, G.E. 2002.
BrainGym. Jakarta: PT. Grasindo.
Giusti, M. M., and Worlstad R. E. 2001.
Characterization and Measurement of
Anthocyanins by UV-Visible
Spectroscopy. Oregon State
University. Availabel at
http://does.org/masterli/facsample.htm-
37k. diakses pada 1 mei 2016
Leong, L. P. dan G. H. Shui. 2004, Analysis
of Polyphenolics antioxidants in star
fruit using liquid of chromathography
and mass spectrometry, J
Chromathograph A, 1022: 67-75.
Man, J. M. de. 1997. Kimia Makanan. ITB.
Bandung
Molyneux, P., 2004, The Use of The Stable
Free Radical Diphenylpicrylhydrazyl
(DPPH) for Estimating Antioxidant
Activity, Songklanakarin J.
Sci.Technol.
Nurwantoro, S. dan M. A. Legowo. 2004.
Analisis Pangan. Badan Penerbit
Universitas Diponegoro, Semarang.
Poedjiadi, A. 1994. Dasar-dasar Biokimia.
Penerbit UI-Press, Jakarta.
Prakash, A. 2001. Antioxidant Activity
Medallion Laboratories Analitical
Progress, 19(2). Minnesota, Hal 1-3.
Ridho, E. A. 2013. Uji Aktivitas
Antioksidan Ekstrak Metanol Buah
Lakum (Cayratia trifolia) dengan
Metode DPPH (2,2-Difenil-1-
Pikrilhidrazil). Universitas
Tanjungpura, Pontianak.
Sudarmadji, S., B. Haryono, dan Suhardi.
2010. Analisis Bahan Makanan dan
Pertanian. Penerbit Liberty Yogyakarta
bekerja sama dengan Pusat Antar
Universitas Pangan dan Gizi
Universitas Gajah Mada.
Sudarmanto. 1990. Bahan Pewarna Alami
dalam Tanaman Pangan. PAU Pangan
dn Gizi. UGM. Yogyakarta
Soematmaji, D.W. 1998. Peran Stress
Oksidatif dalam Patogenesis Angiopati
Mikro dan Makro DM. Medica. 5:
318-25.
Wijaya, A. G. 2011. Uji Aktivitas
Antioksidan Fraksi-Fraksi Hasil
Pemisahan Ekstrak Etil Asetat Kelopak
Bunga Rosella (Hibiscus Sabdariffa)
dengan Metode Penangkap Radikal
DPPH (2,2-Difenil-1-Pikrilhidrazil).
Universitas Islam Negeri Sunan
Kalijaga, Yogyakarta.

Syafiuddin, M., Ansar, M., Ahmad, A., dan Zussiya, A. et al.2012.Ekstraksi dan
Mustafa, M. 2012. Dasar Dasar Ilmu Analisis Zat Warna Biru (Anthosianin)
Tanah. Universitas Hassanudin Press. dan Bunga Telang (Clitoria Ternatea)
Makassar sebagai Pewarna Alami.Jurnal
teknologi Kimia dan Industri.
1(1).356-365.