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II
Una obra, por modest a que sea, no es producto exclusivo de una persona. Es
imposible agradecer especificamente a todos los que colaboraron en la realizacion
del libro, pero al menos nombrare a quienes tuvieron un papel mas directo. Una
buena parte de las figuras fueron realizadas por el Lic. Juan F. Grigera, la Dra. Ines
G. Mogilner comenzo con parte de la revision en las etapas preliminares; la tarea
de correccion y critica del Dr. Santiago A. Grigera es de destacar por el cuidado
y detalle de las mismas que redundaron en una mejora notable del material final.
Gran parte del material, si bien no en la forma que se present a aqui, fue preparado
con otros propositos y con la participacion de los doctores Lesser Blum y Eugene H.
Stanley; su aporte a la discusion y propuestas sobre aspectos de agua y electrolitos
fue de importancia para el resultado final. Quiero agradecer especialmente su amplia
generosidad al permitir la libre disposicion del material para esta publicacion. Los
doctores Juan de Xammar Oro y Fernando Vericat, asi como otros colaboradores y
alumnos a traves de discusiones y comentarios a veces no conectados explicitamente
con el libro, contribuyeron a una mejor presentacion de algunos temas. Para la
preparacion formato final dellibro he utilizado el comando de estilo apropiado que
me fuera provisto por Dr Roberto Marceca. La actividad del equipo de produccion
de EUDEBA fue fundamentel para una adecuada presentacion de la obra.
Este libro fue realizado en mi condicion de Profesor de la Facultad de Ciencias
Exactas de la Universidad Nacional de La Plata y miembro de la Carrera del Inves-
tigador del Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas (CONICET),
gran parte durante el ejercicio del ano sabatico. Tanto a las personas como a las
instituciones quiero agradecer sinceramente el apoyo recibido sin el cual ciertamente
esta obra nunca se hubiera terminado, y tal vez ni siquiera iniciado.
Dejo para el final el agradecimiento a mi Senora. La redaccion de un libro en los
"rat os libres", como ocurre en nuestra vida cientifica, requiere un apoyo, aliento y
paciencia notables, que quiero destacar particularmente.
J. Raul Grigera
La Plata, octubre 2010
III
1
,
Indice general
Prefacio I
Indice de figuras 5
I. El agua 13
1.1. La molecula de agua ............................... 13
1.1.1 Composicion isotopica. . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . .. 13
1.1.2 Estructura de la molecula de agua ................. 14
1.1.3 Propiedades electricas ................................. 15
1.1.4 Interacciones moleculares ........................ 16
1.2. El enlace de hidrogeno ............................... 21
1.3. Potencial de interaccion para agua ......................... 23
1.4. Hielo....................................................... 24
1.4.1 Estructura del hielo h ................................ 26
1.5. Defectos y propiedades electricas del h .................... 31
1.6. La fase liquida . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 35
1.6.1 Algunas propiedades del agua liquida .................. 35
1.6.2 La estructura del agua liquida ......................... 38
1.6.3 Modelos para del agua liquida ......................... 44
1.6.4 Propiedades dinamicas del agua ....................... 45
1.7. El est ado vltreo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .48
II. Soluciones 55
ILL Potencial quimico de soluciones. . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. 55
11.1.1 Actividad individual de iones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 57
11.2. Hidratacion inonica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. 65
11.2.1 La esfera de hidratacion . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. 66
11.2.2 Dinamica de hidratacion . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 68
11.2.3 Iones "promotores" y "destructores" de estructura . . . . 72
11.3. La serie liotropica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 75
2
Apendices 217
A. Mecanica estadistica 219
A.I. El conjunto microcanonico 220
A.2. El conjunto canonico ...................................... 223
A.3. El conjunto macrocanonico ................................ 223
A.3.1 El factor de Boltzman ................................ 225
B. Espectrosocopia 227
B.I. Introduccion .............................................. 227
B.I.1 La radiacion electromagnetica ................... 227
4
5
6
IILI. Corrimiento relativo del tiempo de relajaci6n dielectrico del agua por mol
de soluto en soluciones de alcoholes y acidos carboxilicos en funci6n de la
entropia de solubilidad R ~Ssol (de ref. [3]). TO es el tiempo de relajaci6n
de agua pura c la concentraci6n molar del soluto. 86
IIL2. Tiempo de correlaci6n rotacional del agua en acetona en funci6n de la
concentraci6n de acetona. Las line as llenas corresponden a 25°C y las line as
quebradas a 5°C. Las line as negras muestra la relajaci6n del 17 0 de la
acetona y las line as grises se refieren a los tiempos de correlaci6n rotacional
del prot6n (HI). Se observa que el cambio en los tiempos de correlaci6n de
la acetona casi no sufre variaciones para las diferentes concentraciones en
tanto que la acetona afecta considerablemente los tiempos de correlaci6n
del agua. Se observa que los tiempos de correlaci6n del agua son mayores
que los de la acetona a pesar del menor tamano de la molecula. . . . . . 87
IIL3. Distribuci6n de enlaces de hidr6geno por molecula para agua pura, agua
en presencia de una pared hidrofilica y agua frente a una pared hidrof6bi-
ca obtenidos mediante simulaci6n por dinamica molecular (de ref. [4]). El
modelo de agua es SPC IE. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. 89
8
IlI.4. Esquema que muestra la base para calcular la energia libre de transferencia
de un soluto desde el agua al interior de una proteina. a) un atomo aislado;
b) una molecula mas compleja. Se observa que para el ultimo caso el area
expuesta total no es igual a la sum a de las areas individuales debido al
apantallamiento de ciertas regiones por los atomos vecinos. 97
IlL5. El momento hidrof6bico de la arginina puede representarse como se mues-
tra en la figura. La fiecha apunta desde a la regi6n mas hidrofilica a la mas
hidrof6bica de la molecula. . . . . . . ................ 100
V.l. Esquema de un sistema formado por una caja cerrada dividida por una
membrana ideal. El sistema contiene solamente una sustancia pero la tem-
peratura y potencial quimico de la misma en cada parte de la caja es
diferente. Se consider a que las propiedades de la sustancia cambian abrup-
tamente cuando la misma pasa de una regi6n a otra, de tal manera que
cada parte del sistema es homogeneo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 153
V.2. Dos compartimientos separados por una membrana idealmente semi- per-
meable. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 159
V.3. Dos recipientes conteniendo agua pura a diferente temperatura Tl > T 2 .
Una caja cubre ambos recipientes para evitar la perdida de agua del sistema. 169
V.4. Esquema de un sistema con un compartimiento inserto en un reservorio.
La sustancia a estudiar se encuentra a tiempo t = 0 en el interior del
compartimiento. 172
V.5. Representaci6n gnifica de la ecuaci6n V. 96 para diferentes valores de 1'. 173
V.6. Dos modelos te6ricos diferentes correspondientes a diferentes sistemas reales.175
V. 7. Representaci6n gnifica de la ecuaci6n V.106 para diferentes valores de 1'. 177
V.8. Curvas de captaci6n: a) para un sistema en un reservorio; b) para un
sistema en un recipiente de tamano finito. . . . . . . . . . . . . . . . . 179
V.9. Curvas de lavado: a) para un sistema en un reservorio; b) para un sistema
en un recipiente de tamano finito. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 179
VI.l. Difusi6n simple y difusi6n facilitada a traves de una membrana que separa
dos compartimientos 1 y 2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 184
VI.2. Esquema del mecanismo cinetico de la difusion facilitada. 185
EI agua
La formula quimica del agua es H 2 0, pero, puesto que existen diferentes isotopos
tanto del oxigeno como del hidrogeno, el agua natural es en realidad una mezcla
de formas isotopicas. Particularmente el hidrogeno tiene dos isotopos estables, 1 H
(usualmente indicado como H) y 2H (deuterio, indicado regularmente como D), y un
isotopo radioactivo 3H (tritio, indicado como T), que tiene una vida media de 12,6
arros. El oxigeno tiene tres isotopos naturales, 160 (el isotopo mas abundante), 170
y 180. Se conocen tambien tres isotopos radioactivos artificiales 140, 150 Y 190.
Pese a que la combinacion de los isotopos naturales de oxigeno e hidrogeno darian
18 especies isotopicas diferentes (=3x3x2) de agua, este numero teorico se reduce
lLoado seas, mi Senor, por la hermana agua, la cual es muy util y humilde y preciosa y casta.
13
14 Temas de Biofisicoqufmica
Dado que el equilibrio esta fuertemente desplazado para la derecha en una mezcla
de agua y agua pes ada la especie que encontraremos predominantemente sera HDO.
De la misma manera una preparacion de agua marcada con tritio tendra como especie
marcada moleculas de HTO.
H
Figura I.1: Diagrama de una molecula de agua.
Cuadra I.1: Parametras de las moleculas de H 2 0 D 2 0, y HDO (los simbolos se refieren a la figura
1.1)
HDO
LONGITUD DE ENLACE: rb/nm
Molecula libre 0,09575 0,095718 0,09571
Molecula con enlace de hidrogeno 0,097-0,101
.ANGULO: HOH(j3)
Molecula libre 104,474° 104,523° 104,529°
Molecula con enlace de hidrogeno 105°-109°
o t o
.:~t#.~ ~~ ...,.....~
H ••••••• ••••••• H
v,=1440 em-'
o
;v...
H/' ····.. H
iJiI ~
v,=3755,79 em-' "'"
Figura I.2: Modos norm ales de vibraci6n de H 2 0 y D 2 0. Los enlaces se represent an como
line as de punt os y las fiechas indican la direcci6n de desplazamiento de cada micleo. Se
indica la frecuencia correspondiente a cada modo.
Figura I.3: Densidad electronic a de una molecula de agua calculada mediante mecamca
cwintica. Se muestra solamente la mitad del espacio. La parte central -cortada- corre-
sponde a la densidad electronic a alrededor del atomo de oxigeno, en tanto que los otros dos
picos pequenos estan localizados sobre los protones. Notese que una considerable densidad
electronic a se encuentra a 10 largo de las uniones O-H.
F(r)
au
=-- (1.1 )
or
Haremos el anaJisis de los componentes de la interaccion observando los pot en-
ciales correspondientes.
2La "forma" de la molecula proviene de la interacci6n con nuestro elemento de detecci6n, en este
caso otra molecula del mismo tipo.
18 Temas de Biofisicoqufmica
V(r)
Repulsion
Las fuerzas de repulsion son fuerzas de corto alcance que forman parte de las lla-
madas fuerzas de superposicion, debidas a superposicion de los orbit ales moleculares.
Estas fuerzas (de superposicion) pueden dar lugar a una fuerte repulsion 0 a una
fuerte atraccion. La atraccion se produce cuando existe intercambio cwintico dando
lugar a los enlaces quimicos. Cuando las moleculas tienen todos sus posibles enlaces
form ados , las fuerzas de atraccion est an excluidas y, consecuentemente, debido al
principio de exclusion de Pauli 3 se produce la repulsion.
El potencial de repulsion se represent a apropiadamente mediante una expresion
exponencial,
(1.4)
3En terminos simples el principio de exclusi6n nos dice que dos particulas no pueden tener todos
sus numeros cuanticos iguales.
1. Agua 19
Fuerzas de dispersion
(1.5)
Para el agua se han informado diferentes valores de la constante C 6 segun la
metodologia utilizada para el calculo, algunos de esos valores se muestran en la
tabla 1.2.
La composicion de las componentes de repulsion y dispersion producen un poten-
cial de simetria esferica del tipo mostrado en la figura 1.4. Estos potenciales describen
muy bien, con los parametros apropiados, la interaccion de atomos y moleculas esferi-
cas no-polares. Sus primer as aplicaciones se hicieron para gases nobles. La expresion
mas utilizada es la del potencial de Lennard-Jones
(1.6)
(j12 (j6)
ULJ(r) = 4E ( r12 - r6 ' (1. 7)
20 Temas de Biofisicoqufmica
Interaccion electrostchica
(1.8)
(1.9)
(1.10)
(1.11 )
donde <I> mnt: ( 'Ij!, (), ¢) son funciones que dependen solamente de las coordenadas po-
lares ('Ij!, (), ¢) que describen la orientacion de las moleculas, J-l es el momenta dipolar
y Q el momenta cuadrupolar.
A altas temperaturas (kT » J-l2/ r 3) , las moleculas rotan rapidamente y la inte-
raccion se promedia en los angulos y depende solamente de la distancia. Un ejemplo
es el vapor de agua. La interaccion dipolar, que expresamos en terminos de las
orientaciones moleculares en la ecuacion 1.9, despues del promedio resulta:
1. Agua 21
(1.12)
donde vemos que no solamente hemos perdido la dependencia angular sino que
decrece con la inversa de la sexta potencia, en tanto que sin el promedio esta de-
pendencia es de la inversa del cuba de la distancia. Esto nos indica que para altas
temperaturas la influencia del momenta dipolar es de corta distancia.
A-H···B
• Para un dado compuesto el radio de van der Waals obtenido por la distancia
de equilibrio en un cristal da una idea de la "distancia minima" de aproxi-
macion entre atomos. Para un enlace de hidrogeno la distancia A - H - - - B es
generalmente menor que la suma de los radios de van der Waals. Este hecho
es importante en el analisis de estructuras biologicas.
Cooperatividad
4Para un oscilador, la energia no es un continuo sino que esta discretizada. El valor minimo
corresponde al nivel n=O, de alli su designaci6n como energia de punta cera.
1. Agua 23
Este hecho se puede observar analizando los modos norm ales de vibracion. De
alli se puede ver que la estabilidad del enlace se incrementa con la presencia de otro
enlace de hidrogeno.
Desde el punta de vista de la estructura y dinamica del agua, la cooperatividad
juega un papel importante, como veremos mas adelante. Asimismo el proceso de for-
macion y desarmado de estructuras biologic as basadas en la existencia de numerosos
puentes de hidrogeno toma una dinamica particular.
IV) Modelos polarizables. En este caso los terminos no-aditivos se toman a traves
de la introduccion explicit a de la polarizabilidad.
24 Temas de Biofisicoqufmica
r) rigidos;
II) flexibles.
1.4. Hielo
Llamamos hielo a la fase solida del agua. En realidad no hay un unico hielo,
ya que el agua cristaliza de diferente forma de acuerdo a las condiciones en las
que se produce el cambio de fase. El estudio del hielo y sus diferentes formas no
solamente es importante desde el punta de vista de sus propiedades relacionadas con
la glaciologia, sino, ademas, constituye un camino para entender el comportamiento
del agua liquida. Se supone que algunas de las caracteristicas de ciertas fases del
hielo se encuentran presentes en el agua liquida.
~q ~q ~"(5 '"~'
q
-W+ -2q
m
C- +q
-q +q +q +q +q
Figura I.5: Algunos modelos de agua (ST2 Ref. [5]; MCY Ref. [4]; SPC Ref. [7]; SPCjE Ref. [8]).
La earga q se expresa en terminos de la earga del electron e.
Cuadra I.3: Resultado del ealeulo de propiedades del agua para diferentes modelos (refereneias
en la figura 1. 5) a 298 K y densidad = 0.997 g em -3.
La figura 1. 7 muestra el diagrama de fases del agua y alli podemos ver en que condi-
ciones existen las diferentes fases del hielo. Lo determinante de cada fase es la presion
y la temperatura. La fase que podiamos llamar hielo "comun" es el hielo h que se
forma a presion atmosferica. Tambien existen formas vitreas cuyo interes es cre-
ciente tanto debido al interes basico como aplicado. En la seccion 1. 7 present amos
brevemente el tema.
El diagrama de fases del agua es complejo y aun no totalmente determinado.
Vemos cuatro formas de hielo (II, IV, VII y IX) que no se forman del agua liquida
sino como transformaciones de otras fases de hielo.
En todas las formas cristalinas de hielo encontramos que cada oxigeno esta conec-
tado mediante puentes de hidrogeno con cuatro vecinos. Cada oxigeno posee dos
puentes como dador y dos como aceptor de prot ones (ver figura 1.6). Estos puentes
no pueden romperse simplemente con la presion. Cuando la presion es extrema se
produce distorsion, como por ejemplo en el caso de las formas VII y VIII, el numero
de primeros vecinos aumenta a ocho, cuatro ligados mediante puentes de hidrogeno
y cuatro que no 10 est an. Obviamente se ha producido una gran distorsion de la
estructura tetraedrica original.
26 Temas de Biofisicoqufmica
Figura I.6: Coordinaci6n de la molecula de agua en el hielo. Las esferas pequenas represent an
los atomos de hidr6geno.
Los estudios de rayos X hicieron posible la descripci6n cristalina que hemos men-
cionado; sin embargo, las posiciones de los prot ones no se pueden determinar con
0
6El lingulo tetraedrico ideal es de 109,41 en tanto que para el agua ese lingulo se modifica ya
,
Temperatura °C
30
320
40
280
240
-40
.' VI 200
(.
-80 II
,, '.
, VIII
160
-120 \
.,:' \
\
, 120
-160 :, '
\
.,:'" IX
\
-200 ~__~~__~-L~~__~~~80
5 10 20
Pres i6n/ki lobars
dicho metodo, 10 que es posible mediante difraccion de neutrones. Ese tipo de estu-
dios arroja interesantes resultados.
Las posiciones de los prot ones a 10 largo de la linea 0-0 indica que, por una
parte, el enlace 0 - H es aproximadamente O.003nm (o.03A) mas largo que en la fase
vapor (ver tabla 1.1) pero -10 que es mas notable- no es posible asignar un unico
proton a largo del enlace O ... 0. Considerando unicamente la posicion de los atomos
de oxigeno, tal como ocurre con los datos provenientes de difraccion de rayos X, se
obtiene una red ordenada, como la que se muestra en la figura 1.8. Los resultados
experiment ales de difraccion de neutrones son compatibles con esa estructura orde-
nada de la red de atomos de oxigeno en tanto que aparecen dos "medios" prot ones a
10 largo del enlace 0-0. 7 Para la interpretacion de este resultado debemos tener en
cuenta que los prot ones no pueden estar divididos y que la imagen que obtenemos es
el promedio de toda la red. Por 10 tanto podemos imaginar que la orientacion de las
moleculas de agua puede ser diferente de una region a la otra. Esos "medios" pro-
tones a 10 largo de cada enlace nos indican que el proton puede estar en cualquiera
de los extremos del mismo. La estructura resulta desordenada cuando pretendemos
tomar la totalidad de la molecula de agua. La figura 1.9 muestra esquematicamente
como es posible tener una red ordenada considerando oxigeno e hidrogeno(Fig. L9a).
La figura L9b muestra una de las tantas posibilidades de estructuras desordenadas
respecto de los protones.
7Esto significa que la densidad obtenida en cada punta corresponde a la mitad de la densidad
de un prot6n.
28 Temas de Biofisicoqufmica
Un cristal de hielo sin defect os cumple con las llamadas reglas de Bernal que se
pueden expresar como:
r) Cada sitio de la red esta ocupado por una molecula de agua unida a sus cuatro
primeros vecinos con estructura tetraedrica.
II) Cada molecula de agua permanece intacta (un atomo de oxigeno y dos pro-
tones).
a) ~ ~ ~ ~ b) ~ ~ ~
---9- H - - - 9 - H - - - 9- H - - - 9- H ---O-H---O--- H-O-H ---O-H
I
, I I I
, : ~ : :
H , H H
1 H
I
H
I
H
I
---O-H---O-H---O-H
I I I
H
I
---O-H
,I
I
I
I
,
I
I
I
I
~
I
H-O --- H-O-H ---0 --- H-O---
I
I
~ t;i ~ 8 ~ ~ : ~
---9- H - - - 9 - H - - - 9- H - - - 9- H ---O-H---O--- H-O---
I T I
H-O---
I
: H H :
Figura I.9: Es posible tener una red de hielo orden ada respecto a los atomos de oxigeno y
varias desordenadas respecto a los prot ones manteniendo la integridad de las moleculas de
agua y solamente un proton a 10 largo de la linea 0-0. a) esquema de la red ordenada. b)
una de las numerosas posibles estructuras desordenadas.
Nos podemos preguntar cuaJ es la razon por la cual el hielo no es capaz de encon-
trar su minimo energetico al descender la temperatura, 10 que significaria llegar a la
estructura ordenada que es la de menor energia de red. Las diferencias energeticas
entre numerosas configuraciones en el hielo Ih es muy pequeiia. Cuando la tempe-
ratura cae por debajo de un cierto valor, los movimientos de orientacion molecular
se ven restringidos mucho antes de lograr alcanzar el minimo de energia.
Pauling propuso una teoria aproximada para estimar la entropia residual del hielo.
Considera que el numero de configuraciones 0, ligados a la orientacion molecular
que define las posiciones de los prot ones , esta ligado a la entropia a traves de la
expresion
8 = kInO (1.15)
Un cristal de hielo con N moleculas contiene 2N O-H-O enlaces (despreciando
los efectos de superficie). Los prot ones de cada enlace pueden tener dos posiciones,
de 10 que resultan 22N configuraciones de protones. Pese a que hay cuatro enlaces por
30 Temas de Biofisicoqufmica
molecula, 10 que daria 16 posibles configuraciones por cada una de ellas, solamente
seis satisfacen las reglas de Bernal, 10 que reduce el numero en (6 x 4/16)N. Tenemos
entonces 2(24/16)N = 2(3/2)N, de tal forma que es n = (3/2)N obteniendo finalmente
valor que es cercano al valor experimental (1.14). Debemos notar que la aproximacion
hecha por Pauling desprecia correlaciones. Posteriores caJculos mas rigurosos dan
valores de la entropia residual de 0.8145 cal mol-1K- 1 = 3.408 J mol-1K- 1 [9], muy
cercanos a los obtenidos por dicho autor.
~v.-~'
Xi
't;'~'~f
Figura 1.10: Defectos de orientaci6n en hielo rho Enlace doblemente ocupado (D); enlace vacio
(L); defecto (X), una variante del Do
Otras variantes estructurales de hielo, como los hielos II, VIII y IX, tienen es-
tructuras de proton ordenadas.
1. Agua 31
Defectos ionicos
Si un proton se mueve a 10 largo del enlace, se produce la violacion de la segunda
ley de Bernal; es decir, se pierde la integridad de dos moleculas de agua, con la
consecuente formaci on de un par ionico (H30+ y HO-). La figura 1.11 muestra el
proceso esquematicamente.
Tambien aqui el par puede aniquilarse 0 migrar. La migracion, estimulada por
un campo electrico, es la contribucion mas importante a la conductividad electrica,
ya que la conductividad debida al movimiento electronico es despreciable.
Tal como se observa en la figura 1.11 a 10 largo del enlace 0-0 se forman dos
minimos relativos de energia para el proton, con una barrera de 14 kcaljmol entre
enos. El proton debe superar esta barrera de energia y se ha postulado que tambien
podria pasar mediante efecto tunel cwintico. Esta alternativa, si bien atractiva, no
ha sido confirmada.
Figura I.11: Par ionico; a)Red ideal; b) Par ionico producido por el corrimiento del proton;
c) Separacion del par ionico por corrimiento del proton.
1>,=3.2
",,_ _1>=1.0
1L-__~____-L____~__~_____
1 16 16 16' 16'
Frecuencia / Hz
Figura I.12: Parte real de la permitividad dielectric a (E') en funci6n de la frecuencia del hielo
Ih.
Cuadra I.4: Prapiedades de los defect os i6nicos y de orientaci6n del hielo Ih a-10° C
Relajaci6n dieh§ctrica
Consideremos un material cuyas moleculas poseen un momento dipolar, como en el caso
del agua. La aplicaci6n de un campo elect rico a la muestra producini un ordenamiento
de los dipolos en la direcci6n del campo, este proceso se denomina polarizacion. Cuando
cesa la aplicaci6n del campo elect rico esta polarizaci6n decae. La figura I.13a muestra
el proceso de decaimiento de la polarizaci6n en funci6n del tiempo. El tiempo carac-
teristico de este decaimiento se denomina tiempo de relajacion (T). El decaimiento de la
polarizaci6n responde a las caracteristicas del sistema; el tiempo de respuesta depende de
la facilidad en la que los dipolos responden a la aplicaci6n y corte del campo electrico. A
mayor viscosidad, por ejemplo, la respuesta sera mas lent a y en consecuencia el tiempo
de relajaci6n sera mayor. La expresi6n mas simple del decaimiento de la polarizaci6n es
una funci6n exponencial.
P(t) = P(O)e(-tjr).
* EO -
E (w) = EO + .Eoo ,
1 + zw T
, EO - Eoo
E (w) = Eoo + 1+ (w T
)2'
donde E*(W) = E'(W) + iE"(W), con (w) la frecuencia; EO y Eoo son la permitividad a fre-
cuencia nula (la 'constante dielectrica''') y la permitividad a frecuencias extremadamente
altas respectivamente, y T el tiempo de relajaci6n, que es el mismo que corresponde a la
expresi6n en dominio de tiempo.
Cuando existe mas de un proceso de polarizaci6n se deb en sumar las contribuciones de
cada uno de ellos. No todos los procesos pueden representarse con un decaimiento simple.
1. Agua 35
a) b)
o.oo+--------.:==~--
o tierrpo Frecuencia (escala logaritmica)
1B.O"~
Volumen! cm'mol .,
19.5
'. f(()~O .
BcD
lii.Oil':
-.. (J .{ r;
J9.0
Temperatura/oC
Figura I.14: Densidad del agua en funcion de la temperatura para diferentes composiciones
isotopicas.
gEl grafico no muestra la pequena variaci6n de C p en el estado liquido, que tiene un pequeno
pica a 35°C (311 K).
1. Agua 37
40~____~____~~__~~__~~___
24
20 Punta de fusi6n
--r
16 ~
!
12
4 Punta de ebullici6n
-4
C __ _ calmol
p
-8
H-rt., _"""",,'kcalmol-'
100 ~
Puntos de fusi6n
o
E
.,"
E
Co
~ -100 H
I-
J\sH 5
PH 5 SnH 4
CH SiH - ~ CH
~eH4
4 4
-200
ebullicion indica los cambios notables del calor latente de fusion y vaporizacion.
Es interesante observar los valores de las entalpias de fusion y de vaporizacion
en compuestos isoelectronicos de hidruros. La figura 1.17 muestra las entalpias de
vaporizacion. lO Es de notar que el metano (CH 4 ) no posee capacidad de formaci on
de puentes de hidrogeno, en tanto que el amoniaco (NH 3 ), el acido fluorhidrico
(HF) y el agua (H 2 0) si 10 hacen. La cohesion de los liquidos que forman puentes
de hidrogeno, que frecuentemente denominamos estructurados, eleva el punta de
ebullicion y produce un alto calor latente.
EI concepto de estructura
a) b) c)
ns g(r) s
6 6
4 4
2 2
3 3
rl rl
Figura 1.18: Funci6n de distribuci6n radial. (a) Red regular bidimensional. (b) Gnifico del
mimero de ,itomos a una distancia r del de referencia. (c) La funci6n de distribuci6n radial
obtenida normalizando el gnifico (b).
Es facil ver que un cristal satisface estas condiciones. Resulta posible definir
unidades estructurales (la celda unidad); existe un numero finito de estas y, final-
mente, el tiempo de vida de las estructuras excede largamente el periodo de vi-
bracion molecular. Esto no ocurre en el est ado amorfo, 0 en un vidrio, donde existen
unidades estructurales de largo tiempo de vida pero su numero no es finito. Es in-
correcto asi hablar de "estructura de un vidrio". En un liquido sabemos que existen
estructuras de corto alcance (en el parrafo siguiente discutiremos el caso) , pero no
todos cumplen con la condicion 3. Solamente los liquidos estructurados pueden tener
estructuras del tiempo de vida apropiado y, como veremos, el agua como tal satisface
claramente esa condicion, 10 que puede demostrarse experimentalmente.
a) b) c)
ns g(r) s
6 6
4 4
2 2
3 3
rl rl
Figura I.19: Un "liquido bidimensional" y su funcion de distribucion radial g(r). Notese que
no posee la regularidad del solido de la Fig.LI9.
distancias de los primeros vecinos senin en todos los casos muy similares y aumen-
tara la dispersion de las medidas a medida que tomemos vecinos mas lejanos, tanto
mas cuanto mas desordenado sea el cristal.
La figura L18b muestra el resultado de nuestro grafico que, debido al gran orde-
namiento de nuestro esquema, posee picos muy definidos. A medida que nos alejamos
del centro, el numero de vecinos en general crece, ya que el tamaiio del anillo alrede-
dor de la referencia aumenta. l l Es interesante normalizar el grafico con el valor
medio del numero de atomos que se encontrarian en el anillo; es decir, el producto
de la densidad por el area (para el caso tridimensional seria el producto de la dens i-
dad por el volumen del casquete esferico). En nuestro ejemplo obtenemos el grafico
que se muestra en la figura L18c.
La curva de la figura L18c es la Juncian de distribucian radial 9 (r) y es la densidad
de probabilidad de encontrar n particulas en un intervalo dado.
Con el mismo concepto podemos generalizar a funciones de distribucion angulares
alrededor de un punta dado g(()) e incluso considerar mas variables g(r, ()) 0 g(r, (), ¢).
En la funcion de distribucion radial de los solidos, como la del ejemplo, los picos
est an espaciados a intervalos regulares y est an muy bien definidos practicamente
para cualquier distancia. En el caso de los liquidos esta regularidad no se encuentra
y a grandes distancias los picos desaparecen.
La figura 1.19 muestra el caso para un "liquido bidimensional".
Para un liquido real (tridimensional) el promedio del numero de particulas en
una esfera de radio R, excluyendo la particula central, se puede escribir como:
11 El area del anillo circular de ancho t:,. r a una distancia r del centro es a = 'if [2r t:,. r + (t:,. r ) 2].
1. Agua 41
g(r)
_Ill Argon
3
Agua
o 2 3
ria
Figura I.20: Esquema de la funcion de distribucion radial para agua y argon liquido. Las
distancias se expresan en unidades del diametro molecular de cada especie
a)
Figura I.21: Distribucion de los primeros y segundos vecinos en (a) un liquido simple (ej.
argon liquido) y (b) agua.
~l A g(;or a)
d)
0~15t
100C
:~02
g(r)04 OBb ) ::l 75C
50C
1 10 l
o 10 l
~I"' "' "'.J '" 4C
~
0.2 0.4 O.B
0.0 L::....=:::':::::::::L::::::;:::::::;:::::::;:::::::;:=-l
0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
r I nm r/nm
Figura I.22: Funciones de distribuci6n radial para el agua (datos de ref. [17]): a) go-o(r),
b)gO-H(r), c) gH-H(r), (d) go-o(r) experimental a diferentes temperaturas (redibujado de
ref. [18])
Las tres funciones de distribucion del agua nos permiten sugerir un modelo de
agua liquida que refleje los resultados experiment ales disponibles. Sin embargo, la
complejidad del agua no permite obtener facilmente un modelo totalmente realista.
Si analizamos la estructura, tal como la hemos definido, vemos que las funciones
de distribucion, que reflejan el promedio en tiempo y espacio de la distribucion
molecular, nos informan la existencia de ciertas 'entidades estructurales' tanto en
el caso del agua como en el del argon. Estas entidades est an definidas en el corto
alcance, 10 que se deduce de las curvas ya que, a medida que nos apart amos de la
molecula de referencia los picos, representativos del orden, se esfuman. Si alguno de
los dos liquidos posee estructura dependera del tiempo de vida de esas entidades
(como definimos en 1.6.2). Ese tiempo de vida no 10 podemos conocer a traves de
las funciones de distribucion sino que debemos apelar a metodos que nos informen
sobre la dinamica molecular.
Para el estudio de la dinamica del agua se utilizan tecnicas espectroscopicas
entre las que encontramos espectroscopias infrarroja y Raman (Apendice B), re-
lajacion dielectrica, resonancia magnetica nuclear (Apendice B §B.3) y dispersion
de neutrones. 12 De est os experiment os se encuentra que para el agua el periodo de
vibracion inter-molecular es de aproximadamente 2 x 10- 13 segundos, en tanto que
el tiempo de vida de las estructuras es del orden de 10- 11 segundos, por 10 que es
posible definir la estructura.
12La dispersi6n de neutrones lent os por el agua liquida es de dos tipos: cuasi-elastica -con muy
poco intercambio de energia entre los neutrones y elliquido, e inelastica -con el intercambio de una
energia definida. La dispersi6n cuasi-elastica permite obtener informaci6n dinamica.
44 Temas de Biofisicoqufmica
Datos experimentales
Uno de los metodos, que ya hemos mencionado, para el estudio de las propiedades
dinamicas del agua es la relajacion dielectrica. El espectro dielectrico del agua se
muestra en la figura 1.23, donde, como es habitual, se grafica la permitividad en
funcion del logaritmo de la frecuencia (en este caso en Hertz (ciclosjsegundo). El
comportamiento de la permitividad del agua con la frecuencia no es exactamente
del tipo de Debye sino que existe una pequeiia distorsion que se puede expresar
con un exponente en el termino WT, escribiendolo como (WT)l-a. Dado que el valor
experimental de 0: resulta igual a 0,02 (1-0: = 0,98) es posible considerar un proceso
tipo Debye para la mayoria de los usos.
El tiempo de relajaciondel agua es igual a 9.26xl0- 12 S (a 20°C) y, de acuerdo
a la teoria de relajacion de Debye, se 10 puede relacionar con la viscosidad mediante
la formula
(1.18)
(1.19)
46 Temas de Biofisicoqufmica
80J----~
:§ 60
·5
~ 40
20
o
1 2
10 10
Frecuencia / GHz
Figura I.23: Espectro dielectrico del agua liquid a a 10 °C (EO = 82,0; E(X) = 4,5; T = 9,26 X
1O- 12 s y a = 0,02).
Cuadra I.5: Coeficientes de auto difusi6n D de agua a diferentes temperaturas. [J. H. Wang, 1.
Phys. Chern. 69: 4412 (1965)].
0,,2
1,6
0..
-2
-g 1,2
"0
·iii
o
()
~ 0,8
0,4
o 2 4 6 28 10
Presion/1000 kg em
Figura I.24: Coeficiente de viscosidad del agua bajo presion a diferentes temperaturas.
Energia de activacion
Hemos mencionado a la fase liquida como uno de los est ados mas complejos y
sobre el cual tenemos un conocimiento inferior al de los solidos cristalinos. Los es-
tados desordenados est an aun menos estudiados. Existen diferencias, que podrian
catalogarse de sutiles, entre los est ados desordenados (vitreos y amorfos) que men-
cionaremos en el desarrollo del tema. Pondremos enfasis en el est ado vitreo.
Existen materiales que al enfriarse por debajo del punta de fusion (T f) no crista-
lizan sino que conservan el des orden propio de los liquidos y adquieren la rigidez de
los solidos. Sus propiedades resultan por demas interesantes en tanto que sus dife-
rencias con los solidos cristalinos repercuten en su comportamiento y, para nuestro
interes actual, en el comportamiento de los sistemas biologicos.
Si se realiza un enfriamiento muy rapido de un liquido, el reordenamiento mole-
cular no puede alcanzar un est ado de energia 10 suficientemente bajo y no logra la
cristalizacion. Existen, por otra parte, sustancias en las que a cualquier velocidad,
por baja que sea en la escala de laboratorio, no se logra la cristalizacion, son las
llamadas sustancias "formadoras de vidrios" (glass forming). Un caso interesante es
el dioxido de silicio (Si0 2 ) el cualluego de fundirse por mas lenta que sea su velocidad
de enfriamiento (dentro de los procesos realizables) no cristalizara produciendo un
"vidrio" del tipo que utilizamos en nuestras ventanas.
La figura 1.25 muestra el proceso de solidificacion desde el liquido al cristal y,
alternativamente, a diferentes est ados vitreos pasando por liquidos sobreenfriados.
Vemos en la figura que, bajo circunstancias que podriamos llamar "regulares"
(10 que significa un enfriamiento a una velocidad tal que el sistema pueda buscar
sus minimos energeticos apropiadamente), se produce la cristalizacion. La curva de
volumen especifico muestra que cuando desciende la temperatura se produce una
caida abrupta a una temperatura que denominamos temperatura de fusion (T f).
Ese cambio brusco marca una transicion de primer orden. Si se trata de un liquido
formador de vidrio, 0 la velocidad de enfriamiento no es 10 suficientemente baja, la
curva de volumen especifico continua su descenso lineal por debajo de T f durante
un cierto intervalo en un est ado de liquido sobreenfriado. Por debajo de una cierta
1. Agua 49
Vidrio •.
~~
Cristal
Figura I.25: Diferentes caminos de solidificaci6n para un liquido formador de vidrio en termi-
nos del volumen V. Las line as quebradas indican el efecto de disminuir la velocidad de
enfriamiento. Para una velocidad extremadamente reducida la linea tomaria el valor del
cristal para T=T=.
13De acuerdo con la definici6n que dimos de estructura seria impropio hablar de estructura de los
vidrios.
50 Temas de Biofisicoqufmica
Tg / K
• SrO, 1473 .. /
.. GeO,
• Na 2 ·2Si0 2 713
• ZnCI,
'" MCH
380
85
810
'1/
./ //
~
enro
Q)
en
·0
D As 2Se 2
.. GeSe,
455
695
. .'
/"/
/ i
!
/:
0..
./J / E
0.. L', CKN 217
E + CNH 338
/ /
OJ
0
--l
o o-tp
v pp
• tpp
246
363
•
/
OJ
0
--l
;?1 ty'
~'" .jT.
-+c+-.+.--------- ++-+" ....
Tg/T
generales el fenomeno se 10 designa como estres hidrico ya que en ambos procesos las
transformaciones son muy similares. El uso de carbohidratos (obviamente en solu-
cion acuosa) para la proteccion del est res hidrico es bien conocida y las propiedades
en el est ado vitreo son de vital importancia.
Bibliograffa
[2] C.N.R Rao, Theory of H-bonds, en: Water, Vol. 1, editor F.Franks, Plenum
Press, 1972.
[3] A. Ben Nairn & F.H. Stillinger, en: Structure of Water and Aqueous Solutions,
editor, RA. Horne, Wiley Interscience, New York, 1972. Pg. 295.
[4] O. Matsuoka, E. Clementi & M. Yoshimine, J, Chern. Phys., 64, 1351, 1976.
[5] F.H. Stillinger & A. Rahman, J. Chern. Phys., 60, 3336, 1974.
[6] W.L. Jorgensen, J. Chandrasekhar, J.D.Madura, RW. Impey & M.L. Klein, J.
Chern. Phys., 79, 926, 1983.
[7] H.J.C. Berendsen, J.P.M. Postma, W. F. van Gunsteren & J. Hermans, en:
Intermolecular Forces, editor. B. Pullmann, Reidel, Dordrecht, 1981. Pag. 331.
[8] H.J.C. Berendsen , J.R Grigera & and T.P. Straatsma. J. Phys. Chern., 91,
6269, 1987.
[9] E.A.DiMarzio & F.H. Stillinger,J. Chern. Phys., 40, 1577, 1964.
[10] P. Flubacher, A.J. Leadbetter & J.A. Morrison,J. Chem.Phys, 33,1751. 1960.
[14] S. Frank & W.Y. Wen, Discuss. Faraday Soc., 24, 133, 1957.
[15] O. Ya. Samoilov & T.A. Nosova J. Struct. Chern. (URRSS), 5, 10, 1964; Zh.
Fiz. Khim., 20, 10, 1946.
53
54 Temas de Biofisicoqufmica
[16] G. Nemthy & H.A. Sheraga J. Chern. Phys, 36, 3382,1962; J. Chern. Phys, 41,
680, 1964.
[18] A.H. Narten, & H.A. Levy, Science, 65, 2263 ,1969.
Lecturas suplementarias
General
El siguiente material present a una descripci6n detallada del agua en sus diferentes
aspectos y puede ser una fuente litil para el interesado en profundizar el estudio sobre
el tema.
• N.H. Fletcher The Chemical Physics of Ice, Cambridge University Press, Cam-
bridge, 1970.
Soluciones
En el capitulo anterior hemos visto algunas propiedades del agua, ya que la vida es
imposible sin ella. Sin embargo, el agua en los seres vivos no se encuentra nunca pura;
por 10 tanto, en nuestro camino hacia el estudio del medio en el cual se desarrolla la
vida, pasaremos a un est ado mas complejo: las soluciones.
(11.1 )
donde R es la constante de los gases, T la temperatura absoluta, Xi la fraccion molar
de la componente i Y J-l: el potencial quimico del est ado de referencia, que depende
unicamente de la presion y temperatura. 2
En los casos que nos interesan no se puede considerar que las soluciones se compor-
taran como soluciones ideales. Debemos ampliar la definicion de manera de incluir
soluciones reales. Una de las alternativas es utilizar un parametro que reemplace
la fraccion molar del componente de manera de guardar la forma de la expresion
11.1. Este nuevo parametro es la actividad de la especie iesima: ai. La expresion del
potencial quimico para soluciones reales queda:
2Esta definici6n de la soluci6n ideal a partir de la expresi6n 11.1 es mas rigurosa que la que se
suele utilizar diciendo que es aquella formada por particulas que no interactuan entre sf.
55
56 Temas de Biofisicoqufmica
(11.2)
expresion que es valida independientemente de cuanto la solucion se aparte de la
idealidad. De la misma manera que en la ecuacion 11.1, 1_< es funcion solamente de
la presion y temperatura.
Es util escribir la ecuacion 11.2 como:
(11.3)
donde hemos reemplazado al actividad por el producto de la fraccion molar del
componente i multiplicada por el coeficiente de actividad del mismo, Ii, el cual
puede depender tanto de la presion y temperatura como de la concentracion.
La ecuacion 11.3 no define completamente el coeficiente de actividad Ii (y conse-
cuentemente ai) ya que es necesario establecer en que condiciones el coeficiente de
actividad es igual a la unidad. Existen diversas convenciones para definir univoca-
mente Ii segun las caracteristicas de la solucion.
Para el caso en el cual el 0 los solutos son solidos 0 gaseosos tendremos:
(11.6)
donde 17+ Y 17- son los coeficientes estequiometricos. Podemos defiinir el potencial
quimico media como
(II. 7)
donde 17 = 17+ + 17-· Combinando las ecuaciones 11.7 y 11.2 llegamos directamente a
la actividad media
(II.8)
II. Soluciones 57
(11.9)
Es claro que la actividad media no nos refleja el hecho de que en muchos pro-
blemas biologicos existe especificidad. Por ejemplo, la funcion nerviosa depende de
las actividades (concentraciones) de [K+] y [Na+] en tanto que no depende de la
actividad del anion.
Por esta razon es frecuente ver referencias a la concentracion "libre" de iones 0
"efectiva" mas que ala concentracion total 0 la actividad media de la sal.
Es posible en principio medir la actividad individual de iones mediante electrodos
selectivamente sensibles a un ion en particular, como se hace con los protones. Estos
electrodos est an disponibles en el comercio para diferentes iones pero aun cuando
contemos con la selectividad completa, 10 que no es posible obtener, no nos libramos
del problema de la referencia.
Existen varias tecnicas experiment ales para medir la actividad (0 los coeficientes
de actividad) de soluciones, incluidas las sales, tales como la presion osmotica, la
presion de vapor y la fuerza electromotriz (fern) de pilas. Todas estas propiedades
dependen del potencial quimico de la solucion y, en consecuencia, permiten calcular
los coeficientes de actividad.
Electrodos selectivos
(11.10)
(11.11 )
donde KAB es la constante de asociacion del ion B con la membrana, la cual depende
de cuan select iva es la membrana al ion A en presencia de B.
Incluso si tuvieramos una selectividad perfecta tendriamos siempre presente el
potencial de juntura. Este potencial depende incluso de la forma de la juntura y la
agitacion de la interfase inmediata a la misma. Este valor tiene una incerteza del
orden de 5mV. La calibracion con soluciones del ion investigado son titiles en tanto
conozcamos la actividad de ese ion en las soluciones de calibracion, 10 que dudosa-
mente ocurra. La calibracion no sera buena cuando la diferencia en concentraciones
y composicion ionica de la solucion problema sea muy diferente de la del patron.
La dependencia funcional del potencial con la actividad nos indica que un error
de 5mV, por ejemplo, no es grave para actividades muy pequeiias (para las cuales
la aproximacion a ~ x puede ser aceptable) pero puede llegar a dar errores del
orden del 50 % a actividades medianamente altas. En la figura 11.1 podemos ver esta
dependencia donde se ha indicado en lineas de punta el rango de variacion para un
valor de E j de ±5 mY.
II. Soluciones 59
ElmV
-136
:+-A---+:
, '
, '
-200 '-'--'-'------'--_----"''--_ _'L-_ _--'-_ __
0,001 0,021 0,041 0,061 0,081
Actividad
Figura 11.1: Fuerza electromotriz generada en una pila con un electro do selectivo en funci6n
de la actividad i6nica. La linea llena corresponde al valor con E j = 0 y las line as de puntos
al result ado con E j ± SmV. Se han seiialado dos valores de E y su correspondiene error (~)
debido a los errores en el potencial de juntura. El error aumenta abruptamente con E.
(11.12)
donde e es la carga del electron, Zi i Zj son los numeros de carga de los iones i y j,
rijla distancia ion - ion y c la permitividad electrica.
3S egun el enfoque que se utilice esta suposici6n puede ser una consecuencia. Hemos adoptado
una forma simple de presentar el problema.
60 Temas de Biofisicoqufmica
Figura II.2: Representaci6n esquematica de un electrolito. N6tese que cada ion esta rode ado
por un grupo de iones de carga opuesta.
a) b)
La solucion clasica del problema es la dada por Debye y Huckel (DH) que re-
solvieron la ecuacion de Poisson con la aproximacion importante de que la concen-
tracion de los contra-iones es proporcional a la energia de interaccion con el ion
central. Lo importante de este resultado es que la distribucion ionica es funcion de
un solo parametro, la longitud inversa de Debye k
(11.13)
donde c es la permitividad electrica, T la temperatura absoluta, R la constante
universal de los gases ella Juerza ionica, es decir,
(11.14)
(11.15)
(11.16)
5Ya que r aparece en los dos terminos de la expresi6n debe resolverse iterativamente.
II. Soluciones 63
Cuadra 11.1: Panimetros obtenidos para los diametros de algunos iones en la AEM [de Triolo,
Grigera y Blum J.Phys.Chem. 86: 1030-1032 (1982)].
mismas propiedades del agua libre. Podemos considerar que el diametro de la teoria
es en realidad un diametro efectivo. Existe la alternativa de tomar el diametro ionico
como una variable ajustable pero, dado que el tamaiio de la esfera de hidratacion
ionica depende de la concentracion de los iones es mejor considerar la dependencia
del diametro efectivo con la concentracion [4]. En ese caso consider amos el diametro
como
(11.17)
La importancia biol6gica
ffi 500
ctl';"
Il. c
!;;: ·E
Q)';"
""0 OJ
""0 E
ctl-
""0 0
.s: E
:;:::; c
~-
100 J'
0,5 2 5 10 20 100
[Kf I mM
que tambien participa gran parte del resto del solvente. A efectos de comenzar el
estudio consideremos, provisoriamente, solamente las moleculas de agua que rode an
al ion.
a) b) c)
Figura II.5: Tres casos de interacci6n ion-ion: (a) Las esferas de hidrataci6n no interactuan,
(b) La proximidad de los iones hacen que parte de las esferas de hidrataci6n se superpon-
gan permaneciendo los iones separados por algunas moleculas de agua y (c) Los iones se
encuentran en contacto.
Numeros de hidratacion
Cuadra II.4: Valores minimos de los mimeros de hidrataci6n para algunos iones positivos.
Ion n Ion n
6 Mg++ 14
4 Ba++ 14
4 La+++ 22
Para las diferentes situaciones experiment ales es posible definir un radio efectivo
de los iones. La situacion se puede ver con claridad para experiment os hidrodinami-
cos. El comportamiento de las particulas en el fluido depende del radio de las mismas;
de los resultados experiment ales podemos calcular cual seria el radio de particulas
con las mismas propiedades hidrodinamicas que la solucion en estudio, esto define
el radio efectivo. Es evidente que un ion que es capaz de retener moleculas de agua
a su alrededor actua como si tuviera un radio mayor que el que posee en ausencia
de hidratacion.
Pese a las dificultades de definicion, y manteniendonos dentro de una cierta escala
de tiempo, el numero de hidratacion obtenido como result ado de mas de una tecnica
experimental puede darnos una idea sobre el est ado de hidratacion. En la Tabla 11.4
se muestran los numeros de hidratacion mas utilizados para unos pocos iones. Estos
numeros no son, obviamente, unicos, sino que se trata de valores que se mencionan
corrientemente y, dado que todos se refieren a un mismo criterio, sirven a efectos de
comparacion entre los iones citados.
Otro efecto a notar es que cuando aumenta la concentracion de sales en una
solucion la actividad del agua disminuye, y con ella la disponibilidad de agua para
cada ion. Ademas de esta consideracion, vemos que la alta concentracion de iones
produce un efecto de apantallamiento de cargas que disminuye la atraccion del agua y
tambien la interaccion mutua entre iones. Consecuentemente es claro que el numero
de hidratacion, cualquiera sea la definicion utilizada, disminuira con el aumento de
la concentracion.
(11.18)
En este caso decimos que est amos en presencia de una hidrataci6n positiva, en
donde el ion restringe la movilidad de las moleculas de agua en su entorno. En el
segundo caso, que denominaremos hidrataci6n negativa, el ion, lejos de restringir el
movimiento, perturba el entorno aumentando la movilidad del agua en el entorno
ionico.
Cuadra II.5: Valores del coeficiente B de la ecuacion de Jones-Dole para algunos iones.
Viscosidad
La viscosidad, cuya determinacion precis a es mas laboriosa de 10 que se puede pensar
a la ligera, nos aporta muy buena informacion para el caso de las soluciones.
Debemos distinguir entre la viscosidad reZativa 7]r
7]
7]r = -, (II.21 )
7]0
donde 7] es la viscosidad de la solucion Y 7]0 la del sol vente puro, la viscosidad especifica
7]esp
7] - 7]0 7]
7]esp = - - - = - - 1, (II.22)
7]0 7]0
· 7]esp
[7]] Zzmc--+o-- (II.23)
c
(II.24)
~s
40
30
20
0
-10
-20
-30
Figura II.6: Entropia unit aria de iones en funci6n del coeficiente B. Se observa un compor-
tamiento lineal para diferentes familias de iones.
valores negativos de ese panimetro corresponden a una est ado mas libre del agua
que en el caso de valores positivos. La figura 11.6 muestra la relacion entre ambos
parametros.
La temperatura "estructural"
Cuadra II.6: Valores de las masas atomicas, radios cristalognificos y radios hidrodinamicos
de algunos iones.
177" = 1 + 2, 5¢ (11.26)
D= RT_l_ (11.27)
N 67r17r'
donde R es la constante de los gases, T la temperatura absoluta, 17 el coeficiente de
viscosidad de la solucion y r el radio equivalente.
cr
K'
Figura II.7: Distribuci6n de agua alrededor de Li +, K+, Cl- y 1- de acuerdo con simulaciones
de dinamica molecular [de K. Heinzinger, in Water: Biomolecule Interactions, edit ado por
M. U. Palma and M. B. Palma-Vittorelli, Soc. Italiana di Fisica, Bologna, (1993)].
En 1888 Hofmeister [7] analizo el hecho de que ciertas sales aumentan la solu-
bilidad de las proteinas globulares y otras producen la precipitacion de las mismas.
En base a la concentracion de cada sal para producir la precipitacion establecio la
Hamada serie liotropica. La secuencia de sales en orden decreciente de su efecto
precipitante resulta:
En base a est os datos (y otros adicionales) es posible ordenar los iones individuales
por su acion en la precipitacion de proteinas solubles. El resultado de las series
resultantes para aniones y cationes es :
76 Temas de Biofisicoqufmica
para aniones
para cationes
llSi bien tradicionalmente los sacaridos han sido considerados casi exclusivamente como fuente
de energia, la funci6n biol6gica como moleculas de reconocimiento molecular es una de las carac-
teristicas mas notables.
II. Soluciones 77
azucares deberia ser una cuestion de concentracion. Sin embargo, moleculas muy
semejantes quimicamente y con el mismo numero de sitios capaces de formar puentes
de hidrogeno pueden mostrar propiedades muy diferentes en agua. Por ejemplo, el
sorbitol y el manitol son esteroisomeros (pentitoles lineales) que difieren solamente
en la posicion de un grupo hidroxilo pero tienen un comportamiento en solucion
acuosa bien diferente.
Pese ala diferencia minima de ambos compuestos la solubilidad a 25°C en agua
del sorbitol es dos veces y media mayor que la del manitol. En solucion acuosa la
cadena del sorbitol adopta una conformacion flexionada en tanto que el manitol
posee una conformacion plana en zig-zag. Dada la similitud de los compuestos la
unica explicacion plausible es que la interaccion soluto-solvente es la que determina
la conformacion, la que depende del arreglo de los puentes de hidrogeno mas que
simplemente del numero de hidratacion [8].
Uno de los aspectos mas notables, y que nos permiten observar 10 relevante de
la hidratacion para las propiedades de la solucion molecular, es la diferencia en el
comportamiento de ambos azucares cuando se disuelven en agua 0 en sustancias
no-polares. En el segundo caso los dos muestran una conformacion plegada, en tan-
to que en agua la estructura extendida del manitol puede observarse tanto desde el
punta de vista experimental (ej. viscosidad) como mediante simulacion. Otro aspecto
interesante es la diferente solubilidad. Desde el punta de vista energetico y teniendo
ambos el mismo numero de puentes de hidrogeno para compartir con el agua resulta
inexplicable la diferencia observada. Sin embargo, los estudios de simulacion mues-
tran una movilidad notablemente mayor en el sorbitol cuando se 10 compara con el
manitol en solucion acuosa. Esta movilidad aport a una contribucion entropica a la
energia libre de solubilidad que explica el comportamiento experimental.
Otro ejemplo interesante es el de la glucosa. Existen dos anomeros de glucosa
(0: y (3), la ruptura y reformacion del enlace 05-Cl permite la rotacion del grupo
anomerico y, en consecuencia, la transformacion de uno en otro. En solventes no
acuosos el equilibrio es tal que el anomero 0: represent a aproximadamente el 45 %
del total (45 % en piridina y 44 % en dimetil sulfoxido). Esta fraccion es similar a la
que se encuentra a traves de los calculos semi-empiricos utilizando aproximaciones
cuanticas en vacio. En agua se observa experimentalmente que la fraccion de 0:
es del 37% (34% en D 2 0). Este ejemplo es otro caso donde vemos claramente la
influencia del medio en las propiedades moleculares. La configuracion de los enlaces
de hidrogeno son determinantes en este caso.
Mediante experiment os de resonancia magnetica nuclear (nmr) llevados a cabo en
diferentes azucares [8], se puede concluir que la molecula de glucosa posee un cierto
numero de sitios de hidratacion bien definidos. El numero de hidratacion depende
no solamente del numero de sitios de posible formaci on de puentes de hidrogeno sino
tambien de la orientacion espacial de los mismos. Para una concentracion alta de
78 Temas de Biofisicoqufmica
11.4.1. Clatratos
a) b)
Figura H.9: Estructura de clatratos, (a) Tipo I y (b) Tipo II (redibujado de D. W. Davidson,
in Water: A Comprehensive Treatise, Vol. 2, edit ado por F. Franks, Plenum Press, New
York, 1973).
b)
Figura IUD: a) Caja (octaedro truncado ideal) encontrada en HPF 6 . 6H 2 0, y (b) Forma
distorsionada de (CH3)4NOH . 5H 2 0 (redibujado de Davidson, op. cit.).
Bibliograffa
[3] J.R Grigera & L. Blum, Chern. Phys. Letters, 38,486, 1976.
[4] R Triolo, J.R Grigera & L. Blum, J. Phys. Chem.,80, 1858, 1976.
[6] O. Ya. Samoilov, Structure of Aqueous Electrolyte Solutions and the Hydration
of Ions, Consultant Bureau, New York, 1965.
[8] F. Franks, J. Dadok, RL. Kay & J.R Grigera,J. Chem.Soc. Faraday Transac-
tions, 87, 579, 1991.
[9] S.A. Galema, E.T Howard, J.B.F.N. Engberts, & J.R Grigera , Carbohydrate
Research, 265, 215, 1994.
Bibliografla general
81
Capitulo III
1 Pese a la profunda divisi6n existente entre ellos, principes y gente comun se convirtieron en
'Cymry' -conciudadanos- frente al ataque anglosaj6n.
83
84 Temas de Biofisicoqufmica
(IIL2)
3La entalpfa no depende de la temperatura pero la entropfa sf 10 hace. Por Ese motivo debemos
considerar que estamos en presencia de un cambio fnfimo en la temperatura.
4El solvente puede disminuir la movilidad translacional, tanto mas cuanto mas asociado sea el
solvente.
III. Interacci6n hidrof6bica 85
(IlI.4)
Conociendo la energia libre de solubilidad a diferentes temperaturas es posible
separar las componentes entropicas y entaJpicas. La tabla IlL1 muestra algunos
datos de la transferencia de hidrocarburos a agua obtenidos de esa manera.
Podemos ver que la mayor parte de la entalpia de solubilidad es negativa, 10 que
significa que el proceso esta favorecido energeticamente. Sin embargo, se observa una
contribucion desfavorable al proceso debido a que el termino entropico (-T~Ssol)
es positivo, ya que el cambio en la entropia es negativa, 10 que se atribuye al agua.
experimento marca claramente que la restriccion del movimiento del agua esta pro-
ducida por la presencia de la superficie hidrofobica y que esta es la responsable de
la disminucion de entrop!a de la solucion.
( 't-'tO),l
-- mol
c
-.28
• •
••• •
-.24 • •
••
•
-.20 ' - - - - - - ' - - - - - - ' - - - - - - - -
-10 -20
1 1
L\SsOI' cal mor grad.-
Figura IlLI: Corrimiento relativo del tiempo de relajaci6n dielectrico del agua por mol de
soluto en soluciones de alcoholes y acidos carboxilicos en funci6n de la entropia de solubilidad
R ~Ssol(de ref. [3]). TO es el tiempo de relajaci6n de agua pura cia concentraci6n molar del
soluto.
'T"/nc10
Figura III. 2: Tiempo de correlacion rotacional del agua en acetona en funcion de la concen-
tracion de acetona. Las line as llenas corresponden a 25°C y las line as quebradas a 5°C. Las
line as negras muestra la relajacion del 17 0 de la acetona y las line as grises se refieren a los
tiempos de correlacion rotacional del proton (HI). Se observa que el cambio en los tiempos
de correlacion de la acetona casi no sufre variaciones para las diferentes concentraciones
en tanto que la acetona afecta considerablemente los tiempos de correlacion del agua. Se
observa que los tiempos de correlacion del agua son mayores que los de la acetona a pesar
del menor tamano de la molecula.
1 f 1- f
-=--+--, (IIL5)
Tabs Thid Ta
que el agua alrededor de las moleculas polares tienen un tiempo de vida corto (T <
6, 5ps) pero que forman una "caja" alrededor del soluto similar a las estructuras de
hidratacion de los clatratos. Los estudios de simulacion en superficies planas son aun
mas ilustrativos ya que permiten estudiar el efecto de una superficie de mayor area.
Una ventaja de los metodos computacionales es que, en tanto reproduzcan las
propiedades macroscopicas, nos sirven para "espiar" en el mundo microscopico a
nivel atomico y molecular. En el caso de las simulaciones con paredes planas formadas
por atomos hidrofobicos y que poseen vibracion termica, nos muestran que el agua
modifica sus propiedades a distancias de la pared relativamente largas (del orden de
10nm = 100 A), 10 que es coincidente con los resultados de relajacion dielectrica y
RMN. Asimismo el reticulado de puentes de hidrogeno nos muestra un corrimiento
hacia una distribucion centrada en 4 puentes de hidrogeno a temperaturas en las
cuales el agua libre esta centrada en tres puentes de hidrogeno por molecula. Eso
significa que la pared hidrofobica induce una estructura de mayor orden y estabilidad
que la del seno delliquido. El resultado termodinamico sera una disminucion en la
entropia. La figura III.3 muestra esos resultados.
o Aguapura
_ Con membrana hidrofobica
0.4
.~ 0.3
u
c
(J.)
:::J
~ 0.2
.!::
0.1
0.0 -+--0-""1"---'+ 2 3 4 5 6
Numero de enlaces de hidrogena par malecula de agua
Figura III. 3: Distribuci6n de enlaces de hidr6geno por molecula para agua pura, agua en
presencia de una pared hidrofilica y agua frente a una pared hidrof6bica obtenidos mediante
simulaci6n por dinamica molecular (de ref. [4]). El modelo de agua es SPC IE.
Vemos que tanto los estudios sobre dinamica como los estructurales nos muestran
que las sustancias no polares reducen la entropia de la mezcla induciendo restriccion
del movimiento de las moleculas del agua, 10 que produce el descenso de la entropia
de solubilidad.
del proceso de traer las moleculas desde una distancia infinita hast a su contacto
como
flG(oo ---t 0") = G(T, P, composicion del solvente, r12 = 0") (IlL6)
-G(T, P, composicion del solvente, r12 = (0). (III. 7)
La energia libre de Gibbs contiene la contribucion total del proceso, sin embargo
podemos separarla para poner en evidencia las dos componentes, es decir
(IlLS)
donde U(O") represent a la contribucion direct a de la interaccion independiente del
solvente y el segundo termino (flGhi(O")) la interaccion dependiente del solvente.
Desde este punta de vista deberiamos denominar interaccion hidrofobica sola-
mente a la contribucion del sol vente. La interaccion total contiene tanto contribu-
ciones entropicas como entaJpicas, todas ligados a la reorganizacion del sol vente,
contribuciones que no est amos en condiciones de separar con precision. Por 10 tanto
consideraremos la energia libre de la interaccion hidrofobica como:
(IlL9)
donde incluimos todas las contribuciones al proceso de union de las sustancias no-
polares, ya sean direct as 0 indirectas.
La adopcion de este criterio tiene la desventaja de involucrar interacciones que
tambien est an presentes en la asociacion de las sustancias no polares en cualquier
medio, sea este agua, otro liquido estructurado 0 un solvente no-polar. Perdemos
asi especificidad pero trabajamos con expresiones que est an conectadas con parame-
tros que pueden determinarse experimentalmente.
5N6tese que la entropia de solubilidad disminuye con la temperatura pero, la entropia de inter-
acci6n hidrof6bica aumenta con la misma.
vimos, tanto los resultados experiment ales de difraccion de rayos X como los resul-
tados de simulacion nos muestran claramente que la funcion de distribucion radial
del agua -que podemos tomar como un indicador de la estructura- pierde definicion
al aumentar la temperatura (figura 1.18,)
Puesto que la contribucion entropica del agua a la interaccion hidrofobica de-
pende de la existencia de estructura en el agua, la perdida de la misma, ya sea por
la temperatura u otras causas, debilitara e incluso anulara la interaccion hidrofobi-
ca. Aqui nos encontramos con dos efectos contrapuestos. Es claro que a ciertas
temperaturas existe una contribucion positiva de la entropia, por 10 que deberemos
encontrar un aumento de la interaccion con la temperatura; al mismo tiempo vemos
que el aumento de la temperatura hace disminuir el orden y, por ende, la contribu-
cion entropica, debilitando la interaccion. La pregunta inmediata es en que rango de
temperaturas predomina uno u otro efecto, ya que es de esperar entonces que exista
una temperatura a partir de la cual el proceso se invierta.
Desde el punta de vista experimental se observa que en algunos sistemas el au-
mento de la interaccion hidrofobica llega a producir una separacion de fases mucho
antes de que los efectos de disminucion de la interaccion por debilitamiento de la es-
tructura acuosa se vuelvan importantes. Un caso relevante es la temperatura critica
de separacion de fases (critical de mixing temperature) que se encuentra, por ejemplo,
en mezclas de tetrahidrofurano-agua yen algunos surfactantes como el Triton X65.
Un ejemplo mas comun es el de las bebidas carbonatadas ("gaseosas"), que liberan
el anhidrido carbonico al ser calentadas. Diversas estimaciones indican que en el
rango de 0 a 60°C la interaccion hidrofobica aumenta y a partir de los 60°C comien-
za el proceso inverso. Existen experiment os que sugieren una disminucion continua
de la entropia de solubilizacion (que, como hemos visto, trae como consecuencia la
interaccion hidrofobica) a temperaturas mucho mayores [6]. Esto no es totalmente
sorprendente ya que, pese a que se debilita la estructura, el punta importante es
la diferencia entre la estructura del agua pura y la modificacion inducida por los
agentes hidrofobicos. Lo importante es que se mantenga la capacidad del agua de
producir mayor orden frente a las moleculas no-polares.
7N6tese que la elecci6n del radio de la esfera puede cambiar considerablemente la superficie
expuesta.
III. Interacci6n hidrof6bica 97
(III. 10)
donde 6.(Ji es el panimetro de solvatacion atomica del atomo i yAel valor del area
expuesta correspondiente.
En cuanto a la energia libre total de transferencia de una molecula desde el medio
acuoso al interior de una proteina, esta se expresa como
(III. 11 )
a) b)
Superficie
Agu~a~.......~ accesible I
~)
o Soluci6n
ocuoso
~~%-~~
Figura IlI.4: Esquema que muestra la base para calcular la energia libre de transferencia de
un soluto desde el agua al interior de una proteina. a) un atomo aislado; b) una molecula
mas compleja. Se observa que para el ultimo caso el area expuesta total no es igual a la
sum a de las areas individuales debido al apantallamiento de ciertas regiones por los atomos
vecinos.
no han sido completamente confirm ados y, como se puede ver, est amos frente a un
dJculo aproximado.
(III. 12)
Cuadra III.2: Escala de hidrofobicidad de los amin01icidos. Los valores corresponden ala esc ala
de consenso descripta por Eisenberg, Weis, Terwillinger y Wilcox [Faraday Symp. Chem.
Soc. 17: 109 (1982)]. Los residuos estan dispuestos en orden decreciente de hidrofobicidad.
La magnitudes son aproximadamente al valor necesario para transferir el aminoacido de una
fase hidrof6bica a una hidrofilica expresada en kcal mol- 1
RESIDua ESCALA
Ile 0.73
Phe 0.61
Val 0.54
Leu 0.53
Trp 0.37
Met 0.26
Ala 0.25
Gly 0.16
Cys 0.04
Tyr 0.02
Pro -0.07
Thr -0.18
Ser -0.26
His -0040
Glu -0.62
Asn -0.64
GIn -0.69
Asp -0.72
Lys -1.1
Arg -1.8
100 Temas de Biofisicoqufmica
(IlL13)
donde ri es el vector desde cualquier origen al centro del iesimo grupo y Hi la hidro-
fobicidad del mismo grupo. La figura IlL5 muestra una representaci6n grafica del
momenta dipolar hidrof6bico de la arginina .
• NH'
Cuadra III. 3: Energias libres de solvataci6n (en kcal mol-I) para amin01icidos con sus mo-
mentos hidrof6bicos (en kcal mol- I A) segun Eisenberg y McLachlan Nature 319: 199 (1986).
(IlLI6)
como el coeficiente de particion termodinamico, para distinguirlo del coeficiente de
particion experimental
(IlLI7)
La diferencia existente entre ambos coeficientes debe ser tenida en cuenta. Se
puede escribir
(IlLIg)
donde Vo Y Vw son los volumenes mol ares de los solventes ° y w respectivamente.
Los valores pi y P est an relacionados con la energia libre de transferencia. Fre-
cuentemente en la literatura se cita ellogaritmo (decimal) del coeficiente de particion
III. Interacci6n hidrof6bica 103
JF H = RT In (_v - '! ) .
Vw Va
(IlL21 )
Cuadra IlI.4: Comparaci6n de la esc ala de hidrofobicidad de amin01icidos con algunos com-
puestos obtenidos de los coeficientes de distribuci6n distribuci6n cicloexano-agua (de Rose
y Wolfenden ref. [29]).
Leu, Ile butano, isobutano
Val propano
Pro ciclopropano
Phe tolueno
Met, Trp etil metil sulfato, skatole
Ala metano
Cys, Gly metanotiol, hidrogeno
- nivel cero - Tyr fenol
Thr etanol
Ser metanol
His 4- metilimidazol
Lys, GIn N - butilamina, propionamida
Asn acetamida
Glu acido propionico
Asp acido acetico
Arg N -propilguanidina
[3] K. Hallenga, J.R. Grigera & H.J.C. Berendsen, J. Chern. Phys., 84, 2381, 1980.
[4] J.R. Grigera, S. Kalko, & J. Fischbarg, Langmuir, 12, 154, 1996.
[5] Fioretto et al. en: Water-Biomolecule Interaction, edited by M.D. Palma, M.B.
Palma-Vitorelli, & A. Parak, Soc. It. di Fisica, Bologna, 1993.
[6] R. Crovetto, M.L. Japas & R. Fernandez Prini,J. Chem.Phys, 76, 1077, 1982.
[7] L.A. Woolf, J. Chern. Soc. Farad. Trans. I, 71, 784, 1975.
[8] F.W. Starr, M.C. Bellissent-Funel & H.E. Stanley, Phys. Rev. E, 60 1084, 1999.
[9] Y.Q. Cai y col., Phys. Rev Letters, 94, 025502-1, 2005.
[11] R. Kitahara, H. Yamada, K. Akasaka & P.E. Wright, J. Mol. Biol., 320. 311,
2002.
[12] C.G. Ferrara, A. N. MacCarthy & J.R. Grigera, J. Chern. Phys., 127, 104502-1,
(2007).
[13] A.N. McCarthy & J.R. Grigera, Bioch. Bioph. Acta., 1764, 506, 2006.
[14] A.N. McCarthy& J.R. Grigera, J. Mol. Graph. Mod., 24, 254, 2006.
[15] A.N. McCarthy & J.R. Grigera , Biophys. J., 98, 1626,2010.
[17] S.A. Galema, E.I. Howard,J.B.F.N. Engberts J.R. & Grigera, Carbohydrate
Res., 265, 215, 1994.
107
108 Temas de Biofisicoqufmica
[18] Eisenberg D., Weis RM., Terwillinger T.C.: & Wilcox W. Faraday Symp. Chern.
Soc., 17, 109 (1982).
[19] H.S. Chan& KA. Dill, Ann. Rev. Biophys. Biomol. Struct., 26,425, 1997.
[20] J.Z. Turner, A.K, Soper & J.L. Finney J. Chern. Phys. 102 5438, 1995.
[22] J.N. Israelachvili & RM. Padhley, Nature 30, 341, 1982 .
[23] Y.I.Rabinovich & B.V.: Derjaguin, Colloids Surf 30, 243, 1988.
[24] H.K Christensen, J Fang, B.W. Ninham & J.L. Parker, J.Phys. Chern., 93, 1472,
1990.
[25] RM. Pashley, P. M. McGuiggan, B.W. Ninham & D.F.Evans, Science, 229,
1088, 1985.
[27] M.D. Hammer, T.H. Anderson, A. Chaimovich, M.S. Shell & J. Israelachvilli,
Faraday Discuss., 146, 299, 2010.
[28] O. Chara, A.N. McCarthy, C.G. Ferrara, E.R Caffarena & J.R Grigera, Physica
A,388, 2552, 2009.
[29] G.D. Rose & RW. Wolfenden, Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 22, 381,
1993.
[31] Sharp KA., Nicholis A., Friedman R, & Honig B, Biochemistry, 30, 9686, 1992.
[32] Nys G.G. & Rekker RF., En.J.Med. Chern., 8, 521, (1973. Er.J.Med. Chern. 9,
1621, (1974).
[33] RF. Rekker, The Hydrophobic Fragmental Constant. Its Derivation and Appli-
cations. A Mean of Characterizing Membrane Systems, Elsevier, Amsterdam,
1977.
[34] H. Onish, M.F. Morales, K Katoh, & K Fujiware, PNAS, 92, 11965, 1995.
III. Interacci6n hidrof6bica 109
Lecturas suplementarias
General
• H.S. Chan & K.A. Dill, Ann. Rev. Biophys. Biomol. Struct., 26425, 1997.
Capitulo IV
A mediados del siglo XX comenzaron a aparecer las ideas de que el agua intracelu-
lar diferia en sus propiedades del agua "regular". Comenzo a surgir el concepto de
que, por algun mecanismo desconocido, el agua se fijaba a las macromoleculas. Sin
embargo, no se pensaba que esa cantidad de agua era cuantiosa. Por ejemplo, se su-
geria que en una solucion del 5 % de gelatina alrededor dell % de agua est aria unida
ala proteina [1], una cantidad que hoy sabemos es despreciable frente al verdadero
valor. 2
Con el perfeccionamiento de las determinaciones experiment ales y la introduccion
de nuevas ideas se comenzo a edificar la concepcion de que el agua no solamente es-
taba asociada a sino que era parte integral de los sistemas biologicos, interactuando
fuertemente con las biomacromoleculas y participando en la reactividad molecular.
La evolucion de estas ideas fue muy lenta si 10 com par amos con el nipido desarro-
llo que otros aspectos de la ciencia 10 hicieron a partir de las primer as decadas del
siglo pasado. Alrededor de los arros 60-70 aparecieron ideas cuasi extremas sobre la
estructura y funcion del agua en los sistemas biologicos, ideas extremas que atra-
jeron (y escandalizaron) a muchos investigadores pero que permitieron evolucionar
el conocimiento y aceptacion de la importancia que tiene la hidratacion hoy en dia.
No debe pensarse, sin embargo, que se trata de un tema cerrado y sin controversias,
existe mucho para estudiar, ampliar y corregir de nuestros conocimientos sobre el
particular, 10 que 10 hace uno de los temas mas atrayentes.
111
112 Temas de Biofisicoqufmica
• Agua que esta unida por enlaces de hidrogeno a la macromolecula, que puede
ser detect ada por espectroscopia Raman 0 infrarrojo.
• Agua no-solvente, es decir agua que no este disponible como solvente para un
dado soluto. La cantidad de agua varia segun la eleccion del soluto. Tambien
se refiere a agua dentro de la Hamada interaccion preferencial.
a)
macrom?bolec~la/ ~-~uto I
1""'- _ ~/
N'-{:
I "'1
d)
Soluci6n de
-
proteinas
Agua pura
Log frecuencia
Figura IV.I: Algunas definiciones de "agua ligada": (a) Agua en la proximidad de la macro-
molecula que no disuelve un co-soluto. (b) Agua que produce un ensanchamiento de la linea
de rmn. Esto se produce por la interacci6n agua-soluto que produce una disminuci6n de sus
movimientos. (c) Experimento hidrodinamico, el agua que acompana la macromolecula seria
agua 'ligada'. (d) La interacci6n agua-soluto desplaza la linea de relajaci6n dielectric a hacia
las bajas frecuencias.
114 Temas de Biofisicoqufmica
Cada una de las definiciones dadas arriba resulta en cantidades muy diferentes
de "agua ligada" puesto que cada una de ellas analiza diferentes propiedades del
agua. No es posible definir adecuadamente las caracteristicas del agua asociada a las
macromoleculas mediante un unico experimento. Esto se debe a que cada experimen-
to actua en una escala de tiempo diferente analizando propiedades termodinamicas,
dinamicas y estructurales que, si bien relacionadas, no siempre nos indican el mismo
comportamiento.
Llamaremos hidrataci6n especifica a los casos en que el agua esta unida a sitios
especificos de la macromolecula, e hidrataci6n general cuando el agua, si bien posee
una interaccion importante con la macromolecula, no se encuentra asociada a sitios
en particular (Fig. IV.2).
Estas dos formas de hidratacion no se distinguen por la energia de union sino por
la especificidad.
La hidratacion general y especifica refleja la naturaleza dinamica de la hidrata-
cion. Las moleculas de agua involucradas en la hidratacion especifica tienen mayor
tiempo de residencia en su sitio que las no-especificas, 10 que puede implicar mayor
energia de union 0 razones cineticas para ser retenidas en el sitio. En principio estas
moleculas pueden detectarse experimentalmente y establecer su participacion estruc-
tural. Su permanencia en el sitio hace que posean cierta funcionalidad en relacion
con la macromolecula a la que est an asociadas. Las moleculas que poseen un tiempo
de residencia menor se mueven en el entorno de la macromolecula participando en
la hidratacion general. Estos metodos experiment ales pueden establecer que de al-
guna manera estas moleculas se encuentran alrededor de la macromolecula pero no
es posible detectar sus sitios de union.
Las moleculas de agua que participan en la hidratacion especifica no poseen todas
el mismo grado de localizacion, los tiempos de residencia pueden variar considerable-
mente de un sitio a otro. La figura IV.2 muestra un esquema donde se han marc ado
algunas moleculas con interaccion especifica "enterradas" en la proteina (A). Esto
no significa que permaneceran todo el tiempo en esa posicion, pero ciertamente su
tiempo de residencia sera mayor que la de una molecula, tambien de hidratacion es-
pecifica, localizada en una hendidura (B), la que a su vez tendra un mayor tiempo de
residencia que una de la superficie (C). La accesibilidad de las moleculas del interior
proteico al medio circundante, 10 que determinara el tiempo de vida, depende de los
"movimientos respiratorios" de la proteina (como han dado en llamarse), es decir,
movimiento lentos que involucran grandes porciones de la molecula. Las moleculas
presentes en las hendiduras pueden moverse sin necesidad de grandes movimien-
IV. Hidrataci6n de biomacromoUkulas 115
to pero dependen del grado de acceso de la ruta hacia el medio. Obviamente las
moleculas de la superficie solamente est an retenidas por sus puentes de hidrogeno y
el escape es mas facil que en los casos anteriores.
La figura IV.2 es solamente un esquema y no se refiere a ninguna proteina en
particular, mas adelante nos referiremos a situaciones especificas donde se puede
establecer la participacion de este tipo de moleculas en la funcion proteica.
a
0 0
Especffica
General
Figura IV.2: Las moleculas de agua que poseen enlaces de hidrogeno con sitios bien definidos
de la macromolecula participan de la hidrataci6n especijica, en tanto que las que no tiene
sitios definidos de union participan de la denominada hidrataci6n general. El agua de hidra-
tacion especifica se encuentra generalmente en el interior de la protein a (A), en hendiduras
(B) 0, en ocasiones, en la superficie (C).
Procesos primarios
Tiempos reflejo en fotosintesis
Tiempos de vida
(impulso nervioso de fluorescencia Relajacion dielectrica
respuesta mecanica) del agua (25°C)
Inercambio de H Relajacion dielectrica
en interior proteico Tiempo de giro de
del hielo (-10 C)
+4 +2 o -2 1-4 -6 -8 -10
j -12
un electron en la
orbita interna delBhor
-14 -16 -20,
I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I
Rayos-X RMN
IR - Raman
Relajacion dielectrica
Propiedades Termodinamicas Dispersion inelastica de
neutrones
Dipersion de luz Absorcion ultrasonica
Figura IV.3: Escala de tiempos de algunos procesos. Sobre la linea se muestran algunos
procesos en tanto que debajo de dicha linea se seiiala el range de tiempo que opera cada
uno de los diferentes tipos de experiment os nombrados. Tengase en cuenta que la esc ala de
tiempo es logaritmica. La idea general de la figura esta tomada de Eisenberg y Kauzmann,
The Structure and Properties of Water, Clarendon Press, Oxford, 1969.
ESTADO TECNICAS
Isotermas de sorci on
Estado solido f---------+ Calorimetria
Crist ales Espectroscopia (IR,Raman) f----
(monocristales y polvo) Difraccion (RX, neutrones)
Fibras
Estado vitreo
f---------+ Simulacion
Relajacion dielectrica f----
[---------+ R.M.N.
Soluciones
Soluciones diluidas
Soluciones concentradas Propiedades termodinamicas
(est ado funcional) [---------+ Espectroscopia de absorcion f----
Propiedades de transporte
Reologia
DESCRIPCION TOTAL
I
Figura IV.4: Esquema de los diferentes enfoques utilizados para el estudio del agua en las
macromoleculas. Todos ellos deberian converger a la soluci6n del problema, el cual no es
posible resolver con una unica tecnica.
IV.5.1. Sorcion
La isoterma de sorci on es el nivel mas simple de informacion acerca de la hidra-
tacion. Consiste en estudiar el contenido de agua de la muestra para diferentes
presiones de vapor de agua a temperatura constante. Dada su simplicidad y ac-
cesibilidad, esta tecnica ha suministrado una gran cantidad de informacion sobre
IV. Hidrataci6n de biomacromoUkulas 119
Figura IV.5: Los cinco tipos de isotermas de acuerdo a la clasificaci6n de Bruanuer mostrando
el cubrimiento en funci6n de la presi6n de vapor relativa. El Tipo I es la isoterma clasica
de Langmuir de "mono cap a" . La del tipo II, con una fuerte sorci6n a bajas presiones de
vapor seguida de una sorci6n debil, es la tipica isoterma de porci6n de agua en protein as y
se la design a frecuentemente como de "multicapa". Las isotermas de tipo I I I indican una
debil interacci6n entre el sorbato y la superficie. Las del tipo IV y V corresponden a las de
los tipos II y III respectivamente cuando se produce condensaci6n capilar, 10 que inhibe la
sorci6n a altas presiones de vapor.
120 Temas de Biofisicoqufmica
EI proceso de sorcion
Sorci on (continuacion)
Es posible a traves de un tratamiento apropiado expresar el comportamiento en terminos de
panimetros utiles. Las deducciones originales, tanto de Langmuir como de Brunauer y co-
labor adores [4] parten de consideraciones cineticas. Consider amos este enfoque inapropiado,
ya que est amos frente a un sistema en equilibrio a y, consecuentemente, deberiamos utilizar
otra metodologia.
Existe un gran numero de expresiones de isotermas (mas de 100) aun cuando todas se
reducen a un as pocas. Una de las expresiones mas utilizadas para las isotermas llamadas de
"multicapas" es la isoterma BET de Brunauer, Emmet and Teller [4], que se expresa como:
n = Nc (pjpo) (IV.l)
[1 + (c -l)pjPo](l - pjpo) ,
donde n es la cantidad de agua captada por la sustancia, N el numero de sitios primarios
de sorcion (malllamado area de monocapa), c una constante caracteristica, p la presion de
vapor Y Po la presion del vapor saturado.
Una expresion justificada apropiadamente a partir de consideraciones mecanico-estadisticas
corresponde a la isoterma de Guggenheim [5]. Formalmente se puede obtener facilmente de
la ecuacion IV.l sustituyendo Po por p*.
En este formalismo tanto p* como c tienen una interpretacion termodinamica siendo:
* [(11m - 11 1 )] (IV.2)
p = poexp RT '
y
(IV.3)
n = Nc (pjp*) (IV.4)
[1 + (c - l)pjp*] (1 - pjp*) ,
De alguna manera se podria decir que p* es la medida de las propiedades de la "multicapa"
y c de la primer a capa.
En las ecuaciones IV.2 y IV.3, 11 es el potencial termodinamico estandar, en tanto que los
subindices m, 1 y L indican "multicapa", primer a capa y la fase liquid a respectivamente.
Vemos que para p* = Po el potencial quimico correspondiente al agua que se fija mas
superficialmente es igual que el de la fase liquid a , 10 que es para la isoterma BET una
suposicion inicial, aunque no explicit a en la teoria original.
(continua)
Sorci on (continuacion)
La nomenclatura de "mono cap a" y "multicapa" proviene de la idea de considerar una su-
perficie perfectamente homogenea. La realidad puede ser muy distinta, encontnindonos con
que la superficie puede tener regiones 0 sitios de alta afinidad por el sorbato y otras que no
la tienen, es mucho mas riguroso referirse a sitios primarios y sitios secundarios de sorci6n.
La isoterma de Guggeheim tiene una gran generalidad ya que, con un valor apropiado de
sus parametros, puede describir los tipos I, II y III. Por otra parte est os parametros tienen
una interpretaci6n fisica. La similitud de la forma de la isoterma de Gugenheim (ecuaci6n
IV.4) con la isoterma de BET (ecuaci6n IV.I) no debe Hevar a confusiones.
Histeresis
Es frecuente observar que el camino de desorci6n no coincide con el de sorci6n. Uno y otro
camino forman un lazo Ham ado de histeresis. En general la histeresis se debe a una falta
de equilibrio. Esta falta de equilibrio se produce tanto en materiales bio16gicos como no-
bio16gicos. En el ultimo caso ocurre que el material (por ejemplo, las protein as) sufre una
transformaci6n en el proceso de sec ado y rehidrataci6n que el proceso inverso no puede
recuperar totalmente.
3Utilizamos la denominaci6n descripta para las propiedades de la isoterma que, en algunos casos,
difiere de la de los trabajos originales.
4Arg, Asn, His, Lys, Asp, GIn, Glu, Gly, Cys, Met, Pro, Ser, Thr, Tyr, Trp
IV. Hidrataci6n de biomacromoUkulas 123
Cuadra IV.I: El mimero de sitios primarios de sorei6n para diferentes biopolimeros de aeuerdo
a la isoterma de BET expresados en moles de agua por 100 g de peso seeo.
>
BIOPOLIMERO N REFERENCIA
DNA 0.672 a
Lecitina 0.289 a
Lisozima 0.411 a
Hemoglobina 0.320 b
Colageno 0.529 c
Gelatina 0.485 c
Elastina 0.345 c
Seda 0.226 c
Lana 0.336 c
Albumina serica 0.374 c
Albumina de huevo 0.342 c
se las com para con la del agua pura. 5 Esta reduccion de la movilidad implica una
contribucion negativa a la entropia. Para justificar la fijacion preferencial, el agua
de hidratacion debe formar enlaces, los cuales deben ser mas fuertes que en agua
pura. Esto nos muestra que la simple posibilidad de formar puentes de hidrogeno por
la macromolecula no es suficiente como para considerar su pertenencia al grupo de
sitios primarios. Es de esperar que sea necesaria una buena geometria que favorezca
la formaci on de varios puentes de hidrogeno para definir un sitio primario. Existen
otras posibilidades, tales como la existencia de barreras cineticas (en grietas 0 en el
interior proteico) que retarden el intercambio.
Si aceptamos que un sitio primario debe proveer al menos dos puentes de hidrogeno
para la fijacion de agua, podemos concluir que est os sitios producen "puentes de
agua", es decir, situaciones en las que el agua conecta diferentes partes de la macro-
molecula, contribuyendo eventualmente a la estabilidad de la estructura.
Pese a que la isoterma de sorci on es un metoda de "baja resolucion" la informacion
que se puede obtener es valiosa, en tanto que se la analice cuidadosamente. Es
interesante hacer notar que la mayoria de los experiment os de sorcion, incluyendo los
que cit amos en la tabla IV.1, parten de efectuar un vacio severo para secar totalmente
40
--
c
Figura IV.6: Isoterma de sorci6n de la hemoglobin a, basada en los datos de referencia [13].
La fiechas seiialan la direcci6n en que se realiz6 el procedimiento de sec ado y humectaci6n
en cada etapa. El proceso se inici6 desde el est ado nativo (curva superior).
Luscher [8] mostro mediante el estudio sistematico de varias proteinas que las
isotermas de sorci on repiten la curva del material nativo en tanto que el sec ado
no supere un valor critico. Solamente en estas condiciones el proceso de sec ado es
reversible. El valor limite es de :=:::; 10 % y refleja el minimo de agua necesario para
mantener la estructura. Este valor no es igual al numero de moleculas de agua
minimo que deb en ocupar los sitios primarios responsables de la estructura. La
ocupacion de al menos el 50 % de esos sitios requiere mas moleculas en el entorno
que garanticen el intercambio. De la isoterma de Gugenheim es posible obtener
la fraccion de ocupacion de los sitios para cada contenido de agua total [31] y se
observa que en general el 50 % de ocupacion corresponde al valor observado de 10 %
de agua sobre peso seco establecido por Luscher como valor limite para evitar la
desnaturalizacion observada a traves de la isoterma.
Hemos visto que el sec ado de una proteina hace que las curvas sucesivas de
sorcion-desorcion sigan un camino diferente de la curva original. No debe confundirse
IV. Hidrataci6n de biomacromoUkulas 125
6El ejecta alasterica consiste en el cambio de afinidad por efecto de una 0 varias moleculas que
se asocian a la proteina. Auque simililar con la cooperatividad es un efecto mas complejo.
126 Temas de Biofisicoqufmica
00
7La presencia de sales en la soluci6n de crecimiento del cristal produce regularmente sefiales de
difracci6n que no pueden distinguirse de las del agua, por 10 que el "solvente" detectado resulta ser
la suma de agua y sales presentes.
IV. Hidrataci6n de biomacromoUkulas 127
a) b) C)
(1V.6)
Para realizar la catalisis a la enorme velocidad con que se efectua la enzima debe
contar con un mecanismo que permit a una rapida transferencia de protones. Del
analisis del mecanismo cinetico y su velocidad surge que esta transferencia excede
ellimite de la difusion de prot ones en la solucion. Estas velocidades, sin embargo,
pueden alcanzarse facilmente en un mecanismo de difusion protonica tal como el del
hielo (ver Capitulo 1-1.5). En la figura 1V.8 se muestra el mecanismo propuesto por
Khalifha para la anhidrasa carbonica, mecanismo que -si bien no es concluyente-
es apoyado por los resultados de la estructura de la enzima obtenido por Liljas y
IV. Hidrataci6n de biomacromoUkulas 129
col., quienes observaron un reticulado de nueve moleculas de agua alrededor del sitio
acti vo (Figura IV. 9). Este mecanismo minimizaria adem as la des com pensacion de
cargas durante la catalisis. La cadena de moleculas de agua permite a la enzima
volver (mediante la protonacion inversa) a su forma activa 10 suficientemente rapido
como para producir la actividad catalitica que se observa experimentalmente.
La existencia de "cables para prot ones" form ados por cadenas de agua pereceria
ser un fenomeno que se manifiesta en diversos procesos biologicos, como veremos
mas adelante.
--
--
H2 0 ~ t HCO·,
EZnOH - » EZnOH 2
El agua, como resulta obvio, puede actuar con los grupos polares de las macro-
moleculas. Se han observado en muchos casos "puentes de agua" entre grupos polares
internos. Las moleculas de agua hacen posible conexiones entre grupos polares que
se encuentran demasiado lejos como para formar puentes de hidrogeno en forma
directa. Estos puentes salinos mediados por agua ayudan a mantener la estructura
de la macromolecula de manera tal que removiendo estas moleculas de agua por
deshidratacion extrema se puede afectar la estructura de las macromoleculas, como
10 sugieren las isotermas de sorcion. Los "puentes de agua" han sido observados,
entre otras proteinas, en o:-quimotripsina, ;3-tripsina, mioglobina, hemoglobina y
colageno.
La mioglobina ha sido estudiada extensivamente mediante tecnicas de difraccion. 8
8La mioglobina fue la primera proteina cuya estructura se resolvi6 mediante rayos X.
130 Temas de Biofisicoqufmica
Gin 139
Figura IV.9: La estructura del sitio activo de la anhidrasa carb6nica donde se muestran nueve
moleculas de agua con estructura similar a la de hielo h (basada en el trabajo de Liljas y
col. Nature New Biology, 235, 131, 1972.
Puesto que con difraccion de neutrones es posible localizar los prot ones (en realidad
solamente el deuterio, y no los prot ones , tiene la seccion eficaz de coherencia de
dispersion scattering tal como para ser detect ado ). Esta tecnica es cara, compleja y
requiere crist ales de gran tamano (del orden de varios milimetros) pero no produce
dana en los cristales, los que se pueden entonces estudiar por tiempos largos.
Existen datos obtenidos por difraccion de neutrones en la mioglobina que per-
miten estudiar la hidratacion con cierto detalle. Utilizando los datos de Schoenborn y
Hanson [22] hemos estudiado las conexiones entre diferentes grupos de la mioglobina
a traves del agua. La figura IV.10 muestra muy esquematicamente como las cone-
xiones entre diferentes puntos de las cadenas de la mioglobina establecen cadenas
que podrian contribuir a la estabilidad de la estructura.
La mioglobina muestra el mismo comportamiento que la hemoglobina y otras
proteinas en cuanto al contenido de agua. Despues de una deshidratacion profunda
es imposible recuperar el comportamiento del material nativo. Hemos visto que la
isoterma de sorci on nos puede indicar la poblacion de sitios primarios para cada pre-
sion de vapor de agua (y, consecuentemente, para cada contenido total de agua). Es
interesante notar que la irreversibilidad del proceso de sorcion-desorcion se produce
cuando la ocupacion de los sitios primarios cae por debajo de aproximadamente el
50 %. Un estudio cuidadoso de las cadenas de agua en mioglobina [32] establece que
si se cuentan las moleculas de agua detectadas por difraccion de neutrones conec-
tadas al menos por dos puentes de hidrogeno (ya sea directamente 0 a traves de otras
IV. Hidrataci6n de biomacromoUkulas 131
EO j.lIDebye TiPs
n-Hexano 1,89 0
Benzene 2,234 0
Clorobenzeno 5,649 2,324 11,8
Ni tro benzeno 35,96 4,23 45,3
Agua (30°C) 76,8 1,94 7,2
Agua (20°C) 80,4 1.94 9,3
Agua (lO°C) 84,1 1,94 17,9
Agua (O°C) 88,3 1,94 12,6
Hielo (O°C) 92,0 1,94 2 x 10 7
G licina (en agua) 19,20 49,0
o:-alanina (en agua) 18,6 92,0
Triglycine (en agua) 36,8 258
Propiedades dielectricas
Cuando se aplica un campo electrico los dipolos electricos del agua tienden a
orientarse produciendo la polarizacion del medio (ver el recuadro en §I.5, Capitulo
I). En el Capitulo I discutimos el problema de la dependencia de la permitividad del
agua con la frecuencia. En las macromoleculas biologicas, tal como las proteinas, no
solamente el agua asociada a la proteina contribuye a la permeabilidad, sino que los
grupos polares 0 polarizables presentes en la molecula hacen tambien su aporte a la
permitividad total y relajan a su frecuencia caracteristica.
La tabla IV.2lista algunas propiedades dielectricas de interes para unas pocas sus-
tancias. Notese que tanto la permitividad como el tiempo de relajacion difieren mar-
cadamente entre los diferentes compuestos. Esto permite, en algunos casos, analizar
el comportamiento dielectrico de los diferentes compuestos en una mezcla 0 solucion.
Veamos el caso de una proteina hidratada en est ado solido. 9 La proteina en su
interior tiene una permitividad baja (Eo:=:::; 5) en tanto que para el agua "libre" es
mucho mas alta (Eo:=:::; 76). Los grupos laterales polares cuando la hidratacion es 10
suficientemente alta poseen tambien una movilidad relativamente alta y contribuyen
a la permitividad total, pero con una frecuencia de relajacion que difiere notable-
mente de la rotacion de la proteina completa y de la del agua. Este comportamiento
nos permite obtener una descripcion razonable de la dinamica del sistema.
Comencemos viendo el caso de medidas en un rango restringido de frecuencias. La
figura IV.12 muestra la dependencia de la permitividad de una proteina hidratada
en polvo con el contenido de agua a algunas frecuencias.
.4 .2
Figura IV.12: Permitividad dielectric a de albumin a serica bovina en plovo en funci6n del
contenido de agua a diferentes frecuencias. (a) 0,1 MHz; (b) 1 MHz; (c) 10 MHz. (Datos de:
Rosen, Trans. Faraday Soc., 59, 2178, 1963.
lOExiste percolaci6n cuando se establece contacto entre los elementos de tal forma que se conectan
los extremos.
IV. Hidrataci6n de biomacromoUkulas 135
Relajaci6n dielectrica
Cil
1010
f/Hz
Figura IV.13: Esquema del espectro dielectrico de col age no hidratado. (basado en los datos
de Grigera, Vericat, Hallenga & Berendsen; Biopolymers, 18, 35, 1979).
relajacion que no corresponde a una relajacion dipolar. Veremos que ese es el caso
de la relajacion observada entre los 100 kHz y 5 MHz.
Antes que Debye formulara su teoria de relajacion dipolar, Wagner [20] mostrola
existencia de un fenomeno cuyo resultado macroscopico es similar al estudiado por
Debye. La presencia de interfases con discontinuidades en la relacion entre la permi-
tividad y conductividad, el sistema frente a un campo variable muestra una caida
de la permitividad. El fenomeno es simple de entender utilizando los concept os de
moment os dipolares. Cuando aplicamos un campo alterno a un sistema como el
mencionado, las cargas se desplazanin hast a las regiones de interfase donde se pro-
ducira una acumulacion temporaria de las mismas, generando un momenta dipolar
efectivo "ionico". En la medida en que la movilidad de las cargas es suficiente como
para responder a los cambios de la frecuencia, se obtiene un valor de la "permi-
tividad aparente" muy grande. El aumento de la frecuencia por sobre la respuesta
temporal del sistema de cargas hace que esta permitividad aparente caiga. El tiem-
po de relajacion del proceso puede obtenerse analizando la geometria del sistema, y
para un amplio rango de estructuras dicho tiempo es proporcional al cociente entre
la permi ti vidad y la cond ucti vidad (T ex: E/ W) .
En el caso particular del colageno tenemos las fibras con agua en su superficie y
contra-iones. El resto del espacio puede ser aire, para el caso de las humedades ba-
jas, 0 agua, que tambien recibira contra-iones pero cuya conductividad sera diferente
(los contra-iones estaran asociados generalmente a la proteina, por 10 que solamente
una parte de enos pasara al seno del agua). En esta geometria (para ambos casos) se
cumple la relacion T ex: E/W. El analisis de la relajacion en estudio en funcion del cam-
bio de conductividad, ya sea aumentando el contenido de agua 0 adicionando sales,
indica que efectivamente el proceso se debe a un problema interfacial, denominado
ejecta Maxwell- Wagner.
La region intermedia (100 KHz-5 MHz) tiene una particularidad. La variacion de
la serral con la temperatura indica que la amplitud de la permitividad aumenta en
tanto que la frecuencia de relajacion disminuye cuando aumentamos la temperatura.
Esta respuesta a los cambios de temperatura es opuesta al comportamiento de una
relajacion dipolar. El comportamiento tipico de la relajacion dipolar indica una
disminucion de la amplitud debido a que la agitacion termica dificulta la orientacion
de los dipolos para una misma intensidad de campo; al mismo tiempo se observa
que la movilidad de los dipolos es mayor (por ejemplo, disminucion de la friccion
viscosa) aumentando la frecuencia de relajacion) (ver figura IV.14).
Frente a este comportamiento, podemos concluir que se trata del movimiento
de cadenas laterales polares, las que al orientarse contribuyen a la permitividad del
sistema. Cuando se aumenta la temperatura, las cadenas laterales pueden superar in-
teracciones debiles que las fijan a la superficie proteica permitiendo que una porcion
mayor de la cadena pueda moverse. La mayor longitud de la cadena brindara una
IV. Hidrataci6n de biomacromoUkulas 137
a) b)
Figura IV.14: Visualizaci6n de la respuesta de cadenas later ales a un campo elect rico variable
a diferente temperatura. La temperatura del caso a) es menor que en b).
Figura IV.15: Esquema del espectro de rmn de una protein a salida hidratada. El detalle
muestra el aspecto de la linea correspondiente al agua.
EI modelo de intercambio
La formulacion rigurosa del modelo de intercambio se bas a en la interpretacion
de los resultados de rmn, tanto en cuanto a los aspectos dinamicos (tiempos de re-
lajacion) como estructurales (los factores de orden de las moleculas de agua). La
interpretacion inicial de dos fracciones de agua con propiedades dinamicas y estruc-
turales diferentes parte de la suposicion de que las dos fracciones poseen propiedades
dinamicas que operan en escalas de tiempo bien diferenciadas. Un compuesto de
bloque de hielo en agua nos dara dos seiiales separadas, ya que pese a que hay inter-
cambio entre los dos "compartimientos" (agua e hielo) ese intercambio se producira a
una frecuencia muy inferior a la de nuestro sistema de deteccion. l l
Supongamos que tenemos diversas fracciones en un sistema que intercambian a
una razon del orden 0 mayor que el tiempo de resolucion de nuestro sistema de
medicion. El tiempo de relajacion de rmn observado sera
1 ""' Pi (IV.7)
Tobs - ~ T(i) ,
11 Para rmn el tiempo caracteristico esta determinado por la (inversa de la) frecuencia de medici6n.
IV. Hidrataci6n de biomacromoUkulas 141
1 j (1 - f)
T,0bs = T,b + T,l ' (IV.8)
2 2 2
12La relaci6n entre ambos tiempos es Tc=aTd do de ::; a ::; 3. El valor de a depende del enfoque
te6rico utilizado y aun no existe un acuerdo unanime.
142 Temas de Biofisicoqufmica
~~L (IV.9)
T2 - Tf
Esta relacion permite obtener un valor para el tiempo de relajacion del agua
fija a sitios primarios y de alli el tipo de correlacion rotacional. Nos encontramos
por 10 tanto frente a la situacion que solamente una fraccion cercana al 10 % del
total del agua determina el resultado experimental bajo las condiciones de medici on
utilizadas. Un razonamiento similar nos lleva a que el desdoblamiento observado
corresponde al promedio total dominado por esa pequeiia fraccion. De alli pode-
mos establecer la orientacion promedio de esas dos moleculas de agua cada tres
aminoacidos que hacen de puente entre las diferentes cadenas del colageno.
EI modelo de hidratacion
r) El tiempo de residencia de las moleculas de agua es, para el promedio del agua
en sitios primarios, del orden de 10- 7 s.
III) Es posible identificar las posiciones del agua en los sitios primarios.
las energias de enlace, aun de las moleculas superficiales, hara que estas participen
con tiempos de residencia diferentes. Un estudio detallado de los sitios primarios nos
indica que el rango de tiempos de residencia es muy amplio. Sin embargo, el modelo
de dos est ados es un buen punta de partida y permite describir una amplia gama de
situaciones.
I
-N
Figura IV.17: Modelo de hidrataci6n del colageno. Dos moleculas de agua cada tres aminoaci-
dos ocupan sitios haciendo puente entre diferentes cadenas de la triple helice. La figura de la
derecha muestra el modelo construido en base a los datos experiment ales y la de la izquierda
es un detalle de un result ado de simulaci6n por dinamica molecular de un polipeptido tipo
colageno.
Una descripcion detallada de las moleculas en sitios especificos requiere mas que
su fraccion y el tiempo de residencia. El modelo de intercambio nos dice que el pasaje
de una fraccion a otra es suficientemente rapido como para que observemos el prome-
dio espacio-temporal entre ambos estados. Esto, que aplicamos a la determinacion
del tiempo de residencia, es valida para la orientacion molecular. Cuando, como en
el caso que hemos descrito, podemos obtener informacion sobre la orientacion media,
podemos aplicar el mismo esquema. Un "parametro de orden" que se puede utilizar
144 Temas de Biofisicoqufmica
(IV.I0)
(IV.11)
Figura IV.IS: Estructura de un polipeptido tipo colageno obtenida mediante simulaci6n por
dinamica molecular. a) en presencia de agua. a) Deshidratado (de referencia [14])
[1] RA. Gortner & W. A. Gortner,J. Gen. Physiol., 17, 327, 1934.
[3] Brunauer S., The adsorption of gases and vapors, Princeton University Press,
New Jersey, 1945.
[4] Brunauer S., Emmett P. H. & Teller E., J. Am. Chern. Soc., 60, 309, 1938.
[10] Mouawad L., Perahia D., Robert C.H. & Guilbert C.,Biophys. J., 82, 3224,
2002.
[11] Colombo M.F., D.C. Rau & Parsegian V.A., Science, 256, 655,1992.
[12] Salvay A., Grigera J.R & Colombo M.F., Biophys. J., 84, 564, 2003.
[13] Salvay A., Colombo M.F. & Grigera J.R ,Phys. Chern. Chern. Phys, 5, 192,
2003.
[14] Mogilner 1.G., Ruderman G. & Grigera J.R, J.Mol. Graph. Mod., 21, 209, 2002.
[16] Rayner M.D., Stakus J.G., Ruben P.C. et al., Biophys. J., 61, 96, 1992.
147
148 Temas de Biofisicoqufmica
[21] A.D. Podjarny, E.I. Howard, A. Urzhumtsev & J.R Grigera, Proteins, Struc-
ture, Function, and Genetics, 28, 303, 1997.
[24] RP. Rand & N. Fuller, Biophys. J., 61, A345, 1992.
[25] T.A. Steiz, M. Shoam & W.S. Bennett Jr., Phil. Tans. R.Soc. Lond., 293, 43,
1981.
[26] E. Carrillo-Nava, V. Dohnal& Costas M., Biophys. Chern., 107, 19, 2004.
[27] V.P. Denisov, Peters J., H.D. Horlei & B. Halle, Nature Sruct. Biol., 3, 50, 1996.
[30] B.D. Hilton, E. Hsi & RG. Bryant, J. Am. Chern. Soc, 99, 8487, 1977.
[32] J.R Grigera & I.G. Mogilner, Water Bridges in Myoglobin, En: Biophysics of
Water, editors F.Franks & S. Mathias, J. Wiley, Chichester, 1982.
[33] J.R Grigera & KJ. Bienkiewicz, Studia Biophysica, 103, 195, 1984.
[34] J.R Grigera & S. Mascarenhas, Studia Biophysica, 73, 19, 1978.
[36] G. Careri & J.A. Rupley, Proc. Nat. Acad. Sci., 83, 6810, 1986.
Lecturas suplementarias
Flujos
Todos los organismos vivos, desde los mas primitivos hast a los mas complejos,
utilizan el agua como vehiculo para el intercambio de nutrientes y desechos. En
los organismos mas complejos el agua circula en la sangre y linfa 0 savia, para la
distribucion de nutrientes, desechos, hormonas regulatorias, etc., en tanto que en
las formas mas primitivas de vida el intercambio se lleva a cabo directamente con
el medio circundante. Tanto en unos como en otros existe un intercambio directo
de las celulas con su entorno, sea este el medio externo 0 el fluido intracorporal, a
traves de las membranas celulares.
Para considerar el problema debemos tener presente primero las leyes que go-
biernan el pasaje de sustancias a traves de una membrana. Dado que los sistemas
biologicos est an fuera del equilibrio, debemos considerar este pasaje de sustancias
en el marco de la termodinamica del no-equilibrio.
El fiujo de una sustancia a traves de una superfice se define como la mas a que
pas a por la unidad de superficie en la unidad de tiempo. Se trata entonces de la
variaci6n de la mas a a uno y otro lado de la superfice definida, superficie que puede
ser una superficie real (ej. una membrana) 0 una superficie ideal. Puesto que el flujo
debe definirse con una direccion y sentido, es claro que tiene un caracter vectorial.
Las unidades del flujo resultan igual al producto de concentracion por velocidad.
Dado que la concentracion molar es c = n/vol, donde n es el numero de moles y vol
el volumen, encontramos que n = c x vol y el cociente n/(t x a) = c x vol/(t x a),
151
152 Temas de Biofisicoqufmica
con a igual al area. Es facil ver que las unidades resultantes son iguales al producto
concentracion por velocidad.
El concepto se puede generalizar a flujos en los cuales no se produce transporte
de masa, por ejemplo un flujo magnetico. Insistimos en que el flujo es una magnitud
vectorial, ya que el pasaje se realiza en una direccion y sentido.
Los flujos a traves de las membranas se producen por el efecto de una fuerza
termodinamica. A efectos de enfatizar que no necesariamente se trata de fuerzas
newtonianas (mecanicas) se las denomina Juerzas generalizadas. Estas fuerzas son
gradientes de potenciales termodinamicos, tales como gradientes de presion P, de
temperatura T, de potencial quimico /-l, de concentracion c, de potencial electrico V
u otros.
En un formulacion tradicional el flujo de una sustancia se debe a la accion de
una sola fuerza. Sin embargo. la experiencia nos muestra que esta situacion no
siempre se cumple. Un ejemplo 10 constituyen los efectos termoelectricos. 1 Estos (y
otros) efectos requieren, en un tratamiento clasico, consideraciones ad hoc. Veremos
mas adelante que el formalismo de la termodinamica del no-equilibrio nos permite
incluirlos en un tratamiento general
constante (V.1)
constante (V.2)
constante (V.3)
Puesto que el sistema no intercambia energia ni materia con el entorno, los valores
tot ales de ambos permanecen constantes,
E = EA + EB = constante, (V.4)
1 Los efectos Peltier y Thompson constituyen la base de las celdas utilizadas para enfriamiento
o calentamiento mediante la aplicaci6n de un campo elect rico y el uso de los pares termoelectricos
para la medici6n de temperatura.
v. Flujos 153
A IN B
NA NB
VA VB
TA TB
JE
EA EB
/-LA /-LB
Figura V.I: Esquema de un sistema formado por una caja cerrada dividida por una membrana
ideal. El sistema contiene solamente una sustancia pero la temperatura y potencial quimico
de la misma en cada parte de la caja es diferente. Se consider a que las propiedades de la
sustancia cambian abruptamente cuando la misma pasa de una region a otra, de tal manera
que cada parte del sistema es homogeneo
N = NA + NB = constante. (V.5)
De acuerdo al segundo principio de la termodinamica sabemos que la entropia
total del sistema no puede disminuir, por 10 tanto sera:
(V.6)
donde el signo igual se cumple solamente para el equilibrio.
El cambio de energia en cada subregion sera:
(V.7)
(aE)
as
_T
V,N
y (V.g)
obtenemos
_ dEA-I"AdNA
- TA (V.12)
_ dEB-I"BdNB
TB (V.13)
De V.4 Y V.5 sabemos que dEA = -dEB Y dNA = -dNB, de tal manera que
utilizando (V.6) obtenemos
(V.14)
de donde
(V.15)
J _ dNB/dt
N- A ' (V.16)
1 1
XE --- (V. IS)
TB TA
/-LA /-LB
- - -,
XN (V.19)
TA TB
por 10 tanto podemos escribir a la funcion de disipacion como
(V.20)
2N6tese que hemos indicado el flujo como vector. Esto surge ya que las derivadas de la ener-
gia y materia en la ecuaci6n V.13 corresponden a la componente del gradiente en la direcci6n
perpendicular a la membrana. Estas derivadas corresponden a las fuerzas conjugadas.
v. Flujos 155
donde los productos de flujos por fuerzas son productos escalares entre ambos vec-
tores, consecuentemente la funcion de disipacion es escalar.
En general para N flujos y fuerzas podemos escribir
(V.21)
Dado que los flujos y fuerzas disminuyen cuando el sistema se acerca al equilibrio,
la produccion de entropia se realizara mas rapidamente cuanto el sistema mas lejos
este del mismo. En el equibrio todos los flujos y fuerzas son nulos y, por 10 tanto, la
funcion de disipacion tambien 10 es.
Vemos en las ecuaciones V.lS y V.19 que la fuerza conjugada del flujo de energia
es igual a la diferencia (el gradient e) de la inversa de la temperatura, y la fuerza
conjugada del flujo de materia es igual a la diferencia (el gradient e) entre el cociente
del potencial quimico y la temperatura cambiada de signo. Debe tenerse en cuenta
que solamente para un sistema isotermico esta fuerza depende unicamente de los
valores del potencial quimico.
Nuestro objetivo es encontrar expresiones para los flujos. Puesto que no sabemos
su dependencia funcional, utilizaremos un desarrollo en serie de potencias. Para
varias variables, un desarrollo de Taylor alrededor de cero se expresa como:
Utilizaremos este procedimiento para obtener una expresion general para los flujos
mediante un desarrollo alrededor de cero; para un flujo generico i tenemos
(V.24)
f}2 J i
LiJk = f}XJf}Xk
(V.25)
156 Temas de Biofisicoqufmica
Puesto que el desarrollo se realiza alrededor del cero, el primer termino corre-
sponde a J i para Xl, X 2 , ... , Xn = 0, y, consecuentemente, dado que todas las
fuerzas alli son nulas, el primer coeficiente sera Li = Ji(O, 0, 0, ... ,0) = O.
Para un sistema cerca del equilibrio podemos quedarnos en la aproximacion lineal
y despreciar todos los terminos de segundo grado en adelante, obteniendo
Ji = LLijXj . (V.26)
j
Para el caso del ejemplo, donde tenemos solamente dos flujos resulta
(V.29)
En el marco de la Termodinamica, estas relaciones constituyen un postulado.
Es de hacer notar que la existencia de esta simetria hace que el numero de coefi-
cientes fenomenologicos, a determinar experimentalmente, se yea reducido en forma
considerable.
Otra relacion importante, que se obtiene de la condicion de que la funcion de
disipacion debe ser positiva; esto nos indica que los coeficientes fenomenologicos
correspondientes a las fuerzas conjugadas de los flujos deb en ser positivos.
Simbolicamente tenemos
LnX1 + L 12 X 2, (V.31)
L 21 X 1 + L 22 X 2. (V.32)
(V.33)
LnXI + L l2 X 2 = 0, (V.35)
L 2l X I + L 22 X 2 # o. (V.36)
:;¢ =
uXI
2LnXI + 2L l2 X 2 = 2J I = o. (V.37)
Vemos que para el sistema en est ado estacionario de orden 1 la funcion de disi-
pacion, es decir la produccion de entropia por unidad de tiempo y unidad de area, es
minima. Esta conclusion, que hemos obtenido para un caso particular, se puede gene-
ralizar. El caso trivial es el est ado estacionario de orden cero, el est ado de equilibrio,
donde la produccion de entropia es nula.
Este resultado es en realidad un camino para definir el est ado estacionario como
aquel para el cualla funcion de disipacion es minima para el conjuno de restricciones
aplicadas al sistema. 3
Agua Soluci6n
M
e
m
0 b
r
a
n
CD
a
Figura V.2: Dos compartimientos separados por una membrana idealmente semi- permeable.
(V.38)
para el compartimiento 2 (solucion)
(V.39)
donde R es la constante universal de los gases y aa la actividad del agua en la
solucion a temperatura T y presion P2.
En el equilibrio ambos potenciales quimicos deb en ser iguales, por 10 que obte-
nemos
(V.40)
reordenando
(V.41)
160 Temas de Biofisicoqufmica
( OJ-l*)
op T
_
= Va, (V.42)
(V.43)
(V.44)
hemos supuesto que el volumen molar parcial es independiente de la presion. 4
A la diferencia entre las presiones a uno y otro lado de la membrana la denomi-
namos presi6n osm6tica II = (P2 - PI) Y la podemos escribir, a partir de la ecuacion
V.44 como
1
II = -=-RTln(aa)r,p. (V.45)
Va
(V.46)
(V.47)
4Esto no es estrictamente cierto para el agua. Dado que: V a (p2 - Pl)[l - W(Pl - P2)] Y puesto
que W = 4 X 10- 5atm, la correcci6n resulta despreciable.
v. Flujos 161
(V.4S)
1
II~ ( )RTNs . (V.4g)
Va Ns +Na
Pero para una solucion diluida podemos adem as despreciar el numero de molecu-
las del soluto frente a las del solvente, por 10 que el volumen total vt ~ vaNa y
puesto que Ns/vt = Cs , la concentacion molar del soluto en la solucion, llegamos a:
(V. 50)
Esta es la ecuacwn de van't Hoff la que debe tomarse con cautela si nuestra
solucion no cumple la doble condicion de ideal y diluida.
Para las soluciones electroliticas la condicion de idealidad se logra solamente a
diluciones extremadamente bajas, ya que la interaccion electrostatica es muy fuerte.
Por otra parte, la concentracion de particulas para una cierta concentracion de sal
depende del numero de iones en la cual se disocia. Es frecuente escribir la ecuacion
de van't Hoff como:
(V.51)
v es un coeficiente estequiometrico que indica el numero de iones presentes.
Resulta claro que estas expresiones aproximadas tienen una validez restringida
aunque su simplicidad es atrayente. Si hacemos el cociente entre la presion osmotica
real y la presion osmotica ideal (es decir la obtenida mediante la ecuacion V.50)
tenemos
podemos escribir
5Recordemos que para x < 1 se cumple que In(l + x) = x - ~x2 + ... que, para valores muy
pequenos de xes: In( 1 + x) c:::' x.
6Para una soluci6n diluida tenemos Ns « N a , en consecuencia Na c:::' Ntotal; por 10 tanto
Ns/[va(Na + N s )] c:::' Ns/(vaNtotal) = Ns/Vtotal = C s , con C s la concentraci6n molar del soluto.
162 Temas de Biofisicoqufmica
(v. 53)
donde ¢ es el coeficiente osm6tico.
El coeficiente osmotico puede determinarse experimentalmente 0 mediante dife-
rentes teorias, pero debe tenerse en cuenta que depende no solamente del soluto en
particular sino adem as de la temperatura y la concentracion de la solucion. Para un
numero limit ado de soluciones existen tablas del coeficiente osmotico que permiten
prepar las soluciones deseadas en forma simplificada. 7 A traves de la Aproximacion
Esferica Media se han desarrollado formulas apropiadas para el computo de coe-
ficientes osmoticos y de actividades ionicas individuales de sales de composicion
arbiraria, particularmente de interes biologico [3].
Soluciones iso-osmoticas
La presion osmotica que hemos definido se refiere a un sistema con dos com-
partimientos separados por una membrana, en uno de los cuales tenemos solvente
puro y en el otro la solucion. Este sistema nos permite definir operacionalmente la
presion osmotica, la que hemos expresado a traves de un analisis termodinamico.
Podemos definir para una solucion la presion osmotica independientemente del dis-
positivo experimental. Definida asi, podemos comparar las presiones osmoticas de
dos soluciones. Dos soluciones se dicen isoosm6ticas si tienen igual presion osmotica.
,
V.4. Osmosis a traves de membranas reales
(V.54)
donde dJ-la y dJ-ls son las fuerzas conjugadas de los flujos de soluto y solvente res-
pectivamente. Recordemos que las fuerzas conjugadas del transporte de materia son
iguales a la diferencia (gradiente) del cociente entre el potencial quimico y la tempe-
ratura. En nuestro caso, dado que la temperatura es constante, tomamos solamente
la diferencia (gradiente) del potencial quimico.
Los flujos se expresan como
Ja = LadJ-la + LasdJ-ls
Js = LasdJ-la + LsdJ-ls. (V. 55)
donde Va Y Vs son los volumenes mol ares parciales del solvente y soluto respect iva-
mente y aa y as, las actividades.
Recordando que flln u = ~u, y considerando una solucion muy diluida es posible
escribir
_ RTflc s
flJ-la = va flP - ,
Cw
_ RTflc s
flJ-ls = v sflP + , (V.57)
Cs
8Debemos tener presente que la presi6n osm6tica esta definida para el sistema en equilibria.
164 Temas de Biofisicoqufmica
Hasta aqul no hemos hecho mas que escribir explicitamente los flujos de solvente y
soluto a traves de la membrana para nuestro sistema. Estos no son los flujos que nos
interesan en este momenta y, dado que la eleccion de flujos tiene un cierto grado de
arbitrariedad provisto que utilicemos las fuerzas correspondientes, aprovecharemos
de esa propiedad.
Definamos el fiujo de volumen J v , el cual es posible medir experimentalmente.
Tanto el solvente como el soluto inciden en la variacion de volumen en los com-
partimientos. Su contribucion es simple de calcular ya que el producto del numero
de particulas por su volumen molar represent an la contribucion al volumen total.
Teniendo en cuenta esto podemos escribir:
(V. 59)
El otro flujo que debemos considerar es el pasaje de sustancia que no contribuye
ala variacion de volumen JD, que escribimos como
JD = Js _ Ja . (V.60)
Cs Ca
(V.61)
y para los flujos:
Jv = Lpfl.P
JD = LpDfl.P, (V.64)
EI coeficiente de reflexion
Suponiendo que inicialmente tenemos en una parte del sistema agua pura, fl.c s
es simplemente cs , es decir que la concentracion del soluto es igual al cambio en la
concentracion entre una y otra parte del sistema. Por otra parte, para una solucion
ideal la presion osmotica (en equilibrio) esta dada por la ecuacion de van't Hoff
(ecuacion V.51)
(V.66)
IIa LpD
(J= - = ---. (V.67)
II t Lp
Este coeficiente es igual a la unidad para una membrana idealmente semi-permeable.
Para una membrana real el coeficiente (J toma un valor entre cero y uno y para casos
muy especiales hast a puede ser negativo. 9
Estas ecuaciones son las que corresponden para cambio de volumen nulo (Jv = 0).
Las soluciones participantes en el sistema se denominan isot6nicas, aunque existe
una presion osmotica. En el caso de las soluciones isoosmoticas, que definimos ante-
riormente, estabamos ante una situacion en la que la propiedad era exclusiva de las
soluciones. En este caso la definicion es valida para una membrana en particular, la
cual esta caracterizada a traves de los coeficientes fenomenologicos.
la produccion de entropia es
(V.69)
(V.70)
por 10 tanto
(V.71)
Substituyendo en las ecuaciones V.68 y V.69, tenemos
Xm [)'(;)+h[)'(-~) (V.73)
XQ = [).(-~), (V.74)
Sabemos que
J-l=h-Ts, (V.76)
(V.77)
fl(-~) (V.78)
Utilizando las ecuaciones V.75 y V.76 con las V.77 y V.78 en las expresiones de
las fuerzas (V.73,V.74), obtenemos
(V.79)
(V.80)
Flujo termo-osmotico
Jm = Lmfi(b./)
JQ = LmQfi (b./) . (V.82)
Vemos aqul que el flujo de calor se produce incluso para una diferencia de tempe-
ratura igual a cero. Esto se debe a que la materia al pasar a traves de la membrana es
portadora de calor. Para evitar que se produzca un gradiente de temperatura por ese
pasaje se produce un flujo de calor en la direccion opuesta. En est ado estacionario
se encuentra
(V.83)
La presion termo-osmotica
El segundo caso que analizaremos es aquel en el cual el flujo de materia en el
sistema es nulo. Si partimos de la primer a de las ecuaciones V.81 con J m = 0,
obtenemos
Q*
(V.84)
fiT'
Q*f:)..T
f:)..P=---. (V.85)
fiT
V. Flujos 169
Figura V.3: Dos recipientes conteniendo agua pura a diferente temperatura Tl > T 2 . Una
caja cubre ambos recipientes para evitar la perdida de agua del sistema.
Veamos un ejemplo. El sistema esta represent ado en la figura V.3. AquIla "mem-
brana" es la interface aguajaire y el flujo se produce cuando el agua es vaporizada
en el compartimiento 1 y se condensa en el 2.
Asignemos valores numericos a la ecuacion V.84 teniendo en cuenta que en este
caso Q* es el calor latente del agua (L = 582 calorias por gramo = 24.05 litros-
atmosferas por gramo). El volumen molar del agua es v = 0,001 litrojgramo y
asignamos una temperatura T = 298 K. Obtenemos
fl.p 24,05
(V.86)
fl.T 0,001 x 298
-80,6 atm. j grado. (V.87)
Vemos que para una temperatura de tan solo un grado la diferencia de presion
es considerablemente grande.
El resultado es notable, ya que normalmente suponemos, de manera implicita,
que el efecto de la temperatura sera despreciable. Incluso para seres homotermicos,
las celulas con un metabolismo activo pueden generar gradientes de temperatura
que, aparentemente, pueden ser relevantes al balance osmotico.
Es claro que el efecto depende directamente del valor de Q*. El resultado anterior
sorprende en cuanto a que produce un valor grande de la presion termoosmotica;
pero por otra parte, todo es acorde con 10 que esperamos: el agua se mueve desde el
recipiente mas caliente hacia el mas frio. Una sorpresa mayor seria que se produzca
el pasaje del recipiente frio al caliente. En la realidad eso tambien puede ocurrir.
170 Temas de Biofisicoqufmica
Hemos consider ado hast a el momenta sistemas en los que la membrana tenia un
espesor infinitesimal y donde los cambios se producian abruptamente al cruzar la
superficie ideal definida por la membrana. Estos sistemas pueden representar mu-
chos casos reales pero no siempre es asi.lO Para una membrana de espesor finito
se producen dos interfaces, una en cada compartimiento, con las correspondientes
discontinuidades. En el interior de la membrana se producen cambios que deb en
ser tenidos en cuenta. En realidad podemos tratar el sistema como de tres com par-
timientos, considerando la membrana como el tercero. Las caracteristicas de los dos
compartimientos cuyas soluciones baiian la membrana, pueden ser tratadas como
hast a ahora donde las propiedades de las sustancias dentro del subsistema (poten-
ciales quimicos, temperatura, presion, etc.) se mantienen constantes dentro de cada
uno de enos. Esto no es estrictamente cierto para la membrana, donde se producen
cambios graduales en ciertas propiedades.
Es posible considerar a la membrana como un solvente de manera de tener una
nueva fase homogenea con propiedades bien definidas y diferente de los otros dos
compartimientos separados por la misma. Suponiendo que se mantiene el equilibrio
en la interfase, aceptamos que la temperatura (T) y el potencial quimico (J-l) senin
continuos en dicha interfase, en tanto que la presion (p), la concentracion (c) y el
potencial electrico (Vel ect ) , si estuviera presente, pueden ser discontiuos.
Analizando el sistema encontramos que el resultado para el cambio de presion
con la temperatura puede ser descripto por la ecuacion V.84 redefiniendo Q* como:
Q* = Qm + flhm, (V.88)
(J v / flT)~p=o -Q*
(V.89)
(J v / flP)~T=O vT
(V.90)
donde hemos consider ado el flujo total y no el flujo por unidad de superficie (de
alli que indicamos con L' el coeficiente fenomenologico)
172 Temas de Biofisicoqufmica
Ja = -L'c (V.91)
= ~dn/dt = -L'c (V.92)
= dc/dt = -Lc, (V.93)
dc it
f
C(t) I
- = -L dt, (V.94)
co c a
de donde
c(0)
L·= 0.2
L·=0.5
o 2 4 6 8 10
tierJllO
Figura V.5: Representaci6n gnifica de la ecuaci6n V.96 para diferentes valores de 1'.
A +B ---t AB (V.97)
V.5.2. Trazadores
R a)
1
klO
Figura V.6: Dos modelos teoricos diferentes correspondientes a diferentes sistemas reales.
V.5.3. Modelos
Ja = L/~c (V.99)
= dc/dt = L(C2 - CI). (V.100)
En este caso simple el modelo esta represent ado con esta ecuacion, que podemos
resolver con facilidad. 12 Dado que CI + C2 = Co, tenemos que C2 = Co - CI, por 10 que
resulta
f co
C(t) _d_c_
2c - Co
= -L' rt
Jo
dt. (V.102)
Integrando
finalmente
Co -2L't Co
c ()
t = -e
2
+-
2
(V.106)
12Muchos autores describen los modelos matematicos en terminos de constantes cineticas que
suelen homologarse a "flujos unidireccionales". Este planteo, si bien lleva a los mismos resultados
finales, genera la idea de la existencia real de esos flujos, cosa que no esta de acuerdo con el
tratamiento termodinamico donde definimos los flujos como un pasaje neto de un compartimiento
a otro.
V. Flujos 177
c(O)
L'=O,2
L'=2 L'=O,5
c(OY2
10 15
tiempo
Figura V.7: Representaci6n gnifica de la ecuaci6n V.I06 para diferentes valores de 1'.
V.5.4. EI procedimiento
perimentales nos danin una indicacion sobre la plausibilidad del modelo planteado.
Debe tenerse en cuenta que ciertos aspectos del modelo pueden aparecer ocultos
en las curvas experiment ales debido al error introducido. Un numero de panimetros
a ajustar excesivo no permite obtener resultados concluyentes. Es esencial obtener
informacion adicional, a menos que surja un resultado muy claro.
Captacion y lavado
13Es evidente que esta aseveraci6n es valida dentro de la precisi6n de las medidas y ese es el
sentido de "tamano infinito" del reservorio.
v. Flujos 179
=
. .:.;:. "". . .
Co ..-............................. =....~
.. - - - I ·5
·5
'0
I !
tiemp:>
tiffilJXl
a) b)
'",
Co
">~g
!
·5
i8 .==~---Icfrn
o~--------------~ o~----,,~_=o~----~
a) b)
[2] Documenta Geigy. Tablas Cientificas 6. ed. J.R. Geigy S.A., Basel, Switzerland,
1965.
Lecturas suplementarias
181
Capitulo VI
Difusion simple
(Vr.1)
donde hemos indicado con Pi al coeficiente fenomenologico del componente i, que
Hamaremos permeabilidad de la membrana y ~Ci = C~i) - c~i) a la diferencia de
concentracion de la componente i a ambos lados de la membrana. Claramente es-
tamos adoptando una formulacion muy simple en la que despreciamos todo posible
acoplamiento entre flujos y consider amos que la fuerza termodinamica para el pasaje
puede escribirse como la diferencia de concentracion.
183
184 Temas de Biofisicoqufmica
La ecuacion Vr.1 es una ecuacion lineal en ~Ci que, obviamente, se puede repre-
sentar en el plano ~Ci' J i con un recta de pendiente Pi que pas a por el origen (Fig.
Vr.1). Hablamos de un caso de difusi6n simple.
Difusion facilitada
4~----------~---------------'
""""""""""""""""""""""~\'l~r,,,
/
J
Difusi6n facilitada
O+----+----~--~--~----+----i
o 10
Figura Vr.I: Difusi6n simple y difusi6n facilitada a traves de una membrana que separa dos
compartimientos 1 y 2.
VI. Ttansporte 185
1 membrana 2
pI
Cl = [51] ---t 5+T ~ T+5 ---t C2 [52]
kl1lk-l p
kl1lk-l
5T ~ 5T
(VI.2)
(VI.4)
(VI.5)
o_ 81 (VI.6)
1 - 8 1 +Km
Exactamente el mismo razonamiento nos lleva a que en la cara 2 tendremos
o_ 82 (VI.7)
2 - 8 2 +Km
Utilizando est os valores en la ecuacion VI.3 obtenemos
(VI.8)
VI. Ttansporte 187
(VI.9)
(VI.10)
Contra-tra nsporte
Una celula viva no se encuentra en equilibrio con el medio circundante. Sin em-
bargo, la composicion de la misma es considerablemente estable, 10 que se evidencia
claramente en el contenido ionco en su interior. Esto se debe a que se mantiene un
est ado estacionario, el que, como hemos visto, es un est ado en el cualla produccion
de entropia es minima para las restricciones externas del sistema. El mantenimiento
de este est ado estacionario no puede sino hacerse mediante el consumo de energia,
cuya fuente, en la celula, es el propio metabolismo.
188 Temas de Biofisicoqufmica
1 El principia de Curie establece que no se pueden acoplar fen6menos tensiorales de orden dife-
el transporte proviene de alguna manera del acoplamiento con el otro flujo. Esto
no debe sorprendernos, ya que la energia metabolica depende, entre otras cosas, de
la disponibilidad de oxigeno. El flujo de oxigeno esta ciertamente acoplado al flujo
de sustancias que son sujeto del transporte activo. En nuestro sistema simplificado
no analizamos los detalles de ese acoplamiento desde el punta de vista mecanistico.
Expresamos los dos flujos como
donde hemos consider ado al flujo 1 como el que se hace cero por efecto del transporte
activo. Sin transporte activo el flujo 1 para valores no nulos de la fuerza Xl no seria
nulo. Ese es el caso de, por ejemplo, los iones K+ en la celula, donde para mantener
su concentracion constante ingresan iones en contra del gradiente de concentracion
mediante el transporte activo.
La velocidad de disi pacion local de energia por el sistema se puede expresar como
el producto de la temperatura local por la velocidad de produccion de entropia, es
decir, la funcion de disi pacion
(VI.13)
Dado que J I = °solamente contribuye el producto J 2 X 2 , tenemos
(VI. 14)
De la ecuacion VI. 11 podemos despejar el valor de la fuerza conjugada del flujo 2
(VI.15)
Este resultado nos brinda una informacion interesante. Vemos que la disipacion
de energia es mas rapida cuanto mayor es la fuerza conjugada del flujo 1, en par-
ticular con el cuadrado de esa fuerza. El resultado es facil de interpretar. Cuanto
mayor fuerza termodinamica existe para el pasaje de la sustancia 1, el sistema se
movera mas facilmente hacia el equilibrio, 10 que debe contrarrestarse mediante el
transporte activo insumiendo mas energia.
190 Temas de Biofisicoqufmica
Otra consecuencia que podemos extraer es que la disipacion disminuye con Lr2'
el coeficiente de acoplamiento. Esto nos indica que gastaremos menos energia si los
flujos est an bien acoplados.
Veamos otro aspecto del problema. De la ecuacion VI.ll podemos obtener Xl
como
L12
Xl = --X2 (VI. 17)
L11
y, reemplazando en VI.12, obtener el flujo de la sustancia 2
(VI.18)
(VI.19)
con
(VI.20)
Vista de esta forma se nos muestra con una expresion simple donde el flujo es
proporcional a la fuerza impulsora. La caracteristica interesante es que la constante
de proporcionalidad (el coeficiente fenomenologico "efectivo" LeJec) no es la que
esperamos para el flujo 2 en condiciones norm ales sino que esta reducida por efecto
del acoplamiento con el termino ~LL22.
11
Resulta claro entonces que el hecho de mantener
el flujo 1 nulo Ie "cuesta" al flujo 2 cierto valor, resultando que ese flujo es menor
que el que corresponderia si no hubiera acoplamiento. Tanto menor cuanto mas facil
resulte el pasaje del flujo 1 (al que hay que contrarrestar), ya que a mayor valor de
L11 menor sera el coeficiente fenomenologico efectivo.
2La cadena respiratoria se encuentra descripta en detalle en muchos buenos libros de Bioquimica.
Bibliograffa
Lecturas suplementarias
• K.D. Neame & T.G. Richards, Cinetica del transporte a traves de mem-
branas, Blume Ediciones, Madrid, 1976.
193
Capitulo VII
Potenciales de membrana
1 Recordemos que movilidad se define como velocidad por unidad de campo. En nuestro caso
por unidad de campo electrico, para un fen6meno de sedimentaci6n, sera velocidad por unidad de
campo gravitatorio, etc.
195
196 Temas de Biofisicoqufmica
0
J1i = J1 + Pv + RT In e + zF1/J, (VII. 1)
don de hemos considerado la concentracion en lugar de la actividad. Dado que
consideramos una unica direccion de variacion, perpendicular a la membrana,
escribimos el gradiente como la derivada respecto de la direccion x
1 de v dP zF d1/J]
J = -weRT [ ~ dx + RT dx + RT dx (VII.3)
de
J= -wRT- (VIl.4)
dx'
2Como vimos en el capitulo V, el flujo es resultado del efecto de las diferentes fuerzas presentes.
Este tratamiento, que podriamos Hamar clasico, no considera explicitamente los flujos asociados.
Adicionalmente ya que se supone temperatura constante la fuerza termodinamica del transporte de
materia, definida como el gradiente de fLIT, resulta ser simplemente el gradiente de fL.
VII. Potenciales 197
La ecuacion VII.3 es una ecuacion diferencial que debemos integrar con las
condiciones de contorno apropiadas. Esto requiere de algunas suposiciones. Las
aproximaciones efectuadas por Goldman permit en integrar la ecuacion. Una de
las aproximaciones consiste en considerar que el campo eh§ctrico en el interior
de la membrana es constante, 10 que trae como consecuencia que podemos
reemplazar d7jJ / dx por b.7jJ / b.x, y la otra es considerar que no hay variaciones
de presion (dP/dx = 0). La ecuacionVII.3 se reduce a:
J dc zF b.7jJ
---=-+c--. (VII.6)
wRT dx RT b.x
Esta es una ecuacion diferencial de primer orden en c lineal no-homogenea
que puede resolverse facilmente considerando que para x = 0 la concentracion
c = Cl Y para x = b.x, el otro lado de la membrana, c = C2
J ZFb.7jJ]_ZFt:,.,p J zFb.7jJ
C2 = wRT RTb.x e RT + wRT RTb.x' (VII. 7)
[ Cl -
(VII.8)
(VII.9)
198 Temas de Biofisicoqufmica
(VILIO)
(VILl1)
(VILI2)
Los fiujos de los dos iones deben ser de igual valor absoluto pero de signos
opuestos de tal suerte que su suma no arroje corriente neta, 10 que se observa en
las ecuaciones VII. 9 Y VILI2. Igualando entonces esas ecuaciones obtenemos
F6,p
(W+Cl + w_c2)e- RT = W+C2 - W-Cl (VILI3)
(VILI4)
(VII. 17)
Las ecuaciones que hemos visto nos dan cuenta del potencial a traves de la
membrana en terminos de las concentraciones y permeabilidades de los iones
de mayor aporte al potencial.
Las celulas llamadas excitables (nervios y musculos) tienen la propiedad
de cambiar el potencial de membrana abruptamente ante la recepcion de un
estlmulo apropiado. La respuesta debe ser correct a no solamente en cuanto a
los niveles de potencial sino tambien con respecto al tiempo de reaccion.
Si observamos la ecuacion VII.17 vemos que el potencial no depende unica-
mente de las concentraciones relativas sino tambien de la permeabilidad. Los
tiempos requeridos para la produccion del impulso no pueden ser logrados por
200 Temas de Biofisicoqufmica
(VII. 18)
pr - PK
=1 (VII. 19)
K PK
_ P Na
PNa PK
= 0,04 (VII.20)
_ PCI
P!;z PK
= 0,45 (VII.21)
/).1jJ(K) = RT
-- I n [[Kli]
- (VII.23)
F [Kle'
el valor del potencial de reposo es
VII. Potenciales 201
Cuadra VII.I: Concentraci6n tipica de iones en el interior y exterior celular (de ref.[I]).
Conc. /mmoll- 1
Ion Exterior Interior
Na+ 145 12
K+ 4 139
Ca++ 1.8 <0,002
Mg++ 1.5 0.8
Cl- 116 4
EI potencial de accion
pr =EK =1 (VII.25)
K P K
_ P Na
Piva PK
= 20 (VII.26)
_ PCI
P!;z PK
= 0,45. (VII.27)
Podemos ver que la permeabilidad relativa del sodio aumenta 500 veces.
Este cambio invierte las condiciones y la contribucion que podemos despreciar
debido ala permeabilidad baja es la del potasio. El potencial debido solamente
al sodio durante la excitacion es
Lecturas suplementarias
• K.D. Neame & T.G. Richards, Cinetic del transporte a a traves de mem-
branas, Blume Ediciones, Madrid, 1976.
203
Capitulo VIII
L' eau! ... Tu n' est pas 1lI3cessaire it la vie: tu est la vie. 1
ANTOINE DE SAINT-EXUPERY, Terre des hommes
205
206 Temas de Biofisicoqufmica
2El interior de un gl6bulo rajo madura es esencialmente una vesicula llena de una soluci6n salina
de hemoglobina.
VIII. El agua en las celulas 207
(VIlLI)
Si suponemos equilibrio, el potencial electroqulmico deb era tener igual valor
para cada componente, 10 que se expresa como
D = J.lNa
i! esto es D
J.lNa -
i!
J.lNa =
0 (VIlL2)
J.lNa
VIII. El agua en las celulas 209
D
MCI -
£
MCI =
0. (VIII. 3)
Para N a + tenemos
(VIIl.4)
(VIII. 5)
£ ) liz ( £ ) liz
RTln a~a = RTln a~l , (VIII. 7)
(
aNa a Cl
10 que significa que
(VIII. 8)
(VIII. 9)
(VIII. 10)
210 Temas de Biofisicoqufmica
I! I!c-v DD
mClmNa - mClmNa· (VIII. 11)
En nuestro caso, m~a = m~l = ml!, entonces
(VIII. 13)
Esta es la relacion clave en el equilibrio Donnan. Antes de ir ala discusion del
problema veamos algunas definiciones. Primero, definiremos la Juerza Donnan
relativa4 que es la relacion entre la concentracion de las cargas no difusibles
y la concentracion de las cargas libres en la fase libre. Debe tenerse presente
que la concentracion de las cargas no difusibles excede largamente el numero
de particulas no difusibles.
D = mx (VIII. 14)
mI!·
4El nombre tiene reminiscencia a la Hamada juerza i6nica donde tampoco tiene conexi6n con
ningun tipo de fuerza pero cuyo nombre ha consagrado la costumbre.
VIII. El agua en las celulas 211
(VIII. 16)
(VIII. 17)
y para Cl-
12'-~--~--------=71
-4
-8+····.···········.··········.······--........,·.········
Figura VIII. 2: Coeficiente de acumulaci6n en funci6n de la fuerza Donnan rei at iva para un
sistema Donnan con una fase libre formada por una soluci6n de N aCl.
(VIII. 19)
y en la fase Donnan
la forma el bano, y todo cambio del contenido salino de esa fase infiuini no
solamente en la diferencia de potencial entre el gel y el entomo sino tambien
en la diferencia de presion osmotica entre ambas. Cuando la salinidad del bano
disminuye, la fuerza Donnan relativa aumenta y, consecuentemente, cambia el
coeficiente de acumulacion produciendo una captura de agua por parte del gel
debido a la presion osmotica. Este efecto de hinchamiento se revierte aumen-
tando la salinidad del bano.
5Esto nos lleva al interesante t6pico del tmnsporte activo que ya tratamos en otro capitulo.
Sin embargo, es de hacer notar que gran parte del des balance aparente en concentraci6n i6nica
es compensado por la gran diferencia en la actividad entre el interior y exterior. Actividad que
esta controlada por la fijaci6n selectiva de los diferentes iones.
214 Temas de Biofisicoqufmica
215
Apendices
217
218 Temas de Biofisicoqufmica
Apendice A
Mecanica estadfstica
quienes, por ejemplo, describen una molecula por sus coordenadas internas.
219
220 Temas de Biofisicoqufmica
V/N = v 23
10 ) es impensable, de tal manera que se requiere, como men-
C"V
2En un sistema cuantico, R es un operador y el estado del sistema se especifica con las funciones
de onda de las N particulas
A. Mecanica Estadfstica 221
p(p, q) = e- H / kT , (A.2)
con:
U =E (A.4)
1
T
= (Zi)v (A.5)
P
T = (Zt)E' (A.6)
Consecuentemente:
(A.12)
(A.13)
A = -kTlnQN(V, T) (A.14)
A. Mecanica Estadfstica 223
U= (H) (A.15)
(U) = _(BlnQN)
BkT N,v (Energia media) (A.16)
p= -(~C)T (Presion) (A.17)
s= -(~¢ )v (Entropia) (A.18)
(A.19)
eP,N/kT
p(p q N) = e PV/ kT -7-l(p,q)/kT (A.21)
, ' N ! h dN - k '
224 Temas de Biofisicoqufmica
00
u= (E) (A.23)
(E) = -
( 33 )
3kT J.L/kT,v
(Energia media) (A.24)
p= - kJ in 3(T, /1, V) (Presion) (A.25)
~T
s= o dT~
T (Entropia) (A.26)
A= U-TS (Energia libre de Helmholtz) (A.27)
3 A mayor densidad de estados, mayor numero de estados accesibles, mayor sera la entropia.
A. Mecanica Estadfstica 225
o o
Pnm =
(A.28)
don de gi es la degeneracion.
Necesitamos encontrar el factor de proporcionalidad. La relacion entre el
numero de moleculas en dos niveles de energla dados es, de acuerdo a Boltz-
mann,
p., gieEi/kT
p.] (A.29)
n·] gje Ej / kT ·
(A.30)
226 Temas de Biofisicoqufmica
Espectroscopfa
B.l. Introducci6n
227
228 Temas de Biofisicoqufmica
-4 4
10 10-2 102 10 10
6
10
8
10
10
v/em-1
I I
4 -4
10 102 10-2 10 10-6 10-8 10- 10
A/em
6 8 10 14 16 18 20
3 X 10 3 X 10 3 X 10- 3 x 101~/Hz3 X 10 3 X 10 3X10 3 X 10
I
-8 -6 -4 -2 2 4 6
1,2 x 10 1,2 x 10 1,2 x 10 1,2 x 10 1,2 1,2 x 10 1,2 x 10 1,2 x10
E leV
1
V = - (B.2)
A
don de el numero de ondas posee unidades de cm- 1 con A en cm. El numero de
ondas es el numero de picos de maxima amplitud por centlmetro a 10 largo de
la onda y la longitud de onda es la distancia entre dos maximos (0 m{nimos)
sucesivos. Es frecuente en espectros del ultraviolet a lejano, rayos X y la region
de rayos I referirse a la energ{a mas que a la frecuencia. La conversion, que
se realiza a traves de la ecuacion de Planck 6.E = hv, nos da por ejemplo
para una longitud de onda de 200 nm una energ{a de aproximadamente 589 kJ
mol- 1 0 6 eV (electron-volt). Estas unidades se utilizan regularmente en los
estudios de altas energ{as.
Estado excitado
----,,....--
o
·ut::
G1
U
til
~
o:::I
u:::
Estado fundamental
Absorcion Emision
,2
!!'
<II
r::
w
'--
-- Eslado excilado
Eslado lundamenlal
•
\
\. ./
~
0
I- XAB-I
0 XAB
(B.3)
don de 10 es la intensidad luminosa de la fuente y E el coeficiente de extinci6n
expresado en 1 mol- I cm-I. Los datos se suelen informar en terminos del por-
centaje de absorcion (I / 10 x 100) 0 absorbancia [A = In(Io/1)], que result a una
expresion muy practica ya que:
A = E le. (B.4)
Cuando la molaridad de la solucion es desconocida 0 con gran error es mas
conveniente utilizar la concentracion en gramos por 100 ml de solucion (C) ,
para 10 que se requiere el coeficiente de extincion con las unidades adecuadas.
Tenemos entonces la absorbancia como:
(B.5)
B. Espectroscopfa 231
·1 Sobretonos
Anml v\cm Bandas
combinadas
2500 4000 4000
- - - - - Absorcion
_____ del agua
3333 CH 3000
SH
0 - 0
Sin puente H Con puente H
Figura B.4: Bandas de absorcion en la region del infrarrojo de algunos grupos de importancia
biologica.
Estado
-------------------- ----------
virtual
Figura B.5: Esquema de los niveles de energia para un sistema con absorcion en el infrarrojo
y dispersion Rayleigh-Gans.
- - - - - - - - - - - - - Estados electr6nicos
excitados
Estados
virtuales
hv -------n-----'
JV\/"+
Estados cuanticos
vibracionales
Figura B.6: Diagrama energetico de una molecula mostrando el origen de la dispersion Raman
(efecto Raman no resonante). N otense los diferentes mecanismos de los efectos Stokes y
anti-Stokes. La molecula alcanza, momentaneamente, un nivel de energia mas alto (estado
virtual), pero nunca llega a un est ado electronico excitado.
en tanto que la mayor dipersion es del tipo Rayleigh elastica, con longitud de
onda igual a la luz incidente, la luz dispersada por efecto Raman (inelastica)
estara muy bien diferenciada en frecuencia. Esto nos permite irradiar a la
muestra con luz ultraviolet a 0 visible y observar frecuencias en el infrarrojo,
don de se producen las transiciones vibracionales, 10 que hace posible acceder a
regiones don de el solvente posee bandas de absorcion. En el caso de las muestras
biologicas represent a una gran ventaja, particularmente por la absorcion del
agua.
Cuando la frecuencia de radiacion posee una longitud de onda que puede
excitar niveles electronicos, es decir que irradia en una frecuencia de absor-
cion, si existe dispersion inelastica se puede producir el efecto de resonancia
Raman. La diferencia radica en que la sensibilidad es mayor que en la disper-
sion Raman no resonante. Ademas de la ventaja obvia de mayor sensibilidad,
es posible estudiar alglin grupo en particular que, encontrandose en la banda
de resonancia, se destacara sobre los otros debido a la mayor senal obtenida.
B. Espectroscopfa 235
Ih
(B.6)
27r'
don de h es la constante de Planck( = 6,626 x 10- 34 J s) e I el numero cuantico
de espin, el cual tiene valores multiplos enteros de 1/2.
Toda carga en movimiento genera un campo magnetico y en consecuencia
una particula cargada en rotacion posee un momento magnetico J..L que en
nuestro caso esta dado por:
,Ih
J..L = 27r' (B.7)
236 Temas de Biofisicoqufmica
Para el caso de los protones, los cuales representan nucleos altamente rele-
vantes para la resonancia magnetica nuclear (rmn), tenemos 2 que 1= 1/2 , 10
que nos da un momento magnetico J.l = ,h/27r = 1,41 X 10- 26 J /T =1,41 x 10- 23
erg/gauss.
Energia
-
Figura E.8: Un conjunto de espines orentadoa la azar con lamisma energia.
2Los operadores J.L e I tiene caracter vectorial y sus componentes, en x, por ejemplo, seran /Lx e
Ix respectivamente. En ocasiones cuando se trata de componentes en una direci6n arbitraria no la
indicaremos.
B. Espectroscopfa 237
i
H
Campo externo
Nuc!eo _
bajo precesion
1 RepiBsentaci6n
Figura E.g: Diagrama del efecto de precesion nuclear y la representacion con vectores aline a-
dos paralela y anti-paralelamente al campo externo.
m
3 mlLH
~-{];
2
T
E ~H
2
Figura B.I0: Desdoblamiento de los niveles de energia para un micleo de espin ~ en un campo
H.
Cuadra B.I: Algunos nucleos con espin diferente de cero. Se indica la frecuencia correspon-
diente a un campo de 10 kGauss.
~E=lH
2rc
Niveles de energia
~E=hu no = n .. +n.
u=lH ~1 ~E
2rc n.. -n. = 2 n O kT
Relajaci6n
1
1/1/2 = T2 (B.ll)
1 1
-*
T2
= -+
T2
bc5 H o) 1/2 (B.12)
(B.13)
(B.14)
(B.15)
El campo de radiofrecuencia Hi puede considerarse como rotando (a su
propia frecuencia) en un plano perpendicular a H a , que llamaremos xy. El mo-
mento magnetico J1 se encuentra rotando a la frecuencia de Larmor, por efecto
del campo magnetico Ha formando un angulo e. Si el campo de radiofrecuen-
cia Hi posee la frecuencia apropiada se producira absorcion de energia y el
angulo entre el momento magnetico y el campo se modificara. Sin embargo la
frecuencia de rotacion permanecera constante.
En la practica nunca estudiamos un momento magnetico nuclear aislado
sino un conjunto de nucleos identicos. Todos preceden a la misma frecuencia
pero no hay razon para que exist a coherencia en su movimiento en el plano
xy. Por otra parte, no existe forma de distinguir los ejes x e y. Si existe una
direccion preferencial a 10 largo del eje z, producida por el hecho de haber
designado como z al eje aline ado con el campo magnetico.
Pese a que la alineacion de los espines no es completa, parte de los momentos
magneticos se encuentran en una direccion paralela al campo externo y parte
en direccion contraria (antiparalela). Puesto que la distribucion de Boltzmann
favorece ligeramente la direccion de minima energia, existira mayor cantidad de
nucleos orient ados a favor que en contra del campo. En consecuencia estaremos
frente a una magnetizacion macroscopica M. El proceso puede verse en forma
esquematica en la figura B.12.
l,Como se mide el fenomeno de resonancia magnetica nuclear? Un esquema
simplificado de un aparato de rmn se muestra en la figura B.13.
Como dijimos, la frecuencia de resonancia es la que satisface la condicion
del proceso de emision-absorcion, es decir 6.E = ,h/27rIHI = Hv. Para obser-
var el fenomeno podemos 0 bien cambiar la frecuencia y mantener el campo
externo constante 0 cambiar el campo externo a frecuencia constante. Ambos
metodos son utilizados en los equipos y los resultados se expresan en funcion
de la frecuencia 0 el campo, independientemente del metodo utilizado para la
deteccion.
Desdoblamiento dipolar
En el caso de sustancias en est ado solido 10 protones tienen posiciones bien
definidas, por ejemplo, en los hidratos cristalinos (10 que no ocurre en los
Hquidos). En esta situacion los protones vecinos modifican el campo magnetico
242 Temas de Biofisicoqufmica
r
z
y y.
a)
b)
Frecuencia de
resonancia
Figura B.14: Para un par de prot ones 1 y 2, el momento magnetico dipolar brinda una
contribucion extra al campo de los micleos vecinos. Puesto que el proton tiene dos est ados
("arriba" 0 "abajo") este campo puede sumarse 0 restarse al externo.
(B.17)
don de la barra indica el promedio sobre todas los angulos e posibles. El resul-
tado es cero puesto que:
(3cos 2 e -1) = -
1 17r/2 (3cos
e -1)27rsinede
2
= o. (B.18)
47r 0
El result ado es que observaremos una unica linea.
244 Temas de Biofisicoqufmica
I I
---+
~'~~~~~'
El campo extemo Se produce una La corriente electr6nica
actua sobre los electrones corriente electr6nica genera un campo
magnetico.
Figura B.17: Esquema del efecto del campo extemo sobre el movimiento de los electrones.
N6tese que la direcci6n convencional de la corriente electric a tiene direcci6n opuesta a la
direcci6n de movimiento de los electrones.
por los choques con otras moh§culas de la muestra. Los tiempos de relajacion
en este caso se pueden escribir como:
(B.19)
(B.20)
Figura B.18: Efecto del campo externo en las corrientes producidas en orbit ales 7r.
del nucleo vecino. El acoplamiento puede deberse ala interaccion escalar espln-
espln (J) producida por la conectividad a traves de los enlaces qUlmicos 0 por
el acoplamiento a distancia. La interaccion entre los momentos nucleares que
produce el efecto es proporcional al cuadrado de la interaccion dipolar (ver
§B.4.2), es decir que depende de r- 6 . En la pnictica, esto significa que obser-
varemos el efecto si los nucleos se encuentran a una distancia d :::; 0, 5nm. Esta
circunstancia se explota en el caso de la resonancia magnetica bidimensional
para determinar la estructura de poHmeros en solucion.
La figura B.19 muestra un ejemplo don de muestra la senal de 19F en N a2P03F
cuando se irradia la resonancia del 23Na en Na2P03F. En este caso se trata de
un acoplamiento escalar heteronuclear.
____A_-----JI\'-----~~
Figura B.19: Senal de FIg en Na2P03F bajo irradiaci6n de la resonancia del Na2P03F, la
linea central no aparece sin doble irradiaci6n
3S e han desarrollado tecnicas donde se consideran incluso mas de dos frecuencias, a 10 que se
suele referir, por generalidad, como resonancia magnetica multidimensional.
248 Temas de Biofisicoqufmica
l\
!\
B)
A
•
• 0
x
o •
x
Figura B.20: A) Esquema de un experimento COSY homonuclear con dos pulsos de 90° no
selectivos. tl es el tiempo de evoluci6n y t2 el tiempo de obervaci6n. Se realiza la observaci6n
para diversos tiempos de evoluci6n B) representaci6n bidimensional esquematica (frecuencias
WI y W2) de los resultados para un sistema de espin AX.
Gly Ala
AX
Figura B.21: Diagrama esquematico de la posicion bidimensional de los picos de los prot ones
para alanina y glicina en un experimento COSY homonuclear.
DHO
a)
10 8 6 4 2 9 8ppm
Figura B.22: Espectro de rmn del inhibidor K; representacion mono dimensional (de la refer-
encia [1]).
b)
COl (ppm)
o
2
4
6
8
10
10 8 6 4 2 o
CO 2 (ppm)
Figura B.23: Espectro de rmn del inhibidor K; COSY en su representacion tridimensional (de
la referencia [1]).
CD j ! ppm
o
10
10 4
,.
, .. ..?.__........~ . . +... ~.'"'.......~. G;'
. : ;: ·:·~~=::::~:7;:~3:~;~ 2
8 6 4
a) [- - i- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - f: : : : : : ::::::::::::::::::::~~~~~~~~~t----!
J .:
!________________________________________ ~=::::::::~ ___________________lL______________
Figura B.26: Esquema de una protein a hipotetica a) Estructura primaria; se han seiialado
ciertos residuos que se encuentran pr6ximos en el est ado plegado. b) Estructura tridimen-
sional.
Figura B.27: Estructura de BPTI obtenida mediante rmn (de la ref. [2]).
Bibliograffa
[1] K. Wiithricht, NMR of Proteins and Nucleic Acids, Wiley, New York,
1986.
Lecturas suplementarias
Espectroscop(a optica
• Jr.!. Tinoco, K Sauer, J.C. Wang & J.D. Uglisi, Physical Chemistry 4ta. Ed.,
Capitulo 10, Prentice Hall, Upper Saddle River, New Jersey ,2002.
• Farrar T.C. & Becker E.D.: Pulse and Fourier Transform NMR, Academic
Press, 1971.
• Wuthricht K: NMR of Proteins and Nucleic Acids, Wiley, New York, 1986.
255
Apendice C
Para desarrollar las ideas de los metodos de pulso es conveniente trabajar con la
magnetizacion macroscopic a y estudiar el comportamiento de esta y los efectos de
relajacion. El comportamiento de la magnetizacion macroscopic a en presencia de un
campo magnetico fue estudiado por Bloch. En la siguiente seccion estudiaremos las
ecuaciones que rigen tal comportamiento.
dp/dt = JL 1\ H. (C.l)
La ecuacion C.l indica que el cambio en el momenta angular p del nucleo depende
del momenta ejercido por el campo externo, igual al producto vectorial JL 1\ H. De
este cambio se produce la precesion mencionada en la seccion anterior. Multiplicando
ambos miembros de la ecuacion C.l por I y recordando que JL = IP se obtiene
dM/dt = 1M 1\ H. (C.3)
257
258 Temas de Biofisicoqufmica
Puesto que nos resulta conveniente trabajar con las tres componentes cartesianas
de los vectores tendremos
1 J k
M/\H= Mx My M z = (MyHz-MzHy)i+
Hx Hy Hz
(C.4)
HI coswt, (C.5)
HI sinwt, (C.6)
Ho. (C.7)
De las ecuaciones C.3, C.4 y C.5-C.7 podemos obtener las ecuaciones de las
variaciones del momenta magnetico macros co pi co en las tres direcciones cartesianas
(C.14)
dM
dt
(C.15)
El movimiento de la magnetizacion con respecto al laboratorio es sumamente
complejo, ya que se adiciona al movimiento de presesion alrededor de Ho la precesion
alrededor de HI -que rota en el plano xy- como se muestra en la figura C.l.
x
Figura C.1: Representaci6n del movimiento de la magnetizaci6n M con la aplicaci6n de un
campo estatico Ho y un campo oscilatorio HI.
ai
- w /\ i, (C.16)
at
oj
- w /\j, (C.17)
at
ok
w/\k. (C.18)
at
Vemos que los tres vectores unitarios rotan a la misma frecuencia angular. De
esta manera podemos considerar como sistema de referencia al definido por est os
C. RMN pulsada 261
dM
(C.19)
dt
El primer termino del segundo miembro represent a la derivada temporal del vec-
tor M en el sistema referido a los vectores unitarios, que rotan a la velocidad angular
w, y 10 referiremos como la derivada temporal en el campo rotante. El segundo termi-
no no es mas que el producto vectorial de w y M, de esta forma tenemos
(dH)
dt Jijo
(OH)
=
at rot
+ w /\ M. (C.20)
M
( ddt ) = ,M /\ H, (C.21)
JO'JO
°
y la ecuacion C.20
M
( ddtrot
) =wM/\H-w/\M. (C.22)
,M /\ (H + wi,), (C.24)
262 Temas de Biofisicoqufmica
M
( ddt r)o t = ,M /\ Hejee, (C.25)
donde
(C.27)
Ala frecuencia de resonancia el campo ficticio wi, cancela exactamente el campo
Ho. En este sistema de referencia solo tenemos que considerar la interaccion entre
M y HI. Segun la ecuacion C.23 el vector magnetizacion M precede alrededor del
campo HI.
C. RMN pulsada 263
(C.28)
Esta formula es fundamental para considerar los experiment os de pulso.
En el sistema rotante todo se simplifica enormemente. En la figura C.2 se pueden
observar dos casos en los cuales se aplican pulsos de diferente duracion.
a) z b) z
,
0
90 '-
180
0
______~(-n-/2-)-\~-y
'-
(n) ~ y
x "
(C.29)
Relacion que nos indica el orden relativo de los tiempos de relajacion. La situacion
en la cualla frecuencia del campo aplicado HI Y la rotacion del sistema de referencia
difieren de la frecuencia de resonancia es comun e importante. En este caso el campo
"ficticio" w/, no cancela exactamente el campo Ho y queda un campo remanente
en la direccion z. Por 10 tanto,
(C.33)
Cuando Wo - w # 0 est amos fuera de la condicion de resonancia. Esta situacion
puede ocurrir frecuentemente, por ejemplo: varios nucleos con diferente corrimiento
quimico; inhomogeneidad en el campo magnetico; campos dipolares estaticos en
solidos, donde cada nucleo experiment a no solamente el campo externo sino adem as
la accion de sus vecinos (caso de sumo interes en la determinacion de estructuras de
macromoleculas) .
figura C.3b. El sistema esta preparado para detectar magnetizacion en el plano xy,
consecuentemente detectara la serral, la que, en cuanto el sistema comienza a relajar,
disminuira el tiempo. Esta es la serral del decaimiento libre, ya que los nucleos se
mueven "libremente", es decir que no est an movidos por el campo de radiofrecuencia
(figura C.3c). En un campo perfectamente homogeneo, la constante de decaimiento
sera T 2 ; en realidad, tal como 10 mencionamos previamente, la constante real de
decaimiento es T*. La figura C.3c muestra el pulso aplicado y la figura C.3d la serral
obtenida.
z z
,,
,
______~~M~~-+Y y
x
a) b)
C)CI~d)
Figura C.3: (a) Un pulso de 90 0 aline a M con el eje y'. (b) M decrece perdiendo coherencia.
(c) Pulso incidente. (d) Senal detectada.
Senal Senal
'-
tiempo tiempo
a) b)
Figura C.4: Decaimiento libre (a). Para un pulso de radiofrecuencia igual a la frecuencia
de Larmor. (b) Para un pulso de frecuencia ligeramente diferente de la resonancia; en este
caso la envolvente de la curva oscilatoria es igual al decaimiento que se obtiene cuando la
frecuenca es exactamente la de resonanacia.
C.5. Medici6n de T1
Si bien nuestro objetivo no es detallar aqui los metodos de medici on de tiempos
de relajacion, daremos como ejemplo la metodologia para determinar el tiempo de
relajacion espin-red. De las diferentes posibilidades, un metoda muy comun es el que
emplea una secuencia 180° - 90°. El procedimiento se muestra en la figura C.3. En
primer termino un pulso de 180° invierte la magnetizacion a 10 largo del eje z'. Se
produce relajacion longitudinal, 10 que hace que M~ que comienza con un valor -Mo
se mueva hacia el equilibrio (Mo), pasando por cero. A un cierto tiempo t despues
de la aplicacion del pulso inicial se aplica un nuevo pulso, ahora de 90°, siempre a 10
largo de x', 10 que hacer rotar hacia el eje y I la componente de M z en ese instante.
Como resultado comienza un decaimiento libre cuyo valor inicial es proporcional a
la magnitud de M, es decir al valor de M~, a tiempo p. Esto proporciona un punta
C. RMN pulsada 267
(C.34)
(C.35)
Esta es la funcion represent ada en la curva C.3d, curva que se obtiene experimen-
talmente mediante el procedimiento descripto en el paxrafo anterior. Para obtener
TI es necesario ajustar la curva experimental con la expresion teorica. En la pnictica
se reescribe la ecuacion C.35 como
libre (la amplitud inicial sera negativa, de alli la designacion de eco) Tal como se
0
z z
y
x
a) b) c)
z z
y y
x
d)
Figura C.5: Esquema de un experimento de espin-eco. (a) Se aplica un pulso de 90° a tiempo
O. (b) La magnetizaci6n macrosc6pica pierde coherencia. c) Se aplica un pulso de 180°,
observese el sentido de rotaci6n. d) Transcurrido un tiempo 27 se recupera la coherencia. f)
la coherencia se pierde nuevamente.
Apendice D
269
270 Temas de Biofisicoqufmica
Unidad Definicion
metro (m) 1 650 763,73 longitudes de onda en el vacio de la radiacion
correspondiente a la transicion entre los niveles 2p10 y 5d5
del atomo del kripton-86.
kilogramo (kg) Masa del prototipo internacional, que se encuentra en Sevres,
cerca de Paris a cargo del Comite Internacional de Pesas y
Medidas
segundo (s) La duracion de 9 192 631 770 periodos de la radiacion
correspondiente a la transicion entre los dos niveles
hiperfinos del est ado natural del atomo de cesio-133.
ampere (A) La magnitud de la corriente que fluye en dos conduct ores
distanciados un metro entre si, en el vacio, que produce
una fuerza entre ambos conduct ores (a causa de sus campos
magneticos) de 2 x 10- 7 N/m.
kelvin (K) La fraccion 1/273,16 de la temperatura termodinamica del
punta triple del agua.
candela (cd) La intensidad luminosa, en direccion perpendicular, de una
superficie de 1/600.000 m 2 de un cuerpo negro a la temperatura
de congelamiento del platino (2,042 K), bajo una presion
de 101,325 N/ m 2
mol (mol) La cantidad de substancia de un sistema que contiene un numero
de entidades element ales igual al numero de atomos que hay en
0,012 kg de carbono-12.
D. Unidades y constantes 271
Cuadra D.4: Nombres, simbolo y definici6n de unidades derivadas del Sistema 1nternacional (S1).
Cuadra D.5: Equivalencias entre algunas unidades del Sistema 1nternacional (S1) y otras de uso
frecuente.
Simbolo valor
Velocidad de la luz en el vacio c 2,997925 x 108 ms- 1
Permitividad del vacio E 8,8541853 x 1O- 12 Fm- 1
Carga del electron e 1,602177 x 1O- 19 C
Masa del electron en reposo me 9,109290 x 1O- 31 kg
Constante de Planck h 6,626196 x 1O- 34 Js
n= h/27r 1,0545919 x 1O- 34 Js
N umero de Avogadro NA 6,022169 x 10 23 mol- 1
Constante de Faraday F 9,648670 x 104 Cmol- 1
Constante de los gases R 8,31434 JK-1mol- 1
Constante de Boltzmann k = R/NA 1,380622 x 10 23 JK- 1
,
Indice alfabetico
273
Enlace de hidrogeno, 21, 48, 84, 89, hidrofobica, 88, 89, 95
115 modelo, 142, 67
Entropia numero de, 67, 68, 73, 77, 78
de mezcla, 84 Hielo, 32, 33, 35, 36, 44, 46
de solubilidad, 84 Histeresis, 122
Estado estacionario, 157, Hodking-Katz, ecuacion de, 199
Estructura Hofmeister, 75
cristalografica, 117, 286
de proteinas, 247 Interaccion
por nmr, 246 hidrofobica, 90, 102, 105
alcance, 91
Fick, Ley de, 183 solvofobica, 90
Flujo Isotopos, 13, 14, 175
de calor, 170,
de energia, 154 Jones-Dole, ecuacion, 69
de energia,166
Lambert y Beer, ley de, 230
de iones, 197
de materia, 154, Michaelis-Menten, cinetica de, 185
de oxigeno, 189 Mioglobina, 129
Flujos unidireccionales., 176 Modelo
Fuerzas fisico, 175
conjugadas, 154, 189 matematico, 175
generalizadas, 152, Momento
termodinamicas, 183, cuadrupolar, 20
Funcion de disipacion, 154, 155, 156, dipolar, 20, 24, 33, 34
157, 158, 163, 166 hidrofobico, 98
octupolar, 20
Globulos rojos, 207
Movilidad
fantasmas de, 207
de proteinas, 250
Glucosa,95
ionica, 195
Goldman, ecuacion de, 197
Gurney, 66 Numero de ondas, 228
Nerst-Planck, ecuacion de, 196
Hemoglobina, 124, 125
NMR, 244
Hidratacion
co-esfera de, 66, 75 Onsager, relaciones reciprocas, 156
critica, 134
de hemoglobina, 125 Parametro de orden, 144
de proteinas, 117 Permeabilidad relativa, 200
especifica, 114 Permitividad, 24, 31, 33, 34,45, 59, 61
general, 114 Planck, ecuacion de, 228
274
Polarizabilidad, 16 Tiempo
Potencial de correlacion rotacional, 87
electrico, 152 de relajacion, 88,138, 239, 244
electroquimico, 196 de residencia, 69, 71, 145
medio, 56 de resolucion, 116
quimico, 55, 56, 58, 84, 152, 160, de vida, 89
163 escala de, 115
Presion osmotica, 158, 160, 162, 165, Transportador, 186
168 Trazadores, 174
aparente, 165
Prigogine, principio de, 158 Ultrafiltracion, 165
Proteinas, desnaturalizacion de, 95 Urea, 94
Prot ones , conduccion por, 129
van't Hoff, ecuacion de, 161
Puente de hidrogeno, 21, 89, 122
Viscosidad, 48, 69, 70, 71, 72
Radiacion, 228, 237 especifica, 70
espontanea, 229 intrinseca, 70
Radio relativa, 69, 70, 71, 74
efectivo, 68 teoria de Einstein, 74
equivalente, 73 Volumen
Rayos efectivo, 74
/,228 equivalente, 74
X,228
2D-NMR, 247
Relacion giromagnetica, 236
Relajacion, 45
dielectrica, 90,116, 135
dipolar, 136
magnetica, 239
RMN, 90, 117, 138
Serie liotropica, 75
Sitios
polares, 122,
primarios, 122, 123
Superficie
de Conolly, 96
expuesta, 97
molecular, 119
Surfactantes, 96
Temperatura estructural, 71
275