UFRJ – POLO DE XERÉM / INSTITUTO DE BIOFÍSICA CARLOS CHAGAS FILHO

Ativação e diferenciação de linfócitos T

Herbert Leonel de Matos Guedes

 Sumário
1-Introdução
2-Ativação e diferenciação de linfócitos TCD4+
3- Característica da população
4- Ativação de linfócitos TCD8+
5-Considerações e outras informações
 Sumário
1-Introdução
2-Ativação e diferenciação de linfócitos TCD4+
3- Característica da população
4- Ativação de linfócitos TCD8+
5-Considerações e outras informações
 Introdução
Imunidade inata Imunidade adaptativa
 Introdução
Linfócito T
• Receptor de célula T (TCR)
 Introdução

Linfócito T: Duas grandes populações

• CD4 ou CD8
- Co-receptor
- Superfície

TCD8 TCD4
Introdução
Parte 1- Ativação de linfócitos T CD4 e TCD8

T CD4+

T CD8+
 Introdução
Localização dos Linfócitos T
 Introdução
É necessário processamento
Reconhecimento do antígeno via célula apresentadora

- Reconhecimento de peptídeos
 Introdução

Processo para ativação e diferenciação de Linfócitos T

-Linfonodo -Expansão clonal

-Diferenciação
-Egrasso dos
linfonodos
 Introdução
Captação do antígeno
 Introdução
Captação de antígenos na mucosa
 Introdução
Captação de antígenos na mucosa

Célula M
 Introdução
Processamento e apresentação
- Célula dendrítica

Imatura Madura
 Esquema geral simplificadoIntrodução
Processamento e apresentação
Diferença na apresentação para TCD4 e TCD8

Vesicular - MHC de classe II – Linfócito T CD4

Citoplasmático - MHC de classe I – Linfócito T CD8

• HLA II ou MHCII
Células apresentadoras de antígeno profissionais (APCs) • HLA I ou MHC I
(Células dendríticas, Macrófagos e Linfócitos) B Células nucleadas
 Introdução
Ativação ineficiente

X X
Ativação ineficiente

-Linfonodo -Expansão clonal

-Diferenciação
-Egrasso dos linfonodos
 Sumário
1-Introdução
2-Ativação e diferenciação de linfócitos TCD4+
3- Característica da população
4- Ativação de linfócitos TCD8+
5-Considerações e outras informações
Requerimentos para ativação e diferenciação

• Ativação
Primeiro sinal: TCR-MHC:PEP
CD4-MHCII e CD8-MHCI
Segundo sinal: Moléculas co-estimulatórias
CD28 – B7.1 (CD 80) ou B7.2 (CD86
 Expansão clonal

• Diferenciação
Terceiro sinal: Citocinas no microambiente
 Ativação

Requerimentos para ativação e diferenciação

• Ativação
Primeiro sinal: TCR-MHC:PEP
CD4-MHCII e CD8-MHCI
Segundo sinal: Moléculas co-estimulatórias
CD28 – B7.1 (CD 80) ou B7.2 (CD86
 Expansão clonal

• Diferenciação
Terceiro sinal: Citocinas no microambiente
 Ativação

Adesão
Ativação
 Ativação

• Transformação do sinal extracelular em sinal

intracelular
• Cascata de sinalização
• Geração de segundos mensageiros
• Indução de fatores de transcrição
• Dependendo da intensidade e da qualidade
do sinal – promove ativação
Ativação
 Ativação

LFA-1 – aumento da força de interação

 Ativação
Interação TCR-Pep:MHC Fosforilação Recrutamento de ZAP70
Fyn
CD4:MHC
Lck

ZAP70 ativada
 Ativação

ZAP70-P
LAT LAT-P + GADS GADSLAT-P:SLP-76P
SLP-76 SLP-76P
PLC-

GADSLAT-P:SLP-76P:PLC-

ItK

PLC- ativada
PIP2 IP3
DAG
 Ativação
IP3
+2 +2
IP3  Ca (RE) Abertura dos canais de Ca da membrana

 Ca (extracelular)

Ativa calcineurina

Desfosforila NFAT

Núcleo
 Ativação
DAG
Ativa Ptn G pequena RAS Ativa cascata da quinase MAP

Raf

MEK

ERK

Núcleo

ELK-1 ELK-1 (P) mRNA Fos AP-1 (Fos+Jun)

ERK
 Ativação
DAG
Ativação
 Ativação

Requerimentos para ativação e diferenciação

• Ativação
Primeiro sinal: TCR-MHC:PEP
CD4-MHCII e CD8-MHCI
Segundo sinal: Moléculas co-estimulatórias
CD28 – B7.1 (CD 80) ou B7.2 (CD86)
 Expansão clonal

• Diferenciação
Terceiro sinal: Citocinas no microambiente
Ativação
 Ativação

CD28-B7

NF-KappaB e AP-1

 3X da taxa de transcrição
IL-2 da estabilidade do mRNA de 30X da tradução
 Moléculas co-estimuladoras Ativação

Proliferação de linfócitos T
CD28/CD80 ou CD86 Produção de citocinas via NF-KB
Produção de IL-2

Proliferação de linfócitos T
ICOS/ICOSL Produção de citocinas

Ativação via NF-KB

OX40/OX40L

Estímulo para sobrevivência

4-IBB/4-IBBL Aumento de BcL-X1 e Bfl-1
 Ativação

Proliferação via IL-2 induzido por TCR-Pep:MHC (1) + CD28-B7.1 ou B7.2

Sinapse Imunológica
 Ativação de Linfócito T

•Estímulos dados pelo primeiro e segundo sinal são

necessários para a ativação.

• Proliferação (expansão clonal).

 Diferenciação

Requerimentos para ativação e diferenciação

• Ativação
Primeiro sinal: TCR-MHC:PEP
CD4-MHCII e CD8-MHCI
Segundo sinal: Moléculas co-estimulatórias
CD28 – B7.1 (CD 80) ou B7.2 (CD86
 Expansão clonal

• Diferenciação
Terceiro sinal: Citocinas no microambiente
 Diferenciação

Fatores envolvidos na diferenciação

- Microambiente (citocinas e fatores presentes)

- Célula apresentadora

-Força de interação
 Diferenciação
Diferenciação das populações de T CD4+
 Diferenciação

Diferenciação
de linfócitos T CD4 em
subpopulações Th1 eTh2
 Diferenciação
Histórico

• 1971- Christopher Parish (1971) base para a descoberta das respostas Th1/Th2
Modificação de Ag por (Acetoacetilação) promovia diminuição da resposta humoral e
aumento da DTH
• 1978- Classificação dos Clones Th1/Th2

Tada, T., Takemori, T., Okumura, K., Nonaka, M., Tokuhisa, T. 1978. Two
distinct types of helper T cells involved in the secondary antibody response:
independent and synergistic effects of Ia and Ia÷ helper T cells. J. Exp. Med.
147:446-58
•1986- Dois diferentes clones de células T produzindo diferentes fatores de crescimento
Mosmann, T. R., Cherwinski, H., Bond, M. W., Giedlin, M. A., Coffman,
R. L. 1986. Two types ofmurine h.e!per T cell clone: I. Definition according to
profiles of lymphokine activities and secreted proteins. J. Immunol. 136:
2348-57
 Diferenciação

Ann Ver. Immunol, 1989

 TH1/TH2 e o paradigma

• Existência de 2 clones distintos de células T

Th1-Dano tecidual, resposta parasitária e produção de IgG
Th2- Alergia, resposta conta helmintos e produção de IgE
• Regulação cruzada
 Diferenciação
Th1
 Função da Th1
Diferenciação

- Ativação de macrófago

- Indução de produção de anticorpos opsonizantes: IgG

Proteção contra parasitos intracelulares

 Diferenciação

Resistente NO

suscetível NO
 Diferenciação
Th1 no controle da infecção por L. major
 Diferenciação

Importância de Stat 1, Stat 4 e T-bet no controle da infecção por L. major

C57Bl/6 Stat 4 -/- C57Bl/6 Stat 1 -/- C57Bl/6 Rag -/- e T-bet-/-
Th2 Diferenciação
 Diferenciação
Função da Th2
 Diferenciação

Histórico e características da Th17

TH17 Diferenciação

Th1/Th2 falhava em explicar eventos de doenças autoimunes

(Encefalomielite autoimune EAE)
- Bloqueio de IFN-gama piora a doença
Histórico Diferenciação
• 2000 - Descoberta da IL-23 (membro da família da IL-12) doenças autoimunes
começaram a ser explicadas sem associação com Th1/Th2
IL-23 é produzida por MO, CD por estimulação com PGE2, ATP, anti-CD40
• 2000 - Oppman propôs funções complementares de IL-12 e IL-23 (compartilham IL-
12Rbeta-1) mas
• 2003 - Cua em estudos de Artrite induzida por colágeno (presença de grandes
quantidades de IL-17)
• 2003 - Aggarwal descreve um grupo de células TDC4+ que ativadas na presença de IL-
23 produzem grandes quantidades de IL-17, IL-6 e TNF-alfa
• 2005 - Modelos de autoimunidade
Th17 agrupada em um 3° grupo (Trilogia de células T) por possuir diferentes
mecanismos de desenvolvimento
Th1 (T-bet, stat-1 e stat-6)
Th2 (Stat-4, c-Maf)
Diferenciação
Th17 Diferenciação
Funções da Th17
Diferenciação

Resolução de patógenos extracelulares pelo recrutamento de Neutrófilos

 Diferenciação

T -reguladora
 Diferenciação
T reguladora - HISTÓRICO
1970 – Postulado a existência de uma célula T supressora
- Usualmente atribuida para a expressão de Lyt2+ (CD8+)
Gershon (1970). Interaction in the induction of tolerance. Immunology

1985-

• Timectonia em camundongos com 3 dias causava autoimunidade sistêmica

1994-Presente - Classificação de células T reguladoras (Treg )

- Caracterização fenotípica e funcional
- Papel na prevenção da autoimunidade e imunopatologia
 Diferenciação
T reguladora - HISTÓRICO

2007
• Diferenciação em Treg requer a expressão de FoxP3

• Indentificação da população CD4+CD25+ que restaura a autotolerância

• Estudo dos diferentes mecanismos supressores

 Diferenciação

Timo Periferia

Treg Natural (nTreg) CD4+CD25+Foxp3-

CD4+CD25+Foxp3+

Periferia
Treg Induzido (iTreg)
CD4+CD25+Foxp3+

Supressão da T Efetora
 Diferenciação

Diferenciação de nTregs

1) Interação TCR-Ligante são centrais no desenvolvimento de Treg

Indução de FOXP3 (Villagomez., 1998)

2) TCR com alta afinidade por Ag próprios (Hsieh., 2006)

3) Co-estimulação via CD28 = Papel na diferenciação de Treg

CD28-/- e CD80/86-/- frequência reduzida de Treg

4) participação de TGF-β e IL-2

 Diferenciação
Células T reguladoras induzidas (iTReg)

• Expressão periférica de Foxp-3: Interações fortes ou sub-ótimas com TCR

• Interação via CTLA-4 (Zheng., 2006)

• Interação via CD28 sob “TGF-β–environment” inibe a expressão de Foxp3

Benson., 2007

• A sinalização via TGF é necessária para a indução de Foxp-3 em T naive

Geiger., 2007

• IL-2 atua como potencializador da diferenciação de iTregs

Horwitz., 2008

TGF-β, IL-2, RA
 Diferenciação
Comparação nTreg e iTreg
nTreg iTreg
FOXP3+ FOXP3+
STAT5 STAT5

Tecido Timo GALT, baço,

linfonodo, tecido
inflamado, periferia

Co-estimulação CD-28 CTLA-4

Citocinas TGF-β TGF-β

IL-2 IL-2
Especificidade Antígenos próprios Alérgenos, antígenos
da dieta, microbiota,
Antígenos próprios
(inflamação)
 Diferenciação
Células T reguladoras
Funções:
• Regulação das funções de CD4 e APCs
Controle da RI
Controle de células autoreativas
• Regulação de receptores de homing
• Manutenção de sítios de imuno privilégio

Características:
• Não proliferam por estímulos via TCR (PKC deficiente)
• Não produzem IL-2, IL-4 e IFN-gama
 Mecanismo de supressão

Produção de Citocinas: TGF-β e IL-10

Contato:

CTLA-4: Compete pelo ligante, bloqueando a proliferação e produção de IL-2.

Indução de apoptose

Gelectina 1: Ligação a glicoconjugados – β galactosidase (CD45, CD43)

• Indução de apoptose e produção de citocinas anti-
inflamatórias por T e APC

CItólise: Via CD3/CD46 (mecanismos dependentes de perforina)

Produção de Granzima A, B e Catepsina B

LAG 3 (CD223) Ligante de alta afinidade de MHCII

Matém a célula dendrítica imatura

239-Atpase Ligação de adenosina no receptor A2A

Inibição das funções de co-estimulação
Outras populações
Outras subpopulação de linfócitos T CD4
IL-9 e reposta Th9
Papel regulador
 Diferenciação

Fatores envolvidos na diferenciação

- Microambiente (citocinas e fatores presentes)

- Célula apresentadora

-Força de interação
Educação do linfócto T pela DC
 Célula dendrítica

• Induz T-reg (Foxp3+) liberando TGF-β e RA

(metaboliza retinol)
• Induz secreção de IL-10 por células T
• Apresenta para T CD8+ (apresentação-cruzada)
• Induz CCR9 e 4β7
 Diferenciação

Fatores envolvidos na diferenciação

- Microambiente (citocinas e fatores presentes)

- Célula apresentadora

-Força de interação
 Diferenciação

O papel do TCR na diferenciação

 Produção de citocinas

População de células

• Produção de 1 citocina por 1 célula

• Poucas células produzem mais de 1 citonina
Regulação entre os fenótipos
 Plasticidade

• Antigamente acreditava-se que não ocorreia a

mundança de uma sub-popluação para outra
• Hoje se sabe que existe conversão

- Grau de diferenciação
- Diferenças na capacidade de diferenciação
 Plasticidade
• Antigamente acreditava-se que não ocorreia a
mundança de uma sub-popluação para outra
• Hoje se sabe que existe conversão

- Grau de diferenciação
- Diferenças na capacidade de diferenciação
 Sumário
1-Introdução
2-Ativação e diferenciação de linfócitos TCD4+
3- Característica da população
4- Ativação de linfócitos TCD8+
5-Considerações e outras informações
T CD8+
Participação de TCD4 na ativação de TCD8
Resposta Efetora

Apoptose
 T CD8+ reguladora
• Supressão da resposta Imune

CD8αα/NKT

CD8+ CD28+
CD8+
Inibição de TCRαα
Inibição via Qa1-Apoptose
APC/Contato Inibição via TGF-b

B regs CD8 + Foxp3

Naturais ou induz
Supressão median
 Sumário
1-Introdução
2-Ativação e diferenciação de linfócitos TCD4+
3- Característica da população
4- Ativação de linfócitos TCD8+
5-Considerações e outras informações
 Ação efetora TCD4 e TCD8
• Apresentação via TCR
• Não necessita de co-estímulo
 Memoria
• Proteção contra futuras infecção

Efetora Efetora
inicial

Virgem

Apoptose Apoptose

Memória Memória
 Conceitos importantes
• Ativação
Primeiro sinal: TCR-MHC:PEP
CD4-MHCII e CD8-MHCI
Segundo sinal: Moléculas co-estimulatórias
CD28 – B7.1 (CD 80) ou B7.2 (CD86
 Expansão clonal

• Diferenciação
Terceiro sinal: Citocinas no microambiente
 Introdução
Imunidade inata Imunidade adaptativa
 Superantígenos
• Para ambas as populações linfocitárias: Antígenos que ativam T sem a
necessidade do processamento e apresentação via MHC
– Staphylococcal enterotoxins (SE)
– Toxic shock syndrome toxin (TSST)
 Células T γδ

Linhagem separada dos linfócitos com TCR αβ

1º rearranjo gênico p/ TCR no feto envolve o loci γ e δ

Células T que expressam cadeias γδ funcionais não expressam TCRs αβ e vice-versa

Diversidade de células T γδ é menor que de células T αβ

❖ Defesa precoce contra patógenos

❖ Presente em barreiras epiteliais (TCR reconhece PAMPs)
❖ Células reguladoras