ELECTROFORESIS DE ADN

EN GELES DE AGAROSA
 ELECTROFORESIS DE ADN
EN GELES DE AGAROSA

Método estándar utilizado para separar, identificar y purificar

Fragmentos de ADN

• Muestra de ADN

• Agarosa

• Buffer de corrida (TAE ó TBE) y buffer “de carga”

•Cámara de electroforesis

• Bromuro de Etidio / SybrGreen (colorante)

• Luz Ultravioleta (transiluminador)

 ELECTROFORESIS DE ADN
EN GELES DE AGAROSA

Método estándar utilizado para separar, identificar y purificar

Fragmentos de ADN

• Muestra de ADN

- Purificado
- Plásmido
- Cortado (enzimas de restricción)
- Replicado
- Producto de PCR
- otras
 ELECTROFORESIS DE ADN
EN GELES DE AGAROSA

• Agarosa

CALENTAMIENTO
ELECTROFORESIS DE ADN
EN GELES DE AGAROSA
ELECTROFORESIS DE ADN
EN GELES DE AGAROSA
ELECTROFORESIS DE ADN
EN GELES DE AGAROSA

http://www.fermentas.com/en/products/all/rna-electrophoresis/buffers-reagents/r049-topvision-agarose
ELECTROFORESIS DE ADN
EN GELES DE AGAROSA

http://www.fermentas.com/en/products/all/rna-electrophoresis/buffers-reagents/r080-topvision-lm-agarose
 ELECTROFORESIS DE ADN
EN GELES DE AGAROSA

• Buffers:

•1X TAE
40 mM Tris acetate
1 mM EDTA

• 1X TBE:
89 mM Tris Base
89 mM Boric Acid
2 mM EDTA (Ph 8.0)

Electroforesis: Las moléculas cargadas presentes en una solución acuosa sometida a un campo
eléctrico son atraídas hacia el polo opuesto a su carga neta. Dos fuerzas de acción opuesta
determinan la velocidad de la partícula en cuestión. Por un lado, la fuerza eléctrica, que la atrae
al electrodo, cuya intensidad es directamente proporcional a la carga, y, de acuerdo a la segunda
ley de Newton (F=m x a, entonces a=F/m), le impone una aceleración directamente proporcional
al cociente carga/masa (q/m). Por otro lado, la fuerza de rozamiento, que se opone a la migración
con una intensidad que depende del tamaño y la forma de la partícula y de las características del
medio (viscosidad y estructura, por ejemplo).
ELECTROFORESIS DE ADN
EN GELES DE AGAROSA

Otros “buffers” como TPE y Tris-glicina

se utilizan menos frecuentemente

http://www.fermentas.com/en/products/all/rna-electrophoresis/buffers-reagents
 ELECTROFORESIS DE ADN
EN GELES DE AGAROSA

• “Jugo Azul” (GBX ó Loading Gel)

5X Buffer
0.25% Azul de Bromofenol
0.25% Xylene Cyanols
15% (peso/volumen) glicerol
 ELECTROFORESIS DE ADN
EN GELES DE AGAROSA

• “Jugo Azul” (GBX ó Loading Gel)

 ELECTROFORESIS DE ADN
EN GELES DE AGAROSA

• “Jugo Azul” (GBX ó Loading Gel)

 ELECTROFORESIS DE ADN
EN GELES DE AGAROSA

• “Jugo Azul” (GBX ó Loading Gel)

 ELECTROFORESIS DE ADN
EN GELES DE AGAROSA

• Cámara de electroforesis
 ELECTROFORESIS DE ADN
EN GELES DE AGAROSA
• Bromuro de Etidio

10 mg/ml
ELECTROFORESIS DE ADN
EN GELES DE AGAROSA
ELECTROFORESIS DE ADN
EN GELES DE AGAROSA
ELECTROFORESIS DE ADN
EN GELES DE AGAROSA
ELECTROFORESIS DE ADN
EN GELES DE AGAROSA
 ELECTROFORESIS DE ADN
EN GELES DE AGAROSA

• Luz Ultravioleta
(transiluminador)
ELECTROFORESIS DE ADN
EN GELES DE AGAROSA

http://clinx.cn/UV%20Transilluminator.htm
ELECTROFORESIS DE ADN
EN GELES DE AGAROSA

http://clinx.cn/UV%20Transilluminator.htm
ELECTROFORESIS DE ADN
EN GELES DE AGAROSA
ELECTROFORESIS DE ADN
EN GELES DE AGAROSA

http://www.biocoldscientific.com/catalog/9270.html
ELECTROFORESIS DE ADN
EN GELES DE AGAROSA

Tonalidad del
Bromuro de Etidio
 ELECTROFORESIS DE ADN
EN GELES DE AGAROSA

Animación:

http://www.dnalc.org/resources/animations/gelelectrophoresis.html
ELECTROFORESIS DE ADN
EN GELES DE AGAROSA

Migración relativa
 ELECTROFORESIS DE ADN
EN GELES DE AGAROSA

OTRAS VARIABLES

CONCENTRACION
ELECTROFORESIS DE ADN
EN GELES DE AGAROSA

“Mala electroforesis”
Marcador 1 2 3 4
(pb)
Muestra la migración de los fragmentos
de ADN en el gel después de la
purificación del fragmento sonda.
En el carril 1, el pGEMIAc intacto;
23130
en el carril 2, el pGEMIAc cortado
9416 con Sma I; en el carril 3, el marcador
6557
4361 molecular  + Hind III y en el carril 4,
2322
el fragmento sonda después de la
2027 purificación con GENECLEANR.

726 pb