Gélose glucosée à l’oxytétracycline (base OGA)

DOMAINE D’UTILISATION

La gélose glucosée à l’oxytétracycline est utilisée pour la recherche et le dénombrement des levures
et des moisissures dans les produits alimentaires et les produits cosmétiques.

HISTORIQUE

En 1965, Buttiaux et Catsaras ont recommandé l’emploi de ce milieu pour la recherche des levures
et moisissures dans les bières, puis Sainclivier et Roblot pour l’analyse du beurre. Mossel a
également démontré que sur plusieurs types d’aliments, un milieu à pH neutre permettrait d’obtenir
une meilleure récupération qu’un milieu à bas pH (le pH étant le seul mécanisme de sélection contre
la croissance des bactéries).

PRINCIPES

- La croissance des levures et des moisissures est favorisée en présence de glucose et d’extrait
de levure.
- L’addition extemporanée d’oxytétracycline ou de chloramphénicol ou de chloramphénicol +
gentamicine ou d’oxytétracycline + gentamicine permet d’inhiber les bactéries, y compris les
lactobacilles (microorganismes acidophiles qui sont susceptibles de représenter la flore
dominante de certains produits alimentaires).

PREPARATION

- Mettre en suspension 40,0 g de milieu de base déshydraté (BK053) dans 1,1 litre d’eau distillée
ou déminéralisée.
- Porter lentement le milieu à ébullition sous agitation constante et l’y maintenir durant le temps
nécessaire à sa dissolution.
- Répartir en flacons, à raison de 110 mL par flacon.
- Stériliser à l’autoclave à 121°C pendant 15 minutes.

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MODE D’EMPLOI

- Avec le milieu de base prêt-à-liquéfier BM022 (ou bien si le milieu est préparé à l’avance à partir
du milieu de base déshydraté), faire fondre la gélose pendant le minimum de temps nécessaire à
sa reliquéfaction totale.
- Refroidir et maintenir à 47°C.
- Ajouter stérilement 1,0 mL de supplément sélectif Oxytétracycline 50 mg reconstitué (BS008) à
110 mL de milieu de base.
- Transférer 1 mL du produit à analyser et de ses dilutions décimales successives dans des boîtes
de Petri stériles.
- Couler 10 à 15 mL de milieu.
- Homogénéiser parfaitement.
- Laisser solidifier sur une surface froide.
- Incuber à 20 ou à 25°C pendant 3 à 5 jours, suivant le mode opératoire employé.

NOTA 1 :
L’ensemencement de l’échantillon en surface de boîtes préalablement coulées peut également être
réalisé.

NOTA 2 :
L’oxytétracycline (BS008) peut être remplacée par le chloramphénicol (BS021) ou par l’association
chloramphénicol + gentamicine (BS021 + BS009) ou être complétée par de la gentamicine (BS009).
Consulter les monographies correspondantes et les protocoles à respecter pour les produits à
analyser.

LECTURE

Après l’incubation, dénombrer séparément les levures et les moisissures. Faire un test rapide de
confirmation au microscope sur chaque type de colonies rencontré.

FORMULE - TYPE du milieu complet (avec oxytétracycline)

(pouvant être ajustée de façon à obtenir des performances optimales)

Pour 1,1 litre de milieu :

- Extrait autolytique de levure.............................................................5,0 g
- Glucose ..........................................................................................20,0 g
- Oxytétracycline.................................................................................0,1 g
- Agar agar bactériologique ..............................................................15,0 g

pH du milieu prêt à l’emploi à 25°C : 6,6 ± 0,2.

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CONTRÔLE QUALITE

- Milieu de base déshydraté : poudre beige, fluide et homogène.

- Milieu préparé (complet) : gélose ambrée.
- Réponse culturale typique sur le milieu complet avec oxytétracycline, après 72 heures
d’incubation à 25°C :

Croissance
Microorganismes
(Rapport de productivité : PR)

Saccharomyces cerevisiae ATCC® 9763 PR ≥ 50%

Candida albicans ATCC 10231 PR ≥ 50%
Aspergillus brasiliensis DSM 1988 PR ≥ 50%
Escherichia coli ATCC 25922 inhibée
Bacillus subtilis ATCC 6633 inhibée

STOCKAGE / CONSERVATION

Milieu de base déshydraté : 2-30°C.

- La date de péremption est mentionnée sur l’étiquette.
- Milieu de base préparé en flacons : 6 mois à 2-8°C (à titre indicatif).
- Milieu complet préparé en boîtes, avec supplément : 15 jours à 2-8°C (à titre indicatif).
Milieu de base prêt-à-liquéfier en flacons,
Supplément sélectif Oxytétracycline 50 mg,
Supplément sélectif Gentamicine 25 mg,
Supplément sélectif Chloramphénicol 50 mg :
- Stocker entre 2 et 8°C, à l’abri de la lumière.
- Les dates de péremption sont mentionnées sur les étiquettes.

PRESENTATION Code

Milieu prêt-à-liquéfier (base sans oxytétracycline) en flacons :

- Coffret de 10 flacons de 110 mL BM02208
Milieu de base déshydraté (sans oxytétracycline) :
- Flacon de 500 g BK053HA
- Fût de 5 kg BK053GC
Supplément sélectif Oxytétracycline 50 mg :
- Coffret de 10 flacons BS00808
Supplément sélectif Gentamicine 25 mg :
- Coffret de 10 flacons BS00908
Supplément sélectif Chloramphénicol 50 mg :
- Coffret de 10 flacons BS02108

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SUPPORT PHOTO

Référence produit : [BK053HA, GC + BS00808], [BM02208 + BS00808]

Utilisation : La recherche et le dénombrement des levures et des moisissures dans les produits
alimentaires et les produits cosmétiques.

Aspergillus niger
Gélose glucosée à l’oxytétracycline (base OGA)
Réf : BM02208 + BS00808
Incubation : 3 jours / 25°C
Caractéristiques : Bonne croissance des levures et moisissures avec ou sans formation
des spores.

REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES

Mossel, D.A.A., Visser, M., and Mengerink, W.H.J. 1962. A comparison of media for the enumeration of moulds and yeasts
in foods and beverages. Lab. Pract., 11: 109-112.

Buttiaux, R., et Catsaras, M. 1965. L’analyse bactériologique des bières. Ann. Inst. Pasteur, 16: 167.

Sainclivier, M., et Roblot, A.M. 1966. Choix d’un milieu de culture pour le dénombrement des levures et moisissures dans
le beurre. Ann. Inst. Pasteur, 17: 181.

Journal Officiel du 8 août 1972. Dénombrement des levures et des moisissures dans les produits cosmétiques. 8553-8554.

NF V 03-454. Décembre 1981. Epices et aromates. Dénombrement des levures et des moisissures.

NF ISO 7954 (V 08-022). Août 1988. Microbiologie. Directives générales pour le dénombrement des levures et
moisissures. Technique par comptage des colonies à 25 °C.

NF ISO 7698 (V 03-763). Août 1991. Céréales, légumineuses et produits dérivés. Dénombrement des bactéries, levures et
moisissures.

NF ISO 13681 (V 04-507). Avril 1996. Viandes et produits à base de viande. Dénombrement des levures et moisissures.
Technique par comptage des colonies.

NF V 08-059. Novembre 2002 (3ème tirage d’Août 2003). Microbiologie des aliments. Dénombrement des levures et
moisissures par comptage des colonies à 25 °C. Méthode de routine.

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XP CEN ISO/TS 11133-2 (V 08-104-2). Janvier 2004. Microbiologie des aliments. Guide pour la préparation et la
production des milieux de culture. Partie 2 : Guide général pour les essais de performance des milieux de culture.

ISO 6611 / FIL 94. Octobre 2004. Lait et produits laitiers. Dénombrement des unités formant colonie de levures et/ou
moisissures. Comptage des colonies à 25 °C.

Les mentions portées sur l’étiquette sont prédominantes sur les formules ou les instructions décrites dans ce document.
Les informations et les spécifications contenues dans cette fiche technique ont été établies à la date du 2010-10-12.
Elles sont susceptibles d’être modifiées à tout moment, sans préavis.
Code document : BK053/F/2003-06 : 5.

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