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Para evitar estas dificultades, la Bioingeniería Tisular Los resultados de este estudio muestran exitosamente
progresa constantemente para desarrollar sustitutos como aumentó la formación epitelial sobre una matriz
dérmicos que permitan obtener mejores resultados dérmica injertada con ASCs en un modelo experimental en
estéticos y funcionales con el menor tiempo de ratas durante 4 semanas de regeneración. Estos
regeneración posible (1). resultados son consistentes con lo que se venía
esbozando en nuestro estudio previo, que concluyó a la
Desde el año 1981, está descrito el uso de tercera semana de injerto (14). De este modo,
Integra® (Integra Life Sciences Corp., Plainsboro, NJ, presentamos una continuidad en cuanto a metodología,
EE.UU) en humanos con quemaduras mayores (2), y destacando que hemos mantenido un procedimiento
desde el año 1996 está aprobada su utilización por la simplificado de siembra de ASCs frescas, sin una
expansión previa, durante un período de 48 horas. La infraestructura específica, con profesionales idóneos, de
única modificación técnica en esta oportunidad fue la acuerdo a las diversas autoridades reguladoras y con
utilización de matrices de Integra®circulares en vez de apego estricto a un Comité de Ética de Investigación
cuadradas; así la forma circular se adapta Clínica (22, 23).
geométricamente al fondo del pocillo de cultivo,
permitiendo que las células adherentes se incluyan en
mayor proporción en la matriz.
Conclusiones
Nos parece importante recalcar que la utilización de un
procedimiento simplificado, en esta etapa experimental de En este estudio, las células troncales derivadas del tejido
sólo 48 horas en total, genera una técnica reproducible y adiposo autólogas sembradas en una matriz de
con menor curva de aprendizaje para la traslación clínica.
Integra®aumentan significativamente la formación epitelial,
Además, nuestros resultados previos en cuanto a
probablemente por un mecanismo de inducción más que
adhesión y viabilidad celular en la matriz dérmica Integra® ,
de diferenciación.
nos aseguran que ésta es una vía de transporte celular
adecuada para una terapia localizada.
La simplicidad del método empelado y los resultados
obtenidos, dan soporte para la utilización de ASCs en la
Respecto a la cuantificación del progreso en la
práctica clínica, dentro de un futuro cercano.
cicatrización, es importante comentar lo importante de la
medición del avance epitelial sobre el injerto. Debido a que
éste es un parámetro más objetivo que la simple medición
del tamaño de la lesión, la cual depende de la actividad de
los miofibroblastos de los bordes de la herida (15), tal y
como se ve reflejado en el presente estudio en el que no
hubo diferencias significativas respecto al tamaño de la CONJUNTIVO
lesión. Otros estudios experimentales que utilizan ASCs
transportadas en matrices (6, 16) o en geles de colágeno La matriz extracelular: un ecosistema influyente en la
(17), encuentran importantes diferencias a favor del cierre forma y comportamiento de las células
de las lesiones tratadas con ASCs, pero utilizando como
parámetro final el tamaño final de las lesiones. RESUMEN Actualmente, la matriz extracelular (MEC) se
considera un componente que cumple diversas funciones,
No podemos explicar en este estudio el beneficio obtenido como la supervivencia celular, desarrollo, interacciones
respecto al aumento de la epitelización sólo por intracelulares e inmunológicas, cambiándose la
diferenciación de ASCs en queratinocitos, debido a que en concepción en la que sólo se consideraba como parte del
esta oportunidad no encontramos actividad GFP en el tejido conectivo. La matriz extracelular suele proporcionar
epitelio. No discordamos con los resultados planteados por
otros estudios que reflejan en forma muy ilustrativa cómo sostén mecánico a los tejidos. Diferentes combinaciones
esta diferenciación existe a las 4 semanas (5, 6), pero de componentes de la matriz extracelular la constituyen en
debemos plantearnos otras alternativas para explicar el material ideal para propiedades específicas: fuerza en
nuestros resultados. Una alternativa poco probable es el un tendón, diente o huesos; amortiguación en el cartílago
fallo en el procedimiento de infección letiviral y que éste no y adhesión en la mayoría de los tejidos. Además, la
haya sido del todo efectivo. La siguiente alternativa composición de la matriz que puede variar según el sitio
planteada, siguiendo la lógica como sucede con la
anatómico y el estado fisiológico de un tejido, le permite a
estimulación angiogénica y fibroblástica (17, 18), es que
exista estimulación por efecto paracrino hacia el linaje la célula saber dónde está y que debe hacer. Tanto la
epidérmico mediante la secreción de factores de matriz extracelular como las moléculas de adhesión, son
crecimiento como el EGF, IGF, PDGF, entre otros. Más consideradas componentes fundamentales para mantener
aún, está documentado el crecimiento de pelo debido a la la estabilidad celular, del tejido, órgano y sistema; además,
estimulación paracrina de las ASCs (19, 20). participan en procesos vitales como: migración,
multiplicación, preservación, procesos bioquímicos y de
Encontrar este tipo de resultados nos hace analizar hacia señalización celular. Algunas proteínas intracelulares
donde van dirigidos los beneficios de una cicatrización
como: selectinas, súper familia de las inmunoglobulinas,
más rápida. Lógicamente, un objetivo es su utilización en
situaciones donde existe cicatrización retardada, con cadherinas e integrinas, se sobreexpresan por la ausencia
inflamación prolongada, baja infiltración celular, de proteínas de adhesión, lo cual genera efectos como la
disminución de matriz extracelular y reducción de factores proliferación desmedida, la invasión y las futuras
de crecimiento, como sucede en el pie diabético (21). Pero metástasis. En cuanto a las metaloproteasas de matriz,
otro objetivo, en pacientes sin problemas de cicatrización, tienen una participación compleja en la progresión del
debe ser el encontrar la vía de regeneración cutánea más cáncer; puesto que participan en la degradación de la
corta, con menor tiempo de hospitalización y que requiera
matriz extracelular permitiendo la migración de las células
la menor cantidad de intervenciones quirúrgicas.
endoteliales.
Finalmente, para avanzar hacia el siguiente paso que es la
CARTILAGINOSO
utilización de ASCs en ensayos clínicos, es importante
dejar claro que su desarrollo debe estar acorde a las
Cultivo de condrocitos sobre una matriz acelular
buenas prácticas de producción (GMP o Good
Manufacturing Practices), con la dotación de derivada de membrana amniocoriónica
esumen defectos condrales, y se logró la formación de cartílago
hialino en mayor proporción que de fibrocartílago.8
Introducción: El tejido cartilaginoso articular presenta
escasa capacidad regenerativa. Existe alta incidencia de Sin embargo, esta técnica presentó una importante
lesiones condrales en la rodilla, especialmente de grado limitación relacionada con la migración y, por consiguiente,
II/III (Outerbridge). El uso combinado de células autólogas la pérdida de los condrocitos del sitio del implante, a pesar
cultivadas con membranas biológicas es una posibilidad de los intentos de contenerlos colocando un parche de
terapéutica. El objetivo del presente trabajo es analizar las periostio autólogo o de membranas de colágeno a modo
características del desarrollo in vitro de condrocitos de bolsillo para contener las células.
humanos sobre una membrana amniocoriónica acelular
(MAC) desecada. Tiempo después se propuso la utilización de condrocitos
Materiales y métodos: Entre diciembre de 2010 y autólogos cultivados in vitro, pero no como suspensión,
diciembre de 2011 se procesaron 16 muestras de cartílago sino asociados a una matriz y el implante de este conjunto
de donante vivo, de las cuales se analizaron siete. Los sobre la lesión (matrix-associated autologous
condrocitos fueron cultivados y amplificados sobre chondrocytes implantation, MACI) utilizando para ello
plástico, a partir de lo cual se realizaron los siguientes diversas matrices.9-11
análisis: interacción entre células y MAC, capacidad de la
MAC como matriz para las células y comportamiento de
El objetivo del presente trabajo es analizar las
las células cultivadas sobre la MAC.
características del desarrollo in vitro de condrocitos
Resultados: Los condrocitos in vitro mostraron cambios
humanos sobre una membrana amniocoriónica (MAC)
fenotípicos en presencia de MAC. Las células fueron desecada acelular, procesada en nuestra institución, como
capaces de adherirse y permanecer en la región soporte para el desarrollo celular in vitro, analizando las
esponjosa de la membrana. La microscopia electrónica de
características fenotípicas y microscópicas.
las MAC cultivadas mostró la presencia de células,
organelas celulares bien conservadas, retículo
endoplásmico y uniones de tipo desmosoma. Materiales y métodos
Conclusiones: Este trabajo muestra la factibilidad de
cultivar condrocitos sobre MAC. Las células fueron Entre diciembre de 2010 y diciembre de 2011, se
capaces de adherirse, permanecer y diferenciarse sobre la procesaron 16 muestras de cartílago hialino obtenidas de
membrana durante el tiempo del estudio. segmentos óseos (cabezas femorales - platillos tibiales)
provenientes de donantes vivos sometidos a un
Introducción procedimiento de artroplastia. Los pacientes donantes del
tejido osteoarticular utilizado en este estudio firmaron un
consentimiento de donación y de autorización para el uso
Las lesiones condrales en los pacientes jóvenes
en trasplante e investigación.
representan un serio problema en la práctica ortopédica.
Diversos estudios de prevalencia, epidemiología y
etiología han demostrado que un 60% de los pacientes Todos los procedimientos, desde la extracción de la
sometidos a artroscopias padecen defectos condrales u muestra hasta las manipulaciones in vitro, se llevaron a
osteocondrales de rodilla, con mayor incidencia de cabo cumpliendo con las normas de bioseguridad
lesiones de grados II y III (Outerbridge).1-4 correspondientes.
El tejido cartilaginoso articular (hialino) tiene muy escasa Los condrocitos se obtuvieron luego de 18 horas de
capacidad regenerativa. Dado que carece de vasos, los digestión de las muestras de cartílago en colagenasa de
procesos inflamatorios y reparativos provenientes de la tipo I 0,1%, a 37°C. La suspensión celular obtenida fue
circulación sistémica no pueden actuar en casos de lesión. filtrada con filtros de 70 um para eliminar restos de tejidos
Por otra parte, a diferencia de otros tejidos, los condrocitos sin digerir y centrifugada a 1500 rpm durante 10 minutos.
no migran al sitio de la lesión desde sitios vecinos sanos, Luego del recuento celular y el cálculo de viabilidad, se
porque están rodeados por una densa matriz extracelular.5 sembraron las células sobre una superficie plástica para
cultivo celular, con un inóculo inicial de 4 x
104 células/cm2.
Con el objetivo de restablecer la superficie articular
dañada, se han utilizado técnicas reparativas y
regenerativas.6 Las técnicas reparativas, como la Con el objeto de amplificar la población celular, cuando se
estimulación de la médula ósea con microperforaciones, alcanzaba un 70%-80% de confluencia, se realizaban
tienen como objetivo reconstruir el defecto condral como máximo cuatro subcultivos (P1, P2, P3 y P4) con un
aliviando los síntomas, pero sin restablecer la arquitectura inóculo de 0,3-0,8 x 104 células/cm 2.
del cartílago articular hialino, ya que el tejido de reparación
está formado predominantemente por colágeno de tipo I De las 16 muestras ingresadas, se descartaron 9: 5 debido
(fibro-cartílago) de diferentes características a contaminación y 4 destinadas a la puesta a punto de la
biomecánicas, respecto del tejido nativo.7 técnica (optimización de la digestión enzimática del tejido,
elección de la superficie por cultivar, inóculos iniciales
Por otro lado, las técnicas regenerativas procuran la sobre plástico y sobre MAC). Las 7 restantes se usaron
restitución completa de la microarquitectura del tejido, para los experimentos mostrados en este trabajo.
compuesto principalmente por colágeno de tipo II y
glucoproteínas (cartílago hialino). Estas técnicas Las MAC se obtuvieron a partir de placenta humana y se
comenzaron usando el implante de condrocitos autólogos procesaron según los procedimientos operativos
cultivados preparados como suspensión (autologous estandarizados bajo estrictas normas de bioseguridad,
chondrocytes implantation, ACI) para el relleno de mediante diversos tratamientos antibióticos, seguidos de
procesos de descelularización, desecación y esterilización sumamente atractiva para aplicaciones de ingeniería de
por radiación gamma. tejidos.22
Esta observación coincide con los resultados de otros El análisis por microscopia electrónica mostró que las
estudios.17 Zheng y cols., entre otros, mencionan que, en células podían permanecer dentro de la estructura de la
los cultivos de condrocitos sobre estructuras MAC durante todo el tiempo del estudio (entre 2 y 14
tridimensionales, se induce nuevamente la expresión de días), con organelas bien conservadas y formación de
proteínas específicas de cartílago y las células recuperan estructuras de novo, como uniones de tipo desmosoma.
el fenotipo de condrocitos diferenciados, con buena Estas características ultraestructurales, sumadas a las
integración a la matriz.17,18 imágenes por microscopia óptica, muestran la capacidad
de la MAC para sostener la permanencia de las células
sobre ella y, por lo tanto, su utilidad como
La estrecha relación que se establece entre la matriz y las
andamio (scaffold). Las vacuolas citoplasmáticas con
células no es sólo producto del contacto directo entre
microfibras contenidas en su interior podrían corresponder
ellas, sino que se producen también señales que son
responsables de la dinámica de la relación entre ambas, a fibras de colágeno sintetizadas por las células. Este
hallazgo ha motivado un próximo estudio de investigación
que provocan los cambios fenotípicos observados en las
para su análisis e identificación.
células. Este efecto se ha mostrado en este trabajo
cultivando las células adheridas al sustrato plástico, y
cuando ya estaban desdiferenciadas, al agregar un Conclusiones
pequeño segmento de MAC flotando en el medio de
cultivo sin contacto directo con las células, se observó una La MAC aparece como un material atractivo y novedoso
morfología más esférica, que sugiere un fenotipo más para la aplicación de tecnologías de ingeniería de tejidos.
diferenciado (Fig. 1). Este efecto de diferenciación-
desdiferenciación se observó cada vez que la membrana Este trabajo muestra la factibilidad de cultivar condrocitos
fue agregada-quitada respectivamente del medio de sobre MAC, permitiendo su adhesión y diferenciación. En
cultivo. el futuro, esta membrana con los condrocitos cultivados
podría redundar en el desarrollo de tratamientos para
A fin de optimizar los resultados, es importante que las lesiones condrales que aún no tienen soluciones
matrices utilizadas para los procedimientos de MACI satisfactorias.
cuenten con determinadas características, como
biocompatibilidad, biodegradabilidad y capacidad de ÒSEO
soportar el cultivo celular, permitiendo la diferenciación y
maduración de los condrocitos. Las membranas más Regeneración ósea por medio de células madre en
usadas hasta ahora a nivel clínico son las derivadas de combinación con beta-fosfato tricálcico
colágeno y de ácido hialurónico.8
Resumen Objetivo: Estudiar si las células madre adultas
Hace ya algunos años, en los bancos de tejidos, se mesenquimales en combinación con beta-fosfato tricálcico
comenzó a procesar la MAC, es decir, las membranas
contribuyen significativamente a la regeneración en una
amniótica y coriónica en su conjunto como una unidad,19lo
cual le otorga a este material una estructura de mayor lesión ósea traumatizada. Material y método: Se utilizó un
espesor y resistencia que la membrana amniótica sola, modelo de defecto traumático en el fémur de ratas Wistar
que también se ha utilizado en diversas aplicaciones (n=39). Fueron diseñados dos grupos: el grupo 1 (control),
clínicas.20,21 Se atribuyen a la MAC propiedades con nueve ratas a las que se les realizó un defecto óseo
antimicrobianas y antifúngicas, baja inmunogenicidad, vacío; y el grupo 2 (experimental), con tres subgrupos de
biodegradabilidad y biocompatibilidad, lo que la hace 10 ratas cada uno, a las que se les administró beta-fosfato
tricálcico (β-TCP) y β-TCP en combinación con células en el caso de la asociación del trifosfato cálcico con MSC,
madre mesenquimales (MSC). Se valoraron resultados a los resultados histoló- gicos no permiten afirmar que esta
las tres, seis y nueve semanas de evolución, actividad sea especialmente relevante. Por otra parte, no
respectivamente. Resultados: Se observó el 65% de las se han observado fenómenos inflamatorios marcados, a
fracturas en los fémures derechos de las ratas, que en excepción de los macrófagos encontrados en las primeras
grupo experimental corresponde a la zona donde se etapas, a las tres y seis semanas, y tampoco se han
implanta el carrie en combinación con las MSC, aunque evidenciado células multinucleadas. El hueso neoformado
sólo el 35% de éstas coinciden exactamente con esta en torno al sustitutivo óseo administrado no presenta
zona. No existen diferencias de comportamiento biológico actividad sintética en la etapa más tardía, correspondiente
significativas, aunque se demuestra actividad osteogénica. a las nueve semanas. Estos hallazgos están en
Conclusión: El uso de β-TCP en combinación con células consonancia con algunas de las últimas publicaciones
estromales mesenquimales no genera resultados [10,11], donde Vahabi et al. recogen que no existen
significativos en la regeneración ósea. Todavía es cambios en la regeneración ósea obtenida en un modelo
necesario potenciar la investigación en fase experimental. canino en alveolos post-extracción, tanto con células
madre en asociación con beta-fosfato tricálcico, como
Introducción Las carencias de tejido óseo en el organismo empleando hidroxiapatita bovina Bio-Oss®, siempre en
que requieren del uso de injertos normalmente son comparación con un grupo control con un defecto óseo
consecuencia de defectos postraumáticos [1], secuelas vacío. Sin embargo, los resultados iniciales de este
derivadas de cirugía oncológica [2] o patología estudio orientan hacia la utilización de un sustitutivo óseo
degenerativa como la osteoporosis [3]. Los procedimientos en condiciones distintas a las empleadas, tal y como se
clínicos disponibles tienen un uso limitado debido a la afirma en otras publicaciones [12-15], que muestran cómo
morbilidad del lugar donante, en el caso de los la actividad regenerativa de las células madre en el fémur
autoinjertos, o bien, por el rechazo autoinmune o la baja de la rata es significativa cuando se utilizan asociaciones
capacidad regenerativa, en el caso de los aloinjertos o con factores de crecimiento y plasma rico en plaquetas.
xenoinjertos. Todas estas limitaciones han dado lugar a la
búsqueda de nuevas formas de restituir los procesos HEMATOPOYETICO
biológicos que han resultado dañados, bien mediante el
aporte de precursores celulares sanos, en procesos Eriptosis, la muerte suicida de eritrocitos: mecanismo
conocidos como terapias celulares, o bien mediante la y enfermedades asociadas
aplicación de factores de crecimiento producidos
normalmente por células [4]. La medicina regenerativa Resumen
sustituye o regenera células humanas, tejidos u órganos
con la finalidad de restaurar o establecer una función La muerte suicida de eritrocitos o eriptosis, similar a la
apoptosis de células nucleadas, está caracterizada por
normal [5]. El uso de células madre (Stem Cells, SCs)
disminución del volumen celular, vesiculación de la
representa una opción prometedora para resolver muchos membrana y traslocación de fosfolípidos de la membrana
de los defectos orgánicos mencionados anteriormente, plasmática con exposición de fosfatidilserina en la
asegurando un número suficiente de células específicas superficie celular. Una amplia variedad de drogas,
en el tejido y eliminando los problemas de rechazo contaminantes ambientales, sustancias endógenas,
inmunológico y morbilidad [6]. En los últimos años ha condiciones clínicas y enfermedades disparan el proceso
habido un creciente interés por las células estromales de eriptosis, entre los que se pueden enumerar cationes
como Hg+2, Cd+2, sepsis, síndrome urémico hemolítico,
mesenquimales (Mesenchymal Stromal Cells, MSC) por
enfermedad de Wilson y depleción de fosfato, entre otras.
ser las primeras células no hematopoyéticas aisladas de la Este proceso es estimulado por la activación de canales
mé- dula ósea y más ampliamente caracterizadas [7]. iónicos y la formación de ceramida, desencadenando la
Tienen capacidad de auto-renovación, proliferación y activación de una compleja red de señalización. Los
capacidad para diferenciarse de distintos linajes de tejido desencadenantes del proceso de eriptosis, así como las
mesodérmico, que incluye el hueso, el cartílago, la grasa, moléculas involucradas en la señalización del mismo,
los tendones, el músculo y el estroma medular [8]. El estarían también involucrados en la regulación de la
apoptosis, por lo que en ambos casos, la ruta de
propósito del presente trabajo es estudiar la capacidad de
transducción de señales involucradas serían similares. Es
las células estromales mesenquimales en combinación por eso, que los resultados obtenidos del análisis del
con beta-fosfato tricálcio (β-TCP) para transformase in vivo proceso de eriptosis podrían ser potencialmente tomados
en células osteoblásticas y permitir la regeneración en un como modelo en el estudio de la patogénesis de la muerte
modelo de lesión traumática en el fémur de ratas. suicida de células nucleadas.
Discusión Los resultados obtenidos no permiten afirmar Eritrocitos: modelo para el estudio de la fisiopatología
diferencias de comportamiento biológico significativas en celular
este modelo experimental entre los animales a los que se
les administró un sustitutivo óseo (KeraOs®) y el mismo Los eritrocitos circulantes son las células más abundantes
sustitutivo en combinación con MSC, ni tampoco al en un organismo adulto, constituyendo un 10% del
volumen celular total. Además, son células de fácil
comparar estos mismo grupos con los controles de defecto
obtención y sus funciones pueden ser estudiadas ex vivo.
óseo vacío. Aunque se demuestra actividad osteogénica Esto hace que los eritrocitos sean un excelente modelo
para estudiar la fisiopatología celular. envejecimiento existe una disminución del volumen
Sin embargo, estas células poseen funciones limitadas, ya celular, con un incremento en la densidad de hemoglobina
que, al diferenciarse y madurar, pierden su núcleo, los en las primeras etapas y una disminución en el contenido
ribosomas y las mitocondrias, perdiendo al mismo tiempo de hemoglobina en las últimas. Estos cambios se
su capacidad de sintetizar proteínas. Producen ATP encuentran asociados a una disminución en el contenido
exclusivamente por degradación de glucosa. Es por todo de colesterol y fosfolípidos, con una disminución en el área
esto que los eritrocitos han sido considerados como sacos de aproximadamente 20% durante el envejecimiento (8) .
de hemoglobina (1). Esta pérdida se correlaciona con el proceso de formación
Los eritrocitos circulantes están expuestos regularmente a de microvesículas, las que contienen IgG unida en su
condiciones de estrés, como a estrés oxidativo en el superficie, exponen fosfatidilserina (PS) y contienen
pulmón y a condiciones hiperosmóticas al ingresar varias productos de ruptura de banda 3, las que desaparecen
veces por hora al riñón. rápidamente de circulación al ser removidas por células de
Además, debido a la alta tensión de O2 en sangre arterial y Kupffer (9).
al contenido de Fe, continuamente se producen dentro del
eritrocito especies de oxígeno reactivas ROS, (por sus Mecanismos moleculares involucrados
siglas en inglés Reactive Oxigen Species) tales como O2(-
), H2O2, HO. Existen evidencias que indican que muchas Los principales mecanismos moleculares involucrados en
condiciones fisiológicas y patológicas, como
el inicio de la eriptosis son: la disminución de la carga
envejecimiento celular e inflamación, se desarrollan a
energética, del poder reductor y del estrés osmótico,
través de la acción de ROS. Por esto, los eritrocitos
siendo, alguna o todas estas señales, puntos de
poseen una potente acción antioxidante que consiste de
convergencia de factores que pueden provocar eriptosis.
rutas enzimáticas y no enzimáticas que modifican las El evento clave en los tres casos anteriormente citados es
especies altamente reactivas en intermediarios menos el incremento en la concentración de Ca2+citosólico,
reactivos (2).
aunque las vías por las cuales esto ocurre en cada caso
Los eritrocitos experimentan senescencia, resultando en la
sean diferentes.
eliminación de los eritrocitos envejecidos de circulación
En la Figura 1 se esquematizan todas las vías que se
(3). Recientemente se ha demostrado que, al igual que las
explican a continuación.
células nucleadas, desarrollan un proceso de muerte
suicida o eriptosis (4).
En el caso de estrés energético, la reducción de ATP
disminuye la actividad de la Ca2+- ATPasa y en
Eriptosis fisiológica: Senescencia
consecuencia disminuye la salida de Ca2+ con el
consiguiente incremento de Ca2+ intracelular. Esto produce
Los eritrocitos humanos tienen una vida media útil de la activación de PKC (proteína quinasa C, dependiente de
aproximadamente 120 días, y como otras células, la calcio) fosforilando proteínas de membrana que permiten
generación y destrucción del eritrocito tiene que estar la entrada de Ca2+ (10).
estrictamente regulada. En el estrés oxidativo, la disminución de glutatión reducido
En condiciones fisiológicas, los eritrocitos senescentes incrementa la permeabilidad a Ca2+ a través del canal de
tienen IgG autóloga unida a su superficie, favoreciendo así cationes, permitiendo una mayor entrada de Ca2+ al
su fagocitosis, principalmente por células de Kupffer en el interior del eritrocito.
hígado. El plasma contiene anticuerpos En cuanto al estrés osmótico, éste activa fosfolipasa A2,
eritrocitoespecíficos que se unen a proteínas intracelulares que libera ácido araquidónico de fosfatidilcolina. Este
como actina y espectrina y a dominios intra o ácido araquidónico se convierte por acción de la
extracelulares de proteínas de membrana, como banda 3 ciclooxigenasa en prostaglandina E2 (PGE2), que activa los
(5). canales de Ca2+. La entrada de Ca2+ a través de canales
La IgG se une a banda 3, específicamente a eritrocitos en catiónicos activaría los canales de K+sensibles a
estadios finales de su vida, siendo suficiente un número de Ca2+ (canales Gardos) presentes en la membrana del
aproximadamente 200 moléculas de IgG unidas al eritrocito (11), con la consecuente pérdida de KCl del
eritrocito para su fagocitosis. Sin embargo, aún no se eritrocito (12), favoreciendo de esta manera la
conoce si es un agregado o la ruptura de la banda 3 la hiperpolarización y la disminución del volumen celular
entidad reconocida por IgG. La proteólisis de banda 3 o cell shrinkage (13).
ocurre por proteasas (calpaínas) que se activan por Ca +2, Estos procesos disparan la vesiculización de la membrana
el que ingresa a través de canales sensibles a cambios de celular (14) y estimulan la traslocación (en
volumen del eritrocito. La agregación de los productos de inglés, scrambling) de fosfolípidos de la membrana (15),
proteólisis de banda 3 induce un aumento en la curvatura produciendo la exposición de PS por medio de una
de la membrana que desencadena el proceso de escramblasa sensible a Ca+2 y/o por inhibición de una
vesiculización. Por lo tanto, el proceso de envejecimiento aminotraslocasa sensible a Ca+2 y dependiente de ATP
del eritrocito va acompañado por la generación de (16)(17).
vesículas que se desprenden de los mismos, en Un segundo estimulador de la traslocación de fosfolípidos
circulación. Cualquiera sea la hipótesis correcta, ambas de la membrana celular es la ceramida (18). La acción de
explican la pérdida de la interacción entre la membrana y fosfolipasa A2 genera además de ácido araquidónico,
el citoesqueleto, con un incremento en la movilidad de lisoderivados, los que son transformados en el factor
banda 3 y una disminución en el número de sitios de alta activador plaquetario (PAF). PAF estimula a la
afinidad por la anquirina, con la formación de esfingomielinasa que genera ceramida por hidrólisis de la
neoantígenos (6). esfingomielina (SM), capaz de estimular a la escramblasa.
La CD47, una proteína de membrana asociada a integrina El Ca2+ estimula también a la calpaína, una endopeptidasa
cuya función es mediar procesos de adhesión, también cisteínica que degrada las proteínas del citoesqueleto y
está involucrada en el reconocimiento de eritrocitos por lo tanto, inicia la vesiculización de la membrana celular
envejecidos por macrófagos (7). Por otro lado, durante el (19).
El Ca2+ puede ingresar también vía canales catiónicos no de PS y disminución del volumen celular. Además, se
selectivos (20) como TRPC6 (21) y canales catiónicos observa pérdida de hemoglobina, un evento característico
activados por ATP extracelular como P2X7 (22). Los de la hemólisis. El aumento de volumen (swelling)
canales son estimulados por shockhiperosmótico (23), asociado con la hemólisis contrarresta la disminución de
estrés oxidativo (24) y pérdida de Cl- (23). volumen (shrinkage) asociada a la eriptosis. De hecho, es
posible observar una resistencia a la hemólisis hipotónica
Impacto de los canales catiónicos en el en eritrocitos tratados con Al+3. De todos modos, ambos
envejecimiento de eritrocitos efectos, hemólisis y eriptosis, disminuyen el tiempo de vida
de los eritrocitos en circulación, contribuyendo a la anemia
observada durante la intoxicación con dicho catión (36).
Es posible especular que los canales catiónicos sensan la
edad celular. Así, en los eritrocitos envejecidos, la pérdida
de las defensas oxidativas incrementan la actividad de los Inhibidores de la eriptosis
canales catiónicos provocando un ingreso de Ca2+,
aumentando la actividad de la bomba de Ca2+ y La eriptosis es inhibida por amiloride y
produciendo la activación de la escramblasa. Por este etilisopropilamiloride (EIPA) (37) así como por
motivo, los eritrocitos envejecidos exponen PS en su catecolamina, dopamina, isoproterenol y epinefrina (38), al
superficie, lo que contribuye a la eliminación de estas ser todos estos inhibidores de los canales catiónicos
células senescentes (25). permeables a Ca2+.
Todos estos hechos son también eventos típicos de la
apoptosis de células nucleadas (26). Enfermedades asociadas a eriptosis
Comportamiento de ET-1 en células del músculo liso • La endotelina-1 (ET-1) es el vasoconstrictor más potente
vascular humano hasta ahora conocido por el hombre, incluso es 10 veces
más potente que la angiotensina II. Existen 2 tipos de
La administración de ET-1 en infusión en seres humanos endotelina-1, siendo la endotelina de 21 aminoácidos la
produce incremento de la presión arterial, dosis que tiene mayor actividad y potencia biológica sobre la de
dependiente acompañada de una retención de sodio. La 31 aminoácidos. Existen otras 02 isoformas de endotelina
presión arterial media se incrementa en aproximadamente denominadas ET-2 y ET-3.
10 mmHg. La ET-1, produce un efecto inótropo negativo,
compromete el llenado diastólico de ambos ventrículos, • Los lugares de producción de endotelinas son diversos
disminuye el gasto cardíaco y reduce la frecuencia en la especie humana, sin embargo, podemos señalar
cardíaca. La circulación renal humana es extremadamente como centros de mayor producción para ET-1 a las células
sensible al efecto vasoconstrictor de ET-1, la endoteliales, para ET-2 se ha señalado a las células
administración de pmol/Kg/min produce un decremento de epiteliales renales y las células del estroma. Para ET-3 se
25% del flujo plasmático renal y un incremento en 45% de ha identificado como las células de mayor producción a las
la resistencia vascular renal estos efectos duran neuronas glía e intestino.
aproximadamente 3 horas (7).
• Los factores que estimulan la síntesis de ET-1 son
Se puede concluir que la vasoconstricción producida por la múltiples, pero la hipoxia, isquemia son los más
ET-1 se debe a: importantes. Siendo los inhibidores más importantes de su
liberación el óxido nítrico, prostaglandinas E2, I2, y el
a. La vasoconstricción inducida inicialmente por ET-1 péptido natriurético auricular y cerebral.
puede ser inducida por la liberación de calcio del retículo
sarcoplásmico mediado por la activación de la fosfolipasa • Se han identificado dos tipos específicos de receptores
C. de endotelinas denominados receptores de tipo A y B. Las
células del endotelio expresan en mayor cantidad
b. El ingreso de calcio extracelular es necesario para el receptores de tipo B, siendo su mayor acción sobre esta
mantenimiento de la contracción, este hecho es mediado célula la vasodilatación. La célula del músculo liso
por la apertura de los canales calcio de tipo L, así como de vascular expresa mayor cantidad de receptores de tipo A,
otros canales como los canales catiónicos no selectivos logrando en estas células vasoconstricción.
para el calcio y canales operados por almacenamiento de
calcio (35). • La potencia de ET-1 es mayor sobre los receptores de
tipo A que la ET-2 y ET-3. La potencia de ET-1 sobre
En la figura 5 se expone la liberación de ET-1 y su receptores de tipo B es igual a ET-2 y ET-3.
interacción con el receptor específico ETA y su accionar a
través de segundos mensajeros. En la figura 6 se expone • La ET-1 en condiciones patológicas se incrementa su
un resumen de todos los receptores que favorecen la producción, tanto es así que se ha demostrado su
vasoconstricción dependiente del endotelio vascular, se elevación en enfermedades agudas como crónicas,
resalta la importancia del calcio como segundo mensajero podemos señalar como es el caso de la hipertensión
que ejecuta la función sobre el músculo liso vascular. pulmonar, infarto agudo de miocardio, arterioesclerosis,
lupus, sepsis, cirugías, cáncer, diabetes mellitus,
Aplicaciones clínicas de endotelina 1 insuficiencia cardíaca entre otras.
La acción de ET-1 se describe en múltiples órganos y • La FDA ha aprobado el uso de Bosetan, un antagonista
sistemas con funciones especificas. En la tabla 5 se no selectivo de los receptores de endotelina de
describen las acciones biológicas que cumple ET-1 sobre administración oral, para el tratamiento de hipertensión
los vasos sanguíneos, corazón, riñón, sistema pulmonar primaria.
neuroendocrino entre otros, cabe señalar que estos
efectos son en condiciones fisiológicas. CORAZON
sin embargo, el costo que implica podría ser negativo en la La involución que sufre el timo en los humanos se inicia
economía del proceso. Por otra parte, dependiendo del durante la pubertad y se completa al final de la sexta
espesor y tamaño de los dispositivos estos tiempos de década de la vida, de modo que en la edad adulta gran
nitruración podrían ser tomados en cuenta como parte del parénquima tímico ha sido reemplazado por
referencia. grasa. 25
En este proceso disminuye su tamaño, peso y actividad memoria es la aparición de múltiples expansiones clonales
como resultado de la influencia que ejercen sobre él los dentro de los linfocitos T CD8+, así como la pérdida de
altos niveles de hormonas sexuales circulantes durante la moléculas coestimuladoras como CD40L y CD28, con un
pubertad, el bajo número de células precursoras derivadas espectro de especificidad altamente restringido, de tal
de la MO y los cambios que sufre el microambiente forma que las células T deterioradas manifiestan poca
tímico. 26 citotoxicidad y un desbalance en la producción de
citocinas, lo que genera condiciones proinflamatorias. 27-29
Este fenómeno tiene implicaciones en el mantenimiento
del repertorio de linfocitos T vírgenes, lo cual provoca La involución del timo con la consiguiente disminución de
numerosos defectos funcionales, incluido el acortamiento las células T cooperadoras, afecta además la función y la
de telómeros, un repertorio restringido de RCT, poca diversidad de las células B, que conduce a una débil y
producción de IL-2 y deficiencias en su diferenciación y deficiente respuesta de anticuerpos y un incremento en la
proliferación hacia células efectoras. 25,26 producción de autoanticuerpos. 26,28
Se han descrito diversos cambios asociados con la La atrofia del timo y la disminución de su actividad
involución tímica. Entre los más estudiados, se encuentra: constituyen procesos naturales que suceden a lo largo de
la reducción en el número total de linfocitos T vírgenes que la vida, los cuales provocan alteraciones en las respuestas
expresan el fenotipo CD45RA+, CD62L+ CD27+, CD28+ y de células T y B, que dan como resultado un aumento en
CD11a+, por disminución en la timopoyesis; y el la susceptibilidad para adquirir infecciones debido a la
incremento en el número de linfocitos T de memoria, como disminución en la capacidad para eliminar diferentes
una consecuencia de la experiencia inmunológica que se patógenos, la disminución de la memoria inmunológica y
adquiere durante la vida. El efecto de una reducción de un alto riesgo de padecer enfermedades autoinmunes y
linfocitos T vírgenes en sangre periférica es el cáncer. 25-29
empobrecimiento en el repertorio total de linfocitos T, lo
cual puede llevar a una limitada respuesta hacia los HIPOFISIS
nuevos antígenos. 27
Acción directa de la triyodotironina en la expresión
Las células que recién emigran del timo, pueden ser génica de cerebro y cerebelo en el período neonatal
identificadas por la presencia de pequeños fragmentos de
ADN que permanecen durante el reordenamiento del RCT,
Resumen
los cuales se denominan círculos de excisión de señales
de unión del RCT. La generación de linfocitos T que
expresan estos círculos, permanece relativamente Las hormonas tiroideas tienen un papel fundamental en el
constante a lo largo de la vida y persiste en individuos desarrollo y el funcionamiento de diversos órganos,
mayores de 50 años, aun después de haber recibido un especialmente el cerebro. Las hormonas tiroideas ejercen
trasplante de MO.26,27 sus funciones mediante la interacción de la triyodotironina
(T3) con receptores nucleares y la regulación de la
expresión de genes. En este trabajo hemos estudiado los
Experimentos de trasplante de tejido tímico y de MO
efectos del hipotiroidismo y de la administración de T3 en
procedentes de ratones jóvenes a ratones viejos,
la expresión de genes de cerebro y cerebelo durante el
demuestran que la maduración de los protimocitos a
periodo posnatal en la rata. Se obtuvieron neonatos
linfocitos T está severamente comprometida a partir de los hipotiroideos mediante la administración de antiroideos a
dos meses de edad del ratón. Por otro lado, el número de la madre durante la gestación y la lactancia. Se les
protimocitos en la médula no parece variar con la edad,
administró T3 a dosis diarias de 15ng/g de peso desde el
aunque sí sufren un proceso madurativo diferente. Así, el
día posnatal 10 hasta el 15, y se los sacrificó 24h tras la
conjunto de precursores DN, que expresan CD44 pero no
última inyección. El hipotiroidismo produjo un aumento de
CD25, no está alterado con la edad. Sin embargo, su
las concentraciones de colesterol y disminución de la
progenie inmediata (CD44+/CD25+, CD44-/CD25+, CD44- expresión de D1 en hígado y de Serca-2 en corazón, que
/CD25) sufre una declinación con el envejecimiento. Estos fueron normalizados tras el tratamiento con T3. En el
datos muestran cómo la maduración tímica en edades
encéfalo, el hipotiroidismo redujo la expresión de los
avanzadas parece estar bloqueada en las primeras genes del núcleo estriado Ngrn y Rasd2, así como de los
etapas, justo en el momento previo al reordenamiento del
genes de cerebelo que codifican sinaptotagmina
gen Vß del RCT, en los constituyentes de la línea 12 (Syt12), hairless (Hr), neurotrofina 3 (Nt3) y
germinal. 25-28 RevErbAα (Nrd1d), que también se normalizaron tras la
administración de T3, lo que indica que durante el periodo
El envejecimiento que sufre el sistema inmunitario genera posnatal esta hormona llega directamente y tiene actividad
cambios en el repertorio de los linfocitos T. Diferentes en el cerebro. En paralelo, se ha estudiado la posible
subpoblaciones de linfocitos T modifican su fenotipo acción de un análogo de la T3, que se une in vitro
durante el envejecimiento, lo que incrementa la proporción preferentemente al receptor tiroideo α (TRα). Sin embargo,
de linfocitos T de memoria. Este cambio se presenta tanto este compuesto no tuvo efecto alguno en los parámetros
en linfocitos T CD4+ como en linfocitos T CD8+ .25,26 estudiados. Para comprobar si la falta de acción de este
compuesto se debe a una rápida metabolización, se
La expresión de marcadores de memoria CD44 y CD62L comparó su actividad con la de la T3 en ensayos de
(L-selectina) también puede ser modificada. Aunque los transactivación del gen indicador cloranfenicol
linfocitos T con fenotipo de memoria se incrementan con la acetiltransferasa en células Cos7 que expresan de forma
edad, existe poca evidencia que sustente que su función transitoria, mediante transfección, TRα o TRα. Los
esté disminuida. Uno de los cambios cualitativos más resultados indican que Kb430 carece de actividad.
relevantes existentes en la población de linfocitos T de
TRODUCCIÓN En relación con el efecto de T3 en la expresión génica en
cerebro y cerebelo, no son muchos los genes regulados
Las hormonas tiroideas (HT) triyodotironina (T3) y tiroxina por esta hormona, y para este trabajo hemos elegido los
(T4) regulan el desarrollo y multitud de procesos que mejor se prestan a un estudio mediante PCR. La
fisiológicos en la mayoría de los tejidos del organismo, y regulación génica por T3 en el cerebro con frecuencia
especialmente en el sistema nervioso central (SNC). Las depende de la región, por lo que para la evaluación de sus
HT ejercen sus funciones mediante la interacción de la efectos no es adecuado partir de ARN de todo el cerebro,
hormona activa, T3, con receptores nucleares (TR), que y es necesario utilizar regiones aisladas. En este trabajo
son factores de transcripción regulados por ligando1-3. Los hemos usado el núcleo estriado y el cerebelo, porque su
receptores se unen a secuencias específicas complejidad celular es menor que en otras estructuras.
denominadas elementos de respuesta a HT (TRE), Las células que expresan RC3 y Rasd2 en el estriado son
situadas en regiones reguladoras de los genes diana, las espinosas gabaérgicas de mediano tamaño15, que
principalmente en forma de heterodímeros con el receptor constituyen el 95% de la población celular de esta región.
de ácido 9-cis-retinoico (RXR). En ausencia de hormona, En el cerebelo, la mayoría de las células son granulares,
el aporreceptor unido al ADN interacciona con un conjunto las que expresan los genes que hemos seleccionado para
de correpresores inhibiendo la transcripción de genes el estudio.
diana. La unión del ligando (T3) produce un cambio
conformacional que permite que los correpresores sean Que la administración de T3 dé lugar a cambios en la
desplazados por coactivadores, con lo que se activa la expresión génica en el cerebro indica que esta hormona
transcripción. Existen varias isoformas de TR que resultan es capaz de llegar a las células diana a través de la
del procesamiento alternativo de dos genes TRα y TRβ. barrera hematoencefálica o de los plexos coroideos, es
decir, la acción de la T3, como hormona activa, en el
La importancia de las HT en el desarrollo del SNC es bien cerebro no depende exclusivamente de su formación local
conocida, y aunque aún no se conoce con precisión los a partir de T4 y catalizada por la desyodasa 2, como
fundamentos moleculares y celulares de sus acciones, parece ser el caso durante el período fetal en ratas 19 y en
tienen efectos importantes en la migración y la humanos20. Efectivamente, en modelos de hipotiroidismo
diferenciación de las células neurales, la génesis sináptica maternofetal, tras la administración de T4 a ratas
y la mielinización4-7. El hipotiroidismo altera la gestantes, se puede detectar T3 en el cerebro de los fetos.
diferenciación de células piramidales, células de Purkinje, Sin embargo, tras la administración de T3, se puede
precursores de las interneuronas gabaérgicas, detectar esta hormona en el suero y diversos tejidos
oligodendrocitos y astroglía. Como en el resto de los fetales, pero no en el cerebro, lo que indica que el cerebro
tejidos, las acciones de las hormonas tiroideas en el SNC fetal depende de la actividad Dio2. Nuestros resultados
se deben a la interacción de la T3 con los receptores indican que esto no es aplicable al periodo posnatal. No se
nucleares y la regulación de la expresión de genes conocen las bases celulares de dicha discriminación, y es
específicos8. posible que estén implicados transportadores específicos
de T4 y T321.
En este trabajo hemos analizado el efecto del
hipotiroidismo y de la administración de T3 en la expresión Para un mejor conocimiento de la acción de T3, tiene un
de genes del cerebro y el cerebelo, en relación con otros gran interés definir las isoformas de receptor implicadas
parámetros de acción de la T3 en el hígado y el corazón. específicamente en sus acciones. Para el estudio de las
En paralelo, hemos analizado el posible efecto de un funciones específicas de las isoformas de TR, se han
análogo de la T3 que interacciona de forma específica con seguido dos estrategias: por un lado, se han generado
la isoforma TRα. animales mutantes deficientes en alguna de las isoformas
o que expresaran formas mutadas22,23. El uso de estos
DISCUSIÓN animales ha permitido conocer algunas de estas
funciones, como la implicación de TRα1 en el control de la
actividad del miocardio y el desarrollo intestinal y la
En este trabajo mostramos los efectos del hipotiroidismo y implicación de TRβ en la regulación de la secreción de
del tratamiento con hormona tiroidea en la expresión TSH, la audición y el metabolismo hepático. Otro abordaje
génica de cerebro y cerebelo. El hipotiroidismo de ha sido la generación de compuestos análogos de la
comienzo prenatal y prolongado durante las primeras 2 hormona tiroidea con especificidad selectiva por alguna de
semanas de vida posnatal dio lugar a una disminución de estas isoformas24. El estudio de dichos compuestos es de
la expresión de Ngrn y Rasd2 en el núcleo estriado y gran interés terapéutico, porque serían selectivos para
de Hr, Ntf3, Syt12 y Nr1d1 en el cerebelo. En el mismo determinadas acciones de las hormonas tiroideas que
grupo de animales hemos evaluado el efecto del pueden resultar beneficiosas en afecciones distintas de las
hipotiroidismo y de la administración de T3 en otros tiroideas25. En estudios previos hemos usado uno de estos
tejidos, como la concentración de colesterol en suero, compuestos, GC-1, que actúa selectivamente a través de
resultado de acciones de T3 en el hígado17, expresión de TRβ, para identificar acciones de T3 mediadas por TRα o
D1 en ese tejido y de Serca2 en el corazón. En conjunto, por TRβ en el sistema nervioso central10,26.
en este trabajo hemos descrito protocolos útiles para la
evaluación del estado tiroideo de ratas durante el periodo
En este trabajo hemos tenido la oportunidad de evaluar un
neonatal. La mayoría de estos parámetros también
compuesto que, in vitro, se une con mayor afinidad a TRα
pueden ser aplicables al animal adulto, aunque en el caso
que a TRβ, aunque su actividad in vivo no había sido
de los genes de respuesta a T3 en el cerebro y el
explorada. Los experimentos realizados muestran que el
cerebelo, sólo RC3 se ha demostrado sensible a las
hormonas tiroideas después del primer mes de vida18. tratamiento con Kb430 en animales hipotiroideos no
consigue recuperar la expresión de los genes estudiados
con ninguna de las dosis. Es razonable que este
compuesto no haya tenido efecto en las respuestas
hepáticas, pues éstas dependen fundamentalmente de grupo de células foliculares, unidad estructural y funcional
TRβ; en el cerebro, una explicación a su falta de actividad de la glándula que presentan un epitelio simple cúbico que
podría ser que no atraviesa la barrera hematoencefálica. limita espacios esféricos centrales llenos de sustancia
Sin embargo, este compuesto no tuvo actividad en la gelatinosa: el coloide, región en la cual se almacenan las
regulación de Serca2 en el corazón, que dependería de hormonas T4 y T3 unidas a una glucoproteina:
TRα. tiroglobulina (Junqueira & Carneiro, 2000).
Una razón para la falta de actividad in vivo podría ser una En el hombre a las 12 semanas de gestación la glándula
rápida metabolización que no permitiera la ocupación del sintetiza y segrega hormonas tiroideas, bajo la
receptor el tiempo suficiente. Sin embargo, los estudios de estimulación del hipotálamo a través de la hormona TRH,
transactivación en células en cultivo indican que el la que a su vez estimula la liberación de TSH por parte de
compuesto carece de actividad. En esos experimentos se la hipófisis del feto (Silbernagl & Despopoulos, 2008).
usaron células Cos-7 que no expresan TR, por lo cual se
puede hacer que expresen transitoria y específicamente la Las células foliculares tienen la capacidad de sintetizar,
isoforma de interés mediante transfección con plásmidos almacenar y secretar dos hormonas importantes, la
de expresión. Así, es posible estudiar en condiciones de tiroxina y la triyodotironina, denominadas habitualmente T4
equilibrio la respuesta del sistema a T3 o al análogo de y T3 respectivamente. Estas hormonas aumentan el ritmo
interés mediante el uso de genes indicadores controlados basal de utilización de oxigeno y el índice metabólico
por un TRE. Mientras que T3 tuvo un claro efecto en TRα basal, así como la tasa correspondiente de producción de
o TRβ, el análogo de T3 no tuvo efecto alguno, lo que calor, para adaptarlas a las alteraciones de las
indica falta de actividad biológica. necesidades energéticas, del abastecimiento calórico y del
ambiente térmico, igualmente esta glándula presenta las
células C o parafoliculares encargadas de secretar
calcitonina, una hormona importante que ayuda a
TIROIDES disminuir las concentraciones sanguíneas de calcio
(Gartner et al., 2008).
Efecto del Láser Infrarrojo sobre Células Tiroideas
Esta glándula suele experimentar dos tipos de trastornos
RESUMEN: Diez ratas Sprague Dawley de 4 meses de endocrinos o metabólicos denominados como tirotoxicosis:
vida y peso aproximado de 250 g fueron divididas en dos el hipertiroidismo generado por exceso en la función de la
grupos de 5 animales cada uno, el grupo A se mantuvo tiroides que conlleva a una hipersecreción de Tiroxina (T4)
como control y los animales del grupo B recibieron libre o triyodotironina (T3) libre o de ambas y niveles
plasmáticos anormales y elevados de las citadas
estimulaciones con láser infrarrojo en la tiroides con dosis
hormonas (Reid & Wheeler, 2005). Contrariamente a esta
de 16 J/cm2 durante 15 días consecutivos. Posteriormente afección, encontramos el hipotiroidismo generado por un
las ratas fueron sacrificadas, se extrajeron las respectivas marcado déficit en la síntesis y secreción de hormonas
tiroides siendo procesadas para microscopía óptica y se tiroideas producto básicamente de una insuficiencia en el
obtuvieron placas histológicas y micrografías de tiroides consumo de yodo (Raza & Mahmood, 2013).
con aumentos finales de hasta 1000X, las cuales fueron
sometidas a estudios morfométricos para determinar en Las células de los folículos tiroideos se sustentan sobre
100 células foliculares: número, áreas y perímetro tanto una lámina basal y muestran toda las características de
celular como nuclear, además de disposición coloidal y aquellas que simultaneamente sintetizan, secretan,
absorben y digieren proteínas, por tanto, en su citoplasma
presencia de vasos sanguíneos. El análisis de los encontramos abundante retículo endoplásmico rugoso
resultados entre las 100 células foliculares pertenecientes (RER) y una cantidad moderada de mitocondrias. El
a tiroides normal y estimulada revela que existen núcleo generalmente es esférico y situado en el centro de
marcadas diferencias en todos los componentes la célula. En el polo apical se observa una zona de Golgi
analizados los que se podría traducir en distintas discreta y gránulos de secreción con las características del
funcionalidades en el metabolismo de las respectivas coloide folicular, además de un número moderado de
microvellosidades. En esta región se encuentra también
glándulas.
lisosomas y algunas vacuolas de gran tamaño (Junqueira
& Carneiro).
INTRODUCCIÓN
Por otro lado las células parafoliculares o célula C, se
La tiroides es una glándula endocrina localizada en la encuentran en forma individual o pueden formar racimos
parte anterior y a ambos lados de la tráquea en la base del pequeños de células en la periferia de los folículos
cuello a nivel de las vertebras C5T1 y su tamaño es muy tiroideos, poseen una pequeña cantidad de RER,
variable ya que suele pesar entre 1520 g en el adulto. mitocondrias alargadas y complejo de Golgi prominente.
Posee una capsula delgada de tejido conjuntivo denso En su citoplasma se encuentran numerosos gránulos que
irregular y colagenoso donde los tabiques de la cápsula contienen calcitonina. El núcleo es generalmente redondo.
subdividen a la glándula en lóbulos izquierdo y derecho, Estas células entonces poseen las típicas características
que están conectados a través de una delgada lámina, el ultraestructurales de secreción polipéptidica (Junqueira &
istmo (Silverthom, 2007). Carneiro).
La glándula tiroides está estructurada por miles de Nosotros hemos estudiado y demostrado que las
folículos tiroideos, pequeñas esferas que miden en el inducciones con láser infrarrojo (LIR) sobre hepatocitos de
hombre de 0,2 a 0,9 mm de diámetro, compuestos por un rata genera una significativa activación de la función
celular determinada por notables diferencias en los precisando cambios en los organelos relacionados a
volúmenes de constituyentes celulares tanto síntesis y secreción hormonal destacando particularmente
citoplasmáticos: retículo endoplasmático rugoso, en un aumento de gotas de coloides y lisosomas,
mitocondrias, gránulos de glicógeno, como nucleares: dilatación de las cisternas de retículo endoplasmático
poros nucleares, tipos de cromatina y nucléolos. rugoso y reducción del complejo de Golgi.
Igualmente en las áreas nucleares y celulares (Cornejo et
al., 2012). Dependiendo del grado de estimulación de la glándula
tiroides por acción de la hormona adeno-
En base a lo aquí presentado, el objetivo fundamental del hipofisiariatiroestimulante (TSH), las células foliculares
presente trabajo está orientado a determinar las distintas varían su altura de cúbicas bajas a cilíndricas. Cuando no
modificaciones que en este tipo celular sintetizador y existe estimulación por TSH las células se aplanan y el
secretor de la glándula tiroides se generan cuando son coloide se va acumulando aumentando el díámetro
estimuladas con el emisiones del LIR folicular.
La HAM es sintetizada como una pre-prohormona. En el en crecimiento, productores de HAM, para continuar
citoplasma cada monómero es clivado generando un
fragmento N-terminal: 110 KDa (región pro) y otro C- su crecimiento hasta estadio preovulatorio. Dado que
terminal: 25 KDa (región madura o nativa), unidos en
forma no covalente por 2 puentes disulfuro. El dominio C- la HAM afecta a la sensibilidad de los folículos a FSH,
terminal es el bioactivo, uniéndose al receptor, pero
necesita del fragmento N-terminal para desencadenar
desempeñaría un papel al determinar si los folículos
respuesta biológica. En circulación podemos encontrar
una mezcla de la forma pro-HAM y del complejo C-
terminal/N-terminal, que serían medidos por los ensayos experimentan selección o son removiConclusiones
disponibles. Si bien la HAM se conoce desde hace ya 40 años, en los
últimos años se ha confirmado su utilidad como marcador
Distintos autores han demostrado que la HAM es un de reserva ovárica. El conocimiento de la fisiología, el
marcador precoz de la disminución y agotamiento de la mecanismo de acción, el metabolismo de HAM y la
reserva ovárica. Muestra una estrecha correlación con la estandarización y el cumplimiento de las condiciones
reserva folicular y la capacidad reproductiva, más que la preanalíticas, son, sin duda, de vital importancia para el
FSH y el estradiol. diseño de técnicas más específicas y confiables, así como
para la correcta interpretación de los resultados.
La revisión realizada no deja lugar a dudas sobre la
utilidad de la HAM en la etapa fértil. Ha mostrado ser una Es necesario un importante trabajo de los organismos
excelente herramienta para caracterizar pobres competentes para poder contar con la estandarización
respondedoras en los procedimientos de fertilización internacional que se requiere. La industria diagnóstica
asistida, alertar precozmente en mujeres jóvenes sobre tendrá por delante el desafío de mejorar sus sistemas de
reserva ovárica baja, en relación con su edad cronológica medición, que permitan caracterizar solamente las formas
y expresar un número de folículos en crecimiento elevado, activas de la hormona.
como en síndrome de ovario poliquístico, para evitar una
hiperestimulación ovárica. El creciente número de Las numerosas ventajas que presenta respecto a otros
pacientes que decidieron retrasar su maternidad y su marcadores endocrinológicos utilizados y el surgimiento de
papel en la fisiología ovárica han posibilitado que la HAM nuevas y mejores metodologías de medición sustentan,
integre hoy la evaluación de mujeres con alteraciones de además, su utilización en una gran diversidad de
la fertilidad situaciones clínicas. Entre ellas se encuentran patologías
endocrinas frecuentes, como el SOP, y patologías
infrecuentes, como los tumores de células de la granulosa.
La hormona antimülleriana como marcador de reserva
La revisión realizada no deja lugar a dudas sobre la
ovárica utilidad de la HAM en el área de fertilidad. Ha mostrado
ser una excelente herramienta para caracterizar pobres
La reserva ovárica, representada por la cantidad de respondedoras en los procedimientos de fertilización
folículos y la calidad ovocitaria, disminuye con la edad de asistida, alertar precozmente en mujeres jóvenes sobre
la mujer, resultando en la disminución de su función reserva ovárica baja, en relación con su edad cronológica
reproductiva17. y expresar un número de folículos en crecimiento elevado,
como en el SOP, para evitar una hiperestimulación éster entre una cisteína de su sitio activo y la glicina del
ovárica. extremo carboxilo terminal de la ubiquitina, mediante el
consumo de ATP (Fang & Weissman, 2004; Kim et al.,
El creciente número de pacientes que han decidido 2011). Normalmente cada organismo eucariote presenta
retrasar su maternidad y/o someterse a tratamiento de un solo tipo de E1, aunque existen excepciones en plantas
fertilización asistida y su papel en la fisiología ovárica han (Pickart & Eddins, 2004). Las E2 o enzimas conjugadoras
contribuido a que la HAM integre hoy el panel de de ubiquitina actúan como puente entre E1 y E3. Su
evaluación de mujeres con alteraciones de la fertilidad. mecanismo de acción depende del tipo de E3 con el que
interaccione. Las E3 o enzimas ubiquitina ligasas son
GENITAL MASCULINO enzimas que catalizan la unión de la ubiquitina a sustratos
específicos, por lo que han sido descritas algo más de 650
Papel del Sistema Ubiquitina Proteasoma en la tipos de enzimas E3 (de Bie & Ciechanover, 2011). Las E3
Espematogénesis tienen la capacidad de unirse tanto a E2 como al sustrato
y la interacción con el sustrato puede ser directa o
RESUMEN: La espermatogénesis consiste en una serie mediada a través de proteínas auxiliares (Glickman &
de eventos que constituyen un programa de diferenciación Ciechanover, 2002). La ubiquitinación de proteínas es un
celular, con drásticos cambios en la morfología, en la proceso reversible. Las enzimas encargadas de remover
bioquímica y en la expresión de genes, los cuales son ubiquitinas se denominan deubiquitinasas (DUBs). Las
temporal y especialmente regulados por mecanismos DUBs presentan actividad cisteína proteasa que hidroliza
endocrinos, paracrinos y autocrinos. Durante las distintas de manera específica enlaces isopeptídicos entre el grupo
fases de la espermatogénesis y especialmente durante la carboxilo de la glicina 76 de la ubiquitina y una proteína
fase de diferenciación de las espermátidas, existe diana (Glickman & Ciechanover). Las DUBs son muy
degradación masiva de proteínas citosólicas, nucleares y abundantes y diversas, lo que hace suponer que tienen
de membrana debido a la eliminación de gran parte del una alta especificidad de función y sustrato (Ventii &
citoplasma que posee la espermátida redonda. Esta Wilkinson, 2008). Sus funciones están relacionadas con
degradación de proteínas ocurre dentro del epitelio rescatar y reciclar las ubiquitinas que marcan a las
seminífero y está mediada por los sistemas celulares proteínas, antes de su ingreso al proteasoma (Nandi et al.,
descritos para este propósito. El proteasoma es un 2006), lo que permite el mantenimiento de niveles de
complejo multienzimático encargado de degradar la mayor ubiquitina libres y la regulación de la estabilidad de los
parte de las proteínas nucleares y citosólicas, después de conjugados de ubiquitina (Glickman & Ciechanover). El
que éstas son marcadas para su destrucción por unión proteasoma es un complejo multienzimático con actividad
covalente de moléculas de ubiquitina. Esta destrucción proteolítica formado por múltiples subunidades (Jung et
selectiva de proteínas celulares es un mecanismo esencial al., 2009; Kloetzel, 2001). Este juega un papel central en la
en el proceso de espermatogénesis. En este artículo se degradación intracelular de proteínas y se encuentra tanto
revisan los aspectos básicos del proceso fisiológico en el núcleo como en el citoplasma de las células
gonadal del macho y los conocimientos actuales sobre el eucariotas (Nederlof et al., 1995). El proteasoma más
rol del sistema ubiquitina proteasoma en el mantenimiento sencillo de todos es el proteasoma 20S llamado así por su
funcional de la espermatogénesis. coeficiente de sedimentación, que tiene un peso molecular
de aproximadamente 700 kDa (Orlowski, 1990) y al que se
Sistema Ubiquitina Proteasoma La ubiquitina es una pueden unir distintos complejos reguladores el 19S, PA28
proteína monomérica de 76 residuos aminoacídicos y un α/ß, PA28γ y PA200 (Bousquet-Dubouch et al., 2011; Jung
peso molecular de 8,5 kDa (Bebington et al., 2001; et al.). El proteasoma 20S se encuentra en todas las
Schlesinger et al., 1975), que constituye el elemento células eucarióticas, desde las levaduras al ser humano
esencial del sistema de proteólisis específica dependiente (Arrigo et al., 1987), y tiene una estructura cuaternaria muy
de ATP o SUP (Ciechanover, 2005a). Esta proteína es conservada que, al microscopio electrónico, aparece con
expresada por tres genes diferentes UBA, UBB y UBC la forma de un barril compuesto por 4 anillos apilados
situados en diferentes regiones del genoma eucariota (Hegerl et al., 1991, Jung et al.). Estos anillos forman un
(Grillari et al., 2006; Ryu et al., 2008). Esta proteína es cilindro que está compuesto por 28 subunidades, las
altamente conservada durante la evolución de los cuales tienen pesos moleculares que oscilan entre 23 y 32
eucariotes, de tal forma, que la ubiquitina humana y la de kDa (Claverol et al.; Jung et al.). Estas subunidades están
levadura difieren en sólo 3 residuos de los 76 aminoácidos organizadas en cuatro anillos alrededor de un canal
(Pickart & Fushman, 2004). La ubiquitina, especialmente central donde tiene lugar la proteólisis. Cada uno de los
las cadenas de poliubiquitina, son utilizadas como un anillos externos contiene siete subunidades α, numeradas
marcador universal de proteólisis y son usadas para este de 1 a 7, cuya participación es necesaria para el
propósito en todos los tejidos y organismos (Hershko & ensamblaje del cilindro. Cada uno de los anillos internos
Ciechanover, 1998). La ubiquitinación es una modificación contiene siete subunidades ß (ß1-ß7), tres de las cuales
posttraduccional que experimenta una gran cantidad de están implicadas en la actividad proteolítica del complejo.
proteínas. Consiste en la unión covalente de una o varias Específicamente, las subunidades ß1, ß2 y ß5 del
moléculas de ubiquitina a una proteína sustrato. proteasoma poseen los sitios activos con actividades
Actualmente, se han descrito tres enzimas que llevan a proteolíticas que permiten, respectivamente, hidrolizar
cabo el proceso de ubiquitinación, las cuales actúan de uniones peptídicas por el extremo carboxilo-terminal de
modo secuencial y son conocidas como E1, E2 y E3 aminoácidos ácidos con su actividad tipo peptidilglutamil
péptido hidrolasa o PGPH, de aminoácidos básicos con su
Su actividad culmina con la unión de múltiples ubiquitinas actividad tipo tripsina o de aminoácidos hidrofóbicos con
a los residuos lisina de las proteínas que deben ser su actividad tipo quimotripsina (Wilk & Orlowski, 1980,
eliminadas (Hershko & Ciechanover). La E1 o enzima 1983). De esta manera, cada proteasoma contiene seis
activadora de ubiquitina tiene por función activar a la sitios activos (Jung et al.; Walz et al., 1998). La actividad
molécula de ubiquitina generando con ella un enlace tiol- del proteasoma está modulada por los complejos
reguladores que se pueden unir a los anillos α. En Ácido ascórbico: desde la química hasta su crucial función
ausencia de estos complejos el canal del proteasoma está protectiva en ojoSTA
cerrado por el extremo N-terminal de las siete diferentes
unidades a y por consiguiente la actividad proteolítica está Resumen La Vitamina C o ácido L-ascórbico (AA), es una
reprimida (Bajorek & Glickman, 2004; Rechsteiner & Hill, vitamina esencial y un importante agente antioxidante
2005). Cuatro complejos reguladores proteasomales han hidrosoluble, que se sintetiza químicamente a partir de la
sido identificados en células de mamíferos: 19S, PA28α/ ß, glucosa, mediante una serie de reacciones enzimáticas,
PA28γ y PA200. El prototipo de proteasoma eucariótico siendo la L-gulono-γ-lactona oxidasa (GLO) la última
(Fig. 1), el proteasoma 26S está conformado por un enzima involucrada. La incapacidad de sintetizar AA por
complejo proteolítico central, el “core”20S, más dos ausencia de GLO ocurrió hace cientos de millones de años
complejos reguladores 19S (Pickart & Cohen). Regulación y se manifiesta sólo en algunas especies. La degradación
del Proteasoma La localización celular del proteasoma del AA se lleva a cabo mediante procesos oxidativos que
26S se modifica de acuerdo con las necesidades de la involucran la hidrólisis del anillo lactona para producir
célula y en particular en condiciones de estrés. Al ácido 2,3-dicetogulónico (DCG), que posteriormente se
localizarse en diferentes compartimientos de la célula degrada por decarboxilación, generando productos
interactúa con una gran variedad de proteínas, las que coloreados, encontrados en algunas patologías oculares.
podrían estabilizar y regular diferencialmente su actividad Entre las diferentes propiedades del AA cabe mencionar
proteolítica. La actividad proteasomal está regulada a su capacidad de absorber radiación ultravioleta (RUV) y
varios niveles. 1) Por modulación de la expresión de sus evitar el daño fotoquímico en órganos expuestos. En
subunidades constituyentes. 2) Por la distribución humanos, y en algunos animales (cobayos, ciertos
intracelular y disponibilidad de las subunidades para primates, etc.) el humor acuoso tiene mayor concentración
formar proteasomas funcionales, dado que algunas de AA que el plasma. Esto responde a un mecanismo de
subunidades presentan señal de localización nuclear transporte activo especializado en el cuerpo ciliar que se
(Nederlof et al.; Sorokin et al., 2007). 3) Por la unión encarga de transportar el AA desde la sangre hacia el
diferencial de los complejos reguladores que se unen al humor acuoso y desde allí al epitelio corneal,
“core” 20S permitiendo abrir los extremos del proteasoma transformando a la córnea en la estructura del ojo
para facilitar la entrada de la proteína que será degradada responsable de la mayor absorción de RUV
(Savulescu & Glickman, 2011). 4) Por modificaciones
cotraduccionales y post-traduccionales como fosforilación, FUNCIONES El AA es esencial en la síntesis del
N-acetilación, glicosilación, Nmiristoilación y S- colágeno, también interviene en la síntesis de lípidos,
glutationilación de varias de las subunidades proteínas, norepinefrina, serotonina, L-carnitina, y en el
(Konstantinova et al., 2008). Aunque la función de la metabolismo de tirosina, histamina y fenilalanina. En el
mayoría de estas modificaciones sobre las subunidades escorbuto el problema se produce en la síntesis del
del proteasoma todavía no está clara, su presencia no es colágeno, ya que el AA es un cofactor esencial en este
constante, y cambian según el estado fisiológico de la proceso (18). La deficiencia de AA se asocia con una
célula, sugiriendo que estas modificaciones podrían estar disminución en la síntesis de pro-colágeno y con una
regulando la funcionalidad de este complejo catalítico reducida hidroxilación de los residuos prolina y lisina,
(Konstantinova et al.) obteniéndose una molécula menos estable a la
temperatura corporal. Cobayos deficientes en AA
Conclusión y perspectiva Considerando los antecedentes presentan cambios morfológicos en el endotelio y en la
planteados en esta revisión, queda claro que el SUP juega capa muscular de los vasos sanguíneos debido a la baja
un papel importante en varios niveles de la expresión de colágeno tipo IV y elastina (19). El AA facilita
espermatogénesis. A la fecha, existe un gran número de la absorción del hierro en el tracto digestivo y regula la
evidencias que demuestran la presencia y localización de distribución y almacenamiento del mismo. El ascorbato
los componentes del SUP a nivel testicular (Tabla I). Sin (AH- ), forma químicamente estable a pH fisiológico, es un
embargo, los estudios funcionales de la actividad gran agente reductor hidrosoluble debido a sus dos
proteasomal son menos abundantes. El estudio de las hidroxilos (OH-) ionizables capaces de “limpiar” a los
funciones del SUP es crítico, ya que la inactivación de tejidos de las especies reactivas del oxígeno (ERO)
estos genes da como resultados una progresión anormal o responsables del stress oxidativo (18)(20). A pesar de que
la detención del desarrollo de la espermatogénesis, lo que en las vías degradativas del AA se producen EROs, no se
conduce a la infertilidad. La especificidad del proceso de ha demostrado que estas especies participen en procesos
ubiquitinación de proteínas está dada por la enzima de oxidación ni peroxidación que sean perjudiciales (21).
ubiquitina ligasa o E3. Por lo tanto, la identificación de las El AA también posee la capacidad de regenerar vitamina
E3 ligasas implicadas en los procesos de ubiquitinación de E, y de esta manera la mantiene en un estado activo
proteínas en el epitelio seminífero proporcionará contribuyendo a la acción antioxidante. La vitamina C
información fundamental para comprender los protege de la oxidación a las lipoproteínas de baja
mecanismos celulares implicados en la regulación de la densidad (LDL), conjugándose con compuestos
espermatogénesis. La existencia de proteasomas hidrofóbicos (palmitato de ascorbilo, ácido acetal
específicos de tejidos, como el espermatoproteasoma ascórbico) e incorporándose a las LDL para cumplir su rol
podría estimular el desarrollo de inhibidores selectivos de antioxidante. Además de sus efectos antioxidantes se ha
las subunidades que los diferencian de los proteasomas demostrado que posee capacidad para absorber RUV y
somáticos, como la subunidad PSMA8, los cuales podrían debido a que está altamente concentrado en córnea,
sentar las bases de la investigación para el desarrollo de humor acuoso y cristalino, protege a diferentes tejidos
anticonceptivos masculinos oculares de dichas radiaciones
Vista Oído
Uso de biomateriales como injertos para timpanoplastia frecuente en nuestro medio; no obstante, actualmente
tipo I existen diversas técnicas quirúrgicas con diferentes
resultados reportados, por lo que no sólo debemos poner
RESUMEN Objetivo: comparar dos biomateriales atención en el tipo de cirugía, sino también en el tipo de
(bioplástico e injerto autólogo de fascia) como injertos para injerto. Asimismo, demostramos que el cobayo es un
el cierre de perforación timpánica en un modelo animal. modelo animal barato, factible y distribuido fácilmente en
Material y método: estudio experimental, prospectivo, en el todo el mundo.
que se incluyeron 26 cobayos adultos de sexo masculino,
en el centro hospitalario de tercer nivel, Bioterio de la CONCLUSIONES En este trabajo demostramos que el
Universidad Panamericana, y en el que cada sujeto de alfa, omegatelequelico poli (epsilon caprolactona) diol y
experimentación fue su propio control. Se realizó un hexametilen di-isocianato (PCLDEGHDI) es un bioplástico
modelo de perforación timpánica crónica y timpanoplastia que puede tener uso como injerto timpánico; obtuvimos un
tipo I, con cierre de perforación. Resultados: obtuvimos porcentaje de cierre similar al patrón de referencia (fascia)
tasas de cierre similares con ambos materiales. El análisis y no aparecieron complicaciones al seguimiento a corto
histólogico mostró cualidades diferentes entre ambos plazo; asimismo, con el uso de este plástico, por no
injertos. Conclusiones: el bioplástico (alfa, omega- requerir un abordaje adicional para obtenerlo como injerto
telequelico poli [epsiloncaprolactona] diol y hexametilen di- y por su posible aplicación con el endoscopio, podrían
isocianato [PCLDEGHDI]) es un biomaterial que puede reducirse los costos hospitalarios al realizarse este
utilizarse como injerto en timpanoplastias. Se requieren procedimiento en el consultorio con anestesia local.
más estudios para valorar su eficacia y efectividad, así Proponemos las siguientes líneas de investigación,
como corroborar un adecuado perfil de seguridad para su derivadas de nuestro estudio: evaluar de manera objetiva
uso clínico. la posible ototoxicidad mediante emisiones otoacústicas,
estudiar, mediante seguimiento timpanométrico, las
DISCUSIÓN Una de las principales limitantes de este propiedades biofísicas del injerto, comparar este material
estudio es su diseño como estudio piloto en un modelo con otros biomateriales biológicos (xenoinjertos), aumentar
el tamaño de la muestra para realizar comparaciones
A pesar de existir múltiples estudios acerca del uso de estadísticas más exactas, evaluar el comportamiento del
bioplástico en diferentes ramas de la medicina, existe poca injerto a largo plazo y valorar el costo-beneficio del posible
evidencia del posible uso de éste en injertos timpánicos. uso de este material como injerto
Los poliuretanos son aptos para sustituir a la membrana
timpá- nica debido a su elasticidad y sus propiedades
vibratorias demostradas in vitro. Varios estudios han
demostrado resultados desalentadores con el uso de
bioplásticos; sin embargo, nuestro estudio demuestra un
adecuado cierre de la perforación timpánica. La
timpanoplastia tipo I es un procedimiento relativamente