INSTRUCTIVO

LABORATORIO
Técnica: Determinación de DBO

PRINCIPIO Y ALCANCE
La Demanda Bioquímica de Oxígeno (DBO) es una prueba empírica en la
que se utilizan procedimientos estandarizados de laboratorio para
determinar los requerimientos relativos de oxigeno de las aguas residuales,
efluentes y contaminadas. Se utiliza en sistemas de tratamiento para
determinar cómo eficacia de extracción de DBO de tales sistemas. La
prueba de DBO mide el oxígeno utilizado, durante un periodo de
incubación especificado, para la degradación bioquímica de la materia
orgánica a un pH entre 6,5 y 7,5.

PRINCIPIO:

El método consiste en llenar con muestra, hasta rebosar, un frasco

hermético del tamaño especificado, e incubarlo a la temperatura establecida
durante 5 días. El oxígeno disuelto se mide antes y después de la
incubación, y la DBO se calcula mediante la diferencia entre el OD inicial
y final.

INTERFERENCIA

Cloro residual: El mismo debe ser evaluado y eliminado.

Toxicos: Los toxicos de cualquier tipo, deben tenerse en cuenta pues
actúan sobre los microorganismos, produciendo una deficiencia o ausencia
total de actividad.
Aidez o alcalinidad: las muestras deben ser neutralizadas a un pH entre
6,5 y 7,5 para su correcta determinación.
Reductores: Si la muestra contiene reductores como sulfuros, sulfitos,
iones ferrosos, etc. es necesario realizar una demanda inmediata de oxigeno
para diferenciarla de la DBO obtenida.

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Toma y preservación de las muestras.

Las muestras para el análisis de DBO pueden degradarse significativamente

mientras están almacenadas, entre su recolección y análisis, y producir
resultados bajos de DBO. Para evitar esto se debe realizar el análisis de las
muestras inmediatamente o enfriándolas a temperaturas próximas a la de
congelación durante su almacenamiento. De igual manera debe
minimizarse el tiempo de mantenimiento, y caliéntese las muestras a 20°C
antes de su análisis.

Muestras puntuales:

Si el inicio del análisis es antes de las 2 horas de tomada la muestra, es

innecesario enfriar la muestra. De lo contrario conservese la muestra a
menos de 4°C desde el momento de su recogida. Comiéncese el análisis
antes de las 6 horas de tomada la muestra; cuando esto no sea posible
INFORMESE el tiempo y temperatura del almacenamiento. Este en ningún
caso debe superar las 24 horas.

Muestras compuestas:

Consérvese las muestras debajo de los 4°C durante la mezcla, con un limite
de periodo de mezcla de 24 horas, utilizando los mismos criterios que para
las muestras puntuales, empezando la determinación del tiempo de
mantenimiento a partir del final del periodo de mezcla. INFÓRMESE el
tiempo y las condiciones de almacenamiento como parte de los resultados.

Equipos y materiales.
Incubadora: controlada termostáticamente a 20 ± 0,5 °C.
Frascos: Específicos para determinación de BDO

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Reactivos

1.- Solución buffer de fosfato: disolver 8,5 g. de fosfato diacido de

potasio, 21,75 g. de fosfato acido de potasio, 33,4 g. de fosfato acido de
sodio hepta hidratado y 1,7 g. de cloruro de amonio en aproximadamente
500 ml. De agua destilada. Diluir a 1000 ml. El pH de esta solución será de
7,2.
2.- Solución de sulfato de magnesio: Disolver 22,5 g. de sulfato de
magesio hepta hidratado en agua destilada y diluir a 1000 ml.
3.- Solución de cloruro de calcio: disolver 27,5 g. de cloruro de calcio
anhidro en agua destilada y diluir a 1000 ml.
4.- Solución de cloruro férrico: disolver 0,25 g. de cloruro ferrico hexa
hidratado en agua destilada y diluir a 1000 ml.
5.- Hidróxido de Sodio 1N: pesar 40 g. en balanza analítica y llevar a
volumen con agua destilada en amatraz aforado de 1000 ml.
6.- Acido sulfúrico 1N: medir con pipeta graduda 26,6 ml de acido
sulfúrico concentrado y llevar a volumen con agua destilada en matraz de
1000 ml.
7.- Sulfato de manganeso:
8.- Solución de ioduro alcalino-azida (INa o IK 1M): se disuelve en agua
destilada 17 g de IK o 15 g de INa y se completa a volumen hasta 100 ml
;para su mejor conservación se añade 1 ml de NaOH 1 M por cada 100 ml
de solución.
9.- Acido sulfúrico: d=1,83-1,84. la concentración de este acido es
aproximadamente 36 N.
10.- Solución de almidón: se deslien en un mortero, con poca agua , 5 0 6
g de almidón de papa , se vierten en un litro de agua hirviendo , se agita y
se deja sedimentar durante la noche ;se utiliza el liquido claro
sobrenadante. Para conservar la solución es conveniente agregarle 1,25 g/l
de aciso salicílico.
11.- Solución de bi-iodato de potasio de 0,025 N: se pesa 0,8124 g de
IO3K.IO3H,se disuelve en agua destilada y se completa el volumen hasta
1 litro.

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Procedimiento
1.- Preparar el agua de dilución agregando por cada litro de agua destilada
1 ml de buffer fosfato, 1 ml de sulfato de magnesio, 1 ml de cloruro de
calcio y 1 ml de cloruro férrico.
Guardar a 20°C, con un tapón de algodón que permita la saturación con
oxigeno.
La DBO del agua de dilución, en general debe ser superior a 0,2 ml/l.
Cuando las muestras lo requieran deberá inocularse, agregando 1 ml de
inóculo (por ejemplo: efluentes domésticos) por cada litro de agua de
dilución.
2.- Elegir la dilución adecuada para la DBO de las muestras según la tabla
adjunta en el anexo 1 y preparar el agua de dilución como se describió,
teniendo en cuenta si se debe o no agregar el inoculo.
3.- Llevar las muestras a un pH entre 6,5 y 7,5 con ácido sulfúrico o
hidróxido de sodio 1N.
4.- Si la muestra ha sido clorada, elimine el cloro dejándolo disipar 1-2 h. a
la luz o por el agregado de sulfito de sodio.
5.- Preparar al menos 3 diluciones de la muestra con el agua de dilución.
6.- Llenar por sifonación dos frascos, cuidando que no queden burbujas y
que se forme el cierre hidráulico.
7.- A uno de los frascos de cada dilución, determinarle el Oxigeno Disuelto
(OD H2O ini) y los otros incubarlos 5 días a 20°C.
Al mismo tiempo se procede a llevar un blanco con el agua de dilución
utilizada, con o sin inóculo.
8.- Luego de 5 días determinar el oxigeno disuelto del agua de dilución
(OD H2O 5) y de las diluciones (OD5).
9.- Deben utilizarse para el cálculo todos aquellos datos de diluciones
cuyos oxígenos disueltos finales (OD5) sean 2 mg/l menores que el
oxigeno disuelto del agua de dilución inicial y al mismo tiempo superen el
valor de 1 mg/l (Preferentemente no menor al 30% del oxigeno disuelto
inicial).
10.- Hacer los cálculos de DBO para cada dilución y luego promediar estos
valores.

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Cálculos y expresión de los resultados

Para muestras realizadas al 100%.

DBO mg/l = ODMi – OD5

ODMi: Oxigeno Disuelto inicial de la muestra

OD5: Oxigeno Disuelto inicial de la muestra después de la incubación.

Para muestras diluidas sin inóculo.

DBO mg/l = ODi / OD5

FM

ODi: Oxigeno Disuelto inicial de la muestra diluida.

OD5: Oxigeno Disuelto inicial de la muestra después de la incubación.
FM: Fracción decimal de la muestra diluida *volumen de la
muestra/volumen de la dilución)

Para muestras diluidas sin inoculo

DBO mg/l = (Di / D5) – (B1 – B2) x FA

FM

B1:Oxigeno disuelto inicial del agua de dilución con inoculo

B2: Oxigeno disuelto del agua de dilución con inoculo después de la
incubación.
FA: Fracción del agua = 1 - FM

DODI: Demanda de oxigeno disuelto inmediata

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Utilizando las mismas diluciones realizadas para la determinación de DBO

a 5 días, llenar 2 frascos de DBO, y realizar un OD inicial (ODi) y otro
luego de 15 minutos (ODf)

DODI= ODi – ODf

FM

Los resultados son expresados en mg/l. Se recomienda informarlos con dos

cifras significativas a los valores menores que 10 y con tres cifras
significativas cuando son valores mayores de 10.

Bibliografia

Standard Methods for the examination of water and wastewater. Edición 17

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