FaCENA, UNNE

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QUUIIM
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CAAB
BIIO
OLLO
OGGIIC
CAA IIII
2013
Laboratorio Nº 3-1
Tema: CATABOLISMO DE LOS AMINOÁCIDOS: DETERMINACIÓN
CUANTITATIVA DE UREA.

Contenidos conceptuales: Digestión de proteínas y absorción de aminoácidos.

Función del hígado en el metabolismo de los aminoácidos. Catabolismo aminoacídico:
Desaminaciones oxidativa y no oxidativa. Transaminaciones. Glutamato-
deshidrogenasa: su importancia. Destinos del amoníaco. Ciclo de la urea.

Contenidos procedimentales: Desarrollo del método enzimático específico para la

determinación cuantitativa de urea en sangre y orina.
Determinación de la concentración de urea en sueros humanos normales controles y
sueros de pacientes con nefropatías y hepatopatías.

Contenidos actitudinales: Integración en trabajo grupal. Predisposición para la

resolución de problemas con espíritu crítico y rigor científico. Bioseguridad en el
laboratorio. Autoconfianza. Precisión, sistematización y coherencia en los
planteamientos. Responsabilidad para con las tareas encomendadas.

Objetivos:
Comprobar la actividad biológica de la enzima ureasa en sueros humanos normales
controles, y en sueros de pacientes con hepatopatías y nefropatías.

Fundamentos Teóricos
En los adultos normales, la ingesta de nitrógeno es igual a lo que se excreta. El
balance nitrogenado positivo, un exceso de nitrógeno en relación con el excretado, acompaña
el desarrollo y el embarazo. El balance negativo, donde la excreción es mayor que la ingestión,
se podría presentar después de una operación, en cáncer avanzado y en el kwashorkor o
marasmo.
Si bien el amoníaco, derivado sobre todo del nitrógeno -amino de los aminoácidos, es
muy tóxico, los tejidos convierten al amoníaco en el nitrógeno amida de la glutamina no tóxica.
La desaminación posterior de la glutamina en el hígado libera amoníaco, que luego se
convierte en urea no tóxica. Si la función hepática está comprometida, como en la cirrosis o
la hepatitis, las altas concentraciones del amoníaco en la sangre generan signos y síntomas
clínicos. Los trastornos metabólicos raros se relacionan con cada una de las cinco enzimas del
ciclo de la urea.
La degradación y la síntesis continua de proteínas celulares ocurre en todas las formas
de vida. Todos los días los humanos recambian 1 a 2% de su proteína corporal total, sobre
todo proteína muscular. En los tejidos que sufren rearreglo estructural, por ejemplo, el tejido
uterino durante el embarazo o el músculo esquelético durante la inanición, se presentan
velocidades elevadas de degradación proteica. De los aminoácidos liberados, casi el 75% se
vuelve a utilizar. El nitrógeno en exceso forma urea. Puesto que el exceso de aminoácidos
no se almacena, los que no se incorporan de inmediato en la nueva proteína se degradan con
rapidez.
En la enfermedad renal, las altas concentraciones de urea en la sangre son una
consecuencia, no una causa, de función renal deteriorada.
El hígado elimina rápidamente de la circulación, tanto el amoníaco que producen las
bacterias entéricas y que se absorbe en la sangre del sistema porta, como el amoníaco
producido por los tejidos, y lo convierte en urea. Así que sólo están presentes trazas (10 a 20
µg/dl) en la sangre periférica. Esto es esencial, ya que el amoníaco es tóxico para el sistema
nervioso central. Si la sangre del sistema porta no pasara por el hígado, las concentraciones
de amoníaco sanguíneo sistémico se elevarían a niveles tóxicos. Esto ocurre en la función
hepática gravemente dañada.
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Método enzimático específico para la determinación cuantitativa de urea en

sangre y orina.

Fundamento Químico del Método

La ureasa descompone específicamente a la urea produciendo CO 2 y NH3; este

reacciona con fenol e hipoclorito en medio alcalino produciendo azul de indofenol que se
determina colorimétricamente.

Materiales y Reactivos

 Muestras de sueros humanos normales y con patologías hepáticas y renales.

 Micropipetas
 Timers
 Baño termostatizado
 Espectrofotómetro

Bibliografía:
- Bioquímica Ilustrada de Harper. Murray R. B. 28va edición. Editorial McGraw-Hill. 2010.
- Vademécum de Wiener Lab. Wiener Laboratorios. Rosario, Argentina. 2013.

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Técnica:

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Informe:

D = …………… Urea (g/l) = ..............................

Alumno: ............................................................ Comisión Nº: ...... Grupo: ...... Fecha: ...........