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IRAC-OTEIMA-MIDA
INSEMINACIÓN ARTIFICIAL
INTRODUCCIÓN
1 Unidad 1
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OBJETIVOS
3. Discutir la importancia de cada etapa del descongelado, siembra del semen y del
re entrenamiento de los inseminadores para mejorar los índices de preñez.
5. Analizar los distintos factores que llevan a error en su diagnóstico, incluyendo los
aspectos que tienen que ver con el conocimiento de los signos primarios y
secundarios del celo.
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CONTENIDOS
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Figura 2. Temperatura del semen dentro de pajuelas sostenidas por fórceps, o de ámpulas
sostenidas a los canastillos metálicos durante la exposición a temperatura ambiente (20±
0.6 °C) Cada curva representa la media de cinco réplicas (Adaptado de Berndtson,
1976;1).
Una recomendación práctica que surge de estos datos es que siempre se debe
manipular el semen dentro del termo lo más rápido posible protegiéndolo del viento
y del sol. Algunas veces debemos realizar varias inseminaciones por lo que se
levanta el canastillo repetidamente. Durante este procedimiento el semen se expone
varias veces a temperatura ambiente durante cortos períodos. Pickett et al., realizo un
experimento durante el cual midió la temperatura del semen durante la manipulación
del canastillo y observo que aunque el semen esté en contacto con N tiempo
suficiente como para que vuelva a enfriarse (-196 °C), en cada nueva exposición del
semen a temperatura ambiente éste alcanza temperaturas mayores (Figura 3).
Además si el nivel de N es bajo, el tiempo requerido para alcanzar nuevamente los -
196 °C será más de 10 minutos.
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Bajo nivel de N2
Temperatura
Termo lleno
0 2 4 6 8 10 12
Minutos
Figura 3. Influencia del nivel de N en la temperatura del semen dentro de pajuelas francesas de 0.5
ml, durante exposiciones repetidas en el cuello del termo (5 pajuelas/gobelets) (Adaptado
de Pickett, 1976; 11)
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Una vez que se ha identificado la hembra en celo se debe constatar que esté
debidamente señalada (caravana-tatuaje) y perfectamente inmovilizada. Se debe
lavar bien la zona del recto y vulva con agua, luego secar con toallas de papel para
evitar contaminación y contacto de la punta del pistolette o pipeta con agua. Ésta se
debe introducir abriendo los labios de la vulva con un ángulo de 45º y la punta del
pistolette hacia el techo de la vagina hasta que haga tope (20 a 25 cm.). Luego se
introduce la mano enguantada y lubricada por el recto para no producir daños
(utilizar lubricante no irritante), se toma el cuello uterino llevándolo hacia adelante
para evitar la formación de pliegues en la vagina que puedan dificultar la franca
llegada del pistolette al canal cervical.
Una vez que la punta del pistolette se encuentra tocando el cervix se debe
tratar de introducirlo en la luz del canal cervical y luego realizando movimientos
del cuello uterino se irá pasando a través del cervix hasta llegar al cuerpo del
útero donde se debe realizar la siembra. Para comprobar que la punta del pistolette
pasó el cuello uterino debemos tocar la misma con el dedo índice de la mano que
tenemos sujetando el cervix por delante de éste y casi llegando a la bifurcación de los
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Figura 5. Esquema que resume el trabajo de muchos laboratorios que muestran las principales
barreras al transporte del semen en el tracto femenino. (Adaptado de Saake, 1982; 13)
Se han realizado varios trabajos que muestran la distribución del semen luego
de la deposición en el cuerpo del útero. En la Tabla 2 se muestran los resultados de
un experimento realizado por Suga y Higaki (17) en el que se depositó 300 millones
de espermatozoides en el cuerpo del útero de vacas lecheras. Luego se recogió el
tracto reproductivo completo en el matadero para verificar la distribución los
espermatozoides. Los resultados mostraron que entre 30 y 60 minutos después de
la IA la mayoría de los espermatozoides fueron recuperados de la vagina y
cervix y que sólo unos cuantos cientos fueron recuperados del útero.
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Espermatozoides recuperados
Total mucus mucus orina equipamiento tracto
descargado aspirado reproductivo
Número, 106 306 255 19 0.24 5.5 27.3
Tabla 5. Porcentaje de fertilización después de ligar y seccionar el istmo de vaquillonas después del
servicio (Adaptado de Wilmut, 1984, 19)
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depositar el semen a uno u otro cuerno uterino. La primera observación fue que
muchos inseminadores que decían depositar el semen en el cuerpo del útero, lo
hacían en realidad en el cervix y luego de ser entrenados para depositar el semen en
el cuerno uterino aumentaron los índices de preñez. Por lo tanto la conclusión más
importante de este trabajo fue que los inseminadores mejoraron su porcentaje
de preñez cuando fueron re-entrenados y depositaron el semen en el útero en
lugar del cervix.
Tabla 6. Ubicación de la punta de la pipeta en distintas zonas del tracto reproductivo de la vaca.
(Adaptado de Senger, 1991, 14)
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% acumulado de espermatozoides
Cuernos
Cuerpo del útero
recuperados
Horas después de la IA
Cercix
recuperados
Horas después de la IA
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Por lo tanto podemos concluir con estos trabajos que existe un beneficio
asociado con la deposición en los cuernos a través de la eliminación de los
errores de deposición en el cervix. Teniendo plena seguridad de haber pasado con
la punta de la pipeta la totalidad del cervix el lugar de siembra es el correcto.
Tabla 7. Porcentaje de no retorno de IA en distintos momento del estro con toros con tres niveles de
fertilidad. (Adaptado de Macmillan y Watson, 1975; 7)
% de no retorno 1
Momento del estro Toro de alta Toros de fertilidad Toro de baja
a la IA fertilidad media fertilidad
comienzo 74.3 62.7 58.4
mitad 71.1 70.7 65.8
final 78.6 75.1 71.8
después 73.3 71.3 73.8
1 % de no retorno a los 49 días de 6012 inseminaciones.
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20 20
10 10
0 0
0h 12 h 24 h 0h 12 h 24 h
Inseminación (horas desde comienzo del estro)
Inseminación (horas desde comienzo del estro)
Figura 8. Efecto del momento de la IA sobre la fertilización y calidad de los embriones colectados 6
días después de la IA (n=117; Dalton et al., 1998)
Bajo %
60
fertilización
Alta calidad
Porcentaje de Preñez (%)
50 Alto %
preñez
40 Baja calidad
Optimo momento
30
Inadecuada sobrevida
20 del espermatozoide?
Ovocito envegecido?
10 Menos selección
espermática?
0
0h 12 h 24
Momento de la IA (horas desde comienzo del estro)
Figura 9. Porcentaje de preñez calculado desde los datos presentados en la Figura 8 basado en la
clasificación de los embriones. El momento óptimo de la IA se determinó en base a que la
IA tempranas fueron inadecuadas debido a la gran cantidad de ovocitos infertilizados, y las
IA tardías se caracterizaron por la cantidad de embriones de baja calidad (22).
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El semen al ser congelado sufre una serie de procesos que pueden alterar la
calidad del semen original. Muchas veces semen de alta calidad al momento de la
congelación ha resultado en semen de mediana y baja calidad al ser descongelado.
De aquí, la importancia de evaluar el semen luego de la congelación.
- Las células congeladas a velocidades por encima del valor crítico tienen un
insuficiente período de tiempo para el intercambio osmótico por lo cual no pueden
expulsar la totalidad del agua intracelular y se forman cristales de hielo dentro de la
célula que producen su muerte.
Los mecanismos por los cuales se causa daño celular durante la congelación son
resumidos como sigue:
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0: sin movimiento
1: leve movimiento de cola sin desplazamiento progresivo
2: lento movimiento de cola con algo de movimiento progresivo
3: movimiento progresivo a velocidad lenta
4: movimiento progresivo rápido
5: movimiento progresivo rápido donde es difícil seguir a una célula determinada
Este test es una prueba de Integridad Celular utilizado por algunos centros de
IA. Se coloca el contenido de una pajuela en una solución hiposmótica de fructosa y
citrato de sodio (100 mosm/l). Se utilizan 2 µl y 1 µl de la solución hiposmótica para
el contenido de pajuelas de 0.5 y 0.25 respectivamente. Se incuba en baño María a
37º-38º C durante 60 minutos. Luego se coloca una pequeña gota (6 µl) entre porta y
cubreobjeto y se cuentan 200 espermatozoides a 400X. Los espermatozoides con
colas enrolladas están vivos (reaccionados). Cuanto más colas enrolladas, mejor
calidad de semen. Debe haber un 40 % de reaccionantes. La observación de los
espermatozoides se realiza a las 0 h, 1 h y 2 h. La solución contiene 9 g de fructosa,
4.9 g de citrato trisódico y c.s.p. 1000 µl de agua destilada.
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haber casos donde el semen es muy caro y entonces se podría tomar la muestra en el
campo cuando se realiza una IA (aunque esto no es lo más aconsejable).
MÍNIMO ACEPTABLE
Acrosoma: 0 h = 60 % intactos
2 h = 40 % intactos
MÍNIMO ACEPTABLE
70 % normales
no más del 15-20 % de defectos de cabeza
no más del 25 % de defectos de acrosoma y cola
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Resumen
REFERENCIAS
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El perfil hormonal que puede llevar a la expresión del celo en la vaca es un alto
nivel de estrógenos en sangre en presencia de un bajo nivel de progesterona. Esta
situación hormonal normalmente existe cuando hay un folículo preovulatorio maduro
secretando estrógenos en ausencia de un cuerpo lúteo funcional. Otras condiciones
que pueden llevar a la manifestación de celo incluyen la presencia de folículos
quísticos y altos niveles de estrógenos con bajos niveles de progesterona en las vacas
preñadas cerca del parto.
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Signos Físicos
Sin dudas que el principal signo físico del estro es la descarga de mucus
cervical, más evidente en las vaquillonas que en las vacas.
Como consecuencia de la actividad de monta, los pelos de la zona del anca se
encuentran revueltos o inclusive depilados en las zonas de saliencia de los
huesos.
La edematización vulvar es un signo provocado por los altos niveles de
estrógenos que causan un incremento de la irrigación de los genitales externos.
Días pos-parto.
Número de animales sexualmente activos en el grupo.
Libertad para que los animales sexualmente activos interactúen.
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2.1.4 ¿Cuándo las vacas comienzan a ciclar y a mostrar signos de celo después
del parto?
Este aumento en la expresión del estro durante los primeros tres ciclos
posparto está probablemente relacionado con las diferencias en el patrón ovárico de
secreción de esteroides durante estos tres ciclos. La expresión del estro en respuesta
a los elevados niveles de estrógeno es aumentada si la vaca tuvo una exposición
previa (imprinting) con progesterona. La primera ovulación posparto ocurre sin la
exposición previa a progesterona por ausencia de CL, por lo que probablemente ésta
sea la causa de una deficiente manifestación de celo en este primer ciclo. En forma
similar, el nivel de secreción de progesterona entre la primera y segunda ovulación
posparto es menor que entre la segunda y tercera. El hecho de que tome alrededor de
tres ciclos posparto antes de que la intensidad del celo alcance su pico, es
relativamente poco importante en la mayoría de las vacas, ya que el tercer ciclo
comenzaría alrededor de la 8a. ó 9a. semana posparto, lo que se corresponde con el
inicio del período óptimo para dar servicio.
2.2 Momento de la IA
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6
5 5
5 4
4
4
3 3
3
2
1
0
0- >4 - >8 - >12 - >16 - >2
Figura 1. Índices de preñez en vacas lecheras inseminadas en distintos momentos desde la primera
monta sobre 2661 IA en 17 rodeos (Dransfield y col., 1998; 6).
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Hay una variedad de ayudas para la detección de celos. Muchas de ellas son
beneficiosas como complemento de un programa bien organizado de detección visual
y no debieran ser considerados como sustitutos de la observación.
Revisaremos los desarrollos en esta área en los últimos tiempos. Los métodos
de detección de estro y momento adecuado de inseminación (MAI) se discuten en
términos de su eficiencia y exactitud (23), considerando a la eficiencia como: n° de
detecciones correctas / n° total de períodos estrales, o por períodos no luteales
determinados por dosaje de progesterona x 100. Por otra parte se considera
exactitud al: n° de detecciones correctas / n° total de detecciones x 100.
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productos son de utilidad cuando a las vacas se las puede observar de cerca cada día
para verificar si el parche ha sido activado o la pintura ha sido removida; ayudando
especialmente para la detección de esas vacas "difíciles". Algunos autores (4)
encontraron estos dispositivos de gran utilidad para la detección de celo en
vaquillonas índicas habiendo resultado significativamente superiores con respecto a
la detección visual, pintura de cola y novillos estrogenizados con bozal marcador.
a. Actividad monitoreada por podómetros: El número de pasos por hora de las vacas
en estro es alrededor de dos a cuatro veces mayor que las que están en diestro (11);
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ésta es la base biológica para la detección del MAI con podómetros adosados a uno
de los miembros posteriores de la vaca. La eficiencia varía del 60 al 100 % según
diferentes estudios. No obstante la podometría mostró ser más eficiente que dos
detecciones visuales diarias y tan eficiente como cuatro observaciones diarias en la
detección del inicio del celo. Sumado a esto, la podometría detectó el 63-79 % de
los períodos no luteales u ovulaciones no acompañadas de comportamiento éstrico.
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la detección del celo, pero no parece un dato suficientemente confiable para ser
utilizado como único elemento de detección.
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efectiva en rodeos lecheros pastando en Nueva Zelandia. Es poco probable que algún
sistema llegue a tener aplicación universal.
La eficiencia de detección de celo y del MAI pueden ser mejoradas por el uso
consecutivo o simultáneo de más de un método: detectores de monta o pruebas de IE
intravaginal fueron usados sólo luego de la caída en progesterona indicada con el test
en leche. Casos no detectados por un método, fueron muchas veces detectados por el
uso simultáneo de otro/s (Tabla 1).
Tabla 1. Eficiencia individual y combinada (%) de métodos y/o dispositivos de detección de celo. De
Lehrer y col.1992 (12)
Hay coincidencia entre los diferentes autores en cuanto a que habría una
tendencia hacia el aumento de la confianza en la detección del MAI por la
combinación radiotelemétrica de más de una variable. La actividad física y en el
futuro la impedancia vulvar, son las variables más promisorias monitoreables para
ser incorporadas en los sistemas de manejo de rodeos lecheros.
REFERENCIAS
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