Instituto Politécnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

Aislamiento de DNA de origen vegetal y su caracterización

espectrofotométrica
Hidrólisis de RNA y DNA e identificación de bases púricas y pirimídicas por
cromatografía en capa fina

Introducción  Aislar, purificar y caracterizar DNA

La extracción de DNA de los tejidos de las de guayaba
plantas a diferencia de aislamientos de
 Separar las bases nitrogenadas del
DNA de tejidos mamíferos, sigue siendo
difícil debido a la presencia de una pared DNA y el RNA por cromatografía en
celular rígida que rodea las células capa fina a partir de hidrolizados
vegetales. Actualmente se utilizan de los mismos, identificándolas por
métodos que exigen necesariamente una la propiedad que tienen de
laboriosa trituración mecánica, paso absorber la luz UV.
necesario para interrumpir la pared celular
y liberar el DNA. Resultados
Los ácidos nucleicos son compuestos
nitrogenados de elevado peso molecular
que se encuentran en las células asociados Barrido espectral
con proteínas. Los complejos ácido 3.5
nucleico-proteína se conocen con el 3
nombre de núcleo-proteína, que pueden
2.5
separarse en sus componentes (proteínas
y ácidos nucleicos) al ser tratados con 2
A

ácidos o con concentraciones altas de 1.5

sales. La hidrólisis controlada de DNA y 1
RNA produce nucleótidos que pueden
0.5
considerarse como unidades básicas de los
0
ácidos nucleicos. Si se prosigue la
0 100 200 300 400
hidrólisis, los nucleótidos dan nucleósidos
λ (nm)
y finalmente fosfatos, azúcares y bases
puríricas y pirimídicas. La adenina y
Gráfico 1: Barrido espectral del DNA de la guayaba
guanina son purinas y están presentes en
todos los ácidos nucleicos. La citosina, Pureza
timina y uracilo son pirimidinas.
2.463
𝑃𝑢𝑟𝑒𝑧𝑎 =
2.147
Objetivos
1.14718 𝑥 100%
Pureza= 2
Pureza= 57.3591% malonato. En el 6 tubo hay menor
concentración de malonato por lo que hay
Concentración de DNA
mayor decoloración. En el tubo 7 se
2.463
Concentración=225000 encuentra una mayor concentración de
sustrato por lo que hay una mayor
C=1.09466x10-4 g/ml decoloración.

Discusiones
Conclusiones
En la determinación de la actividad de
Comprobamos que al aumentar la
deshidrogenasa láctica en los tubo 1 se
concentración de sustrato, la velocidad de
observó una decoloración, indicando que
reacción aumenta hasta llegar a un valor
si se lleva a cabo la reacción .En el tubo 2
máximo y que el inhibidor disminuye dicha
no se le agregó coenzima NAD+ pero en el
velocidad.
LDH se encontraban las dos coenzimas por
lo que se decoloró. En el tubo 3 dio la Bibliografía
reacción, a pesar de que no se le haya
1.-. Voet, Voet, 2006 “Bioquímica” Ed,
agregado lactato pero en el músculo de la
Panamericana Médica, 3ra Edición,
rata si se encontraba, por lo que se México, Pp 590-592.
decoloró. En el tubo 4 no se le agregó LDH
por lo que no hubo reacción debido a que
no estaba activa la enzima. En el tubo 5 no
se decoloró por completo debido a que no
se le agregó KCN por lo que no se desplaza
la reacción hacia los productos.

En la actividad de deshidrogenasa
succínica en el tubo 1 no se la agregó
malonato de sodio por lo que se reduce y
se decolora más. En el tubo 2 no se
observa un cambio debido a que no se le
agregó la enzima SDH. En el tubo 3 hay
muy poca decoloración esto se debe a que
hay poco succinato en el extracto crudo.
En el tubo 4 no hay decoloración porque
hay inhibidor (malonato) por lo que no se
decolora. En el tubo 5 se decolora poco
debido a que hay menor cantidad de