Pag. 1.- OBJETIVO. aol 2.- FUNDAMENTO TEORICO.... ini wear sccanaccsnn encod 3.- EQUIPO UTILIZADO............0068 4.- PROCEDIMIENTO.........secseeesee 5.- CUADRO DE DATOS............... iwi an " 6 6.- OBSERVACIONES. sean et EA See heeewttwie sl DOM 7.- CONCLUSIONES... 8.- RECOMENDACIONE: 9.- BIBLIOGRAFIA...... 210 10.-CUESTIONARIO. ada ii seve 101.- OBJETIVOS USO DEL MICROSCOPIO ¥ Medir dimensiones en un microorganismo. ¥ Calibrar de manera efectiva el micrémetro ocular respecto al de platina de manera que el rango de error que posea este dentro del permitido. v Determinar el error de medicién y asimismo el de error de calibracién. 2.- FUNDAMENTO TEORICO EL MICROSCOPIO El microscopio compuesto es un instrumento dptico que se emplea para aumentar © ampliar las imagenes de objetos y organismos no visibles a simple vista. El microscopio éptico comin esta conformado por tres sistemas: 1.-El sistema mecanico esta constituido por una serie de piezas en las que van instaladas las lentes que permiten el movimiento para el enfoque. 2.- El sistema éptico comprende un conjunto de lentes dispuestas de tal manera que produce el aumento de las imagenes que se observan a través de ellas 3.- El sistema de iluminacién comprende las partes del microscopio que reflejan, transmiten y regulan la cantidad de luz necesaria para efectuar la observacion a través del microscopio. En los siguientes puntos describiremos cada uno de los sistemas nombrados, a fin de tener un conocimiento completo del microscopio. Campo del Microscopio Se denomina "campo del microscopio" al circulo visible que se observa a través del microscopio. También podemos definirlo como la porcién del plano visible observado a través del microscopio. Si el aumento es mayor, e! campo disminuye, lo cual quiere decir que el campo es inversamente proporcional al aumento del microscopic. Para medir el diametro de! campo del microscopio con cualquiera de los objetivos se utiliza el micrémetro, al que se hara referencia en el siguiente punto. A) Calibracion del micrémetro ocular: Un micrémetro ocular es un disco de vidrio que encaja en un ocular de microscopio que tiene una escala que se utiliza para medir el tamafo de los objetos magnificados. La longitud fisica de las marcas en la escala dependera del grado de ampliacién. Como es en el caso de este laboratorio, donde se utiliza 10x, y 43x como grados. MICROBIOLOGIA SANITARIA I Pagina 2Micrémetro ocular Micrémetro Ocular para Microscopio Micrometro de Platina Un micrémetro es simplemente un portaobjetos de microscopio con una finamente dividido escala marcada en la superticie. En este laboratorio, nuestra platina tenfa 10 divisiones donde cada una media 0.1mm. Micrémetro de platina Entonces segun el Laboratorio Nacional de Fisica, del Instituto Nacional de Medida del Reino Unido, los factores que pueden influir en la calibracién de este micrémetro son: + Cualquier inexactitud inherente de las lentes del objetivo * Las variaciones en el sistema éptico en si (como la longitud efectiva del tubo) + Las imprecisiones en la escala del reticulo. + Error personal de medida Estos errores combinados deben ser tenidos en cuenta y cuantificar si las mediciones tomadas con el microscopio se consideran precisas dentro de los limites definidos de incertidumbre MICROBIOLOGIA SANITARIA IL Pagina 33.- EQUIPO UTILIZADO Microscopio N°15 Micrémetro de platina Muestra de Algas Micrémetro de ocular MICROBIOLOGIA SANITARIA I Pagina 44.- PROCEDIMIENTO a) Colocar el micrémetro de platina en la Platina y el micrémetro del ocular en el ocular. b) Coincidir las divisiones del micrémetro de platina con las divisiones del micrometro de ocular. = Calibracién del micrémetro del ocular Determinar cuantas divisiones del micrometro o del ocular coinciden con las divisiones del micrémetro de platina. Con objetivo de 10X y 43X Nombramos: X = divisi6n de platina . Y =divisién del ocular - Medicion de los microorganismos Con el micrémetro del ocular, se realiza la medida de microorganismos; objetivo de 10X y 43x. ©) Graficar los datos d) Realizar la tabla MICROSCOPIO| CALIBRACION | MEDICION | ERROR DE | ERROR DE MEDICION | CALIBRACION Tey YooX YoX Le Le MICROBIOLOGIA SANITARIA IL Pagina 55.- CUADROS DE DATOS CALCULO! Sabemos que 1X=0.1mm Para 10x 13 divisién de platina <> 20 divisiones de ocular 13X <> 20Y Y<> 65pm Realizando la medicién del alga con el objetivo de 10X tenemos que: Longitud = 5Y =0.65 um Ancho = 0.01Y = 325 um Para 43x NO SE PUDO APRECIAR DEBIDO A QUE EL MICROSCOPIO ESTA EN MAL ESTADO. MICROBIOLOGIA SANITARIA I Pagina 6Calibrael Medici Error | Error én én MICROSC | bj. 10x 0b, 43x | Obj. 10x Calibrac | Medicion Pio % ‘Ancho | Largo_| Ancho |_Largo 2 [ixe>tylixe> [sy [ay [by | Ay Ancho = y=143 | 27y | 21.45u | 57.2um 22.2um_55.5um 3.38% um e370 |m largo = um 2.97% 4 1x29 | 3 sy | ty Ancho = y 14.280 | 714u | Tu | 7480 ek y=34u Largo = 45% Ix@ Ty | be>28y | 2858u| 7145u | 28S6u | 6065 ‘Ancho = y=14.29 | y=3.57u 0.07% u largo = 17.73% 6 ax=7Y ax=2ey) Yay YY Ancho = 33.3% largo = 20% 69.720 | ObjAOX | Obja0K Largo = 1660 17.78 | 64.75u 2.97% 1430 42.9u | 17.85u | 57.120 Ancho = 24.82% Largo = | 33.14% txe>6y |ix<> | 18y Sy | 63y | 19.7 ‘Ancho = y=16.67 | 265y | 25um | 83.33 23.75 74.27 5.32% um ye 3.77 um um um Largo = um 12.19% Txe>6y |tx<> [ty | 8y Sy _——~ «AB Anch 0 | y=16.67 | 28y 16.67 | Sum | 17.85 | 55.55 6.61% um ye357 | um um um largo = um 6.53% 12 |ixe>y|txe> (Sy Sy yy ‘Ancho= ye143 |30y | 7143 | 2143 | 6333 23.33, 11.33% um 3.33 [um jum um um largo = um 8.16% qxe>ay |2x<> |2y Sy yay ‘Ancho = steve yugad! um um | um Larkéeina 7 um 4.61%1 ixe>7y | ixe> | 0.042 [0,086 | 0.0403 | 0.0808 ye143 | 32y mm lm = | mm | mm 4.048% umn ye Ba Largo = um 4.047% 13 | 1<>10 |1<>42 | 2y 6y oy 28y Ancho = y=10 |y=2.38 |20um | 60um | 21.42 66.64 7.1% ym pm um um largo = 11.06% GRAFICA : MEDIDA EN MM (U) VS. UNIDADES DEL OCULAR 0 1470 2940 4410 58.80 73.50 MEDICION DE MICROORGANISMOS 8 8 LUNIDADES DEL OCULAR o 50 100 © 150 200-250 300 350400. DIMENSION REAL EN um Solo es necesario usar algunos puntos para obtener aproximadamente la gratica salculo del error Se tomara como base el objetivo de 10x como valor real: (43.4) )1100% (10x) erroramedicién = MICROBIOLOGIA SANITARIA IL Pagina 8Error largo Error ancho 2 6.- OBSERVACIONES ¥ El microscopio 15, se encuentra en buen estado la mira de 10x, mientras que la mira de 43x no se observa bien por este motivo no se puede saber el error ¥ El laboratorio solo cuenta con una platina, por lo que hubo demora en la practica de laboratorio. v El error encontrado de medicién de muchos de los microscopios es mucho mayor a 2%. CONCLUSIONES Y Los errores de mediciones fueron mayores al rango admisible, el error del largo fue notable con un 17.73% respecto al valor tomado como real, mientras que por el ancho, el error fue casi minimo con 0.07% v El grafico muestra una pendiente elevada, por parte del objetivo de 43x. A mayor sea el objetivo, menor sera la medida de una division de! micrémetro ocular v Conocer el tamafo de los microorganismos nos dan a entender el comportamiento que presentan en su desarrollo. ¥ Conocer el tamafio de los microorganisms nos permite saber con qué tipo de filtro trabajar. RECOMENDACIONES ¥ Tener cuidado con el uso del microscopio y su respectiva limpieza utiizando el papel lente v Tomar medidas de seguridad en el laboratorio, ya que se observé que habia lmparas con los cables pelados y alguno de ellos no presentaba el enchute. v Hacer mas mediciones de calibracién entre el micrémetro ocular y el de platina, con el fin de obtener mayor comparacién y observar el error que se da entre ellos v Para poder medir un error de calibracién necesitamos una microscopio patron asi podremos realizar esta medicin MICROBIOLOGIA SANITARIA I Pagina 99.- BIBLIOGRAFIA > Libro Microbiologia Sanitaria, autor : Pelezar. > Libro de Biologia de los microorganismos/ Brock > www.alihuen.org.ar/preguntas-frecuentes-faq-/que-son-las-algas.html - 49k > www.astumatura.com/algas/algas.htm! - 17k » bc.inter.edu/facultad/yserrano/MICROP ROtozoarios.htm - 13k > http:/mnww.pysersgl.com/images/thumbnails/Graticules/Stage%20Micromete 1s%20web.pd > hitp:!iwww.npl.co.uk! > hittp:twww.mailxmail. com/curso-microscopio/partes-microscopio-optico > hitp://www.alihuen.org.ar/preguntas-frecuentes-faq-/que-son-las-algas.htm! 10.- CUESTIONARIO 1) Indique el tamajio relativo de los microorganisms 2) Describa las principales caracteristicas de los siguientes microorganismos: virus, bacterias, algas, protozoarios, hongos, rotiferos, microcrustaceos. BACTERIAS ¥ El primer nombre de una bacteria corresponde al género y el segundo | a especie. v Las bacterias en un principio se clasificaron por su forma, la tincién Gram y por sus necesidades de oxigeno, lo que se complementaba con los caracteres bioquimicos y serolégicos. En la actualidad se utiliza la genética para establecer relaciones fundamentales v Las bacterias son procariotas, con ADN circular libre, ribosomas, sin mitocondrias y una pared celular de peptidoglucano. v Laestructura bacteriana incluye Estructura interna: material nuclear, ribosomas, membrana nuclear. MICROBIOLOGIA SANITARIA I Pagina 10Pared celular: peptidoglucano (mas espacio periplasmatico y en membrana extema en bacterias gramnegativas) Estructuras externas: cépsulas. Pil, flagelos. y Las esporas estan metabdlicamente inertes en una capa protectora. ALGAS > Aunque su naturaleza de habitantes indigenas del suelo es discutida, lo cierto es que se encuentran en casi todos los suelos de cualquier continente o isla. » Son fotosintéticas y requieren acceso a la luz pero no solo se encuentran en las primeras capas de la superticie. > Las algas terrestres son mds pequefas y estructuralmente mas simples que las acuaticas. > Se dividen en cuatro grupos: Cloroficeas de color verde, Cianoficeas de color azul-verdoso, Bacilarioficeas o diatomeas y Xantoficeas de color amartillo- verdoso. > El pH limita grandemente la poblacién de algas. Las cianoficeas se desarrollan mejor a valores de pH comprendidos entre 7 y 10, desapareciendo cuando se baja de 5. Lo mismo ocurre a las diatomeas, pero las verdes no son apreciablemente modificadas y por tanto dominan la flora de algas en ambientes acidos, debido ala ausencia de las otras formas > Al aumentar la humedad se aumenta generalmente el desarrollo de las algas. En los suelos agricolas la humedad no suele ser suficiente y la poblacion sigue las incidencias del clima liuvioso 0 seco 0 del riego. PROTOZOARIOS > Los protozoos incluyen pardsitos intestinales y genitales, por ejemplo, Entamoeba histoytica y Tricomonas vaginalis y parasitos de la sangre y los tejidos por ejemplo Toxoplasma gandii y parasitos del paludismo. > Los protozoos son unicelulares y tienen estructuras celulares eucariotas. Todos tienen una etapa de trfozoito fragil y la mayoria tienen una forma quistica resistente. » Todos tienen signos vitales fuera del huésped humano y la mayoria puede multiplicarse en el ser humano. La infeccién es por ingestion, por inhalacion, por picaduras de insectos o por el contacto sexual » Sus ciclos de vida varian desde la transmisi6n directa del trofozoito durante el coito (Trichomonas) 0 la eliminacién de quistes en las heces y la ingestion MICROBIOLOGIA SANITARIA I Pagina 11subsiguiente (Entamoeba y otros protozoos intestinales) hasta la alternancia compleja de generaciones en diferentes huéspedes (paludismo) > La inmunidad protectora no esta bien desarroliada en la mayoria de las infecciones por protozoos, los cules son muy comunes y pueden ser mullilples HONGOS: > La estructura es eucariota y, por ende, a diferencia de las bacterias procariotas, los hongos tienen un nucleo con una membrana nuclear, y el citoplasma contiene mitocondrias, aparato de Golgi, lisosomas y reticulo endoplasmatico, > La morfologia consiste en pequefias levaduras redondas o mohos filamentosos con un micelo de hifas. Algunos hongos son dimorfos con una forma de levadura en los tejidos y una forma miceliar en el medio ambiente » Todos los hongos se reproducen en forma asexuada con células haploides que se dividen mediante mitosis para formar esporas. » Los hongos impertectos, en los que sélo se conoce la replicacién asexual, incluyen algunos microorganismos patégenos humanos. > La teproduccién sexual mediante meiosis constituye la base de fa clasificacién y la denominacién detinitiva. > Los microorganismos patégeno primarios son hongos que pueden infectar a huéspedes anormales. » Los microorganismos patégenos oportunistas solo pueden infectar a huéspedes anormales con las defensas alteradas. > Los hongos producen enfermedad mediante micotoxinas, hipersensibilidad o infeccién invasiva con lesién histica. ROTIFEROS Filo de invertebrados acuaticos, pluricelulares, de tamafio pequefio, generalmente microscépicos, provistes en la cabeza de una corona de cilios que parece una rueda girando al moverse los cilios. > El nombre rotiferos, que significa ‘portadores de ruedas’, proviene precisamente de ese aparato rotador. > Son de las primeras formas de vida microscbpicas que se estudiaron, y se les conocia como animaiculos rueda. Oscilan entre 40 um y 8mm y comprenden unas 1.500 especies. MICROBIOLOGIA SANITARIA I Pagina 12» Los rotiferos son muy numerosos en todo el mundo y se encuentran principalmente en ecosistemas dulceacuicolas, como charcas o lagos de agua dulce, aunque también hay algunas especies marinas o terrestres. > Se alimentan de otros microorganismos y unas pocas especies son parasitas. Los rotiferos presentan sexos separados, aunque los machos son escasos y salvo en condiciones adversas se desatrolian por partenogénesis. > Clasificacién cientitica: los rotiferos constituyen el filo Rotiteros (Rotitera), formado por 8 clases: Seisonaceos, Bdeloideos y Monogonontos. VIRUS > Los virus constan de un genoma central de ARN o ADN y una coraza de proteina que es la capside (que en conjunto forman la nucleocapside). > Los virus son entidades no celulares de muy pequeito tamafo (normalmente inferior al del mas pequefio procariota), por lo que debe de recurrirse al microscopio electrénico para su visualizacién » Son agentes infectivos de naturaleza obligadamente parasitaria intracelular, que necesitan su incorporacién al protoplasma vivo para que su material genético sea replicado por medio de su asociacién mas 0 menos completa con las actividades celulares normales, y que pueden transmitirse de una célula a otra. > Cada tipo de virus consta de una sola clase de Acido nucleico (ADN 0 ARN, nunca ambos), con capacidad para codificar varias proteinas, algunas de las cuales pueden tener funciones enzimaticas. > Otras son estructurales, disponiéndose éstas en cada particula virdsica (virién) alrededor del material genético formando una estructura regular (capsida); en algunos virus existe, ademas, una envuelta externa de tipo membranoso, derivada en parte de la célula en la que se desarrollé el virién y en parte de origen virasico (proteinas). 3) Explique porque es importante conocer el tamafio de los microorganismos? El tamafio microscépico de los microorganismos esta determinado genéticamente, y de las condiciones ambientales. Por lo general, a mas tamafio hay una mayor complejidad en su estructura, y por lo tanto mayor funcion. Ademas determina algunas propiedades bioldgicas, de su ecologia y su evolucién. Entre ellos tenemos a las bacierias, virus y protozoarios. MICROBIOLOGIA SANITARIA I Pagina 13A su vez, el tamafio de los microorganismos es importante para los filtros que los logran retener por medio del tamafio separandolos unos de otros, por medio de poros que permiten el paso. El tamaiio de los microorganismos est muy relacionado con la relacién superficie- volumen. O sea, cuanto menor sea el radio mayor sera esta relacion. Esto significa que el pequefio tamaiio de fas bacterias condiciona un mayor contacto directo con el medio ambiente inmediato que las rodea. lo que se traduce en que reciben las influencias ambientales de forma inmediata. El pequefio tamaiio condiciona una alta tasa de crecimiento. La velocidad de entrada de nutrientes y la de salida de productos de desecho es inversamente proporcional al tamafio de la célula, y a su vez, estas tasas de transporte afectan directamente a la tasa metabdlica. Por lo tanto, en general, las bacterias crecen (se multiplican) de forma répidaE! tamafio también es importante para determinar la velocidad de sedimentacion. 4) Describa las aplicaciones practicas referente a la informacion sobre la medicion de los microorganismos a) Procesos de filtracion en las plantas de tratamiento de agua En el proceso de filtracién el agua residual es roseada sobre la piedra y se deja que sé filtre a través del lecho, este filtro consiste en un lecho formado por un medio sumamente permeable al que los microorganismos se adhieren y a través del cual se filtra el agua residual. El tamaiio de las piedras de que consta el medio filtrante esta entre 2.5 — 10cm de didmetro, la profundidad de estas varia de acuerdo al disefio particular, generalmente de 0.9 — 2.4m con un promedio de profundidad de 1.8m. b) Proceso biologico de tratamiento de aguas residuales: wetland filtro percolador, - Plantas de filtros percoladores El concepto del filtro percolador nacié de! uso de los filtros de contacto, que eran estanques impermeables rellenos con piedra machacada. En su funcionamiento el lecho de contacto se lienaba con el agua residual desde la parte superior y se dejaba que se pusiese en contacto con el medio durante un corto periodo de tiempo. El lecho se vaciaba a continuacién y se le permitia que reposase antes de que se repitiese el ciclo. Un ciclo tipico exigia 12 horas de las cuales habia 6 horas de reposo. Las limitaciones del filtro de contacto incluyen una posibilidad relativamente alta de obturaciones, el prolongado periodo de tiempo de reposos necesario, y la carga relativamente baja que podia ufilizarse” En el filtro percolador el agua residual es roseada sobre la piedra y se deja que se filtre a través del lecho, este filtro consiste en un lecho formado por un medio MICROBIOLOGIA SANITARIA I Pagina 14Suntantiotticponibilidéa ale lslcompestamoismetaiss eshierdaotox fimitsantks‘en te se eB @FléiGua residual. El tamafio de las piedras de que consta el medio filtrante esta entre 2.5 — 10cm de diametro, la profundidad de estas varia de acuerdo al diseio particular, generalmente de 0.9 ~ 2.4m con un promedio de profundidad de ¢)Aiétodéedegiltfitide membrisnin(detersrinacionidde cdliformes) plasticos con pee uintigedesignfrat®on profundidad ordinaria contienen poros tortuosos que capturan microorganismos atrapandolas de forma aleatoria. El resultado es que se capturan fracciones de microorganismos en el interior (intersticios) de la migiatieané y por tanto, no se puede utilizar para su observacién en superficie por microscopia de luz o microscopia electronica de barrido, La importancia de los wetland ha variado con el tiempo. Los wetland son zonas de ancantrastestinsfiteosiideapwicatbonatestantienaniiax sy ciindicasraniferrness Aieferencialmenteseibbeticg en daersamicaac pettnitionshais! detagrictebucide Hoitorchel desiallenuestraacodad @ianonatitayeéseda, ambrane fice coemapletalatsota mecdsrananP deténto ctedatrlasimyestias sos capturadasefoumarsynerficieoplana: osfaiondeytcaiesdifbptsisajea precision en el tamario de los poros en una estrecha distribucién asegura una separacién adecuada, 0 fraccién de las muestras por su tasangtland proveen sumideros efectivos de nutrientes y sitios amortiguadores para contaminantes organicos e inorgénicos. Esta capacidad es el mecanismo Abiréestés Ichbresiarde artéiniktesinantésén dstesmimzidallisstiamicwaparesasiarsan bialdgiamentealinertes| jstogdieincla!oxcetentas resistenciaidyritvicaley eegtabilidag tétmicinicRroveen una resistencia superior y adsorcién del sustrato practicamente bolacksids: faictesckiognhinasiosiseonelasacapialdattes dmiaasiste lastitizatbraqas detpalicacbondte;damhaceieidedivisaaa ankeséx qth taplcacionssuané McySEb5 tales, tans; Mgdlisis)despartiislasan edaireid iniguyendmeasbesteshteuimiataxisi Citologiair istalsigia| @alecmtclogiéapanentesaies: Jaandlisis daraguas parsisisbestés ratios agenteslitiorganicos en suspensién. Ventajas: 1. Las plantas pueden ser utilizadas como bombas extractoras de bajo costo para depurar aguas contaminadas. 2. Algunos procesos degradativos ocurren en forma mas rpida con plantas que con microorganismos. 3. Es un método apropiado para descontaminar superficies grandes o para finalizar la descontaminacién de areas restringidas en plazos largos Limitaciones: 1. Elproceso se limita a la profundidad de penetracién de las raices 0 aguas poco profundas. 2. Los tiempos de proceso pueden ser largos MICROBIOLOGIA SANITARIA IL Pagina 16